WO2017204445A2 - Alk 단백질의 분해를 유도하는 약학적 조성물 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Alk 단백질의 분해를 유도하는 약학적 조성물 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to a method for preparing a drug for inducing degradation of an ALK protein and a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer incorporating the same as an active ingredient.
  • PROTAC Proteolysis Targeting Chimera
  • the technology is conducting research on the development of anticancer drugs using PROTAC substances by linking various types of linkers with inhibitors or binders that bind to specific proteins and ligands that bind E3 ubiquitin ligase.
  • Yale's team has produced polypeptides that bind to VHL (von Hippel-Lindau) E3 ubiquitin ligase for many years, and recently developed organic low-molecular substances through optimization of low-drug polypeptides, and combined them with ERRa inhibitors.
  • ERRa-PROTAC has been shown to significantly reduce ERRa protein in animal models.
  • anticancer target therapies act directly on targets that develop cancer, they have fewer side effects and superior therapeutic effects compared to existing cytotoxic therapies, but high inhibition of targets is required to inhibit signal transmission of targets. In order to show a therapeutic effect, a large amount of long-term administration is disadvantageous. In addition, resistance to the drug appears quickly, and drug resistance occurs within one year after administration, which lowers the effect of the drug. Thus, there is a continuing need for new target discovery and therapeutic development.
  • proteolytic inducers degrade the protein that causes the disease, resulting in low resistance to drugs, and high activity is not required because only enough protein can be decomposed if it can bind to the target protein. It is attracting attention as a technology that can be applied to an undruggable target.
  • anaplastic lymphoma kinase has been found in various cancer cell tumors of the human body and has been studied as a target for the treatment.
  • the carcinogenic process of anaplastic lymphoma kinase (ALK) is mainly in anaplastic large cell lymphoma. It is known to be due to the fusion gene of the observed ALK-NPM (Nucleophosmin, nucleophosmin).
  • ALK-NPM Nucleophosmin, nucleophosmin.
  • abnormally activated anaplastic lymphoma kinase induces cell proliferation, prevents apoptosis (apoptosis), which is one of the ways in which cells die, and prevents cell death and rearranges the cell skeleton. Deform the form.
  • anaplastic lymphoma kinase as described above is achieved by interaction with downstream molecules that are target substances of anaplastic lymphoma kinase (ALK).
  • Submolecules are substances that mediate intracellular signal transduction.
  • Anaplastic lymphoma kinase (ALK) is linked to other tyrosine kinases that are normal or cancer-generated to interact or activate several different pathways.
  • the anaplastic lymphoma kinase (ALK) gene inside the lung cancer cells is fused with EML4 (Echinoderm Microtubule-Associated Protein-Like 4) gene to produce EML4-ALK, an active tyrosine kinase.
  • EML4 Echinoderm Microtubule-Associated Protein-Like 4
  • anaplastic lymphoma kinase (ALK) genes include numerous non-cell lymphomas, systemic morning sickness, inflammatory myofibroblastic sarcoma, esophageal squamous cell carcinoma, non-small cell lung cancer, rhabdomyosarcoma, myofibroblastoma, breast cancer and melanoma cell lines.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • Pfizer has been developed as a selective inhibitor of cancer cell oncogenic mutations.
  • Crizotinib a small molecule tyrosine kinase inhibitor
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • Novartis' LDK-378 (ceritinib) compound has also been approved and clinical trials of a number of anaplastic lymphoma kinase (ALK) inhibitors are ongoing.
  • crizotinib develops drug resistance within one year of administration, and has been shown to have various mutations.
  • LDK378 inhibits the activity of some resistant proteins, but weakly inhibits the activity of some variant proteins, including G1202R.
  • the present inventors have developed a new ALK-PROTAC substance by linking ALK inhibitor LDK378 with VHL ligand or CRBN ligand (thalidomide) to develop a new ALK-PROTAC substance, resulting in the degradation of anaplastic lymphoma kinase (ALK) resulting in excellent anticancer effects.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • An object of the present invention is to provide a compound useful as an active ingredient of a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of anaplastic lymphoma kinase (ALK) -related diseases.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • Another object of the present invention is to provide a method for preparing the compound.
  • Still another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating anaplastic lymphoma kinase (ALK) related disease containing the compound as an active ingredient.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • Another subject of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer containing the compound as an active ingredient.
  • Another object of the present invention to provide a dietary supplement for the prevention or improvement of anaplastic lymphoma kinase (ALK) -related diseases containing the compound as an active ingredient.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • the present invention provides a compound represented by Formula 1, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • the linker may not be continuously connected to -O-;
  • A is or to be.
  • step 3 Reacting the compound represented by A-Linker-Y prepared in step 2 with the compound represented by Formula 2 to prepare a compound represented by Formula 1 (step 3); Provided are methods for preparing the compounds:
  • X and Y are Y, when X is -CO 2 -tBu, Y is -CO 2 H, and when X is Cl or Br, Y is I.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of anaplastic lymphoma kinase (ALK) -related diseases containing the compound represented by Formula 1, the optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. .
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer containing the compound represented by Formula 1, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving diseases related to anaplastic lymphoma kinase (ALK) containing the compound represented by Formula 1, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • the compound represented by the formula (1) according to the present invention can inhibit or degrade anaplastic lymphoma kinase (ALK), thereby having a useful effect in the prevention and treatment of anaplastic lymphoma kinase (ALK) related diseases such as cancer.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • Example 3 compound 3 times a day, 50 mg / kg, 14 days in total
  • SC3 mice transplanted with H3122 xenografts.
  • Step 1 tert -Butyl 4- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-ylamino) butyl carbamate
  • tert-butyl 2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -4-fluoroisoindolin-1,3-dione (20 mg, 0.072 mmol) was dissolved in dimethylformamide (0.5 mL), tert-butyl (4-aminobutyl) carbamate (14 uL, 0.072 mmol) and diisopropylethylamine (21 uL, 0.144 mmol) were mixed and then heated at 90 ° C. for 12 hours. After the reaction was completed, the temperature was lowered to room temperature, diluted with ethyl acetate and washed with water and brine. The residue of the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated and purified to give the desired compound (51%, green gel).
  • step 2 4 -(4- Aminobutylamino ) -2- (2,6- Dioxopiperidine -3 days) Isoindolin Preparation of -1,3-dione Hydrochloride
  • step 1 The compound prepared in step 1 (81 mg, 0.182 mmol) was dissolved in dichloromethane (1 mL), 1,4-dioxane solution (1 mL) containing 4N hydrochloric acid was added, followed by stirring at room temperature. . After the reaction was completed, the reaction solution was concentrated under reduced pressure to obtain the target compound, which was used in the next step without further purification.
  • step 3 5 -(4- (4- (5- Chloro -4- (2- ( Isopropylsulfonyl ) Phenylamino Preparation of Pyrimidin-2-ylamino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -5-oxopentanoic acid
  • reaction mixture was diluted with dichloromethane and washed with water, saturated aqueous ammonium chloride solution and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and then concentrated under reduced pressure to obtain a target compound (0.5 g, white solid).
  • Step 4 5- (4- (4- (5-chloro-4- (2- (isopropylsulfonyl) phenylamino) pyrimidin-2-ylamino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) pi Ferridin-1-yl) -N- (4- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-ylamino) butyl) -5- Preparation of Oxopentanamide
  • step 3 The compound prepared in step 3 (20 mg, 0.031 mmol) was dissolved in dichloromethane (1 mL), and the compound prepared in step 2 (11.8 mg, 0.031 mmol) and benzotriazol-1-yloxy) tri Pyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (16.1 mg, 0.031 mmol) and triethylamine (11 uL, 0.078 mmol) were added and then stirred at room temperature. Upon completion of the reaction, the reaction was diluted with dichloromethane and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound.
  • Step 1 tert -Butyl 2- (2- (2-(((R) -1-((2R, 4R) -4-hydroxy-2- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzylcarbamoyl) Preparation of Pyrrolidin-1-yl) -3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-ylamino) -2-oxoethoxy) ethoxy) ethylcarbamate
  • Step 2 (2S, 4R) -1-((R) -2- (2- (2- (2-aminoethoxy) ethoxy) acetamido) -3,3-dimethylbutanyl) -4- Preparation of hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide hydrochloride
  • step 1 The compound prepared in step 1 (0.54 g, 0.799 mmol) was dissolved in dichloromethane (5 mL), 1,4-dioxane (5 mL) containing 4N hydrochloric acid was added, followed by stirring at room temperature. The reaction was terminated and the reaction was concentrated under reduced pressure to give the title compound.
  • Step 3 (2S, 4R) -1-((R) -2- (tert-butyl) -17- (4- (4- (5-chloro-4- (2- (isopropylsulfonyl) phenylamino ) Pyrimidin-2-ylamino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -4,13,17-trioxo-6,9-dioxa-3,12-dia Preparation of zaheptadecane-1-oyl) -4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • the reaction was diluted with dichloromethane and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound (12 mg, white solid).
  • the reaction was diluted with dichloromethane and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound (14 mg, white solid).
  • step 1 5 - Brofo -N- (2- (2,6- Goofiferidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) pentanamide
  • Step 2 5- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2
  • 4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2 Preparation of -methylphenyl) piperidin-1-yl) -N- (2- (2,6-ioxopyrepidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) pentanamide
  • step 1 5 -((2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) amino) -5-oxopentanoic acid
  • Step 2 5- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2 -Methylphenyl) piperidin-1-yl) -N- (2- (2,6-ioxopyrepidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) -5-oxopentane Preparation of Amides
  • step 1 2 -(2-((2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) amino) -2-oxoethoxy) acetic acid
  • Step 2 2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopro Foxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -2-oxoethoxy) -N- (2- (2,6-dioxopyrepidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) acetamide
  • Step 1 ( 2S, 4R ) -1-((R) -2- (5- Bromopentanamido ) -3,3- Dimethyl Butane Oil Preparation of 4--4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 2 (2R, 4R) -1-((R) -2- (5- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyri) Midin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) pentaneamido) -3,3-dimethylbutanoyl) -4-hydroxy-N- (4 Preparation of-(4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 1 tert -Butyl 7-((2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of 4-yl) amino) -7-oxoheptanoate
  • the mixture was diluted with ethyl acetate and washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to prepare the target compound (0.174 g).
  • step 2 7 -((2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) amino) -7-oxoheptanoic acid
  • tert-butyl 7-((2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) amino) -7-oxoheptanoate (0.174 g) was dissolved in 20% trifluoroacetic acid / dichloromethane solution (5 mL) and stirred at room temperature for 1 hour. The reaction was concentrated under reduced pressure to give the title compound, which was used in the next reaction without purification.
  • Step 3 7- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2 -Methylphenyl) piperidin-1-yl) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-diolisoisoindolin-4-yl) -7-oxoheptane Preparation of Amides
  • Step 1 ( 2S, 4R ) -1-((R) -2- (2- (2- Chloroethoxy ) Acetamido ) -3,3- Dimethyl Butane Oil Preparation of) -4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • step 2 N -(2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoindolin -4-yl) -2- (4- Iodobutoxy Preparation of Acetamide
  • Step 3 (2S, 4R) -1-((R) -2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) phenyl) Amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) acetamido) -3,3-dimethylbutanyl) -4-hydrate
  • the reaction was concentrated under reduced pressure to remove N, N-dimethylformamide, diluted with ethyl acetate, washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and distilled under reduced pressure, and then purified to obtain the target compound.
  • Step 1 ( 2S, 4R ) -1-((R) -2- (2- (2- Chlorobutoxy ) Acetamido ) -3,3- Dimethyl Butane Oil Preparation of) -4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 2 ( 2R, 4R ) -4-hydroxy-1-((R) -2- (2- (4- Iodobutoxy ) Acetamido Preparation of) -3,3-dimethylbutanoyl) -N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 3 (2S, 4R) -1-((R) -2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) phenyl) Amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) acetamido) -3,3-dimethylbutanyl) -4-hydrate
  • the reaction was concentrated under reduced pressure to remove N, N-dimethylformamide, diluted in ethyl acetate, washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and distilled under reduced pressure, and then purified to obtain a target compound (10 mg, ivory gel).
  • Step 1 tert -Butyl 7-(((R) -1-((2R, 4R) -4-hydroxy-2-((4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) carbamoyl) pyrrolidine- Preparation of 1-yl) -3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl) amino) -7-oxoheptanoate
  • step 2 7 -(((R) -1-(( 2R, 4R ) -4-hydroxy-2-((4- (4- Methylthiazole -5 days) benzyl ) Cabamoil Preparation of pyrrolidin-1-yl) -3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl) amino) -7-oxoheptanoic acid
  • Step 3 (2S, 4R) -1-((R) -2- (7- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyri) Midin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -7-oxoheptanamido) -3,3-dimethylbutanoyl) -4-hydroxy- Preparation of N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • the reaction was diluted with dichloromethane and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound (20 mg, white solid).
  • Step 1 N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) -2- (2- (2- (2-iodoethoxy) ethoxy) ethoxy) acetamide
  • Step 2 2- (2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino ) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) ethoxy) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl)- Preparation of 1,3-dioxoisoindolin-4-yl) acetamide
  • the reaction was concentrated under reduced pressure to remove N, N-dimethylformamide, diluted with ethyl acetate and washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and distilled under reduced pressure, and then purified to obtain the target compound.
  • step 1 2 -(4- Chlorobutoxy ) -N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoy Preparation of Soindolin-4-yl) acetamide
  • the solid material was removed by filtration, the filtrate was diluted with ethyl acetate and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound.
  • step 2 2 -(4- Iodobutoxy ) -N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxo Preparation of Isoindolin-4-yl) acetamide
  • step 1 The compound (0.2 g, 0.474 mmol) prepared in step 1 was dissolved in acetone (10 mL), and sodium iodide (0.71 g, 4.74 mmol) was added thereto, followed by heating to reflux for 18 hours. The reaction was concentrated, diluted with ethyl acetate, and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the desired compound.
  • Step 3 2- (4- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopro Foxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) butoxy) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl Preparation of Acetamide
  • reaction was concentrated under reduced pressure to remove N, N-dimethylformamide, diluted with ethyl acetate and washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and distilled under reduced pressure, and then purified to obtain the desired compound.
  • Step 1 Preparation of tert-butyl 2- (2- (2-chloroethoxy) ethoxy) acetate
  • step 2 2 -(2- (2- Chloroethoxy ) Ethoxy Production of acetic acid
  • step 3 2 -(2- (2- Chloroethoxy ) Ethoxy ) -N- (2- (2,6- Dioxopiperidine Preparation of -3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) acetamide
  • step 2 The compound (3.0 eq.) Prepared in step 2 was dissolved in tetrahydrofuran, thionyl chloride (7.5 eq.) Was added, and then stirred at 60 ° C. After the reaction was completed, the mixture was concentrated, dissolved in tetrahydrofuran, and pomalidomide (1.0 eq.) Was added and stirred at 60 ° C. After completion of the reaction, the mixture was concentrated and purified by separation to obtain the target compound.
  • Step 4 N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) -2- (2- (2-iodoethoxy) ethoxy) acetamide
  • step 3 The compound (1.0 eq.) Prepared in step 3 was dissolved in acetone, sodium iodide (10.0 eq.) was added, followed by stirring at 80 ° C. After completion of the reaction, the mixture was concentrated to N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) -2- (2- (2- Iodoethoxy) ethoxy) acetamide was obtained.
  • Step 5 2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5 Isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) ethoxy) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoy Preparation of Soindolin-4-yl) acetamide
  • step 4 The compound (1.0 eq.) And LDK378 (1.0 eq.) Prepared in step 4 were dissolved in dimethylformamide, diisopropylethylamine (2.5 eq.) Was added thereto, and the mixture was stirred at 90 ° C. After the reaction was completed, the mixture was concentrated and separated and purified to obtain the target compound.
  • the target compound was prepared in a similar manner to Step 2 of Example 14.
  • step 3 2 -(2- Chloroethoxy ) -N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoy Preparation of Soindolin-4-yl) acetamide
  • the target compound was prepared in a similar manner to Step 3 of Example 14.
  • Step 4 N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) -2- (2-iodoethoxy) acetamide
  • the target compound was prepared in a similar manner to Step 4 of Example 14.
  • Step 5 2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopro Foxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl Preparation of Acetamide
  • Step 4 Using the compound prepared in Step 4, it was carried out similarly to Step 5 of Example 14 to prepare a target compound.
  • Step 2 tert -Butyl 2- (2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) Preparation of 5-5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) ethoxy) ethoxy) acetate
  • LDK378 50 mg, 0.09 mmol
  • the compound prepared in Step 1 27 mg, 0.09 mmol
  • Cs 2 CO 3 60 mg, 0.18 mmol
  • potassium iodide 3 mg, 0.018 mmol
  • DMF 1 mL
  • the reaction was extracted with water and ethyl acetate, and the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated and purified to obtain the target compound.
  • Step 3 tert -Butyl 2- (2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) Preparation of 5-5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) ethoxy) ethoxy) acetic acid hydrochloric acid
  • step 2 The compound (37 mg, 0.090 mmol) prepared in step 2 was dissolved in dichloromethane (1 mL), 4N hydrochloric acid / dioxane (1 mL) solution was added, and then stirred at room temperature for 6 hours. The reaction was concentrated under reduced pressure and used in the next step without purification.
  • Step 4 (2S, 4R) -1-((R) -1- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidine-2 -Yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -14,14-dimethyl-11-oxo-3,6,9-trioxa-12-azapentadecanecarbo
  • Nyl -4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • the target compound was prepared in the same manner as in Example 4, except that 5-bromohexane oil was used instead of the 5-brophofenic acid oil used in Step 1 of Example 4.
  • Example 10 The compound of interest was carried out in the same manner as in Example 10, except that 2- (5-chloropropoxy) acetic acid was used instead of 2- (4-chlorobutoxy) acetic acid used in Step 1 of Example 10. Was prepared.
