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pour: Procédé de préparation de nouveaux glucosides cristallisés de la digitale.
Le brevet français Ng 712.282 du 27 Février 1931 de la Demanderesse décrit un procédé qui permet d'obtenir à partir de " digitalis lanata" une préparation cardioto- nique de digitale de nature glacosidique. Les cristaux de ce produit présentaient tous las caractères de l'homo- généité puisque des cristallisations répétées, des repré- cipitations réitérées de ses solutions dans des dissolvants variés n'avaient plus modifié les propriétés de ce copps qui pouvait donc à juste titre être considéré - et en fait
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l'avait été par la suite - comme un composé chimique bien caractérisé.
Les recherches ultérieures de la Demanderesse l'ont cependant conduite à la constatation surprenante qae ce corps est en réalité un mélange et du même coup la Demanderesse a trouvé un procédé de fractionnement qui a permis de le séparer en 3 glucosides cardiotoniques dif- férents, inconnus jusqu'à présent et dont les cristaux sont isomorphes, C'est ce procédé qui fait l'objet de la présente invention, On désignera par la suite les trois nouveaux glucosides sous les noms de glucoside A, gluco- side B et glucoside C et leur mélange de départ sous le nom de mélange cristallisé de glucosides,
Le procédé de fractionnement de ce mélange en ses trois composants A,
B et C consiste à le dissoudre d'abord dans un solvant approprié non miscible à l'eau tel que le chloroforme ou l'acétate d'éthyle auquel on ajoute.? pour obtenir des solutions plus concentrées, un deuxième dissolvant organique qui soit miscible à l'eau, tel que l'alcool éthylique, le méthanol ou l'acétone.
On secoue cette solution mixte avec de l'eau et on obtient un système hétérogène à couches superposées; on sépare ces couches et on poursuit, sur chacune d'elles, dans des concentrations convenables, le même procédé bien connu de partage de corps, dissous entre deux liquides non miscibles entre eux dont l'un est l'eau et l'autre un liquide organique, On répète les opérations jusqu'à ce que les propriétés des fractions successivement obtenues ne varient plus,
La séparation d'un mélange de glucosides de la
EMI2.1
digitale en fractions de différente nature par des opét1o
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de partage entre deux liquides non miscibles entre eux, n'est pas nouvelle en soi;
le brevet allemand 514,096 par exemple mentionne qu'en extrayant par du chloroforme la solution dans l'alcool des glucosides de la digitale à l'état natural, or¯ obtient des fractions de composition variable ; seulement on part ici d'un extrait de digitale trop souillé pour pouvoir cristalliser et on le fractiohne jusqu'à ce que l'un des composants commence à cristalliser et puisse alors être séparé par cristallisation.
Le procédé, objet de la présente invention consiste au contraire à fractionner un produit déjà cristallisé, présentant des critères d'nomogénéité qu'on est habitué à trouver suffisants jusqu'à ce que les propriétés des composants soient cons- tantes, Ce procédé n'a pu être trouvé qu'à la suite de l'observation,faite pour la première fois par la Demanderesse, que certains glucosides de la digitale présentent un isomorphisme si complet que leur séparation par cristallisa- tion fractionnée en devient impossible;
cette observation seule pouvait faire concevoir des essais de dédoublement de préparations de digitale cristallisées et paraissant homogènes, par partage entre deux liquides non miscibles. pour la mise en pratique du procédé, ondissou- dra par exemple le mélange cristallisé des glucosides dans un mélangs de chloroforme et de méthanol et on agitera cette solution avec une certaine quantité d'eau après quoi on laissera reposer ; les proportions des trois solvants à utili- ser sont indiquées plus bas à l'exemple 1.
Le mélange se sépare en trois couches, une couche inférieure cnloroformi- que ( Chl), une couche supérieure d'alcool méthylique aqueux (W) et une couche intermédiaire (Z), constituée par un produit
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non dissous en partie liquéfié, On reconnatt à la réaction de coloration de Keller que la concentration en glucoside A a augmenté dans la couche inférieure (Chl); la zone colorée qui se forme au-dessous de la surface de séparation est beaucoup moins rouge quavec la matière initiale.
