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Es ist Absicht, wenn hier und in der folgenden Beschreibung der Ausdruck "Mikroorganismus vom Typ Beggiatoa" und nicht der Ausdruck "Mikroorganismus der Gattung Beggiatoa" verwendet wird. Die Gattung Beggiatoa gehört zur Klasse der "gliding bacteria", welche den Myxobakterien der Familie der Beggiatoaceen zugeordnet werden (s. Bergey 1 s Manual of Determinative
Bacteriology, Eighth Edition, Waverly Press, Baltimore, USA 1974, S. 112 bis 114). Wie man diesem
Werk entnehmen kann, welches auf diesem Gebiet Ansehen geniesst, ist die Klassifizierung der Mikro- organismen dieser Gattung wegen der geringen sicheren verfügbaren Informationen etwas mit Vor- sicht zu geniessen.
Es erscheint deshalb nicht angeraten, sich auf einen so präzisen wissenschaft- lichen Ausdruck wie "Gattung" zu beschränken, wenn man die Unsicherheit der Klassifizierung der fraglichen Mikroorganismen kennt. Der Ausdruck "Mikroorganismen vom Typ Beggiatoa" be- zieht sich also hier auf fadenbildende Bakterien, welche für schwefelhaltige Sole und Wässer charakteristisch sind und deren ungefärbte Fäden - da sie aufeinander gleiten - beweglich und aus
Zellenketten gebildet sind, wie dies beispielsweise bei den Bakterien, die in die Gattung Beggiatoa klassifiziert werden, der Fall ist.
Der Mikroorganismus vom Typ Beggiatoa wird durch Isolation von Baregin gewonnen. Es wurde festgestellt, dass eine solche Isolierung auf eine spezielle Art möglich ist und dass die dabei erhältlichen Stämme kultivierbar sind und eine präzise feststellbare bakteriostatische Aktivität besitzen. Es wurde schliesslich auch festgestellt, dass das Problem ihrer Konservierung in zufriedenstellender Weise gelöst werden kann.
Zur Isolierung eines Stamms kann man so vorgehen, dass man eine Probe von Baregin auf eine gelosehaltiges Nährmedium aufbringt, 5 bis 36 h bei einer Temperatur von 20 bis 500C inkubiert, eine Zone, wo die Fäden eines Mikroorganismus vom Typ Beggiatoa frei von Verunreinigungen sind, herausschneidet, diese Zone auf ein mit dem ersten identischen Gelose enthaltendes Nährmedium aufbringt und die Operationen der Inkubation, des Herausschneidens und Wiedereinsetzens zwei-bis dreimal wiederholt.
Vorzugsweise besteht das für die Isolierung verwendete Gelose enthaltende Nährmedium aus 1 bis 4 g Hefeextrakt und 10 bis 20 g Agar/l Wasser.
Gleichfalls enthält das für die Kultivierung bevorzugte wässerige Nährmedium 1 bis 4 g Hefeextrakt, 0, 1 bis 0, 3 Calciumchlorid und 0, 2 bis 1 g Natrium-oder Ammoniumacetat/1 Wasser. Um die Kultur zu schützen, kann dem Medium beispielsweise Katalase in einer Menge von 5 bis 20 Internationalen Einheiten (IE) je ml zugesetzt werden. Der Mikroorganismus kann bei einer Temperatur von 20 bis 500C während 5 bis 36 h bei einem p-Wert von 6 bis 8 kultiviert werden.
Vorzugsweise erfolgt die Kultivierung bei einer Temperatur von 30 bis 40 C während 8 bis 10 h beim neutralen pH-Wert.
Der Stoff mit bakteriostatischer Aktivität, der durch das erfindungsgemässe Verfahren erhalten worden ist, kann im Rohzustand beispielsweise für Hautmassagen oder als Bestandteil von kosmetischen Produkten für die Haut verwendet werden. Die Biomasse kann auch in trockener Form konserviert werden. Sie wird vorzugsweise wegen ihrer schwachen Natur und ihres geringen Feststoffgehalts durch Lyophilisation getrocknet.
