WO2020175962A1 - 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피라노[2,3-f]크로멘 유도체 화합물, 약학적으로 허용 가능한 그의 염, 또는 그 용매화물을 포함하는 신경계 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 파라옥소나제를 포함한 여러 효소의 기능을 향상 또는 보호시킬 수 있는 약학적 조성물을 제공한다.

Description

2020/175962 1»（：1/10公020/002907 명세서

발명의 명칭:신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물 기술분야

[1] 본발명은신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물에관한것으로서, 구체적으로피라노 [2, 3-f]크로멘유도체화합물을포함하는신경계질환의 예방 또는치료용약학적조성물에관한것이다.

배경기술

[2] 신경계는신체내·외부의자극과신호를받아들여다른부위로전달하고

반응을일으키는기관이다.신경계는신체의활동을상황에맞게조절·통제하는 역할을하며 ,뇌와척수로구성된중추신경계와말초신경으로구성된

말초신경계로이루어져있다.이런신경계에문제가생기면치명적인질환에 걸릴수있다.신경계질환은대개완치가어려워주의가필요하다.한편,활성 산소종증가,산화적스트레스로인한단백질,지질및 DNA의손상은급성및 만성신경계질환의유발에매우중요한역할을한다는것은널리알려져 있다.

[3] 인체에서형성된활성산소가입힌손상을복구하는과정에는여러효소가 관여한다.이러한효소중하나가파라옥소나제 (paraoxonase; PON)이다.

파라옥소나제로는 PON1, PON2및 PON3 3가지가알려져 있고,이중 PON1및 PON2는산화적스트레스로부터세포등을보호하는항산화효소로작용하여 , 산화방지효과및항염증효과를보인다는것이잘알려져있다. PON3역시 비슷한역할을하는것으로보고되고있다.

[4] PON1및 PON2의기능이저하된경우에는혈청이나대식세포의산화적

스트레스가증가하는현상이관찰되었고산화적스트레스로부터유도된독성이 발생하는현상이관찰되었다.또한, PON1및 PON2가제거된 (Knock out)또는 부족한동물을통하여파라옥소나제가신경보호역할을한다는것이보고되고 있다.따라서, PON1및 PON2가산화방지및항염증효과를통하여신경보호에 관여한다는사실이잘알려져있다.

[5] 이에 ,신경계질환을예방하고치료하기위하여파라옥소나제를포함한여러 효소의기능을향상또는보호시킬수있는약학적조성물이필요한실정이다.

[6] [선행기술문헌]

[7] [특허문헌]

[8] 대한민국공개특허제 10-2018-0002539호

[9] 대한민국공개특허제 10-2015-0075030호

[1이 [비특허문헌]

[11] Modulation of PON2 in mouse brain_Neuroprotection mechanism by quercetin (Neurochem Research 2013 (38) 1809〜 1818.)

[12] PON2 in brain and its potential role in neuroprotection (Neurotoxicology 2014 (43) 2020/175962 1»（：1/10公020/002907

3-9.)

[13] DJ-1 interacts with and regulates Paraoxonase 2 for neuronal survival in response to ROS (PLOS one 2014 (9) el06601)

[14] PON2 has the neuroprotective role in the mouse central nervous system (Toxicology and Applied Pharmacology 2011 (256) 369〜 378.)

[15] PON2 has the potential neuro-protecting effect against oxidative stress in vivo and in vitro (Neurochemcal Research 2013 (38) 1809〜 1818; Neurotoxicology 2014 (43) 3〜 9) 발명의상세한설명

기술적과제

[16] 본발명이이루고자하는기술적과제는신경계질환의 예방또는치료효능이 우수한피라노 [2,3-f]크로멘유도체화합물을포함하는약학적조성물을 제공하는것이다.

[17] 다만,본발명이해결하고자하는과제는상기언급한과제로제한되지않으며 , 언급되지않은또다른과제들은하기의기재로부터당업자에게명확하게 이해될수있을것이다.

과제해결수단

[18] 본발명의일실시상태는하기화학식 I의피라노 [2,3-f]크로멘유도체화합물, 약학적으로허용가능한그의염,또는그용매화물을포함하는신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물을제공한다:

[19] [화학식 I]

[21] 상기화학식 I에서,

[22] 점선은선택적이중결합이고,

[23] II ₁은수소원자;및치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 ⁽ -⁽：₆알킬기중어느 하나이며,

[24] II ₂는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0-(： ₆알킬기 ;

직쇄또는분지쇄 ( -(：₆알콕시기;치환또는비치환,직쇄

알릴옥시기 ;및히드록시기중어느하나이고,

[25] 011 ₁및

중적어도하나는히드록시기이며, 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

[26] II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄

비치환,직쇄또는분지쇄。「（ 알콕시기

0 ₃-0 ₆알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄（ ᅪ티오알킬기;및할로겐원자중어느하나이고,

[27] 11 ₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는에톡시이며,

[28] 11 ₅및 11 ₆온각각독립적으로수소원자;및（ ᄅ알킬기중어느하나이고,

[29] 상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기 및치환 티오알킬기의 경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄（：「（： ₅ 알킬기 ;직쇄또는분지쇄（：「（그 ₅알콕시기

티오알킬기중어느하나이다.

발명의 효과

[3이 본발명의 일실시상태에 따른피라노 [2, 3쉬크로멘유도체화합물,약학적으로 허용가능한그의 염,또는그용매화물을포함하는약학적조성물은

알츠하이머병 ,혈관성치매 ,파킨슨병,뇌수막염 ,뇌전증,뇌졸중,뇌종양, 근신경계질환,신경계감염,유전성신경질환,척수질환,이상운동질환등 신경계질환의 예방및치료효능이우수하다.

도면의 간단한설명

[31] 도 1은정상대조군, 1）10대조군,화학식 111-1의 화합물투여군에서知）汉別2 도를

의 발현정도를나타낸그래프이다.

정도를나타낸그래프이다.

낸 그래프이다.

[41] 도 1 내지도 1 세포에

나타낸그래프이

[42] 도 12&내지도 1

¥264.7세포에서

2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 발현정도를나타낸그래프이다.

[43] 도 13&내지도 1 는요쇼\¥264.7세포에서실험예 4-3에따른 1 6의 1111어쇼 발현정도를나타낸그래프이다.

[44] 도 14&내지도 1쑈는요쇼\¥264.7세포에서실험예 4-3에따른 TNF-a의 1111여쇼 발현정도를나타낸그래프이다.

[45]

세포에서실험예 4-3에 따른 1ᄂ1(3의 1111어쇼발현 정도를나타낸그래프이다.

[46]

세포에서실험예 4-3에 따른 1ᄂ6의 1111어쇼발현 정도를나타낸그래프이다.

[47] 도 17&내지도 1%는 3\2세포에서실험예 4-3에 따른 TNFa의 mRNA발현 정도를나타낸그래프이다.

[48] 도 18&내지도 1此는요쇼\¥264.7세포에서실험예 4-4에따른 NF-kB단백질의 ?65와 ?50의 핵내부로의 전사정도를나타낸그래프이다.

