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"Prooédé pour isoler, séparer et purifier les composés carbony- liques homologues obtenus par dégradation des stérines et des
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acides biliaires ou de leurs dérivés."
Par dégradation directe ou par degré de stérines et d'acides biliaires ou de leurs dérivés, par exemple avec l'acide chromique, on obtient des fractions acides et des fractions neutres.
Ces dernières sont formées en partie de composés faoilement volatils, en partie d'un mélange de composés oarbonyliques homologues possédant le squelette des stérines, dans lesquels la chaîne latérale en position 17 est scindée soit complètement avec formation d'une cétone cyclique, soit partiellement avec formation de cétones
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ou d'aldéhydes dont le groupe oarbonylique se trouve dans la chaîne latérale. A côté de ces produits les masses réaotionelles de dégradation contiennent encore d'autres composés neutres, entre autres des produits initiaux non attaqués. Il est très difficile d'isoler des produits purs de ces mélanges. Il est vrai qu'on peut séparer des fractions relativement riches en cétones avec des réactifs cétoniques tels que la sémicarbazide ou des composés analogues.
Mais les fractions obtenue$ ne sont pas du tout homogènes. Ce sont les cétones cycliques de la série de l'androstane ou de l'androstène qu'on peut en général le mieux séparer par ce procédé. La séparation des composés carbonyliques homologues supérieurs, en particulier aussi de ceux de la série du prégnane ou du prégnène, est rendue très difficile ou même impossible d'une part à cause de leur grande solubilité, d'autre part aussi parce qu'ils ne se trouvent dans les mélanges en question quen très faibles quantités.
La demanderesse a trouvé qu'il se forme entre autres la prégnénolone (II) et une autre oétone homologue de formule brute C26H42O2 et fondant à 127 , à coté de la trans-déhydro-androstérone (1), par exemple lorsqu'on oxyde les éthers-sels des dihalogénures de la cholestérine avec de l'acide chromique, qu'on élimine ensuite les halogènes et qu'on saponifie. Il faut probablement attribuer à la cétone de formule brute C26H42O2 la constitution d'une nor-cholesténolone (III).
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Il se forme de façon analogue, à côté l'une de l'autre,
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l'androstérone (IV), 7.' épî-al.o-prénanalane (V) fondant à 1700 et 1 épi norcholestanoloxze (VI) fondant à .80, par oxydation des éthers-sels de l'épi-cholestanol.
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Lorsqu'on opère à partir de stérines ou d'acides biliaires dont les groupes OH fixés aux noyaux sont complètement ou partiellement remplacés par des groupes cargbonyliques, la séparation du mélange réactionnel neutre en ses composants est encore plus difficile. Par dégradation il se forme des composés polyen particulier di-curbonyliques homologues qu'il faut séparer les uns des autres ainsi que des produits cétoniques initiaux.
Ainsi par exemple à partir de la cholesténone, de la sitosténone, de la stigmasténone ou de la cincholénone, on obtient entre autres simultanément l'androsténedione (VII) et la prégnène- dione (VIII).
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On obtient aussi des mélanges analogues lorsqu'on opère à partir de stérines ou d'acides biliaires possédant des groupes OH non protégés, ces groupes étant transformés en groupes cétoniques par dégradation oxydanteo
Lorsqu'on opère à partir de stérines non saturas possédant des doubles liaisons libres dans le noyau et le cas échéant des groupes OH protégés, l'oxydation peut donner d'autres groupes cétoniques en position [alpha] par rapport aux doubles liaisons, par exemple en position 6 ou 7.
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La demanderesse a trouvé qu'on peut avantageusement isoler, séparer et purifier les composés carbonyliques homologues qui se forment par dégradation des Serines et des acides biliaires ou de leurs dérivés, lorsqu'on soumet les mélanges bruts ou préalablement purifiés de ces composés carbonyliques homologues ou de leurs dérivés à un procédé d'adsorption sélectif. On fait couler avantageusement les solutions de ces mélanges dans un dissolvant indfférent, par exemple dans le benzène ou ses homologues, dans des hydrocarbures aliphatiques ou isocycliques, dans du sulfure de carbone ou dans un mélange de dissolvants de ce genre, suivant la méthode analytique d'adorption dhromatographique de Tswett, à travers une colonne contenant 1 agent d'adsorption.