En renouvelant 3 ou 4 fois la même opération avec la fraction des glucosides extraite de la solution chloroformique et en ne conservant chaque fois pour le traitement ultérieur que les phases chloroformiques, on obtient, finalement, un produit qui, à la réaction de Keller, donne au-dessous de la surface de séparation une zone brun pur, sans trace de rouge et dont les propriétés ne se modifient plus par un traitement subséquent. Les propriétés du glucoside A ainsi préparé sont récapitulées plus bas,
La concentration en glucoside B, reconnaissabie à la forte coloration rouge à la réaction de Keller de la zone sise au-dessous de la surface de séparation a aug- menté dans la couche intermédiaire.
En répétant les opéra- tions de partage 3 ou 4 fois avec cette fraction, en ne conservant chaque fois pour l'opération suivante que la couche insoluble, on obtient en fin de compte un produit dont les propriétés ne se modifient plus par un fractionne- ment plus poussé. Il est caractérisé à la réaction de Keller par un anneau d'un rouge éclatant. Les propriétés du glu- coside B ainsi obtenu sont décrites plus bas.
La couche supérieure soutenant le méthanol aqueux (W) contient la plus grande partie du gluooside C, à côté d'une petite quantité de glucoside A et d'une quanti- té un peu plus forte de glucoside B, On élimine ces deux
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glucosides en secouant plusieurs fois la couche de méthanol dilué avec du chloroforme. Comme le chloroforme extrait le glucoside A plus facilement que le glucoside B, on extrait jusqu'à ce que la réaction de Keller ne montre plus la zone rouge caractéristique du glucoside B; on obtient ainsi à l'état par le glucoside C qui ne se modifie plus par un traitement plus prolongé; il ne se distingue presque pas du glucoside A à la réaction de Keller et donne lieu à la formation, sous la surface de séparation,d'une zone brune, sans trace de rouge. Les propriétés du glucoside C sont décri- tes en détail plus bas.
On peut aussi effectuer autrement le procédé de séparation; on fait dissoudre d'abord le mélange cristalli- sé de glucosides dans un mélange d'acétate d'éthyle et de méthanol qu'on secoue plusieurs fois avec de l'eau jusqu'à ce que la solution d'acétate d'éthyle ne contienne plus que la glucoside A caractérisé par l'absence de la zone rouge lorade la réaction de Keller. L'extrait aqueux contenant à c7té de méthanol les glucosides B et C et de petites quanti- tés de glucoside A est épuisé avec du chloroforme jusqu'à ce qu'il soit exempt de glucosides A et B, c'est-à-dire ne donne plus de zone rouge à la réaction de Keller; il contient alors le glucoside C à l'état pur.
Le mélange des glucosides A et B contenu dans les extraits chloroformiques est débarrassé du chloroforme et séparé en ses composants à l'aide de l'acé- tate d'éthyle avec le contrôle de la réaction de Keller.
On pourra utiliser pour la mise en pratique du procédé d'autres systèmes couplés de dissolvants qu'on mettra en action d'après les directives générales données ci-dessus. On pourra évidement appliquer la procédé de sépa- ration qui vient d'être décrit non seulement à des produits
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préparés d'après les données du brevet français N 712.282 précité, mais aussi à tous autres produits initiaux préparés par un procédé quelconque à partir de digitalis lanata, à condition que ces produits contiennent bien les trois nouveaux glucosides, par ailleurs,
il n'est plus nécessaire que la matière initiale ait le haut degré de pureté requis pour les produits décrits au brevet français N 712.282. Des produits renferpant encore des corps organiques inertes peuvent conve- nir,à condition que ces impuretés ne provoquent pas un déca- lage des coefficients de partage des glucosides dans les systèmes de dissolvants choisis. Il sera alors nécessaire, après la séparation des glucosides, de procéder à une purifi- cation subséquent en les recristallisant par exemple dans l'alcool ou le méthanol.
Description des trois nouveaux glaoosides A, B et C.
Le glucoside A cristallise dans le méthanol et l'alcool en petites tablettes homogènes minces, étroites et incolores dont la longueur peut atteindre 10 mm; séchées à l'air ou dans le vide, elles sont efflorescentes. Une partie du glucoside se dissout à la température ordinaire dans environ 20 parties de méthanol, 40 parties d'alcool absolu, 200 parties d'acétate d'éthyle, 225 parties de chloroforme et 16000 part les d'eau.
Le pouvoir rotatoire spécifique mesuré en solution dans le dioxane est de 20 D + 24,5g ( c = 4); mesuré dans l'alcool à 95 % il est de Ó 20 + 35,7 (c = 1,88) pour la corps séché à 100 dans D le vide de la pompe à mercure, Dans la réaction de coloration de Keller, le glucoside A donne au-dessous de la surface de séparation une zone brune sans trace de rouge; la couleur de la solution dans l'acide acétique glacial va du bleu au. bleu-verdâtre. par hydrolyse avec des acides minéraux diluée
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en solution alcoolique aqueuse,il donne comme aglucone uniquement la digitoxigénine.