[49] 도 19&내지도 1吹는 세포에서실험예 4-4에 따른 NF-kB단백질의 p65와

?50의 핵내부로의 전사정도를나타낸그래프이다.

발명의실시를위한최선의형태

[5이 본명세서에서사용되는모든기술용어는,달리정의되지 않는이상,본발명의 관련분야에서통상의 당업자가일반적으로이해하는바와같은의미로 사용된다.또한,본명세서에는바람직한방법이나시료가기재되나,이와 유사하거나동등한것들도본발명의 범주에포함된다.

[51]

[52] 이하,본발명에 대하여더욱상세하게설명한다.

[53]

[54] 본발명의 일실시상태는하기화학식 I의 피라노 [2, 3띠크로멘유도체화합물, 약학적으로허용가능한그의 염,또는그용매화물을포함하는신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물을제공한다:

[55] [화학식 I]

[57] 상기화학식 I에서, 2020/175962 1»（：1/10公020/002907 점선은선택적이중결합이고,

[59] II 수소원자;및치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：「（：₆알킬기중어느 하나이며,

요 ₂는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0「（그 ₆알킬기;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：₃-0 ₆ 알릴옥시기;및히드록시기중어느하나이고,

[6 01 및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（:「（그 ₆알킬기 ;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄。「（ 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0 ₃-0 ₆알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄（ ᅪ티오알킬기;및할로겐원자중어느하나이고,

63； 요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는에톡시이며,

64； II ₅및 II ₆은각각독립적으로수소원자;및（：「（그 ₆알킬기중어느하나이고,

65； 상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기및치환 티오알킬기의경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄（：_!_（： ₅ 알킬기 ;직쇄또는분지쇄（： （그 ₅알콕시기 ;및직쇄또는분지쇄 0 _!-0 ₃ 티오알킬기중어느하나이다.

상기한”선택적이중결합”이라함은경우에따라단일결합이거나이중결합일 수있음을의미한다.

본발명의일실시상태에따른상기화학식 I의피라노피라노［2, 3띠크로멘 유도체화합물,약학적으로허용가능한그의염,또는그용매화물을포함하는 약학적조성물은신경계질환특히뇌질환의 예방및치료효능이우수하다. 구체적으로,신경변성질환,신경세포염증,미토콘드리아기능장애의 예방및

]] 치료효능이우수하다.

0 ⁵

[7 66 5 6 6 6670296이1

7811111] 본발명의일실시상태에따르면,상기 II _!은수소원자,메틸기또는

에틸기이고,상기 II ₂는메틸기,에틸기, _I!-프로필기, ₀ -프로필기, _I!-부틸기,

^0 -부틸기, 부틸기,메톡시기,에톡시기, 11-프로폭시기, ₀ -프로폭시기,

11-부톡시기 , 0 -부톡시기 , -부톡시기또는히드록시기이며 ,상기 II ₃및 II ₄는 각각수소원자이고,상기 II ₅및 II ₆은각각메틸기일수있다.상기 II ₁내지 II ₆가 상기한물질인경우상기화학식 I의피라노피라노［2, 3귀크로멘유도체화합물, 약학적으로허용가능한그의염,또는그용매화물을포함하는약학적조성물은 화학적으로안정하고,뇌질환의 예방및치료에있어서우수한효과를가질수 있다.

본발명의일실시상태에따르면,상기화학식 I의피라노［2, 3띠크로멘유도체 화합물은하기화학식 II의화합물인신경계질환의예방또는치료용약학적 조성물일수있다:

［화학식 II］ 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

[72] 상기화학식 II에서,

II 수소원자;및치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：「（：₆알킬기중어느 하나이며,

[74] 요 2는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0 （그 6알킬기;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄（ -（：₆알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：₃-（：₆ 알릴옥시기;및히드록시기중어느하나이고,

01^및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（： ₆알킬기 ;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄（ - ᄅ알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0 ₃-0 ₆알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄（ ᅪ티오알킬기;및할로겐원자중어느하나이고,

[77] 요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는에톡시이며,

[78] II ₅및 II ₆은각각독립적으로수소원자;및（：「（그 ₆알킬

[79]

] ] ] ] 상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치

2561

77 80⁷³ 티오알킬기의 경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또

알킬기 ;직쇄또는분지쇄（：「（그 ₅알콕시기 ;및직쇄또는

티오알킬기중어느하나이다.

본발명의 일실시상태에 따르면,상기화학식 II의 화합물은하기 화합물중 어느하나일수있다:

[화학식 11- 1] 2020/175962 1»(：1/10公020/002907

9

상기화학식 III에서, 2020/175962 1»(：1^1{2020/002907

[92] II 수소원자;및치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：「（：₆알킬기중어느 하나이며,

요 2는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0「（그 6알킬기;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：₃-0 ₆ 알릴옥시기;및히드록시기중어느하나이고,

[94] 01 및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

[95] II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：「（： ₆알킬기 ;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄。「（ 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0 ₃-0 ₆알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄（ ᅪ티오알킬기;및할로겐원자중어느하나이고, 요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는에톡시이며,

II ₅및 II ₆은각각독립적으로수소원자;및（：「（그 ₆알킬기중어느하나이고, 상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기 및치환 티오알킬기의 경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄（：_!_（： ₅ 알킬기 ;직쇄또는분지쇄（： （그 5알콕시기 ;및직쇄또는분지쇄 0 _!-0 3 티오알킬기중어느하나이다.

[99] 본발명의 일실시상태에 따르면,상기화학식 III의화합물은하기화합물중 어느하나일수있다:

[화학식 111-1]

0

243

000

99997368

2-(8,8-dimethyl-2,3,4,8,9,10-hexahydropyrano[2,3-f]chromen-3-yl)-5-ethoxyphenol [화학식 111-2] 2020/175962 1»(：1/10公020/002907

[111] 2-(8,8-dimethyl-2,3,4,8,9,10-hexahydropyrano[2,3-f]chromen-3-yl)-5-propylphenoL

[112] 본발명의일실시상태에따르면,상기화학식 I의피라노 [2, 3띠크로멘유도체 화합물은하기화학식 IV의화합물일수있다:

[113] [화학식 IV] 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

[115] 상기화학식 IV에서,

[116] II _!은수소원자;및치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 -（：₆알킬기중어느 하나이며,

[117] 요₂는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0 （ 알킬기;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄（ -（：₆알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：₃_（：₆ 알릴옥시기 ;및히드록시기중어느하나이고,

[118] 011 ₁및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

[119] II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（： （： ₆알킬기 ;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄（ - ᄅ알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0 ₃-0 ₆알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄（ ᅪ티오알킬기;및할로겐원자중어느하나이고,

[12이 11 ₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는에톡시이며,

[121] 및 11 ₆은각각독립적으로수소원자;및 0「（ 알킬기중어느하나이고,

[122] 상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기 및치환 티오알킬기의 경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄（：「（： ₅ 알킬기 ;직쇄또는분지쇄（：「（그 ₅알콕시기

티오알킬기중어느하나이다.

