WO2024140934A1 - 一种连接基药物偶联物的制备方法及其中间体 - Google Patents

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李振东
沈磊
杨周
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Definitions

  • the invention belongs to the field of drug synthesis, and specifically relates to a preparation method of a linker-drug conjugate and an intermediate thereof.
  • the raw material 2-2 and the carboxylic acid intermediate 2-2a generated by removing the tert-butyl group are unstable to acids and bases, and there is a certain risk of decomposition during the deprotection and purification process.
  • Compound 2-2a is not purified, and the crude product is used directly for the next reaction, which will cause obvious impurities in the crude product 2-3.
  • the polarity of this impurity is close to that of the product, making purification difficult, thereby affecting the product quality of LE14.
  • the total yield of preparing LE14 using compound 4-1 as the starting material and Dxd-a therein as the payload source is 7.3% (4-1 ⁇ Dxd-a ⁇ LE14); the total yield of preparing LE14 using compound 4-1 as the starting material and Dxd-b therein as the payload source is 12.9% (4-1 ⁇ Dxd-b ⁇ LE14).
  • the synthesis method for preparing Dxd-b according to route 4-b includes: reacting isotecan or its mesylate with 4-methoxytriphenylmethane chloride in the presence of trimethylsilyl chloride and N,N-diisopropylethylamine to prepare an amino-protected intermediate compound 17, reacting compound 17 with tert-butyldiphenylsilyl chloride under alkaline conditions to obtain tert-butyldiphenylsilylated intermediate 16b, removing the amino protection of intermediate 16b under the action of triethylsilane to obtain intermediate 15b, further reacting with hydroxyacetic acid to obtain compound Dxd-b.
  • the total yield of Dxd-b prepared using isotecan as the starting material is 48.2% (isotecan ⁇ Dxd-b; hereinafter referred to as the yield of route 4-b).
  • the synthesis method of route 5 comprises the following steps: compound 5-1 is reacted with p-nitrophenyl chloroformate to obtain compound 5-2, the obtained compound is then reacted with the corresponding amine to obtain compound 5-3, deprotected to obtain compound 5-4, further reacted with amino acid active ester to obtain 5-5, deprotected to obtain 5-6, then reacted with an acyl azide reagent to obtain compound 5-7, then hydroxymethylated to obtain compound 5-8, then reacted with a DXd derivative to obtain compound 5-9, then the azide group in 5-9 was reduced to obtain compound 5-10, then connected with a maleimide linker to obtain 5-11, and finally the hydroxyl protecting group was removed to obtain the final product LE14.
  • the synthetic method for preparing Dxd-b' according to route 5-b includes: reacting isotecan or its mesylate with 4-methoxytriphenylmethane chloride in the presence of trimethylsilyl chloride and N,N-diisopropylethylamine to prepare an amino-protected intermediate compound 17, reacting compound 17 with tert-butyldiphenylsilyl chloride under alkaline conditions to obtain tert-butyldiphenylsilylated intermediate 16b, removing the amino protection of intermediate 16b under the action of triethylsilane to obtain intermediate 15b, further reacting with 2-bromoacetic acid to obtain compound Dxd-b'.
  • the total yield of preparing Dxd-b' using isotecan as the starting material is 44.5% (isotecan ⁇ Dxd-b', hereinafter referred to as the yield of route 5-b).
  • TMS trimethylsilyl
  • TBS tert-butyldimethylsilyl
  • the present invention mainly solves the above technical problems through the following technical solutions.
  • the present invention provides a method for preparing a compound of formula I, comprising the following steps: subjecting an intermediate compound of formula II to an amide condensation reaction with a compound of formula III or its mesylate in the presence of a condensing agent, a base and a solvent to obtain the compound of formula A compound of formula I;
  • the reaction conditions can be conventional conditions of this type of reaction in the art.
  • the following scheme is preferred:
  • the reaction materials are the compound of formula II, the compound of formula III or its mesylate, the condensing agent, the base and the solvent.
  • the amide condensation reaction further comprises the following specific steps: dissolving the compound of formula II in a solvent, adding the condensing agent, and immediately or after a period of reaction, adding the compound of formula III or its mesylate and a base.
  • the reaction in the method for preparing the compound of formula I, is protected from light throughout the entire process.
  • the molar ratio of the condensing agent to the compound of formula II can be 1-3, preferably 1-1.5, and more preferably 1.5.
  • the molar ratio of the base to the compound of formula II can be 1-10, preferably 1-6, more preferably 1-3, and most preferably 1.5.
  • the solvent in the method for preparing the compound of formula I, can be one of N,N-dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, tetrahydrofuran and 1,4-dioxane, or a mixture of any two or more thereof, preferably N,N-dimethylformamide.
  • the preparation method of the compound of formula I may further include a preparation method of the compound of formula II, which may include the following steps: in a solvent, subjecting the compound of formula IV to a deprotection reaction in the presence of a deprotecting agent to obtain a compound of formula II;
  • the C 1 ⁇ C 6 alkyl substituted by -Si(C 1 ⁇ C 6 ) 3 can be trimethylsilylethyl or tert-butyldimethylsilylethyl; preferably, the C 1 ⁇ C 6 alkyl substituted by -Si(C 1 ⁇ C 6 ) 3 is trimethylsilylethyl.
  • the deprotecting agent can be a fluorine reagent
  • the fluorine reagent can be tetrabutylammonium fluoride, tetramethylammonium fluoride, tetrabutylammonium fluoride/acetic acid, pyridine hydrogen fluoride complex, tert-butylammonium fluoride, tert-butylammonium fluoride/acetic acid, tetraethylammonium fluoride, or commercially available tetramethylammonium fluoride/tetrahydrofuran solution, tetraethylammonium fluoride/tetrahydrofuran solution, tetrabutylammonium fluoride/tetrahydrofuran solution, or one or more of silicon tetrafluoride, potassium fluoride, sodium fluoride, lithium fluoride and cesium fluoride, preferably 1M tetrafluoride, potassium fluoride, sodium fluoride
  • the temperature of the etherification reaction can be 0°C-80°C, preferably 40°C-70°C, and most preferably 60°C.
  • the etherification reaction time can be 3-24 hours, preferably 3-12 hours, and more preferably 4-8 hours.
  • the molar ratio of the paraformaldehyde to the compound of formula VII can be 1-10, preferably 1-5, further preferably 1.3-3.0, and most preferably 1.3.
  • the molar ratio of trimethylsilyl chloride to the compound of formula VII can be 1-5, preferably 2-4, more preferably 2-3, and most preferably 2.5.
  • the solvent in the method for preparing the compound of formula VI, can be one of N,N-dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, tetrahydrofuran and 1,4-dioxane, or a mixture of any two or more thereof, preferably tetrahydrofuran or 1,4-dioxane, and more preferably 1,4-dioxane.
  • the substitution reaction is carried out under the protection of an inert gas, such as in a nitrogen or helium environment.
  • the progress of the substitution reaction can be monitored by conventional testing methods in the art (such as TLC, GC, HPLC or NMR, etc.), and the end point of the reaction is generally when the compound of formula VII is no longer detected (using methanol derivatization).
  • the substitution reaction time may be 3-24 hours, preferably 6-18 hours, and more preferably 8-16 hours.
  • the present invention also provides a method for preparing a compound of formula VIII, characterized in that it comprises the following steps: performing a reduction reaction on a compound of formula I and a reducing agent in a solvent and in the presence of an acid buffer to obtain a compound of formula VIII;
  • the molar ratio of the reducing agent to the compound of formula I can be 1.0-3.0, preferably 1.2-1.8, and more preferably 1.5.
  • the volume mass ratio of the acid buffer to the compound of formula I can be 2-10 mL/g, preferably 5-10 mL/g; further preferably 7-8 mL/g, and most preferably 7.7 mL/g.
  • the solvent is an ether solvent, such as one of tetrahydrofuran, diethyl ether, 1,4-dioxane, anisole, and methyl tert-butyl ether, or a mixture of any two or more thereof, more preferably tetrahydrofuran.
  • the temperature of the reduction reaction may be The temperature is preferably 0°C-20°C, preferably 0°C-10°C.
  • the progress of the reaction can be monitored by conventional testing methods in the art (such as TLC, GC, HPLC or NMR, etc.), and the end point of the reaction is generally when the compound of formula I is no longer detected.
  • the reaction time can be 0.5-5 hours, preferably 0.5-2.5 hours, and more preferably 0.5-1.0 hour.
  • a post-treatment step may be further included: extracting the reaction solution, concentrating the organic phase to obtain a crude compound of formula VIII, or directly concentrating the reaction solution to obtain a crude compound of formula VIII; preferably, the crude compound of formula VIII is purified by silica gel column chromatography to obtain a product compound of formula VIII; more preferably, the eluent used for the silica gel column chromatography is a mixed solvent of dichloromethane and methanol, and the volume ratio of dichloromethane to methanol can be (100-1):1, preferably (10-1):1.