Jusqu'à présent, on na connaissait qu'un seul glacoside cristallisé de la digitale qui donnât comme aglucone uniquement la digitoxigénine, CI est la digitoxine.
Le glucoside A en est cependant totalement différent, comme le montre le tableau, de comparaison suivant:
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<tb> Digitoxine <SEP> Glucoside <SEP> A
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<tb> 120 <SEP> (1920).
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Le Glucoside B cristallise dans le méthanol et l'alcool en petites tablettes homogènes et incolores, minces et allongées dont la longueur peut atteindre 10 mm; elles perdent leur transparence au séchage à l'air ou dans le vide. 1 partie se dissout à température ordinaire dans 15 parties de méthanol, 40 parties d'alcool absolu, 3,500 par- ties d'acétate d'éthyle.550 parties de chloroforme et 700 parties d'eau. Le pouvoir rotatoire spécifique de la substan- ce séchée à 100 dans le vide de la pompe à meroure est,dans l'alcool à 96% de [[alpha]] 20 /D = + 34,8 ( c = 1,91 ).
@
Par la réaction de Keller, il produit sous la surface de séparation un anneau rouge vif et il se dissout dans l'acide acétique glacial avec une couleur allant du
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bleu au bleu-vert. Par hydrolyse avec des acides dilués en solution alcoolique aqueuse, il donne comme aglucone unique*- ment la gitoxigénine. jusqu'à présent on ne connaissait qu'un seul glucoside cristallisé de la digitale, qui donnât comme aglucons uniquement la gitoxigénine, à savoir la gitoxine ( = bigitalinum).
Le glucoside B en est cependant totalement différent comme le montre le tableau de comparaison suivant:
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<tb> itoxine <SEP> (Bigitalinum) <SEP> Glucoside <SEP> B
<tb>
<tb> Solubilité <SEP> dans <SEP> 1 <SEP> partie <SEP> dans <SEP> environ <SEP> 1 <SEP> partie <SEP> dans <SEP> enle <SEP> méthanol <SEP> 4.500 <SEP> parties, <SEP> viron <SEP> 15 <SEP> parties.
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<tb> (1926).
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Teneur <SEP> en
<tb> aglucone. <SEP> 46,8 <SEP> % <SEP> 37 <SEP> - <SEP> 38 <SEP> % <SEP>
<tb>
Le glucoside C cristallise dans le méthanol et l'alcool en petites tablettes homogènes, incolores , minces et allongées, dont la longueur peut atteindre 10 mm.; séchées dans le vide ou à l'air, elles perdent leur transparence, 1 partie se dissout à la température ordinaire dans environ 20 parties de méthanol, 45 parties d'alcool absolu-, 3. 300 parties d'acézate d'éthyle, 1500 parties de chloroforme et 17000 parties d'sau. Le pouvoir rotatoire spécifique de la substance séchée à 1008 dans le vide de la pompe à mercure est, dans l'alcool à 95 %,de Ó 20= + 33,4 ( c = 1,93).
D La réaction de Keller donne sous la surface de séparation une zone brune; dans l'acide acétique glacial, le glucoside C prend une couleur allant du bleu au bleu-vert, L'hydrolyse effectuée avec des acides minéraux en solution alcoolique aqueuse fournit comme aglucons uniquement la lanadigigénine ( digoxigénine).
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on connaissait jusqu'à présent deux glucosides de la digitale dont les aglucones étaient constitués uniquement par la lanadigigénine ( digoxigénine), à savoir la lanadigine (C.mannich, Arch.d. Pharmacie und Berichte der deutschen pharmazeut.
Gesellschaft 268,453) et la digoxine (Smith, Journal of the Chemical Society, March 1930, pag, 508).Le glucoside C est un corps différent de ces deux produits, comme le montre le tableau de comparaison suivant:
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<tb> Lanadigine <SEP> digoxine <SEP> Glucoside <SEP> C
<tb>
<tb> Solubilité <SEP> dans <SEP> 1 <SEP> partie <SEP> dans <SEP> presqu'in- <SEP> 1 <SEP> partie <SEP> dans
<tb> le <SEP> chloroforme <SEP> 300 <SEP> parties, <SEP> soluble <SEP> 1500 <SEP> parties.