Die folgenden Beispiele, welche der Erläuterung dienen, gestatten ein besseres Verständnis der Natur und der Bedeutung der Erfindung. Der Name"Beggiatoa"wird dabei systematisch verwendet und soll im Sinne des Ausdrucks "Mikroorganismus vom Typ Beggiatoa" verstanden werden.
Beispiel 1 : Isolierung von Stämmen
Eine frische Bareginflocke von den Thermes Nationaux d'Aix-les-Bains wird in die Mitte einer Petri-Schale gebracht, die 20 ml Gelose enthaltendes Medium enthält, das nach folgendem Rezept hergestellt worden ist :
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<tb>
<tb> Hefeextrakt <SEP> (Difco) <SEP> 2 <SEP> g
<tb> Agar <SEP> (Bacto-Difco) <SEP> 15 <SEP> g
<tb> filtriertes <SEP> Thermalwasser <SEP> aus <SEP> Aix <SEP> 100 <SEP> ml
<tb> destilliertes <SEP> Wasser <SEP> 900 <SEP> ml.
<tb>
Die Schale wird dann 30 h lang in einen Wärmeschrank mit SDOC eingebracht. Eine Untersuchung mit einem schwach vergrössernden Mikroskop lässt die Anwesenheit von spiralenförmigen
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Strukturen, die für Beggiatoa charakteristisch sind, erkennen und zeigt eine Beweglichkeit der Mikroorganismen auf Grund deren Gleitfähigkeit. Einige sind sogar mit dem blossen Auge sichtbar. Die mikroskopische Untersuchung zeigt ausserdem Zonen, in denen die Beggiatoa-Fäden frei von Verunreinigungen erscheinen. Eine dieser Zonen wird mit einem sterilen Skalpell herausgeschnitten und auf eine frische Agarplatte der gleichen Zusammensetzung wie die erste gelegt, wobei darauf geachtet wird, dass die die Beggiatoa-Fäden aufweisende Oberfläche gegen die frische Oberfläche der neuen Agarplatte zu liegen kommt.
Nun wird erneut 24 h bei 30 C inkubiert. Das Herausschneiden, Umsetzen und Inkubieren wird noch zweimal wiederholt. Auf diese Weise wird eine reine Beggiatoa-Kultur erhalten.
Beispiel 2 : Konservierung der Stämme
Es werden in der in Beispiel 1 beschriebenen Weise 10 Stämme isoliert. Sie unterscheiden sich voneinander durch den Durchmesser ihrer Fäden, ihrer Schnelligkeit im Gleiten und der Form ihrer Kolonien aus Agar. Sie werden mit Erfolg auf drei verschiedenen Wegen während einer kurzen, einer mittleren oder einer langen Periode konserviert.
2. 1.) Kurze Periode : Die Platte wird im Kühlschrank bei 40C konserviert, wobei die Petri-Schale sorgfältig wasserdicht verschlossen wird. Der Stamm wird alle 10 Tage überführt, da der Agar eine Tendenz zum Eintrocknen zeigt.
2. 2.) Mittlere Periode : Es wird ein halbflüssiges Medium mit der folgenden Zusammensetzung hergestellt :
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<tb>
<tb> Hefeextrakt <SEP> 2 <SEP> g
<tb> CaCl. <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> g
<tb> Natriumacetat <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> g
<tb> Agar <SEP> 2 <SEP> g
<tb> filtriertes <SEP> Thermalwasser <SEP> 1000 <SEP> ml.
<tb>
Nach Sterilisation des Mediums wird von Pilzen stammende Katalase in einer Menge von 10 IE/ml zugegeben. Die Katalaselösung wird vorher durch kalte Filtration durch ein Milipore-Filter mit mikroskopischen Poren von 0, 22 pm sterilisiert.
