WO2020222461A1 - 면역항암 보조제 - Google Patents

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WO2020222461A1
WO2020222461A1 PCT/KR2020/005368 KR2020005368W WO2020222461A1 WO 2020222461 A1 WO2020222461 A1 WO 2020222461A1 KR 2020005368 W KR2020005368 W KR 2020005368W WO 2020222461 A1 WO2020222461 A1 WO 2020222461A1
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cancer
alkyl
alkenyl
cells
heteroatom
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장해영
박송이
노민영
김여명
김명화
안구현
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    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Definitions

  • the present invention relates to an anticancer adjuvant.
  • Cancer is a disease characterized by abnormal localized cell growth that has the potential to spread throughout the body. Cancer has a number of types of cancer including lung cancer, bladder cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, brain cancer, gastric cancer, colorectal cancer and melanoma. In the past, the most common means of treating cancer (oncology) have been surgery, radiation therapy, or the use of chemotherapy drugs. However, recently, cancer immunotherapy has proven to offer many possibilities as a treatment for oncology.
  • Cancer immunotherapy is a branch of oncology in which the immune system is used to treat cancer in stark contrast to conventional treatment methods in which the tumor is directly excised or treated. This therapeutic concept is based on the identification of many proteins on the surface of T cells that act to inhibit the immune function of these cells.
  • the theoretical background of genetically modified tumor vaccines based on this immunotherapy method is that the host possesses an antigen capable of recognizing the tumor as an external factor.
  • Human T and B lymphocytes have the ability to discriminate almost infinite antigenic differences through the development process in the form of antigen receptors, but practically meet the following two criteria for success in tumor immunity. Should be. First, tumor cells must express new antigens (peptides) that are not expressed in normal cells, and second, immune cells must recognize these antigens and be appropriately activated.
  • Patent Document 1 discloses a pharmaceutical composition for combined administration for the prevention or treatment of cancer, comprising a p53 activator and a c-Met inhibitor as active ingredients.
  • One object of the present invention is to provide an anticancer adjuvant.
  • Another object of the present invention is an immunological anticancer agent; And it is to provide a combination formulation for immune anticancer comprising the immune anticancer adjuvant.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for enhancing the efficacy of an immune anticancer agent.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for enhancing immunity.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating cancer.
  • Another object of the present invention is to provide a kit for chemotherapy.
  • An aspect of the present invention provides an anticancer adjuvant containing a compound represented by the following Formula 1, an isomer thereof, a solvate thereof, a hydrate thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • X is oxygen or sulfur
  • R 1 is hydrogen, halo, C 1-30 alkyl, C 3-10 cycloalkyl, C 2-30 alkenyl, C 3-10 cycloalkenyl, C 2-15 containing oxygen, sulfur or nitrogen as a heteroatom Heterocycloalkyl, C 3-15 heterocycloalkylalkyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as heteroatom, C 2-30 alkoxyalkyl, C 3-30 alkoxyalkoxyalkyl, containing oxygen, sulfur or nitrogen as heteroatom C 3-10 heterocycloalkenyl, C 1-20 alcohol, C 1-20 alkenol, C 2-30 acyl, C 1-10 amide, C 1-10 amine, C 2-15 ester, sulfate, carboxyl group, C 3-20 carboxyalkyl, C 3-20 carboxy alkenyl, C 3-20 alkyl, carboxyl, C 3-20 alkenyl, carboxyl, C 3-20 alkyl, carboxyalkyl, C 3-20 alkyl, carboxy-alkenyl
  • R 21 is C 2-30 alkyl, C 3-10 cycloalkyl, C 2-30 alkenyl, C 3-10 cycloalkenyl, C 2-30 carboxyalkyl, C 2-30 alkylcarboxyl, C 3-30 carboxy alkenyl, C 3-30 alkenyl, carboxyl, C 3-30 alkyl, carboxyalkyl, C 3-30 alkyl, carboxy alkenyl, C 3-30 alkenyl, carboxy alkyl, C 4-30 alkenyl, carboxy-alkenyl, heteroaryl, C 2-10 heterocycloalkyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as an atom, C 3-10 heterocycloalkylalkyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as a heteroatom, C 2-30 alkoxyalkyl, C 3-30 alkoxy Alkoxyalkyl, C 3-10 heterocycloalkenyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as heteroatom, C 1-20 alcohol, C 1-20 alkenol, C 2-30 acyl, C 1
  • R 22 is hydrogen, hydroxy, halo or C 1-10 alkyl
  • R 23 is hydrogen, hydroxy or C 1-10 alkyl
  • R 21 may form a double bond to the carbon to which R 22 and R 23 are bonded together;
  • R 23 may form a double bond to the carbon bonded to R 21 and R 22 together;
  • R 21 or R 23 forms a double bond on the carbon, R 22 does not contain an atom;
  • R 3 and R 4 are independently of each other hydrogen or C 1-10 alkyl).
  • Another aspect of the present invention is an immune anticancer agent
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for enhancing the efficacy of an immuno-anticancer agent containing the compound, its isomer, its solvate, its hydrate or its pharmaceutically acceptable salt as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for enhancing immunity comprising the compound, its isomer, its solvate, its hydrate or its pharmaceutically acceptable salt as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention is an immune anticancer agent
  • It provides a method for preventing or treating cancer, comprising administering the immunotherapy adjuvant to a subject in need thereof.
  • Another aspect of the present invention is an immune anticancer agent
  • It provides a kit for anticancer treatment containing the immune anticancer adjuvant as an active ingredient.
  • the immune anti-cancer adjuvant according to the present invention exhibits an effect of enhancing the anti-cancer effect of the immune anti-cancer agent by activating the function of the immune factor without causing side effects in vivo by co-administering it with an anti-cancer agent. have.
  • 1A is a schematic diagram showing a procedure until preparation and sacrifice of an experimental animal model.
  • Figure 1b is a graph showing the change in tumor size of the mouse according to the MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • Figure 1c is a graph showing the survival rate of mice according to the MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • 2A is a photograph of a mouse after MC38 colon cancer cell line injection and drug administration, and before the tumor and spleen are removed.
  • Figure 2b is a photograph of the spleen extracted from the mice subjected to the MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • 2C is a photograph of a tumor extracted from a mouse after injection of the MC38 colon cancer cell line and administration of drugs.
  • Figure 2d is a graph showing the change in body weight of mice injected with MC38 colon cancer cell line and drug administration.
  • Figure 2e is a graph showing the tumor weight of mice injected with the MC38 colon cancer cell line and drug administration.
  • Figure 2f is a graph showing the change in spleen weight of mice injected with MC38 colon cancer cell line and drug administration.
  • 3A-3C are results of FACS analysis on tumors of mice injected with the MC38 colon cancer cell line and administered with drugs.
  • 3D is a graph showing the levels of immune factors in each drug administration group through the CD45.2+ marker.
  • Figure 3e is a graph showing the level of CD4 + T cells in each drug administration group.
  • Figure 3f is a graph showing the level of CD8 + T cells in each drug administration group.
  • Figure 3g is a graph showing the level of natural killer cells in each drug administration group.
  • Figure 3h is a graph showing the level of regulatory T cells in each drug administration group.
  • 4A is a graph showing the proliferation capacity of CD4 + T cells in total% in each drug administration group.
  • 4B is a graph showing the proliferation capacity of CD8 + T cells in total% in each drug administration group.
  • Figure 4c is a graph showing the total percentage of proliferation capacity of natural killer cells in each drug administration group.
  • Figure 4d is a graph showing the proliferation capacity of CD4 + T cells in each drug administration group as MFI (mean fluorescence intensity).
  • Figure 4e is a graph showing the proliferation capacity of CD8 + T cells in each drug administration group as MFI (mean fluorescence intensity).
  • Fig. 4f is a graph showing the proliferation capacity of natural killer cells in MFI (mean fluorescence intensity) in each drug administration group.
  • 5A is a graph showing the level of CD107a in CD4 + T cells in each drug administration group.
  • 5B is a graph showing the level of CD107a in CD8 + T cells in each drug administration group.
  • 6A is a graph showing the level of TNF ⁇ in CD4 + T cells in each drug administration group.
  • 6B is a graph showing the level of TNF ⁇ in CD8 + T cells in each drug administration group.
  • 7A is a graph showing the level of IFN ⁇ in CD4 + T cells in each drug administration group.
  • 7B is a graph showing the level of IFN ⁇ in CD8 + T cells in each drug administration group.
  • 8A-8B are results of FACS analysis on tumors of mice injected with MC38 colon cancer cell line and administered with drugs.
  • 8C is a graph showing the levels of CD107a in CD4 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • 8D is a graph showing the levels of TNF ⁇ of CD4 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • 8E is a graph showing IFN ⁇ levels of CD4 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • 8F is a graph showing the level of CD107a of CD8 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • Figure 8g is a graph showing the level of TNF ⁇ of CD8 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • Figure 8h is a graph showing the IFN ⁇ level of CD8 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • Figure 9a is a fluorescence photograph showing the expression level of the adhesive bond in the tumor in each drug administration group.
  • 9B is a graph showing the fluorescence density by quantifying the expression level of intratumor adhesive bonds in each drug-administered group.
  • Fig. 10 is a fluorescence photograph showing the expression levels of PDL1 and CD3 in each drug administration group.
  • 11A is a photograph of RT-PCR performed on the expression of pro-inflammatory cytokines and anti-inflammatory cytokines in each drug administration group.
  • 11B is a picture of RT-PCR for the expression of CXCL9, iNOS and Gapdh in each drug administration group.
  • Figure 11c is a photograph showing a graph of the mRNA expression level through RT-PCR for each group.
  • 12A is a schematic diagram showing a procedure according to CD4/8+T, NK removal, MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • Figure 12b is a diagram confirming the results of CD4/8+T and NK removal after injection of the MC38 colon cancer cell line and drug administration through flow cytometry, and confirming that the removal of immune cells proceeded smoothly.
  • 12C shows the survival rate of mice according to the removal of CD4/8+T and NK after MC38 colon cancer cell line injection and drug administration, and is a diagram confirming that the survival rate of the mice in the experimental group from which CD8+ T cells were removed has the lowest survival rate.
  • Figure 12d shows the same process as in Figure 5c, showing the growth rate of the tumor according to the CD4/8 + T removal after the injection of the MC38 colon cancer cell line and drug administration over time.
  • the tumor This is a diagram confirming that the growth rate is the largest.
  • 12E is a comparison of the tumor size according to CD4/8+T and NK removal after MC38 colon cancer cell line injection and drug administration for each experimental group, and a diagram confirming that the tumor size was the largest in the case of the experimental group mice from which CD8+ T cells were removed. to be.
  • Figure 13a is a schematic diagram showing the procedure of the MC38 colon cancer cell line injection and long-term drug administration.
  • 13B is a graph showing the survival rate of mice according to the MC38 colon cancer cell line injection and long-term drug administration.
  • 13C is a graph showing the tumor size of mice according to the MC38 colon cancer cell line injection and long-term drug administration.
  • embodiments of the present invention may be modified in various other forms, and the scope of the present invention is not limited to the embodiments described below.
  • embodiments of the present invention are provided in order to more completely explain the present invention to those having average knowledge in the art.
  • "including" a certain component throughout the specification means that other components may be further included, rather than excluding other components unless specifically stated to the contrary.
  • One aspect of the present invention provides an anticancer adjuvant.
  • an immuno-anticancer adjuvant containing a compound represented by the following formula (1), an isomer thereof, a solvate thereof, a hydrate thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • X is oxygen or sulfur
  • R 1 is hydrogen, halo, C 1-30 alkyl, C 3-10 cycloalkyl, C 2-30 alkenyl, C 3-10 cycloalkenyl, C 2-15 containing oxygen, sulfur or nitrogen as a heteroatom Heterocycloalkyl, C 3-15 heterocycloalkylalkyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as heteroatom, C 2-30 alkoxyalkyl, C 3-30 alkoxyalkoxyalkyl, containing oxygen, sulfur or nitrogen as heteroatom C 3-10 heterocycloalkenyl, C 1-20 alcohol, C 1-20 alkenol, C 2-30 acyl, C 1-10 amide, C 1-10 amine, C 2-15 ester, sulfate, carboxyl group, C 3-20 carboxyalkyl, C 3-20 carboxy alkenyl, C 3-20 alkyl, carboxyl, C 3-20 alkenyl, carboxyl, C 3-20 alkyl, carboxyalkyl, C 3-20 alkyl, carboxy-alkenyl
  • R 21 is C 2-30 alkyl, C 3-10 cycloalkyl, C 2-30 alkenyl, C 3-10 cycloalkenyl, C 2-30 carboxyalkyl, C 2-30 alkylcarboxyl, C 3-30 carboxy alkenyl, C 3-30 alkenyl, carboxyl, C 3-30 alkyl, carboxyalkyl, C 3-30 alkyl, carboxy alkenyl, C 3-30 alkenyl, carboxy alkyl, C 4-30 alkenyl, carboxy-alkenyl, heteroaryl, C 2-10 heterocycloalkyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as an atom, C 3-10 heterocycloalkylalkyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as a heteroatom, C 2-30 alkoxyalkyl, C 3-30 alkoxy Alkoxyalkyl, C 3-10 heterocycloalkenyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as heteroatom, C 1-20 alcohol, C 1-20 alkenol, C 2-30 acyl, C 1
  • R 22 is hydrogen, hydroxy, halo or C 1-10 alkyl
  • R 23 is hydrogen, hydroxy or C 1-10 alkyl
  • R 21 may form a double bond to the carbon to which R 22 and R 23 are bonded together;
  • R 23 may form a double bond to the carbon bonded to R 21 and R 22 together;
  • R 21 or R 23 forms a double bond on the carbon, R 22 does not contain an atom;
  • R 3 and R 4 are independently of each other hydrogen or C 1-10 alkyl).