  • Example 13 The compound of interest was carried out in the same manner as in Example 13, except that 2- (5-chloropropoxy) acetic acid was used instead of 2- (4-chlorobutoxy) acetic acid used in Step 1 of Example 13. Was prepared.
  • the target compound was prepared in the same manner as in Example 10, except that 2- (5-chloropentoxy) acetic acid was used instead of 2- (4-chlorobutoxy) acetic acid used in Step 1 of Example 10. Was prepared.
  • the present invention provides a compound represented by Formula 1, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • the linker may not be continuously connected to -O-;
  • A is or to be.
  • a and i are independently 0 or 1, and may not be 0 at the same time;
  • B is an integer from 0-20;
  • C is 0 or 1
  • D is an integer of 0-3;
  • E is 0 or 1
  • F is an integer from 1-10;
  • G is 0 or 1
  • H is an integer from 0-3;
  • J and k are independently an integer of 0-5.
  • Preferred examples of the compound represented by Formula 1 according to the present invention include the following compounds.
  • the compound represented by Formula 1 of the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid, phosphorous acid, aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes.
  • Non-toxic organic acids such as dioate, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids and the like, and organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid and the like.
  • Such pharmaceutically nontoxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, eye Odide, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, suve Latex, sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitro benzoate, hydroxybenzoate, Methoxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzenesulfonate, toluenesulfonate, chloro
  • the acid addition salt according to the present invention can be prepared by a conventional method, for example, a precipitate produced by dissolving a derivative of Formula 1 in an organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, dichloromethane, acetonitrile and adding an organic or inorganic acid.
  • the solvent may be prepared by filtration and drying, or the solvent and excess acid may be distilled under reduced pressure, dried, and then crystallized under an organic solvent.
  • Bases can also be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • Alkali metal or alkaline earth metal salts are obtained, for example, by dissolving a compound in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt as the metal salt.
  • Corresponding salts are also obtained by reacting alkali or alkaline earth metal salts with a suitable negative salt (eg silver nitrate).
  • the present invention includes not only the compound represented by Formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof, but also solvates, optical isomers, hydrates, and the like that can be prepared therefrom.
  • step 3 Reacting the compound represented by A-Linker-Y prepared in step 2 with the compound represented by Formula 2 to prepare a compound represented by Formula 1 (step 3); Provided are methods for preparing the compounds:
  • X and Y are Y, when X is -CO 2 -tBu, Y is -CO 2 H, and when X is Cl or Br, Y is I.
  • Step 1 is a step of preparing a compound represented by A-Linker-X by reacting a compound represented by AH and a compound represented by Linker-X. to be.
  • the step may be considered as a linker introduction step, and is not particularly limited as long as it is a linking group introduction method that may be used in the art.
  • a method using a protecting group, and replacing Cl or Br at the terminal with I There may be a method to introduce.
  • the method shown in the following preparation method of the compound of the present invention may be used, and may be modified or applied.
  • H 2 O ethanol, tetrahydrofuran (THF), dichloromethane, toluene, acetonitrile, dimethylformamide, and the like may be used as the solvent usable in the above step, and preferably dichloromethane may be used.
  • reaction temperature in the above step is not particularly limited, but preferably carried out between the boiling point of the solvent at 20-90 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-20 hours.
  • Step 2 is a step of preparing a compound represented by A-Linker-X prepared in Step 1 as a compound represented by A-Linker-Y. .
  • the step is to remove the protecting group, the step of replacing the Cl or Br terminal with I.
  • the method shown in the following preparation method of the compound of the present invention may be used, and may be modified or applied.
  • Step 3 is represented by Chemical Formula 1 by reacting the compound represented by A-Linker-Y prepared in Step 2 with the compound represented by Chemical Formula 2 To prepare a compound.
  • the step is the step of connecting the compound represented by the formula (2) capable of binding to the anaplastic lymphoma kinase (ALK) and inhibited with the A-Linker prepared in step 2.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • the compound represented by the formula (2) is a compound capable of binding or inhibiting anaplastic lymphoma kinase (ALK), it can be applied and applied by the method of the present invention and from this the compound represented by A of the present invention and Linker It is characterized by the ability to inhibit or degrade anaplastic lymphoma kinase (ALK).
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • the compound represented by A is characterized in that it forms a bond with an enzyme capable of degrading anaplastic lymphoma kinase, thereby inducing anaplastic lymphoma kinase degradation.
  • H 2 O ethanol, tetrahydrofuran (THF), dichloromethane, toluene, acetonitrile, dimethylformamide, and the like may be used as the solvent usable in the above step, and preferably dichloromethane may be used.
  • reaction temperature in the above step is not particularly limited, but preferably carried out between the boiling point of the solvent at 20-90 °C, the reaction time is not particularly limited, it is preferable to react for 0.5-20 hours.
  • the steps 1 to 3 may be carried out by inverting each other, or may be performed by a method of dividing a linker.
  • the preparation method represented by Scheme 1 is to introduce a linker (Linker) to the compound represented by AH, and then to react with the compound represented by the formula (2) to prepare a compound represented by the formula (1), for example
  • a linker may be first introduced into a compound represented by Formula 2, and a linker may be introduced to a compound represented by A, and then reacted with each other to prepare a compound represented by Formula 1.
  • the method for preparing a compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention may be performed as in Scheme 1 or Scheme 2, and includes a preparation method which may be performed by modifying or modifying the same.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of anaplastic lymphoma kinase (ALK) related diseases containing the compound represented by Formula 1, the optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. .
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • anaplastic lymphoma kinase (ALK) related disease refers to any disease that can be expressed from, but not limited to, anaplastic lymphoma kinase (ALK).
  • an example of an anaplastic lymphoma kinase (ALK) -related disease is cancer, which is caused by anaplastic lymphoma kinase (ALK) in connection with cell proliferation of cancer cells, the compound of the present invention, its optical isomers and Acceptable salts can be useful for the prevention or treatment of diseases referred to as anaplastic lymphoma kinase (ALK) related diseases by inhibiting or degrading anaplastic lymphoma kinase (ALK).
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer containing the compound represented by Formula 1, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the compound may be characterized by inhibiting or degrading anaplastic lymphoma kinase (ALK) to prevent or treat cancer
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • the cancer may be, for example, colorectal cancer, liver cancer, gastric cancer, breast cancer, colon cancer, bone cancer, Pancreatic cancer, head or neck cancer, uterine cancer, ovarian cancer, rectal cancer, esophageal cancer, small intestine cancer, anal muscle cancer, colon cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, cervical carcinoma, vaginal carcinoma, vulvar carcinoma, Hodgkin's disease, prostate cancer, bladder cancer, It may be one or more selected from the group consisting of kidney cancer, ureter cancer, renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma central nervous system tumor and leukemia.
  • the present invention provides a health functional food for preventing or improving diseases related to anaplastic lymphoma kinase (ALK) containing the compound represented by Chemical Formula 1, the optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase
  • the anaplastic lymphoma kinase (ALK) -related disease may include, for example, colorectal cancer, liver cancer, gastric cancer, breast cancer, colon cancer, bone cancer, pancreatic cancer, head or neck cancer, uterine cancer, ovarian cancer, rectal cancer, esophageal cancer, small intestine cancer, and anal muscles.
  • the compound represented by Formula 1 according to the present invention may be administered in various oral and parenteral formulations during clinical administration, and when formulated, the commonly used fillers, extenders, binders, humectants, disintegrating agents, surfactants, and the like. Prepared using diluents or excipients.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, troches and the like, which solid preparations contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, water, or the like. It is prepared by mixing cross, lactose or gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, solvents, emulsions or syrups, and include various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. Can be.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories, and the like.
  • non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerol, gelatin and the like can be used.
  • the effective dosage of the compound of the present invention to the human body may vary depending on the age, weight, sex, dosage form, health condition and degree of disease of the patient, and is generally about 0.001-100 mg / kg / day, preferably Preferably 0.01-35 mg / kg / day. Based on an adult patient weighing 70 kg, it is generally 0.07-7000 mg / day, preferably 0.7-2500 mg / day, once a day at regular intervals according to the judgment of the doctor or pharmacist. Multiple doses may be administered.
  • the compounds according to the present invention were found to have ALK protein inhibitory activity, degradation activity, and cancer growth inhibitory activity.
  • the ALK inhibitory activity IC 50 value of the compounds of Examples 1 to 16 according to the present invention was found to be 10 to 150 nanomolar concentration, so It was determined that the compound of the present invention excellently inhibits the ALK protein.
  • the compounds of Examples 1 to 16 according to the present invention can excellently degrade ALK protein at a concentration of 300 nM, in particular Example 3, It was confirmed that the 4, 10, and 11 compounds exhibited more than 50% degradation activity at the concentration of 300 nM.
  • the compound according to the present invention was able to excellently decompose ALK protein at a concentration of nanomolar units, from which it was determined that it can be effectively used for the prevention and treatment of ALK-related diseases.
  • the experimental group SCID mice to which the compound of Example 3 according to the present invention was administered did not develop tumor size with the passage of days of administration. It can be seen that it keeps or shrinks. Therefore, the compound according to the present invention was confirmed to have cancer growth inhibitory activity, as confirmed in Experimental Example 3, and was determined to be useful for the prevention and treatment of cancer as a pharmaceutical composition containing the same.
  • Step 1 Preparation of tert-butyl 4- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-ylamino) butylcarbamate
  • tert-butyl 2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -4-fluoroisoindolin-1,3-dione (20 mg, 0.072 mmol) was dissolved in dimethylformamide (0.5 mL), tert-butyl (4-aminobutyl) carbamate (14 uL, 0.072 mmol) and diisopropylethylamine (21 uL, 0.144 mmol) were mixed and then heated at 90 ° C. for 12 hours. After the reaction was completed, the temperature was lowered to room temperature, diluted with ethyl acetate and washed with water and brine. The residue of the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated and purified to give the desired compound (51%, green gel).
  • step 2 4 -(4- Aminobutylamino ) -2- (2,6- Dioxopiperidine -3 days) Isoindolin Preparation of -1,3-dione Hydrochloride
  • step 1 The compound prepared in step 1 (81 mg, 0.182 mmol) was dissolved in dichloromethane (1 mL), 1,4-dioxane solution (1 mL) containing 4N hydrochloric acid was added, followed by stirring at room temperature. . After the reaction was completed, the reaction solution was concentrated under reduced pressure to obtain the target compound, which was used in the next step without further purification.
  • step 3 5 -(4- (4- (5- Chloro -4- (2- ( Isopropylsulfonyl ) Phenylamino Preparation of Pyrimidin-2-ylamino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -5-oxopentanoic acid
  • reaction mixture was diluted with dichloromethane and washed with water, saturated aqueous ammonium chloride solution and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and then concentrated under reduced pressure to obtain a target compound (0.5 g, white solid).
  • Step 4 5- (4- (4- (5-chloro-4- (2- (isopropylsulfonyl) phenylamino) pyrimidin-2-ylamino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) pi Ferridin-1-yl) -N- (4- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-ylamino) butyl) -5- Preparation of Oxopentanamide
  • step 3 The compound prepared in step 3 (20 mg, 0.031 mmol) was dissolved in dichloromethane (1 mL), and the compound prepared in step 2 (11.8 mg, 0.031 mmol) and benzotriazol-1-yloxy) tri Pyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (16.1 mg, 0.031 mmol) and triethylamine (11 uL, 0.078 mmol) were added and then stirred at room temperature. Upon completion of the reaction, the reaction was diluted with dichloromethane and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound.
  • Step 1 tert -Butyl 2- (2- (2-(((R) -1-((2R, 4R) -4-hydroxy-2- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzylcarbamoyl) Preparation of Pyrrolidin-1-yl) -3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-ylamino) -2-oxoethoxy) ethoxy) ethylcarbamate
  • Step 2 (2S, 4R) -1-((R) -2- (2- (2- (2-aminoethoxy) ethoxy) acetamido) -3,3-dimethylbutanyl) -4- Preparation of hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide hydrochloride
  • step 1 The compound prepared in step 1 (0.54 g, 0.799 mmol) was dissolved in dichloromethane (5 mL), 1,4-dioxane (5 mL) containing 4N hydrochloric acid was added, followed by stirring at room temperature. The reaction was terminated and the reaction was concentrated under reduced pressure to give the title compound.
  • Step 3 (2S, 4R) -1-((R) -2- (tert-butyl) -17- (4- (4- (5-chloro-4- (2- (isopropylsulfonyl) phenylamino ) Pyrimidin-2-ylamino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -4,13,17-trioxo-6,9-dioxa-3,12-dia Preparation of zaheptadecane-1-oyl) -4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • the reaction was diluted with dichloromethane and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound (12 mg, white solid).
  • the reaction was diluted with dichloromethane and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound (14 mg, white solid).
  • step 1 5 - Brofo -N- (2- (2,6- Goofiferidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) pentanamide
  • Step 2 5- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2
  • 4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2 Preparation of -methylphenyl) piperidin-1-yl) -N- (2- (2,6-ioxopyrepidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) pentanamide
  • step 1 5 -((2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) amino) -5-oxopentanoic acid
  • Step 2 5- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2 -Methylphenyl) piperidin-1-yl) -N- (2- (2,6-ioxopyrepidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) -5-oxopentane Preparation of Amides
  • step 1 2 -(2-((2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) amino) -2-oxoethoxy) acetic acid
  • Step 2 2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopro Foxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -2-oxoethoxy) -N- (2- (2,6-dioxopyrepidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) acetamide
  • Step 1 ( 2S, 4R ) -1-((R) -2- (5- Bromopentanamido ) -3,3- Dimethyl Butane Oil Preparation of 4--4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 2 (2R, 4R) -1-((R) -2- (5- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyri) Midin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) pentaneamido) -3,3-dimethylbutanoyl) -4-hydroxy-N- (4 Preparation of-(4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 1 tert -Butyl 7-((2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of 4-yl) amino) -7-oxoheptanoate
  • the mixture was diluted with ethyl acetate and washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to prepare the target compound (0.174 g).
  • step 2 7 -((2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) amino) -7-oxoheptanoic acid
  • tert-butyl 7-((2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) amino) -7-oxoheptanoate (0.174 g) was dissolved in 20% trifluoroacetic acid / dichloromethane solution (5 mL) and stirred at room temperature for 1 hour. The reaction was concentrated under reduced pressure to give the title compound, which was used in the next reaction without purification.
  • Step 3 7- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2 -Methylphenyl) piperidin-1-yl) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-diolisoisoindolin-4-yl) -7-oxoheptane Preparation of Amides
  • Step 1 ( 2S, 4R ) -1-((R) -2- (2- (2- Chloroethoxy ) Acetamido ) -3,3- Dimethyl Butane Oil Preparation of) -4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • step 2 N -(2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoindolin -4-yl) -2- (4- Iodobutoxy Preparation of Acetamide
  • Step 3 (2S, 4R) -1-((R) -2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) phenyl) Amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) acetamido) -3,3-dimethylbutanyl) -4-hydrate
  • the reaction was concentrated under reduced pressure to remove N, N-dimethylformamide, diluted with ethyl acetate, washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and distilled under reduced pressure, and then purified to obtain the target compound.
  • Step 1 ( 2S, 4R ) -1-((R) -2- (2- (2- Chlorobutoxy ) Acetamido ) -3,3- Dimethyl Butane Oil Preparation of) -4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 2 ( 2R, 4R ) -4-hydroxy-1-((R) -2- (2- (4- Iodobutoxy ) Acetamido Preparation of) -3,3-dimethylbutanoyl) -N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • Step 3 (2S, 4R) -1-((R) -2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) phenyl) Amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) acetamido) -3,3-dimethylbutanyl) -4-hydrate
  • the reaction was concentrated under reduced pressure to remove N, N-dimethylformamide, diluted in ethyl acetate, washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and distilled under reduced pressure, and then purified to obtain a target compound (10 mg, ivory gel).
  • Step 1 tert -Butyl 7-(((R) -1-((2R, 4R) -4-hydroxy-2-((4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) carbamoyl) pyrrolidine- Preparation of 1-yl) -3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl) amino) -7-oxoheptanoate
  • step 2 7 -(((R) -1-(( 2R, 4R ) -4-hydroxy-2-((4- (4- Methylthiazole -5 days) benzyl ) Cabamoil Preparation of pyrrolidin-1-yl) -3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl) amino) -7-oxoheptanoic acid
  • Step 3 (2S, 4R) -1-((R) -2- (7- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyri) Midin-2-yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -7-oxoheptanamido) -3,3-dimethylbutanoyl) -4-hydroxy- Preparation of N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • the reaction was diluted with dichloromethane and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound (20 mg, white solid).
  • Step 1 N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) -2- (2- (2- (2-iodoethoxy) ethoxy) ethoxy) acetamide
  • Step 2 2- (2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino ) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) ethoxy) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl)- Preparation of 1,3-dioxoisoindolin-4-yl) acetamide
  • the reaction was concentrated under reduced pressure to remove N, N-dimethylformamide, diluted with ethyl acetate and washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and distilled under reduced pressure, and then purified to obtain the target compound.
  • step 1 2 -(4- Chlorobutoxy ) -N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) acetamide
  • the solid material was removed by filtration, the filtrate was diluted with ethyl acetate and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the target compound.
  • step 2 2 -(4- Iodobutoxy ) -N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) acetamide
  • step 1 The compound (0.2 g, 0.474 mmol) prepared in step 1 was dissolved in acetone (10 mL), and sodium iodide (0.71 g, 4.74 mmol) was added thereto, followed by heating to reflux for 18 hours. The reaction was concentrated, diluted with ethyl acetate, and washed with water and brine. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated under reduced pressure, and purified to obtain the desired compound.
  • Step 3 2- (4- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopro Foxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) butoxy) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl Preparation of Acetamide
  • reaction was concentrated under reduced pressure to remove N, N-dimethylformamide, diluted with ethyl acetate and washed with water and brine.
  • the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and distilled under reduced pressure, and then purified to obtain the desired compound.