Ein kleiner Würfel des Beggiatoa enthaltenden Agars wird in ein Reagenzglas eingebracht,
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1 ml/Reagenzglas2. 3.) Lange Periode : Es wird eine 24-h-Kultur in einem gerührten Medium in der in Beispiel 3 beschriebenen Weise hergestellt. Hierauf wird sie zentrifugiert. Die Ausfällung wird mit einer sterilen Ringer-Lösung gewaschen. Dann wird die Ausfällung gefroren und lyophilisiert. Sie wird mehrere Monate im Kühlschrank in einem gut verschlossenen Behälter aufbewahrt. Bei Rehydratation sind die Fadenbruchstücke dazu fähig, sich zu entwickeln.
Beispiel 3 : Kultivierung von Stämmen 3. 1.) Inokulum : Ein kleiner Agarwürfel mit einer Kantenlänge von 5 mm wird aus einer gemäss Beispiel 1 erhaltenen Platte herausgeschnitten. Hierauf wird er in einen 500 ml fassenden Kolben eingebracht, der 100 ml des folgenden Mediums enthält :
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<tb>
<tb> Hefeextrakt <SEP> 4 <SEP> g
<tb> Calciumchlorid <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> g
<tb> Ammoniumacetat <SEP> l <SEP> g
<tb> filtriertes <SEP> Thermalwasser <SEP> 1000 <SEP> ml.
<tb>
Dieses Medium besitzt einen p-Wert von 6, 6. Der Kolben wird auf einen Orbitalschüttler befestigt, der mit 150 Umdr/min bei einem Kreisradius von 1, 25 cm läuft. Der Kolben wird dort 16 h bei 30 C belassen. Dann wird die erhaltene Kultur mit Hilfe eines Mischers vom Typ Sorvall- - Omnimixer 15 bis 30 s unter sterilen Bedingungen homogenisiert. Die erhaltene Kultur stellt das Inokulum dar.
3. 2). Kultivierung : 5 ml des obigen Inokulums werden in einen 500 ml fassenden Kolben eingebracht, der 100 ml des gleichen Mediums enthält, wie es für die Herstellung des Inokulums verwen-
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det worden ist. Der Kolben wird 24 h bei 30 C auf dem Orbitalschüttler inkubiert. Es werden
0, 8 g Trockenmasse von Beggiatoa/1 Kultur erhalten. Durch Wiederholung dieser Operation mit verschiedenen Stämmen und unter Veränderung der Bedingungen innerhalb der geeigneten Grenzen werden Ausbeuten zwischen ungefähr 0, 5 und 2 g trockenem Beggiatoa/1 Kultur erhalten.
3. 3.) Kontrolle des Wachstums : Die klassische Methode der Nephelometrie, welche auf Bakterienkulturen anwendbar ist, ist bei Beggiatoa wegen seines Wachstums in Form von Flocken nicht anwendbar. Es wird deshalb eine an den betreffenden Fall angepasste Methode verwendet. Es werden alle 2 h Kulturproben entnommen und im Mischer vom Typ Sorball-Omnimixer homogenisiert.
Ihre optische Dichte wird bei 600 nm auf einem Spektralphotometer abgelesen. Die homogenisierte Probe bildet nur sehr langsam ein Sediment und gestattet eine brauchbare Ablesung. Auf diese Weise wird ein Anhaltspunkt auf das Wachstum in direkter Abhängigkeit mit der Anzahl der Zellen erhalten.
3. 4) Bestimmung des Trockengewichts : Die klassische Trocknung im Ofen ergibt bei Beggiatoa keine reproduzierbaren Resultate. Der Grund hiefür ist vermutlich der sehr hohe Wassergehalt.
Aus diesem Grunde werden zur Erzielung reproduzierbarer Resultate nicht weniger als 400 ml Kultur durch Lyophilisation getrocknet.