  • X in Formula 1 may be oxygen.
  • R 1 of Formula 1 is hydrogen, halo, C 1-10 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 2-10 alkenyl, C 3-8 cycloalkenyl, including oxygen, sulfur or nitrogen as a heteroatom.
  • R 1 in Formula 1 is hydrogen, C 1-10 alkyl, C 3-8 cycloalkyl, C 2-10 alkenyl, C 3-8 cycloalkenyl, C 2-8 heterocyclo containing oxygen as a heteroatom.
  • the cycloalkyl or heterocycloalkyl is hydroxy, halo, C 1-5 alkyl, C 1-5 alcohol, C 1-5 alkoxy, C 2-8 alkoxyalkyl, C 6-20 aryl , C 7-20 may be substituted by arylcarboxyl or a combination thereof;
  • the C 3-10 cycloalkenyl or heterocycloalkenyl is hydroxy, halo, C 1-5 alkyl, C 2-8 alkylcarboxyl, C 3-8 alkylcarboxylalkyl, C 1-5 alcohol, C 1 -5 alkoxy, C 2-8 alkoxyalkyl, C 6-20 aryl, C 7-20 arylcarboxyl, or combinations thereof;
  • the aryl is substituted by hydroxy, halo, C 1-5 alkyl, C 1-5 alcohol, C 1-5 alkoxy, C 2-8 alkoxyalkyl, nitro, C 2-8 alkylcarboxylamino, or a combination thereof
  • the aralkyl is by hydroxy, halo, C 1-5 alkyl, C 1-5 alcohol, C 1-5 alkoxy, C 2-8 alkoxyalkyl, nitro, C 2-8 alkylcarboxylamino, or a combination thereof.
  • the alkaryl is by hydroxy, halo, C 1-5 alkyl, C 1-5 alcohol, C 1-5 alkoxy, C 2-8 alkoxyalkyl, nitro, C 2-8 alkylcarboxylamino, or a combination thereof.
  • the arylcarbonyl is hydroxy, halo, C 1-5 alkyl, C 1-5 alcohol, C 1-5 alkoxy, C 2-8 alkoxyalkyl, nitro, or C 2-8 alkylcarboxylamino, or a combination thereof May be substituted by;
  • the heteroaryl is by hydroxy, halo, C 1-5 alkyl, C 1-5 alcohol, C 1-5 alkoxy, C 2-8 alkoxyalkyl, nitro, C 2-8 alkylcarboxylamino, or a combination thereof.
  • R 21 in Formula 1 is a straight chain or branched C 2-15 alkyl, C 3-10 cycloalkyl, C 2-15 alkenyl, C 3-10 cycloalkenyl, C 2-15 carboxyalkyl, C 2-15 alkyl carboxyl, C 3-15 carboxy alkenyl, C 2-15 alkenyl, carboxyl, C 3-15 alkyl, carboxyalkyl, C 3-15 alkyl, carboxy alkenyl, C 3-15 alkenyl, carboxyalkyl, C 2- 30 alkenylcarboxyalkenyl, C 2-10 heterocycloalkyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as heteroatom, C 3-10 heterocycloalkylalkyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as heteroatom, C 2-20 Alkoxyalkyl , C 3-30 alkoxyalkoxyalkyl, C 3-10 heterocycloalkenyl containing oxygen, sulfur or nitrogen as a heteroatom, C 1-20 alcohol, C 1-20 alkenol, C 2-30
  • R 23 in Formula 1 may be C 1-5 alkyl or may form a double bond with respect to carbon bonded with R 21 and R 22 .
  • Examples of the compound represented by Formula 1 according to the present invention may be a compound represented by the following Formula 2:
  • the compound represented by Formula 1 of the present invention can be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid, phosphorous acid, etc., aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes.
  • Non-toxic organic acids such as dioates, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, trifluoroacetic acid, acetate, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid, etc.
  • pharmaceutically non-toxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, i.
  • the acid addition salt according to the present invention can be prepared by a conventional method, for example, a precipitate formed by dissolving the derivative of Formula 1 in an organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile, etc. and adding an organic or inorganic acid May be prepared by filtration and drying, or may be prepared by distilling off a solvent and an excess of acid under reduced pressure and then drying to crystallize under an organic solvent.
  • an organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile, etc.
  • a pharmaceutically acceptable metal salt can be made using a base.
  • the alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the undissolved compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt as the metal salt.
  • the corresponding salt is obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).
  • the present invention includes not only the compound represented by Formula 1 and its pharmaceutically acceptable salts, but also solvates, optical isomers, hydrates, etc. that may be prepared therefrom.
  • hydrate refers to a compound of the present invention containing a stoichiometric or non-stoichiometric amount of water bound by a non-covalent intermolecule force. Or its salt.
  • the hydrate of the compound represented by Formula 1 of the present invention may contain a stoichiometric or non-stoichiometric amount of water bound by a non-covalent intermolecular force.
  • the hydrate may contain 1 equivalent or more, preferably 1 to 5 equivalents of water.
  • These hydrates may be prepared by crystallizing the compound represented by Formula 1, isomers thereof, or pharmaceutically acceptable salts thereof from water or a solvent containing water.
  • solvate refers to a compound of the present invention or a salt thereof containing a stoichiometric or non-stoichiometric amount of a solvent bound by non-covalent intermolecular forces.
  • Preferred solvents therefor include volatile, non-toxic, and/or suitable solvents for administration to humans.
  • isomers refers to a compound of the present invention or a salt thereof having the same chemical formula or molecular formula, but structurally or sterically different.
  • isomers include structural isomers such as tautomers, R or S isomers having an asymmetric carbon center, stereoisomers such as geometric isomers (trans, cis), and optical isomers. All these isomers and mixtures thereof are also included within the scope of the present invention.
  • the compound represented by Chemical Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be administered in various oral and parenteral formulations at the time of clinical administration, more preferably parenteral It can be a formulation.
  • it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants that are usually used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations include at least one excipient in one or more compounds, such as starch, calcium carbonate, sucrose, or lactose ( lactose), gelatin, etc.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, and syrups.In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as humectants, sweeteners, fragrances, preservatives, etc. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, and emulsions.
  • the non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used.
  • the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be administered in various oral and parenteral formulations upon clinical administration.
  • formulation it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants that are usually used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations include at least one excipient in one or more compounds, such as starch, calcium carbonate, sucrose, or lactose ( lactose), gelatin, etc.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, and syrups.In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as humectants, sweeteners, fragrances, preservatives, etc. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, and emulsions.
  • the non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used.
  • Immuno-anticancer adjuvants containing the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient can be administered parenterally, and parenteral administration is by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, or intrathoracic injection It depends on how to do it.
  • the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof is mixed in water together with a stabilizer or buffer to prepare a solution or suspension, and the ampoule or vial unit dosage form It can be manufactured with
  • the composition may be sterilized and/or contain adjuvants such as preservatives, stabilizers, hydrating agents or emulsification accelerators, salts and/or buffers for controlling osmotic pressure, and other therapeutically useful substances, which are conventional methods of mixing, granulation. It can be formulated according to the method of painting or coating.
  • Formulations for oral administration include, for example, tablets, pills, hard/soft capsules, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, granules, elixirs, and troches.
  • diluents e.g., lactose
  • lubricants e.g. silica, talc, stearic acid and its magnesium or calcium salt and/or polyethylene glycol.
  • Tablets may contain a binder such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and/or polyvinylpyrrolidine, and in some cases, boron such as starch, agar, alginic acid or sodium salt thereof. It may contain release or boiling mixtures and/or absorbents, colorants, flavoring agents, and sweetening agents.
  • a binder such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and/or polyvinylpyrrolidine, and in some cases, boron such as starch, agar, alginic acid or sodium salt thereof. It may contain release or boiling mixtures and/or absorbents, colorants, flavoring agents, and sweetening agents.
  • the immune anti-cancer adjuvant may enhance the efficacy of the immuno-anti-cancer agent, and more specifically, by activating an immune factor to assist the anti-cancer action of the immuno-anti-cancer agent, may enhance the efficacy of the immuno-anti-cancer agent.
  • the immune factor may be at least one selected from the group consisting of helper T cells, cytotoxin T cells, NK cells, and cytokines.
  • the immune anti-cancer adjuvant may be administered simultaneously or sequentially with the immuno-anti-cancer agent, and when sequentially administered, the immuno-anti-cancer agent may be injected after the immuno-anti-cancer adjuvant, or the immuno-anti-cancer adjuvant may be added after the immuno-anti-cancer agent.
  • the administration method is only an example, and the administration method may be changed to enhance the immune anticancer effect.
  • the immuno-anticancer adjuvant was administered intravenously daily and the immuno-anticancer agent was administered intra-abdominal intravenous intraperitoneal injection three times a week, but this is also an example, and is not limited thereto.
  • the immune anticancer adjuvant activates one or more immune factors selected from the group consisting of helper T cells, cytotoxin T cells, natural killer cells, and cytokines. I can make it. By activating the above immune factor, it exhibits the effect of improving the anticancer effect of the immune anticancer agent.
  • the immune anticancer adjuvant may be administered in combination with an immune anticancer agent to prevent or treat cancer.
  • the cancers include pseudomyxoma, intrahepatic biliary tract cancer, hepatoblastoma, liver cancer, thyroid cancer, colon cancer, testicular cancer, myelodysplastic syndrome, glioblastoma, oral cancer, cleft lip cancer, mycosis fungoides, acute myelogenous leukemia, acute lymphocytic leukemia, basal cell cancer, Ovarian epithelial carcinoma, ovarian germ cell carcinoma, male breast cancer, brain cancer, pituitary adenoma, multiple myeloma, gallbladder cancer, biliary tract cancer, colon cancer, chronic myelogenous leukemia, chronic lymphocytic leukemia, retinoblastoma, choroidal melanoma, barter bulge cancer, bladder cancer, peritoneal cancer , Parathyroid cancer, adrenal cancer, non-sinus cancer, non-small cell lung cancer, tongue cancer, astrocytoma, small cell lung cancer, pediatric brain cancer
  • the immuno-anticancer adjuvant is not limited and may be administered in combination as long as it is an immuno-anti-cancer agent well known to those skilled in the art.
  • anti-PD1, anti-PDL1, anti-CTLA4, anti-LAG3, anti-VISTA , anti-BTLA, anti-TIM3, anti-HVEM, anti-CD27, anti-CD137, anti-OX40, anti-CD28, anti-PDL2, anti-GITR, anti-ICOS, anti-SIRP ⁇ , anti-ILT2, anti -ILT3, anti-ILT4, anti-ILT5, anti-EGFR, anti-CD19 and anti-TIGIT may be co-administered with one or more anticancer drugs selected from the group consisting of, but is not limited thereto.
  • Another aspect of the present invention provides a combination formulation for anti-cancer immune.
  • a combination formulation for immuno-anticancer comprising the immuno-anticancer agent and the immuno-anticancer adjuvant.
  • immuno-anticancer agent The detailed description of the immuno-anticancer agent, the immuno-anti-cancer adjuvant, and the combination is the same as that of the immuno-anti-cancer adjuvant.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for enhancing the efficacy of an immune anticancer agent.
  • compositions for enhancing the efficacy of an immunological anticancer agent containing a compound represented by the following Formula 1, an isomer thereof, a solvate thereof, a hydrate thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • R 1 to R 4 and X are the same as the specific description for Formula 1 in the immuno-anticancer adjuvant.
  • the specific description of the pharmaceutical composition for enhancing the efficacy of the immuno-anticancer agent is the same as the specific description of the immuno-cancer adjuvant.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for enhancing immunity.
