WO2017164678A2 - 중증열성혈소판감소증후군 바이러스의 외막 당단백질에 결합하는 항체 및 이의 용도 - Google Patents

중증열성혈소판감소증후군 바이러스의 외막 당단백질에 결합하는 항체 및 이의 용도 Download PDF

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    • C12N2760/12211—Phlebovirus, e.g. Rift Valley fever virus

Definitions

  • the present invention is used to detect or diagnose Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome (SFTSV), a pathogen of Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome (SFTS), and to treat SFTSV. It relates to an antibody that specifically binds to the outer membrane glycoprotein.
  • Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome is a new tick-borne infection disease that is primarily mediated by Haemaphysalis longicornis or Amblyomma testudinarium .
  • Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus SFTSV.
  • SFTS was first reported in China in 2009, and in 2012, diseases and viruses were reported in Japan and Korea.
  • the main symptoms of SFTS are fever, abdominal pain, nausea, vomiting thrombocytopenia or leukopenia, and in severe cases, multiple organ failure can occur and lead to death.
  • SFTS occurs steadily each year in China, Japan, or Korea, resulting in very high mortality rates, mainly in the spring-summer period.
  • the wild host of SFTSV is predominantly a rat, and a high percentage of serum antibodies are found in domestic animals such as goats, cows, dogs, or chickens, and it is estimated that domestic animals may act as hosts.
  • Human infections have been reported through the body fluids of infected people, but there are no treatments or preventive methods that have been proven to effectively treat SFTS.
  • the anti-SFTSV antibody titer is mainly measured by an antibody against N protein of SFTSV.
  • the antibody is an antibody against the SFTSV internal protein that is exposed when SFTSV dies. Therefore, the diagnosis through the identification of the existing anti-SFTSV antibody has a limitation that can not accurately identify the presence of live and active virus.
  • detection of the RNA sequence of SFTSV in human-derived samples is known to have high accuracy, but it is difficult to separate high-quality viral RNA from the sample.
  • SFTSV can be effectively detected by overcoming the limitations of the inaccurate virus titer method of the enzyme immunoassay method for measuring the amount of SFTSV protein in the killed state, or the method of isolation of low purity viral RNA in blood.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide an antibody capable of effectively detecting or diagnosing SFTSV and treating SFTS.
  • another problem to be solved by the present invention is to provide an antibody that specifically binds to the SFTSV, in particular the outer membrane glycoprotein of SFTSV.
  • the present invention provides a novel antibody that specifically binds to SFTSV, in particular its outer membrane glycoprotein.
  • the present invention also provides a method for effectively detecting, isolating or purifying SFTSV using the antibody.
  • the present invention also provides a method for effectively preventing or treating SFTS using the antibody.
  • the present inventors have made intensive studies to overcome the limitations of the conventional methods for the diagnosis of SFTSV. As a result, we have discovered a novel antibody that specifically binds to the outer membrane glycoprotein of SFTSV, particularly Gc or Gn, and effectively detects SFTSV using the same.
  • the present invention has been found to be possible.
  • SFTSV is a negative single-stranded RNA virus belonging to the genus Bunyaviridae and phlebovirus .
  • the virus is a spherical virus having a diameter of 80 to 100 nm as a medium for small cattle mites.
  • the genome of the virus consists of large (L), Medium (M) and small (S) segments, these are RNA dependent RNA polymerase (RdRp), glycoprotein precursor (M), glycoprotein N (Gn), glycoprotein C (Gc) 6 proteins, nucleocapsid protein (NP) and non-structural protein (NSs).
  • RdRp RNA dependent RNA polymerase
  • M glycoprotein precursor
  • Gn glycoprotein N
  • Gc glycoprotein C 6 proteins
  • NP nucleocapsid protein
  • NSs non-structural protein
  • an "antibody” may comprise an intact antibody and any antigen binding moiety or single chain thereof.
  • Naturally occurring “antibodies” are glycoproteins comprising at least two heavy chains (H) and two light chains (L), interconnected by disulfide bonds.
  • Each heavy chain consists of a heavy chain variable region (VH) and a heavy chain constant region (CH).
  • the heavy chain constant region consists of three domains of CH1, CH2 and CH3.
  • Each light chain consists of a light chain variable region (VL) and a light chain constant region (CL).
  • the light chain constant region consists of one domain CL.
  • the VH and VL regions can be further subdivided into hypervariable regions called complementarity determining regions (CDRs), interspersed with more conserved regions called framework regions (FR).
  • CDRs complementarity determining regions
  • Each VH and VL consists of three CDRs and four FRs, which are arranged in the following order from amino terminus to carboxy terminus: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
  • the variable regions of the heavy and light chains contain binding domains that interact with the antigen.
  • the present invention provides antibodies that specifically bind to the outer membrane glycoprotein of SFTSV, in particular the outer membrane glycoprotein Gc or Gn of SFTSV.
  • the antibody may comprise or consist of specific amino acid sequences as follows.
  • some modifications apparent in the constant region of the heavy and light chains fall within the scope of the present invention in the range having the same or similar binding specificities.
  • the VH, VL, full length light chain and full length heavy chain sequences are mixed and matched to It is possible to produce outer membrane glycoprotein binding antibodies of other SFTSVs.
  • the amino acid sequence of the antibody clone (Ab 1-5) binding to the Gc outer membrane glycoprotein of the present invention is shown in Tables 1-8.
  • LFR1 or HFR1 Amino acid sequence of framework region 1 (LFR1 or HFR1) of the light or heavy chain of the antibody that binds to the Gc outer membrane glycoprotein
  • LCDR1 or HCDR1 complementarity determining region 1
  • LFR2 or HFR2 Amino acid sequence of the framework region 2 (LFR2 or HFR2) of the light or heavy chain of the antibody that binds to the Gc outer membrane glycoprotein
  • LCDR2 complementarity determining region 2
  • HCDR2 complementarity determining region 2
  • LFR3 or HFR3 Amino acid sequence of framework region 3 (LFR3 or HFR3) of the light or heavy chain of the antibody that binds to the Gc outer membrane glycoprotein
  • LCDR3 complementarity determining region 3
  • HCDR3 complementarity determining region 3
  • LFR4 or HFR4 Amino acid sequence of framework region 4 (LFR4 or HFR4) of the light or heavy chain of the antibody that binds to the Gc outer membrane glycoprotein
  • an antibody that specifically binds to the outer membrane glycoprotein Gc of SFTSV of the present invention comprises a light chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4 and 5, and a sequence And heavy chains comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of Nos. 6, 7, 8, 9, and 10.
  • Antibodies composed of such specific sequences can bind specifically and effectively to the outer membrane glycoprotein Gc, and thus can be very useful for detecting SFTSV.
  • the antibody specifically binding to the outer membrane glycoprotein Gc of SFTSV of the present invention comprises a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 and a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6
  • a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 and an amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 It may be provided as an antibody containing a heavy chain.
  • the antibody specifically binding to the outer membrane glycoprotein Gc of the SFTSV of the present invention comprises a light chain complementarity determination comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 21, 22, 23, 24 and 25
  • Light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), SEQ ID NOs: 61, 62, 63, 64, and 65 comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of Region 1 (LCDR1), SEQ ID NOs: 41, 42, 43, 44, and 45
  • Light chain complementarity determining region 3 (LCDR3) comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of: heavy chain complementarity determining region comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 26, 27, 28, 29 and 30
  • Heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2) comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of 1 (HCDR1), SEQ ID NOs: 46, 47, 48, 49, and 50, and SEQ ID NOs: 66,
  • the antibody specifically binding to the outer membrane glycoprotein Gc of SFTSV of the present invention comprises a light chain complementarity determining region 1 (LCDR1) of SEQ ID NO: 21, a light chain complementarity determining region 2 (LCDR2) of SEQ ID NO: 41, sequence Light chain complementarity determining region 3 (LCDR3) of SEQ ID NO: 61, heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1) of SEQ ID NO: 26, heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR2) of SEQ ID NO: 46, and heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR3) of SEQ ID NO: 66
  • Antibodies including; Light chain complementarity determining region 1 (LCDR1) of SEQ ID NO: 22, light chain complementarity determining region 2 (LCDR2) of SEQ ID NO: 42, light chain complementarity determining region 3 (LCDR3) of SEQ ID NO: 62, heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1) of SEQ ID NO: 27 ),
  • the amino acid sequence of the antibody clone (Ab 6-10) that binds to the Gn outer membrane glycoprotein of the present invention is shown in Tables 9-16.
  • LFR1 or HFR1 Amino acid sequence of the framework region 1 (LFR1 or HFR1) of the light or heavy chain of an antibody that binds to the Gn outer membrane glycoprotein
  • LCDR1 or HCDR1 complementarity determining region 1
  • LFR2 or HFR2 Amino acid sequence of the framework region 2 (LFR2 or HFR2) of the light or heavy chain of the antibody that binds to the Gn outer membrane glycoprotein
  • LCDR2 complementarity determining region 2
  • HCDR2 complementarity determining region 2
  • LFR3 or HFR3 Amino acid sequence of the framework region 3 (LFR3 or HFR3) of the light or heavy chain of the antibody that binds to the Gn outer membrane glycoprotein
  • LCDR3 complementarity determining region 3
  • HCDR3 complementarity determining region 3
  • LFR4 or HFR4 Amino acid sequence of the framework region 4 (LFR4 or HFR4) of the light or heavy chain of the antibody that binds to the Gn outer membrane glycoprotein
  • the antibody that specifically binds to the outer membrane glycoprotein Gn of SFTSV of the present invention comprises a light chain comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 81, 82, 83, 84, and 85, and a sequence It may include a heavy chain comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of the number 86, 87, 88, 89 and 90.
  • Antibodies composed of these specific sequences can bind specifically to the outer membrane glycoprotein Gn and can be very useful for detecting SFTSV.
  • the antibody specifically binding to the outer membrane glycoprotein Gn of SFTSV of the present invention comprises a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81 and a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86
  • an antibody that specifically binds to the outer membrane glycoprotein Gn of SFTSV of the present invention comprises a light chain complementarity determination comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 101, 102, 103, 104 and 105
  • Light chain complementarity determining region 3 (LCDR3) comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of: heavy chain complementarity determining region comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 106, 107, 108, 109 and 110
  • Heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2) comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of 1 (HCDR1), SEQ ID NOs
  • the antibody specifically binding to the outer membrane glycoprotein Gn of SFTSV of the present invention comprises a light chain complementarity determining region 1 (LCDR1) of SEQ ID NO: 101, a light chain complementarity determining region 2 (LCDR2) of SEQ ID NO: 121, sequence Light chain complementarity determining region 3 (LCDR3) of SEQ ID NO: 141, heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1) of SEQ ID NO: 106, heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR2) of SEQ ID NO: 126, and heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR3) of SEQ ID NO: 146
  • Antibodies including; Light chain complementarity determining region 1 (LCDR1) of SEQ ID NO: 102, light chain complementarity determining region 2 (LCDR2) of SEQ ID NO: 122, light chain complementarity determining region 3 (LCDR3) of SEQ ID NO: 142, heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1) of SEQ ID NO: 107
  • the antibody of the present invention may include an antibody comprising an amino acid that is homologous to an antibody comprising the heavy and light chains described in Table 1 or Table 9 above, including the above-mentioned antibodies.
  • the antibody of the present invention comprises a light chain variable region comprising the LCDR1, LCDR2 and LCDR3 sequences, and a heavy chain variable region comprising the HCDR1, HCDR2 and HCDR3 sequences, wherein at least one of these CDR sequences is an antibody described herein Or certain amino acid sequences based on conservative modifications thereof.
  • the antibody of the present invention may be an antibody retaining the functional properties of the outer membrane glycoprotein Gc or Gn-binding antibody of SFTSV, and an antibody that binds to the same epitope as the antibody comprising the heavy and light chains described in Table 1 or Table 9. Can be.