3. 5.) Bestimmung der bakteriostatischen Aktivität : die klassische Methode der Bestimmung der bakteriostatischen Aktivität des Public Health Laboratory Service Committee, welche in British Med. J. 408 [1965] beschrieben ist, ergibt in diesem speziellen Fall keine zufriedenstellenden Resultate auf Grund der Tatsache, dass dieser Test in einem Reagenzglas ausgeführt wird. Beggiatoa ist in der Tat äusserst aerob, weshalb die Sauerstoffkonzentration in einem Reagenzglas unzufriedenstellend ist. Die Methode wird deshalb angepasst, indem in Schüttelkolben gearbeitet wird, um den Sauerstoffübergang zu verstärken.
Es werden 3 Kolben mit einem Fassungsvermögen von 50 ml vorbereitet, die jeweils 18 ml Nährbouillon (Nutrient Broth Difco) enthält. Die Kolben werden in der ersten und in der zweiten Serie jeweils mit 0, 4 ml einer 24-h-Kultur eines pathogenen Stamms inokuliert. Es werden die drei pathogenen Stämme Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Escherichia coli ATCC 11755 und Staphylococcus aureus ATCC 12600 verwendet.
Es werden Proben des bakteriostatischen Produkts hergestellt, indem eine Kultur zentrifugiert wird, die gemäss Beispiel 3, Ziffer 2, jedoch nur in 8 h erhalten worden ist. Die erhaltene Biomasse wird zentrifugiert und wieder in einem Volumen physiologischer Lösung suspendiert, das gleich dem Volumen des bei der Zentrifugierung verbleibenden Überstands ist. Die die Biomasse enthaltende Lösung und der Überstand werden jeweils in Proben von 2 ml unterteilt.
Den Kolben der ersten Reihe werden 2 ml physiologische Lösung, welche die homogenisierte Biomasse enthält, zugesetzt. Den Kolben der zweiten Reihe werden nur 2 ml der physiologischen Lösung zugegeben. Den Kolben der dritten Reihe, welche nicht mit einem Pathogen inokuliert worden ist, werden 2 ml der physiologischen Lösung, welche die homogenisierte Biomasse enthält, zugesetzt.
Die Kolben werden bei 370C auf einem Orbitalschüttler inkubiert. Nach 16 h wird ihre optische Dichte bei 600 nm gemessen. Die optischen Dichtemessungen der Kolben entsprechend den Reihen 1, 2 und 3 liefern entsprechende Parameter A, B und C. Die Differenz A bis C, abgezogen von B und dann dividiert durch B und multipliziert mit 100, ergibt die bakteriostatische Aktivität der Biomasse in % Inhibierung.
Auf die gleiche Weise wird die bakteriostatische Aktivität des überstands bestimmt, indem den Kolben der ersten und der dritten Reihe 2 ml Überstand an Stelle von 2 ml physiologischer Lösung, welche die homogenisierte Biomasse enthält, zugegeben werden.
Die Resultate sind in der folgenden Tabelle zusammengefasst.
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<tb>
<tb>
Pathogen <SEP> Aktivität <SEP> der <SEP> Biomasse <SEP> Aktivität <SEP> des <SEP> Überstands
<tb> (% <SEP> Inhibierung) <SEP> (% <SEP> Inhibierung)
<tb> P. <SEP> aeruginosa <SEP> 70 <SEP> 41
<tb> S. <SEP> aureus <SEP> 100 <SEP> 45
<tb> E. <SEP> coli <SEP> 70 <SEP> 11
<tb>
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Beispiel 4 : Vergleich
Zum Vergleich wird in der in Beispiel 3, Ziffer 5, beschriebenen Weise die bakteriostatische Aktivität von natürlichem Baregin bestimmt. Nach einer 16 h dauernden Inkubation wird eine prozentuale Inhibierung von 100,83 und 96% gegenüber P. aeruginosa, S. aureus und E. coli gefunden.
