WO2017193186A1 - Composições cosméticas para reparação cutânea - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-e a composições cosméticas para reparação cutânea compreendendo pelo menos um óleo selecionado de Bertholletia excelsa ou Fevillea trilobata e excipientes cosmeticamente aceitáveis. A presente invenção refere-se ainda ao uso de tais composições no tratamento cosmético de regeneração cutânea e/ou cicatrização, em tratamento anti-idade, tratamento de pele sensibilizada pós-procedimentos estéticos e/ou pele ressecada e na modulação de processos celulares envolvidos na reparação cutânea, associados aos mecanismos de regeneração e/ou cicatrização da pele.

Description

COMPOSIÇÕES COSMÉTICAS PARA REPARAÇÃO CUTÂNEA

CAMPO DA INVENÇÃO

[1 ] A presente invenção trata de composições cosméticas reparadoras da pele compreendendo pelo menos um óleo selecionado de Bertholletia excelsa ou Fevillea trilobata e excipientes cosmeticamente aceitáveis, bem como seu uso e métodos para regeneração e cicatrização da pele, propiciando tratamento anti- idade, tratamento de pele sensibilizada pós-procedimentos estéticos e pele ressecada, pela modulação de processos celulares envolvidos nos mecanismos de regeneração e cicatrização da pele. Também contempla um método in vitro para avaliação de reparação cutânea.

ARTE ANTERIOR

[2] A pele tem a incrível habilidade de constantemente se regenerar. Em média, a cada 28 dias uma célula caminha desde a junção dermo-epidérmica até o extrato córneo, desprendendo-se então como uma célula morta.

[3] Essa capacidade de regeneração é substancialmente comprometida por diversos fatores ambientais e fisiológicos, por exemplo, perda de hidratação, ação de agentes externos como sol, poluentes, umidade do ar, doenças, tabagismo, danos diretos na superfície da camada córnea (como queimadura, escoriações, rompimento, etc).

[4] O comprometimento da capacidade de regeneração cutânea também pode ser asseverado pelo envelhecimento, pois a velocidade do ciclo de morte e regeneração celular diminui.

[5] Em torno dos 20 anos, a pele começa a produzir menos hidratação, perder sua elasticidade e as primeiras linhas finas tornam-se visíveis, particularmente aquelas provocadas por raios UV.

[6] Por volta dos 30 anos, a capacidade de regeneração da pele começa a diminuir, já que as alterações no tecido conjuntivo reduzem a resistência e elasticidade da pele e a sua capacidade para reter a água. Nessa fase, linhas finas e enrugadas tornam-se mais proeminentes e rugas começam a se desenvolver. [7] Aos 40 anos, a divisão celular e o fluxo sanguíneo da pele diminuem significativamente e a pele torna-se mais seca, surgindo rugas no contorno dos olhos e lábios e testa.

[8] Dos 50 anos em diante, a pele torna-se ainda mais sensível, frágil e menos flexível, particularmente devido a mudanças hormonais. As rugas e as manchas de pigmentação tornam-se profundas e mais intensas.

[9] Por esta razão, produtos para reparação cutânea, nas diversas fases da pele, têm se tornado cada vez mais importante.

[10] A reparação cutânea processa-se de duas formas: pela regeneração e pela cicatrização. Esses são processos enquadrados como de natureza inflamatória. Quando se inicia um processo inflamatório, que é sempre um mecanismo de defesa contra um agente agressor, simultaneamente, também se dá início aos mecanismos desencadeadores de cicatrização e regeneração.

[1 1 ] A regeneração pode ser definida como o processo pelo qual as células que morreram, devido à agressão, são substituídas pelas células do parênquima do mesmo órgão. E a cicatrização ocorre através de um processo complexo multi-estágios altamente organizado e dinâmico envolvendo vários tipos celulares importantes na restauração e manutenção da integridade do tecido.

