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Verfahren zur Herstellung neuer heterocyclischer Verbindungen
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung neuer heterocyclischer Verbindungen der allgemeinen Formel
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worin R, Wasserstoff oder eine Alkylgruppe und R, eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine Hydroxyalkylgruppe mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Cycloalkylgruppe mit 4 bis 6 Kohlenstoffatomen oder einen in Stellung 1 durch eine Alkylgruppe substituierten Piperidyl-4-Rest bedeuten oder R. und R, zusammen mit dem Stickstoffatom einen gegebenenfalls eine Hydroxygruppe tragenden Piperidino-Rest bilden, und ihrer Säureadditionssalze.
Erfindungsgemäss gelangt man zu den Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und ihren Säureadditionssalzen, indem man auf an sich bekannte Weise Verbindungen der allgemeinen Formel
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worin R. und P, obige Bedeutung haben, in flüssigem Ammoniak mit Methyljodid in Gegenwart eines basischen Kondensationsmittels umsetzt und die so erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) gegebenenfalls auf an sich bekannte Weise durch Reaktion mit organischen oder anorganischen Säuren in ihre Säureadditionssalze überführt.
Als Kondensationsmittel können z. B. Alkalimetallamide, wie Natriumamid oder Alkalimetallalkoholate, wie Natrium-tert. butylat, verwendet werden. Eine bevorzugte Ausführungsform dieses erfin- dungsgemässenverfahrens besteht z. B. darin, dass man eine Lösung von Natrium in flüssigem Ammoniak mit Ferrinitrat oxydiert oder zu einer Lösung von l Mol Natrium in flüssigem Ammoniak 1MoI tert. Butanol unter Kühlung zutropft. Zu der so erhaltenen Suspension von Natriumamid bzw.
Natrium-tert. butylat in flüssigem Ammoniak setzt man zunächst unter gutem Rühren und fortdauernder Kühlung eine
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gemeinen Formel (II) verwendet man für diese Reaktion 1 bis 4Mol, vorzugsweise etwa 3 Mol Natriumamid bzw. Natrium-tert. butylat und 1, 1 bis 4Mol Methyljodid. Anschliessend lässt man den Ammoniak verdampfen und isoliert die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel (I) aus dem Rückstand auf an an sich bekannte Weise, z. B. durch Umkristallisation und/oder Chromatographie.
Da sich sowohl die Verbindungen der allgemeinen Formel (II) als auch ihre 1-Methyl-Derivate leicht in die entsprechenden Lysergsäureverbindungenumlagern, ist das rohe Verfahrensprodukt gewöhnlich durch 5 bis 10% der entsprechenden 1-Methyl-Lysergsäureamide verunreinigt. Falls es gewünscht wird, können diese Unreinheiten durch Adsorptionschromatographie, vorzugsweise an Silicagel, weitgehend entfernt werden.
Die so hergestellten Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können anschliessend auf an sich bekannte Weise in ihre Säureadditionssalze übergeführt werden.
Die als Ausgangsverbindungen verwendeten Säureamide der allgemeinen Formel (II) können durch Reaktion von 6-Methyl-A'-ergolen-8-carbonsäurechlorid-hydrochlorid mit einer Verbindung der allgemeinen Formel
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hergestellt werden.
Die verfahrensgemäss hergestellten Verbindungen der allgemeinen Formel (I) sind bei Raumtemperatur kristalline oder amorphe Verbindungen, die mit anorganischen oder organischen Säuren beständige, bei Raumtemperatur kristallisierte Salze bilden. Zur Salzbildung können unter anderem folgende Säuren verwendet werden :
Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure, Schwefelsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Apfelsäure, Weinsäure und Essigsäure.
Die erfindungsgemäss hergestellten Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und ihre Salze zeichnen sich durch Serotoninantagonismus, oxytocische Wirkung, Blutdrucksenkung und zentrale Stimulation aus. Sie finden Verwendung bei der Therapie der Migräne, bei rheumatischen und psychischen
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Störungen sowie bei Kreislaufstörungen und ferner bei der Geburtshilfe als Oxytocika.
Die täglich zu verabreichende Dosis soll 1 bis 5 mg betragen.