Mit andern Worten heisst das, die bakteriostatische Aktivität der gemäss der Erfindung hergestellten Biomasse ist nahezu genauso stark wie diejenige von Baregin. Dies stellt ein bemerkenswertes Resultat dar, wenn man bedenkt, dass die vorliegende Biomasse in einer guten Ausbeute im industriellen Massstab hergestellt werden kann, während das Baregin nur langsam in sehr geringen Mengen erhältlich ist. Die Aktivität des gemäss der Erfindung erhaltenen Überstands ist zwar geringer, ist aber trotzdem von Interesse.
PATENTANSPRÜCHE :
1. Verfahren zur Herstellung eines Stoffs mit bakteriostatischer Aktivität, dadurch gekennzeichnet, dass man einen Mikroorganismus vom Typ Beggiatoa durch Isolation aus Baregin gewinnt, in einem Stickstoff und Mineralstoffe enthaltendem wässerigen Nährmedium unter aeroben Bedingungen und unter Rühren kultiviert, die Biomasse gewinnt und gegebenenfalls lyophilisiert.
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It is intended that the phrase "microorganism of the Beggiatoa type" and not the phrase "microorganism of the genus Beggiatoa" be used here and in the following description. The genus Beggiatoa belongs to the class of "gliding bacteria", which are assigned to the myxobacteria of the family of Beggiatoaceae (see Bergey 1 s Manual of Determinative
Bacteriology, Eighth Edition, Waverly Press, Baltimore, USA 1974, pp. 112 to 114). How to do this
As can be seen from the work that enjoys a reputation in this area, the classification of the microorganisms of this genus should be enjoyed with caution due to the limited amount of reliable information available.
It is therefore not advisable to restrict oneself to such a precise scientific expression as "genus" if one knows the uncertainty of the classification of the microorganisms in question. The expression "microorganisms of the Beggiatoa type" here refers to thread-forming bacteria which are characteristic of sulfur-containing brine and water and whose undyed threads - since they slide on top of one another - move and move
Cell chains are formed, as is the case for example with the bacteria which are classified in the genus Beggiatoa.
The Beggiatoa-type microorganism is obtained by isolating baregin. It has been found that such isolation is possible in a special way and that the strains obtainable in this way can be cultivated and have a precisely detectable bacteriostatic activity. Finally, it was found that the problem of their conservation can be solved in a satisfactory manner.
The isolation of a strain can be carried out by placing a sample of baregin on a nutrient medium containing gel, incubating for 5 to 36 hours at a temperature of 20 to 500C, a zone where the threads of a microorganism of the Beggiatoa type are free from impurities, cut out this zone, apply it to a nutrient medium containing the first identical gelose, and repeat the operations of incubation, cutting out and reinserting two to three times.
The nutrient medium containing gelose used for the isolation preferably consists of 1 to 4 g of yeast extract and 10 to 20 g of agar / l of water.
Likewise, the aqueous nutrient medium preferred for the cultivation contains 1 to 4 g of yeast extract, 0.1 to 0.3 calcium chloride and 0.2 to 1 g sodium or ammonium acetate / 1 water. To protect the culture, for example, catalase can be added to the medium in an amount of 5 to 20 international units (IU) per ml. The microorganism can be cultivated at a temperature of 20 to 500 ° C. for 5 to 36 hours at a p-value of 6 to 8.
The cultivation is preferably carried out at a temperature of 30 to 40 C for 8 to 10 h at the neutral pH.
The substance with bacteriostatic activity, which has been obtained by the method according to the invention, can be used in the raw state, for example for skin massages or as a component of cosmetic products for the skin. The biomass can also be preserved in dry form. It is preferably dried by lyophilization because of its weak nature and its low solids content.
The following examples, which are illustrative, provide a better understanding of the nature and meaning of the invention. The name "Beggiatoa" is used systematically and is to be understood in the sense of the expression "microorganism of the type Beggiatoa".