[12] O processo de reparação cutânea (regeneração ou cicatrização) pode acontecer mesmo na ausência de lesões visíveis a olho nu, por exemplo, por microlesões que ocorrem após exposição ambiental (UV, clima, ressecamento, envelhecimento). Ele inclui as etapas de sinalização inicial (que pode ser verificada por dosagem de FGF-2), inflamação (que pode ser verificada por dosagem de citocinas inflamatórias (IL-1 B, IL-6, IL-8JL-10, IL-12 p70), migração e proliferação celular (que pode ser verificada por ensaios de proliferação celular) e remodelamento e resolução (que pode ser verificada por dosagem de MMP-13 ou atividade enzimática de colagenase e elastase).

[13] Alguns produtos têm sido propostos, como madecassoside, alantoína, papaína ou óleo de lucuma. Contudo, persiste a necessidade de composições cosméticas, particularmente para aplicação tópica, que apresentem comprovado efeito na reparação cutânea.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[14] Em um primeiro aspecto, a presente invenção trata de composições cosméticas para reparação cutânea compreendendo pelo menos um óleo selecionado de Bertholletia excelsa (conhecida como castanha do Brasil) ou Fevillea trilobata (conhecida como nhandiroba) e excipientes cosmeticamente aceitáveis.

[15] As composições cosméticas para reparação cutânea de acordo com a presente invenção podem ser disponibilizadas em diferentes formas cosméticas, incluindo sem qualquer limitação, emulsões, géis, pós, bastões, entre outros, incluído veículos/excipientes cosmeticamente apropriados conhecidos no estado da técnica para a forma cosmética escolhida.

[16] Referidas composições propicia tratamento anti-idade (anti- aging), incluindo a redução de rugas e a promoção da capacidade regenerativa da pele, promoção da firmeza e da elasticidade, particularmente reduzidas com a idade, bem como tratamento de pele sensibilizada pós-procedimentos estéticos, por exemplo, por depilação, laser, peeling ou dermoabrasão, tratamento de pele ressecada (controle de oleosidade).

[17] As composições cosméticas para reparação cutânea de acordo com a presente invenção são apropriadas tanto para uso facial quanto corporal.

[18] As composições cosméticas de acordo com a presente invenção são comprovadamente eficientes na modulação de processos celulares envolvidos na reparação cutânea, particularmente nos mecanismos de regeneração e cicatrização da pele, incluindo FGF-2 que sinaliza o início do processo de cicatrização, citocinas inflamatórias IL-1 B, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, migração e proliferação celular associada à construção da barreira cutânea e a atividade de elastase (MMP-12) que degrada elastina, MMP-13, glicosaminoglicanos e elastina.

[19] Assim, em outro aspecto a presente invenção também contempla o uso das composições cosméticas para reparação cutânea de acordo com a presente invenção e métodos relacionados ao tratamento cosmético de regeneração cutânea e cicatrização, particularmente pela modulação de processos celulares envolvidos na reparação cutânea, associados aos mecanismos de regeneração e cicatrização da pele, incluindo FGF, IL-1 B, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, migração e proliferação celular, atividades de elastase, MMP-13, glicosaminoglicanos e elastina.

[20] Em outro aspecto, a presente invenção também contempla um método in vitro para avaliação de reparação cutânea, apropriado para estudo de variados ativos, que compreende as seguintes etapas:

- Etapa 1 - Sinalização inicial: quantificação do fator de crescimento FGF-2 pela técnica de citometria de fluxo;

- Etapa 2 - Inflamação: quantificação de citocinas inflamatórias (IL-1 B, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 p70) pela técnica de citometria de fluxo;

- Etapa 3 - Migração e Proliferação Celular:

- proliferação celular pelo método de detecção baseado em Neutral

Red;

- migração celular pelo método ECIS e scratch;

- Etapa 4 - Remodelamento e Resolução

- quantificação da metaloproteinase de matriz MMP-13 pela técnica de Elisa;

- determinação da atividade enzimática da colagenase/gelatinase (MMP-1 e MMP-3) e elastase (MMP-12) pelo ensaio de inibição enzimática.

[21 ] Os exemplos a seguir, sem impor qualquer limitação, ilustram a presente invenção.