  • the present invention also provides a method for preparing compound LE14, comprising the following steps: coupling the compound of formula VIII and 6-(maleimido)hexanoic acid succinimidyl ester in a solvent to obtain the compound LE14, i.e., linker-drug conjugate LE14.
  • the reaction materials are the compound of formula VIII, the 6-(maleimido)hexanoic acid succinimidyl ester and the solvent.
  • the molar ratio of 6-(maleimido)hexanoic acid succinimide ester to the compound of formula VIII can be 1-5, preferably 1-3, further preferably 1.2-2.0, and most preferably 2.0.
  • the solvent in the method for preparing compound LE14, may be an amide solvent.
  • the solvent is preferably a chlorinated alkane solvent, wherein the chlorinated alkane solvent is preferably one of dichloromethane, 1,2-dichloroethane and chloroform or a mixture of any two or more thereof, and further preferably dichloromethane.
  • the reaction temperature is 0°C-45°C, preferably 25°C-40°C, further preferably 30°C-35°C, and most preferably 35°C.
  • the reaction time can be 3-24 hours, preferably 3-10 hours, and more preferably 3-6 hours.
  • a post-treatment step may be further included: concentrating the reaction solution to obtain a crude compound LE14; preferably, the crude compound LE14 is purified by silica gel column chromatography to obtain a compound LE14 product; more preferably, the eluent used for the silica gel column chromatography is a mixed solvent of dichloromethane and methanol, and the volume ratio of dichloromethane to methanol can be (100-1):1, preferably (10-1):1.
  • the compound of formula VIII in the method for preparing compound LE14, can be prepared by any of the methods for preparing the compound of formula VIII above.
  • R is a C 1 -C 6 alkyl group substituted with -Si(C 1 -C 6 ) 3 .
  • C 1 -C 6 alkyl refers to a saturated straight or branched chain alkyl group containing 1-6, especially 1-4 carbon atoms, such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, etc., especially methyl or ethyl.
  • the reagents and raw materials used in the present invention are commercially available or homemade.
  • the use of the purified intermediate II for condensation reaction can greatly improve the purity of the intermediate I and reduce the generation of impurities.
  • Continuing the subsequent synthesis steps can also significantly improve the purity of the final product LE14, and the maximum single impurity in the final product LE14 is reduced to less than 0.1%;
  • the compound of formula IVb (5.0 g, 7.62 mmol) was dissolved in 50.0 mL of DMF, and potassium fluoride (0.67 g, 11.42 mmol) was added at room temperature to form a mixed solution.
  • the reaction was heated to 60°C under nitrogen protection and reacted under this condition for 5.0 to 8.0 hours.
  • the compound of formula IVb (5.0 g, 7.62 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (50.0 mL), and a 1.0 M tetrabutylammonium fluoride tetrahydrofuran solution (11.5 mL, 11.43 mmol) was added at room temperature, and the temperature was slowly raised to 40°C under nitrogen protection, and the reaction was carried out under this condition for 8.0 h.
  • the carboxylic acid intermediate compound II can withstand the conditions of removing the protecting group according to method 1 in step 3, and can also stably exist under the crude compound II obtained by removing the protecting group according to method 1 in step 3 and conventional column chromatography conditions.
  • the crude compound II is purified by conventional column chromatography to obtain a carboxylic acid intermediate II with high purity and low impurity content, thereby avoiding the introduction of impurities into subsequent reaction steps, thereby improving the purity of the final product of compound LE14 while reducing the maximum single impurity, and obtaining a final product of compound LE14 with a purity higher than 99.5% and a maximum single impurity content lower than 0.1%.
  • Phase B was 10% methanol acetonitrile solution
  • the detection wavelength was 254 nm
  • the instrument was Agilent 187260
  • the chromatographic column was Agilent Advance Bio Peptide Map, 3.5 ⁇ m, 2.1 ⁇ 250 mm
  • the flow rate was 1.0 mL/min.
  • the gradient settings are shown in Table 2.
  • the total yield of the route is calculated using isoprotecan as the starting material, and the results show that it is much lower than that of the route of the present invention. Therefore, in Route 4 and Route 5, the utilization rate of the expensive material isoprotecan is low, resulting in high production costs, which are not suitable for large-scale industrial production.
  • the synthetic route of the present invention can not only provide a high-purity LE14 compound, but also significantly reduce the production cost by improving the utilization rate of exotecan, and is more suitable for large-scale industrial production.