<tb>
<tb>
Solubilité <SEP> dans <SEP> 1 <SEP> partie <SEP> dans <SEP> --- <SEP> 1 <SEP> partie <SEP> dans
<tb> l'ean <SEP> 600 <SEP> parties. <SEP> 17000 <SEP> parties.
<tb>
<tb>
Teneur <SEP> en <SEP> aglucone <SEP> environ <SEP> 45 <SEP> % <SEP> 49,2 <SEP> % <SEP> 37-38 <SEP> % <SEP>
<tb>
Toxicité das trois nouveaux glucosides,
Comme on l'a déjà dit dans le brevet français M 712.282 de la Demanderesse, la méthode de Houghton-Straub ne permet pas de déterminer d'une manière précise la toxicité des produits préparés à partie de la digitale, car las résul- tats obtenus varient très fortement, D'après cette méthode, les valeurs des toxicités suivantes ont été obtenues pour le glucoside A 250.000 à 550.000 F.D, pour 1 g. de subst.pour le glucoside B 200.000 à 500.000 F.D. pour 1 g. de subst.pour le gluoside C 200.000 à 500.000 F,D, pour 1 g. de subst, (F.D. = dose grenouille)..
Des résultats plus précis ont été obtenus par des essais de toxicité sur le chat. Comme dose mortelle minima il a été trouvé: pour le glucoside A 0,37 mg pour 1 kg de chat, pour le " B 0,35 " " 1 " " ' pour le " C 0,26 " 1 il " " pour la digitoxine 0.42 " 1 " " "
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EXEMPLE 1
On fait dissoudre 16 parties du mélange cristallisé de glucosides dans un mélanges de 800 parties de méthanol et de 4000 parties de chloroforme ; onsecoue énergiquement cette solution avec 4000 parties d'eau et on laisse reposer quelque temps ; il se sépare 3 couches, une couche inférieure chlorofor- mique ( Chll), une couche intermédiaire de substance non dissouts en partie liquéfiée ( Zl) et une couche supérieure de méthanol aqueux ( W1).
On concentre la couche inférieure ( Chll) dans le vide jusqu'à la moitié, on ajoute 400 parties de méthanol et on agite avec 2000 parties d'eau, Des 3 couches qui se séparent après un moment de repos, on prélève la couche inférieure (Ch12) qui est de nouveau concentrée à la moitié dans le vide, addition- née de 200 parties de méthanol et agitée avec 1000 parties d'eau., On soumet encore deux fois au même procédé les couches chlorofor- miques ( Chlet Chl ) obtenues; on concentre enfin dans le vide
3 4 la dernière couche obtenue (Ch15) qui fournit le glucoside A exempt des -glucosides B et C, avec les propriétés caractéristi- ques mentionnées dans la description qui en a été faite ci-dessus.
Les couches de méthanol aqueux résultant de ces diverses extractions sont réunies à la première ( W1) et extraites 5 on 6 fois avec un volume égal de chloroforme qui élimine de cette solution les glucosides A et B, On concentre la solution aqueuse dans le vide et on obtient le glucoside C avec toutes ses propri- étés mentionnées dans la description précédente. On évapore à sec dans le vide les extraits chloroformiques et on ajoute l'ex- trait sec à la couche intermédiaire obtenue au début ( Z1).
Le produit obtenu est soumis avec le système chloroforme-méthanol- eau aux opérations da partage indiquée? eu début De cette descrip- tion ; la couche intermédiaire formée (Z2) est traitée de la
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même façon encore 3 ou 4 fois et chaque fois ----------- - -- la couche intermédiaire seule est mise en oeuvre, Arrivé au stade Z5 ou Z6' on a entre les mains le glucoside B exempt des glucosides A et C, avec les propriétés mentionnées dans la description précédente.
Ce procédé laisse des solutions résiduelles de mélanges de glucosides; on les évapora dans le vide et on les soumet à un nouveau cycle d'extractions.
EXEMPLE 2:
On fait dissoudre 10 parties du mélange cristal- lisé de glucosides dans un mélange de 250 parties de méthanol et 5000 parties d'acétate d'éthyle; on secoue cette solution avec 5000 parties d'eau et on laisse reposer. Après séparation des couches, on concentre la solution d'acétate d'éthyle
E1 dans le vide à environ 3500 parties ; on ajoute 150 parties de méthanol et on secoue avec 3500 parties d'eau, Après dé- cantation, on concentre la couche E de nouveau à environ
2 60 % de son volume, on ajoute une quantité correspondante de on méthanol, on secoue à nouveau avec de l'eau et/continue à fractionner d'après le même principe.