  • step 2 2 -(2- (2- Chloroethoxy ) Ethoxy Production of acetic acid
  • step 3 2 -(2- (2- Chloroethoxy ) Ethoxy ) -N- (2- (2,6- Dioxopiperidine Preparation of -3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) acetamide
  • step 2 The compound (3.0 eq.) Prepared in step 2 was dissolved in tetrahydrofuran, thionyl chloride (7.5 eq.) Was added, and then stirred at 60 ° C. After the reaction was completed, the mixture was concentrated, dissolved in tetrahydrofuran, and pomalidomide (1.0 eq.) Was added and stirred at 60 ° C. After completion of the reaction, the mixture was concentrated and purified by separation to obtain the target compound.
  • Step 4 N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) -2- (2- (2-iodoethoxy) ethoxy) acetamide
  • step 3 The compound (1.0 eq.) Prepared in step 3 was dissolved in acetone, sodium iodide (10.0 eq.) was added, followed by stirring at 80 ° C. After completion of the reaction, the mixture was concentrated to N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl) -2- (2- (2- Iodoethoxy) ethoxy) acetamide was obtained.
  • Step 5 2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5 Isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) ethoxy) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoy Preparation of Soindolin-4-yl) acetamide
  • step 4 The compound (1.0 eq.) And LDK378 (1.0 eq.) Prepared in step 4 were dissolved in dimethylformamide, diisopropylethylamine (2.5 eq.) Was added thereto, and the mixture was stirred at 90 ° C. After the reaction was completed, the mixture was concentrated and separated and purified to obtain the target compound.
  • step 2 2 -(2- Chloroethoxy Production of acetic acid
  • the target compound was prepared in a similar manner to Step 2 of Example 14.
  • step 3 2 -(2- Chloroethoxy ) -N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) acetamide
  • the target compound was prepared in a similar manner to Step 3 of Example 14.
  • Step 4 N- (2- (2,6- Dioxopiperidine -3-yl) -1,3- Dioxoisoindolin Preparation of -4-yl) -2- (2-iodoethoxy) acetamide
  • the target compound was prepared in a similar manner to Step 4 of Example 14.
  • Step 5 2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) -5-isopro Foxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) -N- (2- (2,6-dioxopiperidin-3-yl) -1,3-dioxoisoindolin-4-yl Preparation of Acetamide
  • Step 4 Using the compound prepared in Step 4, it was carried out similarly to Step 5 of Example 14 to prepare a target compound.
  • Step 2 tert -Butyl 2- (2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) Preparation of 5-5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) ethoxy) ethoxy) acetate
  • LDK378 50 mg, 0.09 mmol
  • the compound prepared in Step 1 27 mg, 0.09 mmol
  • Cs 2 CO 3 60 mg, 0.18 mmol
  • potassium iodide 3 mg, 0.018 mmol
  • DMF 1 mL
  • the reaction was extracted with water and ethyl acetate, and the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, concentrated and purified to obtain the target compound.
  • Step 3 tert -Butyl 2- (2- (2- (2- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidin-2-yl) amino) Preparation of 5-5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) ethoxy) ethoxy) ethoxy) acetic acid hydrochloric acid
  • step 2 The compound (37 mg, 0.090 mmol) prepared in step 2 was dissolved in dichloromethane (1 mL), 4N hydrochloric acid / dioxane (1 mL) solution was added, and then stirred at room temperature for 6 hours. The reaction was concentrated under reduced pressure and used in the next step without purification.
  • Step 4 (2S, 4R) -1-((R) -1- (4- (4-((5-chloro-4-((2- (isopropylsulfonyl) phenyl) amino) pyrimidine-2 -Yl) amino) -5-isopropoxy-2-methylphenyl) piperidin-1-yl) -14,14-dimethyl-11-oxo-3,6,9-trioxa-12-azapentadecanecarbo
  • Nyl -4-hydroxy-N- (4- (4-methylthiazol-5-yl) benzyl) pyrrolidine-2-carboxamide
  • the target compound was prepared in the same manner as in Example 4, except that 5-bromohexane oil was used instead of the 5-brophofenic acid oil used in Step 1 of Example 4.
  • Example 10 The compound of interest was carried out in the same manner as in Example 10, except that 2- (5-chloropropoxy) acetic acid was used instead of 2- (4-chlorobutoxy) acetic acid used in Step 1 of Example 10. Was prepared.
  • Example 13 The compound of interest was carried out in the same manner as in Example 13, except that 2- (5-chloropropoxy) acetic acid was used instead of 2- (4-chlorobutoxy) acetic acid used in Step 1 of Example 13. Was prepared.
  • the target compound was prepared in the same manner as in Example 10, except that 2- (5-chloropentoxy) acetic acid was used instead of 2- (4-chlorobutoxy) acetic acid used in Step 1 of Example 10. Was prepared.
  • anaplastic lymphoma kinase ALK
  • a compound prepared in Examples 1 to 21 was added to a concentration of 1230 ⁇ M in a Greyner 96 well round bottom plate and anaplastic lymphoma kinase (ALK).
  • Enzyme (1 ml) and peptide substrate (2 ml) with biotin were incubated for 15 minutes by mixing.
  • ATP solution (5 ml) was added thereto to perform a kinase reaction at room temperature for 30 minutes.
  • Example IC 50 nM Example IC 50 , nM One 95 11 140 2 140 12 34 3 110 13 70 4 18 14 29 5 69 15 46 6 100 16 16 7 32 8 110 9 89 10 29
  • Examples 1 to 16 of the present invention can inhibit the ALK protein with a unit concentration of nM.
  • Su-Dhl-1 cells were injected with 6 ⁇ 10 5 cells into each well of a 12 well plate. The next day, each well was treated with a final concentration of 30 nM, 100 nM, 300 nM, 1 uM. One well was treated with the same percentage of DMSO. After 16 hours of treatment, the cells were collected and treated with TBS-N lysis buffer (20 mM Tris-Cl, pH8.0, 150 mM NaCl, 0.5% NP-40, 1.5 mM EDTA, 0.5 mM Na3VO4, and protease inhibitor cocktail). Seafood (cell lysate) was made and Western blot was performed.
  • H3122 cells were injected with 6 ⁇ 10 5 cells into each well of a 12 well plate. The next day, each well was treated with a final concentration of 30 nM, 300 nM, 3 uM, 30 uM. One well was treated with the same percentage of DMSO. After 16 hours of treatment, the cells were collected and treated with TBS-N lysis buffer (20 mM Tris-Cl, pH8.0, 150 mM NaCl, 0.5% NP-40, 1.5 mM EDTA, 0.5 mM Na3VO4, and protease inhibitor cocktail). Seafood (cell lysate) was made and Western blot was performed.
  • Example ALK Degradation Activity Example ALK Degradation Activity One + 10 ++ 2 + 11 ++ 3 ++ 12 + 4 ++ 13 + 5 + 14 + 6 + 15 + 7 + 16 + 8 + 9 +
  • Examples 1 to 16 compounds according to the present invention are capable of excellent degradation of ALK protein at a concentration of 300 nM, in particular Examples 3, 4, 10 and 11 compounds 50% at a concentration of 300 nM It can be confirmed that it shows excess decomposition activity.
  • the compound according to the present invention can excellently degrade ALK protein at a concentration of nanomolar units, from which it can be effectively used for the prevention and treatment of ALK-related diseases.
  • mice using the H3122 xenograft model were divided into a control group (8 mice) and an experimental group (8 mice).
  • the experimental group was intraperitoneally injected with a dose of 50 mg / kg three times a day according to the compound of Example 3 The experiment was performed, and the results are shown in FIG. 1.
  • Example 3 compound 3 times a day, 50 mg / kg, 14 days in total
  • SC3 mice transplanted with H3122 xenografts.
  • the experimental group administered with the compound of Example 3 according to the present invention can confirm that the tumor size is maintained or reduced as the elapsed days of administration.
  • the compound according to the present invention is confirmed to have cancer growth inhibitory activity, as confirmed in Experimental Example 3, it can be seen that it can be useful for the prevention and treatment of cancer as a pharmaceutical composition containing it. .
  • the compound represented by the formula (1) according to the present invention can inhibit or degrade anaplastic lymphoma kinase (ALK), thereby having a useful effect in the prevention and treatment of anaplastic lymphoma kinase (ALK) related diseases such as cancer.
  • ALK anaplastic lymphoma kinase

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Abstract

ALK 단백질의 분해를 유도하는 약물의 제조 방법 및 이를 유효성분으로 합유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 역형성 림프종 키나제(ALK)를 억제하거나 분해시킬 수 있어, 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환, 예를 들어 암의 예방 및 치료에 유용한 효과가 있다.

Description

ALK 단백질의 분해를 유도하는 약학적 조성물 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
ALK 단백질의 분해를 유도하는 약물의 제조 방법 및 이를 유효성분으로 합유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
최근 예일대학교의 연구팀(Craig Crews)은 단백질 분해 유도제(Proteolysis Targeting Chimera, PROTAC)기술을 개발하고 다양한 질환에 적용하는 연구를 수행 중이다. 상기 기술은 특정 단백질에 결합하는 저해제(inhibitor) 또는 결합인자(binder)와 E3 유비퀴틴 리가아제에 특징적으로 결합하는 리간드를 다양한 종류의 링커로 연결하여 PROTAC물질을 사용한 항암제 개발 연구를 진행 중이다. 예일대 연구팀은 수년간 VHL(von Hippel-Lindau) E3 유비퀴틴 리가아제에 결합하는 폴리펩타이드를 제조하였으며, 약물성이 낮은 폴리펩타이드의 최적화 연구를 통해 최근 유기 저분자 물질을 개발하였고, 이를 활용한 ERRa 저해제와 결합한 ERRa-PROTAC물질로 동물모델에서 ERRa 단백질을 현저하게 감소시키는 결과를 보여주었다.
또한, 하버드대학의 연구팀(Bradner)은 CRBN E3 유비퀴틴 리가아제에 결합하는 탈리도마이드를 사용하고 BRD4 저해제인 JQ1 화합물을 사용하여 백혈병 치료에 효과가 있는 물질 개발에 성공하였다.
항암 표적 치료제는 암이 발생한 표적에 직접 작용하기 때문에 기존 세포독성 치료제와 비교하여 부작용이 적게 발생하고, 치료효과도 뛰어나나, 표적의 신호 전달을 저해하기 위해서는 표적에 대한 높은 저해력이 요구되며, 치료효과를 보이기 위해서는 많은 양을 오랜 기간 투여해야 하는 단점을 가지고 있다. 또한 약물에 대한 내성이 빠르게 나타나, 투여 후 1년 이내에 약물 내성이 발생하여 약물의 효과를 낮추게 된다. 따라서, 새로운 표적 발굴과 치료제 개발이 지속적으로 필요하다. 반면, 단백질 분해 유도제는 질병의 원인이 되는 단백질을 분해하기 때문에 약물에 대한 내성발생이 낮고, 표적 단백질에 결합만 가능하다면 충분히 표적 단백질 분해가 가능하기 때문에 높은활성이 필요하지 않으며, 따라서 기존 약물 개발에서는 어려웠던 표적(undruggable target)에도 적용이 가능한 기술로 각광받고 있다.
최근, 역형성 림프종 키나아제(ALK, Anaplastic lymphoma kinase)가 인체의 여러 암 세포 종양에서 발견되어 표적치료의 목표물로 연구되고 있는데, 역형성 림프종 키나아제(ALK)의 발암 과정은 주로 역형성 큰세포 림프종에서 관찰되는 ALK-NPM(Nucleophosmin, 뉴클레오포스민)의 융합유전자에 기인한 것으로 알려져 있다. 상기 유전자 융합에 의해 역형성 림프종 키나아제(ALK)가활성화되면 티로신 키나아제는 비정상적으로 행동하게 되고, 이로부터 암이 유발된다. 즉, 비정상적으로활성화된 역형성 림프종 키나아제(ALK)는 세포의 증식을 유도하고, 세포가 사멸하는 방식의 하나인 아포토시스(apoptosis)를 방해하여 세포가 사멸되지 않게 하며, 세포 뼈대를 재배열시켜 세포 형태를 변형시킨다.
상술한 바와 같은 역형성 림프종 키나아제(ALK)의 암 유전자화는 역형성 림프종 키나아제(ALK)의 표적 물질인 하위 분자(downstream molecule)와의 상호 작용에 의해 이루어진다. 하위 분자는 세포 내 신호 전달을 매개하는 물질이다. 역형성 림프종 키나아제(ALK)는 정상이거나 암 유전자화한 다른 티로신 키나아제와 연결되어 상호작용을 하거나 여러 종류의 다른 경로들을활성화 한다. 특히, 폐암 세포의 내부에서 역형성 림프종 키나아제(ALK) 유전자는 EML4(Echinoderm Microtubule-Associated Protein-Like 4) 유전자와 융합하여활성형 티로신 인산화 효소(tyrosine kinase)인 EML4-ALK를 생산하고, 이때, EML4-역형성 림프종 키나아제(ALK)의 암으로 변이가 효소활성에 의존적이라는 것이 알려진 바 있고, 이 외에도 491개의 신경모세포종 검체에서 약 26%의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 유전자 증폭에 대하여 보고된 바 있다. 또한, 역형성 림프종 키나아제(ALK) 유전자는 대형 B-세포 림프종, 전신성 조식구증, 염증성 근섬유아세포성 육종, 식도 편평 세포암, 비소세포폐암, 횡문근육종, 근섬유모세포종, 유방암 및 흑색종 세포주 등 수많은 비조혈세포 종양에서 발현되는 것으로 밝혀졌고, 염증성 골수섬유모세포종양이라는 희귀한 질환의 경우, 여러 종류의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 융합 단백질이 흔하게 발견되어 이러한 융합 단백질들이 종양의 발생에 깊이 연관된 것으로 생각되고 있다.
이에, 역형성 림프종 키나아제(ALK)의활성화 경로를 차단함으로써, 암 치료를 목적으로 하는 ALK-NPM를 대상으로 한 치료제가 개발되고 있다(WO 2013/106643 A2). 최근 화이자(Pfizer)제약에서 암세포 종양원성 변이에 대한 선택적 억제제로 개발한 약물로, 소분자 티로신 인산화효소 억제제의 하나인 크리조티닙이 역형성 림프종 키나아제(ALK) 저해제로써, 비소세포폐암의 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 2011년 FDA에서 신약으로 허가를 받았다. 또한 노바티스(Novartis)사의 LDK-378(써리티닙, ceritinib) 화합물이 승인되었고, 다수의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 저해제들의 임상 실험이 진행중이다. 하지만, 크리조티닙은 투여 1년 이내에 약물 내성이 발생하며, 다양한 변이를 갖는 것으로 나타났으며, LDK378의 경우 일부 내성 단백질의활성은 억제되지만, G1202R을 비롯한 몇몇 변이 단백질의활성 저해는 약하다.
이에, 본 발명자는 ALK 저해제인 LDK378과 VHL 리간드 또는 CRBN 리간드(탈리도마이드)를 다양한 링커를 통해 연결하여 신규 ALK-PROTAC 물질을 개발하여 역형성 림프종 키나아제(ALK)가 분해되며 이에 따른 항암 효과가 우수한 것을 알아내어, 암의 예방 또는 치료제로 유용할 수 있음을 밝히고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용한 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 복적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2017002830-appb-I000001
상기 화학식 1에 있어서,
Linker는 -(CH2)-, -(C=O)-, -NH- 및 -O-로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상이 3-20개 연결된 연결기(linker)이되,
상기 연결기는 연속하여 -O-로 연결될 수 없고; 및
A는
Figure PCTKR2017002830-appb-I000002
또는
Figure PCTKR2017002830-appb-I000003
이다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
A-H로 표시되는 화합물과, Linker-X로 표시되는 화합물을 반응시켜 A-Linker-X로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 A-Linker-X로 표시되는 화합물을 A-Linker-Y로 표시되는 화합물로 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조한 A-Linker-Y로 표시되는 화합물과, 화학식 2로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다:
[반응식 1]
Figure PCTKR2017002830-appb-I000004
상기 반응식 1에서,
Linker, 및 A는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및
X와 Y는 X가 -CO2-tBu인 경우, Y는 -CO2H이고, X가 Cl 또는 Br인 경우, Y는 I이다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 역형성 림프종 키나제(ALK)를 억제하거나 분해시킬 수 있어, 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환, 예를 들어 암의 예방 및 치료에 유용한 효과가 있다.
