"Procédé de synthèse de composés alcaloïdes dimères"
La présente invention concerne un procédé nouveau et perfectionné destiné notamment à la production de composés alcaloïdes dimères, en particulier du groupe des alcaloïdes de Catharanthus (Vinca), et elle concerne en particulier un procédé perfectionné de production des composés antileucémiques (antinéoplastiques) antiviraux, à savoir la vincristine 'et la vinblastine, de formule I
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Le composé ci-dessus est la vinblastine
(NSC 49482) lorsque R est un groupe COOCH3 et R1 est un
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et N1 est un groupe N-CHO (N-formyle).
La présente série d'alcaloïdes dimériques, comprenant des agents antitumoraux importants, est formée à partir d'un indole tel que la catharanthine
(formule II, R = COOCH3) et d'un motif dihydro-indole, par exemple la vindoline (formule III), dont les moitiés sont attachées par une liaison carbone-à-carbone impli-
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vindoline.
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Les conditions de la réaction de couplage, comme décrit dans la présente invention, sont en rapport avec une modification importante du procédé mis au point dans ces laboratoires [brevet des Etats-
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2858 (1976)] (schéma 1). En particulier, la modification selon l'invention permet la préparation et l'isolement du composé intermédiaire de dihydropyridinium VI (R = COOCH3) très instable, qui est formé dans
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avec la vindoline (formule III).
En général, le dérivé Nb-oxyde du motif
<EMI ID=8.1> n a une valeur de 0 à 10) préparés avec un peracide
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tel que le chlorure de méthylène ou d'autres solvants organiques polyhalogénés, sont obtenus à des températures
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biante et au-dessus. Le N-oxyde intermédiaire ainsi formé est utilisé pour l'étape suivante sans isolement. La réaction de fragmentation, qui fragmente la liaison
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en présence d'un réactif tel que l'anhydride trifluoracétique. Pour maximiser la réaction de couplage subséquente qui favorise la formation d'un dimère naturel
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indole peut être ajouté au mélange réactionnel avant la réaction de fragmentation. Comme autres réactifs pour le composant anhydride trifluoracétique utilisé dans la fragmentation et le couplage, on peut choisir l'anhydride trichloracétique, l'anhydride acétique, des halogénures d'acétyle et l'anhydride tosylique. Ces réactifs provoquent une fragmentation du type
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représentés par les formules IIa et IV.
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Les conditions de réaction, à savoir température, temps et pression, sont en général analogues à celles qui sont utilisées dans la réaction de Polonovski qui, dans son application originelle, a impliqué la déalkylation d'amines tertiaires et hétérocycliques par acylation des N-oxydes correspondants avec l'anhydride acétique ou le chlorure d'acétyle
(voir Merck Index, 8ème édition, 1968, page 1203). La température de la réaction de fragmentation et
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situe de préférence dans la partie basse de cette plage. Les étapes de la réaction relatives à la formation du N-oxyde peuvent être conduites à l'air libre ou en atmosphère de gaz inerte tel que de l'argon ou un autre gaz inerte du Groupe Zéro du Tableau Périodique tel que l'hélium, l'azote, le néon, etc. Les mêmes conditions en atmosphère inerte sont utilisées dans les étapes de fragmentation et de couplage de la réaction et avec un réglage positif de température
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A cause de la basse température nécessaire pour les réactions à un stade ultérieur, la durée de réaction peut varier de quelques heures à plusieurs jours.
Le premier composé intermédiaire dimérique indole-dihydro-indole formé, après la réaction (stéréospécifique) de couplage, possède une fonction sel
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comme représenté par les formules V ou VI. La réduction de ce sel d'iminium intermédiaire par réaction avec
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produit le ou les alcaloïdes dimériques comme décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique
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Dans la présente invention, le sel d'iminium intermédiaire (formule V ou VI) peut être isolé tel quel par une manipulation effectuée avec précaution. Lorsque la réaction de couplage est terminée, le mélange réactionnel est traité directement sur un système chromatographique approprié tel que chromatographie sur colonne, chromatographie sur couche mince ou chromatographie en phase liquide à haute performance, de préférence avec inversion de phase et/ou par des opérations de séparation par exclusion dimensionnelle. La température de l'opération peut
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variante, des réactifs et des solvants volatils qui sont présents conjointement avec le sel d'iminium intermédiaire dans le mélange réactionnel peuvent être éliminés sous pression et à température réduites, de préférence au-dessous de -10[deg.]C. La matière solide résultante (formule V ou VI) est ensuite dissoute dans divers solvants organiques tels que des hydrocarbures halogénés, des éthers, des alcools, l'acétonitrile, etc., et/ou divers tampons aqueux. Le pH du tampon peut varier de 2 à 10. La solution du sel d'iminium intermédiaire (formule V ou VI) peut ensuite être purifiée par les opérations chromatographiques décrites ci-dessus, avant d'autres caractérisations. A titre de variante, la solution de sel d'iminium intermédiaire peut être utilisée directement pour des réactions subséquentes.
