WO2017121881A1 - Methodes et compositions pour le controle des fourmis champignonnistes - Google Patents

Methodes et compositions pour le controle des fourmis champignonnistes Download PDF

Info

Publication number
WO2017121881A1
WO2017121881A1 PCT/EP2017/050726 EP2017050726W WO2017121881A1 WO 2017121881 A1 WO2017121881 A1 WO 2017121881A1 EP 2017050726 W EP2017050726 W EP 2017050726W WO 2017121881 A1 WO2017121881 A1 WO 2017121881A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
ants
laccase
cysteine
thymol
eugenol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2017/050726
Other languages
English (en)
Inventor
Philippe Mora
Léonide CELINI
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universite Paris Est Creteil Val de Marne
Universite de Marne la Vallee
Original Assignee
Universite Paris Est Creteil Val de Marne
Universite de Marne la Vallee
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universite Paris Est Creteil Val de Marne, Universite de Marne la Vallee filed Critical Universite Paris Est Creteil Val de Marne
Priority to BR112018014280-8A priority Critical patent/BR112018014280B1/pt
Priority to CR20180396A priority patent/CR20180396A/es
Priority to US16/070,148 priority patent/US10888089B2/en
Priority to MX2018008730A priority patent/MX2018008730A/es
Publication of WO2017121881A1 publication Critical patent/WO2017121881A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to CONC2018/0008396A priority patent/CO2018008396A2/es
Priority to ECSENADI201861449A priority patent/ECSP18061449A/es
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N31/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic oxygen or sulfur compounds
    • A01N31/08—Oxygen or sulfur directly attached to an aromatic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/002—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing a foodstuff as carrier or diluent, i.e. baits
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N31/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic oxygen or sulfur compounds
    • A01N31/08—Oxygen or sulfur directly attached to an aromatic ring system
    • A01N31/16—Oxygen or sulfur directly attached to an aromatic ring system with two or more oxygen or sulfur atoms directly attached to the same aromatic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N35/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having two bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. aldehyde radical
    • A01N35/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having two bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. aldehyde radical containing aliphatically bound aldehyde or keto groups, or thio analogues thereof; Derivatives thereof, e.g. acetals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids
    • A01N37/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids
    • A01N37/38—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system
    • A01N37/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a singly bound oxygen or sulfur atom attached to the same carbon skeleton, this oxygen or sulfur atom not being a member of a carboxylic group or of a thio analogue, or of a derivative thereof, e.g. hydroxy-carboxylic acids having at least one oxygen or sulfur atom attached to an aromatic ring system having at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and one oxygen or sulfur atom attached to the same aromatic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing at least one carboxylic group or a thio analogue, or a derivative thereof, and a nitrogen atom attached to the same carbon skeleton by a single or double bond, this nitrogen atom not being a member of a derivative or of a thio analogue of a carboxylic group, e.g. amino-carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
    • A01N43/06—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom five-membered rings
    • A01N43/08—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom five-membered rings with oxygen as the ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
    • A01N43/22—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom rings with more than six members
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A01N59/02—Sulfur; Selenium; Tellurium; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/22—Lamiaceae or Labiatae [Mint family], e.g. thyme, rosemary, skullcap, selfheal, lavender, perilla, pennyroyal, peppermint or spearmint
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/24—Lauraceae [Laurel family], e.g. laurel, avocado, sassafras, cinnamon or camphor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/28—Myrtaceae [Myrtle family], e.g. teatree or clove