  • composition for enhancing immunity containing a compound represented by the following Formula 1, an isomer thereof, a solvate thereof, a hydrate thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • R 1 to R 4 and X are the same as the specific description for Formula 1 in the immuno-anticancer adjuvant.
  • the specific description of the pharmaceutical composition for enhancing immunity is the same as the specific description of the immuno-anticancer adjuvant.
  • Another aspect of the present invention provides a method of preventing or treating cancer, comprising administering an anticancer adjuvant and an anticancer agent to a subject in need thereof.
  • the immuno-cancer adjuvant or immuno-cancer agent may be administered in combination or concurrently.
  • Another aspect of the present invention provides the use of an anticancer adjuvant and an anticancer agent in the prevention or treatment of cancer.
  • Another aspect of the present invention provides a combination therapy for the treatment of cancer comprising administering an anticancer adjuvant and an anticancer agent to a subject in need thereof.
  • Another aspect of the present invention provides a kit for the prevention or treatment of cancer containing an immuno-anticancer adjuvant and an immuno-anticancer agent as an active ingredient.
  • the SAC-1004 compound which is a pharmaceutical composition for administration in combination with an anticancer agent of the present invention represented by Formula 2, was prepared according to the following Scheme 1 based on Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2011-0047170.
  • mice C57BL/6 7-week-old male mice were injected with MC-38 colon cancer cells 5 ⁇ 10 5 (cells) subcutaneously. After 7 days of injection of the colon cancer cells, the average tumor volume of subcutaneous MC-38 tumors was about 40 mm 3 .
  • the mouse tumor administration method as described above is the same for all of the following four groups, after which the vehicle-administered control group, SAC-1004 and anti-PD1 combined administration group, SAC-1004 alone administration group, and anti-PD1 alone administration group. Divided and conducted the experiment.
  • 1A is a schematic diagram showing a procedure until preparation and sacrifice of an experimental animal model.
  • the specific method of administration is daily intravenous injection of SAC-1004, which is a blood vessel leak inhibitor, dissolved in DMSO in PBS, and 1 mg per 1 kg of body weight per mouse is administered, and anti-PD1, an immune checkpoint inhibitor, is administered intraperitoneally three times a week, with rat igG2a 200. 200 ng per mouse was administered together with ng. SAC-1004 and anti-PD1 were administered for 7 days according to each group in the same manner as described above, and tumors and spleens were removed on the 8th day.
  • SAC-1004 is a blood vessel leak inhibitor, dissolved in DMSO in PBS, and 1 mg per 1 kg of body weight per mouse is administered, and anti-PD1, an immune checkpoint inhibitor, is administered intraperitoneally three times a week, with rat igG2a 200. 200 ng per mouse was administered together with ng.
  • SAC-1004 and anti-PD1 were administered for 7 days according to each group in the same manner as described above, and tumors
  • a medium is added to the cells, centrifuged, and the precipitated cells are collected and counted. Live cells were stained at 37° C. for about 30 minutes. Only living cells are stained and washed three times with PBS. Correction is performed through live/dead staining. In addition, FACS was performed using Canto. Through this, the activity ratio of T cells can be compared.
  • T cells are involved in the adaptive immune response helps T cells (helper T cell) in CD4 + T cells and cytotoxic T cells (cytotoxic T cell) which can be divided by CD8 + T cells derived from CD4 + T cells, but the cells It is divided into regulatory T cells (Treg cells, regulatory T cells) that suppress toxic T cells.
  • regulatory T cells Teg cells, regulatory T cells
  • NK cells natural killer cells having cytotoxic properties involved in the innate immune response, and the levels of the cells were measured for each group.
  • a CD4 antibody was used to measure CD4 + T cells, which are helper T cells
  • a CD8 antibody was used to measure CD8 + T cells, which are cytotoxic T cells.
  • CD25 antibody and Foxp 3 antibody were used to measure regulatory T cells
  • NK1.1 antibody was used to measure natural killer cells.
  • T cells The function of T cells is largely measured in two ways.
  • One method is to measure the secretion of IFN ⁇ or TNF ⁇ , which are pro-inflammatory cytokines, from T cells by analyzing cytokine production capacity, and the other method is to measure cytotoxicity.
  • tumor size changes were analyzed according to drug administration for 7 days as described above in the experimental animal model. I did.
  • Figure 1b is a graph showing the change in tumor size of the mouse according to the MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • 2A is a photograph of a mouse after MC38 colon cancer cell line injection and drug administration, and before the tumor and spleen are removed.
  • 2C is a photograph of a tumor extracted from a mouse after injection of the MC38 colon cancer cell line and administration of drugs.
  • the size of the tumor decreased in the anti-PD1 alone group and the SAC-1004 alone group compared to the control group, and the tumor size decreased in the group administered with SAC-1004 and anti-PD1 together compared to the group administered alone. . This was demonstrated statistically using two-way ANOVA.
  • mice In a total of four groups consisting of a control group, SAC-1004 and anti-PD1 combined administration group, SAC-1004 alone administration group and anti-PD1 alone administration group, the survival rate of mice was analyzed as described above in the experimental animal model for 7 days. I did.
  • Figure 1c is a graph showing the survival rate of mice according to the MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • the survival rate of mice according to drug administration in the anti-PD1 alone administration group was higher than in the control group and the SAC-1004 alone administration group, and the survival rate of the SAC-1004 and anti-PD1 combination administration group was higher than that of the anti-PD1 alone administration group. It was high. This was demonstrated statistically using two-way ANOVA.
  • mice administered the drug for 7 days as described above in the experimental animal model was analyzed. I did.
  • Figure 2d is a graph showing the change in body weight of mice injected with MC38 colon cancer cell line and drug administration.
  • mice administered the drug for 7 days as described above in the experimental animal model was analyzed. I did.
  • Figure 2b is a photograph of the spleen extracted from the mice subjected to the MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • Figure 2f is a graph showing the change in spleen weight of mice injected with MC38 colon cancer cell line and drug administration.
  • the spleen weight of the SAC-1004 alone group was higher than that of the control group, the anti-PD1 alone group had a higher spleen weight than the anti-PD1 alone group, and the SAC-1004 and anti-PD1 combination group were The spleen weight is higher. However, this was not statistically significant when one-way ANOVA was used.
  • mice administered with the drug for 7 days as described above in the experimental animal model were analyzed. I did.
  • Figure 2e is a graph showing the tumor weight of mice injected with the MC38 colon cancer cell line and drug administration.
  • the tumor weight of the anti-PD1 alone group was lower than that of the control group
  • the tumor weight of the SAC-1004 alone group was lower than that of the anti-PD1 alone group
  • SAC-1004 and anti-PD1 combination were used compared to the SAC-1004 alone group.
  • the tumor weight of the administration group was lower. This was also verified statistically using one-way ANOVA.
  • FACS Fluorescence activated cell sorting
  • CD4 antibody was used to measure CD4 + T cells, which are helper T cells
  • a CD8 antibody was used to measure CD8 + T cells, which are cytotoxic T cells.
  • CD25 antibody and Foxp 3 antibody were used to measure regulatory T cells
  • NK1.1 antibody was used to measure natural killer cells.
  • 3A-3C are results of FACS analysis on tumors of mice injected with the MC38 colon cancer cell line and administered with drugs.
  • 3D is a graph showing the levels of immune factors in each drug administration group through the CD45.2+ marker.
  • Figure 3e is a graph showing the level of CD4 + T cells in each drug administration group.
  • Figure 3f is a graph showing the level of CD8 + T cells in each drug administration group.
  • Figure 3g is a graph showing the level of natural killer cells in each drug administration group.
  • Figure 3h is a graph showing the level of regulatory T cells in each drug administration group.
  • the level of not only helper T cells but also cytotoxic T cells was significantly high, the level of natural killer cells was also high, and the level of regulatory T cells that inhibited cytotoxic T cells was Decreased. This was demonstrated statistically through a one-way ANOVA.
  • the effect of activating T cells is greater when administered in combination with SAC-1004 and immunotherapy than when administered alone.
  • the proliferation capacity of the factors was analyzed, and Ki67, a proliferation marker, was used to measure the proliferation capacity.
  • 4A is a graph showing the proliferation capacity of CD4 + T cells in total% in each drug administration group.
  • 4B is a graph showing the proliferation capacity of CD8 + T cells in total% in each drug administration group.
  • Figure 4c is a graph showing the total percentage of proliferation capacity of natural killer cells in each drug administration group.
  • Figure 4d is a graph showing the proliferation capacity of CD4 + T cells in each drug administration group as MFI (mean fluorescence intensity).
  • Figure 4e is a graph showing the proliferation capacity of CD8 + T cells in each drug administration group as MFI (mean fluorescence intensity).
  • Fig. 4f is a graph showing the proliferation capacity of natural killer cells in MFI (mean fluorescence intensity) in each drug administration group.
  • helper T cells cytotoxic T cells
  • natural killer cells in the SAC-1004 and anti-PD1 co-administration group was higher than that of the other groups.
  • CD107a which is involved in degranulation of natural killer cells and activation of CD8 + T cells, was used as a marker, and peptides and PMA/ionomycin were treated to activate T cells. There is a difference in that the group treated with the peptide put the peptide expressed in the tumor in vitro, and the group treated with PMA/ionomycin stimulates the T cell calcium signal to activate all T cells.
  • 5A is a graph showing the level of CD107a in CD4 + T cells in each drug administration group.
  • 5B is a graph showing the level of CD107a in CD8 + T cells in each drug administration group.
  • the group not treated with the peptide and PMA/ionomycin had a lower level of CD107a in T cells, and the group treated with the PMA/ionomycin had higher levels of CD107a in T cells than the peptide.
  • the level of CD107a in CD8 + T cells was high in the SAC-1004 and anti-PD1 co-administration group.
  • TNF ⁇ which is a proinflammatory cytokine marker
  • 6A is a graph showing the level of TNF ⁇ in CD4 + T cells in each drug administration group.
  • 6B is a graph showing the level of TNF ⁇ in CD8 + T cells in each drug administration group.
  • the difference in the level of TNF ⁇ was small in each drug-administered group, but when the peptide was treated and PMA/ionomycin was treated, SAC-1004 and anti-PD1 The level of TNF ⁇ was significantly increased in the co-administration group.
  • IFN ⁇ is also a pro-inflammatory cytokine marker. Similarly, after treatment with peptide and PMA/ionomycin in order to activate T cells, the level of IFN ⁇ was measured.
  • 7A is a graph showing the level of IFN ⁇ in CD4 + T cells in each drug administration group.
  • 7B is a graph showing the level of IFN ⁇ in CD8 + T cells in each drug administration group.
  • the difference in the level of IFN ⁇ was small in each drug-administered group when the peptide and PMA/ionomycin were not treated in CD8 + T cells, but SAC when the peptide was treated and PMA/ionomycin was treated.
  • the level of IFN ⁇ was significantly increased in the -1004 and anti-PD1 co-administration groups.
  • FACS analysis, cytotoxicity analysis, and cytokine production ability analysis were performed using CD107a, TNF ⁇ and IFN ⁇ markers.
  • peptides and PMA/ionomycin were treated to activate T cells.
  • 8A-8B are results of FACS analysis on tumors of mice injected with MC38 colon cancer cell line and administered with drugs.
  • 8C is a graph showing the level of CD107a of CD4 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • Figure 8d is a graph showing the level of TNF ⁇ of CD4 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • 8E is a graph showing IFN ⁇ levels of CD4 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • 8F is a graph showing CD107a levels of CD8 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • Figure 8g is a graph showing the level of TNF ⁇ of CD8 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • 8h is a graph showing IFN ⁇ levels of CD8 + T cells in the spleen in each drug administration group.
  • the above results show that the cytotoxic effect of killing cancer cells is superior when administered in combination with SAC-1004 and immune anticancer agents, respectively, than when administered alone, and that the effect of activating T cells, an immune-related factor, is superior. From, it can be seen that the pharmaceutical composition for co-administration of the present invention can improve the anticancer effect of the immune anticancer agent by activating the immune factor.
  • Figure 9a is a fluorescence photograph showing the expression level of the adhesive bond in the tumor in each drug administration group.
  • 9B is a graph showing the expression level of intratumor adhesive bonds in terms of fluorescence density in each drug-administered group.
  • FIG. 9A is an IHC staining experiment
  • DAPI Dense-labeled DNA
  • CD31 was used to stain blood vessels
  • the adhesion protein VE-cadherin was It was used to show adherent junctions.
  • VE-cadherin is well expressed, drug delivery is well and the anticancer effect is increased.
  • endothelial cells are well bonded to stabilize blood vessels and T cells penetrate well into the tumor.
  • the ratio of VE-cadherin in tumors was increased in the SAC-1004 alone group than in the control group and the anti-PD1 alone group, and the SAC-1004 and anti-PD1 combination compared to the SAC-1004 alone group.