L'utilisation d'une atmosphère inerte peut ou non être nécessaire.
Lorsque le motif indole de départ a une double liaison en C3-C4 (par exemple la catharanthine
(II)), le composé intermédiaire de couplage résultant contient un groupe fonctionnel iminium à non-saturation
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LiBH4) donne des composés de 3',4'-déhydrovinblastine
(formule VII). Le procédé de l'invention utilise.un mode nouveau de réduction dans lequel la transformation du sel d.'iminium intermédiaire (formule VI) en l'énamine (formule VIII) peut être réalisée. Des réactifs utilisés pour cette réduction comprennent des composés de 1,4-dihydropyridine (que l'on appelle modèles de NADH) comme représenté par la formule IX :
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Deux séries de tels composés sont aisément disponibles [Chem. Rev. 82, 232 (1982) ; Chem. Rev. 72, 1 (1972)].
La première série est connue sous le nom d'esters
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La seconde série comprend les 1,4-dihydronicotinamides substitués sur l'atome d'azote (formle IX) où R.. est une fonction alkyle substitué ou aryle substitué , par
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du groupe comprenant l'hydrogène et les fonctions alkyle, alkyle substitué, aryle et aryle substitué.
Les réducteurs ci-dessus peuvent être utilisés individuellement ou en association. Lorsqu'on utilise des 1,4-dihydropyridines pour réduire le sel d'iminium VI, on se sert de solvants organiques tels que des alcools, l'acétonitrile ou des représentants supérieurs de cette série, le diméthylsulf oxyde, - le diméthylformamide, divers éthers tels que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, etc., des hydrocarbures chlorés, etc., normalement sans utiliser de tampon aqueux comme co-solvant. On contrôle la progression de la réduction par l'analyse directe du mélange réactionnel sur un système chromatographique approprié, de préférence par chromatrographie en phase liquide à haute performance à inversion de phase. Ce procédé est utilisé pour optimiser la température, le temps et la pression de la réaction et la concentration des corps réactionnels.
La température de réaction peut varier de <EMI ID=27.1> ambiante. Le temps de réaction peut varier de quelques minutes à plusieurs jours selon d'autres paramètres. La réduction est conduite en vase clos dans des conditions inertes, par exemple sous argon ou dans un gaz inerte du Groupe Zéro du Tableau Périodique (azote, hélium, néon, etc.). L'énamine (formule VIII) formée dans la réduction ci-dessus peut être utilisée directement pour la réaction subséquente ou isolée par une manipulation effectuée avec précaution. Le mélange réactionnel est traité directement sur un système chromatographique approprié, par exemple par chromatographie sur colonne, sur couche mince ou chromatographie en phase liquide à haute performance, de préférence avec inversion de phase, et/ou soumis à des opérations de séparation par perméation sur gel.
La température de l'opération peut varier de 4[deg.]C à la température ambiante. A titre de variante, les réactifs et les solvants volatils présents dans le mélange réactionnel sont chassés sous pression et à température réduites, de préférence au-dessous de -10[deg.]C. Le résidu résultant peut être purifié par les opérations chromatographiques décrites ci-dessus avant d'être caractérisé ou transformé.