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Abstract

提供一种连接基药物偶联物的制备方法及其中间体；具体提供了化合物LE14的制备方法，其通过将中间体式II化合物与式III化合物或其甲磺酸盐在缩合剂、碱以及溶剂存在下进行酰胺缩合反应得到式I化合物。该制备方法能够制备高纯度中间体II，通过中间体II直接与依喜替康甲磺酸盐进行缩合，得到化合物I，继续进行后续反应，制备得到终产物LE14。所述制备方法具有如下一个或多个优点：将中间体II作为工艺生产的起始原料，能够减少工艺步骤，易于控制产品质量，终产物杂质显著降低，纯度提高；同时使用更加经济的依喜替康进行缩合，大幅降低了生产成本，更适合工业化生产。

Description

一种连接基药物偶联物的制备方法及其中间体
本申请要求申请日为2022/12/30的中国专利申请2022117284842的优先权。本申请引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及一种连接基药物偶联物的制备方法及其中间体。
背景技术
抗体偶联药物(ADC)成为了近几年国内外医药企业争相布局的药物管线，是近年来制药行业关注的热点之一。ADC药物由三大基本模块组成，包含抗体、连接子、效应分子。ADC药物正是利用抗体特异性的靶向作用，将效应分子传输到肿瘤部位进行富集，从而达到杀死肿瘤细胞的目的。效应分子中有一类喜树碱类似物在ADC领域被广泛应用。近年来Immunomedics公司将其作为效应分子应用在其ADC药物IMMU-132(ZL200980156218)中，表现出了较好的抗肿瘤效果，第一三共使用另一种喜树碱类似物作为效应分子的ADC药物DS-8201a(ZL201380053256)，同样表现出来较好的抗肿瘤效果。
专利申请WO2020259258A1公开了一种喜树碱衍生物DXd作为效应分子的ADC化合物，并提供了如路线1和路线2所示的连接基药物偶联物LE14的制备方法；专利申请WO2022204947A1、CN115215921A和CN115385926A提供了改进的路线3、路线4和路线5。
路线1：
路线1的合成方法包括如下步骤：化合物1-1与4-氨基苄醇反应，所得化合物与二(对硝基苯)碳酸酯反应后再与取代的烷基胺反应得到化合物1-2，化合物1-2与多聚甲醛和三甲基氯硅烷反应得到化合物1-3，化合物1-3与羟基乙酸叔丁酯反应后在三氟乙酸作用下脱去叔丁基得到化合物1-4，化合物1-4与依喜替康甲磺酸盐反应得到化合物1-5，在DBU作用下脱去氨基上的Fmoc保护后再与6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯发生偶联反应得到目标化合物LE14。
该路线中以中间体1-3作为原料制备中间体1-4的步骤中，由于原料和产物对酸碱均不稳定，脱保护和纯化过程中会存在一定的分解风险，化合物1-4未经过纯化，使用粗品直接进行下一步反应，会造成1-5粗品中产生明显的杂质，这类杂质极性与产物接近，造成纯化困难，进而影响LE14的产品质量。
路线2：
路线2的合成方法包括如下步骤：化合物2-1与多聚甲醛和三甲基氯硅烷反应，所得化合物再与羟基乙酸叔丁酯反应得到化合物2-2，化合物2-2在三氟乙酸作用下脱去叔丁基得到2-2a，再与依喜替康甲磺酸盐反应得到化合物2-3，化合物2-3在三乙基膦作用下将叠氮还原成氨基得到化合物2-4，化合物2-4与MC-V发生偶联反应得到目标化合物LE14。
该路线中原料2-2和脱去叔丁基生成的羧酸中间体2-2a对酸碱均不稳定，脱保护和纯化过程中存在一定的分解风险，化合物2-2a未经过纯化，使用粗品直接进行下一步反应，会造成2-3粗品中产生明显的杂质，这类杂质极性与产物接近，造成纯化困难，进而影响LE14的产品质量。
路线3：
路线3的合成方法包括如下步骤：化合物3-1与对硝基苯基氯甲酸酯反应得到化合物3-2，所得化合物再与相应的胺反应得到化合物3-3，再经脱保护得到3-4，进一步与氨基酸活性酯反应得到3-5，经过脱保护得到3-6，再与酰基叠氮试剂反应得到化合物3-7，随后通过氯甲基化反应得到化合物3-8，再与DXd或者DXd衍生物反应得到化合物3-9，再将3-9中的叠氮基团还原得到化合物3-10，最后接上马来酰亚胺接头得到终产物LE14。
按照路线3的方法，以化合物3-1为起始原料制备LE14的总收率为3.5％，以化合物3-7为起始原料制备LE14的总收率为10.7％。
该路线中用DXd或DXd衍生物作为payload的来源，售价较贵，大大增加了制备LE14的成本。
路线4：
路线4的合成方法包括如下步骤：化合物4-1与对硝基苯基氯甲酸酯反应得到化合物4-2，所得化合物再与相应的胺反应得到化合4-3，经脱保护得到4-4，进一步与氨基酸活性酯反应得4-5，经过脱保护得到4-6，再与酰基叠氮试剂反应得到化合物4-7，随后通过氯甲基化反应得到化合物4-8，再与DXd衍生物反应得到化合物4-9，再将4-9中的叠氮基团还原得到化合物4-10，再接上马来酰亚胺接头得到4-11，最后脱除羟基保护基得到终产物LE14。
按照路线4的方法，以化合物4-1为起始原料，以其中的Dxd-a为payload来源制备LE14的总收率为7.3％(4-1→Dxd-a→LE14)；以化合物4-1为起始原料，以其中的Dxd-b为payload来源制备LE14的总收率为12.9％(4-1→Dxd-b→LE14)。
该路线中用DXd衍生物Dxd-a(结构见路线4-a)或Dxd-b(结构见路线4-b)作为payload的来源，售价较贵，大大增加了制备LE14的成本。
为了避免购买价格昂贵的DXd衍生物，本公司开发了从依喜替康出发制备Dxd-a和Dxd-b的合成路线4-a和路线4-b。
依喜替康衍生化路线4-a：(依喜替康→Dxd-a)
按照路线4-a制备Dxd-a的合成方法包括：将依喜替康或其甲磺酸盐在三甲基氯硅烷及N,N-二异丙基乙胺的存在下与4-甲氧基氯化三苯甲烷反应制备得到氨基保护的中间体化合物17，化合物17在碱性条件下和乙酸酐反应得到乙酰化的中间体16a，中间体16a在三乙基硅烷的作用下脱去氨基的保护后得到的中间体15a进一步与羟基乙酸反应得到化合物Dxd-a,该以依喜替康为起始原料制备Dxd-a的总收率为38.3％(依喜替康→Dxd-a；以下称为路线4-a的收率)。
将以化合物4-1为起始原料按照路线4的合成方法制备得到化合物4-8和以依喜替康为起始原料按照路线4-a的合成方法制备得到的Dxd-a为payload来源按照路线4的方法制备LE14的整体收率为2.8％(4-1→Dxd-a→LE14的收率与依喜替康衍生化路线4-a的收率相乘，即7.3％×38.3％＝2.8％)。
在以化合物4-7作为起始原料和以依喜替康为起始原料按照路线4-a的合成方法制备得到的Dxd-a为payload来源按照路线4的方法制备LE14的整体收率为8.2％(4-7→Dxd-a→LE14的收率与依喜替康衍生化路线4-a的收率相乘，即21.3％×38.3％＝8.2％)。
依喜替康衍生化路线4-b：(依喜替康→Dxd-b)
按照路线4-b制备Dxd-b的合成方法包括：将依喜替康或其甲磺酸盐在三甲基氯硅烷及N,N-二异丙基乙胺的存在下与4-甲氧基氯化三苯甲烷反应制备得到氨基保护的中间体化合物17，化合物17在碱性条件下和叔丁基二苯基氯硅烷反应得到叔丁基二苯基硅烷化的中间体16b，中间体16b在三乙基硅烷的作用下脱去氨基的保护后得到的中间体15b进一步与羟基乙酸反应得到化合物Dxd-b,该以依喜替康为起始原料制备Dxd-b的总收率为48.2％(依喜替康→Dxd-b；以下称为路线4-b的收率)。
将以化合物4-1为起始原料按照路线4的合成方法制备得到化合物4-8和以依喜替康为起始原料按照路线4-b的合成方法制备得到的Dxd-b为payload来源按照路线4的方法制备LE14的整体收率为6.2％(4-1→Dxd-b→LE14的收率与依喜替康衍生化路线4-b的收率相乘，即12.9％×48.2％＝6.2％)。
在以化合物4-7作为起始原料和以依喜替康为起始原料按照路线4-b的合成方法制备得到的Dxd-b为payload来源按照路线4的方法制备LE14的整体收率为18.0％(4-7→Dxd-b→LE14的收率与依喜替康衍生化路线4-b的收率相乘，即37.5％×48.2％＝18.0％)。
若将以依喜替康为起始原料，按照路线4-a和4-b的方法制备得到的Dxd-a和Dxd-b作为Dxd衍生物来源用于路线4，虽然避免了直接用比较昂贵的Dxd，但是增加了4步反应，增加了实验操作量，同时，依喜替康衍生化过程中，其损耗也是巨大的，反而增加了生产成本。
路线5：
路线5的合成方法包括如下步骤：化合物5-1与对硝基苯基氯甲酸酯反应得到化合物5-2，所得化合物再与相应的胺反应得到化合物5-3，经脱保护得到5-4，进一步与氨基酸活性酯反应得5-5，经过脱保护得到5-6，再与酰基叠氮试剂反应得到化合物5-7，随后通过羟甲基化反应得到化合物5-8，再与DXd衍生物反应得到化合物5-9，再将5-9中的叠氮基团还原得到化合物5-10，再接上马来酰亚胺接头得到5-11，最后脱除羟基保护基得到终产物LE14。
按照路线5的方法，以化合物5-1为起始原料，以其中的Dxd-a’(在原专利申请中编号为Dxd-a，结构见路线5-a，为了与路线4-a中的Dxd-a区分，本申请中重新编号为Dxd-a’)为payload来源制备LE14的总收率为6.9％；以化合物5-1为起始原料，以其中的Dxd-b’(在原专利申请中编号为Dxd-b，结构见路线5-b，为了与路线4-b中的Dxd-b区分，本申请中重新编号为Dxd-b’)为payload来源制备LE14的总收率为12.2％。
该路线中用DXd衍生物Dxd-a’或Dxd-b’作为payload的来源，售价较贵，大大增加了制备LE14的成本。
为了避免购买价格昂贵的DXd衍生物，本公司开发了从依喜替康出发制备Dxd-a’和Dxd-b’的合成路线5-a和路线5-b。
依喜替康衍生化路线5-a：(依喜替康→Dxd-a’)
按照路线5-a制备Dxd-a’的合成方法包括：将依喜替康或其甲磺酸盐在三甲基氯硅烷及N,N-二异丙基乙胺的存在下与4-甲氧基氯化三苯甲烷反应制备得到氨基保护的中间体化合物17，化合物17在碱性条件下和乙酸酐反应得到乙酰化的中间体16a，中间体16a在三乙基硅烷的作用下脱去氨基的保护后得到的中间体15a进一步与2-溴乙酸反应得到化合物Dxd-a’,该以依喜替康为起始原料制备Dxd-a’的总收率为27.6％(依喜替康→Dxd-a’，以下称为路线5-a的收率)。
将以化合物5-1为起始原料按照路线5的合成方法制备得到化合物5-8和以依喜替康为起始原料按照路线5-a的合成方法制备得到的Dxd-a’为payload来源按照路线5的方法制备LE14的整体收率为1.9％(5-1→Dxd-a’→LE14的收率与依喜替康衍生化路线5-a的收率相乘，即6.9％×27.6％＝1.9％)。
在以化合物5-7作为起始原料和以依喜替康为起始原料按照路线5-a的合成方法制备得到的Dxd-a’为payload来源按照路线5的方法制备LE14的整体收率为6.5％(5-7→Dxd-a’→LE14的收率与依喜替康衍生化路线5-a的收率相乘，即23.4％×27.6％＝6.5％)。