Die neuen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können alsArzneimittel allein oder in entsprechenden Arzneiformen für orale, enterale oder parenterale Verabreichung verwendet werden. Zwecks Herstellung geeigneter Arzneiformen werden diese mit anorganischen oder organischen, pharmakologisch indifferenten Hilfsstoffen verarbeitet.
Als Hilfsstoffe werden verwendet z. B. für Tabletten und Dragées : Milchzucker, Stärke, Talk, Stearinsäure usw., für Sirupe : Rohrzucker-, Invertzucker-, Glucoselösungen u. a., für Injektionspräparate ; Wasser, Alkohole, Glycerin, pflanzliche Öle u. dgl., für Suppositorien : natürliche oder gehärtete Öle, Wachse u. a. m.
Zudem können die Zubereitungen geeignete Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netzmittel, Lösungsvermittler, süss-und Farbstoffe, Aromantien usw. enthalten.
In den nachfolgenden Beispielen, die die Ausführung des Verfahrens erläutern, den Umfang der Erfindung aber in keiner Weise einschränken sollen, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden und sind korrigiert.
Beispiel 1 : 1,6-Dimethyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäurediäthylamid
Eine Lösung von 150 mg Natrium in 150 ml flüssigem Ammoniak wird durch Zugabe von 25 mg Ferrinitrat entfärbt, 830 mg 6-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäurediäthylamid zugefügt und die praktisch klare Lösung nach 5 min mit 1, 25 g Methyljodid versetzt. Nach weiteren 5 min verdampft man am Vakuum unter Feuchtigkeitsausschluss den Ammoniak, schüttelt den Trockenrückstand zwischen Chloroform und Wasser aus, trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat, verdampft sie zur Trockne und chromatographiert den Rückstand an einer Säule von 30 g Silicagel, wobei die im Titel genannte Verbindung mit Chloroform + 21o Alkohol ins Filtrat gewaschen wird :
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mes NRRL 3080 der Species Claviceps paspali Stevens et Hall hergestellt werden.
Die Isolierung und Vermehrung dieses neuen Stammes kann wie folgt durchgeführt werden.
Aus dem Inneren eines Sclerotiums wird ein kleines Gewebestück steril entnommen und auf Bierwürzeagar übertragen. [ Zusammensetzung : 250 ml ungehopfte helle Bierwürze (Trockensubstanz 170/0), 18 g Agar-Agar, dest. Wasser ad 1 l (pH 5, 2) ]. Es entwickelt sich eine kreisrunde Kolonie, die nach 14 Tagen bei 240C einen Durchmesser von 15 mm erreicht. Sie besteht aus einer dem Agar aufliegenden, zirka 1 mm dicken Haut von pseudosc1erotialer Struktur und darüber einem Polster von weissem Luftmycel. Ein brauner Farbstoff diffundiert in den Agar hinein. Es werden keine Konidien gebildet.
Diese Kolonie wird mit einem Spatel in Stücke zerteilt und in ein Reagenzglas mit 12 ems des folgenden Agarnährbodens übertragen :
Bierwürze 500 ml
C ornsteep- Solids 60 g
Milchsäure 1 ml
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Um jedes Impfstück bildet sich eine kleine Kolonie von zunächst weissem, später rotbraunem Mycel. Nach 10 Tagen beginnen sich an den Hyphenspitzen Konidien abzuschnüren. Nach 20 Tagen sind genügend Konidien vorhanden, um damit eine wässerige Suspension herzustellen, mit welcher 20 Schrägagarröhrchen (gleicher Agar wie oben) beimpft werden können. Diese Kulturen werden bei 240C bebrütet. Die Konidien keimen nach 24 bis 36 h. Nach 6 Tagen ist die Agaroberfläche von einem feinen, weissen Mycel gleichmässig überzogen, nach 10 Tagen ist eine braungraue, feingefurchte Myceldecke gebildet, welche dem Agar eng aufliegt, und nur kurze Lufthyphen hat.
An diesen werden Konidien abgeschnürt. Nach 12 Tagen entstehen an mehreren Stellen im Mycel Zentren, an welchen kleine Tröpfchen einer rotbraunen Flüssigkeit ausgeschieden werden. Die Tröpfchen erreichen einen Durchmesser von 1 bis 3 mm und werden bald von sehr zahlreichen Konidien milchig-trüb. Nach 16 bis 18 Tagen ist
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die Konidienbildung praktisch abgeschlossen. Eine Schrägagarkultur in einem Reagenzglas von 2 cm Durchmesser mit 12 ml Agarnährboden enthält zirka 109 Konidien.