On emploie comme agent d'adsorption de préférence l'oxyde d'aluminium, les oxydes, les hydroxydes ou les carbonates des métaux alcalino-terreux, le kaolin, le charbon, le sucre et les produits analogues ou aussi des mélanges de ces produits. Pour le développement du chromatogramme on fait couler ensuite à travers la colonne une certaine quantité du dissolvant initial, d'un autre dissolvant ou de mélanges de dissolvants. Le développement peut avoir lieu jusqu'à dispersion de chacun des composés carbonyliques sur différentes couches de la colonne d'adsorption ou plus loin encore, jusqu'à ce ce que les solutions de chacun des composés oarbonyliques s'écoulent à des moments distincts.
Dans le premier cas on isole séparément le composé adsorbé de chacune des couches du chromato- gramme, couches qu'on reconnaît par leur fluorescence à la lumière ultraviolette; dans le second cas on obtient directement les solutions des différents composés carbonyliques séparéso
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On peut naturellement combiner les deux modes opératoires, de façon que finalement les composés les plus facilement adsorbés soient retenus sur les différentes couches et qu'on sépare les composés plus difficilement adsorbés sous forme des différentes fractions de la solution qui s'écoule du chromatogramme. Pour éluer les différents adsorbats, on peut employer en particulier les alcools, l'acétone et ses homologues, les éthers, les hydrocarbures halogénés au aussi des mélanges de ces dissolvants.
L'élution peut se faire par extractions répétées, ou par extractions continuelles des adsorbats.
On peut aussi effectuer l'adsorption sélective en secouant, en remuant ou en traitant de façon appropriée une solution des composés carbonyliques bruts avec par exemple l'un des agents adsorbants précités. On arrive ainsi à éliminer de la solution les composés carbonyliques les plus facilement adsorbables, qui peuvent être ensuite isolés séparément, soit par plusieurs adsorptions fractionnées, d'après Tswett, soit par d'autres méthodes de purification physiques,par exemple par recristallisation, par sublimation, par distillation sous vide élevé, etc.,.
On peut aussi tout d'abord séparer de manière connue les composés carbonyliques ou leurs dérivés les moins solubles du mélange brut ou préalablement purifié, par exemple par cristallisation, et procéder seulement après à une nouvelle séparation et purification des autres composés carbonyliques par adsorption sélective.
On peut aussi soumettre à l'adsorption sélective le mélange obtenu par oxydation de stérines et d'acides biliaires, formés de composés carbonyliques homologues qui contiennent des groupes
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OH, soit comme tels, soit sous forme de leurs dérivés, par exemple de leurs éthers-sels, de leurs éthers-oxydes ou de leurs halogénures.
Il est souvent avantageux de répéter le procédé d'adsorption sélectif immédiatement après la première adsorption ou aussi après avoir intercalé d'autres phases de purification telles que cristallisation fractionnée, sublimation, préparation de dérivés, etc..
Les exemples suivants illustrent la présente invention sans toutefois la limiter.
Exemple 1
On fait couler une solution benzénique d'une fraction neutre, obtenue par oxydation de l'acétate d'épicholestanol avec de l'acide chromique et saponification subséquente, à travers une colonne d'adsorption préparée de manière connue à partir d'oxyde d'aluminium. Puis on développe le chromato- gramme avec un mélange de benzène et d'héxane (1:1) jusqu'à ce qu'on puisse déceler dans le filtrat les premières traces de cétones, par exemple avec du m-dinitrobenzène et une solution alcoolique d'hydroxyde de potassium.
A partir des premières parties du filtrat on obtient l'épi-cholestanol pur, fondant à 183-184 , après avoir chassé le dissolvant et recristallisé une fois dans l'alcool. Le filtrat suivant, contenant une grande quantité de cétone, obtenu par développement ultérieur du chromatogramme avec un. mélange de benzène et d'héxane est introduit encore une fois dans une nouvelle colonne d'adsorption.
En observant la colonne à la lumière ultraviolette on constate qu'il s'est formé une large zone d'une luminosité claire à côté
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de petites zones étroites. Cette large zone est séparée et éluée à fond avec un mélange en parties égales d'éther et de méthanol. A partir du produit d'élution on obtient l'androstérone pure, fondant à 184 , après avoir chassé le dissolvant et recristallisé dans de l'alcool dilué.