  • antibodies of the present invention may be prepared using antibodies having one or more light chain or antibody sequences set forth herein as starting materials for manipulating modified antibodies, and may include all antibodies having some altered properties from the starting antibodies. have.
  • the antibody may include a modification to the framework region in the light chain or heavy chain to improve the properties of the antibody.
  • the antibody has at least 1 ⁇ 10 7 M ⁇ 1 , 1 ⁇ 10 8 M ⁇ 1 , 1 ⁇ 10 9 M ⁇ 1 , 1 ⁇ 10 10 M ⁇ 1 or 1 ⁇ 10 11 M against the outer membrane glycoprotein of SFTSV May have an affinity constant (K A ) of ⁇ 1 .
  • the antibodies of the present invention may be fully human antibodies that specifically bind to SFTSV outer membrane glycoproteins. It may have more reduced antigenicity when administered to human subjects as compared to chimeric antibodies and the like.
  • Human antibodies include heavy or light chain variable regions or full-length heavy or light chains that are products of or derived from specific germline sequences when the variable region or full-length chain of the antibody is obtained from a system using human germline immunoglobulin genes. can do.
  • the antibody of the present invention may be a de-immunized antibody having antigenicity.
  • the antibody may be a bispecific or multispecific antibody.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof of the invention may be a bispecific molecule that binds to two or more different binding sites or target molecules.
  • the antibodies of the invention can be monoclonal antibodies that specifically bind to the outer membrane glycoprotein of SFTSV.
  • the antibodies of the invention may be human or humanized monoclonal antibodies or chimeric antibodies that specifically bind to the outer membrane glycoprotein of SFTSV, and the antibodies of the invention may comprise human heavy chain constant regions and human light chain constant regions.
  • the antibody of the present invention may be a single chain antibody, the antibody of the present invention may be a Fab fragment, may be a single-chain variable fragment (scFv), may be IgG isotype.
  • the antibody of the present invention may be scFv.
  • the monoclonal antibody can be produced by a conventional monoclonal antibody method, the synthesized antibody gene can be expressed and purified by inserting the antibody expression vector, preferably pcDNA, pCI, pCMV or pCEP4 or the like.
  • the antibody expression vector preferably pcDNA, pCI, pCMV or pCEP4 or the like.
  • viral or carcinogenic transformation of B lymphocytes can be used and can be prepared based on the sequence of murine monoclonal antibodies prepared using the murine system.
  • standard molecular biology techniques can be used to obtain DNAs encoding heavy and light chain immunoglobulins from murine hybridomas and to contain non-murine immunoglobulin sequences.
  • the invention provides an antibody or antigen-binding fragment thereof comprising a framework in which an amino acid is substituted with an antibody framework from each human VH or VL germline sequence.
  • the invention provides a polypeptide comprising a light chain comprising an amino acid sequence of any one selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4 and 5, and SEQ ID NOs: 6, 7, 8, 9 and Provided is a nucleic acid comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising a heavy chain comprising any one amino acid sequence selected from the group consisting of 10.
  • the nucleic acid may be any one nucleic acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, and 170, which is shown in Table 17 below. (Bolded portions in the table are light chain variable regions (VL) and underlined portions are heavy chain variable regions (VH)).
  • the antibody of the present invention comprises at least 90%, 95%, 97% of any of the amino acid sequences set forth in Tables 1-16 above, within the range in which the antibody specificity for the outer membrane glycoprotein of SFTSV is maintained; Amino acid sequences having 98% or 99% sequence identity.
  • the nucleic acid capable of expressing the antibody of the present invention is at least 90%, 95%, 97% with any one of the nucleic acid sequences set forth in Table 17 within the range that the antibody specificity for the outer membrane glycoprotein of SFTSV is maintained Nucleic acid sequences having 98% or 99% sequence identity.
  • the present invention also provides a vector and a host cell comprising the nucleic acid.
  • the vector of the present invention may include a nucleic acid encoding an amino acid sequence of an antibody that binds to the outer membrane glycoprotein Gc of the SFTSV, or a nucleic acid encoding an amino acid of an antibody that binds to Gn.
  • the vector of the present invention may express both bispecific antibodies, thereby expressing a bispecific antibody.
  • the invention provides a host cell comprising (1) a first recombinant DNA fragment encoding a heavy chain of an antibody of the invention, and (2) a second recombinant DNA fragment encoding a light chain of an antibody of the invention. to provide.
  • the invention provides a host cell comprising recombinant DNA fragments encoding each of the heavy and light chains of an antibody of the invention.
  • the antibody or antigen binding fragment thereof is a human monoclonal antibody or antigen binding fragment thereof.
  • Various expression vectors can be used to express polynucleotides encoding the outer membrane glycoprotein binding antibody of SFTSV of the present invention.
  • Both viral-based or non-viral expression vectors can be used to generate antibodies in mammalian host cells.
  • vectors such as pcDNA, pCI, pCMV or pCEP4 and host cells such as HEK293, CHO or CHO-DG44 can be used.
  • Host cells carrying and expressing antibodies of the invention can be prokaryotic or eukaryotic cells.
  • the host cell is E. Coli , preferably E. coli ER2738. HB2151, BL21, and the like, which can be useful for cloning and expressing polynucleotides of the invention.
  • Bacillus a different microorganism host, for example Bacillus subtilis (Bacillus subtilis), or other enteric bacteria can be used, for example, Salmonella (Salmonella) or Serratia marcescens (Serratia), or various Pseudomonas (Pseudomonas) paper.
  • Other microorganisms such as yeast can be used to express the antibodies of the invention, and insect cells in combination with baculovirus vectors can also be used.
  • mammalian host cells can be used to express and prepare SFTSV envelope membrane glycoprotein binding polypeptides of the invention.
  • it may be a hybridoma cell line expressing an endogenous immunoglobulin gene or a mammalian cell line carrying an exogenous expression vector.
  • any animal or human cells for example CHO cell lines, Cos cell lines, HeLa cells, myeloma cell lines, HEK cell lines, transformed B-cells and hybridomas.
  • any number of suitable host cell lines capable of secreting immunoglobulins can be used, preferably HEK293, CHO or CHO-DG44.
  • the present invention also provides a composition for diagnosing SFTSV comprising one or more SFTSV outer membrane glycoprotein binding molecules of the invention (eg, Gc or Gn binding antibodies or antigen binding fragments thereof).
  • the diagnostic composition of the present invention can be usefully used for the detection, isolation or purification of SFTSV.
  • the composition may further contain one or more other agents suitable for diagnosing SFTSV.
  • the present invention also provides a method of diagnosing SFTSV using the antibody of the invention. The method can be used to quantitatively or qualitatively detect or diagnose SFTSV.
  • the diagnostic method may be expressed in outer membrane glycoprotein and / or nucleic acid expression of SFTSV and outer membrane glycoprotein of SFTSV from a biological sample (eg, blood, serum, cells or tissue) or from a subject suffering from or at risk of developing SFTS. Diagnostic assays that determine function.
  • the detection includes quantitative and / or qualitative analysis, including the detection of presence, absence, and detection of virus titer. Such methods are well known in the art and will be practiced by those skilled in the art. You can choose the appropriate method for your needs.
  • the detection or diagnosis of SFTSV can be detected through radioimmunoassay, Western blot, Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) or immunofluorescence to detect the antigen-antibody complex.
  • the antigen may be labeled with a label such as radioactive material, enzyme or fluorescent material.
  • the diagnostic method of the present invention may utilize a complex in which an antibody against an outer membrane glycoprotein of SFTSV is conjugated to a magnetic bead.
  • the method can more effectively detect, isolate or purify SFTSV by using a complex in which an antibody specific for the outer membrane glycoprotein Gc or Gn of SFTSV is bound to magnetic beads.
  • the antibody-magnet bead complex against the SFTSV outer membrane glycoprotein binds to the SFTSV present in the sample by using the characteristics of the antibody, and when the magnetic beads are pulled by magnetic force, the virus and the rest of the sample are separated to effectively purify the virus.
  • the purified virus is relatively easy to isolate RNA by removing impurities, through which high-quality purification result data can be obtained.
  • a schematic diagram of the diagnostic method is shown in FIG. 4.
  • the present invention also provides a diagnostic kit for SFTSV comprising an antibody that binds to the outer membrane glycoprotein of SFTSV.
  • the kit may comprise any one or more of the above-mentioned antibodies and reagents for detecting antigen-antibody complexes.
  • a reagent used in radioimmunoassay, ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) or immunofluorescence assay may be used.
  • the detection reagent may be labeled directly or indirectly in a sandwich form for detection of the immune response.
  • the serum sample used in the array or the like may be labeled with a fluorescent label such as Cy3 or Cy5.
  • a fluorescent label such as Cy3 or Cy5.
  • an unlabeled serum sample can be detected by first reacting with an array to which a detection reagent is attached and then binding the target protein with a labeled detection antibody.
  • the sensitivity and specificity can be increased, and thus the detection can be performed up to pg / mL level.
  • radioactive materials, coloring materials, magnetic particles or high-density electron particles may be used as the labeling material. Fluorescence luminosity may be used by scanning confocal microscopy, for example Affymetrix, Inc. Or Agilent Technologies, Inc.
  • Kits of the present invention may further comprise one or more additional components required for binding assays, and may further include, for example, binding buffers, reagents for sample preparation, blood sampling syringes or negative and / or positive controls.
  • the kit of the present disclosure which may include the various detection reagents, may be provided for ELISA analysis, dip stick rapid kit analysis, microarray, gene amplification, or immunoassay according to an assay. The detection reagent may be selected according to the analysis mode.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition comprising an antibody that binds to the SFTSV outer membrane glycoprotein of the present invention.
  • the pharmaceutical composition may be used for the prevention or treatment of SFTS.
  • the antibody of the present invention can effectively prevent or treat SFTS by neutralizing SFTSV to block the growth of the virus.
  • the composition may further contain one or more other agents suitable for treating or preventing SFTSV related diseases.
  • Carriers that can be used in the pharmaceutical composition can enhance the effect of the composition, stabilize the composition, or facilitate the preparation of the composition.
  • Pharmaceutically acceptable carriers may include physiologically acceptable solvents, dispersion media, coatings, anti-bacterial agents, anti-fungal agents, isotonic or absorption delaying agents, and the like.
  • the pharmaceutical composition may be administered by various methods known in the art, and the route and / or mode of administration may vary depending on the desired result.
  • the pharmaceutical composition may be administered by a mode of administration such as, for example, intravenous, intramuscular, intraperitoneal, or subcutaneous injection.
  • the antibody which is the active compound, may be coated with a substance that protects the compound from the action of acids and other natural conditions that may inactivate the compound.
  • the pharmaceutical composition may be a sterile fluid.
  • a coating such as lecithin or a surfactant may be used.
  • the pharmaceutical composition may include isotonic agents (eg, sugars, polyalcohols, mannitol, sorbitol, and sodium chloride, etc.) or absorption delaying agents (such as aluminum monostearate or gelatin).
  • the pharmaceutical composition may be prepared according to methods known in the art and commonly practiced, and preferably may be prepared under GMP conditions.
  • the pharmaceutical composition may comprise a therapeutically effective or potent dose of an SFTSV envelope membrane glycoprotein binding antibody.
  • the dosage level of the active ingredient in the pharmaceutical composition may be an amount sufficient to achieve the desired therapeutic effect without being toxic to the patient.
  • the therapeutic dose may be titrated to optimize safety and efficacy.
  • the dosage range may range from about 0.0001 to 100 mg, more generally 0.01 to 15 mg per kg of host body weight.
  • Exemplary therapies involve systemic administration once every two weeks, or once per month, or once every three to six months.
  • the dosage may be adjusted to achieve a plasma antibody concentration of 1 to 1000 ⁇ g / mL, and in some methods 25 to 500 ⁇ g / mL.
  • the antibody can be administered via a sustained release formulation. Dosage and frequency may vary depending on the half-life of the antibody in the patient. In prophylactic use, relatively low doses may be administered at relatively rare intervals over a long period of time.