Für die Züchtung in Submerskultur wird zunächst eine Vorkultur wie folgt bereitet : Als Medium wird eine tige wässerige Malzextraklösung mit PH 5 verwendet. 11 dieser Lösung wird in einem 21-Erlenmeyerkolben 20 min bei 110OC sterilisiert, hernach mit 6, 10 Konidien von einer 15 Tage altenAgarkultur beimpft und 3 Tage lang auf einer rotierenden Schüttelmaschine bei 24 C inkubiert. Es entsteht eine dichte Kultur aus feinen Mycelflocken. Die Flocken bestehen aus einem lokkeren Knäuel von Hyphen und haben einen Durchmesser von 2 bis 4 mm. Es sind keine Alkaloide nachweisbar.
Zur Herstellung grösserer Mengen Vorkultur werden Glasfermenter, welche je 10 1 desselben Mediums enthalten, mit je 6, 109 Konidien beimpft und 3 Tage bei 230C unter Belüftung mit 6 1 Luft/min
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Hauptkultur erwies sich die folgende Nährlösung, die in 11 destilliertem Wasser
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<tb>
<tb> Sorbit <SEP> 50 <SEP> g
<tb> Bernsteinsäure <SEP> 36 <SEP> g
<tb> KH2 <SEP> PO4 <SEP> 2 <SEP> g
<tb> MgSO <SEP> 0, <SEP> 3 <SEP> g
<tb> FeS0 <SEP> 7 <SEP> H20 <SEP> 1 <SEP> mg <SEP>
<tb> ZnSO. <SEP> 7 <SEP> H20 <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
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in 500 ml-Erlenmeyerkolben auf einer reziprok schüttelndenMaschine bei 230C inkubiert. Andere Kulturen werden in analoger Weise in einem 170 INahrmedium enthaltendenFermenter aus rostfreiem Stahl gezüchtet.
Dabei wird mit 170 1 Luft/min belüftet und mit anfänglich 70, später 180 U. p. M gerührt. Zur Schaumbekämpfung wird eine Siliconemulsion verwendet.
Auf diese Weise entstehen Kulturen aus zahlreichen, gleichartigen Mycelpartikeln. Diese haben einen Durchmesser von zirka 5 mm und besitzen einen kugeligen, kompakten Kern von zirka 1 mm Durchmesser aus pseudoparenchymatischem Gewebe. Dieser Kern trägt sternartig angeordnete, zirka 2 mm lange Fortsätze aus parallel gelagerten Hyphen. Am Ende der zirka 10tägigen Kulturdauer ist das Mycel dunkelbraun, und das Filtrat intensiv rotbraun gefärbt. Der PH-Wert verändert sich nur unwesentlich.
Das auf diese Weise erhaltene Kulturfiltrat hat einen kolorimetrisch bestimmten Gesamtalkaloidgehalt von 620mg/l, bezogen auf ein Molekulargewicht von 300. Die papierchromatographisch ermittelte Zusammensetzung des Alkaloidgemisches ist folgendermassen : 6-Methyl-A'-ergolen-8-carbonsäure und
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<tb>
<tb> geringe <SEP> Mengen <SEP> Lysergsäure <SEP> und <SEP> Isolysergsäure <SEP> 86, <SEP> Slo
<tb> Lysergsäureamid <SEP> 3, <SEP> woo
<tb> Isolysergsäureamid <SEP> 3, <SEP> 9%
<tb> Ergobasin <SEP> 1, <SEP> zo <SEP>
<tb> Ergobasinin <SEP> 0, <SEP> fP/o <SEP>
<tb> Clavin-Alkaloide <SEP> 4,
<SEP> 21o <SEP>
<tb>
51 Kulturfiltrat des Stammes NRRL 3080 von Claviceps paspali Stevens et Hall mit einem kolorimetrisch bestimmten Gesamtgehalt an Ergolin-Derivaten von zirka 500 mg/l (bezogen auf ein Mol. - Gew. von 300) und einem pH-Wert von 5, 6 werden durch eine mit Wasser eingeschlämmte Säule von 500 g Amberlite IR 120 (H+-Form ; Durchmesser der Säule 2, 8 cm, Höhe 115 cm) filtriert. Die Durch-
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konz. ) auf den Gehalt an Ergolin-Derivaten geprüft.