EXEMPLOS

[22] Todos os testes foram realizados em triplicata, com pelo menos duas repetições de experimentos, utilização de grupos controles negativos (sem estimulação com ativos) e grupos controles positivos (com estimulação de moléculas moduladoras do marcador a ser avaliado). [23] Além disso, todos os testes foram realizados considerando-se uma condição basal apenas com o estímulo do ativo teste (óleo de Bertholletia excelsa e óleo de Fevillea trilobata) ou padrão (madecassoside, alantoína, papaína ou óleo de lucuma) e uma condição estimulada com moléculas que sabidamente são liberadas durante cada uma das etapas do processo de cicatrização (como NGF e IL-1 -beta) em conjunto com o estímulo do ativo teste (óleo de Bertholletia excelsa e óleo de Fevillea trilobata) ou padrão (madecassoside, alantoína, papaína ou óleo de lucuma).

[24] O processo de regeneração tecidual (cicatrização) pode ser dividido em quatro etapas sequenciais que apresentam como objetivo final a restauração da arquitetura e função celulares. Dessa forma, para caracterizar esse processo, foram definidos alguns eventos-chave de cada uma dessas etapas para a sua respectiva mensuração in vitro.

[25] Assim, este projeto contemplou realizar os seguintes ensaios in vitro:

- Etapa 1 - Sinalização inicial: quantificação do fator de crescimento FGF2 pela técnica de citometria de fluxo;

- Etapa 2 - Inflamação: quantificação de citocinas inflamatórias (IL-1 B, IL-6, IL-8JL-10, IL-12 p70) pela técnica de citometria de fluxo;

- Etapa 3 - Migração e Proliferação Celular:

- proliferação celular pelo método de detecção baseado em Neutral

Red;

- migração celular pelo método ECIS e scratch;

- Etapa 4 - Remodelamento e Resolução

- quantificação da metaloproteinase de matriz MMP-13 pela técnica de Elisa;

- determinação da atividade enzimática da colagenase/gelatinase (MMP-1 e MMP-3) e elastase (MMP-12) pelo ensaio de inibição enzimática.

Quantificação de FGF-2 (Fibroblast Growth Factor)

[26] Os FGFs compreendem uma família de 22 polipeptídeos que regulam proliferação, diferenciação, migração e sobrevivência de diferentes tipos celulares. Suas funções são exercidas pela ativação de quatro receptores transmembrana tirosina quinases chamados de FGFR1 -4.

[27] Estudos prévios revelaram importantes papéis dos FGFs no desenvolvimento, homeostasia e reparo da pele. Alguns deles são expressos neste tecido e muitos são super-expressos após uma lesão. Dessa forma, por promoverem a estimulação da proliferação de fibroblastos e angiogênese, são amplamente estudados quanto ao seu potencial uso para modular a cicatrização. Além disso, entre todos os FGFs, estudos envolvendo cicatrização e regeneração da pele tem sido conduzidos primariamente com o FGF2, também conhecido como FGF básico (bFGF). Esta molécula é um potente mitógeno para células de origem mesodérmica e neuroectodérmica incluindo fibroblastos e células endoteliais.

[28] Neste ensaio, evidenciou-se um aumento significativo (p<0,0001 ) de até 60 vezes para o tratamento com óleo de Bertholletia excelsa e de até 152 vezes para o tratamento com óleo de Fevillea trilobata em relação ao controle negativo. Esses aumentos foram semelhantes aos observados para os padrões madecassoside (aumento de até 1 15 vezes) e óleo de lucuma (aumento de até 134 vezes).

Quantificação de citocinas inflamatórias

[29] Citocinas são pequenas proteínas secretadas que afetam o comportamento de células imunes e também de outras células. Estas incluem as interleucinas, linfocinas e algumas moléculas de sinalização relacionadas tais como o TNF-alfa {tumor necrosis fator-alpha) e interferons. Quimiocinas (ou citocinas quimiotáticas) compreendem um subgrupo de citocinas que estimulam a quimiotaxia e extravasamento de leucócitos para locais de lesão.