. Le traitement de l'énamine VIII avec un <EMI ID=28.1>
vinblastine (formule XI, R = COOCH3). Tandis que dans des conditions oxydantes, l'énamine VIII peut être transformée en la série vinblastine/vincristine en passant par le sel d'iminium intermédiaire (formule
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Des conditions oxydantes qui sont utilisées pour convertir une énamine (formule VIII) en un sel d'iminium intermédiaire (formule XVI) comprennent les suivantes :
(1) aération/oxygénation réglée ;
(2) addition de coenzymes de flavine [riboflavine, formule XII, R = H ; flavine-mononucléotide
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suivie d'une opération d'aération/oxygénation réglée;
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XII
(3) addition de la forme réduite des coenzymes de flavine (dihydroriboflavine, formule XIII, R = H ; dihydroflavine-mononucléotide (FMNH2), formule <EMI ID=33.1> d'une opération d'aération/oxygénation réglée ;
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(4) addition d'analogues de coenzymes de flavine à structure d'iso-alloxazine comme repré-
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vent être des représentants du groupe comprenant les fonctions alkyle, alkyle substitué, aryle et aryle substitué, suivie d'une opération d'aération/oxygé nation réglée ;
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XIV
(5) addition de la forme réduite (1,5dihydro) des analogues de coenzymes de flavine cidessus, comme représenté par la formule XV dans laquelle
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les fonctions alkyle, alkyle substitué, aryle et aryle substitué, suivie d'une opération d'aération/oxygénation réglée ;
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(6) addition de peroxyde d'hydrogène et/ou d'hydroperoxydes comme représenté par la formule R-OOH, dans laquelle R peut être une fonction alkyle, alkyle substitué, aryle ou aryle substitué ;
(7) addition de peracides comme représenté
<EMI ID=39.1> fonction alkyle, alkyle substitué, aryle ou aryle substitué ;
(8) addition de superoxydes ;
(9) addition d'un radical hydroxyle (OH) engendré de diverses façons, par exemple par l'utilisation de peroxyde d'hydrogène en présence de l'ion ferreux ;
(10) addition d'un ion métallique qui est un bon accepteur d'électrons, par exemple l'ion
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(Ag+1), suivie d'une opération d'aération/oxygénation réglée.
Les processus d'oxydation impliquant une aération/oxygénation réglée (condition (1)), les analo-
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des peroxydes (condition (6)), des peracides (condition (7)), des superoxydes (condition (8)), le radical hydroxyle (OH) (condition (9)) et des ions métalliques capables d'un transfert d'électrons (condition (10)) peuvent être effectués dans des solvants organiques tels que des alcools, l'acétonitrile ou des représentants supérieurs de cette série, le diméthylsulfoxyde, le diméthylformamide, divers éthers tels que le dioxanne, le tétrahydrofuranne, des hydrocarbures aromatiques tels que le benzène, le toluène, etc.
Les processus d'oxydation impliquant des coenzymes de flavine (conditions (2), (3)) nécessitent un tampon aqueux (par exemple tampons aux phosphates, au chlorhydrate de tris, au MES)) à pH 5-9, mais de préférence dans la plage de 6 à 8, comme solvant. Un co-solvant organique, par exemple des alcools, l'acétonitrile ou un membre supérieur de cette série, le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le diméthylsulfoxyde, le diméthylformamide, peut être utilisé.
L'évolution du processus d'oxydation est contrôlée par l'analyse directe du mélange réactionnel sur un système chromatographique approprié, de préférence par chromatographie en phase liquide à haute performance avec inversion de phase. Cette méthode est utilisée pour optimiser la température, le temps, la pression de réaction et la concentration des corps réactionnels. La température de la réaction peut varier de -60 à +60[deg.]C et de préférence de 4[deg.]C à la température ambiante. La durée de la réaction peut varier de quelques minutes à plusieurs jours, selon les autres paramètres. La réaction est conduite à la pression atmosphérique.
La transformation du composé intermédiaire
(formule' XVI) en vinblastine (formule I) peut être
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hydrure de métal alcalin (NaBH4, KBH4, LiBH4) dans des solvants convenables (organiques ou aqueux) comme on en utilise dans le processus d'oxydation (conditions (1)-(10)).
A des fins pratiques, un isolement des composés intermédiaires (formules V, VI, VIII, XVI) n'est pas requis et le processus entier depuis le motif indole (formule II) et le motif dihydro-indole
(formule III) jusqu'à la vinblastine (formule I) constituant le produit final peut être conduit de préférence dans une opération en récipient unique.
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En résumé, le procédé de l'invention est applicable à l'obtention de produits dimères à partir de catharanthine et de dihydrocatharanthine avec la vindoline comme matière de départ et des dérivés phényliques, alkyliques et amidiques répondant aux formules
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La formule XXI correspond à la représentation qui en est donnée et dans cette formule, alk
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tel que benzyle, styryle et xylyle ; R1 est un membre du groupe comprenant l'hydrogène, des radicaux alk,
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R2 et R3 sont-des représentants du groupe comprenant l'hydrogène et un radical -CO-alk ; R4 est un représentant du groupe comprenant les radicaux COO-alk, CONH-NH2,
<EMI ID=49.1> de l'indole représenté par la formule XXII dans laquelle R7 est choisi dans le groupe comprenant l'hydrogène
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prenant l'hydrogène, un radical OH, 0-alk, OCO-alk
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l'hydrogène, un radical OH, 0-alk, OCO-alk ou alk; R10 est un membre du groupe comprenant l'hydrogène, un radical OH, 0-alk, OCO-alk, ou de formule XXIII dans laquelle R11 est un représentant du groupe comprenant l'hydrogène ou un radical COO-alk ; R12 est un groupe alkyle.