Die ersten vier Fraktionen (insgesamt 2 l) dampft man bei 13 mm Torr und 300 Badtemperatur auf 500 ml ein, stellt die Lösung mit Eisessig auf einen p-Wert von 5, 5, filtriert vom ausgefallenen Harz (Keller-Farbreaktion negativ) ab, engt das Filtrat im Vakuum auf zirka 25 ml ein, fügt 20 ml Methanol zu, kocht die Lösung kurz auf und lässt bei 50 einige Stunden stehen. Die auskristallisierte Säure wird nach dem Abfiltrieren mit Wasser und Methanol gewaschen und bei 800 2 h im Vakuum getrocknet.
Die folgenden sieben Fraktionen des AmmoniakDurchlaufes liefern nach der gleichen Aufarbeitung eine weitere Menge kristallisierter 6-Methyl-A8'9 -
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-ergonen ergolen-8-carbonsäure,
Zur Reinigung der rohen Säure werden die kristallisierten Produkte vereinigt, in Methanol suspendiert, die Substanz unter kurzem Erwärmen auf dem Wasserbad mit der berechneten Menge verd.
Natronlauge in Lösung gebracht, die heisse Lösung filtriert und mit Eisessig auf pH 5, 5 gestellt, die kristallisierte Säure nach einigen Stunden abfiltriert, mit Wasser und Methanol gewaschen und im Vakuum bei
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Farbreaktionen nach Keller, van Urk und Ehrlich wie bei Lysergsäure ; Dünnschichtchromatogramm auf Kieselgel mit Alkohol/25% Ammoniak (9 : 1) als Fliessmittel : Rf-Wert = 0, 4 bis 0, 45. Der Fleck
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zu und nach erneutem Kühlen auf Oc) 12 ml abs. Chloroform. Nun trägt man, wieder bei 00. 3, 9 g 6-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäure ein, spült mit 10 ml abs. Chloroform nach und tropft nun bei 0, 50 eine Lösung von 3, 6 g Phosphorpentachlorid in 37 ml Phosphortrichlorid ein.
Das Gemisch wird noch 2h bei 0 bis 50 gerührt, dann mit 250 ml abs. Petroläther versetzt, das Säurechlorid-hydrochlorid rasch abfiltriert, mit Petroläther gewaschen und im Vakuum bei 500 getrocknet.
1, 8 g des so erhaltenen rohen 6-Methyl-A''-ergolen-8-carbonsäurechlorid-hydrochlorids werden in 100ml abs. Methylenchlorid suspendiert und bei einer Innentemperatur von 2 rasch 5 ml Diäthylamin zugesetzt, wobei die Temperatur auf zirka 100 steigt. Man rührt noch 30 min ohne Kühlung, schüttelt dann unter Eiskühlung zwischen Sodalösung und Chloroform aus, verdampft die über Pottasche getrocknete organische Phase und chromatographiert das durch Verdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rohprodukt an einer Säule aus Kieselgel.
Das 6-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäurediäthylamid kristallisiert aus Äther in derben Prismen
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Eine Lösung von 460 mg Natrium in 250 ml flüssigem Ammoniak wird durch Zugabe von 65 mg Ferrinitrat entfärbt, 2,7g 6-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäure-(+)-butanolamid-(2') und nach 5 min 4 g Methyljodid zugefügt, nach weiteren 5 min der Ammoniak verdampft und der Trockenrückstand zwischen Wasser und Chloroform ausgeschüttelt. Das durch Verdampfen der über Magnesiumsulfat getrockneten Chloroformlösung gewonnene Rohprodukt chromatographiert man an 165 g Silicagel, wobei
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= -1850-carbonsäure-(+)-hexanolamid-(2'), 500 mg Natriumamid und 2, 2 g Methyljodid in flüssigem Ammoniak hergestellt.
Bimaleinat : Nadeln aus Methanol, Smp. 162 bis 1630. [α]D20=-133 C(c=0,5 in Wasser).