  • the present invention also provides a method for preventing or treating SFTS using the pharmaceutical composition.
  • the prophylactic or therapeutic method may comprise the administration of a therapeutically effective amount of a composition comprising an antibody of the invention.
  • the "therapeutically effective amount” refers to the amount of an antibody or composition comprising the same of the present invention effective in preventing or treating SFTS disease.
  • the present invention also provides the use of an SFTSV envelope membrane glycoprotein binding antibody for the preparation of a diagnostic composition of SFTSV.
  • the antibody of the present invention or a composition comprising the same may include additional components such as an acceptable carrier.
  • the present invention also provides the use of SFTSV outer membrane glycoprotein binding antibodies.
  • Antibodies of the invention that specifically bind to SFTSV can be used for the diagnosis of SFTSV and can be used to diagnose SFTSV outer membrane glycoprotein and / or nucleic acid expression and also the function of the protein in subjects suffering from or at risk of developing SFTS disease. Can be used for purposes.
  • the antibodies of the present invention can be used for the prophylaxis or treatment of SFTS caused by SFTSV in subjects at risk of or suffering from SFTS.
  • the antibody of the present invention can specifically bind to the outer membrane glycoprotein Gc or Gn of SFTSV.
  • SFTSV can be effectively detected or diagnosed and SFTS can be treated.
  • FIG. 3 shows the results of immunofluorescence analysis (A) and fluorescence intensity (B) of SFTSV infection.
  • Immunofluorescence showed that SFTSV infected Vero cells responded with antibodies to Gn and Ab10 was dose dependently inhibiting viral infection. Ab10 was remarkably superior in its ability to inhibit virus invasion compared to MAb 4-5.
  • FIG. 4 is a schematic diagram illustrating a method of detecting SFTSV using an antibody-magnet bead complex.
  • Vero cells from African green monkey kidneys were purchased from the Korean Cell Line Bank and supplemented with 2% heat inactivated fetal bovine serum (Gibco) and penicillin-streptomycin (Gibco). (RPMI) -1640 medium (Welgene) was incubated at 37 ° C. in a 5% carbon dioxide environment.
  • the SFTS virus used in this experiment was KF358691 isolated from serum samples of 63-year-old female patients who were admitted to Seoul National University Hospital and died in 2012 [Kim KH, Yi J, Kim G, Choi SJ, Jun KI, Kim NH, et al. Severe fever with thrombocytopenia syndrome, South Korea, 2012. Emerging infectious diseases. 2013; 19 (11): 1892-4.].
  • the isolated virus was inoculated into a monolayer of Vero cells and incubated at 37 ° C. in a 5% carbon dioxide environment. Virus was propagated in Vero cells and all experiments were performed in the third passage of the virus culture. Reed-Muench method was used to titrate 50% tissue culture infection dose (TCID50) in Vero cells.
  • the amino acid sequence of the SFTS virus glycoprotein used in this experiment was previously reported [Kim KH, Yi J, Kim G, Choi SJ, Jun KI, Kim NH, et al. Severe fever with thrombocytopenia syndrome, South Korea, 2012. Emerging infectious diseases. 2013; 19 (11): 1892-4.].
  • SEQ ID NO: 171 GenBank Accession No: AGT98506, amino acids 20-452 for Gn glycoprotein, amino acids 563-1035 for Gc glycoprotein
  • Human codon optimized DNA sequence corresponding to was synthesized (GenScript).
  • SFTS glycoprotein coding genes were described by Park S, Lee DH, Park JG, Lee YT, Chung J. A sensitive enzyme immunoassay for measuring cotinine in passive smokers. Clinicazia acta; international journal of clinical chemistry. 2010; 411 (17-18): 1238-42.], Lee Y, Kim H, Chung J. An antibody reactive to the Gly63-Lys68 epitope of NT-proBNP exhibits O-glycosylation-independent binding. Experimental & molecular medicine. 2014; 46: e114.].
  • the constant region of the synthesized human Ig k-chain (UniProtKB / Swiss-Prot: P01834.1) was modified to be located on the DNA 3 'side of the added gene sequence.
  • the gene sequence to be added was cloned into a modified pCEP4 vector (Invitrogen) to allow gene addition via SfiI restriction enzymes.
  • Antibody clones were produced in the form of single-chain variable segment-human IgG1 Fc region fusion proteins (scFv-Fc) using the scFv coding DNA of each clone.
  • the vector was then transfected into HEK293F cells (Invitrogen) using polyethyleneimine (Polysciences) and the transfected cells were cultured in FreeStyleTM 293 expression medium containing 100 U / L penicillin-streptomycin.
  • Overexpressed recombinant SFTS virus glycoprotein fusion protein was purified via affinity chromatography (GE Healthcare) using a Protein A / KappaSelect column and AKTA Pure Chromatography System.
  • a phage-display library of human single chain variable fragment (scFv) antibodies was constructed using the pComb3XSS phagemid vector.
  • Barbas CF Burton DR, Scott JK, Silverman GJ.
  • Four rounds of biopanning were performed to select scFv clones from the library.
  • 3 ⁇ g of recombinant SFTS virus glycoprotein Gc or Gn human IgG1 Fc region fusion proteins (Gc-Fc, Gn-Fc) was added to 5 ⁇ 10 6 magnetic Dynabeads M-270 epoxy beads (according to the manufacturer's instructions). Invitrogen) was used for coating. And beads combined with proteins were used in the biopanning procedure.
  • phage clones were selected from the last round of biopanning and scFv-display phages were prepared for phage enzyme immunoassay.
  • Microtiter plates (Corning) were coated overnight at 4 ° C. with 100 ng of recombinant Gc, Gn human Ig k chain constant region fusion proteins (Gc-Ck, Gn-Ck).
  • SFTS virus specific scFv-Fc fusion antibodies (100 ⁇ l / ml) were serially diluted to 10-fold reductions to 0.01 ⁇ l / ml.
  • concentration of scFvs was mixed in equal volumes of 100 TCID50 SFTS virus (strain KF358691) and incubated at 37 ° C. for 1 hour.
  • the virus-antibody mixture was then transferred to a monolayer of Vero cells in an 8-well confocal microscope chamber and incubated at 37 ° C. for 1 hour. After removing the virus-antibody mixture, the samples were incubated in RPMI-1640 medium containing 2% FBS and antibiotics at 37 ° C. in a 5% carbon dioxide environment.
  • Vero cells in an 8-well confocal microscope chamber were used for immunofluorescence analysis (IFA). All experiments were performed three times, and the relative neutralizing effect was positive control as MAb 4-5 [Xiling Guo et al. A human antibody neutralizing SFTS virus, an emerging hemorrhagic fever virus, 2013. Clin. Vaccine Immunol. 2013; 20 (9): 1426-32).] And negative controls as compared to anti-Newcastle disease virus (NDV) antibodies, respectively.
  • IFA immunofluorescence analysis
  • Relative neutralizing effects were determined using immunofluorescence analysis (IFA).
  • IFA immunofluorescence analysis
  • Cells treated or untreated with virus-antibody mixture with or without Ab10, MAb 4-5 (positive control), anti-NDV (negative control) were incubated for 2 days.
  • the cells were fixed in 4% paraformaldehyde in phosphate-buffered saline (PBS) for 1 hour at room temperature.
  • Slides were blocked and permeated with 0.1% Triton X-100 in 1% bovine serum albumin (BSA) and then incubated with anti-SFTS virus glycoprotein Gn clone Ab6 antibody (5 ⁇ l / ml) at 4 ° C. overnight.
  • BSA bovine serum albumin
  • FITC fluorescein isothiocyanate
  • DAPI 6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride
  • Example 9 neutralizing activity of antibodies against SFTS virus

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Abstract

본 발명은 중증열성혈소판감소증후군(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome, SFTS)의 병원체인 중증열성혈소판감소증후군 바이러스(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus, SFTSV)를 효과적으로 검출 또는 진단하고, SFTS를 치료하기 위해 사용되는 SFTSV의 외막 당단백질에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다.

Description

중증열성혈소판감소증후군 바이러스의 외막 당단백질에 결합하는 항체 및 이의 용도
본 출원은 2016년 3월 23일에 출원된 한국특허출원 제10-2016-0034727호에 기초한 우선권을 주장하며, 해당 출원의 명세서 및 도면에 개시된 모든 내용은 본 출원에 원용된다.
본 발명은 중증열성혈소판감소증후군(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome, SFTS)의 병원체인 중증열성혈소판감소증후군 바이러스(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus, SFTSV)를 검출 또는 진단하고, SFTS를 치료하기 위해 사용되는 SFTSV의 외막 당단백질에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다.
중증열성혈소판감소증후군(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome, SFTS)은 신종 진드기매개 감염병 질환으로, 주로 작은소참진드기(Haemaphysalis longicornis) 또는 참진드기류(Amblyomma testudinarium)에 의해 매개되는 중증열성혈소판감소증후군 바이러스(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus, SFTSV)에 의해 발생한다. SFTS는 2009년에 중국에서 최초로 보고되었고, 2012년 일본 및 한국에서도 질환 및 바이러스가 보고된 바 있다. SFTS의 주요 증상은 발열, 복통, 구역, 구토 혈소판 감소증 또는 백혈구 감소증 등이며, 중증인 경우 다발성 장기부전이 발생하여 사망에 이를 수도 있다. SFTS는 매년 중국, 일본 또는 한국에서 꾸준하게 발생하고 있으며, 이로 인한 치사율은 매우 높으며, 봄에서 여름 사이의 기간에 주로 발생한다. SFTSV의 야생 숙주는 등줄쥐가 유력하고, 중국의 주요 발병지에서는 염소, 소, 개 또는 닭 등의 가축에서 혈청 항체가 높은 비율로 발견되어, 가축이 숙주 역할을 할 수도 있는 것으로 추정된다. 감염자의 체액을 매개로 하여 사람간 감염이 일어난 것이 보고된 바 있으나, 현재까지 SFTS를 효과적으로 치료할 수 있는 것으로 증명된 치료제 또는 예방법은 없다.
SFTS 감염 여부를 확인하기 위해 혈액내 항 SFTSV 항체가를 확인하는 방법이 있다. 이때 상기 항 SFTSV 항체가는 주로 SFTSV의 N 단백질에 대한 항체로 측정한다. 상기 항체는 SFTSV가 사멸하였을 때 노출되는 SFTSV 내부 단백질에 대한 항체이다. 따라서 기존의 항 SFTSV 항체가 확인을 통한 진단은 살아서 활발히 활동하는 바이러스의 존재를 정확하게 파악할 수 없는 한계점을 가진다. SFTS를 진단하는 또 다른 방법으로, SFTSV의 RNA 서열을 인체 유래 검체에서 검출하는 방법은 높은 정확도를 보인다고 알려져 있지만, 검체로부터 양질의 바이러스 RNA를 분리하는데 어려움이 있다.
한편, 국제공개특허 제2015/053455호(WO2015/053455A1)에서는 SFTSV에 대한 항체의 검출 방법이 개시되어 있으나, 구체적으로 항체가 SFTSV의 어느 항원에 결합하는지 여부 및 이러한 항체의 중화 활성에 대해서는 전혀 개시되어 있지 않다.
따라서, 종래의 사멸된 상태의 SFTSV 단백질 양을 측정하는 효소면역반응 진단방법의 부정확한 바이러스 역가 측정 방법, 또는 종래의 혈액 내 낮은 순도의 바이러스 RNA 분리 방법의 한계를 극복하여, SFTSV를 효과적으로 검출, 분리 또는 정제할 수 있는 항체 또는 방법의 개발이 필요한 실정이다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 SFTSV를 효과적으로 검출 또는 진단하고 SFTS를 치료할 수 있는 항체를 제공하는 것이다. 또한, 본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 SFTSV, 특히 SFTSV의 외막 당단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 제공하는 것이다.