La présente invention diffère de l'art antérieur [brevet des Etats-Unis d'Amérique
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notamment l'isolement et la caractérisation de composés intermédiaires V, VI, VIII et XVI instables et leur transformation ultérieure en vinblastine et vincristine qui sont des médicaments à usage clinique. L'art antérieur décrit un procédé de production d'alcaloïdes dimères qui sont des analogues des médicaments à usage clinique, par exemple la 3',4'-déhydrovinblastine de formule VII.
On prépare des composés intermédiaires V et VI par mise en contact de vindoline ou d'un dérivé de vindoline [formule XXI dans laquelle R représente H] avec un dérivé d'indole représenté par un composé
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du groupe comprenant l'hydrogène ou un radical COOalk, ou par un composé de formule XXV dans laquelle
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l'hydrogène ou un radical alkyle.
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En plus de la catharanthine, tout motif d'indole représenté par la formule XXVI peut être
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membres du groupe comprenant l'hydrogène, un radical OH, 0-alk, OCO-alk, alkyle ou aryle. Dans la formule XXVI, comme indiqué ci-dessus, alk est un groupe alkyle
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est un groupe mono-aryle tel que benzyle, xylyle, etc.
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Dans les formules XXI à XXVI et d'une manière générale dans la présente demande, alk et alkyle désignent un groupe alkyle inférieur tel que défini pour la formule XXI, et aryle désigne un groupe mono-aryle tel que défini de façon similaire dans la formule XXI.
Le composé intermédiaire VI ainsi obtenu est utilisé dans un procédé nouveau et très spécifique impliquant une réduction en positions 1,4 en vue de former le composé intermédiaire VIII qui est le suivant par ordre d'importance. Le composé intermédiaire VIII est en outre converti par un procédé nouveau en le composé intermédiaire XVI nouveau et ce dernier est utilisé dans un autre procédé nouveau de réduction pour former les composés de structure générale XXI lorsque R est un composé de formule XXII.
Dans une série similaire de réactions, le composé intermédiaire V conduit à des composés de structure générale XXI lorsque R est un composé de formule XXIII.
Une autre particularité nouvelle et très importante de la présente invention est que l'isolement de composés intermédiaires VI, VIII et XVI n'est pas essentiel et que le procédé en entier, soigneusement contrôlé par chromatographie en phase liquide à haute performance pour VI, VIII et XVI, peut être mis en oeuvre en vue de l'obtention de produits dimériques de formule XXI à partir des motifs indole (formules II, XXII et XXIII) et dihydro-indole (formule XXI, R = H) de départ dans une opération en réacteur unique.
PARTIE EXPERIMENTALE
Préparation du sel d'iminium intermédiaire (formule VI) par la réaction de Polonovski modifiée
La réaction a été conduite dans des conditions anhydres. Toute la verrerie a été séchée à l'étuve à 120[deg.]C. Le chlorure de méthylène utilisé comme solvant et l'anhydride trifluoracétique utilisé comme réactif
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0,8 mmole) a été ajouté à une solution de catharanthine (II, 200 mg, 0,6 mmole) dans du chlorure de méthylène anhydre (2 ml) à -20[deg.]C sous atmosphère positive d'argon et le mélange a été agité pendant 5 minutes. Une solution de vindoline (III, 270 mg, 0,6 mmole) dans du chlorure de méthylène (1 ml) a été ajoutée au N-oxyde de catharanthine (lia) ainsi formé et le mélange a été refroidi à -60[deg.]C. De l'anhydride trifluoracétique (0,2 ml, 1,5 mmole) a été ajouté au mélange réactionnel sous agitation maintenu à -60[deg.]C pendant 2 heures. Après cette période, le solvant et les réactifs en excès ont été chassés sous vide à -20[deg.]C en laissant un résidu brun rougeâtre contenant le sel d'iminium intermédiaire.
Ce dernier a été caractérisé par chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) à inversion de phase (cartouche Waters Radial-Pak C18 ou CN, système de solvants formé de méthanol-H20-Et3N). Il a été montré que le rendement en VI dans cette réaction dépassait 80 % par réduction de VI (NaBH4, méthanol, 0[deg.]C) en la 3',4'-déhydrovinblastine connue (formule VII).