  • VE-cadherin was well expressed in the tumor.
  • PDL1 in tumors of mice following drug administration for 7 days The expression of (programmed death-ligand 1) was analyzed.
  • PDL1 is a ligand expressed in tumors, and CD3 is used as a T cell marker.
  • Fig. 10 is a fluorescence photograph showing the expression levels of PDL1 and CD3 in each drug administration group.
  • FIG. 10 shows that the IHC staining experiment was performed, and the increase in PDL1 means that anti-PD1 was well delivered and thus immune activation occurred.
  • the SAC-1004 and anti-PD1 combined administration group was more than the anti-PD1 alone administration group.
  • the level of expression of PDL1 and CD3 is high.
  • the degree of expression of kine was analyzed. Pro-inflammatory cytokines and anti-inflammatory cytokines were used as cytokine markers, and RT-PCR was performed.
  • 11A is a photograph of RT-PCR performed on the expression of pro-inflammatory cytokines and anti-inflammatory cytokines in each drug administration group.
  • 11B is a picture of RT-PCR for the expression of CXCL9, iNOS and Gapdh in each drug administration group.
  • Figure 11c is a photograph showing a graph of the mRNA expression level through RT-PCR for each group.
  • Ifny was increased in the group administered with anti-PD1, and increased more in the group administered with SAC-1004 and anti-PD1 than in the group administered with anti-PD1.
  • Figure 12a is a schematic diagram showing a procedure according to the CD4/8 + T, NK removal, MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • Figure 12b is a diagram confirming that the results of CD4/8 + T and NK removal after MC38 colon cancer cell line injection and drug administration were confirmed through flow cytometry, and that the removal of immune cells proceeded smoothly.
  • 12C shows the survival rate of mice according to the removal of CD4/8 + T and NK after MC38 colon cancer cell line injection and drug administration, and is a diagram confirming that the survival rate of the mice in the experimental group from which CD8 + T cells were removed has the lowest survival rate.
  • Figure 12d shows the same process as in Figure 5c, showing the growth rate of the tumor according to the CD4/8 + T removal after injection of the MC38 colon cancer cell line and drug administration over time. This is a diagram confirming that the growth rate is the largest.
  • FIG. 12E shows the removal of CD4/8 + T and NK after MC38 colon cancer cell line injection and drug administration.
  • the tumor size was compared for each experimental group. This is a diagram confirming that the tumor size was the largest in the case of mice in the experimental group from which CD8+ T cells were removed.
  • a total of four groups consisting of the control group, SAC-1004 and anti-PD1 combined administration group, SAC-1004 alone administration group, and anti-PD1 alone administration group were injected with drugs for a long period of time to analyze the survival rate.
  • Figure 13a is a schematic diagram showing the procedure of the MC38 colon cancer cell line injection and long-term drug administration.
  • 13B is a graph showing the survival rate of mice according to the MC38 colon cancer cell line injection and long-term drug administration.
  • 13C is a graph showing the tumor size of mice according to the MC38 colon cancer cell line injection and long-term drug administration.
  • the above ingredients were mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional tablet preparation method.
  • a gelatin capsule was filled according to a conventional capsule preparation method to prepare a capsule.
  • injections were prepared by containing the above ingredients in the indicated amount.
  • an ointment was prepared by containing the above ingredients in the indicated amount.

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Abstract

본 발명은 면역항암 보조제에 관한 것으로, 상기 보조제는 면역항암제와 병용투여함으로써, 생체 내 부작용을 유발하지 않으면서도 면역 인자의 기능을 활성화시킴으로써 면역항암제의 항암효과를 증진시키는 효과를 나타내어, 면역항암 보조제로 유용하게 사용할 수 있다.

Description

면역항암 보조제
본 발명은 면역항암 보조제에 관한 것이다.
암은 신체 전체로 퍼질 가능성이 있는 비정상의 국소적인 세포 성장을 특징으로 하는 질환이다. 암은 폐암, 방광암, 전립선암, 췌장암, 자궁경부암, 뇌암, 위암, 결장직장암 및 흑색종을 포함한 다수의 암의 유형이 있다. 과거 종양 암을 치료하는 가장 흔한 수단 (종양학)은 수술, 방사선 치료 또는 화학요법 약물의 사용이었다. 그러나, 최근에 암 면역요법이 종양학의 치료법으로서 많은 가능성을 제시하는 것으로 입증되었다.
암 면역요법은 종양이 직접 절제되거나 치료되는 기존의 일반적인 치료 방법과는 아주 대조적으로 암 치료에 면역계가 사용되는 종양학의 한 분야이다. 이 치료 개념은 이들 세포의 면역 기능을 저해하도록 작용하는 T 세포의 표면에 있는 많은 단백질의 동정에 기초한다.
종양면역에 있어 가장 근본적인 문제는 면역체계가 어떻게 이들 항원을 인식하고 제거할 수 있도록 활성화 시키는가이다. 이런 측면에서, 종양세포들이 특정 사이토카인을 분비하도록 유전공학적인 조작을 가하는 새로운 방식은 종양면역에 신기원을 이룩하였다.
이러한 면역치료법에 근거한 유전적으로 변형된 종양백신의 이론적인 배경은 숙주가 외부인자로 종양을 인식할 수 있는 항원을 보유하고 있다는 점이다. 인체의 T 및 B 림프구들은 발생과정을 거쳐 거의 무한대의 항원차이를 구별할 수 있는 능력을 항원 수용체(antigen receptor)의 형태로 갖추었지만, 실질적으로 종양면역의 성공을 위해서는 다음의 두 가지 기준에 부합해야 한다. 첫째로 종양 세포들이 정상세포에서는 발현하지 않는 신규 항원(펩타이드)을 발현해야 하며, 둘째로 면역 세포들이 이들 항원을 인식하고 적절하게 활성화가 되어야 한다.
종래의 사이토카인 유전자를 도입한 종양세포를 이용한 면역치료법은 백서를 이용한 동물실험에서 그 효과를 발휘하였다. 현재, 전 세계적으로 특정 사이토카인 유전자를 도입한 종양 세포를 백서에 투입할 경우 이들 백서에서 신규 종양의 퇴치와 종양면역이 획득될 수 있다는 연구들이 진행되고 있다.
세계적으로, 천만 명 이상의 사람이 매년 암으로 진단되며, 이 숫자는 2020년까지는 매년 1500만의 새로운 증례로 증가할 것이다. 암은 매년 600만 명의 사망을 야기하거나, 세계적으로 사망의 12%를 야기한다. 암을 치료할 수 있는 방법에 대한 필요성은 여전히 남아 있다. 이들 방법은 인간 및 다른 포유동물에서 암의 예방 또는 치료에 유용한 약학적 조성물에 대한 근거를 제공할 수 있다.
특히, 암 치료용 병용투여는 다중 수단을 통해 질환을 공격한다는 이점이 인지됨에 따라 점점 더 일반화되어 가고 있다. 병용투여는, 항암제에 대하여 저항성이 나타난 경우에도 유용할 뿐만 아니라 효능이 나타나는 경우에도 항암제의 효능을 증진시켜 투여하는 항암제의 양을 감소시킬 수 있는 장점이 있다. 이를 통하여 항암제의 신체의 각 장기에 미치는 독성 및 부작용은 최소화하면서 항암 효능은 증대시키는 것이 가능하다. 비록 다수의 효과적인 병용 요법 치료법이 지난 수십 년간에 걸쳐 확인되기는 하였지만; 계속해서 매년 암 사망수는 높다는 것에 비추어 볼 때, 항암 치료법에서 사용하기 위한 효과적인 치료법을 확인하는 것이 계속적으로 요구되고 있다.
특허문헌 1에서는 p53 활성화제 및 c-Met 억제제를 유효성분으로 포함하는, 암의 예방 또는 치료를 위한 병용 투여용 약학 조성물에 대하여 개시한 바 있다.
본 발명의 일 목적은 면역항암 보조제를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 면역항암제; 및 상기 면역항암 보조제를 포함하는 면역항암용 병용제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 면역항암제 효능 증진용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 면역 증강용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 암의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 항암치료용 키트를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명의 일 측면은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역항암 보조제를 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000001
(상기 화학식 1에서,
X는 산소 또는 황이고;
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000002
는 단일결합 또는 이중결합을 나타내고;
R 1은 수소, 할로, C 1-30 알킬, C 3-10 사이클로알킬, C 2-30 알케닐, C 3-10 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-15 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-15 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-30 알콕시알킬, C 3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알케닐, C 1-20 알코올, C 1-20 알케놀, C 2-30 아실, C 1-10 아미드, C 1-10 아민, C 2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C 3-20 카르복시알킬, C 3-20 카르복시알케닐, C 3-20 알킬카르복실, C 3-20 알케닐카르복실, C 3-20 알킬카르복시알킬, C 3-20 알킬카르복시알케닐, C 3-20 알케닐카르복시알킬, C 4-20 알케닐카르복시알케닐, C 6-30 아릴, C 6-30 아랄킬, C 6-30 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C 3-30 헤테로아릴 또는 C 6-30 아릴카르보닐이고;
R 21은 C 2-30 알킬, C 3-10 사이클로알킬, C 2-30 알케닐, C 3-10 사이클로알케닐, C 2-30 카르복시알킬, C 2-30 알킬카르복실, C 3-30 카르복시알케닐, C 3-30 알케닐카르복실, C 3-30 알킬카르복시알킬, C 3-30 알킬카르복시알케닐, C 3-30 알케닐카르복시알킬, C 4-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-30 알콕시알킬, C 3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알케닐, C 1-20 알코올, C 1-20 알케놀, C 2-30 아실, C 1-10 아미드, C 1-10 아민 또는 C 2-15 에스테르이고;
R 22는 수소, 히드록시, 할로 또는 C 1-10 알킬이고;
R 23은 수소, 히드록시 또는 C 1-10 알킬이고;
R 21은 R 22 및 R 23과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
R 23은 R 21 및 R 22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
R 21 또는 R 23이 상기 탄소에 이중결합을 형성하는 경우 R 22는 원자를 포함하지 않고; 및
R 3 및 R 4는 서로 독립적으로 수소 또는 C 1-10 알킬이다).
본 발명의 다른 일 측면은 면역항암제; 및
상기 면역항암 보조제를 포함하는 면역항암용 병용제제를 제공한다.
본 발명의 다른 일 측면은 상기 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역항암제 효능 증진용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 상기 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 면역항암제; 및
상기 면역항암 보조제를 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 면역항암제; 및
상기 면역항암 보조제를 유효성분으로 함유하는 항암치료용 키트를 제공한다.
본 발명에 따른 면역항암 보조제는 면역항암제와 병용투여함으로써, 생체 내 부작용을 유발하지 않으면서도 면역 인자의 기능을 활성화시킴으로써 면역항암제의 항암효과를 증진시키는 효과를 나타내어, 면역항암 보조제로 유용하게 사용할 수 있다.
도 1a는 실험 동물 모델의 준비 및 희생까지의 절차를 나타낸 개략도이다.
도 1b는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 함에 따른 마우스의 종양크기 변화를 나타낸 그래프이다.
도 1c는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 함에 따른 마우스의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2a는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 후에, 종양 및 비장을 적출하기 전의 마우스 사진이다.
도 2b는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스에서 적출한 비장의 사진이다.
도 2c는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 후, 마우스에서 적출한 종양의 사진이다.
도 2d는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 몸무게 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2e는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 종양무게를 나타낸 그래프이다.
도 2f는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 비장무게 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3a-3c는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 종양에 대해 FACS 분석을 한 결과이다.
도 3d는 CD45.2+ 마커를 통해 각 약물투여군에서 면역 인자들의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3e는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3f는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3g는 각 약물투여군에서 자연살생세포의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3h는 각 약물투여군에서 조절T세포의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 4a는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포의 증식능력을 전체%로 나타낸 그래프이다.
도 4b는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포의 증식능력을 전체%로 나타낸 그래프이다.
도 4c는 각 약물투여군에서 자연살생세포의 증식능력을 전체%로 나타낸 그래프이다.
도 4d는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포의 증식능력을 MFI(mean fluorescence intensity)로 나타낸 그래프이다.
도 4e는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포의 증식능력을 MFI(mean fluorescence intensity)로 나타낸 그래프이다.
도 4f는 각 약물투여군에서 자연살생세포의 증식능력을 MFI(mean fluorescence intensity)로 나타낸 그래프이다.
도 5a는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포 내 CD107a의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 5b는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포 내 CD107a의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 6a는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포 내 TNFα의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 6b는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포 내 TNFα의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 7a는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포 내 IFNγ의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 7b는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포 내 IFNγ의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8a-8b는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 종양에 대해 FACS 분석을 한 결과이다.