상기 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 SFTSV, 특히 이의 외막 당단백질에 특이적으로 결합하는 신규 항체를 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 항체를 사용하여 SFTSV를 효과적으로 검출, 분리 또는 정제하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 항체를 사용하여 SFTS를 효과적으로 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명자들은 종래의 SFTSV의 진단 방법이 갖는 한계점을 극복하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, SFTSV의 외막 당단백질, 특히 Gc 또는 Gn에 특이적으로 결합하는 신규 항체를 발견하였고, 이를 이용하여 SFTSV를 효과적으로 검출할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
SFTSV는 마이너스 단일가닥 RNA 바이러스로 Bunyaviridae과, phlebovirus속에 속한다. 상기 바이러스는 직경 80~100nm의 구형 바이러스로 작은소참진드기를 매개체로 한다. 상기 바이러스의 유전체는 large(L), Medium(M) 및 small(S) 세그먼트로 구성되어 있으며, 이들은 RNA dependent RNA polymerase(RdRp), glycoprotein precursor(M), glycoprotein N(Gn), glycoprotein C(Gc), nucleocapsid protein(NP) 및 non-structural protein(NSs)의 6개의 단백질을 코딩한다.
본 발명에 있어서, "항체"는 온전한 항체 및 이의 임의의 항원 결합 부분 또는 단일쇄를 포함할 수 있다. 천연 발생 "항체"는 다이설피드 결합에 의해 상호 연결된, 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 중쇄 불변 영역(CH)으로 이루어진다. 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2 및 CH3의 3개의 도메인으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인 CL로 이루어진다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라 불리는 보다 보존된 영역이 산재되어 있는, 상보성 결정 영역(CDR)이라 불리는 초가변 영역으로 보다 세분화될 수 있다. 각 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어지며, 이것들은 아미노 말단에서부터 카르복시 말단까지 다음의 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호 작용하는 결합 도메인을 함유한다.
본 발명은 SFTSV의 외막 당단백질, 특히 SFTSV의 외막 당단백질 Gc 또는 Gn에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 바람직하게, 상기 항체는 하기와 같은 특정한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어질 수 있다. 또한, 중쇄와 경쇄의 불변 영역에서 자명한 일부 변형의 경우, 동일 또는 유사한 결합 특이성을 가지는 범위에서 본 발명의 범주에 포함된다. 또한, 각각의 이들 항체는 SFTSV의 외막 당단백질에 결합할 수 있기 때문에, VH, VL, 전장 경쇄 및 전장 중쇄 서열(아미노산 서열 및 상기 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열)은 혼합 및 매치되어 본 발명의 다른 SFTSV의 외막 당단백질 결합 항체를 생성할 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명의 Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체 클론(Ab 1~5)의 아미노산 서열을 하기 표 1~8에 나타내었다.
Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
1 Ab1의 경쇄 ELTLTQSPATLSLSPGETATLSC GASQSVSTNYLA WYQQKPGLAPRLLIY DASSRAT GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLAPEDSAVYYC QQYGSSPLT FGGGTKLEIK
2 Ab2의 경쇄 ELVVTQPPSVSGAPGQRVTISC SGSSSNIGNNTVN WYQQLPGTAPKLLIY SNNQRPS GVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQADDEADYYC QSFDSSLNDWV FGGGTKLTVL
3 Ab3의 경쇄 ELELTQPPSVSGAPGQRVTISC TGSSSNIGAGYDVH WYQQLPGTAPKLLIY GNSNRPS GVPDRFSGSKSDTSASLAISGLRSEDEADYYC AAWDDSLNGQVV FGGGTKLTVL
4 Ab4의 경쇄 ELVLTQPPSASGTPGQRVTISC SGSSSNIGSNTVN WYQQLPGTAPKLLIY SNNQRPP GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC QSYDSSLSYV FGTGTKVTVL
5 Ab5의 경쇄 ELVVTQEPSLTVPPGGTVTLTC GSSTGPVTTTQYPY WFQQKPGQAPRTLIY DTNNRHP WTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDDA-YYC LLTSASAPWV FGGGTKLTVL
6 Ab1의 중쇄 QVQLVQSGPEVKKPGSSVKVSCKAS GGTFSTYAIS WVRQAPGQGLEWMG GIIPISGTANYAQKFQG RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCA VPV---------VPAASGPFDYWG QGTLVTVSS
7 Ab2의 중쇄 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS GFTFSSYSMN WVRQAPGKGLEWVS SISSSSRYIFYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCA SLGYCSGGSCYGFPEGGNAFDIWG QGTMVTVSS
8 Ab3의 중쇄 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS GGSFSGYYWS WIRQPPGKGLEWIG EIIHSGSTNYNPSLKS RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCA RGDYYD---------SSGAFDYWG QGTLVTVSS
9 Ab4의 중쇄 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYSMN WVRQAPGKGLEWVS SISSSSRYIFYADSVKG RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYY-- SLGYCSGGSCYGFPEGGNAFDIWG QGTMVTVSS
10 Ab5의 중쇄 QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCSAS GFTFSSYAMH WVRQAPGKGLEYVS AISSDGGSTYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCV NDG------------SSNHFDYWG QGTLVTVSS
Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역1(LFR1 또는 HFR1)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
11 Ab1의 LFR1 ELTLTQSPATLSLSPGETATLSC
12 Ab2의 LFR1 ELVVTQPPSVSGAPGQRVTISC
13 Ab3의 LFR1 ELELTQPPSVSGAPGQRVTISC
14 Ab4의 LFR1 ELVLTQPPSASGTPGQRVTISC
15 Ab5의 LFR1 ELVVTQEPSLTVPPGGTVTLTC
16 Ab1의 HFR1 QVQLVQSGPEVKKPGSSVKVSCKAS
17 Ab2의 HFR1 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAAS
18 Ab3의 HFR1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS
19 Ab4의 HFR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS
20 Ab5의 HFR1 QVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCSAS
Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 상보성 결정영역1(LCDR1 또는 HCDR1)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
21 Ab1의 LCDR1 GASQSVSTNYLA
22 Ab2의 LCDR1 SGSSSNIGNNTVN
23 Ab3의 LCDR1 TGSSSNIGAGYDVH
24 Ab4의 LCDR1 SGSSSNIGSNTVN
25 Ab5의 LCDR1 GSSTGPVTTTQYPY
26 Ab1의 HCDR1 GGTFSTYAIS
27 Ab2의 HCDR1 GFTFSSYSMN
28 Ab3의 HCDR1 GGSFSGYYWS
29 Ab4의 HCDR1 GFTFSSYSMN
30 Ab5의 HCDR1 GFTFSSYAMH
Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역2(LFR2 또는 HFR2)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
31 Ab1의 LFR2 WYQQKPGLAPRLLIY
32 Ab2의 LFR2 WYQQLPGTAPKLLIY
33 Ab3의 LFR2 WYQQLPGTAPKLLIY
34 Ab4의 LFR2 WYQQLPGTAPKLLIY
35 Ab5의 LFR2 WFQQKPGQAPRTLIY
36 Ab1의 HFR2 WVRQAPGQGLEWMG
37 Ab2의 HFR2 WVRQAPGKGLEWVS
38 Ab3의 HFR2 WIRQPPGKGLEWIG
39 Ab4의 HFR2 WVRQAPGKGLEWVS
40 Ab5의 HFR2 WVRQAPGKGLEYVS
Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 상보성 결정영역2(LCDR2 또는 HCDR2)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
41 Ab1의 LCDR2 DASSRAT
42 Ab2의 LCDR2 SNNQRPS
43 Ab3의 LCDR2 GNSNRPS
44 Ab4의 LCDR2 SNNQRPP
45 Ab5의 LCDR2 DTNNRHP
46 Ab1의 HCDR2 GIIPISGTANYAQKFQG
47 Ab2의 HCDR2 SISSSSRYIFYADSVKG
48 Ab3의 HCDR2 EIIHSGSTNYNPSLKS
49 Ab4의 HCDR2 SISSSSRYIFYADSVKG
50 Ab5의 HCDR2 AISSDGGSTYYADSVKG
Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역3(LFR3 또는 HFR3)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
51 Ab1의 LFR3 GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLAPEDSAVYYC
52 Ab2의 LFR3 GVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQADDEADYYC
53 Ab3의 LFR3 GVPDRFSGSKSDTSASLAISGLRSEDEADYYC
54 Ab4의 LFR3 GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYC
55 Ab5의 LFR3 WTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDDA-YYC
56 Ab1의 HFR3 RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCA
57 Ab2의 HFR3 RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCA
58 Ab3의 HFR3 RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCA
59 Ab4의 HFR3 RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYY--
60 Ab5의 HFR3 RFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYCV
Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 상보성 결정영역3(LCDR3 또는 HCDR3)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
61 Ab1의 LCDR3 QQYGSSPLT
62 Ab2의 LCDR3 QSFDSSLNDWV
63 Ab3의 LCDR3 AAWDDSLNGQVV
64 Ab4의 LCDR3 QSYDSSLSYV
65 Ab5의 LCDR3 LLTSASAPWV
66 Ab1의 HCDR3 VPV---------VPAASGPFDYWG
67 Ab2의 HCDR3 SLGYCSGGSCYGFPEGGNAFDIWG
68 Ab3의 HCDR3 RGDYYD---------SSGAFDYWG
69 Ab4의 HCDR3 SLGYCSGGSCYGFPEGGNAFDIWG
70 Ab5의 HCDR3 NDG------------SSNHFDYWG
Gc 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역4(LFR4 또는 HFR4)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
71 Ab1의 LFR4 FGGGTKLEIK
72 Ab2의 LFR4 FGGGTKLTVL
73 Ab3의 LFR4 FGGGTKLTVL
74 Ab4의 LFR4 FGTGTKVTVL
75 Ab5의 LFR4 FGGGTKLTVL
76 Ab1의 HFR4 QGTLVTVSS
77 Ab2의 HFR4 QGTMVTVSS
78 Ab3의 HFR4 QGTLVTVSS
79 Ab4의 HFR4 QGTMVTVSS
80 Ab5의 HFR4 QGTLVTVSS
일부 실시 양태에서, 본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 Gc에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함할 수 있다. 이러한 특정한 서열로 이루어진 항체는 외막 당단백질 Gc에 특이적이고 효과적으로 결합할 수 있어, SFTSV의 검출에 매우 유용하게 사용될 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 바람직하게, 본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 Gc에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체, 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체, 및 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체로 제공될 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 Gc에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 21, 22, 23, 24 및 25로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 41, 42, 43, 44 및 45로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 61, 62, 63, 64 및 65로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 26, 27, 28, 29 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 46, 47, 48, 49 및 50으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역2(HCDR2), 및 서열번호 66, 67, 68, 69 및 70으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역3(HCDR3)을 포함할 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 Gc에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 21의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 41의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 61의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 26의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 46의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 66의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체; 서열번호 22의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 42의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 62의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 27의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 47의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 67의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체; 서열번호 23의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 43의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 63의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 28의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 48의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 68의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체; 서열번호 24의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 44의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 64의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 29의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 49의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 69의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체; 또는 서열번호 25의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 45의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 65의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 30의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 50의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 70의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체로 제공될 수 있다.
일 실시예에서, 본 발명의 Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체 클론(Ab 6~10)의 아미노산 서열을 하기 표 9~16에 나타내었다.
Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
81 Ab6의 경쇄 ELALTQPPSVSVAPGKTAKITC GGDDIGSKTVQ WYQQTSGQAPVLVVY DDSDRPS GIPERFSGANSGNTATLTISRVEAGDEADYYC QVWDGRSDHVV FGGGTKLTVL
82 Ab7의 경쇄 ELVLTQPPSVSAAPGQKVTISC SGSSSNIGNNVVS WYQQLPGTAPKLLIY DDNRRPS GIPDRFSGSKSGTSATLDITGLQTGDEADYYC ATWDGSLTAGRVL FGSGTKLTVL
83 Ab8의 경쇄 ELALTQPPSVSVAPAMTAKITC GGDDIGSTTVQ WYQQTSGQAPVLVVY DDSDRPS GIPERFSGANSGNTATLTISRVEAGDEADYYC QVWDGRSDHVV FGGGTKLTVL
84 Ab9의 경쇄 ELELTQPPSVSGTPGKRVSMSC SGSRSNIGGNVVN WYQQLPGKAPKLFIY NNDQRPS GVPDRVSGSKSGTSVSVAISGLQPEDEADYYC AAWDDILNGVV FGGGTQLTVL
85 Ab10의 경쇄 ELVMTQSPSSLSASVGDTVTITC RASQSIYTYLN WYHQTPGKAPKLLIS AASSLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYADVPVT FGGGTKLEIK
86 Ab6의 중쇄 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYIFTNYWIG WVRQMPGKGLEWM GIIYPGDSDTRYSPSFQG QVTISADRSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RLKLRGFSGGYGSGRRYFDYWG QGTLVTVSS
87 Ab7의 중쇄 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYSFTSYWIG WVRQMPGKGLEWM GIIYPGDSDTRYSPSFQG QVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RLKLRGFSGGYGSGSRYFDYWG QGTLVTVSS
88 Ab8의 중쇄 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYIFTNYWIG WVRQMPGKGLEWM GIIYPGDSDTRYSPSFQG QVTISADRSISTANLQWSSLKASDTALYYCA RLKLRGFSGGYGSGRRYFDYWG QGTLVTVSS
89 Ab9의 중쇄 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYNFTNYWIG WVRQLPGKGLEWM GIIYPGDSDTRYSPSFQG QVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA RIRVIGFYD--SSPPPLFDYWG QGTLVTVSS
90 Ab10의 중쇄 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFSGYGIH WVRQAPGKGLEWV ALISYDGSNKYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA KDR-----DYFGSG--FFDYWG QGTLVTVSS
Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역1(LFR1 또는 HFR1)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
91 Ab6의 LFR1 ELALTQPPSVSVAPGKTAKITC
92 Ab7의 LFR1 ELVLTQPPSVSAAPGQKVTISC
93 Ab8의 LFR1 ELALTQPPSVSVAPAMTAKITC
94 Ab9의 LFR1 ELELTQPPSVSGTPGKRVSMSC
95 Ab10의 LFR1 ELVMTQSPSSLSASVGDTVTITC
96 Ab6의 HFR1 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS
97 Ab7의 HFR1 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS
98 Ab8의 HFR1 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS
99 Ab9의 HFR1 QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS
100 Ab10의 HFR1 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS
Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 상보성 결정영역1(LCDR1 또는 HCDR1)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
101 Ab6의 LCDR1 GGDDIGSKTVQ
102 Ab7의 LCDR1 SGSSSNIGNNVVS
103 Ab8의 LCDR1 GGDDIGSTTVQ
104 Ab9의 LCDR1 SGSRSNIGGNVVN
105 Ab10의 LCDR1 RASQSIYTYLN
106 Ab6의 HCDR1 GYIFTNYWIG
107 Ab7의 HCDR1 GYSFTSYWIG
108 Ab8의 HCDR1 GYIFTNYWIG
109 Ab9의 HCDR1 GYNFTNYWIG
110 Ab10의 HCDR1 GFTFSGYGIH
Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역2(LFR2 또는 HFR2)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
111 Ab6의 LFR2 WYQQTSGQAPVLVVY
112 Ab7의 LFR2 WYQQLPGTAPKLLIY
113 Ab8의 LFR2 WYQQTSGQAPVLVVY
114 Ab9의 LFR2 WYQQLPGKAPKLFIY
115 Ab10의 LFR2 WYHQTPGKAPKLLIS
116 Ab6의 HFR2 WVRQMPGKGLEWM
117 Ab7의 HFR2 WVRQMPGKGLEWM
118 Ab8의 HFR2 WVRQMPGKGLEWM
119 Ab9의 HFR2 WVRQLPGKGLEWM
120 Ab10의 HFR2 WVRQAPGKGLEWV
Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 상보성 결정영역2(LCDR2 또는 HCDR2)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
121 Ab6의 LCDR2 DDSDRPS
122 Ab7의 LCDR2 DDNRRPS
123 Ab8의 LCDR2 DDSDRPS
124 Ab9의 LCDR2 NNDQRPS
125 Ab10의 LCDR2 AASSLQS
126 Ab6의 HCDR2 GIIYPGDSDTRYSPSFQG
127 Ab7의 HCDR2 GIIYPGDSDTRYSPSFQG
128 Ab8의 HCDR2 GIIYPGDSDTRYSPSFQG
129 Ab9의 HCDR2 GIIYPGDSDTRYSPSFQG
130 Ab10의 HCDR2 ALISYDGSNKYYADSVKG
Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역3(LFR3 또는 HFR3)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
131 Ab6의 LFR3 GIPERFSGANSGNTATLTISRVEAGDEADYYC
132 Ab7의 LFR3 GIPDRFSGSKSGTSATLDITGLQTGDEADYYC
133 Ab8의 LFR3 GIPERFSGANSGNTATLTISRVEAGDEADYYC
134 Ab9의 LFR3 GVPDRVSGSKSGTSVSVAISGLQPEDEADYYC
135 Ab10의 LFR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
136 Ab6의 HFR3 QVTISADRSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA
137 Ab7의 HFR3 QVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA
138 Ab8의 HFR3 QVTISADRSISTANLQWSSLKASDTALYYCA
139 Ab9의 HFR3 QVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCA
140 Ab10의 HFR3 RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA
Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 상보성 결정영역3(LCDR3 또는 HCDR3)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
141 Ab6의 LCDR3 QVWDGRSDHVV
142 Ab7의 LCDR3 ATWDGSLTAGRVL
143 Ab8의 LCDR3 QVWDGRSDHVV
144 Ab9의 LCDR3 AAWDDILNGVV
145 Ab10의 LCDR3 QQYADVPVT
146 Ab6의 HCDR3 RLKLRGFSGGYGSGRRYFDYWG
147 Ab7의 HCDR3 RLKLRGFSGGYGSGSRYFDYWG
148 Ab8의 HCDR3 RLKLRGFSGGYGSGRRYFDYWG
149 Ab9의 HCDR3 RIRVIGFYD--SSPPPLFDYWG
150 Ab10의 HCDR3 KDR-----DYFGSG--FFDYWG
Gn 외막 당단백질에 결합하는 항체의 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역4(LFR4 또는 HFR4)의 아미노산 서열
서열번호 항체 및 부위 서열
151 Ab6의 LFR4 FGGGTKLTVL
152 Ab7의 LFR4 FGSGTKLTVL
153 Ab8의 LFR4 FGGGTKLTVL
154 Ab9의 LFR4 FGGGTQLTVL
155 Ab10의 LFR4 FGGGTKLEIK
156 Ab6의 HFR4 QGTLVTVSS
157 Ab7의 HFR4 QGTLVTVSS
158 Ab8의 HFR4 QGTLVTVSS
159 Ab9의 HFR4 QGTLVTVSS
160 Ab10의 HFR4 QGTLVTVSS
일 실시 양태에서, 본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 Gn에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 81, 82, 83, 84 및 85로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및 서열번호 86, 87, 88, 89 및 90으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함할 수 있다. 이러한 특정한 서열로 이루어진 항체는 외막 당단백질 Gn에 특이적이고 효과적으로 결합할 수 있어, SFTSV의 검출에 매우 유용하게 사용될 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 바람직하게, 본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 Gn에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 81의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체, 서열번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체, 서열번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체, 서열번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체, 및 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체로 제공될 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 Gn에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 101, 102, 103, 104 및 105로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 121, 122, 123, 124 및 125로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 141, 142, 143, 144 및 145로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 106, 107, 108, 109 및 110으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 126, 127, 128, 129 및 130으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역2(HCDR2), 및 서열번호 146, 147, 148, 149 및 150으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역3(HCDR3)을 포함할 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 Gn에 특이적으로 결합하는 항체는 서열번호 101의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 121의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 141의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 106의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 126의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 146의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체; 서열번호 102의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 122의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 142의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 107의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 127의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 147의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체; 서열번호 103의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 123의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 143의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 108의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 128의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 148의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체; 서열번호 104의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 124의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 144의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 109의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 129의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 149의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체; 또는 서열번호 105의 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1), 서열번호 125의 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2), 서열번호 145의 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3), 서열번호 110의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1), 서열번호 130의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR2), 및 서열번호 150의 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR3)을 포함하는 항체로 제공될 수 있다.
일 실시 양태에서, 본 발명의 항체는 상기 언급된 항체를 비롯하여, 상기 표 1 또는 표 9에 기재된 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체와 상동성인 아미노산을 포함하는 항체를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 상기 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변영역, 및 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하며, 이들 CDR 서열 중 1개 이상은 본원에 기재된 항체 또는 이의 보존적 변형을 기초로 하는 특정 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 SFTSV의 외막 당단백질 Gc 또는 Gn 결합 항체의 기능적 특성을 보유하는 항체일 수 있으며, 표 1 또는 표 9에 기재된 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체일 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 변형된 항체를 조작하기 위한 출발 물질로서 본원에 제시된 1종 이상의 경쇄 또는 항체 서열을 갖는 항체를 사용하여 제조되고, 출발 항체로부터 일부 변경된 특성을 갖는 항체를 모두 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 항체는 항체의 특성을 개선시키기 위해 경쇄 또는 중쇄 내의 프레임워크 영역에 대해 변형이 이루어진 것을 포함할 수 있다. 또한, 상기 항체는 SFTSV의 외막 당단백질에 대해 적어도 1×107M-1, 1×108M-1, 1×109M-1, 1×1010M-1 또는 1×1011M-1　의 친화도 상수(KA)를 가질 수 있다.
또한, 본 발명의 항체는 SFTSV 외막 당단백질에 특이적으로 결합하는 완전 인간 항체일 수 있다. 이는 키메라 항체 등과 비교할 때, 인간 대상체에 투여되었을 때 더욱 감소된 항원성을 가질 수 있다. 인간 항체는 항체의 가변 영역 또는 전장 쇄가 인간 배선(germline) 면역글로불린 유전자를 사용한 시스템으로부터 수득된 경우에, 특정 배선 서열의 생성물이거나 이로부터 유도된 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 전장 중쇄 또는 경쇄를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 항원성을 가지는 비면역원화(De-immunized) 항체일 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서 항체는 이중특이적 또는 다중특이적 항체일 수 있다. 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2개 이상의 상이한 결합 부위 또는 표적 분자에 결합하는 이중특이적 분자일 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명의 항체는 SFTSV의 외막 당단백질에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 SFTSV의 외막 당단백질에 특이적으로 결합하는 인간 또는 인간화 단일클론 항체 또는 키메라 항체일 수 있으며, 본 발명의 항체는 인간 중쇄 불변 영역 및 인간 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 단일쇄 항체일 수 있으며, 본 발명의 항체는 Fab 단편일 수 있으며, scFv(Single-chain variable fragment)일 수 있으며, IgG 이소형일 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 항체는 scFv일 수 있다.
본 발명에 있어서, 단일클론항체는 통상의 단일클론 항체 방법에 의해 생성될 수 있으며, 합성된 항체 유전자를 항체 발현용 벡터, 바람직하게는 pcDNA, pCI, pCMV 또는 pCEP4 등에 삽입하여 발현 및 정제할 수 있다. 또한, B 림프구의 바이러스성 또는 발암성 형질 전환을 이용할 수 있으며, 뮤린 시스템을 이용하여 제조된 뮤린 단일클론 항체의 서열을 기초로 하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 표준 분자 생물학 기술을 이용하여, 중쇄 및 경쇄 면역글로불린을 코딩하는 DNA를 뮤린 하이브리도마로부터 얻고 이와 함께 비-뮤린 면역글로불린 서열을 함유하게 할 수 있다.