Arrivé au stade E5 on
5 évapore l'acétate d'éthyle dans le vide et on obtient un glucoside A exempt des glucosides B et C et en tous points conforme à la description qui en a été donnée plus haut. Les extraits aqueux réunis sont extraits avec du chloroforme de la même manière que dans l'exemple 1 jusqu'à ce qu'ils ne contiennent plus que du glucoside C et évaporés dans le vide; le glucoside C obtenu correspond à la description qui en a été faite. Les extraits chloroformiques réunis sont évaporés dans le vide et le résidu sec soumis au fractionne- ment avec le système chloroforme-méthanol-eau décrit dans
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l'exemple 1, en ne travaillant chaque fois que les couches intermédiaires insolubles (Z1 à Z4).
Aprés la 5 extraction. la couche Z est constituée par du glucoside B par et
5 possède les propriétés indiquées pour ce glucoside, Les solu- tions résiduelles de ces opérations de partage sont évaporées dans le vide et soumises à un nouveau cycle d'extractions, soit d'après l'exemple 1, soit d'après l'exemple 2. Les nouveaux glucosides sont susceptibles d'applications thérapeu- tiques.
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for: Process for the preparation of new crystallized digitalis glucosides.
French patent Ng 712,282 of February 27, 1931 by the Applicant describes a process which makes it possible to obtain, from "digitalis lanata", a cardiotonic preparation of digitalis of a glacosidic nature. The crystals of this product exhibited all the characteristics of homogeneity since repeated crystallizations, repeated precipitations of its solutions in various solvents had no longer modified the properties of this copps which could therefore rightly be considered. - and in fact
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had been subsequently - as a well-characterized chemical compound.
The Applicant's subsequent research, however, led it to the surprising observation that this body is in reality a mixture and at the same time the Applicant has found a fractionation process which has made it possible to separate it into 3 different, unknown cardiotonic glucosides. Heretofore, the crystals of which are isomorphic, It is this process which forms the subject of the present invention. The three new glucosides will hereafter be designated by the names of glucoside A, glucoside B and glucoside C and their starting mixture under the name of crystallized mixture of glucosides,
The process of splitting this mixture into its three components A,
B and C is to dissolve it first in a suitable water-immiscible solvent such as chloroform or ethyl acetate to which is added. to obtain more concentrated solutions, a second organic solvent which is miscible with water, such as ethyl alcohol, methanol or acetone.
This mixed solution is shaken with water and a heterogeneous system with superimposed layers is obtained; these layers are separated and the same well-known process for the partitioning of bodies, dissolved between two liquids which are immiscible with one another, one of which is water and the other a liquid, is carried out on each of them in suitable concentrations organic liquid, the operations are repeated until the properties of the successively obtained fractions no longer vary,
The separation of a mixture of glucosides from the
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digitalis in fractions of different nature by opét1o
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partition between two liquids immiscible with each other is not new in itself;
German patent 514,096 for example mentions that by extracting the solution in alcohol of the glucosides of digitalis in the natural state with chloroform, or¯ obtains fractions of variable composition; only we start here with an extract of digitalis too soiled to be able to crystallize and it is fractionated until one of the components begins to crystallize and can then be separated by crystallization.
The process, object of the present invention, on the contrary, consists in fractionating an already crystallized product, exhibiting homogeneity criteria which one is used to finding sufficient until the properties of the components are constant. It has been found that following the observation, made for the first time by the Applicant, that certain glucosides of digitalis exhibit such a complete isomorphism that their separation by fractional crystallization becomes impossible;
this observation alone could lead to the conception of tests for the resolution of crystallized digitalis preparations which appear to be homogeneous, by partitioning between two immiscible liquids. for carrying out the process, for example, the crystallized mixture of glucosides will be dissolved in a mixture of chloroform and methanol and this solution will be stirred with a certain quantity of water after which will be allowed to stand; the proportions of the three solvents to be used are given below in Example 1.
The mixture separates into three layers, a lower chloroform layer (Chl), an upper layer of aqueous methyl alcohol (W) and an intermediate layer (Z), consisting of a product.
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undissolved partly liquefied, It can be seen from the Keller staining reaction that the concentration of glucoside A increased in the lower layer (Chl); the colored area which forms below the separation surface is much less red than with the initial material.