Definitions

  • the invention relates to the field of pest control. It proposes a new method of fight against the ants champignonnists as well as a new formicidal composition able to destroy specifically the colonies of mushroom ants.
  • the present invention also provides a method for preparing such a composition or kit for use in said method.
  • Ants of the "leaf cutter” ants type are mainly found in Central and South America.
  • the main characteristic of the Attini tribe, including Atta or Acromyrmex genera, is the fact that it cultivates, within the anthill, a basidiomycete saprophytic fungus of the species Leucoagaricus gongylophorus. Ants grow while the fungus provides nutrients for the colony by breaking down complex, non-ants-like molecules (Richard et al, 2005).
  • the fungus fed with raw material by the ants, can also be a source of nutrition since some authors have observed that the fungus was consumed by certain ants (Qinlan et al., 1978, Fisher et al., 1994) and the fungus is a source of enzymes ensuring the degradation of the plant material.
  • Leaf-cutting mushroom ants are a pest for agricultural and forestry crops. Indeed, they are found without predators when they invade monocultures developed by humans (phenomenon accentuated with deforestation) which leads to a strong unregulated presence. They collect leaves, flowers, fruits and seeds and ravage most agricultural crops: food crops (cassava, sweet potato, corn, breadfruit ...), fruit trees (lemon, orange, mango, avocado ...
  • the damage caused by the mushroom ants represents 30% of the management costs of eucalyptus crops in Brazil.
  • a mature colony can destroy 3 tonnes of sugar cane a year, an estimated loss of $ 60 million.
  • the annual damage is estimated at several million dollars while they are several hundred million dollars in the state of Sao Paulo (Brazil).
  • aldrin 1, 2,3,4,10,10-hexachloro-1,4,4a, 5,8,8a-hexahydro-1,4-endo, exo-5,8-dimetha-nonaphthalene
  • Mirex® (1, 1 a, 2,2,3,3a, 4,5, 5, 5a, 5b, 6-dodecachlorooctahydro-1 H-1, 3, 4-methanetriyl) cyclobuta [cc] pentalene
  • Local means also include the use of repellent plants to keep away the nests of mushroom ants. Such use, however, has reduced effectiveness and have no impact on the nest or colony.
  • the present invention provides a novel method and associated composition for targeting the colony and its environment rather than the ant itself.
  • laccase is an enzyme widely expressed in mushroom ants and in the grinding wheel and that a composition comprising a laccase inhibitor or having a laccase inhibitory activity causes, in a few days, the abandonment of the nests located around the location of the bait.
  • a composition comprising a laccase inhibitor supplemented with an antibacterial compound having bactericidal or bacteriostatic activity against actinomycetes (or comprising a compound exhibiting laccase inhibitory activity and antibacterial activity against actinomycetes) destroys colonies around the location of baits without re-occurring colonies.
  • muscle ants ants belonging to the tribe of Attini and in particular to the genera Atta or Acromyrmex. These ants have the particularity of cultivating within the anthill, a basidiomycete saprophytic fungus of the species Leucophorus gongylophorus. The ants ensure its growth while the fungus ensures the supply of nutrients for the colony by degrading complex molecules. Within this family, ants belonging to the genus Atta or Acromyrmex form a subcategory called leafcutter ants.
  • the most represented species are Acromyrmex heyeri, Acromyrmex echinatior, Acromyrmex lobicornis, Acromyrmex crassispinus, Acromyrmex laticeps, Acromyrmex striatus, Acromyrmex monday, Acromyrmex octospinosus, Acromyrmex rugosus, Acromyrmex subterraneus brunneus, Acromyrmex subterraneus molestans, Acromyrmex subterraneus subterraneus, Acromyrmex volcanoes, Acromyrmex Balzani , Atta capiguara, Atta cephalotes, Atta colombica, Atta sexdens, Atta sexdens srubropilosa, Atta laevigata, Atta bisphaerica, Atta texana and Atta nnenider
  • anthill and “nest” can be used interchangeably here. They correspond to the structure housing the colony of mushroom ants.
  • Colony is meant a group of ants, other than a single pair, including at least one queen, building nests to raise offspring in a cooperative manner.
  • grinding wheel also called “mushroom garden” (ie fungus garden) in the literature, it is necessary to understand here the fungal structure cultivated by the mushroom ants and composed mainly of the saprophytic basidiomycete fungus of the species Leucophorus gongylophorus growing on the plant material harvested by the ants.
  • formicidal composition is meant a composition formulated to specifically target ants.
  • the formicidal composition according to the invention will not cause the death of bees or other arthropods.
  • the formicidal composition according to the invention may cause abandonment of the nest by the colony of mushroom ants or the destruction of said colony.
  • the expression “antibacterial compound” corresponds here to a compound having a bactericidal or bacteriostatic activity.
  • bactericidal activity is used in the case where the compound is capable of killing the bacterium while the term “bacteriostatic activity” corresponds to an inhibition of the growth of the bacterium.
  • the same antibacterial compound may have a bactericidal or bacteriostatic effect on the same bacterial strain depending on its concentration.
  • Actinomycetes means any bacteria belonging to the group of actinomycetes. Actinomycetes are generally aerobic Gram positive bacteria. The most common actinomycetes found in relation to field ants are Pseudonocardia and Streptomyces. Bacteria belonging to the genera Gordonia, Tsukamurella, Amycolatopsis, Kribbella, and Nocardioides can also be found.
  • Laccase enzymes of the polyphenol oxidase type. They degrade lignin and provide protection against toxicity some polyphenols. In the nomenclature for enzymes, laccases are grouped under code EC 1 .10.3.2.
  • laccase inhibitor or “compound exhibiting laccase inhibitory activity” is meant a compound inhibiting laccase activity as measured, for example, by ABTS (2,2'-azino-bis (3-ethylbenzene) -thiazoline-6-sulfonic acid) according to the method published by Bourbonnais et al (1990).
  • antioxidant molecule By “antioxidant molecule”, it is necessary to understand the common sense given to this term, namely a molecule capable of reducing or preventing the oxidation of other chemical substances.
  • the antioxidant potential of a molecule can be verified for example via the use of ABTS radicals (Bourbonnais et al., 1990).
  • laccase is an enzyme widely expressed in mushroom ants as well as in the grinding wheel and that a composition comprising a laccase inhibitor causes, in a few days, the abandonment of the nests. located around the location of the compositions or the destruction of these nests
  • the invention relates to a method of controlling ants mushroom including the use of at least one laccase inhibitor.
  • laccase inhibitors There is a wide variety of laccase inhibitors. The skilled person can select a laccase inhibitor through routine tests such as that presented in the examples and based on the method published by Bourbonnais et al (1990).
  • a laccase inhibitor any molecule which, in the context of the method mentioned above, causes a decrease of the activity of the laccase more than 50%, preferably more than 75%, more preferably more than 90%.
  • these inhibitions of laccase activity are obtained at concentrations below 5 mM. Even more preferably, these inhibitions of laccase activity are obtained at concentrations below 1 mM.
  • All antioxidant molecules have the ability to inhibit the activity of a laccase. Nevertheless, there are laccase inhibitors that do not exhibit antioxidant activity.
  • chelants, detergents, non-oxidizing organic acids and cationic metals it is possible to mention chelants, detergents, non-oxidizing organic acids and cationic metals.
  • the following molecules are also molecules exhibiting anti-laccase activity without being antioxidant molecules: ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA), calcium chloride (CaC), rhodotorulic acid, enterobactin, thioglycolic acid, diethyldithiocarbamic acid, azide sodium, cetyltrimethylammonium bromide, Fe 2+ , Cu 2+ , Ag + , Li + , Sn + , Hg + , Mn 2+ , Zn 2+ , Al 3+ , sodium lauryl sulphate, sodium cyanide (NaCN), thiosulphate sodium, oxalic acid, beta-mercaptoethanol.
  • EDTA ethylene diamine tetraacetic acid
  • CaC calcium chloride
  • rhodotorulic acid enterobactin
  • thioglycolic acid diethyldithiocarbamic acid
  • azide sodium cetyltrimethylam
  • the method of combating the field ants comprises the use of at least one laccase inhibitor selected from: an antioxidant molecule, a chelator, a detergent, a non-oxidizing organic acid and a cationic metal.
  • Preferred molecules for use as a laccase inhibitor are:
  • EDTA EDTA
  • rhodotorulic acid enterobactin
  • the laccase inhibitor is an antioxidant molecule.
  • antioxidant molecules are generally known to those skilled in the art (Lu et al., 2010). It will also be possible to verify this activity via conventional tests for measuring the antioxidant potential such as that described in Bourbonnais et al. (1990).
  • the molecules exhibiting anti-laccase activity and antioxidant activity may for example be selected from: ascorbic acid (E300), citric acid (E330), coumaric acid, ferulic acid, gallic acid, palmityl 6-1-ascorbic acid ( E304), syringic acid, sodium / calcium / potassium ascorbates (E301) / (E302) / (E303), butylhydroxyanisole (BHA), butylhydroxytoluol, cysteine, octyl gallstones (E31 1) or dodecyl (E312), glutathione sodium lactate (E325), potassium (E326) or calcium (E327), lecithin (E322), lipoate, carotenoids (E160) such as lutein, luteolin, carotenes such as lycopene, sodium tartrates (E335) / potassium (E336) or sodium and potassium (E337), sodium thiosulfate, vitamin E (natural tocopherol
  • the laccase inhibitor is selected from one of the following compounds: ascorbic acid, citric acid (E330), coumaric acid, palmityl 6-1-ascorbic acid (E304), sodium / calcium / potassium ascorbates (E301 ) / (E302) / (E303), cysteine, octyl (E31 1) gallates or dodecyl (E312), glutathione, sodium (E325), potassium (E326) or calcium (E327) lactates, lecithins ( E322), caratenoids (E160) such as lutein, luteolin, carotenes such as lycopene, sodium tartrate (E335) / potassium (E336) or sodium and potassium tartrate (E337), sodium thiosulfate, vitamin E (natural tocopherols (E306)), synthetic ⁇ -tocopherol (E307), synthetic ⁇ -tocopherol (E308) and synthetic ⁇ -tocopherol (E309)
  • the laccase inhibitor preferably has little impact on the environment and is rapidly degraded.
  • the laccase inhibitor is selected from one of the following compounds: ascorbic acid, sodium ascorbates / calcium (E301) / (E302), sodium lactate (E325), potassium (E326) or calcium (E327), lutein, lycopene, sodium tartrate (E335) / potassium (E336) or sodium and potassium tartrate (E337), sodium thiosulfate, vitamin E (natural tocopherols (E306)), synthetic ⁇ -tocopherol (E307) ), synthetic ⁇ -tocopherol (E308) and synthetic ⁇ -tocopherol (E309), cysteine and glutathione.
  • the laccase inhibitor is selected from one of the following compounds: L-cysteine, coumaric acid, glutathione, sodium thiosulfate, ferulic acid, syringic acid, ascorbic acid, gallic acid.
  • the preferred molecules are natural or easily degradable molecules and thus respect the environment unlike the most common insecticides.
  • the laccase inhibitor is selected from one of the following compounds: L-cysteine, glutathione, sodium thiosulfate, ferulic acid, syringic acid, ascorbic acid, gallic acid.
  • the laccase inhibitor is selected from L-cysteine, ascorbic acid, sodium thiosulfate or glutathione. This laccase inhibitor is used at a concentration sufficient to cause inhibition of laccase activity in the grindstone and ants.
  • the method of combating the field ants according to the invention comprises at least the use of a laccase inhibitor selected from glutathione, L-cysteine, sodium thiosulfate and ascorbic acid.
  • the use of a composition comprising a laccase inhibitor is sufficient to destroy the ant nest by causing the disappearance of the millstone and the colony.
  • the use of a composition comprising at least one laccase inhibitor causes the nest to be abandoned, but a new nest can be reconstructed near the abandoned nest.
  • the inventors have also isolated many actinomycetes from the cuticle of the mushroom ants. Following these observations, they showed that a composition comprising at least one laccase inhibitor supplemented with at least one antibacterial compound having a bactericidal or bacteriostatic activity against actinomycetes can destroy colonies around the location of baits and this without recurring colonies.
  • the addition of at least one antibacterial compound makes it possible to increase the effect of the laccase inhibitor and affects the grinding wheel and then results in the destruction of the colony.
  • the combination of a laccase inhibitor with an antibacterial molecule having a bactericidal and / or bacteriostatic activity against actinomycetes makes it possible on the one hand to optimize the disappearance of the colony and on the other hand to avoid the appearance of new colonies. This is especially true when the treatment is applied before swarming. Indeed the destruction of the nest will not allow the flight (swarming) of winged ants at the origin of the foundation of new colonies thus limiting their spread.
  • the invention relates to a method for controlling ants that includes the use of at least one laccase inhibitor and at least one antibacterial compound or comprising a laccase inhibitory activity and an antibacterial activity. .
  • an antibacterial molecule having a bactericidal and / or bacteriostatic activity against actinomycetes, can allow the destruction of the nest of the mushroom ants.
  • the invention relates to a method for controlling ants mushroom including the use of at least one antibacterial molecule having a bactericidal and / or bacteriostatic activity against actinomycetes.
  • the invention is characterized in that the antibacterial compound is an antibiotic.
  • the antibiotic can be selected from the following classes of antibiotics: ⁇ -lactams, aminoglycosides, macrolides and the like, glycopeptides, tetracyclines and quinolones.
  • this antibiotic can be selected from the following list: chloramphenicol, erythromycin, josamycin, tetracycline, gentamycin, streptomycin, and penicillin.
  • the inventors have identified natural compounds derived from plants having bacteriostatic or bactericidal activity against actinomycetes isolated from the ant cuticle. These natural compounds derived from plants have the advantage of being rapidly degraded and present for the most part a bactericidal or bacteriostatic activity against the target actinomycetes as strong as that of an antibiotic.
  • the preferred molecules are natural or easily degradable molecules and thus respect the environment unlike the most common insecticides or antibacterials.
  • the antibacterial compound used is not an antibiotic used in therapy (human or animal).
  • the exclusion of such an antibiotic is intended to limit the potential emergence of resistance having a consequence on therapeutic strategies.
  • the antibacterial compound used is a natural molecule extracted from the plant. This antibacterial compound is used pure or may be present in a mixture of compounds in an essential oil.
  • the invention is characterized in that the antibacterial compound is selected from the following list: carvacrol, thymol, eugenol, cinnamaldehyde, ⁇ -terpineol, terpinene-4-ol.
  • the antibacterial compound is selected from the following list: carvacrol, thymol, eugenol and cinnamaldehyde.
  • the antibacterial compound according to the invention may also be characterized in that it consists of an essential oil selected from the following essential oils: Oregano, Marjoram, Thyme, Clove, Cinnamon, Tea Tree (Malaleuca alternifolia) , Pine, Geranium, Lemon, Lemongrass and Garlic.