도 1은 H3122가 이종이식된 SCID 마우스에 본 발명의 실시예 3 화합물을(1일 3회,50 mg/kg, 총 14일) 투여한 뒤, 종양 부피의 변화를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 5-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일아미노)부틸)-5-옥소펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000005
단계 1: tert -부틸 4-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일아미노)부틸카바메이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000006
tert-부틸 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온(20 mg, 0.072 mmol)을 디메틸포름아미드(0.5 mL)에 녹이고, tert-부틸 (4-아미노부틸)카바메이트(14 uL, 0.072 mmol) 및 디아이소프로필에틸아민(21 uL, 0.144 mmol)을 혼합한 후, 90℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응이 종결된 후, 온도를 상온으로 낮춘 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층의 잔류물은 무수 황산 마그네슘으로 건조하고, 여과 및 농축한 후 정제하여 목적하는 화합물(51%, 녹색젤)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.26 (s, 1H), 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.26 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 5.01 - 4.88 (m, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.32 (q, J = 6.3 Hz, 2H), 3.26 - 3.15 (m, 2H), 2.95 - 2.69 (m, 3H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 1.77 - 1.57 (m, 4H), 1.46 (s, 9H). LC/MS (ESI) m/z 445 [M+H]+
단계 2: 4 -(4- 아미노부틸아미노 )-2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일) 이소인돌린 -1,3-디온 염산염의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000007
상기 단계 1에서 제조한 화합물(81 mg, 0.182 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹이고, 4 N 염산을 포함하는 1,4-디옥산 용액(1 mL)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응용액은 감압 농축하여 목적 화합물을 수득하였고, 수득된 화합물을 추가적인 정제과정 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: 5 -(4-(4-(5- 클로로 -4-(2-( 이소프로필설포닐 ) 페닐아미노 )피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000008
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 0.5 g, 0.9 mmol)과 글루타르산 무수물(0.112 g, 9.85 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고, 테트라에틸아민(0.151 mL, 1.08 mmol) 및 촉매량의 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘을 첨가하고 상온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 반응물은 디클로로메탄에 희석시킨 후, 물, 포화 염화암모늄 수용액, 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후, 감압 농축하여 목적 화합물(0.5 g, 흰색 고체)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.56 (s, 1H), 8.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.98 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.69 - 7.54 (m, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.84 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.64 - 4.47 (m, 1H), 4.03 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.38 - 3.24 (m, 1H), 3.24 - 3.12 (m, 1H), 2.92 (t, J = 12.1 Hz, 1H), 2.67 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 2.58 - 2.44 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.11 - 1.98 (m, 2H), 1.85 (s, 2H), 1.70 - 1.52 (m, 2H), 1.42 - 1.27 (m, 12H); LC/MS (ESI) m/z 672.2 [M+H]+
단계 4 : 5-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일아미노)부틸)-5-옥소펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000009
상기 단계 3에서 제조한 화합물(20 mg, 0.031 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹인 후, 상기 단계 2에서 제조한 화합물(11.8 mg, 0.031 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(16.1 mg, 0.031 mmol) 및 트리에틸아민(11 uL, 0.078 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 998.2 [M+H]+
< 실시예 2> (2S,4R)-1-((R)-2-(tert-부틸)-17-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-4,13,17-트리옥소-6,9-디옥사-3,12-디아자헵타데칸-1-오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아마이드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000010
단계 1: tert -부틸 2-(2-(2-(((R)-1-((2R,4R)-4-히드록시-2-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-2-옥소에톡시)에톡시)에틸카바메이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000011
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산염(0.42 g, 1.187 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(5 mL)에 녹이고, 2,2-디메틸-4-옥소-3,8,11-트리옥사-5-아자트리데칸-13-오익산(0.275 mg, 1.187 mmol), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(0.496 g, 1.3 mmol) 및 디에틸이소프로필에틸아민(0.83 mL, 4.75 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물을 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어준다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고 여과한 후, 정제하여 목적 화합물(0.54 g, 노란색 오일)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 676[M+H]+
단계 2: (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)아세트아마이도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아마이드 염산염의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000012
상기 단계 1에서 제조한 화합물(0.54 g, 0.799 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고 4 N 염산을 포함하는 1,4-디옥산(5 mL)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 감압 농축하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 612 [M+H]+
단계 3: (2S,4R)-1-((R)-2-(tert-부틸)-17-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-4,13,17-트리옥소-6,9-디옥사-3,12-디아자헵타데칸-1-오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아마이드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000013
5-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄산(10 mg)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹인 후, 상기 단계 2에서 제조한 화합물(8 mg), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(7.4 mg) 및 디이소프로필에틸아민(9.1 uL)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(12 mg, 흰색 고체)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1231 [M+H-15]+
< 실시예 3> (2S,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000014
5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄산(10 mg)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹인 후, (2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산(7 mg), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(7.4 mg), 디이소프로필에틸아민(9.1 uL)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(14 mg, 흰색 고체)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1084.0 [M+H]+
< 실시예 4> 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000015
단계 1: 5 - 브로포 -N-(2-(2,6- 이동소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000016
4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.1 g, 0.37 mmol)을 테트라히드로퓨란 (2 mL)에 녹이고 5-브포모펜탄오일 클로라이드 (0.049 mL, 0.37 mL)을 첨가후 4시간동안 가열환류하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 감압 농축하고 분리정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.16 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 8.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.15 (m, 1H), 3.58 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.02 - 2.80 (m, 2H), 2.69 - 2.54 (m, 3H), 2.14 - 1.99 (m, 1H), 1.97 - 1.82 (m, 2H), 1.82 - 1.67 (m, 2H).
단계 2: 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000017
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 5-브로포-N-(2-(2,6-이동소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드(15.6 mg, 0.036 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(16 uL, 0.09 mmol)을 첨가한 후, 90℃에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축한 후 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.52 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.82 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.01 - 7.92 (m, 1H), 7.74 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 - 7.49 (m, 3H), 7.27 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 5.05 - 4.95 (m, 1H), 4.60 (brs, 1H), 3.32 - 3.25 (brs, 2H), 3.32 - 3.24 (m, 1H), 2.99 - 2.89 (m, 2H), 2.89 - 2.71 (m, 4H), 2.63 - 2.53 (m, 3H), 2.26 - 2.14 (m, 5H), 1.85 (br, 6H), 1.37 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
< 실시예 5> 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-5-옥소펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000018
단계 1: 5 -((2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아미노)-5-옥소펜탄산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000019
4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(0.1 g, 0.37 mmol)을 아세트산(2 mL)에 녹이고 디히드로-2H-피란-2,6(3H)-디온(0.23 g), 칼륨 아세테이트(0.108 g, 1.1 mmol)를 첨가한 후, 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축, 분리정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.14 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.90 - 7.78 (m, 1H), 7.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 12.8, 5.4 Hz, 1H), 2.98 - 2.83 (m, 1H), 2.67 - 2.53 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 2H), 1.76 - 1.63 (m, 1H).
단계 2: 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-5-옥소펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000020
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 14.4 mg, 0.026 mmol)을 디클로로메탄(2 mL)에 녹이고 5-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-5-옥소펜탄산(10 mg, 0.026 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(11.8 mg, 0.031 mmol), 디이소프로필에틸아민(6.7 uL, 0.039 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.53 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.96 - 7.92 (m, 1H), 7.72 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 2H), 7.56 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.01 - 4.95 (m, 1H), 4.84 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.60 - 4.52 (m, 1H), 4.04 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.33 - 3.23 (m, 1H), 3.17 (t, J = 12.4 Hz, 1H), 2.95 - 2.87 (m, 2H), 2.87 - 2.74 (m, 2H), 2.70 - 2.60 (m, 3H), 2.54 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.18 - 2.10 (m, 3H), 1.84 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 1.65 - 1.52 (m, 2H), 1.40 - 1.35 (m, 6H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 6H). LC/MS (ESI) m/z 927 [M+H]+
< 실시예 6> 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세타미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000021
단계 1: 2 -(2-((2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아미노)-2-옥소에톡시)아세트산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000022
4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.1 g, 0.37 mmol)을 아세트산 (2 mL)에 녹이고 1,4-디옥산-2,6-디온 (0.21 g, 1.83 mmol), 칼륨 아세테이트 (0.108 g, 1.1 mmol) 을 첨가후 90 도에서 12시간동안 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축, 분리정제하여 목적 화합물 (55 mg, 아이보리 고체)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.14 (s, 2H), 10.61 (s, 2H), 8.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.87 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 5.16 (dd, J = 12.9, 5.3 Hz, 2H), 4.25 (s, 4H), 4.08 (s, 4H), 3.17 (s, 2H), 3.00 - 2.79 (m, 3H), 2.70 - 2.52 (m, 4H), 2.17 - 2.01 (m, 2H).
단계 2: 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000023
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 디클로로메탄(2 mL)에 녹이고 2-(2-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-2-옥소에톡시)아세트산(14 mg, 0.036 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(16.4 mg, 0.043 mmol), 디이소프로필에틸아민(9.4 uL, 0.054 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.45 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 8.84 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.95 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.28 - 7.21 (m, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.99 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 1H), 4.47 (q, J = 14.2 Hz, 2H), 4.40 - 4.29 (m, 2H), 3.84 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.35 - 3.25 (m, 1H), 3.19 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 2.99 - 2.85 (m, 2H), 2.81 - 2.68 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.18 - 2.12 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 2H), 1.73 - 1.52 (m, 2H), 1.45 - 1.31 (m, 12H). LC/MS (ESI) m/z 927 [M+H]+
< 실시예 7> (2R,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000024
단계 1: ( 2S,4R )-1-((R)-2-(5- 브로모펜탄아미도 )-3,3- 디메틸부탄오일 )-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000025
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산을 디클로로메탄에 녹이고 5-브포모펜탄오일 클로라이드과 디이소프로필에틸아민을 첨가 후 상온에서 교반하였다. 반반응이 종결되고, 반응물은 디클로로메탄으로 희석하고 물과 소금물로 씻어준 후, 유기층은 무수황산마그네슘으로 건조, 감압 농축하고, 분리정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.39-7.29 (m, 4H), 6.11 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.61-4.48 (m, 3H), 4.35-4.30 (m, 1H), 4.08 (d, J = 11 Hz, 1H), 3.71-3.64 (m, 1H), 3.62-3.59 (m, 1H), 3.39 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.15-3.10 (m, 3H), 3.01 (s, 1H), 2.61-2.57 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.24 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.16-2.09 (m, 1H), 1.84-1.71 (m, 8H), 0.93 (s, 9H))
단계 2: (2R,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000026
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 (2S,4R)-1-((R)-2-(5-브로모펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드(21 mg, 0.036 mmol), 요오드화 나트륨(5.4 mg, 0.036 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(9.4 uL, 0.054 mmol)을 첨가한 후 60℃에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후 에틸아세테이트에 희석시키고 물고 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압 증류시킨 후, 정제하여 목적화합물을 제조하였다. LC/MS (ESI) m/z 1070 [M+H]+
< 실시예 8> 7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디올소이소인돌린-4-일)-7-옥소헵탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000027
단계 1: tert -부틸 7-((2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아미노)-7-옥소헵타노에이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000028
7-(tert-부톡시)-7-옥소헵탄산(0.174 g, 0.636 mmol)을 디클로메탄(1 mL)에 녹이고 옥살릴 클로라이드(0.381 mL, 4.45 mmol) 및 한 방울의 DMF를 첨가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물은 감압하여 농축한 후 테트라히드로퓨란(3 mL)에 녹이고 4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(0.1 g, 0.212 mmol)을 첨가한 후 가열 환류하였다. 반응이 완결되면 에틸아세테이트로 희석하고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압 농축, 분리정제하여 목적 화합물(0.174 g)을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.43 (s, 1H), 8.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.74 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.98 (dd, J = 12.4, 5.3 Hz, 1H), 2.96 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 2.91 - 2.73 (m, 2H), 2.49 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.26 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.24 - 2.16 (m, 1H), 1.86 - 1.76 (m, 2H), 1.72 - 1.63 (m, 2H), 1.51 - 1.40 (m, 11H).
단계 2: 7 -((2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아미노)-7-옥소헵탄산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000029
tert-부틸 7-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-7-옥소헵타노에이트 (0.174 g)을 20% 트리플루오르아세트산/디클로로메탄 용액 (5 mL)에 녹인 후 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 목적 화합물을 제조하였고, 정제없이 다음 반응에서 사용하였다.
단계 3: 7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디올소이소인돌린-4-일)-7-옥소헵탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000030
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민 (LDK378, 20 mg, 0.0358 mmol)을 디클로로메탄 (2 mL)에 녹이고 7-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-7-옥소헵탄산 (14.9 mg, 0.0358 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (16.4mg, 0.043mmol), 디이소프로필에틸아민 (9.4uL, 0.054 mmol)을 가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.53 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.70 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.94 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 - 7.58 (m, 1H), 7.55 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.97 (dd, J = 12.3, 5.3 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.59 - 4.49 (m, 1H), 4.01 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.33 - 3.22 (m, 1H), 3.16 (t, J = 12.5 Hz, 1H), 2.98 - 2.85 (m, 2H), 2.85 - 2.73 (m, 2H), 2.70 - 2.60 (m, 1H), 2.51 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.42 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.23 - 2.15 (m, 5H), 1.90 - 1.78 (m, 4H), 1.78 - 1.71 (m, 2H), 1.65 - 1.44 (m, 4H), 1.41 - 1.35 (m, 6H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
< 실시예 9> (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000031
단계 1: ( 2S,4R )-1-((R)-2-(2-(2- 클로로에톡시 ) 아세트아미도 )-3,3- 디메틸부탄오일 )-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000032
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산(0.3 g, 0.697 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고, 2-(2-클로로에톡시) 아세트산(0.095 g, 0.697 mmol), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(0.291 g, 0.767 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.49 mL, 2.79 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 디클로로메탄으로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고 여과한 후, 정제하여 목적하는 화합물(0.113 g)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.42-7.32 (m, 5H), 4.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.61-4.46 (m, 3H), 4.36-4.27 (m, 1H), 4.07 (d, J = 11 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.77-3.72 (m, 2H), 3.67 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.01 (s, 1H), 2.14-2.04 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 0.96 (s, 9H)
단계 2:N -(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소인돌린 -4-일)-2-(4- 아이오도부톡시 )아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000033
(2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-클로로에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드(0.1 g, 0.181 mmol)을 아세톤(3 mL)에 녹이고 요오드화 나트륨(0.272 g, 1.81 mmol)을 첨가한 후, 18 시간 동안 가열 환류하였다. 반응물은 농축한 후, 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(0.082 g, 노란색 오일)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.70 (s, 1H), 7.39-7.33 (m, 5H), 7.25-7.22 (m, 1H), 4.76 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.61-4.54 (m, 2H), 4.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.36-4.30 (m, 1H), 4.12 (d, J = 11 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.78-3.68 (m, 3H), 3.64-3.59 (m, 1H), 3.30 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.63 (s, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.18 (s, 2H), 0.97 (s, 9H).
단계 3: (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000034
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소인돌린-4-일)-2-(4-아이오도부톡시)아세트아미드(23 mg, 0.036 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(13 uL, 0.072 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후, 에틸아세테이트에 희석시키고 물고 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압 증류시킨 후, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.50 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.58 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.34-7.31 (m, 5H), 7.15-7.12 (m, 1H), 6.81 (s, 1H), 5.35 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.76 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.55-4.52 (m, 3H), 4.47 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.35-4.31 (m, 1H), 4.13 (d, J = 11 Hz, 1H), 4.09-3.97 (m, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.63-3.60 (m, 2H), 3.29-3.24 (m, 1H), 3.11 (s, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 0.96 (s, 9H); LC/MS (ESI) m/z1073.1 [M+H]+
< 실시예 10> (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000035
단계 1: ( 2S,4R )-1-((R)-2-(2-(2- 클로로부톡시 ) 아세트아미도 )-3,3- 디메틸부탄오일 )-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000036
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산(0.1 g, 0.232 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고, 2-(4-클로로부톡시) 아세트산(0.051 g, 0.279 mmol), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(0.115 g, 0.302 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.061 mL, 348 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 디클로로메탄으로 희석하고 물과 소금물로 씻어준다. 유기층은 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 여과한 후, 정제하여 목적 화합물(0.1 g, 무색 젤)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z579.2 [M+H]+
단계 2: ( 2R,4R )-4-히드록시-1-((R)-2-(2-(4- 아이오도부톡시 ) 아세트아미도 )-3,3-디메틸부탄오일)-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000037
(2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-클로로부톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드 (0.1 g, 0.167 mmol)을 아세톤 (5 mL)에 녹이고 요오드화 나트륨 (0.251 g, 1.67 mmol)을 첨가한 후 18시간 동안 가열 환류하였다. 반응물은 농축한 후, 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(0.048 g, 노란색 오일)을 제조하였다.
단계 3: (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000038
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민 (LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드 (2 mL)에 녹이고 (2R,4R)-4-히드록시-1-((R)-2-(2-(4-아이오도부톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드 (24 mg, 0.036 mmol)과 디이소프로필에틸아민 (13 uL, 0.072 mmol)을 첨가후 상온에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후 에틸아세테이트에 희석시키고 물고 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압증류 시킨 후, 정제하여 목적 화합물(10 mg, 아이보리 젤)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z1100.3 [M+H]+
< 실시예 11> (2S,4R)-1-((R)-2-(7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-7-옥소헵탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000039
단계1 : tert -부틸 7-(((R)-1-((2R,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-7-옥소헵타노에이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000040
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산(0.1 g, 0.232 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고, 7-(tert-부톡시)-7-옥소헵탄산(0.065 g, 0.279 mmol), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(0.115 g, 0.302 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.061 mL, 348 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 디클로로메탄으로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고 여과한 후 정제하여 목적 화합물(0.162 g, 무색 젤)을 제조하였다.
단계 2: 7 -(((R)-1-(( 2R,4R )-4-히드록시-2-((4-(4- 메틸티아졸 -5-일) 벤질 ) 카바모일 )피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-7-옥소헵탄산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000041
tert-부틸 7-(((R)-1-((2R,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-7-옥소헵타노에이트(0.16 g, 0.232 mmol)을 20% 트리플루오로아세트산/디클로로메탄(5 mL)에 녹인 후, 상온에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축 후, 정제하여 목적 화합물(0.135 g, 흰색 고체)을 제조하였다.