도 8c는 각 약물투여군에서 비장 내 CD4 +T세포의 CD107a 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8d는 각 약물투여군에서 비장 내 CD4 +T세포의 TNFα 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8e는 각 약물투여군에서 비장 내 CD4 +T세포의 IFNγ 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8f는 각 약물투여군에서 비장 내 CD8 +T세포의 CD107a 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8g는 각 약물투여군에서 비장 내 CD8 +T세포의 TNFα 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8h는 각 약물투여군에서 비장 내 CD8 +T세포의 IFNγ 수준을 나타낸 그래프이다.
도 9a는 각 약물투여군에서 종양 내 접착 결합의 발현 수준을 나타낸 형광발광 사진이다.
도 9b는 각 약물투여군에서 종양 내 접착 결합의 발현 수준을 수치화하여 형광발광 밀도로 나타낸 그래프이다.
도 10은 각 약물투여군에서 PDL1 및 CD3의 발현 수준을 나타낸 형광발광 사진이다.
도 11a는 각 약물투여군에서 전염증성 사이토카인과 항염증성 사이토카인들의 발현에 대해 RT-PCR을 수행한 사진이다.
도 11b는 각 약물투여군에서 CXCL9, iNOS 및 Gapdh의 발현에 대해 RT-PCR을 수행한 사진이다.
도 11c는 각 군별로 RT-PCR을 통해 mRNA 발현 수준을 그래프로 나타낸 사진이다.
도 12a는 CD4/8+T, NK 제거, MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여에 따른 절차를 나타낸 개략도이다.
도 12b는 MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여 후 CD4/8+T, NK 제거에 따른 결과를 유세포 분석을 통해 확인하였고, 면역세포의 제거가 원활히 진행되었음을 확인한 도이다.
도 12c는 MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여 후 CD4/8+T, NK 제거에 따른 마우스의 생존율을 나타낸 것으로, CD8+ T 세포를 제거한 실험군 마우스의 경우 가장 생존율이 낮은 것을 확인한 도이다.
도 12d는 상기 도 5c와 동일한 과정을 나타낸 것으로, MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여 후 CD4/8+T 제거에 따른 종양의 성장율을 시간에 따라 나타낸 것으로, CD8+ T 세포를 제거한 실험군 마우스의 경우 종양 성장율이 가장 큰 것을 확인한 도이다.
도 12e는 MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여 후 CD4/8+T, NK 제거에 따른 종양의 크기를 각 실험군마다 비교한 것으로, CD8+ T 세포를 제거한 실험군 마우스의 경우 종양 크기가 가장 큰 것을 확인한 도이다.
도 13a는 MC38 대장암 세포주 주입 및 장기간 약물투여의 절차를 나타낸 개략도이다.
도 13b는 MC38 대장암 세포주 주입 및 장기간 약물투여에 따른 마우스의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 13c는 MC38 대장암 세포주 주입 및 장기간 약물투여에 따른 마우스의 종양 크기를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
한편, 본 발명의 실시 형태는 여러가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 형태로 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 실시 형태는 당해 기술분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 나아가, 명세서 전체에서 어떤 구성요소를 "포함"한다는 것은 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있다는 것을 의미한다.
본 발명의 일 측면은, 면역항암 보조제를 제공한다.
구체적으로, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역항암 보조제를 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000003
(상기 화학식 1에서,
X는 산소 또는 황이고;
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000004
는 단일결합 또는 이중결합을 나타내고;
R 1은 수소, 할로, C 1-30 알킬, C 3-10 사이클로알킬, C 2-30 알케닐, C 3-10 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-15 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-15 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-30 알콕시알킬, C 3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알케닐, C 1-20 알코올, C 1-20 알케놀, C 2-30 아실, C 1-10 아미드, C 1-10 아민, C 2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C 3-20 카르복시알킬, C 3-20 카르복시알케닐, C 3-20 알킬카르복실, C 3-20 알케닐카르복실, C 3-20 알킬카르복시알킬, C 3-20 알킬카르복시알케닐, C 3-20 알케닐카르복시알킬, C 4-20 알케닐카르복시알케닐, C 6-30 아릴, C 6-30 아랄킬, C 6-30 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C 3-30 헤테로아릴 또는 C 6-30 아릴카르보닐이고;
R 21은 C 2-30 알킬, C 3-10 사이클로알킬, C 2-30 알케닐, C 3-10 사이클로알케닐, C 2-30 카르복시알킬, C 2-30 알킬카르복실, C 3-30 카르복시알케닐, C 3-30 알케닐카르복실, C 3-30 알킬카르복시알킬, C 3-30 알킬카르복시알케닐, C 3-30 알케닐카르복시알킬, C 4-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-30 알콕시알킬, C 3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알케닐, C 1-20 알코올, C 1-20 알케놀, C 2-30 아실, C 1-10 아미드, C 1-10 아민 또는 C 2-15 에스테르이고;
R 22는 수소, 히드록시, 할로 또는 C 1-10 알킬이고;
R 23은 수소, 히드록시 또는 C 1-10 알킬이고;
R 21은 R 22 및 R 23과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
R 23은 R 21 및 R 22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
R 21 또는 R 23이 상기 탄소에 이중결합을 형성하는 경우 R 22는 원자를 포함하지 않고; 및
R 3 및 R 4는 서로 독립적으로 수소 또는 C 1-10 알킬이다).
상기 화학식 1의 X는 산소일 수 있다.
상기 화학식 1의 R 1은 수소, 할로, C 1-10 알킬, C 3-8 사이클로알킬, C 2-10 알케닐, C 3-8 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-8 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-20 알콕시알킬, C 3-20 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-8 헤테로사이클로알케닐, C 1-10 알코올, C 1-10 알케놀, C 2-20 아실, C 1-10 아미드, C 1-5 아민, C 2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C 3-20 카르복시알킬, C 3-20 카르복시알케닐, C 3-20 알킬카르복실, C 3-20 알케닐카르복실, C 3-20 알킬카르복시알킬, C 3-20 알킬카르복시알케닐, C 3-20 알케닐카르복시알킬, C 4-20 알케닐카르복시알케닐, C 6-20 아릴, C 6-20 아랄킬, C 6-20 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C 3-20 헤테로아릴 또는 C 6-20 아릴카르보닐일 수 있다.
상기 화학식 1의 R 1은 수소, C 1-10 알킬, C 3-8 사이클로알킬, C 2-10 알케닐, C 3-8 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C 2-8 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-20 알콕시알킬, C 3-10 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C 3-8 헤테로사이클로알케닐, C 1-10 알코올, C 1-10 알케놀, C 1-10 아미드, C 1-5 아민, C 2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C 3-20 카르복시알킬, C 3-20 카르복시알케닐, C 3-20 알킬카르복실, C 3-20 알케닐카르복실, C 3-20 알킬카르복시알킬, C 3-20 알킬카르복시알케닐, C 3-20 알케닐카르복시알킬, C 4-20 알케닐카르복시알케닐, C 6-20 아릴, C 6-20 아랄킬, C 6-20 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C 3-20 헤테로아릴 또는 C 6-20 아릴카르보닐일 수 있다.
상기 화학식 1의 R 1에서 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, C 6-20 아릴, C 7-20 아릴카르복실 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 C 3-10 사이클로알케닐 또는 헤테로사이클로알케닐은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 2-8 알킬카르복실, C 3-8 알킬카르복실알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, C 6-20 아릴, C 7-20 아릴카르복실 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 아릴은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 아랄킬은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 알카릴은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 아릴카르보닐은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, 또는 C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 헤테로아릴은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있다.
상기 화학식 1의 R 21은 직쇄 또는 분쇄의 C 2-15 알킬, C 3-10 사이클로알킬, C 2-15 알케닐, C 3-10 사이클로알케닐, C 2-15 카르복시알킬, C 2-15 알킬카르복실, C 3-15 카르복시알케닐, C 2-15 알케닐카르복실, C 3-15 알킬카르복시알킬, C 3-15 알킬카르복시알케닐, C 3-15 알케닐카르복시알킬, C 2-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-20 알콕시알킬, C 3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알케닐, C 1-20 알코올, C 1-20 알케놀, C 2-30 아실, C 1-10 아미드, C 1-10 아민 또는 C 2-15 에스테르일 수 있다.
상기 화학식 1의 R 23은 C 1-5 알킬이거나 또는 R 21 및 R 22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있다.
상기 화학식 1의
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000005
는 이중결합일 수 있다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 예로는 하기 화학식 2로 표시되는 화합물을 들 수 있다:
[화학식 2]
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000006
본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 트리플루오로아세트산, 아세테이트, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜서 제조할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.
용어 "수화물(hydrate)"은 비공유적 분자간력(non-covalent intermolecμLar force)에 의해 결합된 화학양론적(stoichiometric) 또는 비화학양론적(non-stoichiometric) 량의 물을 포함하고 있는 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다. 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 수화물은 비공유적 분자간 힘으로 결합되는 화학양론적 또는 비화학양론적 양의 물을 포함할 수 있다. 상기 수화물은 1당량 이상, 바람직하게는, 1 당량 내지 5당량의 물을 함유할 수 있다. 이러한 수화물은 물 또는 물을 함유하는 용매로부터 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염을 결정화시켜 제조될 수 있다.
용어 "용매화물(solvate)"은 비공유적 분자간력에 의해 결합된 화학양론적 또는 비화학양론적 양의 용매를 포함하고 있는 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다. 그에 관한 바람직한 용매들로는 휘발성, 비독성, 및/또는 인간에게 투여되기에 적합한 용매들이 있다.
용어 "이성질체(isomer)"는 동일한 화학식 또는 분자식을 가지지만 구조적 또는 입체적으로 다른 본 발명의 화합물 또는 그것의 염을 의미한다. 이러한 이성질체에는 호변이성질체(tautomer) 등의 구조 이성질체와, 비대칭 탄소 중심을 가지는 R 또는 S 이성체, 기하이성질체(트랜스, 시스) 등의 입체 이성질체, 광학 이성질체(enantiomer)가 모두 포함된다. 이들 모든 이성체 및 그것의 혼합물들 역시 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명에 따른 상기 면역항암 보조제에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 보다 바람직하게는 비경구 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등 이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등 이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 면역항암 보조제는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.
이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘 등과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염 등과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.
상기 면역항암 보조제는 면역항암제의 효능을 증진시킬 수 있으며, 보다 구체적으로, 면역인자를 활성화 시켜 면역항암제의 항암 작용을 보조함으로써 면역항암제의 효능을 증진시킬 수 있다. 상기 면역인자는 도움 T세포(helper T세포), 세포독성 T세포(cytotoxin T cell), 자연살생세포(NK cell) 및 사이토카인(cytokine)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.
상기 면역항암 보조제는 면역항암제와 동시적 또는 순차적으로 투여할 수 있고, 순차적으로 투여할 시에는 면역항암 보조제 투입 후 면역항암제를 투입할 수 있고, 면역항암제 투입 후 면역항암 보조제를 투입할 수도 있다. 다만 상기 투여방법은 일례일 뿐, 면역항암효과를 증진시킬 수 있도록 투여방식은 변경될 수 있다. 본 발명의 일실시예에서는 매일 정맥주사로 면역항암 보조제를 투여하고, 1주에 3회 복강 내 정맥주사로 면역항암제를 투여하였으나, 이 또한 일례일 뿐, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 면역항암 보조제는 도움 T세포(helper T세포), 세포독성 T세포(cytotoxin T cell), 자연살생세포(NK cell) 및 사이토카인(cytokine)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 면역 인자들을 활성화시킬 수 있다. 상기 면역인자를 활성화시킴으로써, 면역항암제의 항암효과를 향상시키는 효과를 나타낸다
이때, 상기 면역항암 보조제는 면역항암제와 병용투여되어 암을 예방 또는 치료할 수 있다.
상기 암은 가성점액종, 간내 담도암, 간모세포종, 간암, 갑상선암, 결장암, 고환암, 골수이형성증후군, 교모세포종, 구강암, 구순암, 균상식육종, 급성골수성백혈병, 급성림프구성백혈병, 기저세포암, 난소상피암, 난소생식세포암, 남성유방암, 뇌암, 뇌하수체선종, 다발성골수종, 담낭암, 담도암, 대장암, 만성골수성백혈병, 만성림프구백혈병, 망막모세포종, 맥락막흑색종, 바터팽대부암, 방광암, 복막암, 부갑상선암, 부신암, 비부비동암, 비소세포폐암, 설암, 성상세포종, 소세포폐암, 소아뇌암, 소아림프종, 소아백혈병, 소장암, 수막종, 식도암, 신경교종, 신우암, 신장암, 심장암, 십이지장암, 악성 연부조직 암, 악성골암, 악성림프종, 악성중피종, 악성흑색종, 안암, 외음부암, 요관암, 요도암, 원발부위불명암, 위림프종, 위암, 위유암종, 위장관간질암, 윌름스암, 유방암, 삼중음성유방암, 육종, 음경암, 인두암, 임신융모질환, 자궁경부암, 자궁내막암, 자궁육종, 전립선암, 전이성 골암, 전이성뇌암, 종격동암, 직장암, 직장유암종, 질암, 척수암, 청신경초종, 췌장암, 침샘암, 카포시 육종, 파제트병, 편도암, 편평상피세포암, 폐선암, 폐암, 폐편평상피세포암, 피부암, 항문암, 횡문근육종, 후두암, 흉막암, 혈액암 및 흉선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.