[123] 본발명의 일실시상태에 따르면,상기화학식 IV의화합물은하기화합물중 어느하나일수있다:

[124] [화학식 IV-!] 2020/175962 1»(：1/10公020/002907

[126] (R)-2-(8,8-dimethyl-2,3,4,8,9,10-hexahydropyrano[2,3-f]chromen-3-yl)-5-ethoxyphe 신

[127] [화학식 1\-2]

[128]

[129] (R)-2-(8,8-dimethyl-2,3,4,8,9,10-hexahydropyrano[2,3-f]chromen-3-yl)-5-propoxyph

[13이 [화학식 1\-3]

[131]

[132] (R)-2-(8,8-dimethyl-2,3,4,8,9,10-hexahydropyrano[2,3-f]chromen-3-yl)-5-propylphe

1101 2020/175962 1»（：1/10公020/002907

[135] （R）-2-（8,8-dimethyl-2,3,4,8,9,10-hexahydropyrano[2,3-f]chromen-3-yl）-5-butoxyphe

1101.

[136] 본발명의 일실시상태에 따르면,상기화학식 I의 피라노 [2, 3띠크로멘유도체 화합물은하기화학식 V의화합물일수있다:

[137] [화학식 V]

[138]

[139] 상기화학식 V에서,

[14이 II _!은수소원자;및치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（：₆알킬기중어느 하나이며,

[141] 요 ₂는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0「（그 ₆알킬기;치환또는비치환,

알릴옥시기;및히드록시기중어느하나이고,

[142] 011 및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

[143] II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：「（： ₆알킬기 ;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄。「（ 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0 ₃-0 ₆알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ;치환또는비치환, 직쇄또는분지쇄（ ᅪ티오알킬기;및할로겐원자중어느하나이고,

[144] 요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는에톡시이며, 2020/175962 1»(：1^1{2020/002907

[145] II ₅및 II ₆은각각독립적으로수소원자;및 0 ᄅ알킬기중어느하나이고,

[146] 상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기및치환 티오알킬기의경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄（：「（： ₅ 알킬기 ;직쇄또는분지쇄（：「（그 ₅알콕시기 ;및직쇄또는분지쇄

티오알킬기중어느하나이다.

[147] 본발명의일실시상태에따르면,상기화학식 V의화합물은하기화합물중 어느하나일수있다:

[148] [화학식 \니]

[149]

[153] (S)-2-(8,8-dimethyl-2,3,4,8,9,10-hexahydropyrano[2,3-f]chromen-3-yl)-5-propoxyph

[154] [화학식 \-3] 2020/175962 1»(：1/10公020/002907

[159] (S)-2-(8,8-dimethyl-2,3,4,8,9,10-hexahydropyrano[2,3-f]chromen-3-yl)-5-butoxyphe 1101.

[160] 본발명의일실시상태에따르면,상기화학식 I의화합물의약학적으로허용 가능한염은상기화학식 I의화합물이유리산과함께염을형성하여,산 부가염으로존재하는것을의미할수있다.상기화학식 1의화합물은당해 기술분야에서공지된통상의방법에따라약학적으로허용되는산부가염을 형성할수있다.상기유리산으로는유기산또는무기산을사용할수있고,상기 무기산으로는염산,브롬산,황산또는인산등을사용할수있고,상기

유기산으로는구연산,초산,젖산,주석산,말레인산,푸마르산,포름산, 프로피온산,옥살산,트리플루오로아세트산,벤조산,글루콘산,메탄술폰산, 글리콜산,숙신산, 4 -톨루엔술폰산,갈락투론산,엠본산,글루탐산또는 아스파르트산등을사용할수있다.

[161] 본발명의일실시상태에따른약학적조성물은상기화학식 I의

피라노 [2, 3귀크로멘유도체화합물,약학적으로허용가능한그의염,또는그 용매화물이외에약학적으로허용가능한담체，부형제또는희석제를포함할수 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 있다.상기 담체,부형제및희석제로는락토오스,덱스트로오스,수크로오스, 소르비톨,만니톨,자일리톨,에리스리톨,말티톨,전분,아카시아고무, 알지네이트,젤라틴,칼슘포스페이트,칼슘실리케이트,셀룰로오스,메틸 셀롤로오스,미정질셀룰로오스,폴리비닐피롤리돈,물,

메틸히드록시벤조에이트,프로필히드록시벤조에이트,탈크,마그네슘 스테아레이트및광물유를들수있다.

[162] 본발명의 일실시상태에 있어서,화학식 I의피라노 [2,3-f]크로멘유도체

화합물은대한민국특허공개번호 10-2015-0075030및 10-2018-0002539에 기재된 방법과동일한방법으로제조될수있다.다만,이에 한정되는것은아니다.

[163] 본발명에 있어서,신경계질환은크게중추신경계질환과말초신경계

질환으로분류할수있으며,중추신경계질환의 예로뇌 질환,척수질환을들수 있다.신경계질환은신경 변성,신경세포염증,미토콘드리아기능장애등에 의하여 발병되는것일수있다.

[164] 본발명의 일실시상태에 따른약학적조성물은상기 화학식 I의화합물이특히 PONase활성제로작용하여다양한항염증지표및미토콘드리아기능을 개선시키는데기여하므로,신경계질환의 예방또는치료에사용가능하다.본 발명의 일실시상태에 따른약학적조성물은예를들어,알츠하이머병,혈관성 치매 ,파킨슨병 ,뇌수막염 ,뇌전증,뇌졸중,뇌종양,근신경계질환,신경계감염 , 유전성신경질환,척수질환및 이상운동질환중어느하나의신경계질환의 예방또는치료에사용될수있다.그리고,신경계질환으로인하여발생하는 두통,어지러움증,통증등의 예방또는치료에도사용될수있다.

[165] 본발명의 일실시상태에 따르면,상기 약학적조성물은당해기술분야에

공지되어 있는통상적인약학적제형으로제제화될수있다.상기제형은 경구투여제제 ,주사제 ,좌제，경피투여제제 및경비투여제제를포함하지만,이에 한정되지 않는임의의 제형으로제제화되어투여될수도있다.바람직하게는 경구투여용제제 및주사제로제제화될수있다.

[166] 상기각각의 제형으로제제화시 ,각각의제형의 제조에필요한약학적으로 허용가능한담체를부가하여제조할수있다.본명세서에서용어 "약학적으로 허용가능한담체（pharmaceutically acceptable carrier）”는약학적활성성분을 제외한임의의구성성분을지칭하기 위해사용된다. "약학적으로허용 가능한’’이란조성물중에존재하는다른구성성분들과상호작용하여（예를 들면,담체들상호간또는약학적 활성성분과담체간의상호작용）약학적으로 바람직하지 않은변화를야기하지 않는성질을의미한다.상기 약학적으로허용 가능한담체의선택은특정한투여 제형의특성 ,투여 방식，용해도및안정성에 대한상기담체의 효과와같은인자에따라달라질수있다.

[167] 본발명의 일실시상태에 따르면,경구투여용약학적조성물에포함되는

약학적으로허용가능한담체는희석제,결합제,붕해제,활택제（또는윤활제）, 흡착제,안정화제,용해보조제,감미제,착색제및착향제중에서선택된 1종 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 이상일수있으나,이에 한정되는것은아니다.

