BE1001434A6

BE1001434A6 - Procede d'examen de la toxicite dermique de substances et de selection de substances actives compatibles avec la peau.

Info

Publication number: BE1001434A6
Application number: BE8800183A
Authority: BE
Inventors: Heinz Spitzbart; Jutta Naumann; Ulf Thust; Reinhold Bech; Horst Kodderitzsch; Gisela Trutschel; Gunter Schoppe
Original assignee: Bitterfeld Chemie
Priority date: 1986-12-24
Filing date: 1988-02-15
Publication date: 1989-10-31
Also published as: DE3802780A1; CH676506A5; GB2215043A; GB8802864D0; DD256760B5; GB2215043B; DD256760A1

Abstract

Procédé d'examen de la toxicité dermique de substances ou mélanges de substances et de sélection de substances actives compatibles vis-à-vis de la peau, en particulier pour des produits de l'industrie agrochimique ou de la pharmacie, des colorants, des désinfectants, des produits d'hygiène et des produits chimiques domestiques, caractérisé en ce qu'on met en contact avec les substances à examiner, comme corps d'examen, des sections de peau de vagin d'au moins deux patientes, qui ont été réséquées au cours d'opérations plastiques sur des femmes saines ayant atteint l'age de puberté et ce qu'ensuite des images au microscope électronique à balayage de ces corps d'examen sont réalisées.

Description


   <Desc/Clms Page number 1> 
 



   "Procédé d'examen de Ja toxicité dermique de substances et de sélection de substances actives compatibles avec Ja peau". 



   Le procédé suivant l'invention peut être exploité pour sélectionner rapidement, parmi un grand nombre de substances actives, destinées en particulier à des produits de l'industrie agrochimique ou de la pharmacie, des désinfectants, des colorants, des produits d'hygiène et des produits chimiques domestiques, ceux qui sont compatibles avec la peau. 



   Il est connu que des substances chimiques ou des mélanges de ces substances, qui viennent en contact avec la peau d'un être humain ou les muqueuses proches de la peau, peuvent provoquer des maladies de la peau. Fréquement, de faibles irritants ne sont dommageables qu'après une durée d'exposition prolongée et lors d'une mise en oeuvre répétée, tandis que des facteurs supplémentaires peuvent encore s'ajouter. C'est à une connaissance accrue de l'environnement dans tous Jes pays industrialisés que correspond l'exigence d'un examen dermato-toxicologique pour l'admission de nouvelles substances actives dans l'industrie agrochimique, pour des produits chimiques domestiques, des colorants, des   cosmétiques, des désin-   fectants, ainsi que pour tous les produits chimico-techniques, qui peuvent entrer en contact avec la peau de l'homme. 



   L'exigence d'indications au sujet de l'activité sur la peau vaut comme on le sait pour des préparations finies, de même que pour des produits intermédiaires formés dans le processus technologique. 



   On sait que, pour l'examen de la compatibilité des substances   vis-à-vis   de la peau et des muqueuses, il n'existe pas de prescriptions d'examen générales qui satisfassent également les revendicatiöns internationales, en ce qui concerne l'aspect de J'exportation de tels produits.   L'examen de t'action   irritante primaire de substances sur la peau est comme on le sait très pénible et coûteux. Les examens 

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 toxicologiquesontlieuparétapessurdesanimauxd'essaid'espèces inférieures et supérieures, par exemple sur des souris, des rats, des cochons d'inde, des lapins et ensuite sur des hommes eux-mêmes. 



   Pour   cela   on s'occupe de concervoir les expériences sur animaux de façon que des examens ultérieurs sur des êtres humains puissent etre limités à une mesure   minimaJe   pour une sécurité aussi grande que possible. 



     Maigre   Ja dépense d'examen   élevée, Jes résultats   des essais sur animaux peuvent ne pas etre satisfaisants dans chaque cas.   U   apparaît que des problemes dermatologiques surgissent sur les etres humains eux-mêmes seulement après une application prolongée de substances. Un certain risque subsiste lors de la transposition des résultats expérimentaux sur animaux aux êtres humains. 



   En outre on doit chaque fois incorporer un plus grand nombre d'animaux dans des essais correspondants, pour exclure le facteur d'insécurité par l'individualité des sujets de l'essai. Comme les animaux doivent être sacrifiés après la fin des examens dermato- logiques, en vue d'une observation approfondie, ces méthodes font aussi de plus en plus l'objet de critiques de la part d'associations de protection des animaux. 