[30] As citocinas pró-inflamatórias, incluindo a IL-1 alfa e IL-1 beta,

IL-6 e TNF-alfa, possuem um importante papel no reparo de lesões porque induzem respostas biológicas no sítio da lesão, incluindo estimulação da proliferação de queratinócitos e fibroblastos, síntese e degradação de proteínas da MEC, quimiotaxia de fibroblastos e regulação da resposta imune. No entanto, deve-se ressaltar que a produção dessas citocinas deve ocorrer em níveis baixos e deve ser combinada com a produção de citocinas anti-inflamatórias como IL-10, a principal citocina responsável pela resolução do processo inflamatório no sítio da lesão. Corroborando essa informação, todos os aumentos observados para as citocinas pró-inflamatórias neste estudo representaram níveis baixos, mas significativos, e foram combinados com a observação do aumento da citocina anti-inflamatória IL-10.

[31 ] Corroborando esse contexto, em resumo, foi possível detectar modulação significativa nas citocinas pró-inflamatórias IL-1 beta, IL-6 e IL-8 e nas citocinas anti-inflamatorias IL-10 e IL-12. Para os tratamentos com óleo de Fevillea trilobata foi observado aumento de 2 vezes (p<0,001 ), 2,5 vezes (p<0,01 ) e 2,7 vezes (p< 0,0001 ), respectivamente, em relação ao controle negativo e para os tratamentos com óleo de lucuma foi observado aumento de 3,5 vezes (p<0,0001 ), 3 vezes (p<0,01 ) e 4,2 vezes (p< 0,0001 ), respectivamente, em relação ao controle negativo. Para o padrão madecassoside, foi detectado aumento de 2 vezes (p<0,05) nos níveis de IL-8 apenas, em relação ao controle negativo. Todos esses tratamentos também promoveram aumentos combinados nos níveis da citocina anti-inflamatória IL-10: óleo de Fevillea trilobata e óleo de Bertholletia excelsa (aumento de até 3,3 vezes em relação ao controle negativo, p< 0,0001 ); madecassoside (aumento de 2,3 vezes em relação ao controle negativo, p< 0,0001 ) e óleo de lucuma (aumento de 3,3 vezes em relação ao controle negativo, p< 0,0001 ).

Proliferação celular

[32] Neste ensaio, evidenciou-se aumentos significativos na proliferação celular de até 2 vezes para os tratamentos com óleo de Bertholletia excelsa (p<0,001 ) e de 80 a 100% para os tratamentos com óleo de Fevillea trilobata (p<0,001 ), em relação ao controle não tratado, após 48 horas de tratamento. Os padrões madecassoside, alantoína, papaína e óleo de lucuma não apresentaram aumentos significativos na proliferação celular.

Migração celular

[33] Neste ensaio, foi possível realizar o cálculo da taxa de migração celular e do tempo de migração em cada um dos tratamentos avaliados. Quanto a taxa de migração celular, pode-se constatar um aumento significativo de 38% para o tratamento com óleo de Bertholletia excelsa em relação ao controle negativo (p<0,001 ). O tratamento com óleo de Fevillea trilobata, entretanto, apresentou uma leve queda na taxa de migração (p<0,05) em relação ao controle negativo. Os padrões não apresentaram diferenças significativas neste parâmetro.

[34] Quanto ao tempo de migração após os tratamentos, apenas o óleo de Bertholletia excelsa apresentou potencial de diminuição (p<0,01 ) na função avaliada.

Atividade de Colaaenase (MMP-1 Coláaeno IVGelatinase (MMP-2 Coláaeno IV), Elastase (MMP-12) e Quantificação de MMP-13 (Colaaenase III)

[35] As proteínas que compõem a matriz extracelular (MEC) compreendem colágeno, glicoproteínas adesivas (fibulina, fibrilina, elastina), proteoglicanos, entre outras. Através de domínios estruturais, essas proteínas promovem atividades biológicas, modulam a atividade de fatores de crescimento e citocinas e compreendem sítios de reconhecimento para a interação com receptores de membranas celulares específicos. Estas proteínas formam um "scaffold" estrutural em todos os tecidos, interagindo umas com as outras na construção de grandes redes estruturais. A síntese, deposição e remodelamento dessas proteínas são essenciais para a restauração de tecidos danificados durante a cicatrização.