依喜替康衍生化路线5-b：(依喜替康→Dxd-b’)
按照路线5-b制备Dxd-b’的合成方法包括：将依喜替康或其甲磺酸盐在三甲基氯硅烷及N,N-二异丙基乙胺的存在下与4-甲氧基氯化三苯甲烷反应制备得到氨基保护的中间体化合物17，化合物17在碱性条件下和叔丁基二苯基氯硅烷反应得到叔丁基二苯基硅烷化的中间体16b，中间体16b在三乙基硅烷的作用下脱去氨基的保护后得到的中间体15b进一步与2-溴乙酸反应得到化合物Dxd-b’，该以依喜替康为起始原料制备Dxd-b’的总收率为44.5％(依喜替康→Dxd-b’，以下称为路线5-b的收率)。
将以化合物5-1为起始原料按照路线5的合成方法制备得到化合物5-8和以依喜替康为起始原料按照路线5-b的合成方法制备得到的Dxd-b’为payload来源按照路线5的方法制备LE14的整体收率为5.4％(5-1→Dxd-b’→LE14的收率与依喜替康衍生化路线5-b的收率相乘，即12.2％×44.5％＝5.4％)。
在以化合物5-7作为起始原料和以依喜替康为起始原料按照路线5-b的合成方法制备得到的Dxd-b’为payload来源按照路线5的方法制备LE14的整体收率为18.3％(5-7→Dxd-b’→LE14的收率与依喜替康衍生化路线5-b的收率相乘，即41.2％×44.5％＝18.3％)。
若将以依喜替康为起始原料，按照路线5-a和5-2的方法制备得到的Dxd-a’和Dxd-b’作为Dxd衍生物来源用于路线5，虽然避免了直接用比较昂贵的Dxd，但是增加了4步反应，增加了实验操作量，同时，依喜替康衍生化过程中，其损耗也是巨大的，反而增加了生产成本。
经过验证评估下来，发现以上路线存在以下缺陷：
路线1和路线2中的中间体1-3和2-2需要通过脱除叔丁基制备羧酸中间体，但是该反应使用了三氟乙酸脱保护，条件剧烈，且三氟乙酸后处理难以除去，同时生成的1-4 和2-2a羧酸中间体不稳定，在纯化过程中近乎完全损失，只能采用未经纯化的粗品直接进行下一步反应，进而造成终产品中存在一部分极性与其相近的杂质存在，增加了纯化难度；同时路线3、路线4和路线5中需要用到DXd或者DXd的衍生物，大幅增加了生产成本。
为了能拿到纯化的稳定的羧酸中间体，我们还尝试了用甲基或乙基保护羧基，例如将甲砜基乙基胺中间体和羟基乙酸甲酯或羟基乙酸乙酯反应，然后在碱性或者酸性条件下进行酯水解来得到羧酸，然而该类酯结构及水解后得到的羧酸均不耐酸碱，无法拿到纯化的羧酸产品；也尝试使用硅类保护基，如三甲基硅(TMS)、叔丁基二甲基硅基(TBS)保护羧基，然而对应的产物也不稳定，没办法拿到纯化的产品。
以上合成路线的缺陷及失败的尝试都限制了该类ADC药物的商业化生产，因此需要寻找一条更有效合理的制备路线及具有稳定易于纯化分离的中间体来解决这一问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服在现有的式LE14所示的连接基药物偶联物的制备方法中存在的中间体不易纯化，导致制备得到的LE14纯度不高，以及DXd衍生物价格昂贵的缺陷，从而提供了一种连接基药物偶联物LE14的新的制备方法及其中间体，本发明的制备方法直接采用依喜替康或其甲磺酸盐作为payload的来源，并与本发明的新中间体II反应形成连接基药物偶联物化合物I，最终通过后续工艺反应得到终产物LE14。本发明制备方法具有以下一个或多个优点：能稳定地拿到纯化的羧酸中间体II产品，将其作为工艺生产的起始原料，显著减少工艺步骤，同时也降低终产品LE14的杂质含量；此外工艺中使用更加经济的依喜替康或其甲磺酸盐作为关键原料，大幅降低了生产成本。
本发明涉及的抗体药物偶联物LE14的结构如下所示：
本发明主要是通过以下技术方案解决上述技术问题的。
本发明提供了一种式I化合物的制备方法，其包括如下步骤：将中间体式II化合物与式III化合物或其甲磺酸盐在缩合剂、碱以及溶剂存在下进行酰胺缩合反应得到所述的 式I化合物；
所述的式I化合物制备方法中，反应条件(例如溶剂用量、投料次序和加料方式、投料时间等)可以为本领域该类反应的常规条件，本发明中，优选如下方案：
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，反应物料为所述的式II化合物、所述的式III化合物或其甲磺酸盐、所述的缩合剂、所述的碱和所述的溶剂。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述的酰胺缩合反应还包括如下具体步骤：式Ⅱ化合物溶于溶剂，加入所述的缩合剂，立刻或反应一段时间后加入式Ⅲ化合物或其甲磺酸盐和碱。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，该反应全程避光处理。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述的式ⅡI化合物与所述的式II化合物的摩尔比值可以为0.8-1.5，优选为0.9-1.2，进一步优选为0.9-1.0，最优选为0.9。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述的缩合剂可以为氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉(DMTMM)、氰代磷酸二乙酯(DECP)、叠氮磷酸二苯酯(DPPA)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBt)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)、2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)、2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TSTU)和2-(5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸季铵盐(TNTU)中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选地，所述的缩合剂可以为氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述的缩合剂与所述的式Ⅱ化合物的摩尔比值可以为1-3，优选为1-1.5，进一步优选为1.5。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述的碱可以为本领域此类反应常规的碱，可以为有机碱、无机碱或其混合，优选为有机碱；其中，所述的有机碱优选为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺和吡啶中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为N,N-二异丙基乙胺；所述的无机碱优选为碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐和碱金属磷酸盐中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化钾中的一种或其中任意两种或两种以上的混合。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述的碱与所述的式Ⅱ化合物的摩尔比值可以为1-10，优选为1-6，进一步优选为1-3，最优选为1.5。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述的溶剂可以为N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选为N，N-二甲基甲酰胺。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述的缩合反应的温度可以为20℃-50℃，优选为20℃-30℃。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述缩合反应优选在惰性气体保护下进行，例如在氮气或氦气环境中进行。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述缩合反应的反应进程监测可采用本领域中的常规测试方法(例如TLC、GC、HPLC或NMR等)进行监控，一般以不再检测到式Ⅲ化合物作为反应终点。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述缩合反应的反应时间可以为2-8小时，优选为3-5小时，进一步优选为2-4小时。
在一些实施方案中，所述的式I化合物的制备方法中，所述缩合反应的反应完成后，还可以进一步包括如下后处理步骤：将反应液浓缩得到式I化合物粗品；优选地，将式I化合物粗品进行硅胶柱层析纯化得到式I化合物产品，更优选地，所述的硅胶柱层析的洗脱剂可以为氯仿和甲醇的混合溶剂，所述的氯仿和甲醇的体积比为(100-10):1，进一步优选为10:1。
所述的式I化合物的制备方法还可以进一步包括式II化合物的制备方法，其可以包括如下步骤：在溶剂中，将式IV化合物在脱保护剂的存在下进行脱保护反应得到式II化合物；
其中，R为-Si(C1～C6)3取代的C1～C6烷基。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的制备方法中，所述的-Si(C1～C6)3取代的C1～C6烷基可以为三甲基硅基乙基、叔丁基二甲基硅基乙基；优选地，所述的-Si(C1～C6)3取代的C1～C6烷基为三甲基硅基乙基。
在一些实施方案中，所述的式II化合物的制备方法中，反应物料为所述的式IV化合物、所述的脱保护剂和所述的溶剂。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的制备方法中，所述的脱保护剂可以为氟试剂，所述的氟试剂可以为四丁基氟化铵、四甲基氟化铵、四丁基氟化铵/醋酸、吡啶氟化氢络合物、叔丁基氟化铵、叔丁基氟化铵/醋酸、四乙基氟化铵，或者市售的四甲基氟化铵/四氢呋喃溶液、四乙基氟化铵/四氢呋喃溶液、四丁基氟化铵/四氢呋喃溶液，或者为四氟化硅、氟化钾、氟化钠、氟化锂和氟化铯中的一种或多种，优选为1M四丁基氟化铵/四氢呋喃溶液或者氟化钾。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的制备方法中，所述的脱保护剂与所述的式Ⅳ化合物的摩尔比值可以为1-5，优选为1-3，进一步优选为1.1-2.0，最优选为1.5。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的制备方法中，所述的溶剂可以为纯化水、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选为N,N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃，最优选为N,N-二甲基甲酰胺。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物制备方法中的反应条件(例如溶剂用量、溶剂种类、投料顺序、加料方式和投料时间等)可以为本领域该类反应的常规条件，其可根据不同脱保护基的类型进行调整。例如可包括如下步骤：式Ⅳ化合物溶于溶剂，加入脱保护剂后加热开启反应、或者脱保护剂溶于溶剂，加入Ⅳ化合物后加热开启反应。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的制备方法中，所述的脱保护反应的温度为 20℃-80℃，优选为30℃-70℃，进一步优选为40℃-70℃，更进一步优选为40℃-60℃，最优选为60℃。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的制备方法中，所述脱保护反应优选在惰性气体保护下进行，例如在氮气或氦气环境中进行。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的制备方法中，所述脱保护反应的反应进程监测可采用本领域中的常规测试方法(例如TLC、GC、HPLC或NMR等)进行监控，一般以不再检测到式Ⅳ化合物作为反应终点。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的制备方法中，所述脱保护反应的反应时间可以为4-24小时，优选为5-16小时，进一步优选为5-8小时。