By repeating the same operation 3 or 4 times with the fraction of the glucosides extracted from the chloroform solution and keeping only the chloroform phases for the subsequent treatment, we finally obtain a product which, on the Keller reaction, gives below the separation surface, a pure brown zone, without a trace of red and whose properties are no longer modified by a subsequent treatment. The properties of the glucoside A thus prepared are summarized below,
The concentration of glucoside B, recognizable by the strong red coloration in the Keller reaction of the area below the separation surface, increased in the intermediate layer.
By repeating the partitioning operations 3 or 4 times with this fraction, each time retaining only the insoluble layer for the next operation, a product is finally obtained whose properties are no longer modified by a fraction. ment further. It is characterized in the Keller reaction by a bright red ring. The properties of the glucose B thus obtained are described below.
The upper layer supporting the aqueous methanol (W) contains most of the gluooside C, next to a small amount of glucoside A and a somewhat larger amount of glucoside B. These two are removed.
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glucosides by shaking several times the layer of methanol diluted with chloroform. As chloroform extracts glucoside A more easily than glucoside B, it is extracted until the Keller reaction no longer shows the red zone characteristic of glucoside B; one thus obtains in the state by the glucoside C which is not modified any more by a more prolonged treatment; it hardly differs from glucoside A in the Keller reaction and gives rise to the formation, under the separation surface, of a brown zone, without a trace of red. The properties of glucoside C are described in detail below.
The separation process can also be carried out otherwise; the crystallized mixture of glucosides is first dissolved in a mixture of ethyl acetate and methanol which is shaken several times with water until the ethyl acetate solution has dissolved. contains more than glucoside A characterized by the absence of the red zone in the Keller reaction. The aqueous extract containing glucosides B and C and small amounts of glucoside A next to methanol is depleted with chloroform until it is free of glucosides A and B, i.e. no longer gives a red zone to the Keller reaction; it then contains the glucoside C in the pure state.
The mixture of glucosides A and B contained in the chloroform extracts is freed from chloroform and separated into its components using ethyl acetate with the control of the Keller reaction.
Other coupled solvent systems can be used for the practice of the process which will be operated according to the general guidelines given above. Obviously, the separation process which has just been described can be applied not only to products.
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prepared according to the data of the aforementioned French patent N 712,282, but also to all other initial products prepared by any process from digitalis lanata, provided that these products do indeed contain the three new glucosides, moreover,
it is no longer necessary for the initial material to have the high degree of purity required for the products described in French patent N 712,282. Products still containing inert organic bodies may be suitable, provided that these impurities do not cause a shift in the partition coefficients of the glucosides in the selected solvent systems. It will then be necessary, after the separation of the glucosides, to carry out a subsequent purification by recrystallizing them, for example from alcohol or methanol.
Description of the three new glaoosides A, B and C.
Glucoside A crystallizes in methanol and alcohol in small homogeneous thin, narrow and colorless tablets, the length of which can reach 10 mm; dried in air or in a vacuum, they are efflorescent. One part of the glucoside dissolves at room temperature in about 20 parts of methanol, 40 parts of absolute alcohol, 200 parts of ethyl acetate, 225 parts of chloroform and 16,000 parts of water.
The specific optical rotation measured in solution in dioxane is 20 D + 24.5 g (c = 4); measured in 95% alcohol it is Ó 20 + 35.7 (c = 1.88) for the body dried at 100 in D the vacuum of the mercury pump, In the Keller staining reaction, the glucoside A gives below the separation surface a brown zone without a trace of red; the color of the solution in glacial acetic acid ranges from blue to. greenish-blue. by hydrolysis with dilute mineral acids
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in aqueous alcoholic solution, it gives only digitoxigenin as aglucone.
Until now, only one crystallized digitalis glacoside has been known which gave only digitoxigenin as aglucone, CI is digitoxin.
Glucoside A is however totally different, as shown in the following comparison table:
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<tb> Digitoxin <SEP> Glucoside <SEP> A
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<tb> Solubility <SEP> in <SEP> in <SEP> approximately <SEP> in <SEP> approximately
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<tb> water <SEP> 100,000 <SEP> partmes <SEP> 16,000 <SEP> parts
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<tb> <SEP> rotary power <SEP> [Ó] <SEP> 20 <SEP> +8 <SEP> [Ó] <SEP> 20 = <SEP> + <SEP> 24.5
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<tb> specific <SEP> in <SEP> the <SEP> D <SEP> = + 8 <SEP> D
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<tb> dioxane <SEP> (c = 4) <SEP> (<SEP> digitoxin <SEP>
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<tb> screams. <SEP> of
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<tb> Merck.