   L'invention a pour but de développer un procédé qui, sans essais sur animaux, permette une indication rapide, sûre et reproductible au sujet de la compatibilité de substances vis-a-vis de Ja peau. 



   Elle a pour objet de développer un procédé d'examen de la toxicité dermique de substances ou de mélanges de substances et de sélection de substances actives compatibles avec la peau, qui exploite la technique d'examen moderne histologico-morphologique. 



   Suivant l'invention on résout ce probleme par le fait que, comme corps d'examen, on met en contact avec les substances à examiner des sections de peau de vagin d'au moins deux patientes, qui ont été réséquées au cours d'opérations plastiques sur des femmes 
 EMI2.1 
 - --- - -- - - - -- - - - -- -- - - - saines atteint l'âge de la puberté, et qu'ensuite des images au microscope corps d'examen sont pe lectronique balayage réalisées. 

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 ayantDesopérations, dontlebutestlaplastiqueduvagin avant ou arrière, sont, comme on le sait, déjà effectuées depuis plusieurs dizaines d'années dans des cliniques gynécologiques. Les parties de peau saine, qui sont obtenues, sont rejetées.

   On a   découvert-que-ta--   peau de vagin fraîche, réséquée au cours des opérations, convient dans une mesure particulière pour donner des indications   a   propos de la compatibilité de substances vis-à-vis de la peau. 



   En évitant des essais sur animaux coûteux et pénibles, le procédé suivant J'invention permet d'obtenir de telles indications rapidement et simplement et de fixer éventuellement des limites de compatibilité pour des substances ; des substances compatibles vis-à-vis de la peau peuvent être sélectionnées pour des champs d'appli- 
 EMI3.1 
 cation déterminés. 



   On peut voir en outre l'avantage, associé en supplément au procédé suivant l'invention, dans le fait qu'il offre la possibilité de déterminer l'activité des substances examinées   vis-à-vis   d'agents pathogènes. Dans des cas particuliers, on peut utiliser la microscopie 
 EMI3.2 
 électronique a transmission.Exempies de réalisation
Le procédé suivant l'invention va être décrit de manière plus détaillée dans la suite par l'exemple et sa capacité d'information va être ainsi illustrée. Les sections de peau de vagin 
 EMI3.3 
 réséquées lors d'opérations plastiques sont chaque en morceaux de même grandeur, jusque dans un nombre de quatre. 



   Pour examiner la toxicité dermique de certaines substances, on laisse agir celles-ci à une concentration définie pendant 24 heures sur au moins deux échantillons de peau différents. Des images de ces échantillons de peau, traités par la substance à examiner, ainsi que respectivement de deux témoins non traités, provenant des rnemes sections de peau, sont réalisées par un microscope électronique, elles sont mutuellement comparées et le degré d'endommagement de Ja peau est-évalué. 
 EMI3.4 
 "=-Lar pour" preparation"de !'echantition a examinerJa microscopie électronique s'effectue d'une manière connue a) Préparation pour Ja microscopie électronique à balayage. 

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    Les sections de peau qui se trouvent dans de l'éthanol et qui ont une dimension d'environ 8 mm2 séchées pendant 45 minutes à 20 C et sous une pression finale d'environ 5 Pa. Ensuite, elles ----sont fixées par de la colle sur le porte-objet du microscope électronique à balayage et, dans une installation de metallisation sous vide poussé, elles sont vaporisées par du carbone et de l'or, comme couches de dérivation. Une image des surfaces d'échantillon, agrandie à 1000 fois, est donnée dans le microscope électronique à balayage. b) Préparation pour la microscopie électronique à transmission. 



  Le séchage des sections de peau prévues pour la microscopie électronique à transmission et présentant une dimension d'environ 2 x 2 mm a lieu de la même manière que pour l'examen dans le microscope électronique à balayage. Après le séchage, les échantillons de tissu sont introduits dans un produit d'enrobage, qui polymérise à 48 C en l'espace de 3 à 4 jours. 



  L'enrobage a lieu de façon que des coupes puissent être effectuées parallèlement à la surface. 