Das als Ausgangsverbindung verwendete 6-Methyl-#8,9, ergolen-8-carbonsäure-(+)-hexanolamid- - (2') kann analog zu Beispiel 1 aus 6-Methyl-#,-ergolen-8-carbonsäurechlorid-hydrochlorid und (+)-Hexanolamin- (2) hergestellt werden. Nädelchen aus Methanol/Äther, Smp. unscharf, die Verbin-
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=-205 -carbonsäurepropanolamid-(3'), 410 mg Natriumamid und 2, 1 g Methyljodid in flüssigem Ammoniak hergestellt.
Bimaleinat : Prismen aus Methanol/Äther, Smp. 157 bis 158 , [a] =-140 (c = 0, 7 in Wasser).
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Das als Ausgangsverbindung verwendete 6-Mehtyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäurepropanolamid-(3') kann analog zu Beispiel 1 aus 5-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäurechlorid-hydrochlorid und Propanol- amin- (3) hergestellt werden.
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Die im Titel genannte Verbindung wird analog zu Beispiel 1 aus 5, 3 g 6-Methyl-A8, 9-ergolen-8- -carbonsäurecyclopentylamid, 1,85 g Natriumamid und 8 g Methyljodid in flüssigem Ammoniak hergestellt.
Bimaleinat : PrismenausMethanol, Smp.197 bis 198 [α]D20=-150 (c=0,5 in Äthanol/W.asser(1:1).
Das als Ausgangsverbindung verwendete 6-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäurecyclopentylamid kann analog zu Beispiel 1 aus 6-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäurechlorid-hydrochlorid und Cyclopen- tylamin hergestellt werden. Kristallösungsmittelhaltige Prismen aus Methanol vom Smp. 137 bis 1380.
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g =-199 Das als Ausgangsverbindung verwendete 6-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäure-(1'-methylpiperidyl-4')-amid kann analog zu Beispiel 1 aus 6-Methyl-#8,9-ergolen-8-carbonsäurechlorid-hydrochlorid
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KristallosungsmittelhaltigePrismenvom Smp. 160lydrochlorid und 10 g L-valinol in 300 cm3 Methylenchlorid hergestellt werden.
Das Rohprodukt wird in 1, 8 kg Silicagel chromatographiert, wobei mit Chloroform +10% Alkohol Nebenprodukte und mit Chloroform +20% Alkohol die im Titel genannte Verbindung ins Filtrat gewaschen wird.
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Process for the preparation of new heterocyclic compounds
The invention relates to a process for the preparation of new heterocyclic compounds of the general formula
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where R, hydrogen or an alkyl group and R, an alkyl group with 1 to 4 carbon atoms, a hydroxyalkyl group with 2 to 6 carbon atoms, a cycloalkyl group with 4 to 6 carbon atoms or a piperidyl-4 radical substituted in position 1 by an alkyl group or R . and R, together with the nitrogen atom, form a piperidino radical optionally bearing a hydroxyl group, and their acid addition salts.
According to the invention, the compounds of the general formula (I) and their acid addition salts are obtained by adding compounds of the general formula in a manner known per se
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wherein R. and P, have the above meanings, are reacted with methyl iodide in liquid ammonia in the presence of a basic condensing agent and the compounds of the general formula (I) thus obtained are optionally converted into their acid addition salts in a manner known per se by reaction with organic or inorganic acids.
As a condensing agent, for. B. alkali metal amides, such as sodium amide or alkali metal alcoholates, such as sodium tert. butylate, can be used. A preferred embodiment of this inventive method consists, for. B. in that one oxidizes a solution of sodium in liquid ammonia with ferric nitrate or tert to a solution of 1 mol of sodium in liquid ammonia 1MoI. Butanol is added dropwise with cooling. To the suspension of sodium amide or
Sodium tert. butylate in liquid ammonia is first added with thorough stirring and continuous cooling
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Common formula (II) is used for this reaction 1 to 4 mol, preferably about 3 mol of sodium amide or sodium tert. butylate and 1.1 to 4 mol methyl iodide. The ammonia is then allowed to evaporate and the compound of the general formula (I) obtained is isolated from the residue in a manner known per se, e.g. B. by recrystallization and / or chromatography.
Since both the compounds of the general formula (II) and their 1-methyl derivatives easily rearrange into the corresponding lysergic acid compounds, the crude process product is usually contaminated by 5 to 10% of the corresponding 1-methyl lysergic acid amides. If desired, these impurities can be largely removed by adsorption chromatography, preferably on silica gel.