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<tb> <SEP> content in <SEP> aglucone <SEP> 47.9% <SEP> 37 <SEP> - <SEP> 38 <SEP>%
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<tb> according to <SEP> Cloetta)
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<tb> (Arch.exp.Pathol.
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<tb> a <SEP> pharmakol. <SEP> 88
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<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 120 <SEP> (1920).
<tb>
Glucoside B crystallizes in methanol and alcohol in small homogeneous and colorless, thin and elongated tablets, the length of which can reach 10 mm; they lose their transparency on drying in air or in a vacuum. 1 part dissolves at room temperature in 15 parts of methanol, 40 parts of absolute alcohol, 3,500 parts of ethyl acetate. 550 parts of chloroform and 700 parts of water. The specific optical rotation of the substance dried at 100 in the vacuum of the meroure pump is, in alcohol at 96%, [[alpha]] 20 / D = + 34.8 (c = 1.91) .
@
By Keller's reaction, it produces a bright red ring under the separation surface and it dissolves in glacial acetic acid with a color ranging from
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blue to blue-green. On hydrolysis with acids diluted in aqueous alcoholic solution, it gives as aglucone only gitoxigenin. Until now, only one crystallized glucoside from digitalis was known, which gave as aglucons only gitoxigenin, namely gitoxin (= bigitalinum).
Glucoside B is however totally different as shown in the following comparison table:
EMI8.1
<tb> itoxine <SEP> (Bigitalinum) <SEP> Glucoside <SEP> B
<tb>
<tb> Solubility <SEP> in <SEP> 1 <SEP> part <SEP> in <SEP> approximately <SEP> 1 <SEP> part <SEP> in <SEP> enle <SEP> methanol <SEP> 4.500 <SEP > parties, <SEP> about <SEP> 15 <SEP> parties.
<tb>
<tb> Power <SEP> rotatoi- <SEP> inactive <SEP> (Cloetta <SEP> [Ó] 20 <SEP> = <SEP> + <SEP> 34.8
<tb>
<tb> re <SEP> specific <SEP> Arch. <SEP> exp.pathol. <SEP> and <SEP> [x <SEP> D <SEP> + <SEP> 34.8
<tb> Pharmakol. <SEP> 112, <SEP> 273
<tb> (1926).
<tb>
<SEP> content in
<tb> aglucone. <SEP> 46.8 <SEP>% <SEP> 37 <SEP> - <SEP> 38 <SEP>% <SEP>
<tb>
Glucoside C crystallizes in methanol and alcohol in small, homogeneous, colorless, thin and elongated tablets, the length of which can reach 10 mm .; dried in vacuum or in air, they lose their transparency, 1 part dissolves at room temperature in about 20 parts of methanol, 45 parts of absolute alcohol, 3.300 parts of ethyl acezate, 1500 parts of chloroform and 17,000 parts of water. The specific optical rotation of the substance dried at 1008 in the vacuum of the mercury pump is, in 95% alcohol, Ó 20 = + 33.4 (c = 1.93).
D Keller's reaction gives a brown zone under the separation surface; in glacial acetic acid, glucoside C takes on a color ranging from blue to blue-green. Hydrolysis carried out with mineral acids in aqueous alcoholic solution provides only lanadigenin (digoxigenin) as aglucons.
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two digitalis glucosides were known until now, the aglucones of which consisted solely of lanadigigenin (digoxigenin), namely lanadigine (C.mannich, Arch.d. Pharmacie und Berichte der deutschen pharmazeut.
Gesellschaft 268,453) and digoxin (Smith, Journal of the Chemical Society, March 1930, pag, 508). Glucoside C is a different body from these two products, as shown in the following comparison table:
EMI9.1
<tb> Lanadigine <SEP> digoxin <SEP> Glucoside <SEP> C
<tb>
<tb> Solubility <SEP> in <SEP> 1 <SEP> part <SEP> in <SEP> almost in- <SEP> 1 <SEP> part <SEP> in
<tb> the <SEP> chloroform <SEP> 300 <SEP> parts, <SEP> soluble <SEP> 1500 <SEP> parts.