[36] O colágeno representa a mais abundante proteína de nosso corpo, sendo que há descrição na literatura de ao menos 19 tipos diferentes de colágeno. Na pele, o colágeno é predominantemente do tipo I e III ocorrendo numa proporção de 4:1 e são responsáveis por manter a estrutura, força e integridade da pele. O colágeno tipo IV é um componente das membranas basais endoteliais e epidermais.

[37] Durante as fases iniciais da cicatrização, o colágeno III predomina, o qual é substituído por colágeno I nas fases finais. Durante a fase final, MMP-1 1 e MMP-13 são liberadas pelas células endoteliais e fibroblastos, o que permite que essas células migrem, enquanto proteases de macrófagos e neutrófilos removem os componentes da matriz degradada promovendo o remodelamento do tecido reparado.

[38] A atividade de colagenase (MMP-1 )/gelatinase (MMP-2) não foi alterada em nenhum dos tratamentos avaliados; entretanto, a atividade de elastase (MMP-12) apresentou-se diminuída nos tratamentos com óleo de Fevillea trilobata (p<0,0001 ) e Bertholletia excelsa (p<0,05), assim como no padrão óleo de lucuma (p<0,0001 ), demonstrando o potencial desses ativos na redução da degradação da proteína do sistema elástico elastina.

[39] Além disso, aumentos de três vezes na quantificação de MMP-

13 foram observados nos tratamentos com óleo de Bertholletia excelsa (p<0,01 ), em relação ao controle não tratado, da mesma forma que os padrões madecassoside, alantoína, papaína e óleo de lucuma (p<0,01 ).

[40] Após a realização destes estudos, pelo conjunto de testes realizados, foi possível identificar que os óleos de Bertholletia excelsa e/ou Fevillea trilobata possuem atividade biológica relacionada à regeneração/reparação da pele (tabela 1 ), de forma semelhante à observada para alguns padrões como madecassoside. Comparativamente, o óleo de Bertholletia excelsa ainda apresentou um potencial para modulação desta atividade maior do que o óleo de Fevillea trilobata. Dessa forma, estes óleos podem ser associados a produtos indicados para pele sensibilizada após procedimentos estéticos, peles danificadas (com microlesões), peles ressecadas ou, ainda, anti-envelhecimento, uma vez que há gradativa redução da capacidade regenerativa da pele com o avançar da idade.

[41 ] Além do novo benefício identificado para os óleos de Bertholletia excelsa e Fevillea trilobata, disponibilizou-se uma metodologia in vitro para avaliação deste benefício apropriada para outros ativos de interesse.

[42] Além disso, a combinação de resultados obtidos para alguns ensaios neste estudo, permitiram identificar que os óleos de Bertholletia excelsa e Fevillea trilobata também possuem outros benefícios anti-envelhecimento da pele (Tabela 2). Comparativamente, o óleo de Fevillea trílobata apresentou um potencial maior para este benefício do que o óleo de Bertholletia excelsa.

Tabela 1 . Combinação de ensaios para o benefício de regeneração/reparação da pele

Legenda: - (resultados não significativo) Tabela 2. Combinação de ensaios para o benefício de anti-envelhecimento da pele e indica ão das concentra ões ue a resentaram resultados si nificativos

Legenda: NA (não avaliado)

[43] Esses resultados mostram que as composições de acordo com a presente invenção são comprovadamente {in vitro) eficientes na modulação de processos celulares envolvidos na reparação cutânea, particularmente nos mecanismos de regeneração e cicatrização da pele, incluindo FGF-2, citocinas inflamatórias IL-1 B, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, migração e proliferação celular e a atividade de elastase (MMP-12), MMP-13, glicosaminoglicanos e elastina, propiciando efeito anti-idade, incluindo redução de rugas e promoção da capacidade regenerativa da pele, da firmeza e da elasticidade, bem como tratamento de pele sensibilizada pós- procedimentos estéticos, e de pele ressecada ou danificada.