단계 3: (2S,4R)-1-((R)-2-(7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-7-옥소헵탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000042
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 디클로로메탄(2 mL)에 녹이고 7-(((R)-1-((2R,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-7-옥소헵탄산(24 mg, 0.036 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(16.3 mg, 0.043 mmol), 디이소프로필에틸아민(7 uL, 0.054 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(20 mg, 흰색 고체)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1113.3 [M+H]+
< 실시예 12> 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000043
단계 1: N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)-2-(2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)에톡시)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000044
tert-부틸 2-(2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)에톡시)아세테이트(0.2 g, 0.899 mmol)을 20% 트리플루오로아세트산/디클로로메탄 용액(1 mL)에 녹인 후, 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축한 후, 테트라히드로퓨란(2 mL)에 녹이고 티오닐클로라이드(0.162 mL, 2.24 mmol)을 첨가한 후, 60℃에서 1시간 동안 가열 환류하였다. 반응물을 농축한 후, 테트라히드로퓨란(2 mL)에 녹인 후 4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(82 mg, 0.297 mmol)을 가하고 80℃에서 12시간 동안 가열 환류하였다. 반응종결 후, 고체물질은 여과하여 제거하고 여과액은 에틸아세테이트에 희석시킨 후 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 8.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 7.2 Hz, 0.6 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 12.3 Hz, 5.4 Hz, 1H), 4.22 (s, 2H), 3.84 - 3.79 (m, 6H), 3.67 - 3.63 (m, 2H), 2.96 - 2.74 (m, 3H), , 2.19 - 2.13 (m, 1H)
단계 2: 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2-(2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)에톡시)아세트아미드(41 mg, 0.072 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(13 uL, 0.072 mmol)을 첨가한 후 90℃에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후, 에틸아세테이트에 희석시키고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압 증류시킨 후, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 10.66 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.92 - 4.89 (m, 1H), 4.57 - 4.52 (m, 1H), 4.22 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.148 (d, J = 15 Hz, 1H), 3.85 - 3.68 (m, 8H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 3.19 - 3.17 (m, 2H), 2.88 - 2.79 (m, 2H), 2.73 - 2.66 (m, 3H), 2.57 - 2.52 (m, 1H), 2.22 - 2.16 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.05 (s, 1H), 2.01 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.75 - 1.73 (m, 3H), 1.35 (t, J = 6.0 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 7.0 Hz, 6H)
< 실시예 13> 2-(4-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000046
단계 1: 2 -(4- 클로로부톡시 )-N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이 소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000047
2-(4-클로로부톡시)아세트산(0.5 g, 3 mmol)을 테트라히드로퓨란(5 mL)에 녹이고, 티오닐클로라이드(0.544 mL, 7.5 mmol)을 첨가한 후, 60℃에서 1시간 동안 가열 환류하였다. 반응물을 농축한 후, 테트라히드로퓨란(5 mL)에 녹인 뒤, 4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(0.273 g, 1 mmol)을 가하고 80℃에서 12시간 동안 가열 환류하였다. 반응종결 후, 고체물질은 여과하여 제거하고 여과액은 에틸아세테이트에 희석시킨 후 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산 마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z422 [M+H]+
단계 2: 2 -(4- 아이오도부톡시 )-N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소 이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000048
상기 단계 1에서 제조한 화합물(0.2 g, 0.474 mmol)을 아세톤(10 mL)에 녹이고, 요오드화나트륨(0.71 g, 4.74 mmol)을 첨가한 후, 18시간 동안 가열 환류하였다. 반응물은 농축한 후 에틸아세테이트로 희석하고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산 마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압농축, 정제하여 목적하는 화합물을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.70 (s, 1H), 7.39-7.33 (m, 5H), 7.25-7.22 (m, 1H), 4.76 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.61-4.54 (m, 2H), 4.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.36-4.30 (m, 1H), 4.12 (d, J = 11 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.78-3.68 (m, 3H), 3.64-3.59 (m, 1H), 3.30 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.63 (s, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.18 (s, 2H), 0.97 (s, 9H)
단계 3: 2-(4-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000049
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 상기 단계 2에서 제조한 화합물(24 mg, 0.036 mmol)과 디이소프로필에틸아민(13 uL, 0.072 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후, 에틸아세테이트에 희석시키고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산 마그네슘으로 건조, 여과, 감압증류 시킨 후, 정제하여 목적하는 화합물을 수득하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.56 (s, 1H), 9.52 (s, 1H), 8.87 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.94 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.78 - 7.69 (m, 1H), 7.66 - 7.61 (m, 1H), 7.61 - 7.56 (m, 2H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.22 - 4.08 (m, 2H), 3.77 - 3.63 (m, 2H), 3.47 - 3.21 (m, 2H), 2.94 - 2.62 (m, 5H), 2.26 - 2.11 (m, 4H), 1.95 - 1.76 (m, 6H), 1.37 (dd, J = 6.0, 1.8 Hz, 5H), 1.33 (d, J = 6.9 Hz, 6H). LC/MS (ESI) m/z 943.2 [M+H]+
< 실시예 14> 2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000050
단계 1: tert-부틸 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)아세테이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000051
2-(2-클로로에톡시)에탄-1-올(1.0 eq.)과 tert-부틸 2-브로모아세테이트(1.2 eq.)를 테트라히드로퓨란에 녹인 후, 칼륨 tert-부톡사이드(1.5 eq.)를 첨가하고 상온에서 교반하였다. 반응 종결 후, 에틸아세테이트와 물로 씻어주고, 유기층을 추출하여 물과 소금물로 씻어주었다. 무수 황산마그네슘으로 물을 제거한 후, 감압 농축한 후, 분리, 정제하여 tert-부틸 2-(2-클로로에톡시)아세테이트를 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.04 (s, 1H), 3.79 - 3.75 (m, 2H), 3.74 - 3.68 (m, 8H), 3.66 - 3.62 (m, 2H), 1.49 (s, 9H)
단계 2: 2 -(2-(2- 클로로에톡시 ) 에톡시 )아세트산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000052
20%의 트리플루오로아세트산/디클로로메탄용액에 상기 단계 1에서 제조한 화합물을 첨가하고 상온에서 교반하였다. 반응 종결 후, 혼합물을 농축하여 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)아세트산을 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 11.14 (s, 1H), 4.24 (s, 2H), 3.82 - 3.74 (m, 6H), 3.65 (t, J = 5.7 Hz, 2H)
단계 3: 2 -(2-(2- 클로로에톡시 ) 에톡시 )-N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000053
상기 단계 2에서 제조한 화합물(3.0 eq.)을 테트라히드로퓨란에 녹이고, 티오닐 클로라이드(7.5 eq.)를 첨가한 뒤, 60℃에서 교반하였다. 반응이 종결된 후, 혼합물을 농축하고, 테트라히드로퓨란에 녹인 뒤, 포말리도마이드(1.0 eq.)를 첨가하고 60℃에서 교반하였다. 반응 종결 후, 혼합물을 농축하고 분리정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 8.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 7.2 Hz, 0.6 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 12.3 Hz, 5.4 Hz, 1H), 4.22 (s, 2H), 3.84 - 3.79 (m, 6H), 3.67 - 3.63 (m, 2H), 2.96 - 2.74 (m, 3H), , 2.19 - 2.13 (m, 1H)
단계 4: N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)-2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000054
상기 단계 3에서 제조한 화합물(1.0 eq.)을 아세톤에 녹이고, 요오드화나트륨(10.0 eq.)을 첨가한 뒤, 80℃에서 교반하였다. 반응 종결 후, 혼합물은 농축하여 N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)아세트아미드를 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 8.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.73 (t, J = 7.8, 1H), 7.60 - 7.57 (m, 1H), 5.01 - 4.94 (m, 1H), 4.22 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 3.84 - 379 (m, 6H), 3.67 - 3.63 (m, 1H), 3.29 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 2.95 - 2.74 (m, 3H), 2.19 - 2.13 (m, 1H)
단계 5: 2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000055
상기 단계 4에서 제조한 화합물(1.0 eq.)과 LDK378(1.0 eq.)을 디메틸포름아미드에 녹이고, 디이소프로필에틸아민(2.5 eq.)를 첨가하여 90℃에서 교반하였다. 반응이 종결된 후, 혼합물을 농축, 분리 정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 10.66 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.92 - 4.89 (m, 1H), 4.57 - 4.52 (m, 1H), 4.22 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.148 (d, J = 15 Hz, 1H), 3.85 - 3.68 (m, 8H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 3.19 - 3.17 (m, 2H), 2.88 - 2.79 (m, 2H), 2.73 - 2.66 (m, 3H), 2.57 - 2.52 (m, 1H), 2.22 - 2.16 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.05 (s, 1H), 2.01 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.75 - 1.73 (m, 3H), 1.35 (t, J = 6.0 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 7.0 Hz, 6H)
< 실시예 15> 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000056
단계 1: tert -부틸 2-(2- 클로로에톡시 )아세테이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000057
상기 실시예 14의 단계 1에서 사용한 2-(2-클로로에톡시)에탄-1-올을 대신하여 2-클로로에탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 14의 단계 1과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.04 (s, 1H), 3.79 - 3.75 (m, 2H), 3.74 - 3.68 (m, 8H), 3.66 - 3.62 (m, 2H), 1.49 (s, 9H)
단계 2: 2-(2-클로로에톡시)아세트산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000058
상기 단계 1에서 제조한 화합물을 사용하여, 상기 실시예 14의 단계 2와 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 11.11 (s, 1H), 4.26 (s, 2H), 3.87 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.69 (t, J = 5.5 Hz, 2H)
단계 3: 2 -(2- 클로로에톡시 )-N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이 소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000059
상기 단계 2에서 제조한 화합물을 사용하여, 상기 실시예 14의 단계 3과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 10.46 (s, 1H), 8.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.74 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 12.5 Hz, 5.5 Hz, 1H), 4.23 (s, 2H), 3.95 - 3.92 (m, 2H), 3.81 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.96 - 2.73 (m, 3H), 2.20 - 2.15 (m, 1H)
단계 4: N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)-2-(2-아이오도에톡시)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000060
상기 단계 3에서 제조한 화합물을 사용하여, 상기 실시예 14의 단계 4와 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.45 (s, 1H), 8.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.74 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 7.2 Hz, 0.6 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 12.3 Hz, 5.4 Hz, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.93 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.42 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.97 - 2.75 (m, 3H), 2.20 - 2.15 (m, 1H)
단계 5: 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000061
상기 단계 4에서 제조한 화합물을 사용하여, 상기 실시예 14의 단계 5와 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 8.88 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.93 (dd, J = 4.8 Hz, J = 0.6 Hz, 1H), 7.73 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.64 - 7.61 (m, 1H), 7.59 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.52 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.94 (dd, J = 7.2 Hz, J = 3.0 Hz, 1H), 4.54 - 4.52 (m, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 3.14 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 2.91 - 2.69 (m, 6H), 2.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H), 2.14 - 2.13 (m, 1H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.76 (s, 4H), 1.63 (s, 1H), 1.35 (d, J = 3.6 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 4.2 Hz, 6H)
< 실시예 16> (2S,4R)-1-((R)-1-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-14,14-디메틸-11-옥소-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데칸카보닐)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸싸이아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000062
단계 1: tert -부틸 2-(2-(2-(2- 클로로에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 )아세테이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000063
2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄올(1 g, 5.42 mmol)과 tert-부틸 브로모아세테이트(0.8 mL, 5.42 mmol)를 테트라히드로퓨란(10 mL)에 녹이고, KOtBu(0.638 g, 5.69 mmol)을 0℃에서 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되면 물 및 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고 여과, 농축, 분리정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 4.04 (s, 1H), 3.83 - 3.58 (m, 5H), 1.49 (s, 4H).
단계 2: tert -부틸 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)아세테이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000064
LDK378(50 mg, 0.09 mmol), 상기 단계 1에서 제조한 화합물(27 mg, 0.09 mmol), Cs2CO3(59 mg, 0.18 mmol), 요오드화 칼륨(3 mg, 0.018 mmol)을 DMF(1 mL)에 녹인 후, 상온에서 교반하였다. 반응물은 물과 에틸아세테이트로 추출하고, 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 농축, 분리정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.50 (s, 1H), 8.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 8.05 - 7.98 (m, 1H), 7.94 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.63 - 4.47 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.76 - 3.57 (m, 10H), 3.38 - 3.21 (m, 1H), 3.14 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.28 - 2.10 (m, 5H), 1.91 - 1.72 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.35 (m, 13H).
단계 3: tert -부틸 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)아세트산 염산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000065
상기 단계 2에서 제조한 화합물(37 mg, 0.090 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹이고, 4 N 염산/디옥산(1 mL)용액을 첨가한 후, 상온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여, 정제 과정 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 4: (2S,4R)-1-((R)-1-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-14,14-디메틸-11-옥소-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데칸카보닐)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸싸이아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000066
상기 단계 3에서 제조한 화합물(10 mg, 13 mmol), (2S,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드 염산(6 mg, 13 mmol), HATU(7.4 mg, 19.5 mmol), 디이소프로필에틸아민(9.1 uL, 52 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹이고, 상온에서 교반하였다. 반응물은 물과 디클로메탄으로 추출하고, 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압농축, 분리정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LC/MS (ESI) m/z 1190.7[M+H-15]+
< 실시예 17> 6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)헥산아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000067
상기 실시예 4의 단계 1에서 사용한 5-브로포펜산오일을 대신하여, 5-브로모헥산오일을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 4와 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300MHz) δ 9.49 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7,72 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.28 - 7.23 (m merged with CHCl3, 1H), 6.84 (br, 1H), 4.96 (dd, J = 12.0, 6.0 Hz, 1H), 4.60 - 4.50 (m, 1H), 3.31 - 3.22 (m, 1H), 3.14 (br, 2H), 2.96 - 2.70 (m, 5H), 2.49 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.86 - 1.61 (m, 9H), 1.52 - 1.39 (m, 3H), 1.35 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 6.9 Hz, 6H)
< 실시예 18> (2R,4S)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-6-옥소헥산아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000068
상기 실시예 3에서 사용한 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄산을 대신하여, 6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-6-옥소헥산산을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 3과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 9.51 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.58 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.03 (s,1H), 7.93 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 5H), 7.29 - 7.23 (m, merged with CHCl3, 1H), 6.68 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 15.0, 7.8 Hz, 1H), 4.77 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.59 - 4.50 (m, 4H), 4.34 (dd, J= 15.3, 5.4 Hz, 1H), 4.11 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.96 (d, J =13.2 Hz, 1H), 3.59 (dd, J = 11.7, 3.6 Hz, 1H), 3.54 - 3.44 (m, 1H), 3.31 - 3.22 (m, 1H), 3.11 (t, J =12.9 Hz, 1H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.37 - 2.22 (m, 4H), 2.17 (s, 3H), 2.14 - 2.11 (m, 1H), 1.81 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 1.68 - 1.66 (m, 6H), 1.58 - 1.38 (m, 2H), 1.36 (dd, J = 5.7, 2.1 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.25 (s, 1H), 0.94 (s, 9H)
< 실시예 19> (2R,4S)-1-((S)-2-(2-(3-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)프로폭시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000069
상기 실시예 10의 단계 1에서 사용한 2-(4-클로로부톡시)아세트산을 대신하여, 2-(5-클로로프로폭시)아세트산을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 10과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1113.3 [M+H]+
< 실시예 20> 2-(3-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)프로폭시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000070
상기 실시예 13의 단계 1에서 사용한 2-(4-클로로부톡시)아세트산을 대신하여, 2-(5-클로로프로폭시)아세트산을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 13과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1113.3 [M+H]+
< 실시예 21> (2R,4S)-1-((R)-2-(2-((5-(4-(4-((5-chloro-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜틸)옥시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000071
상기 실시예 10의 단계 1에서 사용한 2-(4-클로로부톡시)아세트산을 대신하여, 2-(5-클로로펜톡시)아세트산을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 10과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1114 [M+H]+
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
이하 설명은 발명의 이해를 돕기 위해서 제시하는 것이며, 본 발명이 이하 설명의 내용으로 제한되지 않는다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure PCTKR2017002830-appb-I000072
상기 화학식 1에 있어서,
Linker는 -(CH2)-, -(C=O)-, -NH- 및 -O-로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상이 3-20개 연결된 연결기(linker)이되,
상기 연결기는 연속하여 -O-로 연결될 수 없고; 및
A는
Figure PCTKR2017002830-appb-I000073
또는
Figure PCTKR2017002830-appb-I000074
이다.
바람직하게,
상기 Linker는,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000075
이되,
여기서, 상기 a 및 i는 독립적으로 0 또는 1이되, 동시에 0일 수 없고;
상기 b는 0-20의 정수이고;
상기 c는 0 또는 1이고;
상기 d는 0-3의 정수이고;
상기 e는 0 또는 1이고;
상기 f는 1-10의 정수이고;
상기 g는 0 또는 1이고;
상기 h는 0-3의 정수이고;
상기 j 및 k는 독립적으로 0-5의 정수이다.
보다 바람직하게,
상기 Linker는,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000076
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000077
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000078
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000079
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000080
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000081
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000082
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000083
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000084
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000085
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000086
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000087
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000088
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000089
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000090
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000091
,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000092
, 또는
Figure PCTKR2017002830-appb-I000093
이다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 바람직한 예로는 하기의 화합물들을 들 수 있다.
(1) 5-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일아미노)부틸)-5-옥소펜탄아미드;
(2) (2S,4R)-1-((R)-2-(tert-부틸)-17-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-4,13,17-트리옥소-6,9-디옥사-3,12-디아자헵타데칸-1-오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아마이드;
(3) (2S,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드;
(4) 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드;
(5) 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-5-옥소펜탄아미드;
(6) 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세타미드;
(7) (2R,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드;
(8) 7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디올소이소인돌린-4-일)-7-옥소헵탄아미드;
(9) (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
(10) (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
(11) (2S,4R)-1-((R)-2-(7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-7-옥소헵탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
(12) 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드;
(13) 2-(4-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드;
(14) 2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드;
(15) 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드;
(16) (2S,4R)-1-((R)-1-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-14,14-디메틸-11-옥소-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데칸카보닐)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸싸이아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
(17) 6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)헥산아미드;
(18) (2R,4S)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-6-옥소헥산아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
(19) (2R,4S)-1-((S)-2-(2-(3-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)프로폭시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
(20) 2-(3-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)프로폭시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드; 및
(21) (2R,4S)-1-((R)-2-(2-((5-(4-(4-((5-chloro-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜틸)옥시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 다이하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 디클로로메탄, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜서 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
A-H로 표시되는 화합물과, Linker-X로 표시되는 화합물을 반응시켜 A-Linker-X로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 A-Linker-X로 표시되는 화합물을 A-Linker-Y로 표시되는 화합물로 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조한 A-Linker-Y로 표시되는 화합물과, 화학식 2로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다:
[반응식 1]
Figure PCTKR2017002830-appb-I000094
상기 반응식 1에서,
Linker, 및 A는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및
X와 Y는 X가 -CO2-tBu인 경우, Y는 -CO2H이고, X가 Cl 또는 Br인 경우, Y는 I이다.