[168] 희석제 (diluent)는조성물의부피를증량하여 제형에따른적절한크기로

만들기 위해 첨가되는임의의부형제를지칭한다.상기 희석제는,전분 (예를 들면,감자전분,옥수수전분,밀전분,전젤라틴화전분),미세결정성 셀룰로오스 (예를들면,저수화미결정셀룰로오스),유당 (예를들면,유당일수화물, 무수유당,분무유당),포도당,소르비톨,만니톨,수크로오스,알기네이트, 알칼리토금속류염,클레이,폴리에틸렌글리콜디칼슘포스페이트,

무수인산수소칼슘및이산화규소중에서선택된 1종이상일수있으나,이에 한정되는것은아니다.본발명에서상기 희석제는상기 약학적조성물총량에 대해 5중량%내지 50중량%범위로사용될수있다.예를들면,정제화및품질 유지를위해조성물총량에 대해 10중량%내지 35중량%로사용될수있다.

[169] 결합제 (binder)는분말상의물질에 점착성을부여하여 압착을용이하게하고 유동성을개선하기위해사용되는물질을지칭한다.상기결합제는전분, 미세결정성 셀룰로오스,고분산성실리카,만니톨,락토스,폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈,셀룰로오스유도체 (예를들면,

히드록시프로필메틸셀룰로오스,히드록시프로필셀룰로오스,

저치환도히드록시프로필셀룰로오스),천연검 ,합성검 ,포비돈,코포비돈및 젤라틴중에서선택된 1종이상일수있으나,이에 한정되는것은아니다.본 발명에서상기결합제는상기 약학적조성물총량에 대해 2중량%내지 15 중량%로사용될수있다.예를들면,정제화및품질유지를위해 1중량%내지 3 중량%로사용될수있다.

[17이 붕해제 (disintegant)는생체투여후고체제형의붕괴또는붕해를용이하게 하기 위해 첨가되는물질을지칭한다.상기붕해제는나트륨전분글리콜레이트, 옥수수전분,감자전분또는전젤라틴화전분과같은전분또는변성전분, 벤토나이트,몬모릴로나이트,비검 (veegum)과같은클레이 (clay),

미세결정성셀룰로오스,히드록시프로필셀룰로오스또는

카르복시메틸셀룰로오스와같은셀룰로오스,알긴산나트륨또는알긴산과같은 알긴류,크로스카르멜로스 (croscarmellose)나트륨과같은가교셀룰로오스, 구아검 ,잔탄검과같은검 ,가교폴리비닐피롤리돈 (crospovidone)과같은가교 중합체,중탄산나트륨,시트르산과같은비등성 제제를단독또는혼합하여 사용할수있으나,이에 한정되는것은아니다.본발명에서상기붕해제는상기 약학적조성물총량에 대해 ₂중량%내지 ₁₅중량%범위로사용될수있다.예를 들면,정제화및품질유지를위해 4중량%내지 10중량%로사용될수있다.

[171] 활택제 (glidant)또는윤활제 (lubricant)는압착설비에 대한분말의부착을

방지하고과립의유동을개선시키는기능을수행하는물질을지칭한다.상기 활택제는경질무수규산,탈크,스테아린산,스테아린산의금속염 (마그네슘염 또는칼슘염등),라우릴설페이트나트륨,수소화식물성오일,나트륨벤조에이트, 푸마르산스테아릴나트륨,글리세릴비헤네이트,글리세릴모노스테아레이트 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 또는폴리에틸렌글리콜을단독또는혼합사용할수있으나,이에 한정되는것은 아니다.본발명에서상기 활택제는상기 약학적조성물총량에 대해 0.1중량% 내지 5중량%로사용될수있다.예를들면,정제화및품질유지를위해 1중량% 내지 3중량%로사용될수있다.

[172] 흡착제 (adsorbant)는함수이산화규소,경질무수규산,

콜로이달실리콘디옥사이드,메타규산알루민산마그네슘,미결정셀룰로오스, 유당또는가교폴리비닐피롤리돈을단독또는혼합사용할수있으나이에 한정되는것은아니다.

[173] 안정화제 (stabilizer)는부틸히드록시아니솔,부틸히드록시톨루엔,카로틴, 레티놀,아스코르빈산,토코페롤,토코페롤폴리에틸렌글리콜숙신산또는 프로필갈레이트와같은항산화제 ,사이클로덱스트린,카르복시에틸

사이클로덱스트린,히드록시프로필사이클로덱스트린,술포부틸에테르또는 사이클로덱스트린과같은당류의환상화합물,인산,젖산,초산,구연산,주석산, 숙신산,말레인산,푸마르산,글리콜산,프로피온산,글루콘산또는

글루쿠론산과같은유기산중에서선택된 1종이상일수있으나,이에 한정되는 것은아니다.

[174] 선택적으로,상기 약학적조성물에는미각을돋구어기호성을증진시키기위한 공지의 첨가제가포함될수있다.예를들면,수크랄로오스,수크로오스, 프럭토오스,에리스리톨,아세설팜칼륨,당알코올,벌꿀,소르비톨또는 아스파르탐과같은감미제를첨가하여,쓴맛을보다효과적으로은폐시키고 제제의 안정성 및품질을유지할수있다.또한,구연산,구연산나트륨과같은 산미제,매실향,레몬향,파인애플향,허브향등의천연향료,천연과즙, 클로로필린,플라보노이드등의천연색소가사용될수있다.

[175] 상기경구투여용약학적조성물은경구투여를위한고형제제,반고형 제제 또는액상제제일수있다.경구투여를위한고형제제는예를들면,정제 ,환제 , 경질또는연질캡슐제,산제,세림,과립,용액또는현탁액재구성용분말, 로젠지,웨이퍼,구강필름 (oral strip)드라제 (dragee),쥬잉검 (chewable gum)등이 있으나,이에 한정되는것은아니다.경구투여를위한액상제제는액제,현탁제, 에멀젼,시럽제,엘릭서제 ,주정제 ,방향수제 ,레모네이드제 ,엑스제，침전제, 틴크제 및약유제를포함한다.반고형제제는에어로졸,크림,겔 (gel)등을 포함하나이에 한정되는것은아니다.

[176] 상기본발명에따른약학적조성물은주사제로서제제화될수있으며,

주사제로제제화될경우혈액과등장인무독성완충용액을희석제로서포함할 수있으며,예를들어 pH 7.4의 인산완충용액등이 있다.상기 약학적조성물은 완충용액 이외에기타다른희석제또는첨가제를포함할수있다.

[177] 상기 언급된제제에사용되는담체와제제의 제조방법은당해기술분야에 널리 알려져 바에따라선택하고제조할수있으며,예를들어 Remington's

Pharmaceutical Science최신판에 기재된방법에 따라제조될수있다. 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

[178] 상기본발명에따른약학적조성물의투여량및투여시기는투여대상의나이, 성별,상태,체중,투여경로,투여횟수,약의형태에따라서달라질수있다.일일 투여량은약 0.1내지 ^00 11¾/1¾이고,바람직하게는 1내지 100 1¾/1¾이다.상기 투여량은질환의종류,질환의진행정도,투여경로,성별,나이,체중등에따라 적절히증감될수있다.