Réduction du sel d'iminium intermédiaire (formule VI) avec le 1-benzyl-1,4-dihydronicotinamide (formule
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Synthèse de l'énamine (formule VIII) - (Mode opératoire A)
Du 1-benzyl-1,4-dihydronicotinamide
(135 mg, 0,63 mmole, 6 équivalents) sous atmosphère
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a été ajouté en une période de 5 heures à une solution sous agitation du sel d'iminium intermédiaire (VI,
100 mg) dans de l'acétonitrile (5 ml) dégazé. Après cette période de 5 heures, le mélange réactionnel, comme contrôlé par CLHP avec l'inversion de phase
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vants formé de méthanol/H20/Et3N) a indiqué la transformation totale de VI en un mélange d'énamine VIII* et de 3',4'-déhydrovinblastine (VII) dans un rapport de 1:1 (rendement 75 %).
A titre de variante, on a ajouté goutte à goutte ou par portions une solution de 1-benzyl1,4-dihydronicotinamide (56 mg, 0,26 mmole, 2,5 équivalents) dans du méthanol (2 ml) sous pression positive d'argon en une période de 5 heures à une solution sous agitation du sel d'iminium intermédiaire (VI,
100 mg) dans du méthanol (5 ml), initialement maintenue à 0[deg.]C pendant 0,5 heure. Pendant cette période de 5 heures, on a laissé la solution se réchauffer à la température ambiante. Un contrôle par CLHP effectué comme ci-dessus a indiqué la transformation totale de VI en un mélange d'énamine VIII et de 3',4'-déhydrovinblastine (VII) dans un rapport de 1:1 (rendement
75 %).
Dans un essai, le mélange d'énamine (VIII) et de 3',4'-déhydrovinblastine (VII) obtenu comme décrit ci-dessus a été traité avec du borohydrure de sodium en excès (500 mg) à 0[deg.]C. Le mélange réactionnel a ensuite été rendu basique avec de l'hydroxyde d'ammonium et il a été extrait à l'acétate d'éthyle
(3 x 200 ml). Les phases organiques rassemblées ont été déshydratées sur du sulfate de magnésium. Le produit obtenu, après élimination du solvant organique, a été soumis à une chromatographie préparative sur couche mince, sur gel de silice (élution avec un mélange mé thanol/acé tate d'éthyle). Il a été montré que le produit consistait en un mélange de 3',4'déhydrovinblastine (VII) n'ayant pas réagi et de composés connus, à savoir la 4'-déhydrovinblastine (X, R = COOCH3) et la 4'-déoxo-4'-épivinblastine (XI,
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a mis en évidence sans ambiguïté la structure de l'énamine VIII.
Réduction du sel d'iminium intermédiaire (formule VI) avec la 3,5-diéthoxycarbonyl-2,6-diméthyl-4-phényl1,4-dihydropyridine (analogue d'ester de Hantzch,
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CH3 ; R4 = phényle) - Variante de synthèse d'énamine
(formule VIII) - (Mode opératoire B)
De la 3,5-diéthoxycarbonyl-2,6-diméthyl4-phényl-1,4-dihydropyridine (264 mg, 8 équivalents) dans de l'éthanol (12 ml) sous atmosphère positive d'argon a été ajoutée à une solution sous agitation du sel d'iminium intermédiaire (VI, 100 mg) dans de l'acétonitrile dégazé (3 ml). Le mélange réactionnel a été chauffé au reflux pendant 3 heures. Après cette période, l'analyse par CLHP avec inversion de phase
(comme décrit ci-dessus) a indiqué la formation, entre autres produits, d'énamine VIII et de 3',4'-déhydrovinblastine (VII) dans un rapport de 1:1 (rendement
60 %).