在一些实施方案中，所述的式Ⅱ化合物的合成方法中，反应完成后，还可以进一步包括后处理步骤：将反应液浓缩得到式Ⅱ化合物粗品；优选地，将式Ⅱ化合物粗品进行硅胶柱层析纯化得到式Ⅱ化合物产品；更优选地，所述的硅胶柱层析所用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，所述的二氯甲烷和甲醇的体积比可以为(100-1):1，优选为(10-1):1。
所述的式I化合物的制备方法还可以进一步包括式IV化合物的制备方法，其可以包括如下步骤：将式VI化合物与试剂V在溶剂中、在碱存在下进行醚化反应得到式Ⅳ化合物；
其中，R如上所述。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的制备方法中，反应物料为所述的式VI化合物、所述的试剂V、所述的碱和所述的溶剂。
在一些实施方案中，所述的式Ⅳ化合物的制备方法中，所述的试剂Ⅴ与所述的式Ⅵ化合物的摩尔比值可以为1-5，优选为1-3，进一步优选为1.1-1.6，最优选为1.5。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的制备方法中，所述碱试剂可以为有机碱、无机碱或其混合，优选为有机碱；其中，所述有机碱优选为叔丁醇钾、三乙胺、4-二甲氨 基吡啶、吡啶和潘必啶中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为潘必啶；所述无机碱优选为碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐和碱金属磷酸盐中的一种或其中任意两种或两种以上的混合。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的制备方法中，所述的碱与所述的式Ⅵ化合物的摩尔比值可以为1-5，优选为1.2-4，进一步优选为1.5-3，最优选为1.5。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的制备方法中，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选为四氢呋喃或1,4-二氧六环，进一步优选为四氢呋喃。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物制备方法中，反应条件(例如溶剂用量、投料顺序、加料方式和投料时间等)可以为本领域该类反应的常规条件，其可根据不同碱试剂的类型进行调整，例如可包括如下步骤：式Ⅵ化合物溶于溶剂，加入碱后，立刻或反应一段时间后加入试剂Ⅴ。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的合成方法中，所述的醚化反应的温度可以为0℃-80℃，优选为40℃-70℃，最优选60℃。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的制备方法中，所述的醚化反应优选在惰性气体保护下进行，例如在氮气或氦气环境中进行。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的制备方法中，所述的醚化反应进程的监测可采用本领域中的常规测试方法(例如TLC、GC、HPLC或NMR等)进行监控，一般以不再检测到式Ⅵ化合物作为反应终点。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的制备方法中，所述醚化反应时间可以为3-24小时，优选为3-12小时，进一步优选为4-8小时。
在一些实施方案中，所述的式IV化合物的制备方法中，反应完成后，还可以进一步包括后处理步骤：将反应液萃取，将有机相浓缩后得到式IV化合物粗品或者，反应液直接将反应液浓缩得到IV化合物粗品；优选地，通过将式IV化合物粗品进行硅胶柱层析纯化得到IV化合物产品；更优选地，所述的硅胶柱层析所用的洗脱剂为正庚烷和乙酸乙酯的混合溶液，所述的正庚烷和乙酸乙酯的体积比可以为(20-1):1，优选为(10-1):1。
所述的式I化合物的制备方法还可以进一步包括式VI化合物的制备方法，其可以包括如下步骤：将式Ⅶ化合物与多聚甲醛和三甲基氯硅烷在溶剂中进行取代反应得到所述式Ⅵ化合物；
其中所述的式Ⅶ化合物为叠氮类多肽化合物，来源为市售或者自制。
在一些实施方案中，所述的式VI化合物的制备方法中，反应物料为所述的式Ⅶ化合物、所述的多聚甲醛、所述的三甲基氯硅烷和所述的溶剂。
在一些实施方案中，所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的多聚甲醛与所述的式Ⅶ化合物的摩尔比值可以为1-10，优选为1-5，进一步优选为1.3-3.0，最优选为1.3。
在一些实施方案中，所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的三甲基氯硅烷与所述的式Ⅶ化合物的摩尔比值可以为1-5，优选为2-4，进一步优选为2-3，最优选为2.5。
在一些实施方案中，所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述溶剂可以为N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选为四氢呋喃或1,4-二氧六环，进一步优选为1,4-二氧六环。
在一些实施方案中，所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的取代反应的温度为-10℃-50℃，优选为15℃-35℃，进一步优选为18℃-25℃。
在一些实施方案中，所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的取代反应在惰性气体保护下进行，例如在氮气或氦气环境中进行。
在一些实施方案中，所述的Ⅵ化合物的制备方法中，所述取代反应的反应进程监测可采用本领域中的常规测试方法(例如TLC、GC、HPLC或NMR等)进行监控，一般以不再检测到式Ⅶ化合物(采用甲醇衍生化)作为反应终点。
在一些实施方案中，所述的Ⅵ化合物的制备方法中，所述的取代反应时间可以为3-24小时，优选为6-18小时，进一步优选为8-16小时。
在一些实施方案中，所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，反应完成后，还可以进一步包括后处理步骤：将反应液进行固液分离(有固体存在的情况下)或者不进行固液分离，将有机相浓缩后得到式Ⅵ化合物；优选地，直接将浓缩后得到的式Ⅵ化合物粗品与试剂V反应。
本发明还提供了一种式VIII化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将式Ⅰ化合物和还原剂在溶剂中和酸缓冲液存在下进行还原反应得到式Ⅷ化合物；
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，反应物料为所述的式Ⅰ化合物、所述的还原剂、所述的酸缓冲液和所述的溶剂。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的还原剂可以为三苯基膦、三叔丁基膦或三甲基膦，或选择市售的三苯基膦/四氢呋喃溶液、三叔丁基膦/四氢呋喃溶液或三甲基膦/四氢呋喃溶液，优选为三甲基膦/四氢呋喃溶液，进一步优选为1M三甲基膦/四氢呋喃溶液。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的酸缓冲液可以为醋酸钠缓冲液、甲酸钠缓冲液，优选为醋酸钠缓冲液；所述酸缓冲液的pH优选为4.0-6.0，进一步优选为4.5-5.5，更进一步优选为5.0。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的还原剂与所述的式I化合物的摩尔比值可以为1.0-3.0，优选为1.2-1.8，进一步优选为1.5。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的酸缓冲液与所述的式I化合物的体积质量比可以为2-10mL/g，优选为5-10mL/g；进一步优选为7-8mL/g，最优选7.7mL/g。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的溶剂为醚类溶剂，例如四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、苯甲醚、甲基叔丁基醚中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为四氢呋喃。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的还原反应的温度可 以为0℃-20℃，优选为0℃-10℃。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，反应进程的监测可采用本领域中的常规测试方法(例如TLC、GC、HPLC或NMR等)进行监控，一般以不再检测到式Ⅰ化合物作为反应终点。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，反应时间可以为0.5-5小时，优选为0.5-2.5小时，进一步优选为0.5-1.0小时。
在一些实施方案中，所述的式VIII化合物的制备方法中，反应完成后，还可以进一步包括后处理步骤：将反应液萃取，将有机相浓缩后得到式VIII化合物粗品，或者直接将反应液浓缩得到式VIII化合物粗品；优选地，将式VIII化合物粗品进行硅胶柱层析纯化得到式VIII化合物产品；更优选地，所述的硅胶柱层析所用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，所述的二氯甲烷和甲醇的体积比可以为(100-1):1，优选为(10-1):1。