[179] 상기본발명에따른약학적조성물은목적하는효과를얻기위하여,

유효성분으로서성인을기준으로 1일총투여량이화합물로서 0.1내지 1000 이되도록임의로수회나누어서투여할수있다.

[180] 상기본발명에따른약학적조성물은본발명에따른상기화학식 I의

화합물을전체조성물종중량에대해약 0.0001내지 중량%,바람직하게는 0.001내지 1중량%의양으로함유할수있다.

[181]

발명의실시를위한형태

[182] 이하,본발명을구체적으로설명하기위해실시예를들어상세하게

설명하기로한다.그러나,본발명에따른실시예들은여러가지다른형태로 변형될수있으며,본발명의범위가아래에서기술하는실시예들에한정되는 것으로해석되지않는다.본명세서의실시예들은당업계에서평균적인지식을 가진자에게본발명을보다완전하게설명하기위해제공되는것이다.

[183]

[184] <실험예 >

[185] 화학식 I의피라노 [2, 3귀크로멘유도체화합물이신경계질환의 예방또는

치료에효과가있는지여부를살펴보기위하여하기실험을진행하였다.

[186] 대한민국특허공개번호 10-2015-0075030및 10-2018-0002539에기재된방법을 이용하여제조된화학식 111-1, IV-!, \니, 1\-2, \-2, 11-1, 111-4, 1\-3, \-3, 111-2,

¥-4, 11-2, 111-3의화합물에대하여하기실험을수행하였다.또한, 글라브리딘（대촌화학,대한민국）을구입하여실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제한것을사용하였다.

[187]

[188] 1:스트레스상황하에서 1^>0>比 3（«011386 1）의활성억제방지확인

[189] 산화된리놀렌산을처리하면 의활성이저해되는것을이용하여,

활성억제방지확인실험을수행하였다.：?0 의활성은

기질로하여확인하였다.

[190] 구체적으로,에펜도르프튜브（Eppendorf 句 12개에각각 1 mM 0&（그 ₂를

포함하는 50 11^ 1¾8선（：1 9.6 를첨가한후,화학식 111-1, IV-!, V-!, 1\-2, \-2, 11-1, 1\-3, \-3, 111-2, 1\-4, \-4, 11-2, 111-3의화합물및글라브리딘을각각의 튜브에 0.2 씩첨가하여농도가 30 _l·iM이되도록하였다.상기 12개튜브에각각 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 汉쎄 刀개, ]·■社） 0.2 ¹를첨가하고혼합하였다.그후상온에서 30 분동안반응시키고, rePONl의활성을억제하기위하여 DMSO에녹인 1 mM 산화된리놀렌산（0 1 ） 0.5（此를각각첨가한후상온에서 2시간동안 반응시켜용액（I）을제조하였다.

[191] 384 \vell마 의 \vell에 1 mM 0&（：1 ₂를포함하는 50 mM 1¾선（：1에녹인 0.5 mM

1> ：8을 25 씩분주한후,상기용액（I）을각각 10 씩분주하고,

를포함하는 50 11^ 1¾8선（그에녹인 2 11^ 을각각 20 씩첨가하여 시료를준비하였다.스펙트로미터（SpectraMax M2）를이용하여 1시간동안

2분마다 37 °0, 420 11111에서시료들의흡광도를측정하였다.

[192] 또한,용액제조시화학식 111-1, 1\니, \니, 1\-2, \-2, 11-1, 1\-3, \-3, 111-2, 1\-4,

\-4, 11-2, 111-3의화합물및글라브리딘대신 DMSO를 0.2 ¹첨가한것을 제외하고상기한방법과동일한방법으로음성대조군을준비하였고,용액제조 시상기한화합물및글라브리딘대신 를 0.2 첨가한것및산화된 리놀렌산을첨가하지않은것을제외하고상기한방법과동일한방법으로정상 대조군을준비하여각각의흡광도를측정하였다.

[193] SoftMax Pro 를이용하여상기흡광도로부터 의활성도를하기식

1과같이계산하였고,하기표 1에그결과를나타내었다.

[194] [식 1]

[195] 활성도 =（톱광도시 톱광도 ； 톱광도 _!>0비-톱광도 ） * 100

[196]

[197] [표 1]

[198] 표 1로부터 ,화학식 111-1, IV-!, V-!, ^-2, \-2, 11-1, 1\니, \니, 111-2, 1\^-4, ¥-4, 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

II-2또는 III-3의화합물및 rePONl을포함하는용액에산화된리놀렌산을 첨가한경우,산화된리놀렌산에의한 rePONl의활성억제가방지되는것을 확인할수있다.그리고,글라브리딘및 rePONl을포함하는용액에산화된 리놀렌산을첨가한경우보다,화학식 III- 1, IV- 1, V-1, IV-2, V-2, II- 1, IV-3, V-3,

III-2, IV-4, V-4, II-2또는 III-3의화합물및 rePONl을포함하는용액에산화된 리놀렌산을첨가한경우 rePONl의활성억제를방지하는정도가큰것을확인할 수있다.

[199]

[20이 실험예 2: PON2(Paraoxonase 2)의발현확인실험

[201] 14주령 C57BL/6J DIO(Diet Induced Obesity)마우스 (The Jackson Laboratory, USA)를구입하여 ,정상대조군은 10 %지방식이 , DIO대조군은 60 %지방 식이를 3주동안먹였다.그리고,화학식 III-1의화합물투여군은 60 %지방 식이를 3주동안먹인후,매일 1회 6주동안화학식 III-1의화합물을 100 mg/kg 경구투여하였다.

[202] 상기정상대조군, DIO대조군,화학식 III- 1의화합물투여군의쥐를

희생시키고,간조직을적줄하여 PIC(protease inhibitor cocktail)가포함된 PBS 용액으로세척하고, 0.2내지 0.5 g크기로절편을만들어실험전까지 - 196 ^OC에 보관하였다.

[203] 상기정상대조군, DI0대조군,화학식 III- 1의화합물투여군의간조직절편을 이용하여하기실험을수행하였다.

[204] - PON2 mRNA의상대적인발현정도확인

[205] Real-time PCR을이용하여 PON2 mRNA의상대적인발현정도를확인하였다. 구체적으로,상기간조직에트리졸 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을첨가한후 균질기를이용하여분쇄한후,총 RNA를추출하였다. 1 의총 RNA에올리고 Dtl7프라이머 (oligo Dtl7 proimer) 100 pmol을첨가하고, 74 °0에서 10분동안 인큐베이션한후, 30 U RNasin(RNase inhibitor), 10 U AMV-RT(avian

myeloblastosis virus reverse transcriptase), AMV-RT버퍼 (프로메가 ^:社:,이스라엘)을 첨가한뒤 , 42 ^OC에서 2시간, 52 ^OC에서 1시간동안반응시켜 ,간조직에서추출한 RNA로부터 cDNA를합성하였다. cDNA는 (주)타카라바이오社의 SYBR Premix Ex Taq키트와어늘라이드바이오시스템 ^社:의 StepOnePlus Real-time PCR 시스템을이용하여증폭시켰다.

[206] 프라이머시퀀스는인테그레이티드 DNA테크놀로지社의프라이머퀘스트 소프트웨어를이용하여디자인하였다.사용된프라이머시퀀스는표 2와같다.