Synthèse de la vinblastine (formule I) par oxydation d'énamine (formule VIII) en sel d'iminium intermédiaire
(formule XVI) avec le flavine-mononucléotide (FMN,
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Du FMN (80 mg, 1 équivalent) en solution dans un tampon au chlorhydrate de tris (2 ml) sous atmosphère positive d'argon a été ajouté à un mélange réactionnel sous agitation contenant l'énamine (VIII) obtenue comme décrit ci-dessus (mode opératoire A)
à partir du sel d'iminium VI (100 mg). La solution a été maintenue à l'obscurité à la température ambiante
(20[deg.]C) pendant. 16 heures. Ensuite, l'atmosphère inerte d'argon a été remplacée par de l'air et le mélange réactionnel a été agité pendant encore 2,5 heures. Des analyses par CLHP avec inversion de phase ont indiqué la transformation de l'énamine VIII en le sel d'iminium intermédiaire XVI ainsi qu'en d'autres produits (voir plus loin). Du borohydrure de sodium
(500 mg) a été ajouté à 0[deg.]C et le mélange réactionnel a été rendu basique avec de l'hydroxyde d'ammonium et extrait à l'acétate d'éthyle (3 x 200 ml). Les extraits organiques rassemblés ont été déshydratés sur du sulfate de magnésium et le solvant a été chassé sous vide en donnant un produit brut (85 mg).
La purification de ce dernier produit par chromatographie sur couche épaisse (gel de silice, méthanol:acétate d'éthyle 1 : 5 ) a permis la séparation des produits dinériques suivants : vinblastine (formule I, 22 mg, 23 %) :
3',4'-déhydrovinblastine (formule VII, 16 mg, 17 %); leurosine (formule XVII, 8 mg, 9 %), catharine (formule XVIII, 7 mg, 7,5 %) ; vinamidine (formule XIX,
5 mg, 5,6 %) et le produit de réduction de la vinamidine (formule XX, 19 mg, 20 %).
Synthèse de la vinblastine (formule I) par oxydation de l'énamine (formule VIII) au peroxyde d'hydrogène en le sel d'iminium intermédiaire (formule XVI) Procédé 2
Du peroxyde d'hydrogène (30 %, 1,2 ml,
95 équivalents) sous atmosphère inerte d'argon a été ajouté à une solution contenant l'énamine (VIII) obtenue à partir du sel d'iminium intermédiaire VI (100 mg, mode opératoire A). Le mélange réactionnel a été agité à la température ambiante pendant 5,5 heures aux termes desquels des analyses par CLHP avec inversion de phase ont indiqué la transformation complète de l'énamine VIII. Du borohydrure de sodium (500 mg)
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(3 x 200 ml). Les extraits organiques rassemblés ont été déshydratés sur du sulfate de magnésium et le solvant a été chassé sous vide. Le produit mixte résultant a été séparé par chromatographie sur couche épaisse
(gel de silice, méthanol/acétate d'éthyle) en donnant les alcaloïdes dimériques suivants : vinblastine (I, 4 mg, 4 %), 3',4'-déhydrovinblastine (VII, 5 mg, 4,8 %), leurosine (XVII, 13 mg, 12,5 %), catharine
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(XX, 30 mg, 27,6 %).
Synthèse de la vinblastine (I) par oxydation de l'énamine (VIII) en présence d'air en le sel d'iminium intermédiaire (formule XVI) - Procédé 3
Une solution contenant l'énamine (VIII) obtenue à partir du sel d'iminium intermédiaire (VI,
100 mg) par le mode opératoire A a été agitée à l'air libre à la température ambiante pendant 3 heures. Après cette période, du borohydrure de sodium (500 mg) a été ajouté à 0[deg.]C et le mélange réactionnel a été rendu basique avec de l'hydroxyde d'ammonium et extrait à l'acétate d'éthyle (3 x 200 ml). Les extraits organi-ques rassemblés ont été déshydratés sur du MgS04 et chassés sous vide. Le produit brut résultant a été séparé par chromatographie préparative sur couche épaisse (gel de silice, méthanol/acétate d'éthyle) en donnant la vinblastine (I, 4 mg, 4 %).
Synthèse de la vinblastine (I) par oxydation de l'énamine (formule VIII) à l'air en présence de chlorure ferrique en le sel d'iminium intermédiaire (XVI) Procédé 4
Du chlorure ferrique (1 équivalent) a été ajouté à une solution sous agitation contenant l'énamine (VIII) obtenue à partir du sel d'iminium intermédiaire (VI, 100 mg, mode opératoire A) et on
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réactionnel basique avec de l'hydroxyde d'ammonium avant l'extraction à l'acétate d'éthyle (3 x 100 ml). Les extraits organiques rassemblés ont été déshydratés sur du Na2S04 et le solvant a été chassé sous vide. Le produit brut a été purifié par chromatographie sur couche épaisse (gel de silice, méthanol/acétate d'éthyle) en donnant la vinblastine (I, 37 mg). Sur la base de l'énamine (50 mg) présente dans le mélange, le rendement dans cette étape est de 70 %.