이하, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 A-H로 표시되는 화합물과, Linker-X로 표시되는 화합물을 반응시켜 A-Linker-X로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 단계는 연결기(Linker) 도입 단계로 생각될 수 있으며, 해당 분야에 사용될 수 있는 연결기 도입 방법이라면 특별히 제한되지 않고, 예를 들어, 보호기를 사용한 방법, 말단의 Cl 또는 Br을 I로 치환하여 도입하는 방법이 있을 수 있다. 보다 구체적인 실례로 하기 본 발명의 실시예 화합물의 제조방법에 제시되어 있는 방법을 사용할 수 있고, 이를 변형하거나 응용하여 수행할 수 있다.
또한, 상기 단계에서 사용 가능한 용매로는 H2O, 에탄올, 테트라하이드로퓨란(THF), 디클로로메탄, 톨루엔, 아세토니트릴, 디메틸포름아미드 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 사용할 수 있다.
또한, 상기 단계에서 반응온도는 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게 20-90℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-20시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 제조한 A-Linker-X로 표시되는 화합물을 A-Linker-Y로 표시되는 화합물로 제조하는 단계이다.
이때, 상기 단계는 보호기를 제거하는 단계, 말단의 Cl 또는 Br을 I로 치환하는 단계이다. 보다 구체적인 실례로 하기 본 발명의 실시예 화합물의 제조방법에 제시되어 있는 방법을 사용할 수 있고, 이를 변형하거나 응용하여 수행할 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 제조한 A-Linker-Y로 표시되는 화합물과, 화학식 2로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 단계는 역형성 림프종 키나제(ALK)에 결합할 수 있고, 저해할 수 있는 화학식 2로 표시되는 화합물을 상기 단계 2에서 제조한 A-Linker와 연결시키는 단계이다.
또한, 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 역형성 림프종 키나제(ALK)와 결합하거나 저해할 수 있는 화합물이라면, 본 발명의 방법으로 응용하여 적용할 수 있고 이로부터 본 발명의 A로 표시되는 화합물과 Linker로 연결되어 역형성 림프종 키나제(ALK)를 저해 또는 분해할 수 있는 특징이 있다. 여기서, 상기 A로 표시되는 화합물은 역형성 림프종 키나제를 분해시킬 수 있는 효소와 결합을 형성하여 역형성 림프종 키나제 분해를 유도하는 역할을 수행하는 특징이 있다.
A로 표시되는 화합물은 상기 본 발명의 화학식 1에서 제시된 바와 같이,
Figure PCTKR2017002830-appb-I000095
또는
Figure PCTKR2017002830-appb-I000096
일 수 있고, 해당 분야의 당업자라면, 이와 유사하게 변형하거나 응용하여 적용시킬 수 있다.
또한, 상기 단계에서 사용 가능한 용매로는 H2O, 에탄올, 테트라하이드로퓨란(THF), 디클로로메탄, 톨루엔, 아세토니트릴, 디메틸포름아미드 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 사용할 수 있다.
또한, 상기 단계에서 반응온도는 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게 20-90℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-20시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
상기 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1 내지 3은 상호 도치되어 수행되거나, 링커(Linker)를 분할하여 도입하는 방법으로 수행될 수 있다.
예를 들어, 상기 반응식 1로 표시되는 제조방법은 A-H로 표시되는 화합물에 링커(Linker)를 도입한 뒤, 화학식 2로 표시되는 화합물과 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 것이나, 예를 들어, 각각 화학식 2로 표시되는 화합물에 먼저 링커(Linker)를 도입하고, A로 표시되는 화합물에 링커(Linker)를 도입한 뒤, 상호 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.
보다 면밀하게, 하기 실시예 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 예로 들 수 있는데, 하기 반응식 2에 나타난 바와 같이 수행할 수 있다.
[반응식 2]
Figure PCTKR2017002830-appb-I000097
상기 반응식 2를 살펴보면,
실시예 1 화합물은,
각각, 화학식 2로 표시되는 화합물 및 A로 표시되는 화합물에, 링커(Linker)를 도입하는 단계;(단계 1) 및
상기 단계 1에서 제조된 각각의 화합물을 상호 반응시켜 실시예 1 화합물을 제조하는 단계;(단계 2)로 수행되는 것을 확인할 수 있다.
상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법은 반응식 1 또는 반응식 2와 같이 수행될 수 있고, 이로부터 변형하거나 수정하여 수행될 수 있는 제조방법을 포함하고 있다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 역형성 림프종 키나아제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
여기서, 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환은 하기에 제한되지 않으나, 역형성 림프종 키나제(ALK)로부터 발현될 수 있는 모든 질병을 말한다. 특히, 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환의 예로 암을 들 수 있는데, 암 세포의 세포증식과 관련되어 역형성 림프종 키나제(ALK)로부터 기인한 경우, 본 발명의 화합물, 이의 광학이성질체 및 이로부터 허용 가능한 염은 역형성 림프종 키나제(ALK)를 억제하거나 분해하여, 상기 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환으로 언급된 질병의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
여기서, 상기 화합물은 역형성 림프종 키나제(ALK)를 억제하거나 분해하여 암을 예방 또는 치료하는 것을 특징으로 할 수 있고, 상기 암은 예를 들어, 대장암, 간암, 위암, 유방암, 결장암, 골암, 췌장암, 두부 또는 경부암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 전립선암, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종 중추신경계 종양 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상의 것이 될 수 있다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 역형성 림프종 키나아제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
여기서, 상기 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환은 예를 들어, 대장암, 간암, 위암, 유방암, 결장암, 골암, 췌장암, 두부 또는 경부암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 전립선암, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종 중추신경계 종양 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상의 것이 될 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용 액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁 용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001-100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01-35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70 ㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07-7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7-2500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
본 발명에 따른 화합물은 ALK 단백질 저해활성, 분해활성, 및 암 성장 억제활성을 갖는 것으로 확인되었다.
먼저, 본 발명에 따른 화합물의 ALK 단백질 저해활성 평가 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 1 내지 16 화합물의 ALK 저해활성 IC50 값은 10 내지 150의 나노몰 농도로 나타났으며, 이로부터 본 발명의 화합물이 ALK 단백질을 우수하게 저해하는 것으로 판단하였다.
또한, 본 발명에 따른 화합물의 ALK 단백질 분해활성 평가 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 1 내지 16 화합물은 ALK 단백질을 300 nM의 농도에서 우수하게 분해할 수 있으며, 특히 실시예 3, 4, 10 및 11 화합물은 300 nM의 농도에서 50 % 초과의 분해활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따른 화합물은 ALK 단백질을 나노몰 단위의 농도로 우수하게 분해할 수 있으며, 이로부터 ALK 관련 질환의 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있는 것으로 판단하였다.
나아가, 본 발명에 따른 화합물의 암 성장 억제활성 평가를 수행하기 위해 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 3 화합물을 투여한 실험군 SCID 마우스는 투여 경과일이 흐름에 따라 종양 크기가 발달하지 않고 유지되거나 줄어드는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물은 상기 실험예 3에서 확인되는 바와 같이, 암 성장 억제 활성을 갖는 것으로 확인되어, 이를 함유하는 약학적 조성물로서 암의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있는 것으로 판단하였다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 5-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일아미노)부틸)-5-옥소펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000098
단계 1: tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일아미노)부틸카바메이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000099
tert-부틸 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온(20 mg, 0.072 mmol)을 디메틸포름아미드(0.5 mL)에 녹이고, tert-부틸 (4-아미노부틸)카바메이트(14 uL, 0.072 mmol) 및 디아이소프로필에틸아민(21 uL, 0.144 mmol)을 혼합한 후, 90℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응이 종결된 후, 온도를 상온으로 낮춘 후, 에틸아세테이트로 희석시키고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층의 잔류물은 무수 황산 마그네슘으로 건조하고, 여과 및 농축한 후 정제하여 목적하는 화합물(51%, 녹색젤)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.26 (s, 1H), 7.50 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.26 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 5.01 - 4.88 (m, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.32 (q, J = 6.3 Hz, 2H), 3.26 - 3.15 (m, 2H), 2.95 - 2.69 (m, 3H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 1.77 - 1.57 (m, 4H), 1.46 (s, 9H). LC/MS (ESI) m/z 445 [M+H]+
단계 2: 4 -(4- 아미노부틸아미노 )-2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일) 이소인돌린 -1,3-디온 염산염의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000100
상기 단계 1에서 제조한 화합물(81 mg, 0.182 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹이고, 4 N 염산을 포함하는 1,4-디옥산 용액(1 mL)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응용액은 감압 농축하여 목적 화합물을 수득하였고, 수득된 화합물을 추가적인 정제과정 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: 5 -(4-(4-(5- 클로로 -4-(2-( 이소프로필설포닐 ) 페닐아미노 )피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000101
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 0.5 g, 0.9 mmol)과 글루타르산 무수물(0.112 g, 9.85 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고, 테트라에틸아민(0.151 mL, 1.08 mmol) 및 촉매량의 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘을 첨가하고 상온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 종결 후, 반응물은 디클로로메탄에 희석시킨 후, 물, 포화 염화암모늄 수용액, 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조시킨 후, 감압 농축하여 목적 화합물(0.5 g, 흰색 고체)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.56 (s, 1H), 8.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.98 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.69 - 7.54 (m, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.84 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.64 - 4.47 (m, 1H), 4.03 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.38 - 3.24 (m, 1H), 3.24 - 3.12 (m, 1H), 2.92 (t, J = 12.1 Hz, 1H), 2.67 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 2.58 - 2.44 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.11 - 1.98 (m, 2H), 1.85 (s, 2H), 1.70 - 1.52 (m, 2H), 1.42 - 1.27 (m, 12H); LC/MS (ESI) m/z 672.2 [M+H]+
단계 4 : 5-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일아미노)부틸)-5-옥소펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000102
상기 단계 3에서 제조한 화합물(20 mg, 0.031 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹인 후, 상기 단계 2에서 제조한 화합물(11.8 mg, 0.031 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(16.1 mg, 0.031 mmol) 및 트리에틸아민(11 uL, 0.078 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물을 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 998.2 [M+H]+
< 실시예 2> (2S,4R)-1-((R)-2-(tert-부틸)-17-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-4,13,17-트리옥소-6,9-디옥사-3,12-디아자헵타데칸-1-오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아마이드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000103
단계 1: tert -부틸 2-(2-(2-(((R)-1-((2R,4R)-4-히드록시-2-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-2-옥소에톡시)에톡시)에틸카바메이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000104
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산염(0.42 g, 1.187 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(5 mL)에 녹이고, 2,2-디메틸-4-옥소-3,8,11-트리옥사-5-아자트리데칸-13-오익산(0.275 mg, 1.187 mmol), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(0.496 g, 1.3 mmol) 및 디에틸이소프로필에틸아민(0.83 mL, 4.75 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물을 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어준다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고 여과한 후, 정제하여 목적 화합물(0.54 g, 노란색 오일)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 676[M+H]+
단계 2: (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)아세트아마이도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아마이드 염산염의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000105
상기 단계 1에서 제조한 화합물(0.54 g, 0.799 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고 4 N 염산을 포함하는 1,4-디옥산(5 mL)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 감압 농축하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 612 [M+H]+
단계 3: (2S,4R)-1-((R)-2-(tert-부틸)-17-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-4,13,17-트리옥소-6,9-디옥사-3,12-디아자헵타데칸-1-오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아마이드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000106
5-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄산(10 mg)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹인 후, 상기 단계 2에서 제조한 화합물(8 mg), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(7.4 mg) 및 디이소프로필에틸아민(9.1 uL)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(12 mg, 흰색 고체)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1231 [M+H-15]+
< 실시예 3> (2S,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000107
5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄산(10 mg)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹인 후, (2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산(7 mg), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(7.4 mg), 디이소프로필에틸아민(9.1 uL)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(14 mg, 흰색 고체)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1084.0 [M+H]+
< 실시예 4> 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000108
단계 1: 5 - 브로포 -N-(2-(2,6- 이동소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000109
4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.1 g, 0.37 mmol)을 테트라히드로퓨란 (2 mL)에 녹이고 5-브포모펜탄오일 클로라이드 (0.049 mL, 0.37 mL)을 첨가후 4시간동안 가열환류하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 감압 농축하고 분리정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.16 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 8.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.15 (m, 1H), 3.58 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.02 - 2.80 (m, 2H), 2.69 - 2.54 (m, 3H), 2.14 - 1.99 (m, 1H), 1.97 - 1.82 (m, 2H), 1.82 - 1.67 (m, 2H).
단계 2: 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000110
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 5-브로포-N-(2-(2,6-이동소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드(15.6 mg, 0.036 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(16 uL, 0.09 mmol)을 첨가한 후, 90℃에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축한 후 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.52 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.82 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.01 - 7.92 (m, 1H), 7.74 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 - 7.49 (m, 3H), 7.27 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 5.05 - 4.95 (m, 1H), 4.60 (brs, 1H), 3.32 - 3.25 (brs, 2H), 3.32 - 3.24 (m, 1H), 2.99 - 2.89 (m, 2H), 2.89 - 2.71 (m, 4H), 2.63 - 2.53 (m, 3H), 2.26 - 2.14 (m, 5H), 1.85 (br, 6H), 1.37 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
< 실시예 5> 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-5-옥소펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000111
단계 1: 5 -((2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아미노)-5-옥소펜탄산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000112
4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(0.1 g, 0.37 mmol)을 아세트산(2 mL)에 녹이고 디히드로-2H-피란-2,6(3H)-디온(0.23 g), 칼륨 아세테이트(0.108 g, 1.1 mmol)를 첨가한 후, 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축, 분리정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.14 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.90 - 7.78 (m, 1H), 7.62 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 12.8, 5.4 Hz, 1H), 2.98 - 2.83 (m, 1H), 2.67 - 2.53 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 2H), 1.76 - 1.63 (m, 1H).
단계 2: 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-5-옥소펜탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000113
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 14.4 mg, 0.026 mmol)을 디클로로메탄(2 mL)에 녹이고 5-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-5-옥소펜탄산(10 mg, 0.026 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(11.8 mg, 0.031 mmol), 디이소프로필에틸아민(6.7 uL, 0.039 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.53 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.96 - 7.92 (m, 1H), 7.72 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 2H), 7.56 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.27 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.01 - 4.95 (m, 1H), 4.84 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.60 - 4.52 (m, 1H), 4.04 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.33 - 3.23 (m, 1H), 3.17 (t, J = 12.4 Hz, 1H), 2.95 - 2.87 (m, 2H), 2.87 - 2.74 (m, 2H), 2.70 - 2.60 (m, 3H), 2.54 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.18 - 2.10 (m, 3H), 1.84 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 1.65 - 1.52 (m, 2H), 1.40 - 1.35 (m, 6H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 6H). LC/MS (ESI) m/z 927 [M+H]+
< 실시예 6> 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세타미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000114
단계 1: 2 -(2-((2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아미노)-2-옥소에톡시)아세트산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000115
4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.1 g, 0.37 mmol)을 아세트산 (2 mL)에 녹이고 1,4-디옥산-2,6-디온 (0.21 g, 1.83 mmol), 칼륨 아세테이트 (0.108 g, 1.1 mmol) 을 첨가후 90 도에서 12시간동안 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축, 분리정제하여 목적 화합물 (55 mg, 아이보리 고체)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO) δ 11.14 (s, 2H), 10.61 (s, 2H), 8.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.87 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 5.16 (dd, J = 12.9, 5.3 Hz, 2H), 4.25 (s, 4H), 4.08 (s, 4H), 3.17 (s, 2H), 3.00 - 2.79 (m, 3H), 2.70 - 2.52 (m, 4H), 2.17 - 2.01 (m, 2H).
단계 2: 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000116
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 디클로로메탄(2 mL)에 녹이고 2-(2-((2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-2-옥소에톡시)아세트산(14 mg, 0.036 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(16.4 mg, 0.043 mmol), 디이소프로필에틸아민(9.4 uL, 0.054 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.45 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 8.84 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.95 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.28 - 7.21 (m, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.99 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 1H), 4.47 (q, J = 14.2 Hz, 2H), 4.40 - 4.29 (m, 2H), 3.84 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.35 - 3.25 (m, 1H), 3.19 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 2.99 - 2.85 (m, 2H), 2.81 - 2.68 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.18 - 2.12 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 2H), 1.73 - 1.52 (m, 2H), 1.45 - 1.31 (m, 12H). LC/MS (ESI) m/z 927 [M+H]+
< 실시예 7> (2R,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000117
단계 1: ( 2S,4R )-1-((R)-2-(5- 브로모펜탄아미도 )-3,3- 디메틸부탄오일 )-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000118
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산을 디클로로메탄에 녹이고 5-브포모펜탄오일 클로라이드과 디이소프로필에틸아민을 첨가 후 상온에서 교반하였다. 반반응이 종결되고, 반응물은 디클로로메탄으로 희석하고 물과 소금물로 씻어준 후, 유기층은 무수황산마그네슘으로 건조, 감압 농축하고, 분리정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.39-7.29 (m, 4H), 6.11 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.61-4.48 (m, 3H), 4.35-4.30 (m, 1H), 4.08 (d, J = 11 Hz, 1H), 3.71-3.64 (m, 1H), 3.62-3.59 (m, 1H), 3.39 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.15-3.10 (m, 3H), 3.01 (s, 1H), 2.61-2.57 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.24 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.16-2.09 (m, 1H), 1.84-1.71 (m, 8H), 0.93 (s, 9H))
단계 2: (2R,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000119
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 (2S,4R)-1-((R)-2-(5-브로모펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드(21 mg, 0.036 mmol), 요오드화 나트륨(5.4 mg, 0.036 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(9.4 uL, 0.054 mmol)을 첨가한 후 60℃에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후 에틸아세테이트에 희석시키고 물고 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압 증류시킨 후, 정제하여 목적화합물을 제조하였다. LC/MS (ESI) m/z 1070 [M+H]+
< 실시예 8> 7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디올소이소인돌린-4-일)-7-옥소헵탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000120
단계 1: tert -부틸 7-((2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아미노)-7-옥소헵타노에이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000121
7-(tert-부톡시)-7-옥소헵탄산(0.174 g, 0.636 mmol)을 디클로메탄(1 mL)에 녹이고 옥살릴 클로라이드(0.381 mL, 4.45 mmol) 및 한 방울의 DMF를 첨가하고 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물은 감압하여 농축한 후 테트라히드로퓨란(3 mL)에 녹이고 4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(0.1 g, 0.212 mmol)을 첨가한 후 가열 환류하였다. 반응이 완결되면 에틸아세테이트로 희석하고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압 농축, 분리정제하여 목적 화합물(0.174 g)을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.43 (s, 1H), 8.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.74 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.98 (dd, J = 12.4, 5.3 Hz, 1H), 2.96 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 2.91 - 2.73 (m, 2H), 2.49 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.26 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.24 - 2.16 (m, 1H), 1.86 - 1.76 (m, 2H), 1.72 - 1.63 (m, 2H), 1.51 - 1.40 (m, 11H).