[44] O homem da técnica saberá prontamente avaliar, por meio dos ensinamentos contidos no texto e nos exemplos apresentados, vantagens da invenção e propor variações e alternativas equivalentes de realização, sem fugir ao escopo da invenção, conforme definido nas reivindicações anexas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1 . COMPOSIÇÕES COSMÉTICAS PARA REPARAÇÃO CUTÂNEA caracterizadas pelo fato de que compreende pelo menos um óleo selecionado de Bertholletia excelsa ou Fevillea trilobata e excipientes cosmeticamente aceitáveis.

2. Composições, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizadas pelo fato de que são utilizadas no tratamento de regeneração cutânea e/ou cicatrização.

3. Composições, de acordo com a reivindicação 2, caracterizadas pelo fato de que são utilizadas no tratamento anti-idade, tratamento de pele sensibilizada pós- procedimentos estéticos e/ou pele ressecada.

4. Composições, de acordo com a reivindicação 1 , caracterizadas pelo fato de que atuam na modulação de processos celulares envolvidos na reparação cutânea, associados aos mecanismos de regeneração e/ou cicatrização da pele, incluindo FGF- 2, IL-1 B, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, migração e proliferação celular, atividades de elastase, MMP-13, glicosaminoglicanos e/ou elastina.

5. USO DAS COMPOSIÇÕES, de acordo com uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de ser no tratamento cosmético de regeneração cutânea e/ou cicatrização.

6. USO DAS COMPOSIÇÕES, de acordo com uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de ser no tratamento anti-idade, tratamento de pele sensibilizada pós-procedimentos estéticos e/ou pele ressecada.

7. USO DAS COMPOSIÇÕES, de acordo com uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de ser na modulação de processos celulares envolvidos na reparação cutânea, associados aos mecanismos de regeneração e/ou cicatrização da pele, incluindo FGF-2, IL-1 B, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, migração e proliferação celular, atividades de elastase, MMP-13, glicosaminoglicanos e/ou elastina.

8. MÉTODO TRATAMENTO COSMÉTICO DE REGENERAÇÃO CUTÂNEA E CICATRIZAÇÃO caracterizado pelo fato de que consiste aplicar na pele, do corpo ou rosto, uma quantidade eficaz das composições cosméticas definidas em uma das reivindicações 1 a 4.

7. MÉTODO MODULAÇÃO DE PROCESSOS CELULARES ENVOLVIDOS NA REPARAÇÃO CUTÂNEA, associados aos mecanismos de regeneração e/ou cicatrização da pele FGF-2, IL-1 B, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, migração e proliferação celular, atividades de elastase, MMP-13, glicosaminoglicanos e/ou elastina caracterizado pelo fato de que consiste aplicar na pele, do corpo ou rosto, uma quantidade eficaz das composições cosméticas definidas em uma das reivindicações 1 a 3.

8. MÉTODO IN VITRO PARA AVALIAÇÃO DE REPARAÇÃO CUTÂNEA caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas:

- Etapa 1 - Sinalização inicial: quantificação do fator de crescimento FGF-2 pela técnica de citometria de fluxo;

- Etapa 2 - Inflamação: quantificação de citocinas inflamatórias (IL-1 B, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 p70) pela técnica de citometria de fluxo;

- Etapa 3 - Migração e Proliferação Celular:

- proliferação celular pelo método de detecção baseado em Neutral

Red;

- migração celular pelo método ECIS e scratch;

- Etapa 4 - Remodelamento e Resolução

- quantificação da metaloproteinase de matriz MMP-13 pela técnica de Elisa;

- determinação da atividade enzimática da colagenase/gelatinase (MMP-1 e MMP-3) e elastase (MMP-12) pelo ensaio de inibição enzimática.