  • an essential oil selected from the following essential oils: Oregano, Marjoram, Thyme, Clove, Cinnamon, Tea Tree (Malaleuca alternifolia) , Pine, Geranium, Lemon, Lemongrass and Garlic.
  • the antibacterial compound is selected from the following list of essential oil: Oregano, Thyme, Clove and Cinnamon.
  • This antibacterial compound is used at a concentration sufficient to cause bactericidal and / or bacteriostatic activity against actinomycetes in the grindstone and ants.
  • This concentration can be determined by those skilled in the art by means of conventional tests for evaluating the minimal inhibitory concentration or the minimum bactericidal concentration such as those used in the examples.
  • compositions according to the invention because, having both a laccase inhibitory activity and an antibacterial activity, they make it possible to act on the two targets identified by the inventors for the fight against ants. mushroom.
  • the compounds according to the invention exhibiting a laccase inhibitory activity and an antibacterial activity are selected from thymol and eugenol.
  • the invention relates to a method of controlling leaf cutting mushroom ants belonging to the genera Atta or Acromyrmex comprising the use of at least one laccase inhibitor.
  • the invention relates to a method for controlling leaf-cutting mushroom ants belonging to the Atta or Acromyrmex genera comprising the use of at least one antibacterial molecule having a bactericidal and / or bacteriostatic activity against actinomycetes.
  • compositions or methods according to the invention can operate with one or more laccase inhibitors preferably in combination with one or more antibacterial compounds.
  • the subject of the invention is an anti-mushroom ant control method comprising the use of a formicidal composition comprising at least one compound or a combination of compounds selected from:
  • the invention relates to a method of controlling ants mushroom including the use of at least one appetizing oligosaccharide or polysaccharide.
  • the invention relates to a method of controlling ants mushroom including the use of at least one oligosaccharide appetizer or polysaccharide in combination with at least one laccase inhibitor alone or in combination with at least one antibacterial compound.
  • the subject of the invention is a method for controlling leaf-cutting mushroom ants belonging to the Atta or Acromyrmex genera comprising the use of at least one oligosaccharide or polysaccharide appetizer in combination with at least one laccase inhibitor. alone or in combination with at least one antibacterial compound.
  • the oligosaccharide or polysaccharide appetizer may be chosen from: starch, amylose, amylopectin, cellobiose, glycogen, glucose, sucrose, laminarin ((1-3) -beta-D-glucan), maltodextrin, cyclodextrin polymers, polymers isomaltose, icodextrins, dextran, maltoheptose, maltohexose, maltopentaose, maltotetrose, maltotriose, maltobiosis and their derivatives.
  • the oligosaccharide appetizer or polysaccharide is chosen from: starch, amylose, cellobiose, laminarin, maltodextrin, maltobiosis, glucose, sucrose and glycogen.
  • the oligosaccharide appetizer or polysaccharide is selected from: starch, amylose, laminarin, maltodextrin and glycogen.
  • the appetizer is starch.
  • the appetizer is itself in the form of a composition and constitutes the majority element.
  • starch is the major component of wheat flour.
  • the appetizing concentration is in particular a function of the presence and the amount of laccase inhibitor and / or antibacterial agent.
  • the amount of appetizer is between 600g / kg and 999g / kg; preferably between 800 g / kg and 999 g / kg, preferably between 850 g / kg and 990 g / kg, or even between 870 g / kg and 950 g / kg of the formicidal composition of the invention.
  • the invention relates to a formicidal composition comprising at least one laccase inhibitor or at least one antibacterial compound or a combination of at least one laccase inhibitor and at least one antibacterial compound as active compounds. against the mushroom ants.
  • these two compounds are the only active compounds against the ants champignonisses.
  • the antibacterial compounds and the laccase inhibitors are the same (including the preferred compounds) as those described above with respect to the method of the invention.
  • the concentration of antibacterial compound is between 1 and 200 g / kg of the formicidal composition of the invention.
  • it is between 10 g / kg and 150 g / kg and more preferably between 50 g / kg and 120 g / kg of the formicidal composition of the invention.
  • the concentration of laccase inhibitor is between 1 and 200 g / kg of the formicidal composition of the invention. It is preferably between 10 g / kg and 150 g / kg and more preferably between 50 g / kg and 120 g / kg of the formicidal composition of the invention.
  • composition according to the invention may be a combination product of at least one laccase inhibitor and at least one antibacterial compound for simultaneous, spread or separate use over time.
  • the composition according to the invention may comprise at least one compound having both ant laccase and grinding inhibitory activity and bactericidal and / or bacteriostatic activity against actinomycetes present in the grinding wheel and on the ants.
  • the skilled person will readily know, on the basis of the method published by Bourbonnais et. al (1990) mentioned above and used in the experimental part, identify the bactericidal and / or bacteriostatic compounds that can be used against the actinomycetes present in the grindstone and on the ants having ant laccase and grinding inhibitory activity.
  • composition according to the invention may also comprise at least one appetizer.
  • the appetizer is an appetizing carbohydrate.
  • the appetizer is more preferably selected from the oligosaccharide or polysaccharide appetizers described above relative to the method of the invention (including the preferred compounds).
  • the invention relates to a formicidal composition as described above comprising starch as polysaccharide appetizer.
  • the invention relates to a formicidal composition
  • a formicidal composition comprising starch as a polysaccharide appetizer and at least one compound or combination of compounds selected from:
  • the formicidal composition according to the invention does not include compounds targeting the insect nervous system (e.g., fipronil).
  • composition according to the invention is specific to mushroom ants.
  • this composition does not have an immediate effect.
  • the compositions according to the invention are devoid of repulsive effect. Because of this effect "delay" and the absence of repellent effect, the composition is not necessarily dispersed on the colony. It can be placed in the fields to be protected or at the level of the harvesting columns. The ants musicians will bring the composition to the nest where it will be in contact with the whole colony and the mushroom. In this embodiment, the use of an appetizer is particularly advantageous.
  • composition according to the invention may be dispersed directly on or around the nest when the latter is located (for example less than 5 meters) or preferably near the harvesting columns (for example less than 2 meters).
  • composition according to the invention may be dispersed at once on or around the nest or near the harvesting columns.
  • the composition according to the invention is dispersed regularly, in several times, on or around the nest or near the harvesting columns.
  • Dispersions can be daily, or spaced 2, 3, 4, 5, or 6 days apart, or one, two, or three weeks apart.
  • the method according to the invention may comprise the dispersion of 20 g to 500 g of formicidal composition according to the invention per day.
  • the method according to the invention may comprise the dispersion of 10 g to 100 g of formicidal composition according to the invention per day, over 5 to 30 consecutive days.
  • the method according to the invention may also comprise the dispersion of 100 g to 500 g, preferably 200 g to 500 g of formicidal composition according to the invention in one go.
  • Figure 1 shows a measure of the anti-laccase activity of L-cysteine on a sample of grinding wheel (A) and ant (B).
  • the grindings were made in mortars placed on ice, using pestles.
  • the ants (2g) and the grind (2g) were milled in 10ml of distilled water chilled at 4 ° C. After obtaining a ground homogeneous texture, the whole was centrifuged. Centrifugation was performed at 4 ° C, 15,000 rpm for 20min. For protein precipitation, the supernatant was 80% saturated with ammonium sulfate ((NH) 2 SO 4 ). After total dissolution of the ammonium sulfate, the resulting solution is placed at 4 ° C for 12 hours. The solution was then centrifuged at 4 ° C at 15,000 rpm for 20 minutes.
  • the pellet obtained is redissolved in a minimum of cold distilled water and dialyzed against 5 liters of distilled water at 4 ° C. for 12 hours.
  • the extract thus obtained constitutes the crude enzymatic extract. These extracts were aliquoted and then stored at -20 ° C.
  • the enzymatic activity was evaluated with respect to the degradation capacity of 16 substrates:
  • Oligosaccharidase activity was determined by the glucose oxidase (GOD) assay method, according to Werner et al. (1970). Heterosidase activity was assessed indirectly by measuring the amount of para-nitrophenol (PNP) released, according to the method described by Nunan et al., (2015).
  • GOD glucose oxidase
  • PNP para-nitrophenol
  • the proteins are assayed by the method using the BioRad® reagent. To achieve the standard range bovine serum albumin was used.
  • the assay for laccase activity is based on a colorimetric method in which the substrate ABTS (2,2'-AZINO-bis (3-ETHYLBENZ-THIAZOLINE-6-SULFONIC ACID) in reduced form (colorless) is oxidized (green color) in the presence of the enzyme
  • the method was published by Bourbonnais et al in 1990.
  • the test molecule is added to the reaction mixture with amounts ranging from 0.1 mM to 100 mM
  • the inhibitors chosen for the analyzes are compounds having an antioxidant power.
  • the bacterial strains adhering to the ant cuticle were removed by using a dispersing solution corresponding to a 0.9% NaCl solution containing 10% Tween 80.
  • the actinomycete strains were isolated by successive subcultures on agar NA media (composition: 2.5 g of K 2 HPO 4; 0.5 g of sodium nitrate, 7.5 g of agar, 2 g of N- acetyl-glucosamine, Qs 500 ml, pH 6.5) or PCA (composition: casein peptone 5.0 g, yeast extract 2.5 g, D (+) - glucose 1.0 g, agar 14.0 g; Qsp1000 ml pH 7) and verification of the morphology by optical microscopy.
  • agar NA media composition: 2.5 g of K 2 HPO 4; 0.5 g of sodium nitrate, 7.5 g of agar, 2 g of N- acetyl-glucosamine, Qs 500 ml, pH 6.5
  • PCA composition: casein peptone 5.0 g, yeast extract 2.5 g, D (+) - glucose 1.0 g, agar 14.0
  • the culture was incubated with shaking at 27 ° C overnight. After bacterial growth, samples of 2 ml of culture were taken on each sample and placed respectively in eppendorf tubes and then centrifuged at 10,000 g for 10 min. Bacterial lysis was performed using FastPrep®-24 (MP Biomedicals) and the "Powerbead" tubes included in the kit. The conditions were as follows: Frequency 4.0 ms-1, time 45 s. The PowerSoil DNA isolation kit (Mobio Laboratories) was used to extract the total DNA from pellets obtained after centrifugation. The protocol applied is the one recommended by the supplier. The DNA was eluted in 70 ⁇ l of Tris-HCl buffer provided with the kit. The concentration of total DNA extracted was determined spectrophotometrically using Nanodrop and stored at -20 ° C before further analysis.
  • a region specific for the 16S rRNA gene specific to bacteria was amplified by PCR under the following conditions:
  • the primers used were: 27F and 1390R (Mao et al 2012). Verification of the amplicons was done by electrophoresis on 1% agarose gel (weight / volume of 0.5X TAE buffer) containing 0.5X Sybersafe. The presence of the bands was visualized by exposing the gel to ultraviolet (UV) light.
  • UV ultraviolet
  • the measurement of the antibacterial activity can be carried out in a liquid medium (in a liquid bacterial culture) or in a solid medium (on a petri-agar plate) by adding a known concentration of antibiotic.
  • a liquid medium in a liquid bacterial culture
  • a solid medium on a petri-agar plate
  • OD Optical Density
  • solid medium the inhibition of the growth is estimated by the diameter of the halo corresponding to the zone where no growth is observed.
  • a sample is taken. This is suspended in 1 ml of physiological saline without measuring the OD.
  • Seeding is carried out with 100 ⁇ of suspension using a rake.
  • a disc soaked in the essential oil is placed in the center of the box.
  • both discs are placed in the same box. Dilutions were made by diluting the essential oils in sunflower oil.
  • a control box was made and consists of an inoculum in the absence of essential oil.
  • a second witness this time with a disc impregnated with sunflower oil was also performed to verify the absence of an effect. All the products were sterilized and the experiments carried out under hood in sterile conditions.
  • Erythromycin is a macrolide antibiotic that has a similar or slightly broader antimicrobial spectrum than penicillins. This molecule serves as a reference.
  • pellets Two days after having deposited the pellets, the nests are visited for the first time then at 4, 6, 8, 9, 10, 12 and 14 days.
  • pellets (10 g) placed in a small plastic bag were deposited near a dome. At each visit the bag is replaced whether or not the pellets were harvested by the ants.
  • the pellets impregnated with ascorbic acid or sodium thiosulphate are alternated at each visit.
  • a test of activity of the colony is carried out using a wooden rod. This is pushed into the ground at different places around the cone and when no resistance is felt it means that the rod is pressed at the cavity containing the wheel. In a few seconds dozens of ants disturbed by the introduction of the stem in the cavity of the grinding wheel back along the stem thus attesting to the vitality of the colony. 1 .3.2.2. Anti-laccase + antibacterial
  • the pellets may also contain a mixture of anti-laccase and antibacterial molecule.
  • compositions tested Several compositions according to the invention have been tested:
  • compositions took place as mentioned in point 1 .3.1.
  • Each active compound was present at 10% of the composition (by weight of the composition), the remainder consisting of a wheat flour paste.
  • compositions mentioned above were tested on two or three nests. At each nest were deposited at once 5 sachets each containing 25 g of one of the compositions mentioned above.
  • laccases or polyphenol oxidases catalyze the oxidation of phenolic substances (Thurston, 1994).
  • laccases in addition to their oxidative action on polyphenolic compounds would also have a detoxifying role vis-à-vis the defensive substances of plants.
  • L-cysteine causes, at concentrations greater than 0.5 mM, an inhibition of more than 80% of the activity ( Figure 1). Ascorbic acid and gallic acid, in turn, inhibit more than 90% of the activity at concentrations of 0.25 mM. With ferulic acid and syringic acid this percentage inhibition is obtained with a concentration of 0.5 mM (results not shown).
  • This step made it possible to isolate, from ants belonging to the species Acromyrmex octospinosus, 15 strains of actinomycetes, 12 of which belong to the genus Tsukumurella, two to the genus Streptomyces and one to the genus Gordonia.
  • a total of 5 strains belonging to the genera Streptomyces, Tsukumurella and Gordonia were selected for the analysis of antibacterial substances.
  • composition comprising an anti-laccase molecule:
  • composition comprising an anti-laccase molecule and an antibacterial molecule:
  • the formicidal compositions comprising a laccase inhibitor, an antibacterial agent or bacteriostatic actinomycetes commensales mushroom ants or their combination are effective in the fight against the ants champignonnists by causing the abandonment and / or destruction of the nests.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Catching Or Destruction (AREA)