단계 2: 7 -((2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아미노)-7-옥소헵탄산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000122
tert-부틸 7-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-7-옥소헵타노에이트 (0.174 g)을 20% 트리플루오르아세트산/디클로로메탄 용액 (5 mL)에 녹인 후 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 목적 화합물을 제조하였고, 정제없이 다음 반응에서 사용하였다.
단계 3: 7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디올소이소인돌린-4-일)-7-옥소헵탄아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000123
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민 (LDK378, 20 mg, 0.0358 mmol)을 디클로로메탄 (2 mL)에 녹이고 7-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-7-옥소헵탄산 (14.9 mg, 0.0358 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (16.4mg, 0.043mmol), 디이소프로필에틸아민 (9.4uL, 0.054 mmol)을 가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.53 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.70 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.94 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 - 7.58 (m, 1H), 7.55 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.97 (dd, J = 12.3, 5.3 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.59 - 4.49 (m, 1H), 4.01 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.33 - 3.22 (m, 1H), 3.16 (t, J = 12.5 Hz, 1H), 2.98 - 2.85 (m, 2H), 2.85 - 2.73 (m, 2H), 2.70 - 2.60 (m, 1H), 2.51 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.42 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.23 - 2.15 (m, 5H), 1.90 - 1.78 (m, 4H), 1.78 - 1.71 (m, 2H), 1.65 - 1.44 (m, 4H), 1.41 - 1.35 (m, 6H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
< 실시예 9> (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000124
단계 1: ( 2S,4R )-1-((R)-2-(2-(2- 클로로에톡시 ) 아세트아미도 )-3,3- 디메틸부탄오일 )-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000125
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산(0.3 g, 0.697 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고, 2-(2-클로로에톡시) 아세트산(0.095 g, 0.697 mmol), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(0.291 g, 0.767 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.49 mL, 2.79 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 디클로로메탄으로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고 여과한 후, 정제하여 목적하는 화합물(0.113 g)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 7.42-7.32 (m, 5H), 4.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.61-4.46 (m, 3H), 4.36-4.27 (m, 1H), 4.07 (d, J = 11 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.77-3.72 (m, 2H), 3.67 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.01 (s, 1H), 2.14-2.04 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 0.96 (s, 9H)
단계 2:N -(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소인돌린 -4-일)-2-(4- 아이오도부톡시 )아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000126
(2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-클로로에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드(0.1 g, 0.181 mmol)을 아세톤(3 mL)에 녹이고 요오드화 나트륨(0.272 g, 1.81 mmol)을 첨가한 후, 18 시간 동안 가열 환류하였다. 반응물은 농축한 후, 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(0.082 g, 노란색 오일)을 제조하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.70 (s, 1H), 7.39-7.33 (m, 5H), 7.25-7.22 (m, 1H), 4.76 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.61-4.54 (m, 2H), 4.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.36-4.30 (m, 1H), 4.12 (d, J = 11 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.78-3.68 (m, 3H), 3.64-3.59 (m, 1H), 3.30 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.63 (s, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.18 (s, 2H), 0.97 (s, 9H).
단계 3: (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000127
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소인돌린-4-일)-2-(4-아이오도부톡시)아세트아미드(23 mg, 0.036 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(13 uL, 0.072 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후, 에틸아세테이트에 희석시키고 물고 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압 증류시킨 후, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.50 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.58 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.34-7.31 (m, 5H), 7.15-7.12 (m, 1H), 6.81 (s, 1H), 5.35 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.76 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.55-4.52 (m, 3H), 4.47 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.35-4.31 (m, 1H), 4.13 (d, J = 11 Hz, 1H), 4.09-3.97 (m, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.63-3.60 (m, 2H), 3.29-3.24 (m, 1H), 3.11 (s, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 0.96 (s, 9H); LC/MS (ESI) m/z1073.1 [M+H]+
< 실시예 10> (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000128
단계 1: ( 2S,4R )-1-((R)-2-(2-(2- 클로로부톡시 ) 아세트아미도 )-3,3- 디메틸부탄오일 )-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000129
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산(0.1 g, 0.232 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고, 2-(4-클로로부톡시) 아세트산(0.051 g, 0.279 mmol), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(0.115 g, 0.302 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.061 mL, 348 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 디클로로메탄으로 희석하고 물과 소금물로 씻어준다. 유기층은 무수 황산 마그네슘으로 건조하고 여과한 후, 정제하여 목적 화합물(0.1 g, 무색 젤)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z579.2 [M+H]+
단계 2: ( 2R,4R )-4-히드록시-1-((R)-2-(2-(4- 아이오도부톡시 ) 아세트아미도 )-3,3-디메틸부탄오일)-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000130
(2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-클로로부톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드 (0.1 g, 0.167 mmol)을 아세톤 (5 mL)에 녹이고 요오드화 나트륨 (0.251 g, 1.67 mmol)을 첨가한 후 18시간 동안 가열 환류하였다. 반응물은 농축한 후, 에틸아세테이트로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(0.048 g, 노란색 오일)을 제조하였다.
단계 3: (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000131
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민 (LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드 (2 mL)에 녹이고 (2R,4R)-4-히드록시-1-((R)-2-(2-(4-아이오도부톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드 (24 mg, 0.036 mmol)과 디이소프로필에틸아민 (13 uL, 0.072 mmol)을 첨가후 상온에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후 에틸아세테이트에 희석시키고 물고 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압증류 시킨 후, 정제하여 목적 화합물(10 mg, 아이보리 젤)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z1100.3 [M+H]+
< 실시예 11> (2S,4R)-1-((R)-2-(7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-7-옥소헵탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000132
단계1 : tert -부틸 7-(((R)-1-((2R,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-7-옥소헵타노에이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000133
(2R,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드 염산(0.1 g, 0.232 mmol)을 디클로로메탄(5 mL)에 녹이고, 7-(tert-부톡시)-7-옥소헵탄산(0.065 g, 0.279 mmol), 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리딘늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(0.115 g, 0.302 mmol), 디이소프로필에틸아민(0.061 mL, 348 mmol)을 첨가한 후 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되고, 반응물은 디클로로메탄으로 희석하고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고 여과한 후 정제하여 목적 화합물(0.162 g, 무색 젤)을 제조하였다.
단계 2: 7 -(((R)-1-(( 2R,4R )-4-히드록시-2-((4-(4- 메틸티아졸 -5-일) 벤질 ) 카바모일 )피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-7-옥소헵탄산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000134
tert-부틸 7-(((R)-1-((2R,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-7-옥소헵타노에이트(0.16 g, 0.232 mmol)을 20% 트리플루오로아세트산/디클로로메탄(5 mL)에 녹인 후, 상온에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축 후, 정제하여 목적 화합물(0.135 g, 흰색 고체)을 제조하였다.
단계 3: (2S,4R)-1-((R)-2-(7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-7-옥소헵탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000135
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 디클로로메탄(2 mL)에 녹이고 7-(((R)-1-((2R,4R)-4-히드록시-2-((4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)카바모일)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-7-옥소헵탄산(24 mg, 0.036 mmol), 벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(16.3 mg, 0.043 mmol), 디이소프로필에틸아민(7 uL, 0.054 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 완결되면, 반응물은 디클로로메탄으로 희석시키고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조한 후, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물(20 mg, 흰색 고체)을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1113.3 [M+H]+
< 실시예 12> 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000136
단계 1: N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)-2-(2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)에톡시)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000137
tert-부틸 2-(2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)에톡시)아세테이트(0.2 g, 0.899 mmol)을 20% 트리플루오로아세트산/디클로로메탄 용액(1 mL)에 녹인 후, 상온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축한 후, 테트라히드로퓨란(2 mL)에 녹이고 티오닐클로라이드(0.162 mL, 2.24 mmol)을 첨가한 후, 60℃에서 1시간 동안 가열 환류하였다. 반응물을 농축한 후, 테트라히드로퓨란(2 mL)에 녹인 후 4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(82 mg, 0.297 mmol)을 가하고 80℃에서 12시간 동안 가열 환류하였다. 반응종결 후, 고체물질은 여과하여 제거하고 여과액은 에틸아세테이트에 희석시킨 후 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 8.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 7.2 Hz, 0.6 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 12.3 Hz, 5.4 Hz, 1H), 4.22 (s, 2H), 3.84 - 3.79 (m, 6H), 3.67 - 3.63 (m, 2H), 2.96 - 2.74 (m, 3H), , 2.19 - 2.13 (m, 1H)
단계 2: 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000138
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2-(2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)에톡시)아세트아미드(41 mg, 0.072 mmol) 및 디이소프로필에틸아민(13 uL, 0.072 mmol)을 첨가한 후 90℃에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후, 에틸아세테이트에 희석시키고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압 증류시킨 후, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 10.66 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.92 - 4.89 (m, 1H), 4.57 - 4.52 (m, 1H), 4.22 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.148 (d, J = 15 Hz, 1H), 3.85 - 3.68 (m, 8H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 3.19 - 3.17 (m, 2H), 2.88 - 2.79 (m, 2H), 2.73 - 2.66 (m, 3H), 2.57 - 2.52 (m, 1H), 2.22 - 2.16 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.05 (s, 1H), 2.01 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.75 - 1.73 (m, 3H), 1.35 (t, J = 6.0 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 7.0 Hz, 6H)
< 실시예 13> 2-(4-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000139
단계 1: 2 -(4- 클로로부톡시 )-N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000140
2-(4-클로로부톡시)아세트산(0.5 g, 3 mmol)을 테트라히드로퓨란(5 mL)에 녹이고, 티오닐클로라이드(0.544 mL, 7.5 mmol)을 첨가한 후, 60℃에서 1시간 동안 가열 환류하였다. 반응물을 농축한 후, 테트라히드로퓨란(5 mL)에 녹인 뒤, 4-아미노-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(0.273 g, 1 mmol)을 가하고 80℃에서 12시간 동안 가열 환류하였다. 반응종결 후, 고체물질은 여과하여 제거하고 여과액은 에틸아세테이트에 희석시킨 후 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산 마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압 농축, 정제하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z422 [M+H]+
단계 2: 2 -(4- 아이오도부톡시 )-N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000141
상기 단계 1에서 제조한 화합물(0.2 g, 0.474 mmol)을 아세톤(10 mL)에 녹이고, 요오드화나트륨(0.71 g, 4.74 mmol)을 첨가한 후, 18시간 동안 가열 환류하였다. 반응물은 농축한 후 에틸아세테이트로 희석하고, 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산 마그네슘으로 건조하고, 여과, 감압농축, 정제하여 목적하는 화합물을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.70 (s, 1H), 7.39-7.33 (m, 5H), 7.25-7.22 (m, 1H), 4.76 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.61-4.54 (m, 2H), 4.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.36-4.30 (m, 1H), 4.12 (d, J = 11 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.78-3.68 (m, 3H), 3.64-3.59 (m, 1H), 3.30 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.63 (s, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.18 (s, 2H), 0.97 (s, 9H)
단계 3: 2-(4-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000142
5-클로로-N2-(2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)-N4-(2-(이소프로필설포닐)페닐)피리미딘-2,4-디아민(LDK378, 20 mg, 0.036 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)에 녹이고 상기 단계 2에서 제조한 화합물(24 mg, 0.036 mmol)과 디이소프로필에틸아민(13 uL, 0.072 mmol)을 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여 N,N-디메틸포름아미드를 제거한 후, 에틸아세테이트에 희석시키고 물과 소금물로 씻어주었다. 유기층은 무수 황산 마그네슘으로 건조, 여과, 감압증류 시킨 후, 정제하여 목적하는 화합물을 수득하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.56 (s, 1H), 9.52 (s, 1H), 8.87 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.94 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.78 - 7.69 (m, 1H), 7.66 - 7.61 (m, 1H), 7.61 - 7.56 (m, 2H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.22 - 4.08 (m, 2H), 3.77 - 3.63 (m, 2H), 3.47 - 3.21 (m, 2H), 2.94 - 2.62 (m, 5H), 2.26 - 2.11 (m, 4H), 1.95 - 1.76 (m, 6H), 1.37 (dd, J = 6.0, 1.8 Hz, 5H), 1.33 (d, J = 6.9 Hz, 6H). LC/MS (ESI) m/z 943.2 [M+H]+
< 실시예 14> 2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000143
단계 1: tert -부틸 2-(2-(2- 클로로에톡시 ) 에톡시 )아세테이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000144
2-(2-클로로에톡시)에탄-1-올(1.0 eq.)과 tert-부틸 2-브로모아세테이트(1.2 eq.)를 테트라히드로퓨란에 녹인 후, 칼륨 tert-부톡사이드(1.5 eq.)를 첨가하고 상온에서 교반하였다. 반응 종결 후, 에틸아세테이트와 물로 씻어주고, 유기층을 추출하여 물과 소금물로 씻어주었다. 무수 황산마그네슘으로 물을 제거한 후, 감압 농축한 후, 분리, 정제하여 tert-부틸 2-(2-클로로에톡시)아세테이트를 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.04 (s, 1H), 3.79 - 3.75 (m, 2H), 3.74 - 3.68 (m, 8H), 3.66 - 3.62 (m, 2H), 1.49 (s, 9H)
단계 2: 2 -(2-(2- 클로로에톡시 ) 에톡시 )아세트산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000145
20%의 트리플루오로아세트산/디클로로메탄용액에 상기 단계 1에서 제조한 화합물을 첨가하고 상온에서 교반하였다. 반응 종결 후, 혼합물을 농축하여 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)아세트산을 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 11.14 (s, 1H), 4.24 (s, 2H), 3.82 - 3.74 (m, 6H), 3.65 (t, J = 5.7 Hz, 2H)
단계 3: 2 -(2-(2- 클로로에톡시 ) 에톡시 )-N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000146
상기 단계 2에서 제조한 화합물(3.0 eq.)을 테트라히드로퓨란에 녹이고, 티오닐 클로라이드(7.5 eq.)를 첨가한 뒤, 60℃에서 교반하였다. 반응이 종결된 후, 혼합물을 농축하고, 테트라히드로퓨란에 녹인 뒤, 포말리도마이드(1.0 eq.)를 첨가하고 60℃에서 교반하였다. 반응 종결 후, 혼합물을 농축하고 분리정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 8.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 7.2 Hz, 0.6 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 12.3 Hz, 5.4 Hz, 1H), 4.22 (s, 2H), 3.84 - 3.79 (m, 6H), 3.67 - 3.63 (m, 2H), 2.96 - 2.74 (m, 3H), , 2.19 - 2.13 (m, 1H)
단계 4: N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)-2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000147
상기 단계 3에서 제조한 화합물(1.0 eq.)을 아세톤에 녹이고, 요오드화나트륨(10.0 eq.)을 첨가한 뒤, 80℃에서 교반하였다. 반응 종결 후, 혼합물은 농축하여 N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2-(2-(2-아이오도에톡시)에톡시)아세트아미드를 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 8.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.73 (t, J = 7.8, 1H), 7.60 - 7.57 (m, 1H), 5.01 - 4.94 (m, 1H), 4.22 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 3.84 - 379 (m, 6H), 3.67 - 3.63 (m, 1H), 3.29 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 2.95 - 2.74 (m, 3H), 2.19 - 2.13 (m, 1H)
단계 5: 2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000148
상기 단계 4에서 제조한 화합물(1.0 eq.)과 LDK378(1.0 eq.)을 디메틸포름아미드에 녹이고, 디이소프로필에틸아민(2.5 eq.)를 첨가하여 90℃에서 교반하였다. 반응이 종결된 후, 혼합물을 농축, 분리 정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 10.66 (s, 1H), 9.49 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.72 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.92 - 4.89 (m, 1H), 4.57 - 4.52 (m, 1H), 4.22 (d, J = 16 Hz, 1H), 4.148 (d, J = 15 Hz, 1H), 3.85 - 3.68 (m, 8H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 3.19 - 3.17 (m, 2H), 2.88 - 2.79 (m, 2H), 2.73 - 2.66 (m, 3H), 2.57 - 2.52 (m, 1H), 2.22 - 2.16 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.05 (s, 1H), 2.01 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.75 - 1.73 (m, 3H), 1.35 (t, J = 6.0 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 7.0 Hz, 6H)
< 실시예 15> 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000149
단계 1: tert -부틸 2-(2- 클로로에톡시 )아세테이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000150
상기 실시예 14의 단계 1에서 사용한 2-(2-클로로에톡시)에탄-1-올을 대신하여 2-클로로에탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 14의 단계 1과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.04 (s, 1H), 3.79 - 3.75 (m, 2H), 3.74 - 3.68 (m, 8H), 3.66 - 3.62 (m, 2H), 1.49 (s, 9H)
단계 2: 2 -(2- 클로로에톡시 )아세트산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000151
상기 단계 1에서 제조한 화합물을 사용하여, 상기 실시예 14의 단계 2와 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 11.11 (s, 1H), 4.26 (s, 2H), 3.87 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.69 (t, J = 5.5 Hz, 2H)
단계 3: 2 -(2- 클로로에톡시 )-N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000152
상기 단계 2에서 제조한 화합물을 사용하여, 상기 실시예 14의 단계 3과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 10.46 (s, 1H), 8.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.74 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 12.5 Hz, 5.5 Hz, 1H), 4.23 (s, 2H), 3.95 - 3.92 (m, 2H), 3.81 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.96 - 2.73 (m, 3H), 2.20 - 2.15 (m, 1H)
단계 4: N-(2-(2,6- 디옥소피페리딘 -3-일)-1,3- 디옥소이소인돌린 -4-일)-2-(2-아이오도에톡시)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000153
상기 단계 3에서 제조한 화합물을 사용하여, 상기 실시예 14의 단계 4와 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.45 (s, 1H), 8.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.74 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 7.2 Hz, 0.6 Hz, 1H), 4.97 (dd, J = 12.3 Hz, 5.4 Hz, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.93 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.42 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.97 - 2.75 (m, 3H), 2.20 - 2.15 (m, 1H)
단계 5: 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000154
상기 단계 4에서 제조한 화합물을 사용하여, 상기 실시예 14의 단계 5와 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 10.47 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 8.88 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.93 (dd, J = 4.8 Hz, J = 0.6 Hz, 1H), 7.73 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.64 - 7.61 (m, 1H), 7.59 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.52 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 4.94 (dd, J = 7.2 Hz, J = 3.0 Hz, 1H), 4.54 - 4.52 (m, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.29 - 3.24 (m, 1H), 3.14 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 2.91 - 2.69 (m, 6H), 2.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H), 2.14 - 2.13 (m, 1H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.76 (s, 4H), 1.63 (s, 1H), 1.35 (d, J = 3.6 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 4.2 Hz, 6H)
< 실시예 16> (2S,4R)-1-((R)-1-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-14,14-디메틸-11-옥소-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데칸카보닐)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸싸이아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000155
단계 1: tert -부틸 2-(2-(2-(2- 클로로에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 )아세테이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000156
2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄올(1 g, 5.42 mmol)과 tert-부틸 브로모아세테이트(0.8 mL, 5.42 mmol)를 테트라히드로퓨란(10 mL)에 녹이고, KOtBu(0.638 g, 5.69 mmol)을 0℃에서 첨가한 후, 상온에서 교반하였다. 반응이 종결되면 물 및 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조하고 여과, 농축, 분리정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 4.04 (s, 1H), 3.83 - 3.58 (m, 5H), 1.49 (s, 4H).