本发明还提供了一种化合物LE14的制备方法，包括如下步骤：将式VIII化合物和6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯在溶剂中进行偶联反应得到所述化合物LE14，即连接基药物偶联物LE14。
在一些实施方案中，所述的化合物LE14的制备方法中，反应物料为所述的式VIII化合物、所述的6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯和所述的溶剂。
在一些实施方案中，所述的化合物LE14的制备方法中，所述的6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯与式VIII化合物的摩尔比值可以为1-5，优选为1-3，进一步优选为1.2-2.0，最优选为2.0。
在一些实施方案中，所述的化合物LE14的制备方法中，所述溶剂可以为酰胺类溶 剂、氯代烷烃类溶剂、醚类溶剂和腈类溶剂中的一种或其中任意两种或两种以上的混合；优选为氯代烷烃类溶剂，其中，所述氯代烷烃类溶剂优选为二氯甲烷，1,2-二氯乙烷和氯仿中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为二氯甲烷。
在一些实施方案中，所述的化合物LE14的制备方法中，反应温度为0℃-45℃，优选为25℃-40℃，进一步优选为30℃-35℃，最优选为35℃。
在一些实施方案中，所述的化合物LE14的制备方法中，反应进程的监测可采用本领域中的常规测试方法(例如TLC、GC、HPLC或NMR等)进行监控，一般以不再检测到式VIII化合.物作为反应终点。
在一些实施方案中，所述的化合物LE14的制备方法中，反应时间可以为3-24小时，优选为3-10小时，进一步优选为3-6小时。
在一些实施方案中，所述的化合物LE14的制备方法中，反应完成后，还可以进一步包括后处理步骤：将反应液浓缩得到化合物LE14粗品；优选地，通过将化合物LE14粗品进行硅胶柱层析纯化得到化合物LE14产品；更优选地，所述的硅胶柱层析所用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，所述的二氯甲烷和甲醇的体积比可以为(100-1):1，优选为(10-1):1。
在一些实施方案中，所述的化合物LE14的制备方法中，所述的式VIII化合物可为如上式VIII化合物的制备方法中的任意方案制备得到。
本发明还提供了一种式II化合物：
本发明还提供了一种式II化合物的制备方法，其包括如下步骤：在溶剂中，将式IV化合物在脱保护剂的存在下进行脱保护反应得到式II化合物；
其中，R为-Si(C1～C6)3取代的C1～C6烷基。
所述的式II化合物的制备方法中，反应条件均可以如前所述。
所述的式II化合物的制备方法还可以进一步包括本文所述的式IV化合物的制备方法。
定义
本发明中，术语“C1～C6烷基”表示包括1-6个、特别是1-4个碳原子的饱和直链或支链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等，特别是甲基或乙基。
本发明中，室温是指20℃-30℃
本发明中涉及的化合物英文缩写和中文名称对照见表1。
表1

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料来自市售或自制。
本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一种新的式I所示的连接基药物偶联物中间体的制备方法，首先，该制备方法能够稳定的提供中间体II纯品，其收率可达89.1％，纯度可达90.16％，相比于路线1和2中脱除叔丁基制备羧酸中间体的方法，收率和纯度均大幅提升；
其次，利用纯化后的中间体II进行缩合反应，可以大大提高中间体I的纯度，减少杂质的产生，继续进行后续合成步骤，也能够显著提升终产物LE14的纯度，终产物LE14中最大单杂降低至0.1％以下；
最后，以中间体II作为商业化生产工艺的起始原料，可以简化生产步骤，同时，以中间体II与市售的Exatecan甲磺酸盐进行缩合，避免了使用昂贵的DXd物料，能够大幅度的降低生产成本。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
以下实施例中，
质谱采用Waters Acquity Xevo G2-XS QTof UPLC/MS超高效液相色谱高分辨质谱联用系统；
1H-NMR采用Bruker AVANCE III 400MHz核磁共振仪或Bruker AVANCE III HD 300MHz核磁共振仪；
HPLC检测条件：仪器为安捷伦187260，色谱柱为Agilent AdvanceBio Peptide Map， 3.5μm,2.1×250mm，检测波长为254nm，采用如表2所示的流动相梯度设置，其中A相为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(pH＝5.0)，B相为10％甲醇乙腈溶液，流速为1.0mL/min。
表2.HPLC检测流动相梯度设置
常规柱层析条件均为：填料为200-400目无定形硅胶，室温条件下进行柱层析。
以下实施例中，室温指20-30℃。
实施例1化合物LE14的合成
步骤1：式Ⅵ化合物的合成
将式Ⅶ化合物(25.0g，53.36mmol)与多聚甲醛(2.09g，69.37mmol)混合溶于250.0mL的无水1,4-二氧六环中，慢慢加入三甲基氯硅烷(14.43g，133.40mmol)，18-25℃范围内反应15.0h得到式Ⅵ化合物的粗品溶液，反应液取样中控检测，待反应完毕后将反应液过滤，然后将滤液浓缩即得到粗品式Ⅵ化合物(28.40g)。(直接用于下一步反应)
步骤2：式Ⅳb化合物的合成
将所得粗品式Ⅵ化合物(28.40g，按理论收率计算，53.36mmol)溶于250.0mL的无水四氢呋喃中，加入潘必啶(12.43g，80.05mmol)和式Ⅴb化合物(14.12g，80.05mmol)，反应在氮气保护下加热至60℃，并在此条件下反应4.0～8.0h。待原料反应完毕，减压浓缩除去四氢呋喃，然后加乙酸乙酯和饱和食盐水萃取，所得有机相经干燥后减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝10:1～1:1(v/v))纯化得到式Ⅳb化合物(17.88g，纯度92.81％，步骤1和步骤2合并收率51.0％)；
ESI-MS m/z：657.4(M+H)；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),8.49(d,J＝7.0Hz,1H),7.59(d,J＝8.6Hz,2H),7.42–7.21(m,2H),5.15–4.97(m,2H),4.85(s,2H),4.46(p,J＝7.0Hz,1H),4.12(dd,J＝29.5,10.7Hz,4H),3.68(dd,J＝8.7,6.0Hz,2H),3.49(d,J＝8.2Hz,1H),3.40(t,J＝7.3Hz,2H),2.97(d,J＝26.2Hz,3H),1.33(d,J＝7.1Hz,3H),1.29–1.18(m,2H),0.93(dd,J＝9.6,6.6Hz,6H),0.87–0.82(m,1H),0.15(s,9H).
步骤3：式Ⅱ化合物的合成
方法1：使用氟化钾试剂进行脱保护
将式Ⅳb化合物(5.0g，7.62mmol)溶于50.0mL的DMF中，室温下加入氟化钾(0.67g，11.42mmol)形成混合溶液，反应在氮气保护下加热至60℃，并在此条件下反应5.0～8.0h。待原料反应完毕，减压浓缩除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷： 甲醇＝10:1～1:1(v/v))纯化得到式Ⅱ化合物(3.78g，收率89.1％)；
ESI-MS m/z：556.0(M-H)；
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.57(d,J＝38.3Hz,1H),9.36(d,J＝94.5Hz,1H),7.61(d,J＝8.5Hz,2H),7.28(d,J＝7.2Hz,2H),5.01(d,J＝10.8Hz,2H),4.83(s,2H),4.38(s,1H),4.17(s,1H),3.71(s,2H),3.54(s,2H),3.48(d,J＝8.3Hz,1H),3.44(s,1H),3.14(s,2H),2.95(d,J＝22.9Hz,3H),1.32(d,J＝7.2Hz,3H),0.89(dd,J＝14.7,6.7Hz,6H).
方法2：使用氟化钠试剂进行脱保护
操作步骤和反应条件同方法1，将氟化钾替换为等当量的氟化钠，原料用量和溶剂用量同方法1，纯化得到式Ⅱ化合物(2.20g，收率52.0％)。
方法3：使用氟化铯试剂进行脱保护
操作步骤和反应条件同方法1，将氟化钾替换为等当量的氟化铯，原料用量和溶剂用量同方法1，纯化得到式Ⅱ化合物(1.84g，收率43.5％)。
方法4：使用四丁基氟化铵试剂进行脱保护
将式Ⅳb化合物(5.0g，7.62mmol)溶于四氢呋喃(50.0mL)中，室温下加入1.0M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(11.5mL，11.43mmol)，在氮气保护下缓慢升温至40℃，并在此条件下反应8.0h。减压浓缩除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1～1:1(v/v))纯化得到式Ⅱ化合物(2.99g，收率70.3％)；
ESI-MS m/z：557.5(M+H)。
步骤4：式Ⅰ化合物的合成
将式Ⅱ化合物(2.79g，5.00mmol)溶于20.0mL无水DMF中，加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)(2.08g，7.50mmol)，反应在室温下反应1.0h。然后向其中加入N，N-二异丙基乙胺(1.30mL，7.50mmol)和式III化合物(Exatecan甲磺酸盐)(2.40g，4.50mmol)并继续反应1.5～2.0h。待原料反应完毕，减压浓缩除去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(氯仿：甲醇＝10:1(v/v))纯化得到式Ⅰ化合物(3.44g，纯度91.30％，收率70.5％)；
ESI-MS m/z：974.5(M+H)。
步骤5：式Ⅷ化合物的合成
将2.1mL的1.0mol/L三甲基膦四氢呋喃溶液(2.1mL，2.01mmol)与5.0mL THF混合后的混合液滴加到盛有10.0mL的醋酸钠缓冲液(pH＝5.0)中，反应在氮气保护下降温至0～5℃。随后将溶有式Ⅰ化合物(1.30g，1.34mmol)的5.0mL四氢呋喃缓慢滴加到反应体系中，反应保持0-10℃条件下继续反应0.5～1.0h。待原料反应完毕，减压馏去四氢呋喃溶剂，二氯甲烷萃取，所得有机相经干燥后减压蒸除溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1～1:1(v/v))纯化得到式Ⅷ化合物(980mg，纯度89.75％，收率77.5％)；
ESI-MS m/z：948.7(M+H)；