일부 실시 양태에서, 본 발명은 아미노산이 각각의 인간 VH 또는 VL 배선 서열로부터의 항체 프레임워크로 치환된 프레임워크를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 서열번호 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 폴리펩티드, 및 서열번호 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 일 구현예에서, 상기 핵산은 서열번호 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169 및 170으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 핵산 서열일 수 있으며, 이를 하기 표 17에 나타내었다(표에서 볼드체로 표시한 부분은 경쇄 가변영역(VL)이며, 밑줄로 표시한 부분은 중쇄 가변영역(VH)이다).
서열번호 항체 핵산 서열
161 Ab1 scFv GAGCTCACACTCACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAACAGCCACCCTCTCCTGCGGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCACCAACTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCTGGCGCCCAGGCTCCTCATCTATGATGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGCGCCTGAAGATTCTGCGGTGTATTACTGTCAGCAATATGGTAGCTCACCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGGAGATCAAAGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGCCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCACCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAGGGATCATCCCTATCTCTGGTACAGCAAACTACGCACAGAAATTCCAGGGCAGAGTCACCATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGGTACCAGTAGTACCAGCTGCCAGCGGCCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCC
162 Ab2 scFv GAGCTCGTGGTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAATAATACTGTAAACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGACGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTTTGACAGCAGCCTGAATGATTGGGTGTTCGGCGGGGGCACCAAGCTGACCGTCCTAGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATAGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTCGTTACATATTCTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGCCTAGGATATTGTAGTGGTGGTAGCTGCTACGGGTTCCCGGAAGGTGGGAATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
163 Ab3 scFv GAGCTCGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGACACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGCCAGGTGGTATTCGGCGGAGGCACCAAGCTGACCGTCCTAGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGAAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGGAAATCATTCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAATTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGGTGATTATTATGATAGTAGTGGTGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
164 Ab4 scFv GAGCTCGTGCTGACTCAGCCACCTTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATACTGTAAACTGGTACCAGCAGCTCCCCGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCCCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTTATGTCTTCGGAACTGGCACCAAGGTGACCGTCCTAGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATAGCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTAGTAGTCGTTACATATTCTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGCCTAGGATATTGTAGTGGTGGTAGCTGCTACGGGTTCCCGGAAGGTGGGAATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
165 Ab5 scFv GAGCTCGTGGTGACCCAGGAGCCCTCACTGACTGTGCCCCCAGGAGGGACAGTCACTCTCACCTGTGGCTCCAGCACTGGACCTGTCACCACTACTCAGTATCCCTACTGGTTCCAGCAGAAGCCTGGCCAGGCCCCCAGGACACTCATTTATGATACCAACAACAGACACCCCTGGACACCTGCCCGCTTCTCAGGCTCCCTCCTTGGGGGCAAGGCTGCCCTGACCCTTTCGGGAGCGCAGCCTGAGGATGACGCTTAGTATTATTGCTTGCTCACCTCTGCTAGCGCTCCTTGGGTGTTCGGCGGAGGCACCAAGCTGACCGTCCTAGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTTCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGCTATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTGGAATATGTTTCAGCTATTAGTAGTGATGGGGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCAGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAGCAGTCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTATATTACTGTGTGAACGATGGCAGCTCGAACCATTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
166 Ab6 scFv GAGCTCGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGTGTCAGTGGCCCCAGGAAAGACGGCCAAGATTACCTGTGGGGGTGACGACATTGGAAGTAAAACTGTGCAATGGTACCAACAGACCTCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGACGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGACGGCAGAAGTGATCATGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACATCTTTACCAACTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTGGTGACTCTGATACCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAGGTCCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGACTAAAGCTCCGGGGGTTTTCGGGCGGCTATGGTTCAGGGAGACGCTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
167 Ab7 scFv GAGCTCGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACTGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCTAACATTGGGAATAATGTTGTATCCTGGTACCAGCAACTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACGATAACCGGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGACATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTACTACTGCGCAACATGGGATGGCAGCCTGACTGCTGGCCGTGTGTTGTTCGGCAGTGGCACCAAGCTGACCGTCCTAGGTGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTACCAGCTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTGGTGACTCTGATACCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGACTAAAGCTCCGGGGGTTTTCGGGCGGCTATGGTTCAGGGAGCCGCTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
168 Ab8 scFv GAGCTCGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGTGTCAGTGGCCCCAGCAATGACGGCCAAGATTACCTGTGGGGGTGACGACATTGGAAGTACTACTGTGCAATGGTACCAACAGACCTCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGACGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGACGGCAGAAGTGATCATGTGGTTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACATCTTTACCAACTACTGGATCGGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTGGTGACTCTGATACCAGATACAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAGGTCCATCAGCACCGCCAACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCCTGTATTACTGTGCGAGACTAAAGCTCCGGGGGTTTTCGGGCGGCTATGGTTCAGGGAGACGCTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
169 Ab9 scFv GAGCTCGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCTGGGACCCCCGGGAAGAGGGTCAGTATGTCTTGTTCTGGAAGTAGGTCCAACATCGGAGGTAATGTTGTGAACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAAAGGCCCCCAAACTCTTCATCTACAATAATGATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGAGTCTCTGGCTCCAAGTCAGGCACCTCAGTCTCCGTGGCCATCAGTGGGCTCCAGCCTGAAGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCTTGGGATGACATCCTGAATGGTGTGGTCTTCGGCGGAGGGACCCAGCTGACCGTCCTCGGCGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAACTTCACCAACTACTGGATCGGGTGGGTGCGCCAGCTGCCCGGGAAAGGCCTGGAGTGGATGGGGATCATCTATCCTGGTGACTCCGACACCAGATATAGCCCGTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATCTCAGCCGACAAGTCCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGAGCAGCCTGAAGGCCTCGGACACCGCCATGTATTACTGTGCGAGAATTCGAGTTATCGGATTCTATGATAGTAGCCCCCCGCCCTTATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
170 Ab10 scFv GAGCTCGTGATGACTCAGTCTCCATCTTCCCTGTCCGCATCTGTGGGAGACACAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTTACACCTATTTAAATTGGTATCACCAGACACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCCTGATTTCTGCTGCATCTAGTTTGCAAAGTGGTGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAGGATTTTGCAACGTACTACTGTCAACAGTATGCGGATGTCCCGGTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGGAGATCAAAGGTGGTTCCTCTAGATCTTCCTCCTCTGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTGGCTATGGCATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCACTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAAAGATCGGGATTACTTTGGTTCAGGGTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 항체는 SFTSV의 외막 당단백질에 대한 항체 특이성이 유지되는 범위 내에서, 상기 표 1~16에 개시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 상기 항체를 발현시킬 수 있는 핵산은 SFTSV의 외막 당단백질에 대한 항체 특이성이 유지되는 범위 내에서, 상기 표 17에 개시된 핵산 서열 중 어느 하나와 적어도 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포를 제공한다. 본 발명의 벡터는 상기 SFTSV의 외막 당단백질 Gc에 결합하는 항체의 아미노산 서열을 코딩하는 핵산, 또는 Gn에 결합하는 항체의 아미노산을 코딩하는 핵산을 포함할 수 있다. 또는 본 발명의 벡터는 상기 2가지 종류의 핵산을 모두 포함함으로써, 이중 특이적 항체를 발현할 수 있다.
일 실시 양태에서, 본 발명은 (1) 본 발명의 항체의 중쇄를 코딩하는 제1 재조합 DNA 절편, 및 (2) 본 발명의 항체의 경쇄를 코딩하는 제2 재조합 DNA 절편을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명은 본 발명의 항체의 중쇄 및 경쇄 각각을 코딩하는 재조합 DNA 절편을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
본 발명의 SFTSV의 외막 당단백질 결합 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 발현시키기 위해 다양한 발현 벡터가 사용될 수 있다. 포유동물 숙주 세포에서 항체를 생성하기 위해 바이러스-기재 또는 비-바이러스 발현 벡터 둘 다 사용될 수 있다. 예를 들어, pcDNA, pCI, pCMV 또는 pCEP4 등의 벡터와, HEK293, CHO 또는 CHO-DG44 등의 숙주세포가 사용될 수 있다.
본 발명의 항체를 보유하고 발현하는 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포일 수 있다. 예를 들어, 상기 숙주 세포는 E.Coli, 바람직하게, E.coli ER2738. HB2151, BL21 등일 수 있으며, 이들은 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 클로닝하고 발현시키는데 유용할 수 있다. 또한, 다른 미생물 숙주로 바실러스, 예를 들어 바실러스 섭틸리스(Bacillus subtilis), 또는 다른 장내 박테리아, 예를 들어 살모넬라(Salmonella) 또는 세라티아(Serratia), 또는 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종이 사용될 수 있다. 본 발명의 항체를 발현시키기 위해 다른 미생물, 예를 들어 효모가 사용될 수 있으며, 바큘로바이러스 벡터와 조합된 곤충 세포가 또한 사용될 수 있다.
일부 바람직한 실시양태에서, 포유동물 숙주 세포가 본 발명의 SFTSV 외막 당단백질 결합 폴리펩티드를 발현시키고 제조하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 내인성 면역글로불린 유전자를 발현하는 하이브리도마 세포주 또는 외인성 발현 벡터를 보유하는 포유동물 세포주 일 수 있다. 또한, 임의의 동물 또는 인간 세포로, 예를 들어, CHO 세포주, Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주, HEK 세포주, 형질전환된 B-세포 및 하이브리도마를 포함한다. 또한, 면역글로불린을 분비할 수 있는 수많은 적합한 숙주 세포주가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 HEK293, CHO 또는 CHO-DG44가 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명의 1종 이상의 SFTSV 외막 당단백질 결합 분자(예를 들어, Gc 또는 Gn 결합 항체 또는 이의 항원 결합 단편)를 포함하는 SFTSV 진단용 조성물을 제공한다. 본 발명의 진단용 조성물은 SFTSV의 검출, 분리 또는 정제에 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 SFTSV를 진단하기에 적합한 1종 이상의 다른 제제를 추가로 함유할 수 있다. 또한, 본 발명은 본 발명의 항체를 사용하여 SFTSV를 진단하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 SFTSV의 정량적 또는 정성적 검출 또는 진단하는데 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 진단 방법은 생물학적 샘플(예를 들어, 혈액, 혈청, 세포 또는 조직)로부터 또는 SFTS를 앓고 있거나 발생할 위험이 있는 대상으로부터 SFTSV의 외막 당단백질 및/또는 핵산 발현 및 SFTSV의 외막 당단백질 기능을 결정하는 진단 검정을 포함할 수 있다. 본 발명에 있어서, 검출은 정량 및/또는 정성 분석을 포함하는 것으로, 존재, 부존재의 검출 및 바이러스 양(titer)의 검출을 포함하는 것으로 이러한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 당업자라면 본원의 실시를 위해 적절한 방법을 선택할 수 있다.
본 발명에 있어서, SFTSV의 진단의 검출 또는 진단은 항원-항체의 복합체를 검출하는 방사상면역분석, 웨스턴블랏, ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay) 또는 면역형광분석 등을 통해 검출될 수 있다. 본 발명에 있어서, 항원은 방사능 물질, 효소 또는 형광물질 등의 표지로 표지될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명의 진단 방법은 SFTSV의 외막 당단백질에 대한 항체를 자석 비드에 접합시킨 복합체를 이용할 수 있다. 구체적으로, 상기 방법은 SFTSV의 외막 당단백질 Gc 또는 Gn에 특이적인 항체를 자석 비드에 결합시킨 복합체를 이용하여, SFTSV를 보다 효과적으로 검출, 분리 또는 정제할 수 있다. 상기 SFTSV 외막 당단백질에 대한 항체-자석 비드 복합체는 항체의 특성을 이용하여 검체 내에 존재하는 SFTSV와 결합하게 되고, 이때 자력으로 자석 비드를 당기면 바이러스와 검체 내 나머지 물질들을 분리하여 바이러스를 효과적으로 정제할 수 있다. 이렇게 정제된 바이러스는 불순물이 제거되어 상대적으로 RNA 분리에 용이하며, 이를 통해 양질의 정제 결과 데이터를 얻어낼 수 있다. 또한 자석 비드에 붙어있는 상태의 바이러스에 또 다른 항체를 이용한 면역화학반응을 진행할 수 있으며, 이를 통해 검체 내에 존재하는 SFTSV를 신속하게 확인할 수 있다. 상기 진단 방법의 개략적인 도면을 도 4에 나타내었다.