상기 면역항암 보조제는 통상적으로 알려지고, 당업자에게 널리 알려진 면역항암제라면 한정되지 않고 함께 병용투여될 수 있으며, 일례로는, anti-PD1, anti-PDL1, anti-CTLA4, anti-LAG3, anti-VISTA, anti-BTLA, anti-TIM3, anti-HVEM, anti-CD27, anti-CD137, anti-OX40, anti-CD28, anti-PDL2, anti-GITR, anti-ICOS, anti-SIRPα, anti-ILT2, anti-ILT3, anti-ILT4, anti-ILT5, anti-EGFR, anti-CD19 및 anti-TIGIT로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 면역항암제와 병용투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 측면은, 면역항암용 병용제제를 제공한다.
구체적으로, 면역항암제 및 상기 면역항암 보조제를 포함하는 면역항암용 병용제제를 제공한다.
상기 면역항암제, 면역항암 보조제 및 병용에 대한 구체적인 설명은 상기 면역항암 보조제의 구체적인 설명과 동일하다.
본 발명의 다른 측면은, 면역항암제 효능 증진용 약학적 조성물을 제공한다.
구체적으로, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역항암제 효능 증진용 약학적 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000007
상기 화학식 1에서, R 1 내지 R 4 및 X에 대한 정의는 상기의 면역항암 보조제에서의 화학식 1에 대한 구체적인 설명과 동일하다.
아울러, 상기 면역항암제 효능 증진용 약학적 조성물의 구체적인 설명은 상기 면역항암 보조제의 구체적인 설명과 동일하다.
본 발명의 다른 측면은, 면역 증강용 약학적 조성물을 제공한다.
구체적으로, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 약학적 조성물을 제공한다.
[화학식 1]
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000008
상기 화학식 1에서, R 1 내지 R 4 및 X에 대한 정의는 상기의 면역항암 보조제에서의 화학식 1에 대한 구체적인 설명과 동일하다.
아울러, 상기 면역 증강용 약학적 조성물의 구체적인 설명은 상기 면역항암 보조제의 구체적인 설명과 동일하다.
본 발명의 다른 측면은, 면역항암 보조제 및 면역항암제를 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
상기 면역항암 보조제 또는 면역항암제는 병용 투여 또는 이시 투여 모두 가능하다.
본 발명의 다른 측면은, 암의 예방 또는 치료에 있어서의, 면역항암 보조제 및 면역항암제의 용도를 제공한다.
본 발명의 다른 측면은, 면역항암 보조제 및 면역항암제를 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료를 위한 병용요법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은, 면역항암 보조제 및 면역항암제를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 키트를 제공한다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예를 통해 상세히 설명한다.
단, 후술하는 실시예 및 실험예는 본 발명을 일 측면에서 구체적으로 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 이에 제한되는 것은 아니다.
<실시예 1> 면역항암 보조제의 준비(SAC-1004)
[화학식 2]
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000009
상기 화학식 2로 표시되는 본 발명의 면역항암제와의 병용 투여용 약학적 조성물인 SAC-1004 화합물을 대한민국 공개특허 10-2011-0047170에 근거하여, 하기 반응식 1에 따라 제조하였다.
[반응식 1]
Figure PCTKR2020005368-appb-img-000010
SAC-1003 13.4 mg을 테트라히드로퓨란 1 mL에 녹인 뒤, 아르곤 기류 하에서 트리-O-아세틸-D-글루칼(Aldrich) 26 mg과 보론트리플로리드·디에틸에테레이트(Aldrich) 0.012 mL을 가하고, 0℃에서 10시간 교반하였다. 상기 반응액을 실온으로 온도를 올려준 뒤, 디에틸에테르 5 mL을 첨가하여 희석하고, 탄산수소나트륨 수용액으로 세척한 뒤, 황산나트륨으로 건조 및 여과하였다. 여액을 감압 농축한 후, 잔사를 에틸아세테이트/헥산(1:10)의 혼합용출액으로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 목적화합물 SAC-1004(11mg, 56%)을 얻었다: 1H-NMR (300MHz, CDCl 3) δ5.89-5.80 (m, 2H), 5.37-5.27 (m, 2H), 5.17-5.14 (m, 2H), 4.23-4.16 (m, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.56 (m, 1H), 2.38-2.28 (m, 4H), 2.17-0.53 (m, 37H).
<실험방법>
1. 실험 동물 모델의 준비
C57BL/6 7주령 수컷 마우스에 MC-38 대장암세포 5x10 5(cells)를 피하에 주입하였다. 상기 대장암세포를 주입한 지 7일이 경과한 후에 피하 MC-38 종양의 평균 종양 용적이 약 40 mm 3로 되었다. 상기와 같은 마우스 종양 투여방식은 하기의 4개의 군에 대해 모두 동일하게 적용되며, 이후 vehicle을 투여한 대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독 투여군 및 anti-PD1 단독 투여군으로 나누어 실험을 진행하였다.
도 1a는 실험 동물 모델의 준비 및 희생까지의 절차를 나타낸 개략도이다.
구체적인 투여방식은 매일 정맥주사로 혈관 누수 억제제인 SAC-1004를 DMSO in PBS에 녹여서 마우스마다 체중 1kg당 1mg을 투여하고, 1주에 3회 복강주사로 면역 관문 억제제인 anti-PD1를 rat igG2a 200 ng과 함께 마우스당 200 ng씩 투여하였다. 상기와 같은 방법으로 각 군에 따라 SAC-1004와 anti-PD1을 7일간 투여하고, 8일째 되는 날에 종양 및 비장을 적출하였다.
2. RNA 분리, cDNA 합성 및 PCR 분석
적출한 종양조직에 트리졸 시약을 이용하여 전체 RNA를 분리하였다. 분리한 RNA는 나노-드롭(ND-1000, Thermo scientific)을 이용해 260 nm/280 nm에서 흡광도를 측정하여 농도를 구한 후, RNA 2 ㎍를 포함하고 전체 부피가 20 ㎕가 되게 하여 cDNA를 합성하였다.
3. 마우스 종양 유세포 분석 (Fluorescence-activated cell sorting, FACS)
종양조직에서 콜라겐분해효소를 사용하여 세포를 분리한 후, 세포에 배지를 첨가하여 원심분리하고 침전된 세포를 모아 카운팅한다. 살아있는 세포를 37℃에서 약 30분간 염색하였다. 살아있는 세포만 염색이 되며 PBS로 3회 반복해서 세척한다. 라이브/데드 염색을 통하여 보정을 진행한다. 또한, 칸토를 사용하여 FACS를 진행하였다. 이를 통하여 T세포의 활성비율을 비교할 수 있다.
T세포는 적응면역반응에 관여되며 도움 T세포(helper T cell)인 CD4 +T세포와 세포독성 T세포(cytotoxic T cell)인 CD8 +T세포로 나눌 수 있고, CD4 +T세포에서 유래되지만 세포독성 T세포를 억제하는 조절 T세포(Treg cell, regulatory T cell)로 나누어진다. 또한 선천면역반응에 관여되는 세포독성적인 특성을 가진 자연살생세포(NK cell, natural killer cell)이 있어, 각 군별로 상기 세포들의 수준을 측정하였다.
마커(marker)로는 도움 T세포인 CD4 +T 세포를 측정하기 위해 CD4 항체가 사용되었고, 세포독성 T세포인 CD8 +T 세포를 측정하기 위해 CD8 항체가 사용되었다. 또한 조절 T세포를 측정하기 위해 CD25 항체 및 Foxp 3 항체가 사용되었고, 자연살생세포를 측정하기 위해 NK1.1 항체가 사용되었다.
4. IHC 염색
종양조직을 바로 꺼낸 뒤 4% PFA에서 O/N 인큐베이션(4℃ 보관)하고 15 % 내지 30 % 수크로스에서 순차적으로 종양조직을 담그어 가라앉힌 다음, 드라이아이스에서 OCT 샘플링을 진행하였다. 섹션 20㎛로 진행한 후 각각의 1차 항체, 2차 항체를 사용하여 염색을 진행하였다.
5. T세포의 기능 분석
T세포의 기능은 크게 두 가지로 측정되는데, 한 가지 방식은 사이토카인 생산능력 분석으로 T세포에서 전염증성 사이토카인에 해당되는 IFNγ나 TNFα 등의 분비를 측정하는 것이고, 다른 방식은 세포독성을 측정하는 방법으로 종양세포를 직접 라이게이션(ligation)하여 종양세포 내에 퍼포린(perforin)이나 그랜자임B(GranzymeB) 등을 넣어서 사멸시키는 것들이 있다.
<실험예 1> MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여에 따른 마우스의 종양크기 변화 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 함에 따른 종양크기 변화를 분석하였다.
도 1b는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 함에 따른 마우스의 종양크기 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2a는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 후에, 종양 및 비장을 적출하기 전의 마우스 사진이다.
도 2c는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 후, 마우스에서 적출한 종양의 사진이다.
구체적으로, 대조군에 비해 anti-PD1 단독투여군 및 SAC-1004 단독투여군에서 종양의 크기가 감소하였고, 상기 단독투여군들에 비해 SAC-1004 및 anti-PD1을 병용투여한 그룹에서 종양의 크기가 감소하였다. 이는 양방향 ANOVA를 사용하여 통계적 수치로 입증되었다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때에 암의 예방 또는 치료효과가 현저하게 상승하는 것을 입증한다.
<실험예 2> MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여에 따른 마우스의 생존율 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 함에 따른 마우스의 생존율을 분석하였다.
도 1c는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 함에 따른 마우스의 생존율을 나타낸 그래프이다.
구체적으로, 대조군 및 SAC-1004 단독투여군에 비해 anti-PD1 단독투여군에서의 약물투여에 따른 마우스의 생존율이 더 높았고, anti-PD1 단독투여군에 비해서 SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군의 상기 생존율이 높았다. 이는 양방향 ANOVA를 사용하여 통계적 수치로 입증되었다.
상기 결과는, 상기 실험예 1의 종양크기 변화 분석 결과와 같이, SAC-1004 및 면역항암제를 단독투여할 때보다 병용투여할 때에 암의 예방 또는 치료효과가 현저하게 상승함을 입증한다.
<실험예 3> MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 몸무게 변화 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 한 마우스의 몸무게 변화를 분석하였다.
도 2d는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 몸무게 변화를 나타낸 그래프이다.
구체적으로, 모든 군에서 비슷한 몸무게가 측정되었으므로, 약물을 장기간 투여해도 마우스에서 이상이 나타나지 않는다.
상기 결과는, 본 발명에 따른 병용 투여용 약학적 조성물은 단독 또는 병용투여하여도 생체 내에서 부작용을 유발하지 않고, 안전성이 확보된 물질임을 입증한다.
<실험예 4> MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 비장크기 및 무게비교
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 한 마우스의 비장 크기를 분석하였다.
도 2b는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스에서 적출한 비장의 사진이다.
도 2f는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 비장무게 변화를 나타낸 그래프이다.
구체적으로, 대조군에 비해 SAC-1004 단독투여군의 비장무게가 높고, SAC-1004 단독투여군보다 anti-PD1 단독투여군의 비장무게가 높으며, anti-PD1 단독투여군보다 SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군의 비장무게가 더 높다. 그런데, 이는 편도 ANOVA를 사용하였을 때, 통계적으로 유의하지 않았다.
상기 결과는, 본 발명에 따른 병용투여용 약학적 조성물은 단독 또는 병용투여하여도 생체 내에서 부작용을 유발하지 않고, 안전성이 확보된 물질임을 입증한다.
<실험예 5> MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 종양무게 비교
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 한 마우스의 종양무게를 분석하였다.
도 2e는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 종양무게를 나타낸 그래프이다.
구체적으로, 대조군에 비해 anti-PD1 단독투여군의 종양무게가 낮았고, anti-PD1 단독투여군보다 SAC-1004 단독투여군의 종양무게가 더 낮았으며, SAC-1004 단독투여군보다 SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군의 종양무게가 더 낮았다. 이는 편도 ANOVA를 사용하여 통계적 수치로도 입증하였다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때에 암의 예방 또는 치료효과가 현저하게 상승하는 것을 입증한다.