단계 2: tert -부틸 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)아세테이트의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000157
LDK378(50 mg, 0.09 mmol), 상기 단계 1에서 제조한 화합물(27 mg, 0.09 mmol), Cs2CO3(59 mg, 0.18 mmol), 요오드화 칼륨(3 mg, 0.018 mmol)을 DMF(1 mL)에 녹인 후, 상온에서 교반하였다. 반응물은 물과 에틸아세테이트로 추출하고, 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 농축, 분리정제하여 목적 화합물을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.50 (s, 1H), 8.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 8.05 - 7.98 (m, 1H), 7.94 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.26 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 4.63 - 4.47 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.76 - 3.57 (m, 10H), 3.38 - 3.21 (m, 1H), 3.14 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.28 - 2.10 (m, 5H), 1.91 - 1.72 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.35 (m, 13H).
단계 3: tert -부틸 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)아세트산 염산의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000158
상기 단계 2에서 제조한 화합물(37 mg, 0.090 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹이고, 4 N 염산/디옥산(1 mL)용액을 첨가한 후, 상온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물은 감압 농축하여, 정제 과정 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 4: (2S,4R)-1-((R)-1-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-14,14-디메틸-11-옥소-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데칸카보닐)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸싸이아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000159
상기 단계 3에서 제조한 화합물(10 mg, 13 mmol), (2S,4R)-1-((R)-2-아미노-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드 염산(6 mg, 13 mmol), HATU(7.4 mg, 19.5 mmol), 디이소프로필에틸아민(9.1 uL, 52 mmol)을 디클로로메탄(1 mL)에 녹이고, 상온에서 교반하였다. 반응물은 물과 디클로메탄으로 추출하고, 유기층은 무수 황산마그네슘으로 건조, 여과, 감압농축, 분리정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LC/MS (ESI) m/z 1190.7[M+H-15]+
< 실시예 17> 6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)헥산아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000160
상기 실시예 4의 단계 1에서 사용한 5-브로포펜산오일을 대신하여, 5-브로모헥산오일을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 4와 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR (CDCl3, 300MHz) δ 9.49 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7,72 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.28 - 7.23 (m merged with CHCl3, 1H), 6.84 (br, 1H), 4.96 (dd, J = 12.0, 6.0 Hz, 1H), 4.60 - 4.50 (m, 1H), 3.31 - 3.22 (m, 1H), 3.14 (br, 2H), 2.96 - 2.70 (m, 5H), 2.49 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.86 - 1.61 (m, 9H), 1.52 - 1.39 (m, 3H), 1.35 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 6.9 Hz, 6H)
< 실시예 18> (2R,4S)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-6-옥소헥산아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000161
상기 실시예 3에서 사용한 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄산을 대신하여, 6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-6-옥소헥산산을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 3과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 9.51 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.58 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.03 (s,1H), 7.93 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 5H), 7.29 - 7.23 (m, merged with CHCl3, 1H), 6.68 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 15.0, 7.8 Hz, 1H), 4.77 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.59 - 4.50 (m, 4H), 4.34 (dd, J= 15.3, 5.4 Hz, 1H), 4.11 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.96 (d, J =13.2 Hz, 1H), 3.59 (dd, J = 11.7, 3.6 Hz, 1H), 3.54 - 3.44 (m, 1H), 3.31 - 3.22 (m, 1H), 3.11 (t, J =12.9 Hz, 1H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.37 - 2.22 (m, 4H), 2.17 (s, 3H), 2.14 - 2.11 (m, 1H), 1.81 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 1.68 - 1.66 (m, 6H), 1.58 - 1.38 (m, 2H), 1.36 (dd, J = 5.7, 2.1 Hz, 6H), 1.32 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 1.25 (s, 1H), 0.94 (s, 9H)
< 실시예 19> (2R,4S)-1-((S)-2-(2-(3-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)프로폭시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000162
상기 실시예 10의 단계 1에서 사용한 2-(4-클로로부톡시)아세트산을 대신하여, 2-(5-클로로프로폭시)아세트산을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 10과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1113.3 [M+H]+
< 실시예 20> 2-(3-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)프로폭시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000163
상기 실시예 13의 단계 1에서 사용한 2-(4-클로로부톡시)아세트산을 대신하여, 2-(5-클로로프로폭시)아세트산을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 13과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1113.3 [M+H]+
< 실시예 21> (2R,4S)-1-((R)-2-(2-((5-(4-(4-((5-chloro-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜틸)옥시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure PCTKR2017002830-appb-I000164
상기 실시예 10의 단계 1에서 사용한 2-(4-클로로부톡시)아세트산을 대신하여, 2-(5-클로로펜톡시)아세트산을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 10과 유사하게 수행하여 목적 화합물을 제조하였다.
LC/MS (ESI) m/z 1114 [M+H]+
실시예 구조식
1
Figure PCTKR2017002830-appb-I000165
2
Figure PCTKR2017002830-appb-I000166
3
Figure PCTKR2017002830-appb-I000167
4
Figure PCTKR2017002830-appb-I000168
5
Figure PCTKR2017002830-appb-I000169
6
Figure PCTKR2017002830-appb-I000170
7
Figure PCTKR2017002830-appb-I000171
8
Figure PCTKR2017002830-appb-I000172
9
Figure PCTKR2017002830-appb-I000173
10
Figure PCTKR2017002830-appb-I000174
11
Figure PCTKR2017002830-appb-I000175
12
Figure PCTKR2017002830-appb-I000176
13
Figure PCTKR2017002830-appb-I000177
14
Figure PCTKR2017002830-appb-I000178
15
Figure PCTKR2017002830-appb-I000179
16
Figure PCTKR2017002830-appb-I000180
17
Figure PCTKR2017002830-appb-I000181
18
Figure PCTKR2017002830-appb-I000182
19
Figure PCTKR2017002830-appb-I000183
20
Figure PCTKR2017002830-appb-I000184
21
Figure PCTKR2017002830-appb-I000185
<실험예 1> ALK 단백질 저해활성 평가
본 발명에 따른 화합물의 ALK 단백질 저해활성을 평가하기 위해, 다음과 같이 실험하였다.
구체적으로, 역형성 림프종 키나아제(ALK)에 대한 억제 활성을 측정하기 위하여 그레이너 96 웰 라운드 형 바닥 플레이트에 실시예 1 내지 21에서 제조된 화합물을 1230 μM 농도로 가하고, 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소(1 ml)와 바이오틴이 붙은 펩타이드 기질(2 ml)을 15분 동안 혼합하여 배양하였다. 여기에 ATP 용액(5 ml)을 가하여 상온에서 30분 동안 키나아제 반응을 수행하였다. 에틸렌다이아민테트라아세트산 용액에 용해된, 스트렙트아비딘이 붙은 엑스엘(XL 665, 5 ml)과 유로피움(Eu3+)이 붙은 항-포스포티로신 항체(5 ml)를 반응액에 첨가하여 반응을 중지시키고 1시간 동안 배양한 후, 시간분해형광도(Homogeneous Time-resolved fluorescence, HTRF, Cisbio)를 이용하여 분석하였다. 왈락 인비전 2103(Wallac Envision 2103) 기기로 615/665 nm의 파장 범위에서 판독하였다. 하기 표 2에서는 실시예 1 내지 21에서 제조된 화합물의 IC50을 프리즘(버전 5.01, 그래프패드) 소프트웨어를 이용하여 구현하였다. 표 2에는 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소 활성이 50% 이하로 감소되면 억제 활성을 보이는 것으로 판단하고 상기 화합물의 IC50을 하기 표 2에 나타내었다.
실시예 IC50, nM 실시예 IC50, nM
1 95 11 140
2 140 12 34
3 110 13 70
4 18 14 29
5 69 15 46
6 100 16 16
7 32
8 110
9 89
10 29
상기 표 2를 살펴보면, 본 발명의 실시예 1 내지 실시예 16은 ALK 단백질을 nM의 단위 농도로 우수하게 저해할 수 있음이 확인된다.
<실험예 2> ALK 단백질 분해활성 평가
본 발명에 따른 화합물의 ALK 단백질 분해활성을 평가하기 위해, 다음과 같이 실험하였다.
Su-Dhl-1 세포를 12 웰 플레이트의 각 웰에 6 X 105개를 주입하였다. 다음날 각 웰에 화합물을 최종농도 30 nM, 100 nM, 300 nM, 1 uM이 되도록 처리해 주었다. 한 개의 웰에는 DMSO를 동일한 백분율로 처리하였다. 처리 16시간 후, 세포를 모아 TBS-N lysis buffer(20mM Tris-Cl, pH8.0, 150mM NaCl, 0.5% NP-40, 1.5mM EDTA, 0.5mM Na3VO4, and protease inhibitor cocktail)를 이용하여 세포 용해물(cell lysate)을 만들어 웨스턴블롯을 수행하였다.
H3122 세포를 12 웰 플레이트의 각 웰에 6 X 105개를 주입하였다. 다음날 각 웰에 화합물을 최종농도 30 nM, 300 nM, 3 uM, 30 uM이 되도록 처리해 주었다. 한 개의 웰에는 DMSO를 동일한 백분율로 처리하였다. 처리 16시간 후, 세포를 모아 TBS-N lysis buffer(20mM Tris-Cl, pH8.0, 150mM NaCl, 0.5% NP-40, 1.5mM EDTA, 0.5mM Na3VO4, and protease inhibitor cocktail)를 이용하여 세포 용해물(cell lysate)을 만들어 웨스턴블롯을 수행하였다.
상기 실험 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
실시예 ALK 분해활성 실시예 ALK 분해활성
1 + 10 ++
2 + 11 ++
3 ++ 12 +
4 ++ 13 +
5 + 14 +
6 + 15 +
7 + 16 +
8 +
9 +
++ : 300 nM 농도에서 50% 초과로 분해(> 50%)
+ : 300 nM 농도에서 50% 미만으로 분해(< 50%)
표 3을 살펴보면, 본 발명에 따른 실시예 1 내지 16 화합물은 ALK 단백질을 300 nM의 농도에서 우수하게 분해할 수 있으며, 특히 실시예 3, 4, 10 및 11 화합물은 300 nM의 농도에서 50 % 초과의 분해활성을 나타내는 것을 확인할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 화합물은 ALK 단백질을 나노몰 단위의 농도로 우수하게 분해할 수 있으며, 이로부터 ALK 관련 질환의 예방 및 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.
<실험예 3> In vivo 암 성장 억제활성 평가
본 발명에 따른 화합물의 암 성장 억제활성 평가를 수행하기 위해, 다음과 같이 실험하였다.
H3122 이종이식 모델을 사용한 SCID 마우스를 대조군(8마리), 실험군(8 마리)로 나누어, 상기 실험군에는 본 발명에 따른 실시예 3 화합물을 하루에 3번씩 50 mg/kg의 투여량으로 복강주입 하여 실험하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1은 H3122가 이종이식된 SCID 마우스에 본 발명의 실시예 3 화합물을(1일 3회,50 mg/kg, 총 14일) 투여한 뒤, 종양 부피의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 1을 살펴보면, 본 발명에 따른 실시예 3 화합물을 투여한 실험군은 투여 경과일이 흐름에 따라 종양 크기가 발달되지 않고 유지되거나 줄어드는 것을 확인할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 화합물은 상기 실험예 3에서 확인되는 바와 같이, 암 성장 억제 활성을 갖는 것으로 확인되어, 이를 함유하는 약학적 조성물로서 암의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 역형성 림프종 키나제(ALK)를 억제하거나 분해시킬 수 있어, 역형성 림프종 키나제(ALK) 관련 질환, 예를 들어 암의 예방 및 치료에 유용한 효과가 있다.

Claims (10)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000186
    (상기 화학식 1에 있어서,
    Linker는 -(CH2)-, -(C=O)-, -NH- 및 -O-로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상이 3-20개 연결된 연결기(linker)이되,
    상기 연결기는 연속하여 -O-로 연결될 수 없고; 및
    A는
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000187
    또는
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000188
    이다).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 Linker는,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000189
    이되,
    여기서, 상기 a 및 i는 독립적으로 0 또는 1이되, 동시에 0일 수 없고;
    상기 b는 0-20의 정수이고;
    상기 c는 0 또는 1이고;
    상기 d는 0-3의 정수이고;
    상기 e는 0 또는 1이고;
    상기 f는 1-10의 정수이고;
    상기 g는 0 또는 1이고;
    상기 h는 0-3의 정수이고;
    상기 j 및 k는 독립적으로 0-5의 정수인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 Linker는,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000190
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000191
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000192
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000193
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000194
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000195
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000196
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000197
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000198
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000199
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000200
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000201
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000202
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000203
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000204
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000205
    ,
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000206
    , 또는
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000207
    인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    (1) 5-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일아미노)부틸)-5-옥소펜탄아미드;
    (2) (2S,4R)-1-((R)-2-(tert-부틸)-17-(4-(4-(5-클로로-4-(2-(이소프로필설포닐)페닐아미노)피리미딘-2-일아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-4,13,17-트리옥소-6,9-디옥사-3,12-디아자헵타데칸-1-오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아마이드;
    (3) (2S,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-5-옥소펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드;
    (4) 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드;
    (5) 5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-이옥소피레피딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-5-옥소펜탄아미드;
    (6) 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세타미드;
    (7) (2R,4R)-1-((R)-2-(5-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복사미드;
    (8) 7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디올소이소인돌린-4-일)-7-옥소헵탄아미드;
    (9) (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
    (10) (2S,4R)-1-((R)-2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
    (11) (2S,4R)-1-((R)-2-(7-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-7-옥소헵탄아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
    (12) 2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드;
    (13) 2-(4-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)부톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드;
    (14) 2-(2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드;
    (15) 2-(2-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)에톡시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드;
    (16) (2S,4R)-1-((R)-1-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-14,14-디메틸-11-옥소-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데칸카보닐)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸싸이아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
    (17) 6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)헥산아미드;
    (18) (2R,4S)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)-6-옥소헥산아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
    (19) (2R,4S)-1-((S)-2-(2-(3-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)프로폭시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드;
    (20) 2-(3-(4-(4-((5-클로로-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)프로폭시)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아세트아미드; 및
    (21) (2R,4S)-1-((R)-2-(2-((5-(4-(4-((5-chloro-4-((2-(이소프로필설포닐)페닐)아미노)피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-일)펜틸)옥시)아세트아미도)-3,3-디메틸부탄오일)-4-히드록시-N-(4-(4-메틸티아졸-5-일)벤질)피롤리딘-2-카르복스아미드.
  5. 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
    A-H로 표시되는 화합물과, Linker-X로 표시되는 화합물을 반응시켜 A-Linker-X로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
    상기 단계 1에서 제조한 A-Linker-X로 표시되는 화합물을 A-Linker-Y로 표시되는 화합물로 제조하는 단계(단계 2); 및
    상기 단계 2에서 제조한 A-Linker-Y로 표시되는 화합물과, 화학식 2로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법:
    [반응식 1]
    Figure PCTKR2017002830-appb-I000208
    (상기 반응식 1에서,
    Linker, 및 A는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및
    X와 Y는 X가 -CO2-tBu인 경우, Y는 -CO2H이고, X가 Cl 또는 Br인 경우, Y는 I이다).
  6. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 역형성 림프종 키나아제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 화합물은 역형성 림프종 키나아제(ALK)를 억제하거나 분해하여 암을 예방 또는 치료하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  9. 제7항에 있어서,
    상기 암은 대장암, 간암, 위암, 유방암, 결장암, 골암, 췌장암, 두부 또는 경부암, 자궁암, 난소암, 직장암, 식도암, 소장암, 항문부근암, 결장암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암종, 질암종, 음문암종, 호지킨병, 전립선암, 방광암, 신장암, 수뇨관암, 신장세포암종, 신장골반암종 중추신경계 종양 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  10. 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 역형성 림프종 키나아제(ALK) 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
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