Abstract

L'invention concerne un procédé de lutte contre les fourmis champignonnistes ainsi qu'une composition formicide capable de détruire spécifiquement les colonies de fourmis champignonnistes. La présente invention concerne également un kit pouvant être utilisé dans ledit procédé.

Description

METHODES ET COMPOSITIONS POUR LE CONTROLE DES FOURMIS
CHAMPIGNONNISTES
DOMAINE DE L'INVENTION L'invention se rapporte au domaine du contrôle des nuisibles. Elle propose un nouveau procédé de lutte contre les fourmis champignonnistes ainsi qu'une nouvelle composition formicide capable de détruire spécifiquement les colonies de fourmis champignonnistes. La présente invention propose également une méthode de préparation d'une telle composition ou d'un kit pouvant être utilisé dans ledit procédé.
ETAT DE LA TECHNIQUE
Les fourmis champignonnistes de type fourmis « coupe feuille » appartenant par exemple aux genres Atta ou Acromyrmex sont essentiellement présentes en Amérique Centrale et en Amérique du Sud. La particularité principale de la tribu Attini, regroupant notamment les genres Atta ou Acromyrmex, est le fait qu'elle cultive, au sein même de la fourmilière, un champignon basidiomycète saprophyte de l'espèce Leucoagaricus gongylophorus. Les fourmis assurent sa croissance tandis que le champignon assure l'apport de nutriments pour la colonie en dégradant des molécules complexes, non assimilables par les fourmis (Richard et al, 2005). Le champignon, alimenté en matière première par les fourmis, peut également constituer une source nutritive puisque des auteurs ont observé que le champignon était consommé par certaines fourmis (Qinlan et al., 1978, Fisher et al., 1994) et le champignon est une source d'enzymes assurant la dégradation de la matière végétale. Les fourmis champignonnistes « coupe feuilles » représentent un nuisible pour les cultures agricoles et forestières. En effet, elles se retrouvent sans prédateur lorsqu'elles envahissent des monocultures développées par l'homme (phénomène accentué avec la déforestation) ce qui entraine une forte présence non régulée. Elles y collectent feuilles, fleurs, fruits et graines et ravagent ainsi la plupart des cultures agricoles : les cultures vivrières (manioc, patate douce, maïs, fruits à pain...), fruitières (citronniers, orangers, manguiers, avocatiers...), maraîchères (piments, haricots, salades...) et ornementales (rosiers, hibiscus...). Les dégâts provoqués par les fourmis champignonnistes représentent 30% des coûts de gestion des cultures d'eucalyptus au Brésil. Une colonie mature peut provoquer la destruction de 3 tonnes de canne à sucre par an, soit une perte estimée à 60 millions de dollars. Aux Etats- Unis, et plus particulièrement au Texas, les dégâts annuels sont estimés à plusieurs millions de dollars alors qu'ils sont de plusieurs centaines de millions de dollars dans l'état de Sao Paulo (Brésil).
Les traitements utilisés pour contrôler leur expansion, principalement basés sur des produits chimiques pesticides, ont entraîné pollution et détérioration des sols. Ces composés sont aujourd'hui peu à peu retirés du marché car ils présentent un risque pour l'homme et l'environnement. Dans le cadre de la lutte contre Acromyrmex octospinosus, commencée dès la fin des années cinquante, de nombreux produits chimiques (produits organochlorés utilisés en tant qu'insecticides) ont été utilisés. Après l'aldrine (1 ,2,3,4,10,10-hexachloro-1 ,4,4a, 5,8, 8a-hexahydro- 1 ,4-endo,exo-5,8- dimétha-nonaphtalène), qui aujourd'hui est considéré comme un polluant organique persistant, le Mirex® (1 ,1 a,2,2,3,3a,4,5, 5, 5a, 5b, 6- dodecachlorooctahydro-1 H-1 ,3,4-methanetriyl)cyclobuta[cc ] pentalene) a été utilisé avant d'être à son tour interdit à cause de son impact néfaste sur l'environnement. Un autre produit nommé Blitz (fipronil) a été employé, mais son champ d'action étant trop large, il a été retiré de la vente en Europe (2013) et n'est donc plus utilisé.
La plupart de ces insecticides avaient comme point commun de cibler le système nerveux des insectes en général et pas seulement celui des fourmis champignonnistes. Ainsi ces composés, non spécifiques, affectent d'autres espèces vulnérables (e.g. abeilles). Par ailleurs, l'action contre le système nerveux des insectes est généralement assez rapide et cible l'insecte en tant que tel. Or, contre les insectes sociaux, il est préférable de cibler la colonie dans sa globalité notamment via une action contre conjointement les fourmis et leur champignon symbiotique. De plus, ces composés insecticides classiques sont généralement difficilement biodégradables et entraînent une activité toxique persistante dans les sols et les eaux.
Il existe d'autre moyen de lutte contre les fourmis champignonnistes comme des composés chimiques fongicides ou encore des champignons pathogènes (WO2012050857) ciblant les fourmis (entomopathogènes) ou le champignon poussant sur la meule (mycopathogène). Néanmoins, ces solutions ne se sont pas révélées suffisamment efficaces. D'une part la combinaison doit être appliquée directement sur le nid et d'autre part elle ne présente une efficacité que de 50% en 9- 10 jours.
Les moyens locaux incluent également l'utilisation de plantes répulsives afin d'éloigner les nids de fourmis champignonnistes. Une telle utilisation présente toutefois une efficacité réduite et n'ont pas de conséquence sur le nid ou la colonie.
Actuellement il n'existe aucun moyen de lutte efficace et le problème d'infestation par les fourmis champignonnistes reste capital.
Ainsi, les recherches actuelles ont eu pour objectif de trouver un moyen innovant de lutte contre les fourmis champignonnistes qui serait peu coûteux, peu nocif pour l'environnement et spécifique de ces fourmis. Dans ce contexte, la présente invention propose une nouvelle méthode et composition associée visant à cibler la colonie et son environnement plutôt que la fourmi elle-même.
DESCRIPTION DETAILLEE :
Les inventeurs ont découvert que la laccase est une enzyme largement exprimée chez les fourmis champignonnistes ainsi que dans la meule et qu'une composition comprenant un inhibiteur de laccase ou présentant une activité inhibitrice de laccase entraine, en quelques jours, l'abandon des nids situés autour de l'emplacement des appâts. De plus, conformément à la présente invention, une composition comprenant un inhibiteur de laccase additionné d'un composé antibactérien ayant une activité bactéricide ou bactériostatique contre les actinomycètes (ou comprenant un composé présentant une activité inhibitrice de laccase et une activité antibactérienne contre les actinomycètes) permet de détruire les colonies autour de l'emplacement des appâts et cela sans réapparition des colonies. Ces nouvelles méthodes de lutte contre les fourmis et les compositions associées étant spécifiques des fourmis champignonnistes, elles présentent un impact plus faible sur l'environnement que les compositions formicides classiques. De plus, dans certains modes de réalisation, ces compositions sont rapidement dégradées.
Sauf indication contraire, les termes scientifiques et techniques utilisés dans le cadre de la présente invention auront les significations qui sont communément admises par l'homme du métier.
Par « Fourmis champignonnistes », on entend désigner ici les fourmis appartenant à la tribu des Attini et en particulier aux genres Atta ou Acromyrmex. Ces fourmis ont la particularité de cultiver au sein même de la fourmilière, un champignon basidiomycète saprophyte de l'espèce Leucophorus gongylophorus. Les fourmis assurent sa croissance tandis que le champignon assure l'apport de nutriments pour la colonie en dégradant des molécules complexes. Au sein de cette famille, les fourmis appartenant aux genres Atta ou Acromyrmex forment une sous-catégorie appelée fourmis « coupe feuille ». Les espèces les plus représentées sont Acromyrmex heyeri, Acromyrmex echinatior, Acromyrmex lobicornis, Acromyrmex crassispinus, Acromyrmex laticeps, Acromyrmex striatus, Acromyrmex lundii, Acromyrmex octospinosus, Acromyrmex rugosus, Acromyrmex subterraneus brunneus, Acromyrmex subterraneus molestans, Acromyrmex subterraneus subterraneus, Acromyrmex volcanus, Acromyrmex Balzani, Atta capiguara, Atta cephalotes, Atta colombica, Atta sexdens, Atta sexdens srubropilosa, Atta laevigata, Atta bisphaerica, Atta texana et Atta vollenweideri.
Au sens de l'invention, l'expression « lutte contre les fourmis champignonnistes » correspond ici à une action conduisant à l'abandon du nid ou à la destruction de la colonie.
Les termes « fourmilière » et « nid » peuvent être utilisés ici de manière interchangeable. Ils correspondent à la structure abritant la colonie de fourmis champignonnistes. Par « Colonie », il faut comprendre ici un groupe de fourmis, autre qu'un couple unique et comprenant au moins une reine, construisant des nids pour y élever une progéniture de manière coopérative.
Par « Meule » également appelée « jardin à champignon » (ie fungus garden) dans la littérature, il faut comprendre ici la structure fongique cultivée par les fourmis champignonnistes et composée majoritairement du champignon basidiomycète saprophyte de l'espèce Leucophorus gongylophorus poussant sur la matière végétale récoltée par les fourmis.
Par « Composition formicide », il faut comprendre ici une composition formulée de façon à cibler spécifiquement les fourmis. Ainsi, contrairement à une composition insecticide, la composition formicide selon l'invention n'entraînera pas la mort des abeilles ou des autres arthropodes. La composition formicide selon l'invention peut entraîner un abandon du nid par la colonie de fourmis champignonnistes ou la destruction de ladite colonie. Au sens de l'invention, l'expression « Composé antibactérien » correspond ici à un composé ayant une activité bactéricide ou bactériostatique. Le terme « Activité bactéricide » est utilisé dans le cas où le composé est capable de tuer la bactérie tandis que le terme « Activité bactériostatique » correspond à une inhibition de la croissance de la bactérie. Un même composé antibactérien peut avoir un effet bactéricide ou bactériostatique sur une même souche bactérienne en fonction de sa concentration.
Par « Actinomycètes », il faut comprendre toute bactérie appartenant au groupe des actinomycètes. Les actinomycètes sont des bactéries Gram positives généralement aérobies. Les actinomycètes les plus fréquemment retrouvés en relation avec des fourmis champignonnistes sont les Pseudonocardia et les Streptomyces. Les bactéries appartenant aux genres Gordonia, Tsukamurella, Amycolatopsis, Kribbella, et Nocardioides peuvent également être retrouvées.
Par « Laccase », il faut comprendre des enzymes de type polyphénol oxydases. Elles permettent de dégrader la lignine et apportent une protection contre la toxicité de certains polyphénols. Dans la nomenclature relative aux enzymes, les laccases sont regroupées sous le code EC 1 .10.3.2.
Par « Inhibiteur de laccase » ou « composé présentant une activité inhibitrice de laccase », il faut comprendre un composé inhibant l'activité des laccases telle que mesurée par exemple par le substrat ABTS (2,2'-azino-bis (3-ethylbenz-thiazoline-6- sulfonic acid) selon la méthode publiée par Bourbonnais et. al (1990).
Par « Molécule antioxydante », il faut comprendre le sens commun donné à ce terme à savoir une molécule capable de diminuer ou d'empêcher l'oxydation d'autres substances chimiques. Le potentiel antioxydant d'une molécule peut être vérifié par exemple via l'utilisation des radicaux ABTS (Bourbonnais et. al 1990).
Par « Appétant » ou «appât», il faut comprendre un composé ayant un pouvoir attractif sur les fourmis champignonnistes et augmentant ainsi la quantité de composition selon l'invention récoltée par lesdites fourmis. Par appétant glucidique, il faut comprendre une molécule appartenant à la famille des glucides. Par appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique, il faut comprendre une molécule de type oligosaccharidique ou polysaccharidique comme par exemple les fructanes, glucanes, galactanes, mannanes ou hémicelluloses.
Comme cela est montré dans les exemples, les inventeurs ont découvert que la laccase est une enzyme largement exprimée chez les fourmis champignonnistes ainsi que dans la meule et qu'une composition comprenant un inhibiteur de laccase entraine, en quelques jours, l'abandon des nids situés autour de l'emplacement des compositions ou la destruction de ces nids
Une telle méthode permet de protéger les récoltes en empêchant le développement de nids aux abords des champs à protéger. Ainsi, selon un premier aspect, l'invention porte sur une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes comprenant l'utilisation d'au moins un inhibiteur de laccase.
Il existe une grande variété d'inhibiteur de laccase. L'homme du métier peut sélectionner un inhibiteur de laccase grâce à des tests de routine tel que celui présenté dans les exemples et basé sur la méthode publiée par Bourbonnais et al (1990).
En particulier, est considéré comme étant un inhibiteur de laccase toute molécule qui, dans le cadre de la méthode mentionnée ci-dessus, entraine une diminution de l'activité de la laccase de plus de 50%, de préférence de plus de 75 %, de façon plus préférée de plus de 90%. De préférence, ces inhibitions de l'activité de la laccase sont obtenues à des concentrations inférieures à 5mM. De manière encore plus préférée, ces inhibitions de l'activité de la laccase sont obtenues à des concentrations inférieures à 1 mM. Toutes les molécules anti-oxydantes ont la capacité d'inhiber l'activité d'une laccase. Néanmoins, il existe des inhibiteurs de laccases ne présentant pas une activité anti-oxydante. Parmi les molécules présentant une activité anti-laccase et n'étant pas des molécules anti-oxydantes, il est possible de citer les chélateurs, les détergents, les acides organiques non oxydants et les métaux cationiques. Par exemple, les molécules suivantes sont également des molécules présentant une activité anti-laccase sans être des molécules antioxydantes : acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA), chlorure de calcium (CaC ), acide rhodotorulique, entérobactine, acide thioglycolique, acide diéthyldithiocarbamique, azoture de sodium, bromure de cétyltriméthylammonium, Fe2+, Cu2+, Ag+, Li+, Sn+, Hg+, Mn2+, Zn2+, Al3+, laurylsulfate de sodium, cyanure de sodium (NaCN), thiosulphate de sodium, acide oxalique, beta-mercaptoéthanol.
Ainsi, typiquement, la méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes comprend l'utilisation d'au moins un inhibiteur de laccase sélectionné parmi : une molécule anti-oxydante, un chélateur, un détergent, un acide organique non oxydant et un métal cationique.
Les molécules préférées pour leur utilisation en tant qu'inhibiteur de laccases sont :
pour les chélateurs : EDTA, acide rhodotorulique, entérobactine
pour les détergents : laurylsulfate de sodium,