또한 본 발명은 SFTSV의 외막 당단백질에 결합하는 항체를 포함하는 SFTSV의 진단용 키트를 제공한다. 상기 키트는 상기 언급된 항체의 어느 하나 이상 및 항원-항체 복합체 검출용 시약을 포함할 수 있다. 상기 항원-항체 복합체 검출용 시약은 방사상면역분석, ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) 또는 면역형광분석 등에 사용되는 시약이 사용될 수 있다.
예를 들어, 상기 면역 반응의 검출을 위해 검출시약은 검출을 위해 직접적 또는 샌드위치 형태로 간접적으로 표지될 수 있다. 직접적 표지방법의 경우, 어레이 등에 사용되는 혈청 시료는 Cy3 또는 Cy5와 같은 형광 표지로 표지될 수 있다. 샌드위치 방식의 경우, 표지되지 않은 혈청 시료를 먼저 검출시약이 부착된 어레이와 반응시켜 결합시킨 후, 표적 단백질을 표지된 검출 항체와 결합시켜 검출할 수 있다. 샌드위치 방식의 경우, 민감도와 특이성을 높일 수 있어, pg/mL 수준까지 검출이 가능하다. 그 외 방사능 물질, 발색물질, 자기성입자 또는 고밀도전자입자 등이 표지물질로 사용될 수 있다. 형광 광도는 스캐닝 콘포칼 현미경이 사용될 수 있으며, 예를 들어 Affymetrix, Inc. 또는 Agilent Technologies, Inc 등에서 입수할 수 있다.
본 발명의 키트는 추가로 결합분석에 필요한 하나 이상의 부가 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들면 결합 버퍼, 시료 준비에 필요한 시약, 혈액채취용 주사기 또는 음성 및/또는 양성대조군을 추가로 포함할 수 있다. 상기 다양한 검출시약을 포함할 수 있는 본원의 키트는 분석양태에 따라 ELISA 분석용, 딥스틱 래피드 키트(dip stick rapid kit) 분석용, 마이크로어레이용, 유전자증폭용, 또는 면역분석용 등으로 제공될 수 있으며, 분석 양태에 맞추어 적절한 검출시약을 선별할 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명의 SFTSV 외막 당단백질에 결합하는 항체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 바람직하게, 상기 약학적 조성물은 SFTS의 예방용 또는 치료용으로 사용될 수 있다. 본 발명의 항체는 SFTSV를 중화하여 바이러스의 증식을 차단함으로써, SFTS를 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 SFTSV 관련 질환을 치료 또는 예방하기에 적합한 1종 이상의 다른 제제를 추가로 함유할 수 있다. 약학적 조성물에 사용될 수 있는 담체는 조성물의 효과를 향상시키거나, 조성물을 안정화시키거나, 또는 조성물의 제조를 용이하게 할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 생리적으로 허용 가능한 용매, 분산 매질, 코팅제, 항-박테리아제, 항-진균제, 등장화제 또는 흡수 지연제 등을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 당업계에 공지된 다양한 방법으로 투여될 수 있으며, 투여 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 달라질 수 있다. 상기 약학적 조성물은 예를 들어, 정맥내, 근육내, 복막내 또는 피하 주사 등의 투여 방식으로 투여될 수 있다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물인 항체는 산의 작용 및 화합물을 불활성화시킬 수 있는 다른 천연 조건으로부터 화합물을 보호하는 물질로 코팅될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 멸균된 유체일 수 있다. 유체 조성물의 적당한 유동성을 유지하기 위해, 예를 들어 레시틴과 같은 코팅제 또는 계면활성제 등이 사용될 수 있다. 또한, 상기 약학적 조성물은 등장화제(예를 들어, 당, 폴리알콜, 만니톨, 소르비톨, 및 염화나트륨 등) 또는 흡수 지연제(알루미늄 모노스테아레이트 또는 젤라틴 등)을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 당업계에 공지되고 통상적으로 실시되는 방법에 따라 제조될 수 있으며, 바람직하게 GMP 조건하에 제조될 수 있다. 상기 약학적 조성물은 SFTSV 외막 당단백질 결합 항체의 치료 유효 용량 또는 효능 용량을 포함할 수 있다. 또한, 상기 약학적 조성물 중 활성 성분의 투여량 수준은 환자에게 독성을 나타내지 않으면서 목적하는 치료 효과를 달성하기에 충분한 양일 수 있다.
본 발명에 있어서, 치료 투여량은 안전성 및 효능이 최적화되도록 적정될 수 있다. 본 발명의 항체를 전신 투여하는 경우, 투여량 범위는 숙주 체중 1 kg 당 약 0.0001 내지 100 mg, 더욱 일반적으로는 0.01 내지 15 mg의 범위일 수 있다. 예시적인 치료법은 2주 당 1회, 또는 1개월 당 1회, 또는 3개월 내지 6개월마다 1회의 전신 투여를 수반한다. 전신 투여의 일부 방법에서, 투여량은 1 내지 1000 ㎍/mL, 일부 방법에서는 25 내지 500 ㎍/mL의 혈장 항체 농도가 달성되도록 조정될 수 있다. 또는, 빈도를 덜하게 하여 투여하는 것이 요구되는 경우에는, 지속 방출 제제를 통해 항체를 투여할 수 있다. 투여량 및 빈도는 환자에서의 항체의 반감기에 따라서 달라질 수 있다. 예방적 용도에서는 상대적으로 낮은 투여량을 장기간에 걸쳐 상대적으로 드문 간격으로 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 사용하여 SFTS를 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기 예방 또는 치료 방법은 본 발명의 항체를 포함하는 조성물의 치료학적으로 유효한 양의 투여를 포함할 수 있다. 상기 "치료학적으로 유효한 양"은 SFTS 질환의 예방 또는 치료에 유효한 본 발명의 항체 또는 이를 포함하는 조성물의 양을 나타낸다.
또한, 본 발명은 SFTSV의 진단용 조성물의 제조를 위한 SFTSV 외막 당단백질 결합 항체의 용도를 제공한다. 상기 진단용 조성물 제조를 위하여, 본 발명의 항체 또는 이를 포함하는 조성물은 허용되는 담체 등의 추가 성분을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 SFTSV 외막 당단백질 결합 항체의 용도를 제공한다. SFTSV에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체는 SFTSV 진단용으로 사용될 수 있으며, SFTS 질환을 앓고 있거나 발생할 위험이 있는 대상으로부터 SFTSV의 외막 당단백질 및/또는 핵산 발현 및 또한 상기 단백질의 기능을 결정하는 진단 용도로 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 SFTS가 발생할 위험이 있거나 이를 앓고 있는 대상에 SFTSV에 의해 발병하는 SFTS의 예방 또는 치료 용도로 사용될 수 있다.
본 발명의 항체는 SFTSV의 외막 당단백질 Gc 또는 Gn에 특이적으로 결합할 수 있어, 본 발명의 항체를 사용함으로써 SFTSV를 효과적으로 검출 또는 진단할 수 있으며, SFTS를 치료할 수 있다.
도 1은 항체 클론 Ab1 내지 Ab10의 아미노산 서열을 나타낸 것이다.
도 2는 SFTSV 외막 당단백질 Gc 및 Gn에 대해 정제된 scFv 절편 항체의 ELISA 분석 결과를 나타낸다. 이들 데이터는 3회 반복 샘플의 평균±S.D를 나타낸다.
도 3은 SFTSV 감염의 면역형광분석 결과(A) 및 형광강도 측정 결과(B)이다. 면역형광분석 결과에서, SFTSV 감염된 Vero 세포가 Gn에 대한 항체와 반응하는 것으로 나타났으며, Ab10은 투여량 의존적으로 바이러스 감염을 억제하는 것으로 나타났다. Ab10은 MAb 4-5에 비해 바이러스 침입에 대한 억제 능력이 현저하게 우수하였다.
도 4는 항체-자석 비드 복합체를 사용하여 SFTSV를 검출하는 방법을 나타낸 개략적인 도면이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
실시예 1: 세포의 준비
아프리카 녹색 원숭이 신장에서 유래된 Vero 세포를 한국 세포주 은행(Korean Cell Line Bank)에서 구입하여, 2% 열 불활성화된 소태아 혈청(Gibco) 및 페니실린-스트렙토마이신(Gibco)로 보충된 Roswell Park Memorial Institute (RPMI)-1640 배지(Welgene)로 5% 이산화탄소 환경에서 37℃로 배양하였다.
실시예 2: 바이러스 균주의 준비
본 실험에 사용된 SFTS 바이러스는 서울대학교 병원에 입원하고 2012년에 사망한 63세 여성 환자의 혈청 샘플에서 분리된 KF358691이다 [Kim KH, Yi J, Kim G, Choi SJ, Jun KI, Kim NH, et al. Severe fever with thrombocytopenia syndrome, South Korea, 2012. Emerging infectious diseases. 2013;19(11):1892-4.]. 상기 분리된 바이러스를 Vero 세포의 단일층에 접종하고 5% 이산화탄소 환경에서 37℃로 배양하였다. 바이러스를 Vero 세포에서 증식시키고, 모든 실험은 바이러스 배양 세번째 계대수(viral passage)에서 수행되었다. Reed-Muench법을 사용하여 Vero 세포에서 50% 조직 배양물 감염 투여량(TCID50)을 적정하였다.
실시예 3: 재조합 SFTS 바이러스 당단백질 및 단쇄 가변절편 항체 융합 단백질의 준비
본 실험에 사용된 SFTS 바이러스 당단백질의 아미노산 서열은 이전에 보고되었다[Kim KH, Yi J, Kim G, Choi SJ, Jun KI, Kim NH, et al. Severe fever with thrombocytopenia syndrome, South Korea, 2012. Emerging infectious diseases. 2013;19(11):1892-4.]. SFTS 바이러스 당단백질을 코딩하는 DNA 가닥을 얻기 위해, 서열번호 171의 SFTS 바이러스 당단백질의 아미노산 서열(GenBank Accession No: AGT98506, Gn 당단백질에 대해 아미노산 20-452, Gc 당단백질에 대해 아미노산 563-1035)에 상응하는 인간 코돈 최적화된 DNA 서열을 합성하였다(GenScript).
인간 면역글로불린 G1(IgG1) Fc 영역(Gc-Fc, Gn-Fc)에 융합되거나, 인간 Ig k-쇄 불변 영역(Gc-Ck, Gn-Ck)에 융합된 재조합 SFTS 바이러스 당단백질 Gc 및 Gn을 과발현시키기 위해, SFTS 당단백질 코딩 유전자를 [Park S, Lee DH, Park JG, Lee YT, Chung J. A sensitive enzyme immunoassay for measuring cotinine in passive smokers. Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry. 2010;411(17-18):1238-42.], [Lee Y, Kim H, Chung J. An antibody reactive to the Gly63-Lys68 epitope of NT-proBNP exhibits O-glycosylation-independent binding. Experimental & molecular medicine. 2014;46:e114.]에서 개시된 방법에 따라 준비하였다.
먼저, 인간 골수유래 cDNA 라이브러리(Clontech Laboratories)로부터 2종의 프라이머 (5'-GAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCAC-3') 및 (5'-GGATCCTCATTTACCCGGGGACAGGGAG-3')를 이용해 인간 IgG1의 Fc 영역을 증폭시켜 획득한 DNA 서열 또는 합성된 인간 Ig k-쇄의 불변 영역(UniProtKB/Swiss-Prot: P01834.1)을 추가되는 유전자 서열의 DNA 3' 쪽에 위치하도록 변형하였다. 추가되는 유전자 서열은 SfiI 제한효소를 통해 유전자 추가가 가능하도록 변형된 pCEP4 벡터(Invitrogen)에 클로닝하였다.