The compounds of the general formula (I) prepared in this way can then be converted into their acid addition salts in a manner known per se.
The acid amides of the general formula (II) used as starting compounds can be prepared by reacting 6-methyl-A'-ergolen-8-carboxylic acid chloride hydrochloride with a compound of the general formula
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getting produced.
The compounds of the general formula (I) prepared according to the process are crystalline or amorphous compounds which, with inorganic or organic acids, form stable salts which crystallize at room temperature. The following acids, among others, can be used for salt formation:
Hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid, fumaric acid, maleic acid, malic acid, tartaric acid and acetic acid.
The compounds of general formula (I) prepared according to the invention and their salts are distinguished by serotonin antagonism, oxytocic action, lowering of blood pressure and central stimulation. They are used in the therapy of migraines, rheumatic and psychological
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Disorders as well as circulatory disorders and also in obstetrics as oxytocics.
The dose to be administered daily should be 1 to 5 mg.
The new compounds of the general formula (I) can be used as medicaments alone or in corresponding medicament forms for oral, enteral or parenteral administration. In order to produce suitable dosage forms, these are processed with inorganic or organic, pharmacologically indifferent auxiliaries.
As auxiliaries are used z. B. for tablets and dragees: milk sugar, starch, talc, stearic acid etc., for syrups: cane sugar, invert sugar, glucose solutions and the like. a., for injectables; Water, alcohols, glycerine, vegetable oils, etc. Like., For suppositories: natural or hydrogenated oils, waxes and the like. a. m.
In addition, the preparations can contain suitable preservatives, stabilizers, wetting agents, solubilizers, sweeteners, colorants, flavorings, etc.
In the following examples, which illustrate the implementation of the process but are not intended to restrict the scope of the invention in any way, all temperatures are given in degrees Celsius and have been corrected.
Example 1: 1,6-Dimethyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid diethylamide
A solution of 150 mg of sodium in 150 ml of liquid ammonia is decolorized by adding 25 mg of ferric nitrate, 830 mg of 6-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid diethylamide is added and the practically clear solution after 5 min with 1.25 g Methyl iodide added. After a further 5 min, the ammonia is evaporated in vacuo with exclusion of moisture, the dry residue is shaken out between chloroform and water, the organic phase is dried over magnesium sulfate, evaporated to dryness and the residue is chromatographed on a column of 30 g of silica gel, the one mentioned in the title Compound with chloroform + 21o alcohol is washed into the filtrate:
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with NRRL 3080 of the species Claviceps paspali Stevens et Hall.
The isolation and propagation of this new strain can be carried out as follows.
A small piece of tissue is removed in a sterile manner from the inside of a sclerotium and transferred to wort agar. [Composition: 250 ml unhopped light beer wort (dry substance 170/0), 18 g agar-agar, dist. Water ad 1 l (pH 5, 2)]. A circular colony develops, which after 14 days at 240 ° C. reaches a diameter of 15 mm. It consists of an approximately 1 mm thick skin with a pseudosclerotial structure on top of the agar and above it a cushion of white aerial mycelium. A brown dye diffuses into the agar. No conidia are formed.
This colony is cut into pieces with a spatula and transferred to a test tube with 12 ems of the following agar culture medium:
Beer wort 500 ml
C ornsteep Solids 60 g
Lactic acid 1 ml
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A small colony of initially white, later red-brown mycelium forms around each inoculation piece. After 10 days, conidia begin to constrict at the hyphae tips. After 20 days there are enough conidia to produce an aqueous suspension with which 20 slant agar tubes (same agar as above) can be inoculated. These cultures are incubated at 240C. The conidia germinate after 24 to 36 hours. After 6 days the agar surface is evenly covered by a fine, white mycelium, after 10 days a brown-gray, finely furrowed mycelium cover is formed, which lies closely on the agar and has only short aerial hyphae.
Conidia are pinched off at these. After 12 days, centers develop in several places in the mycelium, where small droplets of a red-brown liquid are excreted. The droplets reach a diameter of 1 to 3 mm and soon become milky-cloudy with numerous conidia. After 16 to 18 days it is
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conidia formation practically completed. An agar slant culture in a test tube 2 cm in diameter with 12 ml agar medium contains approximately 109 conidia.