<실험예 6> 마우스의 종양에 대한 FACS 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 한 마우스의 종양에 대해, 각 약물투여군에서 T세포의 활성비율을 비교하기 위한 FACS(Fluorescence activated cell sorting) 분석을 하였다.
도움 T세포인 CD4 +T세포를 측정하기 위해 CD4 항체가 사용되었고, 세포독성 T세포인 CD8 +T세포를 측정하기 위해 CD8 항체가 사용되었다. 또한 조절T세포를 측정하기 위해 CD25 항체와 Foxp 3 항체가 사용되었고, 자연살생세포를 측정하기 위해 NK1.1 항체가 사용되었다.
도 3a-3c는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 종양에 대해 FACS 분석을 한 결과이다.
도 3d는 CD45.2+ 마커를 통해 각 약물투여군에서 면역 인자들의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3e는 각 약물투여군에서 CD4+T세포의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3f는 각 약물투여군에서 CD8+T세포의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3g는 각 약물투여군에서 자연살생세포의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 3h는 각 약물투여군에서 조절T세포의 수준을 나타낸 그래프이다.
구체적으로, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군에서 도움 T세포뿐만 아니라 세포독성 T세포의 수준이 상당히 높았고, 자연살생세포의 수준도 높았으며, 세포독성 T세포를 억제하는 조절 T세포의 수준은 감소되었다. 이는 편도 ANOVA를 통해 통계적 수치로 입증되었다.
따라서, SAC-1004 및 면역항암제를 단독투여할 때보다 병용투여할 때 T세포들을 활성화시키는 효과가 더 크다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때에 면역 관련 인자인 T세포를 활성화시키는 효과가 우수함을 나타내며, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역 인자를 활성화 시킴으로써, 면역항암제의 항암 효과를 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
<실험예 7> 마우스의 종양 내 면역인자들의 증식능력 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 함에 따른 마우스의 종양 내 면역인자들의 증식능력을 분석하였는데, 증식능력을 측정하기 위해 증식마커인 Ki67를 사용하였다.
도 4a는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포의 증식능력을 전체%로 나타낸 그래프이다.
도 4b는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포의 증식능력을 전체%로 나타낸 그래프이다.
도 4c는 각 약물투여군에서 자연살생세포의 증식능력을 전체%로 나타낸 그래프이다.
도 4d는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포의 증식능력을 MFI(mean fluorescence intensity)로 나타낸 그래프이다.
도 4e는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포의 증식능력을 MFI(mean fluorescence intensity)로 나타낸 그래프이다.
도 4f는 각 약물투여군에서 자연살생세포의 증식능력을 MFI(mean fluorescence intensity)로 나타낸 그래프이다.
구체적으로, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군에서 도움 T세포, 세포독성 T세포, 자연살생세포의 증식능력이 다른 군들에 비해 높았다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때에 면역 관련 인자의 증식능력을 향상시키는 효과가 우수함을 나타내며, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역 인자를 활성화시킴으로써, 면역항암제의 항암 효과를 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
<실험예 8> 마우스의 종양 내 T세포의 세포독성 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 함에 따른 마우스의 종양 내 T세포의 세포독성을 분석하였다.
세포독성을 측정하기 위해 자연살생세포의 탈과립과 CD8 +T세포의 활성화에 관여하는 CD107a를 마커로 사용하였고, T세포를 활성화시키기 위해 펩티드 및 PMA/아이오노마이신을 처리하였다. 펩티드를 처리한 군은 종양에서 발현하는 펩티드를 생체 외 상태에서 넣어준 것이고, PMA/아이오노마이신을 처리한 군은 T세포 칼슘 신호를 자극시켜 모든 T세포를 활성화시키는 것이란 차이가 있다.
도 5a는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포 내 CD107a의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 5b는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포 내 CD107a의 수준을 나타낸 그래프이다.
구체적으로, 펩티드 및 PMA/아이오노마이신을 처리하지 않은 군은 T세포 내 CD107a의 수준이 적었고, 펩티드보다 PMA/아이오노마이신을 처리한 군이 T세포 내 CD107a의 수준이 높았다. 특히 PMA/아이오노마이신을 처리한 경우, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군에서 CD8 +T세포 내 CD107a의 수준이 높았다.
상기 결과는, 상대적으로 CD8 +T세포에서 활성화가 증가하였지만 모든 그룹에서 유의하지는 않았으며, SAC-1004 및 면역항암제를 단독투여할 때보다 병용투여할 때 T세포를 활성화시키어 암세포를 사멸시키는 세포독성 효과가 우수함을 나타내며, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역항암제와 병용투여함으로써, 항암효과를 증대시키는 역할을 수행함을 알 수 있다.
<실험예 9> 마우스의 종양 내 T세포의 사이토카인 생성능력 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 함에 따른 마우스의 종양 내 T세포의 사이토카인 생성능력을 분석하였다.
(9-1)
사이토카인 생성능력을 측정하기 위해 전염증성 사이토카인의 정도를 비교할 수 있고, 전염증성 사이토카인 마커인 TNFα를 이용할 수 있다. 상기 실험예 8과 같이, T세포를 활성화시키기 위해 펩티드 및 PMA/아이오노마이신을 처리한 후 TNFα의 수준를 측정하였다.
도 6a는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포 내 TNFα의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 6b는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포 내 TNFα의 수준을 나타낸 그래프이다.
구체적으로, 펩티드 및 PMA/아이오노마이신을 처리하지 않은 경우 각 약물투여군에서 TNFα의 수준 차이가 적었으나, 펩티드를 처리한 경우 및 PMA/아이오노마이신을 처리한 경우는 SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군에서 TNFα의 수준이 상당히 증가했다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때에 면역 관련 인자인 T세포를 활성화시키는 효과가 우수함을 나타내며, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역 인자를 활성화 시킴으로써, 면역항암제의 항암 효과를 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
(9-2)
IFNγ도 또한, 전염증성 사이토카인 마커이다. 마찬가지로 T세포를 활성화시키기 위해 펩티드 및 PMA/아이오노마이신을 처리한 후 IFNγ의 수준를 측정하였다.
도 7a는 각 약물투여군에서 CD4 +T세포 내 IFNγ의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 7b는 각 약물투여군에서 CD8 +T세포 내 IFNγ의 수준을 나타낸 그래프이다.
구체적으로, CD8 +T세포에서 펩티드 및 PMA/아이오노마이신을 처리하지 않은 경우는 각 약물투여군에서 IFNγ의 수준 차이가 적었으나, 펩티드를 처리한 경우 및 PMA/아이오노마이신을 처리한 경우는 SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군에서 IFNγ의 수준이 상당히 증가했다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때에 면역 관련 인자인 T세포를 활성화시키는 효과가 우수함을 나타내며, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역 인자를 활성화시킴으로써, 면역항암제의 항암 효과를 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
<실험예 10> 마우스의 비장 내 T세포의 사이토카인 생성능력 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 함에 따른 마우스의 비장 내 T세포의 기능을 비교하기 위해 CD107a, TNFα 및 IFNγ 마커를 사용하여 FACS 분석, 세포독성 분석, 사이토카인 생성능력 분석을 수행하였다. 또한, 상기 실험예 8 및 실험예 9와 같이 T세포를 활성화시키기 위해 펩티드 및 PMA/아이오노마이신을 처리하였다.
도 8a-8b는 MC38 대장암세포주 주입 및 약물투여를 한 마우스의 종양에 대해 FACS 분석을 한 결과이다.
도 8c는 각 약물투여군에서 비장 내 CD4+T세포의 CD107a 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8d는 각 약물투여군에서 비장 내 CD4+T세포의 TNFα 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8e는 각 약물투여군에서 비장 내 CD4+T세포의 IFNγ 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8f는 각 약물투여군에서 비장 내 CD8+T세포의 CD107a 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8g는 각 약물투여군에서 비장 내 CD8+T세포의 TNFα 수준을 나타낸 그래프이다.
도 8h는 각 약물투여군에서 비장 내 CD8+T세포의 IFNγ 수준을 나타낸 그래프이다.
구체적으로, 비장 내 CD4 +T세포와 CD8 +T세포에서 PMA/아이오노마이신을 처리하여 T세포를 활성화시킨 경우에 SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군에서 CD107a, TNFα 및 IFNγ의 수준이 증가되었다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때에 암세포를 사멸시키는 세포독성 효과가 우수함을 나타내고, 면역 관련 인자인 T세포를 활성화시키는 효과가 우수함을 나타내며, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역 인자를 활성화시킴으로써, 면역항암제의 항암 효과를 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
<실험예 11> 마우스의 종양 내 접착 결합의 발현 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 7일간 SAC-1004를 매일 투여한 후에 anti-PD1을 1주간 3회 투여함으로써 14일간 약물투여한 것을 제외하고는 상기 실험 동물 모델에서 상술한 바와 같이 처리한 후, 마우스의 종양 내 접착 결합의 발현을 분석하였다.
도 9a는 각 약물투여군에서 종양 내 접착 결합의 발현 수준을 나타낸 형광발광 사진이다.
도 9b는 각 약물투여군에서 종양 내 접착 결합의 발현 수준을 형광발광 밀도로 나타낸 그래프이다.
구체적으로, 도 9a는 IHC염색 실험을 진행한 것으로서, DAPI(다피)는 핵을 염색하기 위해 사용되었고, CD31은 혈관을 염색하기 위해 사용되었으며, 접착 단백질인 VE-카드헤린(VE-cadherin)은 부착연접(adherent junction)을 보기 위해 사용되었다. 이 때, VE-카드헤린이 잘 발현되면 약물전달이 잘 되어 항암효과가 증가된다는 것이고, 또한 내피세포 사이가 접합이 잘 되어 혈관이 안정화되고 T세포가 종양으로 잘 침투하는 것이다.
도 9a 및 도 9b에 나타난 바와 같이, 대조군과 anti-PD1 단독투여군보다 SAC-1004 단독투여군에서 종양 내 VE-카드헤린의 비율이 증가했고, SAC-1004 단독투여군보다 SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군에서 종양 내 VE-카드헤린이 잘 발현되었다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때 면역항암제 전달이 잘 되고, T세포가 종양으로 잘 침투하여, 항암 효과가 증가되는 것임을 나타내고, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역항암제의 항암 효과를 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
<실험예 12> 마우스의 종양 내 PDL1의 발현 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 함에 따른 마우스의 종양 내 PDL1(programmed death-ligand 1)의 발현을 분석하였다. PDL1은 종양에서 발현되는 리간드이고, CD3는 T세포 마커로 사용된다.
도 10은 각 약물투여군에서 PDL1 및 CD3의 발현 수준을 나타낸 형광발광 사진이다.
구체적으로, 도 10은 IHC염색 실험을 진행한 것으로서, PDL1이 증가한 것은 anti-PD1이 잘 전달되어 면역활성화가 일어났다는 것을 의미하는데, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군이 anti-PD1 단독투여군보다 PDL1 및 CD3의 발현 수준이 높다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때 면역항암제 전달이 잘 되고, 면역활성화가 잘 일어나서, 항암 효과가 증가되는 것임을 나타내고, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역항암제의 항암 효과를 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
<실험예 13> 마우스의 종양 내 사이토카인 발현수준 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 상술한대로 7일간 약물투여를 함에 따른 마우스의 종양 내 사이토카인의 발현정도를 분석하였다. 사이토카인 마커로 전염증성 사이토카인과 항염증성 사이토카인을 사용하였고 RT-PCR을 수행하였다.
도 11a는 각 약물투여군에서 전염증성 사이토카인과 항염증성 사이토카인들의 발현에 대해 RT-PCR을 수행한 사진이다.
도 11b는 각 약물투여군에서 CXCL9, iNOS 및 Gapdh의 발현에 대해 RT-PCR을 수행한 사진이다.
도 11c는 각 군별로 RT-PCR을 통해 mRNA 발현 수준을 그래프로 나타낸 사진이다.
구체적으로, 전염증성 사이토카인 중 Ifny가 anti-PD1을 투여한 군에서 증가하였고, anti-PD1을 투여한 군보다 SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군에서 더 증가한다.
상기 결과는, SAC-1004 및 면역항암제를 각각 단독으로 투여할 때보다 병용투여할 때에 면역 관련 인자인 T세포를 활성화시키는 효과가 우수함을 나타내며, 이로부터, 본 발명의 병용투여용 약학적 조성물은 면역 인자를 활성화 시킴으로써, 면역항암제의 항암 효과를 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
< 실험예 14> MC38 대장암 세포주가 자라는 시기와 약물을 주입하는 시기에 CD4/8+T, NK 세포 제거 후 약물투여에 따른 마우스의 생존율 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 상기 실험 동물 모델에서 CD4/8 +T, NK 제거(depletion)를 진행한 후 상술한대로 7일간 약물투여를 하여 유세포 분석(flow cytometry)을 통해 마우스의 생존율을 분석하였다.