pour les métaux cationiques : Fe2+, Cu2+, Ag+, Li+, Sn+, Hg+, Mn2+, Zn2+, Al3+, pour les acides organiques non oxydants : acide oxalique, acide thioglycolique, acide diéthyldithiocarbamique. De manière préférée, l'inhibiteur de laccase est une molécule anti-oxydante.
De telles molécules anti-oxydantes sont généralement connues de l'homme du métier (Lu et al. 2010). Il pourra par ailleurs, vérifier cette activité via des tests classiques de mesure du potentiel antioxydant tel que celui décrit dans Bourbonnais et al. (1990).
Les molécules présentant une activité anti-laccase et une activité anti-oxydante peuvent par exemple être sélectionnées parmi : acide ascorbique (E300), acide citrique (E330), acide coumarique, acide férulique, acide gallique, acide palmityl 6-1 - ascorbique (E304), acide syringique, ascorbates de sodium/calcium/potassium (E301 )/(E302)/(E303), butylhydroxyanisole (BHA), butylhydroxytoluol, cystéine, gallates d'octyle (E31 1 ) ou de dodécyle (E312), glutathion, lactates de sodium (E325), de potassium (E326) ou de calcium (E327), lécithines (E322), lipoate, des caroténoïdes (E160) comme la lutéine, lutéoline, des carotènes comme la lycopène, tartrates de sodium (E335)/potassium (E336) ou de sodium et de potassium (E337), thiosulfate de sodium, vitamine E (tocophérols naturels (E306)), α-tocophérol de synthèse (E307), γ-tocophérol de synthèse (E308) et δ-tocophérol de synthèse (E309), sélénium et chlorure d'hydroxylammonium. En particulier, l'inhibiteur de laccases est sélectionné parmi l'un des composés suivants : acide ascorbique, acide citrique (E330), acide coumarique, acide palmityl 6-1 -ascorbique (E304), ascorbates de sodium/calcium/potassium (E301 )/(E302)/(E303), cystéine, gallates d'octyle (E31 1 ) ou de dodécyle (E312), glutathion, lactates de sodium (E325), de potassium (E326) ou de calcium (E327), lécithines (E322), des caraténoides (E160) comme la lutéine, lutéoline, des carotènes comme la lycopène, tartrates de sodium (E335)/potassium (E336) ou de sodium et de potassium (E337), thiosulfate de sodium, vitamine E (tocophérols naturels (E306)), α-tocophérol de synthèse (E307), γ-tocophérol de synthèse (E308) et δ-tocophérol de synthèse (E309), sélénium et chlorure d'hydroxylammonium. L'inhibiteur de laccase a de préférence peu d'impact sur l'environnement et y est rapidement dégradé. Ainsi, de façon préférée l'inhibiteur de laccases est sélectionné parmi l'un des composés suivants : acide ascorbique, ascorbates de sodium/calcium (E301 )/ (E302), lactates de sodium (E325), de potassium (E326) ou de calcium (E327), lutéine, lycopène, tartrates de sodium (E335)/potassium (E336) ou de sodium et de potassium (E337), thiosulfate de sodium, vitamine E (tocophérols naturels (E306)), α-tocophérol de synthèse (E307), γ-tocophérol de synthèse (E308) et δ-tocophérol de synthèse (E309), cystéine et glutathion. De préférence, l'inhibiteur de laccases est sélectionné parmi l'un des composés suivants : L-cystéine, acide coumarique, glutathion, thiosulfate de sodium, acide férulique, acide syringique, acide ascorbique, acide gallique.
En outre, les molécules préférées sont des molécules naturelles ou facilement dégradables et respectent donc l'environnement contrairement aux insecticides les plus répandus. Ainsi, de manière encore plus préférée, l'inhibiteur de laccases est sélectionné parmi l'un des composés suivants : L-cystéine, glutathion, thiosulfate de sodium, acide férulique, acide syringique, acide ascorbique, acide gallique.
De manière particulièrement préférée, l'inhibiteur de laccases est sélectionné parmi la L-cystéine, l'acide ascorbique, le thiosulfate de sodium ou le glutathion. Cet inhibiteur de laccase est utilisé à une concentration suffisante pour entraîner une inhibition de l'activité des laccases présentes dans la meule et chez les fourmis.
Cette concentration peut être déterminée par l'homme du métier grâce à des tests conventionnels d'évaluation de la concentration minimale inhibitrice tels que ceux mis en œuvre dans les exemples. Ainsi, typiquement, la méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes selon l'invention comprend au moins l'utilisation d'un inhibiteur de laccases sélectionné parmi le glutathion, L-cystéine, le thiosulfate de sodium et l'acide ascorbique.
Comme le montre la partie expérimentale, l'utilisation d'une composition comprenant un inhibiteur de laccases suffit à détruire le nid de fourmis en engendrant la disparition de la meule et de la colonie. Dans certains cas, l'utilisation d'une composition comprenant au moins un inhibiteur de laccase entraine l'abandon du nid mais un nouveau nid peut être reconstruit à proximité du nid abandonné. Les inventeurs ont également isolé de nombreux actinomycètes de la cuticule des fourmis champignonnistes. Suite à ces observations, ils ont montré qu'une composition comprenant au moins un inhibiteur de laccase additionné d'au moins un composé antibactérien ayant une activité bactéricide ou bactériostatique contre les actinomycètes permet de détruire les colonies autour de l'emplacement des appâts et cela sans réapparition des colonies. Ainsi l'ajout d'au moins un composé antibactérien permet d'augmenter l'effet de l'inhibiteur de laccase et affecte la meule puis aboutit à la destruction de la colonie. Ainsi, la combinaison d'un inhibiteur de laccase avec une molécule antibactérienne ayant une activité bactéricide et/ou bactériostatique contre les actinomycètes permet d'une part d'optimiser la disparition de la colonie et d'autre part d'éviter l'apparition de nouvelles colonies. Cela est d'autant plus vrai lorsque le traitement est appliqué avant l'essaimage. En effet la destruction du nid ne permettra pas l'envol (essaimage) des fourmis ailées à l'origine de la fondation de nouvelles colonies limitant ainsi leur propagation.
Alors que l'inhibiteur de laccase pris individuellement permet un contrôle des fourmis champignonnistes (e.g. abandon du nid) sans destruction de la colonie, la combinaison de ces deux composés entraine une destruction de la colonie. Cette action est en outre spécifique des fourmis champignonnistes et n'aura pas ou peu d'impact sur l'environnement.
Ainsi, de manière préférée, l'invention porte sur une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes comprenant l'utilisation d'au moins un inhibiteur de laccase et d'au moins un composé antibactérien ou comprenant une activité inhibitrice de laccase et une activité antibactérienne.
De manière surprenante les inventeurs ont observé que l'utilisation d'une molécule antibactérienne, ayant une activité bactéricide et/ou bactériostatique contre les actinomycètes, peut permettre la destruction du nid des fourmis champignonnistes.
Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, l'invention porte sur une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes comprenant l'utilisation d'au moins une molécule antibactérienne ayant une activité bactéricide et/ou bactériostatique contre les actinomycètes.
Il existe une très grande diversité de composés antibactériens actifs contre les actinomycètes. Il existe des tests de routine permettant de détecter et de quantifier cette activité tels que ceux présentés dans les exemples (antibiogramme en boîte de Pétri, à savoir : disques imprégnés sur gélose) qui peuvent être mis en œuvre sur des souches d'actinomycètes de collection (par exemple : ATCC23345, ATCC19727) ou sur des souches directement isolées de fourmis champignonnistes (cf. exemples).
En particulier, l'invention est caractérisée en ce que le composé antibactérien est un antibiotique.
Plus particulièrement l'antibiotique peut être sélectionné parmi les classes d'antibiotiques suivantes : β-lactamines, Aminosides, Macrolides et apparentés, glycopeptides, tétracyclines et quinolones. Par exemple, cet antibiotique peut être sélectionné parmi la liste suivante : chloramphenicol, erythromycine, josamycine, tétracycline, gentamycine, streptomycine, et pénicilline.
Par ailleurs, les inventeurs ont identifié des composés naturels provenant de végétaux ayant une activité bactériostatique ou bactéricide contre les actinomycètes isolés à partir de la cuticule des fourmis. Ces composés naturels issus de végétaux ont l'avantage d'être dégradé rapidement et présentent pour la plupart une activité bactéricide ou bactériostatique contre les actinomycètes visés aussi forte que celle d'un antibiotique. En outre, les molécules préférées sont des molécules naturelles ou facilement dégradables et respectent donc l'environnement contrairement aux insecticides ou antibactériens les plus répandus.
De préférence, le composé antibactérien utilisé n'est pas un antibiotique utilisé en thérapeutique (humaine ou animale). L'exclusion d'un tel antibiotique a pour but de limiter l'émergence potentielle de résistance ayant une conséquence sur les stratégies thérapeutiques. De préférence le composé antibactérien utilisé est une molécule naturelle extraite de plante. Ce composé antibactérien est utilisé pur ou peut être présent au sein d'un mélange de composés dans une huile essentielle.
Ainsi, plus particulièrement, l'invention est caractérisée en ce que le composé antibactérien est sélectionné parmi la liste suivante : carvacrol, thymol, eugénol, cinnamaldéhyde, a-terpineol, terpinène-4-ol. De préférence, le composé antibactérien est sélectionné parmi la liste suivante : carvacrol, thymol, eugénol et cinnamaldéhyde.
Le composé antibactérien selon l'invention peut également être caractérisé en ce qu'il consiste en une huile essentielle sélectionnée parmi les huiles essentielles provenant des végétaux suivants : Origan, Marjolaine, Thym, Clou de girofle, Cannelle, Arbre à thé (Malaleuca alternifolia), Pin, Géranium, citron, citronnelle et Ail.
De préférence, le composé antibactérien est sélectionné parmi la liste suivante d'huile essentielle suivante : Origan, Thym, Clou de girofle et Cannelle. Ce composé antibactérien est utilisé à une concentration suffisante pour entraîner une activité bactéricide et/ou bactériostatique contre les actinomycètes présents dans la meule et sur les fourmis. Cette concentration peut être déterminée par l'homme du métier grâce à des tests conventionnels d'évaluation de la concentration minimale inhibitrice ou de la concentration minimale bactéricide tels que ceux mis en œuvre dans les exemples.
De manière tout à fait surprenante, une activité anti-laccase a été observée pour les composés antibactériens eugénol et thymol. Ces deux composés présentent donc un intérêt particulier pour les compositions selon l'invention car, ayant à la fois une activité inhibitrice de laccase et une activité antibactérienne, ils permettent d'agir sur les deux cibles identifiées par les inventeurs pour la lutte contre les fourmis champignonnistes.
Préférentiellement, les composés selon l'invention présentant une activité inhibitrice des laccases et une activité antibactérienne sont sélectionnés parmi le thymol et l'eugénol.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention porte sur une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes découpeuses de feuille appartenant aux genres Atta ou Acromyrmex comprenant l'utilisation d'au moins un inhibiteur de laccase. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention porte sur une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes découpeuses de feuille appartenant aux genres Atta ou Acromyrmex comprenant l'utilisation d'au moins une molécule antibactérienne ayant une activité bactéricide et/ou bactériostatique contre les actinomycètes.
En outre, l'homme du métier sait comment préparer de telles compositions formicide et les compositions ou méthodes selon l'invention peuvent fonctionner avec un ou plusieurs inhibiteurs de laccase de préférence en combinaison avec un ou plusieurs composés antibactériens.
De manière particulièrement préférée, l'invention a pour objet une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes comprenant l'utilisation d'une composition formicide comprenant au moins un composé ou une combinaison de composés sélectionné(e) parmi :
- thymol et L-cystéine,
- eugénol et L-cystéine,
- cinnamaldéhyde et L-cystéine,
- thymol et thiosulfate de sodium,
- eugénol et thiosulfate de sodium,
- cinnamaldéhyde et thiosulfate de sodium,
- thymol et glutathion,
- eugénol et glutathion,
- cinnamaldéhyde et glutathion,
- thymol,
- eugénol,
- cinnamaldéhyde,
- thiosulfate de sodium,
- L-cystéine, et
- glutathion.
Les inventeurs ont également montré que l'ajout d'un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique à une composition formicide telle que décrite précédemment permet d'attirer plus efficacement les fourmis champignonnistes. Ainsi, selon un autre aspect, l'invention porte sur une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes comprenant l'utilisation d'au moins un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique.
Avantageusement, l'invention porte sur une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes comprenant l'utilisation d'au moins un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique en combinaison avec au moins un inhibiteur de laccase seul ou en combinaison avec au moins un composé antibactérien.
Les concentrations respectives de chacun des composés de la composition de l'invention sont indiquées ci-après et, en fonction de la composition finale de la composition de l'invention, peuvent se cumuler.
Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet une méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes découpeuses de feuille appartenant aux genres Atta ou Acromyrmex comprenant l'utilisation d'au moins un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique en combinaison avec au moins un inhibiteur de laccase seul ou en combinaison avec au moins un composé antibactérien.
En particulier, l'appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique peut être choisi parmi : amidon, amylose, amylopectine, cellobiose, glycogène, glucose, saccharose, laminarine ((1 -3)-beta-D-glucane), maltodextrine, polymères de cyclodextrine, polymères d'isomaltose, icodextrines, dextrane, maltoheptose, maltohexose, maltopentose, maltotetrose, maltotriose, maltobiose et leurs dérivés.
De manière préférée, l'appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique est choisi parmi : amidon, amylose, cellobiose, laminarine, maltodextrine, maltobiose, glucose, saccharose et glycogène.
De manière particulièrement préférée, l'appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique est choisi parmi : amidon, amylose, laminarine, maltodextrine et glycogène.
De manière encore plus préférée l'appétant est de l'amidon.
Dans un mode de réalisation particulier, l'appétant est lui-même sous la forme d'une composition et en constitue l'élément majoritaire. Par exemple, l'amidon est le composé majoritaire de la farine de blé. L'homme de l'art saura aisément choisir la forme la plus adéquate des appétants. Typiquement, la concentration en appétant est notamment fonction de la présence et de la quantité de d'inhibiteur de laccase et/ou d'agent antibactérien. Ainsi, la quantité d'appétant est comprise entre 600g/kg et 999g/kg ; de préférence entre 800g/kg et 999g/kg, de préférence entre 850g/kg et 990g/kg, voire entre 870g/kg et 950g/kg de la composition formicide de l'invention.