[207] 2020/175962 1»(：1^1{2020/002907

[표 2]

[208] 어닐링 (annealing)온도는 60 ^OC로하였다. GAPDH는어떠한조건에관계없이 모든조직에서일정하게발현되는하우스키핑유전자로, GAPDH프라이머는 같은양의 RNA가실험에사용되었다는것을확인하기위한용도로사용되었다.

[209] -웨스턴블랏분석을통한 P0N2의상대적인발현정도확인

[210] 상기간조직에 protease inhibitor cocktail을첨가한 lysis버퍼 (CelLytic™ MT Cell Lysis Reagent,시그마알드리치社)를첨가하고균질기를이용하여분쇄한후, 0 ^OC에서 30분동안인큐베이션하고, 4 ^OC, 14,000 rpm조건으로 15분동안 원심분리하여상등액을얻었다.단백질의농도를 Bradford법을이용하여정량한 후,동량의단백질을 10 % SDS-PAGE에서전기영동하여단백질을분리하고, 글리신-메탄올버퍼에서 PVDF막 (polyvinylidene difluoride membrane, Pall Corporation, USA)으로단백질을전사하였다. PVDF막을 5 %무지방유가포함된 블로킹용액에서블로킹한후, PON2항체 (Abeam, UK)로밤새

인큐베이션시켰다.다시 2차항체를반응시킨후, ECL용액 (Thermo Fisher Scientific, USA)을 PVDF막위에가하여발광시키고암실에서 X-선필름에 감광한후현상하였다.

[211] 액틴은하우스키핑유전자로,같은양의 RNA가실험에사용되었다는것을

확인하기위한용도로사용되었다.

[212] 도 1은정상대조군, DIO대조군,화학식 III-1의화합물투여군에서 (a) PON2 mRNA의상대적인발현정도및 (b) Actin에대한 PON2의상대적인발현정도를 나타낸그래프이다.

[213] 도 1로부터화학식 III-1의화합물투여군의경우, DIO대조군에비하여

PON2의발현이높을뿐만아니라,정상대조군에비해서도 PON2 mRNA및 PON2의발현이높은것을확인할수있다.

[214]

[215] 실험예 3:뉴로블라스토마세포 (SH-SY5Y세포)의손상된미토콘드리아기능 회복확인실험 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

[216] 3-1.미토콘드리아기능저하유도및세포배양

[217] 37 °C, 5%탄산가스및 95 %공기조건의 10 % FBS(fetal bovine serum)를

포함하는 1:1 DMEM/F12배지에서인간신경세포인 SH-SY5Y세포를

배양하였다.상기배양한세포를 2 * 10⁴세포/웰밀도로 96웰세포배양 플레이트에옮기고 24시간동안배양하였다.그후,혈청제한배지 (0.5 % FBS를 포함하는 1:1 DMEM/F12배지)로교체하고 16시간동안배양한후, 1 mM

MPP+(l-methyl-4-phenylpyridinium)로상기배양한세포를처리하고 24시간동안 배양하여세포에미토콘드리아기능저하를유도하였다.

[218] 이후각각의웰에 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1또는 1 ^iM의농도가되도록화학식 III- 1의화합물을첨가한후 24시간동안배양하였다.

[219]

[22이 3-2.미토콘드리아손상에따른세포사멸억제효능확인

[221] 3-1에서수득된배양물을각각 0.2 mg/ml

3-(4, 5 -디메틸티아졸- 2 -일)- 2, 5 -디페닐-테트라졸리움

브로마이 H (3 - (4, 5 -dimehty lthiozol-2y 1) -2,5 -dipheny l-2H-tetrazolium bromide, MTT; 시그마알드리치社)로처리하여 4시간동안배양하고,살아있는세포에의해 형성된 MTT포르마잔 (formazan)침전물을 0.04N염산/이소프로판올 (isopropanol) 100 에용해하여 , ELISA마이크로플레이트리더기 (Molecular Devices社)로 540 nm에서의흡광도를측정하였다.

[222] MMP+및화학식 III-1의화합물대신 DMSO를첨가한시료 (정상대조군);및 화학식 III-1의화합물을첨가하지않은시료 (음성대조군);를사용한것을 제외하고,상기한방법과동일한방법으로대조군의흡광도를측정하였다.

[223] 흡광도로부터세포생존력 (cell viability)백분율을구하였다.

[224] 도 2는실험예 3-2에따른세포생존력백분율을나타낸그래프이다.

[225] 도 2에나타난바와같이 ,화학식 III-1의화합물을첨가하는경우 MPP+에의해 손상된미토콘드리아의기능이회복되는것을확인할수있다.

[226]

[227] 3-3.미토콘드리아손상에따른세포내 ATP생성량감소에대한회복확인

[228] 3-1에서수득된배양물의세포파쇄물 100 를 ATP생물발광체세포시험

키트인생물발광성체세포분석키트 (bioluminescent somatic cell assay kit, 시그마알드리치社)를사용하여 100 !d루시페린-루시퍼라제 (luciferin-luciferase) 반응완충액과혼합하고, 20 ^OC에서 10분동안반응시켰다.그후,상등액을얻고 LB 9501루매트루미노미터 (Lumat-Luminometer)로형광세기를즉정하여 , 미토콘드리아손상에따른세포내 ATP생성량감소에대한회복을확인하였다.

[229] MMP+및화학식 III-1의화합물대신 DMSO를첨가한시료 (정상대조군);및 화학식 III-1의화합물을첨가하지않은시료 (음성대조군);를사용한것을 제외하고,상기한방법과동일한방법으로대조군의형광세기를측정하였다.

[23이 형광세기로부터세포내 ATP생성량을정상대조군에대한백분율로 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 나타내었다.

[231]

백분율을나타낸그래프이다.

[232] 도 3의그래프에나타난바와같이,화학식 111-1의 화합물을첨가하는경우, MPP+로인한미토콘드리아의손상에

감소가회복되는것을 확인할수있다.

[233]

[234] 3-4.미토콘드리아손상에따른활성산소발생완화효능확인

이용하여,활성산소발생정도를확인하였다.

[ 므必쇼및 0.05

첨가하여 37

°（：에서 1시간동안세포를염색하였다.그리고,형광분석기로여기 파장 485 11111, 방출파장 535 11111에서 0 ^의 형광세기 및여기파장 335며₁₁,방출파장 460 11111에서 비스벤지마이드의 형광세기를얻어활성산소발생정도를확인하였다.

[236] MMP+및화학식 111-1의 화합물대신 DMSO를첨가한시료（정상대조군）;및 화학식 111-1의 화합물을첨가하지 않은시료（음성 대조군）;를사용한것을 제외하고,상기한방법과동일한방법으로대조군의 형광세기를측정하였다.

[237] 형광세기로부터。 의농도를정상대조군에 대한백분율로나타내었다.

[238] 도 4는실험예 3-4에따른 1）0^농도백분율을나타낸그래프이다.

[239] 도 4의그래프에나타난바와같이,화학식 111-1의 화합물을첨가하는경우, MPP+를첨가함으로써유발되는세포독성으로인하여발생하는세포내활성 산소발생정도가감소하는것을확인할수있다.