步骤6：化合物LE14的合成
将式Ⅷ化合物(0.98g，1.04mmol)溶于30.0mL的无水二氯甲烷中，加入6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(0.64g，2.08mmol)，反应在氮气保护下加热至35℃，并在此条件下反应3-6h。待原料反应完毕，减压馏去溶剂，所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1～1:1(v/v))纯化得到化合物LE14(861mg，纯度99.66％，收率72.5％)；
ESI-MS m/z：1141.6(M+H)；
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.93(s,1H),8.49(s,1H),8.13(d,J＝6.9Hz,1H),7.76(d,J＝28.7Hz,2H),7.57(s,2H),7.28(s,3H),6.99(s,2H),6.48(s,1H),5.59(s,1H),5.47–5.32(m,2H),5.17(s,2H),5.04–4.79(m,4H),4.38(d,J＝7.1Hz,1H),4.21–4.14(m,1H),4.03(s,2H),3.69(d,J＝2.8Hz,2H),3.37(dt,J＝14.2,7.7Hz,4H),3.24–3.09(m,2H),2.93(d,J＝37.1Hz,3H),2.36(t,J＝1.8Hz,3H),2.22–2.07(m,4H),2.01–1.77(m,3H),1.52–1.41(m,4H),1.30(d,J＝7.1Hz,3H),1.19(d,J＝7.7Hz,2H),0.84(d,J＝12.0Hz,9H)。
实施例2
其他投料和反应条件不变，依次按照实施例1步骤1至步骤3的方法制备得到的式II化合物粗品(步骤3的反应液直接浓缩，不进行纯化)直接进行后续反应，按照实施 例1步骤4至步骤6的操作，最终得到纯化的化合物LE14(894mg，纯度95.46％，收率75.3％)。
实施例3
IVb-1的合成步骤参考实施例1中的步骤1和步骤2，将Vb替换为Vb-1(羟基乙酸乙酯)，得到化合物IVb-1(18.28g，纯度94.10％，步骤1和步骤2合并收率58.6％)；式II化合物的合成步骤：
将式Ⅳb-1化合物(5.9g，10.00mmol)溶于50.0mL的甲醇中，0-10℃下加入氢氧化锂水溶液(360mg氢氧化锂溶解于10mL水中)，加料完毕20-30℃下反应3-4小时，监控原料反应完毕，减压浓缩除去甲醇，向浓缩液中滴加1mol/L氯化铵水溶液(15mL)中和，所得混合物使用二氯甲烷/水体系萃取分相，有机相浓缩得到粗品，所得粗品经硅胶柱层析纯化未得到式Ⅱ化合物。
实施例4工艺路线综合对比
1、对比不同路线制备得到的羧酸中间体
将按照路线1方法得到的羧酸中间体1-4的粗品用硅胶柱层析(氯仿：甲醇＝10:1(v/v))纯化，未拿到纯化的中间体1-4；将按照路线2的方法得到的羧酸中间体2-2a的粗品用硅胶柱层析(氯仿：甲醇＝10:1(v/v))纯化，未拿到纯化的中间体2-2a；而按照实施例1的方法能以较好的收率得到羧酸中间体II，三条合成路线制备羧酸中间体的纯化情况汇总对比见下表3。
2、对比不同路线制备得到的化合物LE14
将按照实施例1、实施例2合成得到的化合物LE14与路线1、路线2、路线3、路线4和路线5得到的化合物LE14通过高效液相进行纯度对比，所得结果见下表4。
从表4的数据可以看出按照本发明实施例1的方法制备化合物LE14，由于更换了保护基，脱保护条件更温和，产生的羧酸中间体能够稳定存在，一方面能降低最大单杂的 含量，另一方面可将化合物LE14产品的纯度提升至99.5％以上，优于路线1至路线5的方法(最大单杂含量高于0.3％，化合物LE14产品纯度低于98.7％)；实施例2中步骤3中的式II化合物不做纯化直接用于后续反应，拿到的化合物LE14产物中最大单杂含量高于1％，产物纯度只有95.46％，说明步骤3中式II化合物粗品的纯化与否对于LE14产物的纯度和最大单杂的含量有很大影响。
本发明中，实施例1中步骤2用三甲基硅乙基对羧酸进行保护得到的化合物IVb粗品中化合物IVb能稳定存在，化合物IVb粗品能通过常规柱层析的方法加以纯化，纯化过程中化合物IVb稳定，几乎不会损失，拿到了纯化的式IVb化合物，从而避免了将杂质带入后续反应步骤中。
本发明中，羧酸中间体化合物II能耐受步骤3中方法1脱除保护基的条件，并且在按照步骤3中方法1脱去保护基得到的化合物II粗品以及常规的柱层析条件下也能稳定存在，化合物II粗品通过常规柱层析的方法加以纯化得到纯度较高、杂质含量低的羧酸中间体II，避免了将杂质带入后续反应步骤中，从而使得化合物LE14终产品纯度提高的同时最大单杂减少，拿到了纯度高于99.5％、最大单杂含量低于0.1％的化合物LE14终产品。
所用液相条件：A相为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(pH＝5.0)，B相为10％甲醇乙腈溶液，检测波长为254nm，仪器为安捷伦187260，色谱柱为Agilent AdvanceBio Peptide Map，3.5μm,2.1×250mm，流速为1.0mL/min。梯度设置如下表2。
表2.流动相梯度设置
表3.四种不同工艺路线制得的羧酸中间体(1-4，2-2a，II)比较

表4.不同工艺路线终产物LE14纯度对比数据
现有技术中，合成路线3、路线4和路线5都使用了与本发明相同的中间体(化合物5与化合物VII结构相同)，可以从相同的中间体出发制备得到终产物LE14，三条路线制备得到终产物LE14，其路线总收率及终产物的纯度归纳见表5。
表5.不同工艺路线终产物纯度和以同样的化合物5(VII)作为起始物料的总收率对比
在现有技术CN115215921A和CN115385926A的合成路线中，以依喜替康为起始物，合成终产物1的路线总收率均低于本发明，见表6。
表6.不同工艺路线以依喜替康投料计总收率对比
从表5、表6可以看出，路线3、路线4和路线5制备得到的产品纯度远不及本发明；路线3使用了价格比依喜替康更加昂贵的DXd作为payload来源，虽然节省了反应步骤，但是路线3的收率却远低于本发明而且Dxd的利用率不高，而在路线4、路线5和本发明的合成路线中，依喜替康是各个工艺路线中成本占比最大的一个关键物料，也是主要的成本控制点，路线4和5均对依喜替康进行了衍生化，一方面工艺反应步骤较多，生产操作繁琐，另一方面在制备过程中依喜替康损失也较多，以依喜替康为起始原料计算路线总收率，结果显示均远低于本发明路线，因此在路线4和路线5中，昂贵物料依喜替康的利用率较低从而使得生产成本较高，不适合进行大规模工业化生产。
本发明的合成路线不仅能提供高纯度的LE14化合物，而且通过提高依喜替康的利用率，从而大幅地降低了生产成本，更适合进行大规模的工业化生产。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改。因此，本发明的保护范围由所附权利要求书限定。

Claims (10)

  1. 一种式I化合物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：将式II化合物与式III化合物或其甲磺酸盐在缩合剂、碱以及溶剂存在下进行酰胺缩合反应得到式I化合物；
  2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述的式I化合物制备方法中，所述的酰胺缩合反应还包括如下具体步骤：所述的式II化合物溶于溶剂，加入所述的缩合剂，立刻或反应一段时间后加入所述的式III化合物或其甲磺酸盐和所述的碱；
    (2)所述的式I化合物制备方法中，所述的缩合反应全程避光处理；
    (3)所述的式I化合物制备方法中，所述的式III化合物与所述的式II化合物的摩尔比值为0.8-1.5，优选为0.9-1.2，进一步优选为0.9-1.0；
    (4)所述的式I化合物的制备方法中，所述的缩合剂为氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉、氰代磷酸二乙酯、叠氮磷酸二苯酯、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯、2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯和2-(5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸季铵盐中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选地，所述的缩合剂为氯化4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉；
    (5)所述的式I化合物的制备方法中，所述的缩合剂与所述的式II化合物的摩尔比值为1-3，优选为1-1.5；
    (6)所述的式I化合物的制备方法中，所述的碱为有机碱、无机碱或其混合，优选为有机碱；其中，所述的有机碱优选为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺和吡啶中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为N,N-二异丙基乙胺；所述的无机碱优选为碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐和碱金属磷酸盐中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢氧化钾中的一种或其中任意两种或两种以上的混合；
    (7)所述的式I化合物的制备方法中，所述的碱与所述的式II化合物的摩尔比值为1-10，优选为1-6，进一步优选为1-3，最优选为1.5；
    (8)所述的式I化合物的制备方法中，所述的溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选为N，N-二甲基甲酰胺；
    (9)所述的式I化合物的制备方法中，所述的缩合反应的温度为20℃-50℃，优选为20℃-30℃；
    (10)所述的式I化合物的制备方法中，所述缩合反应在惰性气体保护下进行，例如在氮气或氦气环境中进行；
    (11)所述的式I化合物的制备方法中，所述缩合反应的反应完成后，还进一步包括如下后处理步骤：将有机相浓缩后得到式I化合物粗品；优选地，将式I化合物粗品进行硅胶柱层析纯化得到式I化合物产品，更优选地，所述的硅胶柱层析的洗脱剂为氯仿和甲醇的混合溶剂，所述的氯仿和甲醇的体积比为(100-10):1，进一步优选为10:1。
  3. 如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的式I化合物的制备方法还包括式II化合物的制备方法，其包括如下步骤：在溶剂中，将式IV化合物在脱保护剂的存在下进行脱保护反应得到式II化合物；
    其中，R为-Si(C1～C6)3取代的C1～C6烷基；
    优选地，所述的式I化合物的制备方法还包括式IV化合物的制备方法，其包括如下步骤：将式VI化合物与试剂V在溶剂中、在碱的存在下进行醚化反应得到式Ⅳ化合物；