Les inventeurs ont montré qu'une composition formicide comprenant au moins un inhibiteur de laccase ou au moins un composé antibactérien ou une combinaison d'au moins un inhibiteur de laccase et d'au moins un composé antibactérien permet de détruire les colonies de fourmis champignonnistes. Ainsi, selon un autre aspect, l'invention porte sur une composition formicide comprenant au moins un inhibiteur de laccase ou au moins un composé antibactérien ou une combinaison d'au moins un inhibiteur de laccase et d'au moins un composé antibactérien comme composés actifs contre les fourmis champignonnistes. De préférence, ces deux composés sont les seuls composés actifs contre les fourmis champignonnistes.
Pour la composition de l'invention, les composés antibactériens et les inhibiteurs de laccases sont les mêmes (y compris les composés préférés) que ceux décrits plus haut relativement à la méthode de l'invention.
Typiquement, la concentration en composé antibactérien est comprise entre 1 et 200 g/kg de la composition formicide de l'invention. De préférence elle est comprise entre 10 g/kg et 150 g/kg et de manière plus préférée entre 50 g/kg et 120 g/kg de composition formicide de l'invention.
Typiquement, la concentration en inhibiteur de laccases est comprise entre 1 et 200 g/kg de la composition formicide de l'invention. De préférence elle est comprise entre 10 g/kg et 150 g/kg et de manière plus préférée entre 50 g/kg et 120 g/kg de composition formicidede l'invention.
Bien évidemment, ces concentrations pourront être déterminées par l'homme du métier grâce à des tests conventionnels d'évaluation de la concentration minimale tels que ceux mis en œuvre dans les exemples. La composition selon l'invention peut être un produit de combinaison d'au moins un inhibiteur de laccase et au moins un composé antibactérien pour une utilisation simultanée, étalée ou séparée dans le temps.
Avantageusement, la composition selon l'invention peut comprendre au moins un composé ayant à la fois une activité inhibitrice des laccases des fourmis et de la meule et une activité bactéricide et/ou bactériostatique contre les actinomycètes présents dans la meule et sur les fourmis. L'homme du métier saura aisément, sur la base de la méthode publiée par Bourbonnais et. al (1990) mentionnée précédemment et utilisée dans la partie expérimentale, identifier les composés bactéricides et/ou bactériostatiques pouvant être utilisés contre les actinomycètes présents dans la meule et sur les fourmis ayant une activité inhibitrice des laccases des fourmis et de la meule.
La composition selon l'invention peut également comprendre au moins un appétant. De préférence, l'appétant est un appétant glucidique. L'appétant est de façon plus préférée sélectionné parmi les appétants oligosacchandiques ou polysaccharidiques décrits plus haut relativement à la méthode de l'invention (y compris les composés préférés).
Ainsi de manière préférée, l'invention porte sur une composition formicide telle que décrite précédemment comprenant de l'amidon comme appétant polysaccharidique.
De manière particulièrement préférée, l'invention porte sur une composition formicide comprenant de l'amidon comme appétant polysaccharidique et au moins un composé ou une combinaison de composés sélectionné(e) parmi :
- thymol et L-cystéine,
- eugénol et L-cystéine,
- cinnamaldéhyde et L-cystéine,
- thymol et thiosulfate de sodium,
- eugénol et thiosulfate de sodium,
- cinnamaldéhyde et thiosulfate de sodium,
- thymol et glutathion,
- eugénol et glutathion,
- cinnamaldéhyde et glutathion, - thymol,
- eugénol,
- cinnamaldéhyde,
- thiosulfate de sodium,
- L-cystéine, et
- glutathion.
Il n'est pas nécessaire d'ajouter à la composition formicide des composés toxiques pour les fourmis champignonnistes.
Ainsi, typiquement, la composition formicide selon l'invention ne comprend pas de composés ciblant le système nerveux des insectes (par exemple le fipronil).
Contrairement à des insecticides ou des formicides classiques, la composition selon l'invention est spécifique des fourmis champignonnistes.
Ainsi, son utilisation est prévue dans un procédé de lutte contre les fourmis champignonnistes et plus particulièrement pour la destruction des colonies de fourmis champignonnistes.
Contrairement à d'autres insecticides ou formicides, cette composition n'a pas un effet immédiat. En outre, de manière particulièrement avantageuse, les compositions selon l'invention sont dépourvues d'effet répulsif. Du fait de cet effet « retard » et de l'absence d'effet répulsif, la composition n'est donc pas obligatoirement dispersée sur la colonie. Il est possible de la placer dans les champs à protéger ou bien au niveau des colonnes de récolte. Les fourmis champignonnistes vont amener la composition au nid où elle sera en contact avec l'ensemble de la colonie et du champignon. Dans ce mode de réalisation, l'utilisation d'un appétant est particulièrement avantageux.
La composition selon l'invention peut être dispersée directement sur ou autour du nid lorsque ce dernier est localisé (par exemple à moins de 5 mètres) ou de préférence à proximité des colonnes de récoltes (par exemple à moins de 2 mètres).
La composition selon l'invention peut être dispersée en une seule fois sur ou autour du nid ou à proximité des colonnes de récolte. Dans un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention est dispersée régulièrement, en plusieurs, fois sur ou autour du nid ou à proximité des colonnes de récolte. Typiquement les dispersions peuvent être journalières, ou espacées de 2, 3, 4, 5, ou 6 jours, ou d'une, deux ou trois semaines.
La méthode selon l'invention peut comprendre la dispersion de 20 g à 500 g de composition formicide selon l'invention par jour.
La méthode selon l'invention peut comprendre la dispersion de 10 g à 100 g de composition formicide selon l'invention par jour, sur 5 à 30 jours consécutifs.
La méthode selon l'invention peut également comprendre la dispersion de 100 g à 500 g, préférentiellement de 200 g à 500 g de composition formicide selon l'invention en une seule fois.
FIGURES
Figure 1 présente une mesure de l'activité anti-laccase de la L-cystéine sur un échantillon de meule (A) et de fourmi (B).
EXEMPLES
1. Matériels et Méthodes
1 .1 . Mesure de l'activité enzymatique
1 .1 .1 . Echantillonnage et conditionnement
Sur un total de 18 nids, des échantillons de meules et des échantillons de fourmis ont été prélevés puis conservés à -20°C.
1 .1 .2. Obtention des extraits enzymatiques
Les broyages ont été faits dans des mortiers placés sur de la glace, à l'aide de pilons. Les fourmis (2g) et la meule (2g) ont été broyées dans 10ml d'eau distillée réfrigérée à 4°C. Après avoir obtenu un broyât de texture homogène, le tout a été centrifugé. La centrifugation a été effectuée à 4°C, 15 000 tours/min pendant 20min. Pour la précipitation des protéines, le surnageant a été saturé à 80% en sulfate d'ammonium ((NH )2SO4). Après dissolution totale du sulfate d'ammonium, la solution obtenue est placée à 4°C durant 12 heures. La solution a été ensuite centrifugée à une température de 4°C, à 15 000 tours/min, pendant 20min. Le culot obtenu est re-dissout dans un minimum d'eau distillée froide puis dialysé contre 5 litres d'eau distillé à 4°C pendant 12 heures. L'extrait ainsi obtenu constitue l'extrait enzymatique brut. Ces extraits ont été aliquotés puis conservés à -20°C.
1 .1 .3. Substrats enzymatiques analysés
L'activité enzymatique a été évaluée par rapport à la capacité de dégradation de 16 substrats :
• cinq oligosaccharides naturels (cellobiose, gentiobiose, lactose, maltose, saccharose) ;
• six hétérosides synthétiques (PNPa- et β-glucopyranosydes, PNP-a- et β- galactopyranoside, ΡΝΡ-β-xyloside et PNP-N-acétyl-glucosamine) ;
· quatre polysaccharides (amidon, carboxyméthylcellulose (CMC), pullulane et xylane).
1 .1 .4. Analyses enzymatiques
Les solutions enzymatiques ont été incubées avec les substrats à 37°C, pendant 30min dans une solution tampon Mac llvain de pH=5,2. Tous les essais enzymatiques et de témoins ont été réalisés en 3 réplicats, pour s'assurer d'avoir une répétabilité des résultats. Pour exprimer les résultats, la moyenne des trois répétitions a été prise en compte.
L'activité oligosaccharidase a été déterminée par la méthode de dosage par la glucose oxydase (GOD), selon Werner et al. (1970). L'activité hétérosidase a été évaluée indirectement, par mesure de la quantité de para-nitrophénol (PNP) libéré, d'après la méthode décrite par Nunan et al., (2015).
Les sucres réduits produits par l'hydrolyse des polysaccharides sont appréciés par la méthode de microdosage Somogyi-Nelson au réactif cupro-alcalin (Williams et al., 1978)
L'activité laccase a été évaluée en utilisant le 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6- sulphonic acid) (ABTS) en tant que substrat, témoin d'oxydation. De façon succincte, l'ABTS est diluée à 27,4 mg/L dans une solution de tampon Macllvain à pH=5,2. 150 μΙ_ de la solution d'ABTS est incubée avec 100 μΙ_ d'une solution à tester puis incubée pendant 30 min à 37°C. La mesure de la DO à 405 nm permet de déterminer la quantité d'ABTS oxydée en utilisant la loi de Beer-Lambert (epsilon = 36000mM).
Les protéines sont dosées par la méthode utilisant le réactif BioRad®. Pour réaliser la gamme étalon l'albumine de sérum bovin a été utilisée.
1 .1 .5. Inhibition des laccases
Le dosage de l'activité laccase est basé sur une méthode colorimétrique où le substrat ABTS (2,2'-AZINO-bis (3-ETHYLBENZ-THIAZOLINE-6-SULFONIC ACID) sous forme réduite (incolore) est oxydé (coloration verte) en présence de l'enzyme. La méthode a été publiée par Bourbonnais et al. en 1990. Pour tester l'inhibition de l'activité laccase, la molécule testée est ajoutée au mélange réactionnel avec des quantités pouvant varier de 0,1 mM à 100 mM. Les inhibiteurs choisis pour faire les analyses sont des composés ayant un pouvoir antioxydant.
1 .2. Evaluation de l'activité antibactérienne
1 .2.1 . Prélèvement
Les souches bactériennes adhérant à la cuticule des fourmis ont été prélevées grâce à l'utilisation d'une solution dispersante correspondant à une solution de NaCI 0.9% contenant 10% de Tween 80.
1 .2.2. Isolement
Les souches d'actinomycètes ont été isolées par repiquages successifs sur des milieux gélosé NA (composition : 2,5 g de K2HPO4 ; 0,5g de Nitrate de sodium ; 7,5 g d'agar ; 2 g de N-acetyl-glucosamine ; Qsp 500 ml ; pH : 6.5) ou PCA (composition : Peptone de caséine 5,0 g ; Extrait de levure 2,5 g ; D(+)-glucose 1 ,0 g ; Agar 14,0 g ; Qsp1000 ml pH 7) et vérification de la morphologie par microscopie optique.
1 .2.3. Vérification de l'identité des souches
1 .2.3.1 . Extraction d'ADN Les souches isolées de la surface extérieure des corps de fourmis et sélectionnées ont été réactivées dans 9 ml de milieu de culture (5 g peptone ; 2,5 g d'extrait de levure et 1 g de glucose).
La culture a été incubée sous agitation à 27°C pendant une nuit. Après croissance bactérienne, des prélèvements de 2 mL de culture ont été effectués sur chaque échantillon et placés respectivement dans des tubes eppendorf puis centrifugés à 10000 g pendant 10 min. La lyse des bactéries a été effectuée en utilisant le FastPrep®-24 (MP Biomedicals) et les tubes « Powerbead » inclus dans le kit. Les conditions étaient les suivantes : Fréquence 4.0 ms-1 , temps 45 s. Le kit PowerSoil DNA isolation (Mobio Laboratories) a été utilisé pour extraire l'ADN total à partir des culots obtenus après centrifugation. Le protocole appliqué est celui recommandé par le fournisseur. L'ADN a été élué dans 70 μί de tampon Tris-HCI fourni avec le kit. La concentration de l'ADN total extrait a été déterminée par spectrophotométrie en utilisant le Nanodrop et conservé à -20°C avant analyses ultérieures.
1 .2.3.2. Amplification d'une région du gène 16S ARNr spécifique aux bactéries
Une région spécifique au gène 16S ARNr spécifique aux bactéries a été amplifiée par PCR dans les conditions suivantes :
Les amorces utilisées étaient : 27F et 1390R (Mao et al. 2012). La vérification des amplicons avait été faite par électrophorèse sur gel d'agarose à 1 % (poids/volume de tampon TAE 0,5X) contenant 0,5X de Sybersafe. La présence des bandes a été visualisée en exposant le gel à la lumière ultraviolette (UV).
1 .2.3.3. Séquençage et affiliation phylogénétique des souches
Le séquençage de type Sanger des amplicons était effectué par la société Beckman Coulter Genomics. Le logiciel BioEdit a été utilisé pour aligner les séquences obtenues. La comparaison entre ces séquences et celles disponibles dans les banques de données a été réalisée en utilisant le logiciel BLAST sur NCBI (https://www.ncbi.nlm. nih.gov/sutils/blink. cgi?mode=query).
1 .2.4. Mesure de l'activité antibactérienne en boîte de pétri sur disque Le principe général est de tester en milieu solide la culture de la souche en présence de disque de papier imprégné de la molécule à tester. Pour chaque molécule testée au moins trois dilutions ont été réalisées. En présence d'une molécule, une auréole dont le diamètre est en relation avec l'intensité de l'effet inhibiteur apparaît autour du disque de papier. Cette approche permet de manière simple de sélectionner les molécules antibactériennes et de déterminer la concentration minimale d'inhibition (CMI) de la croissance bactérienne.
La mesure de l'activité antibactérienne peut être réalisée en milieu liquide (dans une culture bactérienne liquide) ou en milieu solide (sur une boîte de pétri gélosée) en ajoutant une concentration connue d'antibiotique. En milieu liquide l'inhibition est mesurée par une Densité Optique (DO), en milieu solide l'inhibition de la croissance est estimée par le diamètre de l'auréole correspondant à la zone où aucune croissance n'est observée.
A partir des isolais, un prélèvement est réalisé. Celui-ci est mis en suspension dans 1 ml de sérum physiologique sans mesure de la DO.
L'ensemencement est réalisé avec 100 μΙ de suspension à l'aide d'un râteau. Pour les tests d'huile essentielle sans dilution, un disque trempé dans l'huile essentielle est placé au centre de la boîte. Pour les dilutions (1/2 ; 1/5) les deux disques sont placés dans une même boîte. Les dilutions ont été réalisées en diluant les huiles essentielles dans de l'huile de tournesol. Une boîte témoin a été réalisée et consiste en un inoculât en l'absence d'huile essentielle. Un deuxième témoin cette fois ci avec un disque imprégné avec de l'huile de tournesol a également été effectué afin de vérifier l'absence d'un effet. Tous les produits ont été stérilisés et les expérimentations réalisées sous hotte en conditions stériles.
Après 4 jours de croissance, les diamètres d'inhibition ont été mesurés.
Pour cette étude et celle concernant l'utilisation de molécules, l'érythromycine a été utilisée. L'érythromycine est un antibiotique macrolide qui a un spectre antimicrobien similaire ou légèrement plus large que celui des pénicillines. Cette molécule sert de référant.