Example 1: Isolation of strains
A fresh baregin flake from the Thermes Nationaux d'Aix-les-Bains is placed in the middle of a Petri dish containing 20 ml of medium containing gelose, which has been prepared according to the following recipe:
EMI2.1
<tb>
<tb> yeast extract <SEP> (Difco) <SEP> 2 <SEP> g
<tb> agar <SEP> (Bacto-Difco) <SEP> 15 <SEP> g
<tb> filtered <SEP> thermal water <SEP> from <SEP> Aix <SEP> 100 <SEP> ml
<tb> distilled <SEP> water <SEP> 900 <SEP> ml.
<tb>
The dish is then placed in an SDOC oven for 30 hours. Examination with a weakly magnifying microscope reveals the presence of spiral
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Structures that are characteristic of Beggiatoa recognize and show a mobility of the microorganisms due to their lubricity. Some are even visible to the naked eye. The microscopic examination also shows zones in which the beggiatoa threads appear free of impurities. One of these zones is cut out with a sterile scalpel and placed on a fresh agar plate of the same composition as the first, taking care that the surface with the beggiatoa threads comes to lie against the fresh surface of the new agar plate.
Now incubate again at 30 C for 24 h. The cutting out, transferring and incubating is repeated two more times. In this way, a pure Beggiatoa culture is obtained.
Example 2: Preservation of the strains
10 strains are isolated in the manner described in Example 1. They differ from each other in the diameter of their threads, their speed in sliding and the shape of their colonies made of agar. They are successfully preserved in three different ways during a short, medium or long period.
2. 1.) Short period: The plate is preserved in the refrigerator at 40C, whereby the Petri dish is carefully sealed watertight. The strain is transferred every 10 days because the agar shows a tendency to dry out.
2. 2.) Middle period: A semi-liquid medium with the following composition is produced:
EMI3.1
<tb>
<tb> yeast extract <SEP> 2 <SEP> g
<tb> CaCl. <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> g
<tb> sodium acetate <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> g
<tb> agar <SEP> 2 <SEP> g
<tb> filtered <SEP> thermal water <SEP> 1000 <SEP> ml.
<tb>
After the medium has been sterilized, catalase derived from fungi is added in an amount of 10 IU / ml. The catalase solution is previously sterilized by cold filtration through a Milipore filter with microscopic pores of 0.22 pm.
A small cube of agar containing beggiatoa is placed in a test tube,
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1 ml / test tube 2. 3.) Long period: A 24-hour culture is prepared in a stirred medium in the manner described in Example 3. It is then centrifuged. The precipitate is washed with a sterile Ringer's solution. The precipitate is then frozen and lyophilized. It is kept in the refrigerator in a well-sealed container for several months. When rehydrated, the thread fragments are able to develop.
Example 3: Cultivation of Strains 3. 1.) Inoculum: A small agar cube with an edge length of 5 mm is cut out of a plate obtained according to Example 1. It is then placed in a 500 ml flask containing 100 ml of the following medium:
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<tb>
<tb> yeast extract <SEP> 4 <SEP> g
<tb> calcium chloride <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> g
<tb> ammonium acetate <SEP> l <SEP> g
<tb> filtered <SEP> thermal water <SEP> 1000 <SEP> ml.
<tb>
This medium has a p-value of 6, 6. The flask is attached to an orbital shaker, which runs at 150 rev / min with a circle radius of 1.25 cm. The flask is left there at 30 C for 16 h. The culture obtained is then homogenized for 15 to 30 s using a Sorvall-Omnimixer mixer under sterile conditions. The culture obtained represents the inoculum.
3. 2). Cultivation: 5 ml of the above inoculum is placed in a 500 ml flask containing 100 ml of the same medium as used for the preparation of the inoculum
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has been det. The flask is incubated on the orbital shaker at 30 C for 24 h. It will
Obtained 0.8 g of dry matter from Beggiatoa / 1 culture. By repeating this operation with different strains and changing the conditions within the appropriate limits, yields between approximately 0.5 and 2 g dry beggiatoa / 1 culture are obtained.