  Les coupes ultraminces (épaisseur : 150-200 nm, surface de section d'environ 0, 2 x 0, 4 mm) sont réalisées à l'aide d'un ultramicrotome. Les coupes transférées sur des grilles de support sont contrastées ultérieurement pendant 2 heures dans une solution saturée d'acétate d'uranyle et leur image, agrandie à 22. 000 fois, sont obtenues dans un microscope électronique à transmission. 



  Le tableau 1 reprend une sélection des substances actives et respectivement compositions à base de substances actives mises en oeuvre dans l'examen de la toxicité dermique.   

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 EMI5.1 
 



  Tableau : substancesactiyes en oeuvre dans i'examen ' 
 EMI5.2 
 
<tb> 
<tb> R. <SEP> euEchantillon <SEP> Substance <SEP> active
<tb> d'examen <SEP> n' <SEP> 
<tb> 1 <SEP> 2-Hydroxybutyraldéhyde
<tb> 2 <SEP> 1,1,1-Trichloro-4-méthyl-4-pentén-2-ol
<tb> 3 <SEP> Hexahydrate <SEP> de <SEP> phosphonoformiate <SEP> trisodique
<tb> 4 <SEP> Chlorure <SEP> de <SEP> poly- <SEP> (diméthyl-diallylammonium) <SEP> 
<tb> 5 <SEP> Acide <SEP> peracétique
<tb> 6 <SEP> Ujosan <SEP> (iode/acide <SEP> peracétique)
<tb> 7 <SEP> Camposan <SEP> (acide <SEP> 2-chloroéthylphosphonique <SEP> a <SEP> 50 <SEP> %)
<tb> 
 
L'évaluation des images au microscope électronique à balayage s'effectue selon le code suivant :

   Note d'évaluation Etat
0 = pas d'endommagement des cellules par rapport au témoin non traite
Faible endommagement des cellules
2   = Fort   endommagement des cellules
3 = Elimination de plusieurs couches cellulaires   4 = Grave   endommagement et destruction du tissu. 



   Pour les images (installation) au microscope électronique à balayage correspondant aux notes d'évaluation on peut observer : Note d'évaluation Etat
0 La surface n'est pas modifiée ; les cellutes super- posées font partie de la cytolyse physiologique et elles peuvent aussi être observées sur la préparation non traitée (fig. 1). 
 EMI5.3 
 



  1 montrent une nette modi- - qui est à attribuer à l'action de---la Les cellules-individuelles montrent des contractions et-aussi une certaine cytolyse (fig. 2). 

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 EMI6.1 
 -----2-- Les couches--cellulair-es-super-ficielles----font---défaut e --- ou sont encore presentes sous la forme de débris. 



   On   reconnait   nettement des structures qui ne font pluspartiedescouchescellulairessuperficielles (fig. 3). 



   3 Les couches cellulaires supérieure et moyenne font partiellement défaut. On trouve des débris cellulaires abondants bien que des fragments de cellules puissent encore nettement être observés (fig. 4). 



   4 Les sections de cellules sont tout à fait dégradées à l'exception de résidus. On   reconnalt   déjà le système vasculaire et Je tissu conjonctif. La destruction du tissu à plusieurs couches a réussi presque tota- lement (fig. 5). 



   L'image comparative montre de la peau de vagin non traitée (simple processus de fixation). La surface ne laisse observer aucune sorte de modifications morphologiques (fig. 6). 



     H   ressort du tableau 11 le degré de l'endommagement de la peau par différentes substances ou mélanges de substances en fonction de la concentration. Par cela le procédé suivant l'invention permet de sélectionner des substances compatibles avec la peau ou respectivement de fixer des concentrations d'application maximales de ces substances actives, si tout endommagement   a   la peau doit etre exclu. 

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  Tableau II : Examen de la toxicité dermique de différentes substances ou mélanges de substances selon le procédé suivant   x). l'invention   
 EMI7.1 
 - -- ----- ---- -- -- 
 EMI7.2 
 
<tb> 
<tb> Echantillon <SEP> Concentration <SEP> Note <SEP> d'évaluation <SEP> correspondant
<tb> d'examen <SEP> nO <SEP> au <SEP> degré <SEP> de <SEP> l'endommagement
<tb> 1 <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> 5 <SEP> 2
<tb> 10 <SEP> 3
<tb> 25 <SEP> 4
<tb> 2 <SEP> 50 <SEP> 2 <SEP> (K)
<tb> 100 <SEP> 3
<tb> 3 <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> 4 <SEP> 3 <SEP> (K)
<tb> 4 <SEP> (pommade) <SEP> 0
<tb> 4 <SEP> 
<tb> 1 <SEP> 05 <SEP> 0
<tb> 25 <SEP> 2
<tb> 5 <SEP> 0,5 <SEP> 2
<tb> 5 <SEP> 2
<tb> 100 <SEP> 4
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> 1
<tb> 5 <SEP> 1
<tb> 50 <SEP> -
<tb> 7 <SEP> 0,