For the cultivation in submerged culture, a preculture is first prepared as follows: An aqueous malt extract solution with pH 5 is used as the medium. 11 of this solution is sterilized in a 21 Erlenmeyer flask for 20 min at 110 ° C, then inoculated with 6, 10 conidia from a 15 day old agar culture and incubated for 3 days on a rotating shaker at 24 ° C. A dense culture of fine mycelium flakes is created. The flakes consist of a loose tangle of hyphae and are 2 to 4 mm in diameter. No alkaloids are detectable.
To produce larger quantities of preculture, glass fermenters, each containing 10 liters of the same medium, are inoculated with 6, 109 conidia and for 3 days at 230C with aeration at 6 liters air / min
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The main culture turned out to be the following nutrient solution, which was dissolved in 11% distilled water
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<tb>
<tb> Sorbitol <SEP> 50 <SEP> g
<tb> succinic acid <SEP> 36 <SEP> g
<tb> KH2 <SEP> PO4 <SEP> 2 <SEP> g
<tb> MgSO <SEP> 0, <SEP> 3 <SEP> g
<tb> FeS0 <SEP> 7 <SEP> H20 <SEP> 1 <SEP> mg <SEP>
<tb> ZnSO. <SEP> 7 <SEP> H20 <SEP> 10 <SEP> mg
<tb>
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Incubated in 500 ml Erlenmeyer flasks on a reciprocating shaking machine at 230C. Other cultures are grown in an analogous manner in a stainless steel fermenter containing 170 I nutrient medium.
It is ventilated with 170 1 air / min and initially 70, later 180 r.p.m. M stirred. A silicone emulsion is used to combat foam.
In this way, cultures are created from numerous, similar mycelium particles. These have a diameter of about 5 mm and have a spherical, compact core of about 1 mm diameter made of pseudoparenchymatic tissue. This nucleus has star-like, approximately 2 mm long appendages made of parallel hyphae. At the end of the approximately 10-day culture period, the mycelium is dark brown and the filtrate is intensely red-brown in color. The pH value changes only insignificantly.
The culture filtrate obtained in this way has a colorimetrically determined total alkaloid content of 620 mg / l, based on a molecular weight of 300. The composition of the alkaloid mixture determined by paper chromatography is as follows: 6-methyl-A'-ergolen-8-carboxylic acid and
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<tb>
<tb> small <SEP> quantities <SEP> lysergic acid <SEP> and <SEP> isolysergic acid <SEP> 86, <SEP> Slo
<tb> Lysergic acid amide <SEP> 3, <SEP> woo
<tb> Isolysergic acid amide <SEP> 3, <SEP> 9%
<tb> Ergobasin <SEP> 1, <SEP> zo <SEP>
<tb> Ergobasinin <SEP> 0, <SEP> fP / o <SEP>
<tb> clavine alkaloids <SEP> 4,
<SEP> 21o <SEP>
<tb>
51 culture filtrate of the strain NRRL 3080 from Claviceps paspali Stevens et Hall with a colorimetrically determined total content of ergoline derivatives of about 500 mg / l (based on a mol. - wt. Of 300) and a pH of 5.6 a column of 500 g of Amberlite IR 120 (H + form; diameter of the column 2.8 cm, height 115 cm), slurried with water. By-
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conc. ) checked for the content of ergoline derivatives.
The first four fractions (a total of 2 l) are evaporated to 500 ml at 13 mm Torr and a bath temperature of 300, the solution is adjusted to a p-value of 5.5 with glacial acetic acid, filtered from the precipitated resin (cellar color reaction negative), the filtrate is concentrated in vacuo to about 25 ml, 20 ml of methanol are added, the solution is briefly boiled and left to stand at 50 for a few hours. The acid which has crystallized out is filtered off, washed with water and methanol and dried in vacuo at 800 for 2 h.
The following seven fractions of the ammonia run-through provide, after the same work-up, a further amount of crystallized 6-methyl-A8'9 -
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-ergonen ergolen-8-carboxylic acid,
To purify the crude acid, the crystallized products are combined, suspended in methanol, the substance is diluted with the calculated amount of dilute heating on a water bath.