1 .3. Evaluation de l'efficacité contre les fourmis champignonnistes sur 14 jours.
1 .3.1 . Préparation de la composition La préparation des boulettes (ou appât) a été réalisée en incorporant à une pâte de farine de blé 10% de thiosulphate de sodium ou d'acide ascorbique. La pâte ainsi obtenue a été transformée en boulette ayant la forme d'un grain de riz. Ces boulettes ont ensuite été séchées à une température maximum de 28°C dans une étuve.
1 .3.2. Essais contre les fourmis champignonnistes
1 .3.2.1 . Anti-laccase
Des premiers essais ont été réalisés afin d'acquérir de premières données concernant l'utilisation de boulettes imprégnées de différents inhibiteurs de laccase.
Deux jours après avoir déposé les boulettes, les nids sont visités pour la première fois puis à 4, 6, 8, 9, 10, 12 et 14 jours. On observe la présence ou non de boulettes (10 g) qui placées dans un petit sac plastique ont été déposées à proximité d'un dôme. A chaque visite le sachet est remplacé que les boulettes ou non aient été récoltées par les fourmis. Les boulettes imprégnées d'acide ascorbique ou de thiosulfate de sodium sont alternées lors de chaque visite.
Un test d'activité de la colonie est réalisé à l'aide d'une tige en bois. Celle-ci est enfoncée dans le sol à différents endroits autour du cône et lorsque l'on ne ressent aucune résistance cela signifie que la tige est enfoncée au niveau de la cavité contenant la meule. En quelques secondes plusieurs dizaines de fourmis dérangées par l'introduction de la tige dans la cavité de la meule remontent le long de la tige attestant ainsi de la vitalité de la colonie. 1 .3.2.2. Anti-laccase + antibactérien
Les boulettes peuvent également contenir un mélange de molécule anti-laccase et antibactérienne.
1 .4. Evaluation de l'efficacité contre les fourmis champignonnistes sur plusieurs mois.
1 .4.1 . Sites d'expérimentation.
Une expérimentation a été menée in situ aux Antilles françaises, sur 44 nids.
1 .4.2. Compositions testées. Plusieurs compositions selon l'invention ont été testées :
- thymol et L-cystéine,
- eugénol et L-cystéine,
- cinnamaldéhyde et L-cystéine,
- thymol et thiosulfate de sodium,
- eugénol et thiosulfate de sodium,
- cinnamaldéhyde et thiosulfate de sodium,
- thymol et glutathion,
- eugénol et glutathion,
- cinnamaldéhyde et glutathion,
- thymol,
- eugénol,
- cinnamaldéhyde,
- thiosulfate de sodium,
- L-cystéine, et
- glutathion.
La préparation des compositions s'est déroulée comme mentionné au point 1 .3.1 . Chaque composé actif était présent à hauteur de 10% de la composition (en poids de la composition), le reste étant constitué d'une pâte de farine de blé.
Chacune des compositions mentionnées ci-dessus a été testée sur deux ou trois nids. Au niveau de chaque nid ont été déposés en une seule fois 5 sachets contenant chacun 25 g de l'une des compositions mentionnées ci-dessus.
2. Résultats
2.1 . Mesure de l'activité enzymatique
Les résultats des mesures d'activité enzymatique sont présentés dans le tableau 1 .
Tableau 1 Activités enzymatiques mesurées chez la fourmi champignonniste Acromyrmex octospinosus et le champignon Leucophorus gongulophorus
Figure imgf000025_0001
Cellobiase 41 ,3 4,5
Gentiobiase 62,4 8,8
Lactase 12,0 5,0
Maltase 988,7 5,2
Saccharase 790,7 0,9
Hétérosidases Fourmi Champignon
([ig phénol mn"1 mg"1 protéines)
α-galactosidase 48,5 14,2
β-galactosidase 12,0 10,3
α-glucosidase 2706,5 9,3
β-glucosidase 46,9 12,9
β-Xylosidase 22, 1 14,0
N-acétyl-glucosaminidase 23,5 3,2
Polysaccharidase Fourmi Champignon
(μg équivalent glucose mn"1 mg"1 protéines)
Amylase 385,6 26,5
Cellulase 75,9 1 ,7
Pullulanase 14, 1 0,8
Xylanase 96,6 13, 1
Phénol oxydase Fourmi Champignon
^g fluoresceine mn"1 mg"1 protéines
Laccase 38830,5 8538,1
Le résultat majeur de ce criblage enzymatique est la mise en évidence d'une très forte activité laccase à la fois dans la meule et chez les fourmis. En effet, cette enzyme représente plus de 90% de l'ensemble des activités mesurées. Les laccases ou polyphénol oxydases catalysent l'oxydation des substances phénoliques (Thurston, 1994). Chez les champignons, les laccases outre leur action oxydative sur les composés polyphénoliques (implication dans la dégradation de la lignine) auraient également un rôle de détoxification vis-à-vis des substances défensives des plantes.
Les résultats de l'étude du spectre osidasique montrent que celui des fourmis est caractérisé par une activité amylolytique. Ainsi, l'activité maltase (dimère de l'amidon) des fourmis est non seulement très largement supérieure à celle détectée dans la meule mais elle est également l'une des enzymes majoritaires. Il en va de même pour les activités mesurées sur Γα-glucoside. Ces fortes activités liées à la dégradation de l'amidon sont confirmées par de fortes activités amylases. L'amidon apparaît donc comme une source carbonée importante pour Acromyrmex octospinosus contrairement à ce que l'on peut observer au niveau de la meule.
2.2. Mesure de l'activité anti-laccase
Les résultats de mesure de l'activité anti-laccase sur des échantillons de fourmi ou de meule sont présentés dans le tableau 2.
Tableau 2
Figure imgf000027_0001
Les résultats d'inhibition de l'activité laccase présente chez les fourmis montrent que les composés listés permettent une inhibition d'au moins 50 % de l'activité laccase ^'Acromyrmex octospinosus et de Leucophorus gongyiophorus à des concentrations inférieures à 0.25 mM.
De plus, la L-cystéine entraîne, à des concentrations supérieures à 0,5mM, une inhibition de plus de 80 % de l'activité (Figure 1 ). L'acide ascorbique et l'acide gallique, entraînent quant à eux une inhibition de plus de 90 % de l'activité pour des concentrations de 0,25mM. Avec l'acide férulique et l'acide syringique ce pourcentage d'inhibition est obtenu avec une concentration de 0,5 mM (résultats non montrés).
Les résultats obtenus lors des inhibitions sont très homogènes pour les échantillons de meules et de fourmis. Toutes les molécules appliquées pour tester la capacité inhibitrice, sont des molécules connues pour leur capacité de réagir en tant qu'antioxydants. Ces composés ont un très fort pouvoir inhibiteur.
2.3. Isolement de souches d'actinomycètes
Cette étape a permis d'isoler, à partir de fourmis appartenant à l'espèce Acromyrmex octospinosus, 15 souches d'actinomycètes dont 12 appartenant au genre Tsukumurella, deux au genre Streptomyces et une au genre Gordonia.
Au total 5 souches appartenant aux genres Streptomyces, Tsukumurella et Gordonia ont été sélectionnées pour l'analyse des substances antibactérienne.
2.4. Mesure de l'activité antibactérienne
Les résultats obtenus sur la souche Streptomyces NA2B3 (Tableau 3) montrent que les huiles essentielles de thym, de cannelle et d'origan et de clou de girofle ont un effet inhibiteur sur la croissance. Considérant qu'une inhibition entraînant un diamètre supérieur ou égal à 1 ,5 cm est un critère de sélection, les inventeurs ont identifié comme solutions préférées les huiles essentielles d'origan et de clou de girofle provoquant une inhibition avec des dilutions allant jusqu'au 1/5. Le thym et la cannelle agissent jusqu'à la dilution au ½.
En moyenne sur les souches isolées à partir des fourmis champignonnistes (Tableau 4), les huiles essentielles de thym, origan, cannelle et clou de girofle permettent l'inhibition de la croissance. A l'exception de l'huile essentielle de thym, ces huiles ont une action délétère pour des dilutions au 1/5.
Il est intéressant de noter que l'érythromycine donne des résultats similaires en ce qui concerne ces deux souches à savoir que cet antibiotique donne des résultats qui globalement sont comparables à ceux obtenus avec les huiles essentielles de thym, cannelle, origan et clou de girofle.
Tableau 3. Streptomyces (NA 2B3) : diamètre d'inhibition en cm
Figure imgf000028_0001
Clou de girofle 1/2 2,4 ± 0,3
Erythromycine 10% 2,2 ± 0,3
Tableau 4. Diamètres moyens d'inhibition (cm) observés sur les 5 souches d'actinomycètes isolées à partir de fourmis champignonnistes
Figure imgf000029_0001
Les résultats obtenus à partir des huiles essentielles testées montrent que 3 d'entre elles (thym, origan et cannelle) lorsqu'elles sont utilisées sans dilution présentent des diamètres d'inhibition compris entre 5,4 et 6,1 cm. Diluée au ½ l'huile essentielle de cannelle et d'origan entraînent une inhibition de croissance supérieure à celle obtenue avec l'érythromycine 20% attestant par la même l'efficacité de ces huiles.
Tableau 5. Streptomyces (NA 2B3) : diamètre d'inhibition en cm
Figure imgf000029_0002
Tableau 6. Diamètres moyens d'inhibition observés sur 5 souches d'actinomycètes isolées à partir de fourmis champignonnistes Cinnamaldéhyde 20 % 4,5 ± 0,6
Erythromycine 20 % 3,6 ± 0,4
Erythromycine 10% 3,2 ± 0,4
Cinnamaldéhyde 10 % 2,9 ± 0,6
Eugénol 20% 2,9 ± 0,7
Carvacrol 20% 2,4 ± 0,3
Thymol 20% 2,2 ± 0,3
Les tests réalisés avec les molécules actives des huiles essentielles montrent clairement que le cinnamaldéhyde se différencie nettement des autres molécules testées. De plus, les résultats obtenus avec cette molécule sont comparables à ceux obtenus avec l'antibiotique de référence (érythromycine). Cependant, les autres molécules testées à savoir l'eugénol, la carvacrol et le thymol présentent également de forts taux d'inhibition.
De manière tout à fait surprenante, une activité anti-laccase a été observée pour l'eugénol et le thymol, ces composés étant de ce fait d'un intérêt particulier pour les compositions selon l'invention, car permettant d'agir sur les deux cibles identifiées par les inventeurs pour la lutte contre les fourmis champignonnistes (données non présentées). 2.5. Essais in situ sur les fourmis champignonnistes :
2.5.1 . Tests des compositions selon l'invention sur 14 jours :
2.5.1 .1 . Composition comprenant une molécule anti-laccase :
Cette expérimentation a montré que les compositions formicides (sous forme de boulettes formées avec de l'amidon) quel que soit le type d'inhibiteur sont prélevées par les fourmis et qu'elles peuvent induire un effet de dépérissement de la meule (zones blanchâtres, jaunâtres et ou rosâtres). Ces expériences ont également permis d'observer un comportement d'abandon du nid par la colonie pouvant s'accompagner d'un déménagement de la meule. Cela est confirmé par la constatation d'une absence de meule ou de résidus de meule dans la cavité souterraine de certains nids. Dans ces cas, la meule peut être reconstruite dans un second nid à distance du premier nid.
2.5.1 .2. Composition comprenant une molécule anti-laccase et une molécule antibactérienne :
Le traitement de nid avec des compositions contenant de l'acide ascorbique (100 g/kg) et du chloramphénicol (10 g/kg) permet la disparition de toute activité. De plus, il n'a pas été observé de disparition de la meule et réapparition de la colonie avec cette combinaison. 2.5.1 .3. Effet de l'appétant glucidique :
Les tests avec les fourmis ont montré que les boulettes de farine étaient prélevées rapidement par les fourmis et confirment que la farine (essentiellement constitué d'amidon) présente un caractère attractif et que les compostions ne comprennent pas d'effet répulsif. Du fait de ce prélèvement et de l'importation des appâts par les fourmis dans les nids, il n'est donc pas besoin d'appliquer les compositions sur la colonie.
2.5.1 .4. Tests des compositions selon l'invention (cf. partie 1 .4.2.) sur plusieurs mois :
Les nids ont été surveillés durant la première quinzaine de jours (tableau 7) suivant le dépôt des combinaisons formicides, puis examinés à 41 jours (tableau 8) et 4 mois (tableau 9) suivant le dépôt des compositions.
Tableau 7. Observation des nids dans les 15 jours suivant le traitement
Figure imgf000031_0001
(nombre de jours après le dépôt)
Nombre de nid observés 44
Nombre de nids avec
29 (66%)
déplacement de la meule (%)
Normalement une couleur poivre et sel sur le haut de la meule, blanche dans la partie moyenne et marron dans la partie basse atteste d'une bonne vitalité de la meule. Au bout d'une période de 14 jours, un déplacement de la meule (déménagement) est observé dans 66% des nids sur l'ensemble des sites d'expérimentations. De plus un changement de la coloration de la meule déplacée a été observé : l'apparition de zones de couleurs jaunâtre, rosâtre ou bien une meule totalement blanche sans gradient de couleur ont été observées. Tableau 8. Observation des nids 41 jours suivant le traitement
Figure imgf000032_0001
Quarante et un jours suivant le dépôt des compositions, les nids morts ont été dénombrés sur les sites d'expérimentions (Tableau 8). 10 nids morts ont été observés sur les sites d'expérimentions (26%). Tableau 9. Observation des nids 4 mois suivant le traitement
Figure imgf000032_0002
Quatre mois après le traitement 77% de nids morts ont été observés sur les sites d'expérimentions. Sur l'ensemble des sites il apparaît donc que 77% des nids ont été détruits par le traitement avec les compositions de l'invention. Ainsi, les compositions formicides comprenant un inhibiteur de laccase, un agent antibactérien ou bactériostatique des actinomycètes commensales des fourmis champignonnistes ou de leur combinaison sont efficaces dans la lutte contre les fourmis champignonnistes en provoquant l'abandon et/ou la destruction des nids.
Références
Jian-Ming Lu, Peter H. Lin, Qizhi Yao, Changyi Chen. 2010 Chennical and molecular mechanisims of antioxidants: expérimental approaches and model Systems J. Cell. Mol. Med. Vol 14. 840-860
Richard FJ, Mora P, Errard C and Rouland C, Digestive capacities of leaf-cutting ants and the contribution of their fungal cultivar to the dégradation of plant material. J Comp Physiol B (2005) 175: 297-303
Qinlan RJ and Cherrett JM, Aspects of the symbiosis of the leaf-cutting ant Acromyrmex octospinosus (Reich) and its food fungus. Ecological Entomology (1978) 3, 221 -230 Fisher PJ, Stradling DJ and Pegler DN. Leaf cutting ants, their fungus gardens and the formation of basidiomata of Leucoagaricus gongylophorus. Mycologist (1994) 8, 3, 128-131
North RD, Kackson CW and Howse PE. Evolutionary aspects of ants-fungus interactions in leaf-cutting ants. Tree (1997) 12, 386-389
Bourbonnais R., Paice M. G., 1990. Oxidation of non-phenolic substrates. An expanded rôle for laccase in lignin biodégradation. FEBS, 267, 99-102) Williams Janice, Henri Villarroya and Fahrettin Petek. α-Galactosidases II, III and IV from Seeds of Trifolium repens. (1978) Biochem. J. 175, 1069-1077.
Nunan N, Lerch TZ, Pouteau V, Mora P, Changey F, Katterer T, Giusti-Miller S, Herrmann AM. Metabolising old soil carbon: Simply a matter of simple organic matter? Soil Biology & Biochemistry 88 (2015) 128-136.
Werner W., Rey HG and Wielinger H. Z Anal. Chem. (1970) 252, 224-228. Thurston, CF. "The structure and function of fungal laccases," Microbiology (1994) 140, 19-26.
Mao DP, Zhou Q, Chen CY and Quan ZX. BMC Microbiology (2012) 12:66.