도 12a는 CD4/8 +T, NK 제거, MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여에 따른 절차를 나타낸 개략도이다.
도 12b는 MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여 후 CD4/8 +T, NK 제거에 따른 결과를 유세포 분석을 통해 확인하였고, 면역세포의 제거가 원활히 진행되었음을 확인한 도이다.
도 12c는 MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여 후 CD4/8 +T, NK 제거에 따른 마우스의 생존율을 나타낸 것으로, CD8+ T 세포를 제거한 실험군 마우스의 경우 가장 생존율이 낮은 것을 확인한 도이다.
도 12d는 상기 도 5c와 동일한 과정을 나타낸 것으로, MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여 후 CD4/8 +T 제거에 따른 종양의 성장율을 시간에 따라 나타낸 것으로, CD8+ T 세포를 제거한 실험군 마우스의 경우 종양 성장율이 가장 큰 것을 확인한 도이다.
도 12e는 MC38 대장암 세포주 주입 및 약물투여 후 CD4/8 +T, NK 제거에 따른 종양의 크기를 각 실험군마다 비교한 것으로, CD8+ T 세포를 제거한 실험군 마우스의 경우 종양 크기가 가장 큰 것을 확인한 도이다.
상기 결과를 통해 CD8 + T 세포를 제거한 경우 가장 큰 종양 성장율을 보여주었고, 그 다음으로 NK 세포와 CD4 + T 세포를 제거한 실험군이 큰 종양 성장율을 보여주었다. 이는 SAC-1004와 anti-PD1의 병합투여가 CD8 + T 세포에 의존적으로 유도되는 과정임을 제시한다.
<실험예 15> 장기간 약물 투여에 따른 결과 분석
대조군, SAC-1004 및 anti-PD1 병용투여군, SAC-1004 단독투여군 및 anti-PD1 단독 투여군으로 이루어진 총 4개의 군에, 장기간 약물을 주입하여 생존율을 분석하였다.
도 13a는 MC38 대장암 세포주 주입 및 장기간 약물투여의 절차를 나타낸 개략도이다.
도 13b는 MC38 대장암 세포주 주입 및 장기간 약물투여에 따른 마우스의 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 13c는 MC38 대장암 세포주 주입 및 장기간 약물투여에 따른 마우스의 종양 크기를 나타낸 그래프이다.
장기간 약물을 처리하여도 동일한 결과를 지속적으로 보여줌에 따라 위 실험 과정에 신뢰도를 증가시켰고, 오랜 약물투여임에도 불구하고 약물 독성이 없음을 증명하였다.
<제제예 1> 산제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<제제예 2> 정제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캡슐제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 4> 주사제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
만니톨 180 ㎎
Na 2HPO 4ㆍ2H 2O 26 ㎎
증류수 2974 ㎎
통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.
<제제예 5> 연고제의 제조
화학식 1로 표시되는 화합물 5 g
세틸팔미테이트 20 g
세탄올 40 g
스테아릴알콜 40 g
미리스탄이소프로필 80 g
폴리솔베이트 60 g
파라옥시안식향산 프로필 1 g
파라옥시안식향산 메틸 1 g
인산 및 정제수 적량
통상적인 연고제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 연고제를 제조하였다.

Claims (21)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역항암 보조제:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2020005368-appb-img-000011
    (상기 화학식 1에서,
    X는 산소 또는 황이고;
    Figure PCTKR2020005368-appb-img-000012
    는 단일결합 또는 이중결합을 나타내고;
    R 1은 수소, 할로, C 1-30 알킬, C 3-10 사이클로알킬, C 2-30 알케닐, C 3-10 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-15 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-15 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-30 알콕시알킬, C 3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알케닐, C 1-20 알코올, C 1-20 알케놀, C 2-30 아실, C 1-10 아미드, C 1-10 아민, C 2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C 3-20 카르복시알킬, C 3-20 카르복시알케닐, C 3-20 알킬카르복실, C 3-20 알케닐카르복실, C 3-20 알킬카르복시알킬, C 3-20 알킬카르복시알케닐, C 3-20 알케닐카르복시알킬, C 4-20 알케닐카르복시알케닐, C 6-30 아릴, C 6-30 아랄킬, C 6-30 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C 3-30 헤테로아릴 또는 C 6-30 아릴카르보닐이고;
    R 21은 C 2-30 알킬, C 3-10 사이클로알킬, C 2-30 알케닐, C 3-10 사이클로알케닐, C 2-30 카르복시알킬, C 2-30 알킬카르복실, C 3-30 카르복시알케닐, C 3-30 알케닐카르복실, C 3-30 알킬카르복시알킬, C 3-30 알킬카르복시알케닐, C 3-30 알케닐카르복시알킬, C 4-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-30 알콕시알킬, C 3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알케닐, C 1-20 알코올, C 1-20 알케놀, C 2-30 아실, C 1-10 아미드, C 1-10 아민 또는 C 2-15 에스테르이고;
    R 22는 수소, 히드록시, 할로 또는 C 1-10 알킬이고;
    R 23은 수소, 히드록시 또는 C 1-10 알킬이고;
    R 21은 R 22 및 R 23과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
    R 23은 R 21 및 R 22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성할 수 있고;
    R 21 또는 R 23이 상기 탄소에 이중결합을 형성하는 경우 R 22는 원자를 포함하지 않고; 및
    R 3 및 R 4는 서로 독립적으로 수소 또는 C 1-10 알킬이다).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 X는 산소인 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 R 1은 수소, 할로, C 1-10 알킬, C 3-8 사이클로알킬, C 2-10 알케닐, C 3-8 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-8 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-20 알콕시알킬, C 3-20 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-8 헤테로사이클로알케닐, C 1-10 알코올, C 1-10 알케놀, C 2-20 아실, C 1-10 아미드, C 1-5 아민, C 2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C 3-20 카르복시알킬, C 3-20 카르복시알케닐, C 3-20 알킬카르복실, C 3-20 알케닐카르복실, C 3-20 알킬카르복시알킬, C 3-20 알킬카르복시알케닐, C 3-20 알케닐카르복시알킬, C 4-20 알케닐카르복시알케닐, C 6-20 아릴, C 6-20 아랄킬, C 6-20 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C 3-20 헤테로아릴 또는 C 6-20 아릴카르보닐인 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 화학식 1의 R 1은 수소, C 1-10 알킬, C 3-8 사이클로알킬, C 2-10 알케닐, C 3-8 사이클로알케닐, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C 2-8 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-20 알콕시알킬, C 3-10 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소를 포함하는 C 3-8 헤테로사이클로알케닐, C 1-10 알코올, C 1-10 알케놀, C 1-10 아미드, C 1-5 아민, C 2-15 에스테르, 설페이트, 카르복실기, C 3-20 카르복시알킬, C 3-20 카르복시알케닐, C 3-20 알킬카르복실, C 3-20 알케닐카르복실, C 3-20 알킬카르복시알킬, C 3-20 알킬카르복시알케닐, C 3-20 알케닐카르복시알킬, C 4-20 알케닐카르복시알케닐, C 6-20 아릴, C 6-20 아랄킬, C 6-20 알카릴, 헤테로원자로서 질소를 포함하는 C 3-20 헤테로아릴 또는 C 6-20 아릴카르보닐인 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 R 1에서 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, C 6-20 아릴, C 7-20 아릴카르복실 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 C 3-10 사이클로알케닐 또는 헤테로사이클로알케닐은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 2-8 알킬카르복실, C 3-8 알킬카르복실알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, C 6-20 아릴, C 7-20 아릴카르복실 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 아릴은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 아랄킬은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있고; 상기 알카릴은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 아릴카르보닐은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, 또는 C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있으며; 상기 헤테로아릴은 히드록시, 할로, C 1-5 알킬, C 1-5 알코올, C 1-5 알콕시, C 2-8 알콕시알킬, 니트로, C 2-8 알킬카르복실아미노 또는 이들의 조합에 의해 치환될 수 있는 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 R 21은 직쇄 또는 분쇄의 C 2-15 알킬, C 3-10 사이클로알킬, C 2-15 알케닐, C 3-10 사이클로알케닐, C 2-15 카르복시알킬, C 2-15 알킬카르복실, C 3-15 카르복시알케닐, C 2-15 알케닐카르복실, C 3-15 알킬카르복시알킬, C 3-15 알킬카르복시알케닐, C 3-15 알케닐카르복시알킬, C 2-30 알케닐카르복시알케닐, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 2-10 헤테로사이클로알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알킬알킬, C 2-20 알콕시알킬, C 3-30 알콕시알콕시알킬, 헤테로원자로서 산소, 황 또는 질소를 포함하는 C 3-10 헤테로사이클로알케닐, C 1-20 알코올, C 1-20 알케놀, C 2-30 아실, C 1-10 아미드, C 1-10 아민 또는 C 2-15 에스테르인 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의 R 23은 C 1-5 알킬이거나 또는 R 21 및 R 22과 함께 결합하는 탄소에 대하여 이중결합을 형성하는 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1의
    Figure PCTKR2020005368-appb-img-000013
    는 이중결합인 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 화학식 1은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2020005368-appb-img-000014
  10. 제1항에 있어서,
    상기 면역항암 보조제는 면역항암제의 효능을 증진시키는 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 면역항암 보조제는 면역 증강 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 면역항암 보조제는 면역항암제와 동시적 또는 순차적으로 투여할 수 있는 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 면역항암 보조제는 도움 T세포(helper T세포), 세포독성 T세포(cytotoxin T cell), 자연살생세포(NK cell) 및 사이토카인(cytokine)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 면역 인자들을 활성화시키는 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 면역항암 보조제는 가성점액종, 간내 담도암, 간모세포종, 간암, 갑상선암, 결장암, 고환암, 골수이형성증후군, 교모세포종, 구강암, 구순암, 균상식육종, 급성골수성백혈병, 급성림프구성백혈병, 기저세포암, 난소상피암, 난소생식세포암, 남성유방암, 뇌암, 뇌하수체선종, 다발성골수종, 담낭암, 담도암, 대장암, 만성골수성백혈병, 만성림프구백혈병, 망막모세포종, 맥락막흑색종, 바터팽대부암, 방광암, 복막암, 부갑상선암, 부신암, 비부비동암, 비소세포폐암, 설암, 성상세포종, 소세포폐암, 소아뇌암, 소아림프종, 소아백혈병, 소장암, 수막종, 식도암, 신경교종, 신우암, 신장암, 심장암, 십이지장암, 악성 연부조직 암, 악성골암, 악성림프종, 악성중피종, 악성흑색종, 안암, 외음부암, 요관암, 요도암, 원발부위불명암, 위림프종, 위암, 위유암종, 위장관간질암, 윌름스암, 유방암, 삼중음성유방암, 육종, 음경암, 인두암, 임신융모질환, 자궁경부암, 자궁내막암, 자궁육종, 전립선암, 전이성 골암, 전이성뇌암, 종격동암, 직장암, 직장유암종, 질암, 척수암, 청신경초종, 췌장암, 침샘암, 카포시 육종, 파제트병, 편도암, 편평상피세포암, 폐선암, 폐암, 폐편평상피세포암, 피부암, 항문암, 횡문근육종, 후두암, 흉막암, 혈액암 및 흉선암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 암을 예방 또는 치료하는 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  15. 제1항에 있어서,
    상기 면역항암 보조제는 anti-PD1, anti-PDL1, anti-CTLA4, anti-LAG3, anti-VISTA, anti-BTLA, anti-TIM3, anti-HVEM, anti-CD27, anti-CD137, anti-OX40, anti-CD28, anti-PDL2, anti-GITR, anti-ICOS, anti-SIRPα, anti-ILT2, anti-ILT3, anti-ILT4, anti-ILT5, anti-EGFR, anti-CD19 및 anti-TIGIT로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 면역항암제와 병용투여되는 것을 특징으로 하는 면역항암 보조제.
  16. 면역항암제; 및
    제1항의 면역항암 보조제를 포함하는 항암용 병용제제.
  17. 제16항에 있어서, 상기 항암용 병용제제는 면역항암용 병용제제인 것인, 항암용 병용제제.
  18. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역항암제 효능 증진용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2020005368-appb-img-000015
  19. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 이성질체, 이의 용매화물, 이의 수화물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 약학적 조성물:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2020005368-appb-img-000016
  20. 면역항암제; 및
    제1항의 면역항암 보조제를 필요한 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료 방법.
  21. 면역항암제; 및
    제1항의 면역항암 보조제를 유효성분으로 함유하는 항암치료용 키트.
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