<tb>
<tb>
Solubility <SEP> in <SEP> 1 <SEP> part <SEP> in <SEP> --- <SEP> 1 <SEP> part <SEP> in
<tb> the eean <SEP> 600 <SEP> parts. <SEP> 17000 <SEP> parties.
<tb>
<tb>
<SEP> content of <SEP> aglucone <SEP> approximately <SEP> 45 <SEP>% <SEP> 49.2 <SEP>% <SEP> 37-38 <SEP>% <SEP>
<tb>
Toxicity in three new glucosides,
As has already been said in French patent M 712,282 by the Applicant, the Houghton-Straub method does not allow the toxicity of products prepared from digitalis to be determined precisely, because the results obtained vary greatly. According to this method, the following toxicities values were obtained for glucoside A 250,000 to 550,000 FD, per 1 g. of subst. for glucoside B 200,000 to 500,000 F.D. per 1 g. of subst. for gluoside C 200,000 to 500,000 F, D, per 1 g. of subst, (F.D. = frog dose) ..
More precise results have been obtained by toxicity tests on cats. As a minimum lethal dose, it was found: for glucoside A 0.37 mg per 1 kg of cat, for "B 0.35" "1" "'for" C 0.26 "1 he" "for digitoxin 0.42 "1" ""
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EXAMPLE 1
16 parts of the crystallized mixture of glucosides are dissolved in a mixture of 800 parts of methanol and 4000 parts of chloroform; this solution is shaken vigorously with 4000 parts of water and left to stand for some time; 3 layers separate, a lower chloroform layer (Chll), an intermediate layer of partly liquefied undissolved substance (Zl) and an upper layer of aqueous methanol (W1).
The lower layer (Chll) is concentrated in a vacuum to half, 400 parts of methanol are added and the mixture is stirred with 2000 parts of water, From the 3 layers which separate after standing for a while, the lower layer is removed (Ch12) which is again concentrated to half in vacuum, added with 200 parts of methanol and stirred with 1000 parts of water., The chloroform layers are further subjected to the same process (Chlet Chl). obtained; we finally concentrate in the void
The last layer obtained (Ch15) which provides the glucoside A free from the -glucosides B and C, with the characteristic properties mentioned in the description which has been made above.
The layers of aqueous methanol resulting from these various extractions are combined in the first (W1) and extracted 5 or 6 times with an equal volume of chloroform which removes the glucosides A and B from this solution. The aqueous solution is concentrated in vacuo and glucoside C is obtained with all of its properties mentioned in the preceding description. The chloroform extracts are evaporated to dryness in vacuo and the dry extract is added to the intermediate layer obtained at the start (Z1).
The product obtained is subjected with the chloroform-methanol-water system to the partition operations indicated? at the beginning of this description; the formed intermediate layer (Z2) is treated with
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same way again 3 or 4 times and each time ----------- - - the intermediate layer alone is used, Arrived at stage Z5 or Z6 'we have in our hands the glucoside B free of glucosides A and C, with the properties mentioned in the previous description.
This process leaves residual solutions of mixtures of glucosides; they are evaporated in a vacuum and subjected to a new cycle of extractions.
EXAMPLE 2:
10 parts of the crystallized mixture of glucosides are dissolved in a mixture of 250 parts of methanol and 5000 parts of ethyl acetate; this solution is shaken with 5000 parts of water and allowed to stand. After separation of the layers, the ethyl acetate solution is concentrated
E1 in vacuum to about 3500 parts; 150 parts of methanol are added and the mixture is shaken with 3500 parts of water. After decantation, layer E is concentrated again to approximately
2 60% of its volume, add a corresponding amount of methanol, shake again with water and / continue to fractionate according to the same principle.
Arrived at stage E5 on
5 evaporates the ethyl acetate in vacuo and a glucoside A is obtained free from the glucosides B and C and in all respects in accordance with the description which has been given above. The combined aqueous extracts are extracted with chloroform in the same manner as in Example 1 until they contain only glucoside C and evaporated in vacuo; the glucoside C obtained corresponds to the description which has been given thereof. The combined chloroform extracts are evaporated in vacuo and the dry residue subjected to fractionation with the chloroform-methanol-water system described in
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Example 1, each time working only the insoluble intermediate layers (Z1 to Z4).
After the 5 extraction. layer Z consists of glucoside B by and
5 has the properties indicated for this glucoside. The residual solutions of these partitioning operations are evaporated in vacuo and subjected to a new cycle of extractions, either according to example 1 or according to example. 2. The new glucosides are susceptible to therapeutic applications.