  5 <SEP> 1
<tb> 5 <SEP> 2
<tb> 100 <SEP> 3-4
<tb> 
 

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   Les numéros des échantillons d'examen correspondent aux indications du tableau I; K signifie une séparatfon-cristalline. 



  Dans le tableau 111 le procédé suivant l'invention est confronté à l'essai connu sur les lapins. 



  L'examen de J'action irritante primaire d'une substance comporte la détermination du degré d'irritation de la peau non lésée et de la peau lésée à l'ide de l'index de t'irritation primaire de la peau selon la méthode de Draize [Dermal toxicity, Publ. in Appraisol of the safety of chemicals in foods, drugs and cosmetics, Wyd. Assoc. of Food and Drug Officials of the United States, 1959], sur la peau de lapins. 



  Par substances et concentrations, on met en oeuvre 6 lapins albinos. Après 1, 3 et 7 jours, on évalue toutes les modifications de la peau (érythèmes, enflures et formations de croûtes). 



  Draize utilise la classification suivante : 0 = pas irritant pour la peau 0 - 2 = faiblement irritant pour la peau 2 - 5 = modérément irritant pour la peau 5 = fortement irritant pour la peau. 



  Ces chiffres de classification résultent de la valeur moyenne de tous les points qui ont été déterminés à partir des évaluations après 1, 3 et 7 jours pour la peau lésée et la peau non lésée. 



  La méthode ne garantit pas une classification exacte des preparations à faible irritation.   

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 EMI9.1 
 



  Tableau aljation ferentes -------------a) selon 1e procédé suivant 
 EMI9.2 
 
<tb> 
<tb> et
<tb> I <SEP> ! <SEP> Lb) <SEP> selon <SEP> l'essai <SEP> sur <SEP> des <SEP> lapins <SEP> suivant <SEP> Draize.
<tb> 



  Echantillon <SEP> Concentration <SEP> Notes <SEP> d'évaluation <SEP> 
<tb> d'examen <SEP> n  <SEP> en <SEP> [Ma <SEP> %] <SEP> suivant <SEP> l'invention <SEP> selon <SEP> Draize
<tb> 1 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 
<tb> S <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 2
<tb> 10 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> 25 <SEP> 4 <SEP> 3
<tb> 2 <SEP> 50 <SEP> 2 <SEP> 3
<tb> 100 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> 3 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 0 <SEP> 
<tb> 430
<tb> 4 <SEP> (pommade) <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 2
<tb> 4100
<tb> 5 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 25 <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> - <SEP> 2 <SEP> 
<tb> 6 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 
<tb> 5 <SEP> 1 <SEP> 0
<tb> 50 <SEP> - <SEP> 0
<tb> 7 <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> 2 <SEP> 0
<tb> 5 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 
<tb> 100 <SEP> 3-4' <SEP> 3-4
<tb> 
 
 EMI9.3 
 - )

   des échantillons d'examen correspondent- ations du tableau L 

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 EMI10.1 
 ---- -de--7- lisation dcrits ci-dessus en aucune façon limitée aux modes de -eatisation et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir --du cadre du présent   brevet. -

Claims

REVENDICATION ---Procédé d'examen de la toxicité dermique---de substances ou mélanges de substances et de sélection de substances EMI11.1 activescomssalibJesdLS-a-YLs la peau, en particulier pour-des-produits--- de l'industrie agrochimique ou de la pharmacie, des colorants, des désinfectants, des produits d'hygiène et des produits chimiques domestiques, caractérisé en ce qu'on met en contact avec les substances à examiner, comme corps d'examen, des sections de peau de vagin d'au moins deux patientes, qui ont été réséquées au cours d'opérations plastiques sur des femmes saines ayant atteint l'âge de puberté et en ce qu'ensuite des images au microscope électronique à balayage de ces corps d'examen sont réalisées.