Brought sodium hydroxide solution into solution, the hot solution filtered and adjusted to pH 5.5 with glacial acetic acid, the crystallized acid filtered off after a few hours, washed with water and methanol and in vacuo
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Color reactions according to Keller, van Urk and Ehrlich as with lysergic acid; Thin-layer chromatogram on silica gel with alcohol / 25% ammonia (9: 1) as the mobile phase: Rf value = 0.4 to 0.45. The stain
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to and after cooling again to Oc) 12 ml abs. Chloroform. Now you enter, again at 00. 3, 9 g of 6-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid, rinsing with 10 ml abs. Chloroform and then at 0.50 a solution of 3.6 g of phosphorus pentachloride in 37 ml of phosphorus trichloride.
The mixture is stirred for a further 2 hours at 0 to 50, then with 250 ml of abs. Petroleum ether is added, the acid chloride hydrochloride is quickly filtered off, washed with petroleum ether and dried in vacuo at 500.
1.8 g of the crude 6-methyl-A ″ -ergolen-8-carboxylic acid chloride hydrochloride obtained in this way are dissolved in 100 ml of abs. Suspended methylene chloride and 5 ml of diethylamine added rapidly at an internal temperature of 2, the temperature rising to about 100. The mixture is stirred for a further 30 min without cooling, then shaken out between sodium carbonate solution and chloroform while cooling with ice, the organic phase dried over potash is evaporated and the crude product obtained by evaporation of the solvent is chromatographed on a column of silica gel.
The 6-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid diethylamide crystallizes from ether in coarse prisms
EMI5.3
A solution of 460 mg sodium in 250 ml of liquid ammonia is decolorized by adding 65 mg of ferric nitrate, 2.7 g of 6-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid - (+) - butanolamide- (2 ') and after 5 min 4 g of methyl iodide were added, after a further 5 min the ammonia was evaporated and the dry residue was shaken between water and chloroform. The crude product obtained by evaporating the chloroform solution dried over magnesium sulfate is chromatographed on 165 g of silica gel, whereby
EMI5.4
= -1850-carboxylic acid - (+) - hexanolamide- (2 '), 500 mg sodium amide and 2.2 g methyl iodide in liquid ammonia.
Bimaleate: needles from methanol, m.p. 162 to 1630. [α] D20 = -133 C (c = 0.5 in water).
The 6-methyl- # 8,9, ergolen-8-carboxylic acid - (+) - hexanolamide- - (2 ') used as the starting compound can be prepared analogously to Example 1 from 6-methyl - #, - ergolen-8-carboxylic acid chloride hydrochloride and (+) - hexanolamine- (2). Needles made of methanol / ether, melting point blurred, the connection
EMI5.5
= -205 -carboxylic acid propanolamide- (3 '), 410 mg sodium amide and 2.1 g methyl iodide in liquid ammonia.
Bimaleate: prisms made of methanol / ether, m.p. 157 to 158, [a] = -140 (c = 0.7 in water).
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The 6-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid propanolamide (3 ') used as the starting compound can be prepared analogously to Example 1 from 5-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid chloride hydrochloride and propanol amine (3) can be produced.
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The compound mentioned in the title is prepared analogously to Example 1 from 5.3 g of 6-methyl-A8, 9-ergolen-8-carboxylic acid cyclopentylamide, 1.85 g of sodium amide and 8 g of methyl iodide in liquid ammonia.
Bimaleate: prisms made of methanol, m.p. 197 to 198 [α] D20 = -150 (c = 0.5 in ethanol / water (1: 1).
The 6-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid cyclopentylamide used as the starting compound can be prepared analogously to Example 1 from 6-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid chloride hydrochloride and cyclopentylamine. Crystal solvent-containing prisms made of methanol with a melting point of 137 to 1380.
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g = -199 The 6-methyl- # 8,9-ergolen-8-carboxylic acid (1'-methylpiperidyl-4 ') amide used as the starting compound can be prepared from 6-methyl- # 8,9-ergolen analogously to Example 1 -8-carboxylic acid chloride hydrochloride
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Crystal solvent-containing prisms of melting point 160 ldrochloride and 10 g of L-valinol in 300 cm3 of methylene chloride are prepared.
The crude product is chromatographed in 1.8 kg of silica gel, with chloroform + 10% alcohol by-products and the compound named in the title being washed into the filtrate with chloroform + 20% alcohol.
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