Claims

Revendications
Méthode de lutte contre les fourmis champignonnistes comprenant l'utilisation d'au moins un inhibiteur de laccase.
Méthode selon la revendication 1 , caractérisée en ce qu'elle comprend l'utilisation d'au moins un composé antibactérien et d'au moins un inhibiteur de laccase.
Méthode selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que l'inhibiteur de laccase est une molécule anti-oxydante, un chélateur, un détergeant, un acide organique non oxydant ou un métal cationique, de préférence une molécule anti-oxydante.
Méthode selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisée en ce que le composé antibactérien est sélectionné parmi les molécules appartenant à l'un des familles suivantes : β-lactamines, tétracyclines, quinolones, macrolides, glycopeptides, aminosides et molécules actives d'huiles essentielles.
Méthode selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'inhibiteur de laccase est sélectionné parmi les molécules suivantes : acide ascorbique, acide citrique, acide coumarique, acide férulique, acide syringique, acide gallique, acide lactique, acide tartrique, cystéine, glutathion, lécithines (E322), lipoate, Lutéine, lutéoline, lycopène, thiosulphate de sodium, vitamine E, a-tocophérol, γ-tocophérol et δ-tocophérol, sélénium et hydroxylammonium chloride.
Méthode selon l'une des revendications 2 à 5, caractérisée en ce que le composé antibactérien est sélectionné parmi les molécules suivantes cinnamaldéhyde, thymol, l'eugénol et le carvacrol.
Méthode selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le composé présentant l'activité inhibitrice de laccase exerce également une activité bactéricide et/ou bactériostatique contre les actinomycètes présents dans la meule et sur les fourmis, lequel est sélectionné préférentiellement parmi le thymol et l'eugénol.
8. Méthode selon l'une des revendications 2 à 7, caractérisée en ce qu'elle comprend l'utilisation d'une composition formicide comprenant au moins un composé ou une combinaison de composés sélectionné(e) parmi :
- thymol et L-cystéine,
- eugénol et L-cystéine,
- cinnamaldéhyde et L-cystéine,
- thymol et thiosulfate de sodium,
- eugénol et thiosulfate de sodium,
- cinnamaldéhyde et thiosulfate de sodium,
- thymol et glutathion,
- eugénol et glutathion,
- cinnamaldéhyde et glutathion,
- acide ascorbique,
- thymol,
- eugénol,
- thiosulfate de sodium,
- L-cystéine, et
- glutathion.
9. Méthode selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre l'utilisation d'au moins un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique.
10. Méthode selon la revendication 9, caractérisée en ce que l'appétant oligosccharidique ou polysaccharidique est sélectionné parmi l'amidon, l'amylose, la laminarine, la maltodextrine et le glycogène.
1 1 . Composition formicide susceptible d'être mise en œuvre dans la méthode selon l'une des revendications 2 à 10 caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé antibactérien et au moins un inhibiteur de laccase et au moins un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique.
12. Composition formicide selon la revendication 1 1 caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé ou une combinaison de composés sélectionné(e) parmi :
- thymol et L-cystéine,
- eugénol et L-cystéine,
- cinnamaldéhyde et L-cystéine,
- thymol et thiosulfate de sodium,
- eugénol et thiosulfate de sodium,
- cinnamaldéhyde et thiosulfate de sodium,
- thymol et glutathion,
- eugénol et glutathion,
- cinnamaldéhyde et glutathion.
13. Composition formicide susceptible d'être mise en œuvre dans la méthode selon la revendication 9 caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un inhibiteur de laccase et au moins un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique.
14. Composition formicide selon la revendication 13 caractérisée en ce que ledit inhibiteur de laccase est sélectionné parmi la L-cystéine, glutathion, thiosulfate de sodium ou l'acide ascorbique
15. Composition formicide selon l'une des revendications 1 1 à 14, caractérisée en ce que ledit au moins un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique est sélectionné parmi l'amidon, l'amylose, la laminarine, la maltodextrine et le glycogène.
16. Composition formicide selon l'une des revendications 1 1 à 13, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé exerçant à la fois une activité inhibitrice des laccases présentes dans la meule et chez les fourmis, et une activité bactéricide et/ou bactériostatique contre les actinomycètes présents dans la meule et sur les fourmis.
17. Composition formicide selon l'une des revendications 1 1 à 16 comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, étalée ou séparée dans le temps.
18. Composition formicide selon la revendication 1 1 ou 12 caractérisée en ce que la concentration en composé antibactérien est comprise entre 1 et 200 g/kg et la concentration en inhibiteur de laccase est comprise entre 1 et 200 g/kg.
19. Composition formicide selon la revendication 1 1 ou 12 caractérisée en ce que la concentration en un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique est comprise entre 600 g/kg et 999 g/kg
20. Composition formicide selon la revendication 13 caractérisée en ce que la concentration en un appétant oligosaccharidique ou polysaccharidique est comprise entre 800 g/kg et 999 g/kg et la concentration en inhibiteur de laccase est comprise entre 1 et 200 g/kg.
PCT/EP2017/050726 2016-01-15 2017-01-13 Methodes et compositions pour le controle des fourmis champignonnistes Ceased WO2017121881A1 (fr)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BR112018014280-8A BR112018014280B1 (pt) 2016-01-15 2017-01-13 Método e uso de inibidor de lacase para o controle de formigas cultivadoras de fungos
CR20180396A CR20180396A (es) 2016-01-15 2017-01-13 Métodos y composiciones para el control de las hormigas cultivadoras de hongos
US16/070,148 US10888089B2 (en) 2016-01-15 2017-01-13 Methods and compositions for controlling fungus-growing ants
MX2018008730A MX2018008730A (es) 2016-01-15 2017-01-13 Metodos y composiciones para el control de las hormigas cultivadoras de hongos.
CONC2018/0008396A CO2018008396A2 (es) 2016-01-15 2018-08-10 Métodos y composiciones para el control de las hormigas cultivadoras de hongos
ECSENADI201861449A ECSP18061449A (es) 2016-01-15 2018-08-15 Métodos y composiciones para el control de las hormigas cultivadoras de hongos

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1650318 2016-01-15
FR1650318A FR3046716B1 (fr) 2016-01-15 2016-01-15 Methodes et compositions pour le controle des fourmis champignonnistes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017121881A1 true WO2017121881A1 (fr) 2017-07-20

Family

ID=55650534

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2017/050726 Ceased WO2017121881A1 (fr) 2016-01-15 2017-01-13 Methodes et compositions pour le controle des fourmis champignonnistes

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10888089B2 (fr)
CO (1) CO2018008396A2 (fr)
CR (1) CR20180396A (fr)
EC (1) ECSP18061449A (fr)
FR (1) FR3046716B1 (fr)
MX (1) MX2018008730A (fr)
WO (1) WO2017121881A1 (fr)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021089967A1 (fr) 2019-11-08 2021-05-14 Soleo Eco-Solutions Preparation combinee et procede pour la lutte contre les fourmis champignonnistes

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2655240A1 (fr) * 1989-12-01 1991-06-07 Erpac Procede de lutte contre les insectes champignonnistes et composition pour la mise en óoeuvre de ce procede.
RO107544B1 (ro) * 1992-03-04 1996-03-29 Ioan Manzatu Cremă cosmetică
WO2012050857A1 (fr) 2010-09-29 2012-04-19 Smithsonian Institution Procédé de lutte biologique contre les fourmis coupeuses de feuilles
US20150368649A1 (en) * 2012-12-28 2015-12-24 Universidade Federal Do Rio Grande Do Sul Genetic control method and compositions against insect pests in cotton plants by the silencing of genes of the laccase family

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080193387A1 (en) * 2007-02-14 2008-08-14 Ricki De Wolff Essential oil compositions for killing or repelling ectoparasites and pests and methods for use thereof
MX2010010216A (es) * 2008-03-19 2011-02-22 Tyratech Inc Control de peste utilizando combinaciones de agentes de control de pestes.
US9487523B2 (en) * 2012-03-14 2016-11-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Process for making CGRP receptor antagonists
AU2015218714A1 (en) * 2014-02-21 2016-10-06 Emekatech, Llc Systems for pest elimination, suppression or control

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2655240A1 (fr) * 1989-12-01 1991-06-07 Erpac Procede de lutte contre les insectes champignonnistes et composition pour la mise en óoeuvre de ce procede.
RO107544B1 (ro) * 1992-03-04 1996-03-29 Ioan Manzatu Cremă cosmetică
WO2012050857A1 (fr) 2010-09-29 2012-04-19 Smithsonian Institution Procédé de lutte biologique contre les fourmis coupeuses de feuilles
US20150368649A1 (en) * 2012-12-28 2015-12-24 Universidade Federal Do Rio Grande Do Sul Genetic control method and compositions against insect pests in cotton plants by the silencing of genes of the laccase family

Non-Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BOURBONNAIS R.; PAICE M.G.: "Oxidation of non-phenolic substrates. An expanded rôle for laccase in lignin biodégradation", FEBS, vol. 267, 1990, pages 99 - 102
C. R. CURRIE ET AL: "Experimental evidence of a tripartite mutualism: bacteria protect ant fungus gardens from specialized parasites", OIKOS, vol. 101, no. 1, 1 April 2003 (2003-04-01), DK, pages 91 - 102, XP055285420, ISSN: 0030-1299, DOI: 10.1034/j.1600-0706.2003.12036.x *
FISHER PJ; STRADLING DJ; PEGLER DN: "Leaf cutting ants, their fungus gardens and the formation of basidiomata of Leucoagaricus gongylophorus", MYCOLOGIST, vol. 8, no. 3, 1994, pages 128 - 131
H. H. DE FINE LICHT ET AL: "Laccase detoxification mediates the nutritional alliance between leaf-cutting ants and fungus-garden symbionts", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES, vol. 110, no. 2, 24 December 2012 (2012-12-24), US, pages 583 - 587, XP055285160, ISSN: 0027-8424, DOI: 10.1073/pnas.1212709110 *
JIAN-MING LU; PETER H. LIN; QIZHI YAO; CHANGYI CHEN: "Chemical and molecular mechanisms of antioxidants: experimental approaches and model systems", J. CELL. MOL. MED., vol. 14, 2010, pages 840 - 860
MAO DP; ZHOU Q; CHEN CY; QUAN ZX, BMC MICROBIOLOGY, vol. 12, 2012, pages 66
NORTH RD; KACKSON CW; HOWSE PE: "Evolutionary aspects of ants-fungus interactions in leaf-cutting ants", TREE, vol. 12, 1997, pages 386 - 389
NUNAN N; LERCH TZ; POUTEAU V; MORA P; CHANGEY F; KATTERER T; GIUSTI-MILLER S; HERRMANN AM: "Metabolising old soil carbon: Simply a matter of simple organic matter?", SOIL BIOLOGY & BIOCHEMISTRY, vol. 88, 2015, pages 128 - 136
QINLAN RJ; CHERRETT JM: "Aspects of the symbiosis of the leaf-cutting ant Acromyrmex octospinosus (Reich) and its food fungus", ECOLOGICAL ENTOMOLOGY, vol. 3, 1978, pages 221 - 230
RICHARD FJ; MORA P; ERRARD C; ROULAND C: "Digestive capacities of leaf-cutting ants and the contribution of their fungal cultivar to the dégradation of plant material", J COMP PHYSIOL B, vol. 175, 2005, pages 297 - 303
THURSTON, CF.: "The structure and function of fungal laccases", MICROBIOLOGY, vol. 140, 1994, pages 19 - 26
WERNER W.; REY HG; WIELINGER H., Z ANAL. CHEM., vol. 252, 1970, pages 224 - 228
WILLIAMS JANICE; HENRI VILLARROYA; FAHRETTIN PETEK: "a-Galactosidases II, III and IV from Seeds of Trifolium repens", BIOCHEM. J., vol. 175, 1978, pages 1069 - 1077

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021089967A1 (fr) 2019-11-08 2021-05-14 Soleo Eco-Solutions Preparation combinee et procede pour la lutte contre les fourmis champignonnistes
FR3102910A1 (fr) 2019-11-08 2021-05-14 SoléO Eco-Solutions Preparation combinee et procede pour la lutte contre les fourmis champignonnistes

Also Published As

Publication number Publication date
FR3046716A1 (fr) 2017-07-21
MX2018008730A (es) 2019-05-27
US10888089B2 (en) 2021-01-12
ECSP18061449A (es) 2022-02-25
CR20180396A (es) 2019-02-08
BR112018014280A2 (pt) 2018-12-18
US20190021315A1 (en) 2019-01-24
CO2018008396A2 (es) 2018-10-31
FR3046716B1 (fr) 2019-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Agarwal et al. Differential antagonistic responses of Bacillus pumilus MSUA3 against Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum causing fungal diseases in Fagopyrum esculentum Moench
Lopes et al. Saccharomyces cerevisiae: a novel and efficient biological control agent for Colletotrichum acutatum during pre-harvest
Adetunji et al. Prolonging the shelf life of ‘Agege Sweet’orange with chitosan–rhamnolipid coating
Jung et al. Inoculation of Paenibacillus illinoisensis alleviates root mortality, activates of lignification-related enzymes, and induction of the isozymes in pepper plants infected by Phytophthora capsici
Seethapathy et al. Bacterial antagonists and hexanal-induced systemic resistance of mango fruits against Lasiodiplodia theobromae causing stem-end rot
Shehata et al. Oil-bioactive films as an antifungal application to save post-harvest food crops
Zhang et al. Pathogenicity of Serratia marcescens to hazelnut weevil (Curculio dieckmanni)
Podile et al. Biological control of peanut diseases
Attia et al. The potential impact of Octopus cyanea extracts to improve eggplant resistance against Fusarium-wilt disease: in vivo and in vitro studies
WO2018115296A1 (fr) Préparation d'un extrait de biomasse sèche riche en polyphenols
Abdelghany et al. PCR identification of Aspergillus niger with using natural additives for controlling and detection of malformins and maltoryzine production by HPLC
EP2502983B1 (fr) Compositions à base d'arthrospira et utilisations de celles-ci
Atalla et al. Using maize wastes, fermented by co-cultures of Trichoderma harzianum and Pseudomonas fluorescens, as grain dressing against m maize diseases under field conditions
KR100802494B1 (ko) 비올라세인을 함유하는 해충 방제제, 항진균제 및 그의제조방법
Castro-Longoria Biosynthesis of metal-based nanoparticles by trichoderma and its potential applications
Fortes et al. Production of an antimicrobial substance against Cryptococcus neoformans by Paenibacillus brasilensis Sa3 isolated from the rhizosphere of Kalanchoe brasiliensis
Ashiq et al. In vitro activity of isothiocyanates against Fusarium graminearum
Parhusip et al. Antimicrobial activity of melinjo seed and peel extract (Gnetum gnemon) against selected pathogenic bacteria
Looi et al. Antioxidant and antibacterial activities in the fruit peel, flesh and seed of Ceri Terengganu (Lepisanthes Alata leenh.)
FR3046716B1 (fr) Methodes et compositions pour le controle des fourmis champignonnistes
Ghani et al. Assessment of a nanobiofungicide with antimicrobial potential against mycopathogenic Fusarium species
Almasoudi et al. Assessment of certain plant extracts for controlling potato tuber soft rot disease caused by Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum
Plascencia-Jatomea et al. Synthesis and toxicological study of chitosan–pirul (Schinus molle L.) essential oil nanoparticles on Aspergillus flavus
Samrot et al. Bioprospecting studies of pigmenting Pseudomonas aeruginosa SU-1, Microvirga aerilata SU14 and Bacillus megaterium SU15 isolated from garden soil
Gajera et al. Biocontrol mechanism of Bacillus for Fusarium wilt management in cumin (Cuminum cyminum L.)

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17700377

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/A/2018/008730

Country of ref document: MX

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112018014280

Country of ref document: BR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: CR2018-000396

Country of ref document: CR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112018014280

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20180712

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 17700377

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: CR2018-000396

Country of ref document: CR