    其中，R为-Si(C1～C6)3取代的C1～C6烷基；
    进一步优选地，所述的式I化合物的制备方法还包括式VI化合物的制备方法，其包括如下步骤：将式Ⅶ化合物与多聚甲醛和三甲基氯硅烷在溶剂中进行取代反应得到式Ⅵ化合物；
  4. 如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述的式II化合物的制备方法中，所述的脱保护反应还包括如下具体步骤：所述的式Ⅳ化合物溶于溶剂，加入所述的脱保护剂后加热开启反应、或者所述的脱保护剂溶于溶剂，加入所述的式Ⅳ化合物后加热开启反应；
    (2)所述的式II化合物的制备方法中，所述的-Si(C1～C6)3取代的C1～C6烷基为三甲基硅基乙基、叔丁基二甲基硅基乙基；优选地，所述的-Si(C1～C6)3取代的C1～C6烷基为三甲基硅基乙基；
    (3)所述的式II化合物的制备方法中，所述的脱保护剂为氟试剂，所述的氟试剂为四丁基氟化铵、四甲基氟化铵、四丁基氟化铵/醋酸、吡啶氟化氢络合物、叔丁基氟化铵、叔丁基氟化铵/醋酸、四乙基氟化铵，或者市售的四甲基氟化铵/四氢呋喃溶液、四乙基氟化铵/四氢呋喃溶液、四丁基氟化铵/四氢呋喃溶液，或者四氟化硅、氟化钾、氟化钠、氟化锂和氟化铯中的一种或多种，优选为1M四丁基氟化铵/四氢呋喃溶液或者氟化钾；
    (4)所述的式II化合物的制备方法中，所述的脱保护剂与所述的式Ⅳ化合物的摩尔比值为1-5，优选为1-3，进一步优选为1.1-2.0，最优选为1.5；
    (5)所述的式II化合物的制备方法中，所述的溶剂为纯化水、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选为N,N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃，最优选为N,N-二甲基甲酰胺；
    (6)所述的式II化合物的制备方法中，所述的脱保护反应的温度为20℃-80℃，优选为30℃-70℃，进一步优选为40℃-60℃；
    (7)所述的式II化合物的制备方法中，所述脱保护反应在惰性气体保护下进行，例如在氮气或氦气环境中进行；
    (8)所述的式II化合物的制备方法中，反应完成后，进一步包括后处理步骤：将反应液浓缩得到式II化合物粗品；优选地，通过将式II化合物粗品进行硅胶柱层析纯化得到式II化合物产品，更优选地，所述的硅胶柱层析所用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，所述的二氯甲烷和甲醇的体积比为(100-1):1，优选为(10-1):1；
    (9)所述的式Ⅳ化合物的制备方法中，所述的醚化反应还包括如下具体步骤：所述的式Ⅵ化合物溶于溶剂，加入所述的碱后，立刻或反应一段时间后加入式所述的试剂Ⅴ；
    (10)所述的式Ⅳ化合物的制备方法中，所述的试剂V与所述的式Ⅵ化合物的摩尔比值为1-5，优选为1-3，进一步优选为1.1-1.6，最优选为1.5；
    (11)所述的式IV化合物的制备方法中，所述的碱为有机碱、无机碱或其混合，优选为有机碱；其中，所述的有机碱优选为叔丁醇钾、三乙胺、4-二甲氨基吡啶、吡啶和潘必啶中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为潘必啶；所述的无机碱优选为碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐和碱金属磷酸盐中的一种或其中任意两种或两种以上的混合；
    (12)所述的式IV化合物的制备方法中，所述的碱与所述的式Ⅵ化合物的摩尔比值为1-5，优选为1.2-4，进一步优选为1.5-3；
    (13)所述的式IV化合物的制备方法中，所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选为四氢呋 喃或1,4-二氧六环，进一步优选为四氢呋喃；
    (14)所述的式IV化合物的制备方法中，所述的醚化反应的温度为0℃-80℃，优选为40℃-70℃，最优选60℃；
    (15)所述的式IV化合物的制备方法中，所述的醚化反应在惰性气体保护下进行，例如在氮气或氦气环境中进行；
    (16)所述的式IV化合物的制备方法中，反应完成后，进一步包括后处理步骤：将反应液萃取，将有机相浓缩后得到式IV化合物粗品，或者直接将反应液浓缩得到IV化合物粗品；优选地，通过将式IV化合物粗品进行硅胶柱层析纯化得到IV化合物产品；更优选地，所述的硅胶柱层析所用的洗脱剂为正庚烷和乙酸乙酯的混合溶液，所述的正庚烷和乙酸乙酯的体积比为(20-1):1，优选为(10-1):1；
    (17)所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的多聚甲醛与所述的式Ⅶ化合物的摩尔比值为1-10，优选为1-5，进一步优选为1.3-3.0，最优选为1.3；
    (18)所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的三甲基氯硅烷与所述的式Ⅶ化合物的摩尔比值为1-5，优选为2-4，进一步优选为2-3，最优选为2.5；
    (19)所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃和1,4-二氧六环中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，优选为四氢呋喃或1,4-二氧六环，进一步优选为1,4-二氧六环；
    (20)所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的取代反应的温度为-10℃-50℃，优选为15℃-35℃，进一步优选为18℃-25℃；
    (21)所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，所述的取代反应在惰性气体保护下进行，例如在氮气或氦气环境中进行；
    (22)所述的式Ⅵ化合物的制备方法中，反应完成后，进一步包括后处理步骤：将反应液进行固液分离或者不进行固液分离，将有机相浓缩后得到式Ⅵ化合物；优选地，直接将浓缩后得到的式Ⅵ化合物进行后续反应。
  5. 一种式VIII化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将式Ⅰ化合物和还原剂在溶剂中和酸缓冲液存在下进行还原反应得到式Ⅷ化合物；
    其中，所述的式I化合物为如权利要求1-4中任一项所述的制备方法制备得到。
  6. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的还原剂为三苯基膦、三叔丁基膦或三甲基膦，或三苯基膦/四氢呋喃溶液、三叔丁基膦/四氢呋喃溶液或三甲基膦/四氢呋喃溶液，优选为三甲基膦/四氢呋喃溶液，进一步优选为1M三甲基膦/四氢呋喃溶液；
    (2)所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的酸缓冲液为醋酸钠缓冲液、甲酸钠缓冲液，优选为醋酸钠缓冲液；所述的酸缓冲液的pH优选为4.0-6.0，进一步优选为4.5-5.5，更进一步优选为5.0；
    (3)所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的还原剂与所述的式I化合物的摩尔比值为1.0-3.0，优选为1.2-1.8，进一步优选为1.5；
    (4)所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的酸缓冲液与所述的式I化合物的体积质量比为2-10mL/g，优选为5-10mL/g，进一步优选为7-8mL/g，最优选7.7mL/g；
    (5)所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的溶剂为醚类溶剂，优选为四氢呋喃、乙醚、1,4-二氧六环、苯甲醚、甲基叔丁基醚中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为四氢呋喃；
    (6)所述的式VIII化合物的制备方法中，所述的还原反应的温度为0℃-20℃，优选为0℃-10℃；
    (7)所述的式VIII化合物的制备方法中，反应完成后，进一步包括后处理步骤：将反应液萃取，有机相浓缩后得到式VIII化合物粗品，或者直接将反应液浓缩得到式VIII化合物粗品；优选地，将式VIII化合物粗品进行硅胶柱层析纯化得到式VIII化合物产品； 更优选地，所述的硅胶柱层析所用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，所述的二氯甲烷和甲醇的体积比为(100-1):1，优选为(10-1):1。
  7. 一种化合物LE14的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将式VIII化合物和6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯在溶剂中进行偶联反应得到化合物LE14；
    其中，所述的式VIII化合物为如权利要求5或6所述的制备方法制备得到。
  8. 如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法满足下述条件中的一种或多种：
    (1)所述的化合物LE14的制备方法中，所述的6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯与式VIII化合物的摩尔比值为1-5，优选为1-3，进一步优选为1.2-2.0；
    (2)所述的化合物LE14的制备方法中，所述的溶剂为酰胺类溶剂、氯代烷烃类溶剂、醚类溶剂和腈类溶剂中的一种或其中任意两种或两种以上的混合；优选为氯代烷烃类溶剂，其中，所述的氯代烷烃类溶剂优选为二氯甲烷，1,2-二氯乙烷和氯仿中的一种或其中任意两种或两种以上的混合，进一步优选为二氯甲烷；
    (3)所述的化合物LE14的制备方法中，所述的偶联反应温度为0℃-45℃，优选为25℃-40℃，进一步优选为30℃-35℃；
    (4)所述的化合物LE14的制备方法中，反应完成后，进一步包括后处理步骤：将反应液浓缩后得到化合物LE14粗品；优选地，通过将化合物LE14粗品进行硅胶柱层析纯化得到化合物LE14产品；更优选地，所述的硅胶柱层析所用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，所述的二氯甲烷和甲醇的体积比为(100-1):1，优选为(10-1):1。
  9. 一种式II化合物；
  10. 一种式II化合物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：在溶剂中，将式IV化合物在脱保护剂的存在下进行脱保护反应得到式II化合物；反应条件如权利要求4所述；
    其中，R的定义如权利要求3或4所述。
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