3. 3.) Control of growth: The classic method of nephelometry, which is applicable to bacterial cultures, is not applicable to Beggiatoa because of its growth in the form of flakes. A method adapted to the case in question is therefore used. Culture samples are taken every 2 hours and homogenized in a Sorball-Omnimixer mixer.
Their optical density is read at 600 nm on a spectrophotometer. The homogenized sample forms a sediment very slowly and allows a useful reading. In this way an indication of the growth is obtained in direct dependence on the number of cells.
3. 4) Determination of dry weight: The classic drying in the oven does not produce reproducible results with Beggiatoa. The reason for this is probably the very high water content.
For this reason, no less than 400 ml of culture are dried by lyophilization to achieve reproducible results.
3. 5.) Determination of bacteriostatic activity: the classic method of determining the bacteriostatic activity of the Public Health Laboratory Service Committee, which is described in British Med. J. 408 [1965], does not give satisfactory results in this particular case due to the The fact that this test is carried out in a test tube. Beggiatoa is indeed extremely aerobic, which is why the oxygen concentration in a test tube is unsatisfactory. The method is therefore adapted by working in shake flasks to increase the oxygen transfer.
3 flasks with a capacity of 50 ml are prepared, each containing 18 ml of nutrient broth (Nutrient Broth Difco). In the first and in the second series, the flasks are each inoculated with 0.4 ml of a 24-hour culture of a pathogenic strain. The three pathogenic strains Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145, Escherichia coli ATCC 11755 and Staphylococcus aureus ATCC 12600 are used.
Samples of the bacteriostatic product are produced by centrifuging a culture which was obtained according to Example 3, Section 2, but only in 8 hours. The biomass obtained is centrifuged and resuspended in a volume of physiological solution which is equal to the volume of the supernatant remaining during centrifugation. The solution containing the biomass and the supernatant are each divided into 2 ml samples.
2 ml of physiological solution containing the homogenized biomass are added to the flasks of the first row. Only 2 ml of the physiological solution are added to the flasks of the second row. To the flask of the third row, which has not been inoculated with a pathogen, 2 ml of the physiological solution containing the homogenized biomass are added.
The flasks are incubated at 370C on an orbital shaker. After 16 h, their optical density is measured at 600 nm. The optical density measurements of the pistons corresponding to rows 1, 2 and 3 provide corresponding parameters A, B and C. The difference A to C, subtracted from B and then divided by B and multiplied by 100, gives the bacteriostatic activity of the biomass in% inhibition .
In the same way, the bacteriostatic activity of the supernatant is determined by adding 2 ml of the supernatant to the flasks of the first and third rows instead of 2 ml of physiological solution containing the homogenized biomass.
The results are summarized in the following table.
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<tb>
<tb>
Pathogen <SEP> activity <SEP> of the <SEP> biomass <SEP> activity <SEP> of the <SEP> supernatant
<tb> (% <SEP> inhibition) <SEP> (% <SEP> inhibition)
<tb> P. <SEP> aeruginosa <SEP> 70 <SEP> 41
<tb> S. <SEP> aureus <SEP> 100 <SEP> 45
<tb> E. <SEP> coli <SEP> 70 <SEP> 11
<tb>
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Example 4: Comparison
For comparison, the bacteriostatic activity of natural baregin is determined in the manner described in Example 3, paragraph 5. After 16 hours of incubation, a percentage inhibition of 100.83 and 96% against P. aeruginosa, S. aureus and E. coli is found.
In other words, the bacteriostatic activity of the biomass produced according to the invention is almost as strong as that of baregin. This is a remarkable result when one considers that the present biomass can be produced in good yield on an industrial scale, while baregin is only slowly available in very small quantities. The activity of the supernatant obtained according to the invention is lower, but is nevertheless of interest.
PATENT CLAIMS:
1. A process for the preparation of a substance with bacteriostatic activity, characterized in that a microorganism of the Beggiatoa type is obtained by isolation from baregin, cultivated in an aqueous nutrient medium containing nitrogen and minerals under aerobic conditions and with stirring, the biomass is obtained and optionally lyophilized.