항체 클론은 각 클론의 scFv 코딩 DNA를 사용하여 단쇄 가변 절편-인간 IgG1 Fc 영역 융합 단백질(scFv-Fc)의 형태로 생산되었다. 이후, 상기 벡터를 폴리에틸렌이민(Polysciences)을 사용하여 HEK293F 세포(Invitrogen)에 형질주입시키고, 형질주입된 세포를 100 U/L 페니실린-스트렙토마이신을 포함하는 FreeStyleTM 293 발현 배지에 배양하였다. 과발현된 재조합 SFTS 바이러스 당단백질 융합 단백질을 단백질 A/ KappaSelect 칼럼 및 AKTA 퓨어 크로마토그래피 시스템을 사용하는 친화성 크로마토그래피(GE Healthcare)를 통해 정제하였다.
실시예 4: 항체 라이브러리 구성 및 바이오패닝 (biopanning)
Ficoll-Paque 용액(GE Healthcare)을 사용하여 SFTS로부터 회복된 환자의 말초 혈액 단핵 세포를 수집하였다. 전체 RNA를 TRIzol 시약(Invitrogen)을 사용하여 분리하고, 올리고(dT) 프라이밍(priming)과 함께 SuperScript III 첫번째 가닥 cDNA 합성 키트(Invitrogen)를 사용하여 전체 RNA로부터 cDNA를 합성하였다. 상기 cDNA를 사용하여, pComb3XSS 파지미드(phagemid) 벡터를 사용하여 인간 단쇄 가변 절편(scFv) 항체의 파지-디스플레이 라이브러리를 제작하였다. 그리고 [Barbas CF, Burton DR, Scott JK, Silverman GJ. Phage display: a laboratory manual: CSHL Press; 2004.]에 기술된 바와 같이 라이브러리로부터 scFv 클론을 선택하기 위해 4 라운드의 바이오패닝을 수행하였다. 바이오패닝의 각 라운드마다 재조합 SFTS 바이러스 당단백질 Gc 또는 Gn 인간 IgG1 Fc 영역 융합 단백질(Gc-Fc, Gn-Fc)의 3 μg을 제조자의 지시에 따라 5x106 개의 자기성 Dynabeads M-270 에폭시 비드(Invitrogen)를 코팅하는데 사용하였다. 그리고 단백질과 결합된 비드는 바이오패닝 절차에 사용하였다.
실시예 5: SFTS 바이러스에 대한 단쇄 가변 절편 항체의 스크리닝
SFTS 바이러스 당단백질에 결합하는 개별적인 항체 클론을 선택하기 위하여, 바이오패닝의 마지막 라운드로부터 파지 클론을 선택하였고, 파지 효소 면역분석법을 위해 scFv-디스플레이 파지를 제조하였다. 마이크로타이터 플레이트(Corning)를 밤새 4℃에서 웰당 100 ng의 재조합 Gc, Gn 인간 Ig k쇄 불변 영역 융합 단백질(Gc-Ck, Gn-Ck)로 코팅하였다. 상기 웰을 37℃에서 1시간 동안 100 μl의PBS 내 3%(w/v) BSA로 차단하고, 37℃에서 2시간 동안 파지를 포함하는 50 μl의 배양물 상청액으로 배양하고, 150 μl의PBS 내0.05%(v/v) Tween20로 세번 세척하였다. 이후, 차단 버퍼(1:5000)에 희석된 50 ml의 호스래디쉬 퍼옥시다제(HRP)-결합된 항-M13 항체(GE Healthcare)를 각 웰에 첨가하였고, 이후 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 150 μl의 0.05% PBST로 세번 세척한 이후, 50 μl의 2,2-아지노-bis-3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산(ABTS) 기질 용액(Pierce)를 각 웰에 첨가하고 실온에서 30분 동안 배양하였다. 이후, 각 웰의 흡광도를 마이크로플레이트 리더(Labsystems)를 사용하여 405 nm에서 측정하였다.
실시예 6: 중화 분석
SFTS 바이러스 특이적 scFv-Fc 융합 항체(100μl/ml)를 계열 희석하여 0.01 μl/ml까지 10배씩 감소시켰다. 각 농도의 scFvs를 100 TCID50 SFTS 바이러스(균주 KF358691)의 동일한 부피로 혼합하고 1시간 동안 37℃에서 배양하였다. 이후 상기 바이러스-항체 혼합물을 8-웰 공초점 현미경 챔버 내 Vero 세포의 단일층으로 옮기고 1시간 동안 37℃로 배양하였다. 바이러스-항체 혼합물을 제거한 이후, 샘플을 5% 이산화탄소 환경 내 37℃에서 2% FBS 및 항생제가 포함된 RPMI-1640 배지로 배양하였다. 8-웰 공초점 현미경 챔버 내 Vero 세포는 면역형광 분석(IFA)를 위해 사용되었다. 모든 실험은 세번 수행되었고 상대적인 중화 효과는 양성 대조군으로 MAb 4-5 [Xiling Guo et al. A human antibody neutralizing SFTS virus, an emerging hemorrhagic fever virus, 2013. Clin. Vaccine Immunol. 2013;20(9):1426-32).] 및 음성 대조군으로 항-뉴캐슬병 바이러스(NDV) 항체와 비교하여 각각 측정하였다.
실시예 7: 면역형광 분석(IFA) 및 형광 강도 측정
상대적인 중화 효과는 면역형광 분석(IFA)을 사용하여 측정하였다. Ab10, MAb 4-5(양성 대조군), 항-NDV(음성 대조군)가 있거나 없는 바이러스-항체 혼합물로 처리되거나 처리되지 않은 세포를 2일 동안 배양하였다. 상기 세포를 실온에서 1시간 동안 인산염-버퍼 식염수(PBS)에서 4% 파라포름알데히드로 고정시켰다. 슬라이드를 1% 소혈청 알부민(BSA) 내 0.1% 트리톤 X-100으로 차단 및 투과시킨 후, 밤새 4℃로 항-SFTS 바이러스 당단백질 Gn 클론 Ab6 항체(5μl/ml)와 함께 배양하였다. 세포를 세척하고 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC)-결합된 항-인간 IgG(Pierce)로 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 4',6-디아미디노-2-페닐인돌 디하이드로클로라이드(DAPI)는 핵을 염색하는데 사용하였다. 샘플을 공초점 현미경(Leica, Buffalo Grove, IL, USA)으로 실험하였다. 형광 신호 세기는 컴퓨터 보조 Leica application suite advanced fluorescence (LAS AF)를 사용하여 측정하였다. 현미경 사진은 x10/0.3 렌즈를 사용하여 각 슬라이드의 5개 영역에서 찍었으며, 분석을 위해 3개의 중간 값을 사용했다. 405 nm 청색 다이오드 레이저로 DAPI 신호를 설정하고 아르곤 이온 레이저로 Alexa 488을 조정했다.
실시예 8: SFTS 바이러스에 대한 scFv 항체의 생성
인간 scFv 라이브러리를 재조합 SFTS 바이러스 당단백질에 대해 바이오패닝하였다. 4 라운드의 패닝 이후, 항체 클론을 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA)을 통해 스크리닝 하였다. 10개 클론(Gc에 대해 Ab1 내지 5 및 Gn에 대해 Ab6 내지 10)이 ELISA를 통해 SFTS 바이러스를 인식하는 것으로 나타났다. 상기 ELISA 분석 결과를 도 2에 나타내었으며, 각 항체 클론의 아미노산 서열을 도 1에 나타내었다.
실시예 9: SFTS 바이러스에 대한 항체의 중화 활성
SFTS 바이러스에 대해 정제된 scFv-hFc 항체의 중화 활성은 Vero 세포에서 실험하였다. 실험된 10개의 클론(Ab1 내지 Ab10) 가운데, Ab10은 가장 강력한 중화 활성을 보였다. Ab10 scFv-hFc 항체(100 μl/ml)를 0.01 μl/ml로 10배씩 희석하고, 100 TCID50 SFTS 바이러스(KF358691 균주)에 대해 적정하였다. SFTSV 감염의 면역형광분석 결과 및 형광강도 측정 결과를 도 3에 나타내었다.
면역형광 분석(IFA)에서, Ab10(100 μl/ml)로 처리된 세포는 가장 적은 바이러스 감염을 보였으며 중화 활성은 투여량 의존적이었다. 즉, 처리되는 MAb 10의 양이 많을수록 SFTS 바이러스에 감염된 세포의 수가 적었다. MAb 4-5(양성 대조군)에 비해, Ab10은 현저하게 높은 중화 활성을 보였다. 음성 대조군 항체는 중화 활성을 전혀 보이지 않았다.

Claims (19)

  1. 중증열성혈소판감소증후군 바이러스(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus)의 외막 당단백질 Gc 또는 Gn에 특이적으로 결합하는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 21, 22, 23, 24 및 25로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1),
    서열번호 41, 42, 43, 44 및 45로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2),
    서열번호 61, 62, 63, 64 및 65로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3),
    서열번호 26, 27, 28, 29 및 30으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1),
    서열번호 46, 47, 48, 49 및 50으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역2(HCDR2), 및
    서열번호 66, 67, 68, 69 및 70으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역3(HCDR3)을 포함하며,
    SFTSV의 외막 당단백질 Gc에 특이적으로 결합하는 항체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및
    서열번호 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며,
    SFTSV의 외막 당단백질 Gc에 특이적으로 결합하는 항체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열에 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄, 및
    서열번호 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열에 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며,
    SFTSV의 외막 당단백질 Gc에 특이적으로 결합하는 항체.
  5. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 101, 102, 103, 104 및 105로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역1(LCDR1),
    서열번호 121, 122, 123, 124 및 125로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역2(LCDR2),
    서열번호 141, 142, 143, 144 및 145로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정영역3(LCDR3),
    서열번호 106, 107, 108, 109 및 110으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역1(HCDR1),
    서열번호 126, 127, 128, 129 및 130으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역2(HCDR2), 및
    서열번호 146, 147, 148, 149 및 150으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정영역3(HCDR3)을 포함하며,
    SFTSV의 외막 당단백질 Gn에 특이적으로 결합하는 항체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 81, 82, 83, 84 및 85로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 및
    서열번호 86, 87, 88, 89 및 90으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며,
    SFTSV의 외막 당단백질 Gn에 특이적으로 결합하는 항체.
  7. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 81, 82, 83, 84 및 85로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열에 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄, 및
    서열번호 86, 87, 88, 89 및 90으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열에 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며,
    SFTSV의 외막 당단백질 Gn에 특이적으로 결합하는 항체.
  8. 서열번호 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열에 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열, 및
    서열번호 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열에 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산.
  9. 서열번호 81, 82, 83, 84 및 85로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열에 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열, 및
    서열번호 86, 87, 88, 89 및 90으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 아미노산 서열에 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산.
  10. 제8항의 핵산, 제9항의 핵산, 또는 이들 모두를 포함하는 벡터.
  11. 제10항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  12. 제1항의 항체를 포함하는 SFTSV 진단 또는 검출용 조성물.
  13. 제1항의 항체를 포함하는 SFTSV 진단 또는 검출용 키트.
  14. 제1항의 항체를 이용하여 SFTSV를 진단 또는 검출하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 방법은 제1항의 항체 및 자석 비드가 결합된 복합체를 이용하는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제1항의 항체를 포함하는 약학적 조성물.
  17. 제1항의 항체를 이용하여 SFTS를 예방 또는 치료하는 방법.
  18. SFTSV의 진단, 예방 또는 치료하기 위한 제1항의 항체의 용도.
  19. SFTSV의 진단용 조성물의 제조를 위한 제1항의 항체의 용도.
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