[24이

[241] 3-5.미토콘드리아손상에따른미토콘드리아내부의활성산소발생완화효능 확인

[242] MitoSOX

환원되어 있는형광물질을이용하여

미토콘드리아내부활성산소발생정도를확인하였다. MitoSOX 1 （1는 호흡하는세포내로들어가기 전까지 형광을띠지 않으나,세포내로들어가서 산화되면선택적으로미토콘드리아를염색한다.

[243] 구체적으로, 3-1에서수득된배양물을 13 ¹ DMS0에녹인 50將의 MitoSOX 1 （1로처리하여 37ᄋ（：에서 1시간동안인큐베이션시켰다.

2번세척한뒤 , 0.05 비스벤지미드 :난 此 33342）를처리하여 37ᄋ（：에서 1시간동안염색하였다.그리고,형광분석기로여기파장 510 11111，방출 파장 595 11111에서 형광세기를측정하여 미토콘드리아내부에서 생성된활성 산소발생정도를확인하였다.

[244] MMP+및화학식 111-1의 화합물대신 DMSO를첨가한시료（정상대조군）;및 화학식 111-1의 화합물을첨가하지 않은시료（음성 대조군）;를사용한것을 제외하고,상기한방법과동일한방법으로대조군의 형광세기를측정하였다. 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

[245] 형광세기로부터 MitoSOX Red의농도를정상대조군에대한백분율로

나타내었다.

[246] 도 5는실험예 3-5에따른 Mito-SOX의농도백분율을나타낸그래프이다.

[247] 도 5의그래프에나타난바와같이,화학식 III-1의화합물을첨가하는경우, MPP+를첨가함으로써유발되는세포독성으로인하여발생하는미토콘드리아 내부에서생성된활성산소발생정도가감소하는것을확인할수있다.

[248]

[249] 결과적으로,실험예 3으로부터화학식 I의피라노 [2,3-f]크로멘유도체

화합물을포함하는경우미토콘드리아기능향상을통하여신경보호지표들이 개선되었음을확인할수있다.

[25이

[251] 심험예 4:항염증효과확이심험

[252] 4-1. RAW264.7세포, BV2세포의배양및전처리

[253] RAW264.7세포와 BV2세포 (5X10 ⁵cells八 veil)를 10 % heat-inactivated FBS, 페니실린 G(penicillin G) 10 IU/mL,스트렙토마이신 (streptomycin) 100 _[xg/mL,

L-글루타민 (L-glutamine) 2 mM을함유한 DMEM배지에분주하고 5% CO ₂ 배양기내에서 37 ^OC의온도로배양하였다.

[254] RAW264.7세포또는 BV2세포에화학식 III-3, III-4, V-3, III- 1, IV- 1, V-1, IV-2, V-2또는 II-2의화합물을첨가하여 MTT assay를통해화합물들의독성을 확인하였고,세포독성을나타내지않은농도를실험가능한농도로정하여하기 실험을진행하였다.

[255] 항염증효과확인실험에서 Butein은항염증물질로서참고를위하여

사용되었다.

[256] 먼저 ,배양한 RAW264.7세포또는 BV2세포에하기표 3과같이화합물을각각 첨가하고 3시간동안전처리하였다.

2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

[표 3]

[258]

[259] 4-2.別여와（：0 2단백질의 발현

[26이 4-1의 전처리물을나¾ 1 / 로 2

발현정도를웨스턴블랏을통해관찰하였고, NO와모0£ ₂의 생성을확인하였다.

[261]

세 른別여와（：0 2의 발현정도를나타낸그래프이고,

세포에서실험예 4-2에 도를나타낸그래프이다.

[262] 세포에서실험예 4-2에따른 NO의 생성도를

도 %는요쇼\¥264.7세포에서실험예 4-2에따른 모0£ ₂의 생성도를나타낸그래프이다.

[263] 도 1（ 내지 실험예 4-2에 따른 NO의 생성도를나타낸 그래프이고,

세포에서실험예 4-2에따른모0£ ₂의 생성도를나타낸그래프이다.

이용하여 염증반응에서 생성되는사이토카인인 1 1（3, 1 6또는 TNF-a의 mRNA발현 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 정도를확인하였다.

[267] 도 12&내지도 1 는요쇼\¥264.7세포에서

발현정도를나타낸그래프이고,도 13&내지도 1 는 11쇼\¥264.7세포에서 실험예 4-3에따른 1 6의 mRNA발현정도를나타낸그래프이고,도 14&내지도 1쑈는요쇼\¥264.7세포에서실험예 4-3에따른 TNFa의 1111어쇼발현정도를 나타낸그래프이

[268] 도 15&내지도

세포에서실험예 4-3에따른 1ᄂ1(3의 1111어쇼발현 정도를나타낸그래프이고,도 16&내지도

세포에서실험예 4-3에 따른 1ᄂ6의 1111 ^발현정도를나타낸그래프이고,도 1 내지도

세포에서실험예 4-3에따른 TNFa의 mRNA발현정도를나타낸그래프이다.

[269]

[27이 내부로의전사억제확인

[271]

1 / 로 1시간동안처리한후,웨스턴블랏을통해 NF-kB단백질의 p65와 ?50의핵내부로의전사정도를확인하였다.

[272] 도 18&내지도 1此는요쇼\¥264.7세포에서실험예 4-4에따른

?65와 _?50의핵내부로의전사정도를나타낸그래프이고,도 1

세포에서실험예 4-4에따른 NF-kB단백질의 p65와 ?50의핵내부로의전사 정도를나타낸그래프이다.

[273]

[274]

로부터화학식 111-3, 111-4,、!-3, 111-1, IV-!, V-!, 1\-2, \-2또는 11-2의화합물은요쇼\¥264.7세포, 3\2세포각각에서別03와 (：0 -2의발현,

NO와 ?0£ ₂의생성, 1ᄂ6, ^-1(3, TNF-a mRNA의발현및 NF-kB단백질의 p65와 00의핵내부로의전사정도를농도의존적으로감소시키는것을확인할수 있다.이에비하여,글라브리딘을첨가한경우에는,요쇼\¥

세포에서別여와 (：0 -2의발현, NO와 ?0£ ₂의생성 , 1ᄂ

1111 ^의발현및 NF-kB단백질의 p65와 ?50의핵내부로의전사정도가화학식 I의피라노 [2, 3귀크로멘유도체화합물을첨가한경우보다감소되지않는것을 확인할수있다.또한,화학식 I의피라노 [2, 3띠크로멘유도체화합물을첨가한 경우에는,글라브리딘을첨가한경우의글라브리딘농도보다낮은농도에서 글라브리딘과동등하거나그이상의항염증효과를나타내는것을확인할수 있다.

[275]

[276] 결과적으로,화학식 I의피라노 [2, 3귀크로멘유도체화합물은 PONase활성제로 작용하여다양한항염증지표및미토콘드리아기능을개선시키는데기여하는 것을확인할수있다.

Claims

2020/175962 1»（：1/10公020/002907 청구범위

［청구항 1］ 하기 화학식 I의피라노［2, 3쉬크로멘유도체화합물,약학적으로허용 가능한그의 염,또는그용매화물을포함하는신경계질환의 예방또는 치료용약학적조성물:

상기 화학식 I에서,

점선은선택적 이중결합이고,

II ₁은수소원자;

어느하나이며,

요 2는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0「（ 알킬기 ;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄。「（ 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는 분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;및히드록시기중어느하나이고,

01 및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（： ₆알킬기 ;치환 또는비치환,직쇄또는분지쇄（：「（그 ₆알콕시기 ;치환또는비치환,직쇄 또는분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ; 치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（: ₄티오알킬기;및할로겐원자 중어느하나이고,

요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는에톡시이며,

II ₅및 II ₆은각각독립적으로수소원자;

하나이고,

상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기 및 치환티오알킬기의경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄 0

-（： 3티오알킬기중어느하나이다.

［청구항 2］ 제 1항에 있어서,

상기

은수소원자,메틸기또는에틸기이고,

상기 II ₂는메틸기,에틸기, 11-프로필기, ₀ -프로필기, 11-부틸기,

0 -부틸기,

부틸기,메톡시기,에톡시기, II -프로폭시기, 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 0 -프로폭시기 , II -부톡시기 , 0 -부톡시

히드록시기이며,

상기 II ₃및 II ₄는각각수소원자이고,

상기 II ₅및 II ₆은각각메틸기인신경계질환의 예방또는치료용약학적 조성물.

［청구항 3］ 제 1항에 있어서,

상기 화학식 I의피라노［2, 3귀크로멘유도체화합물은하기화학식 II의 화합물인신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물:

［화학식 II］

상기 화학식 II에

II ₁은수소원자;

어느하나이며,

요 2는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0「（ 알킬기;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄。「（ 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는 분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;및히드록시기중어느하나이고,

01 및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（： ₆알킬기 ;치환 또는비치환,직쇄또는분지쇄（:「（그 ₆알콕시기 ;치환또는비치환,직쇄 또는분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ; 치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（: ₄티오알킬기;및할로겐원자 중어느하나이고,

요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는 며,

II ₅및 II ₆은각각독립적으로수소원자;

알킬기중어느 하나이고,

상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기 및 치환티오알킬기의경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄 0 1-0 5알킬기

쇄（： ₁

-（： ₃티오알킬기중어느하나이다. 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

［청구항 4］ 제 3항에있어서,

상기화학식 II의화합물은하기화합물중어느하나인신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물:

［화학식 11-1］

［청구항 5］ 제 1항에있어서,

상기화학식 I의피라노［2, 3귀크로멘유도체화합물은하기화학식 III의 화합물인신경계질환의예방또는치료용약학적조성물:

［화학식 III］

2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 상기 화학식 III에

II ₁은수소원자;

어느하나이며,

요 2는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0「（ 알킬기 ;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄。「（ 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는 분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;및히드록시기중어느하나이고,

01 및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（： ₆알킬기 ;치환 또는비치환,직쇄또는분지쇄（:「（그 ₆알콕시기 ;치환또는비치환,직쇄 또는분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ; 치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（: ₄티오알킬기;및할로겐원자 중어느하나이고,

요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는 며,

II ₅및 II ₆온각각독립적으로수소원자;

알킬기중어느 하나이고,

상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기 및 치환티오알킬기의경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄 0 1-0 5알킬기

쇄（： ₁

-（： ₃티오알킬기중어느하나이다.

[청구항 6] 제 5항에 있어서,

상기 화학식 III의 화합물은하기 화합물중어느하나인신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물:

[화학식 111- 1]

[화학식 111-2] 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

［청구항 7］ 제 1항에있어서,

상기화학식 I의피라노［2, 3귀크로멘유도체화합물은하기화학식 IV의 화합물인신경계질환의예방또는치료용약학적조성물:

［화학식 IV］ 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

상기화학식 IV에

II ₁은수소원자;

어느하나이며,

요 ₂는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0 （그 ₆알킬기;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄（ - ᄅ알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는 분지쇄（: _{3 6}알릴옥시기;및히드록시기중어느하나이고,

01^및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（：,-（： ₆알킬기 ;치환 또는비치환,직쇄또는분지쇄（: （그 ₆알콕시기 ;치환또는비치환,직쇄 또는분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ; 치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（: ₄티오알킬기;및할로겐원자 중어느하나이고,

요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는에톡시이며,

II ₅및 II ₆은각각독립적으로수소원자;

하나이고,

상기치환알킬기,치환알콕시기,치환알릴옥시기,치환아릴옥시기및 치환티오알킬기의경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄 0 1-0 ₅알킬기 ;직쇄또는분지쇄 0 ₅알콕시기 ;및직쇄또는분지쇄（： ₁

-（： ₃티오알킬기중어느하나이다.

[청구항 8] 제 7항에 있어서,

상기화학식 IV의화합물은하기화합물중어느하나인신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물:

[화학식 IV- 1] 2020/175962 1^/1012020/002907

［화학식 1\나］ 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

［청구항 9］ 제 1항에 있어서,

상기 화학식 I의피라노［2, 3귀크로멘유도체화합물은하기화학식 V의 화합물인신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물:

［화학식 V］

상기 화학식 V에서,

II ₁은수소원자;및치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0-（： ₆알킬기중 어느하나이며,

요 2는치환또는비치환,직쇄또는분지쇄 0「（ 알킬기;치환또는 비치환,직쇄또는분지쇄。「（ 알콕시기;치환또는비치환,직쇄또는 분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;및히드록시기중어느하나이고,

01 및 11 ₂중적어도하나는히드록시기이며,

II ₃은수소원자;치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（： ₆알킬기 ;치환 또는비치환,직쇄또는분지쇄（:「（그 ₆알콕시기 ;치환또는비치환,직쇄 또는분지쇄（： _{3 6}알릴옥시기 ;치환또는비치환 0 ₆-0 ₁₂아릴옥시기 ; 치환또는비치환,직쇄또는분지쇄（ -（: ₄티오알킬기;및할로겐원자 중어느하나이고,

요₄는수소원자;메틸;에틸;메톡시또는 며,

II ₅및 II ₆은각각독립적으로수소원자;

알킬기중어느 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907 하나이고,

상기치환알킬기 ,치환알콕시기 ,치환알릴옥시기 ,치환아릴옥시기및 치환티오알킬기의경우,상기치환기는할로겐원자;직쇄또는분지쇄 0 1-0 ₅알킬기 ;직쇄또는분지쇄 0 ₅알콕시기 ;및직쇄또는분지쇄（： ₁

-（： ₃티오알킬기중어느하나이다.

［청구항 10］ 제 9항에 있어서,

상기화학식 V의화합물은하기화합물중어느하나인신경계질환의 예방또는치료용약학적조성물:

［화학식 V-!］

［화학식 \니］ 2020/175962 1»（：1^1{2020/002907

［청구항 11］ 제 1항에있어서,

상기신경계질환은알츠하이머병,혈관성치매,파킨슨병,뇌수막염, 뇌전증,뇌졸중,뇌종양,근신경계질환,신경계감염,유전성신경질환, 척수질환및이상운동질환중어느하나인신경계질환의예방또는 치료용약학적조성물.