On élue également ce qui reste de la colonne d'adsorption avec un mélange d'éther et de méthanol (1:1). Le résidu de cette élution est adsorbé ensuite de manière analogue en solution benzénique sur de la chaux éteinte à grain fin, puis le chromatogramme est développé avec du benzène. On élue les couches contenant de la cétone, déterminées à la lumière ultraviolette, avec un mélange d'éther et de méthanol (1:1), évapore les solutions obtenues et obtient l'épi-allo-prégnanolone
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fondant à 170 , ainsi éue l'épi norcholestanolone fondant à 1820e par reoristallisation du résidu dans de l'acétone ou de l'alcool dilué.
Au lieu de soumettre les composés carbonyliques contenant des groupes OH libres à l'analyse par adsorption, on peut aussi soumettre leurs éthers-sels par exemple les acétates, les propionates, ou les benzoates de ces composés.
.Exemple 2
On traite les parties neutres obtenues par oxydation de l'acétate du dibromure de cholestérine puis élimination de 1'halogène, avec de la sémicarbazide en solution alcoolique, précipite la plus grande partie de la semioarbazone de l'acétate de déhydroanrostérone et saponifie les semicarbazones plus solubles. On fait couler une solution benzénique du mélange de cétones ainsi obtenu, d'après les indications de l'ex-
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emple 1, à travers une colonne contenant de l' oxyde d'aluminium à grain fin et développe le chromatogramme, en le traitant avec de nouvelles quantités de benzène.
Au bout de peu de temps on peut déceler dans le filtrat des parties ne contenant pas de cétone. On continue de laver la colonne d'adsorption jusqu'à ce qu'on décelé les premières traces de cétones. On élue les couches du chromatogramme contenant les composés à groupes car- bonyliques avec un mélange d'éther et d'acétone, puis on ef- fectue une nouvelle séparation de chacune des fractions obtenues en renouvelant l'adsoprtion. On arrive ainsi à obtenir la pré- , gnénolone et la norcholesténolone ainsi qu'un peu de trans-dé- hydroandrostdrone. Après recristallisation dans de l'héxane
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la trans-déhydroandroxtérone fond â 1529.
La noroholésténolone difficilement soluble peut être cristallisée dans de l'alcool en paillettes brillantes fondant à 126 , tandis que la prégnénolone cristallise dans l'alcool dilué à l'état de fines aiguil- les fondant à 191 .
Exemple
On adsorbe à de 1 oxyde d'aluminium, comme on l'a décrit à l'exemple 1, une solution benzénique des parties neutres obtenues par oxydation de la cholesténone avec de l'acide chromique, et développe ensuite le chromatogramme avec un mélange de benzène et d'héxane (1:1). Des premières parties du filtrat on peut isoler de la cholesténone inchangée. La colonne d'adsorption contient des fractions dicétoniques. Pour les séparer et les isoler on sépare les difiérentes couches formées dans la colonne, puis on adsorbe encore une fois à de l'oxyde d'aluminium les fractions séparées, obtenues par élution avec un mélange de chloroforme et de méthanol.
Par recristallisation dans de l'hé-
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xane, on obtient enfin l'androstènedione pure fondant à 173-174 , la prégnènedione pure sous 2 formes fondant à 1200
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et à 129 ainsi que la nor-cholestènedine-
On peut aussi décomposer de manière analogue en leurs différents composants les mélanges réactionnels neutres qu'on obtient par oxydation par exemple de sitosténone, de stigmasténone, de cincholénone, ainsi que par oxydation par exemple de oholestérine, de sitostérine, de stigmastérine, de cinohol ou de leurs produits d'addition avec des halogènes ou des acides halogènehydriques.
Lorsqu'à la place du cholesténone ou de composés analogues on opère à partir du cholestanone, du sitostanone, du stigmastanone, du cincholone, on peut séparer de manière analogue les produits d'oxydation neutres obtenus en oomposés carbonyliques saturés correspondants, par exemple en allo- prégnanedione fondant à 204-205 et en androstane-dione fon- dant à 133-135 .
Revendications.
La présente invention a pour objet : 1.) Un procédé pour isoler, séparer et purifier les composés carbonyliques homologues obtenus par dégradation des stérines et des acides biliaires ou de leurs dérivés, consistant à sou- mettre des mélanges bruts ou préalablement purifiés de ces com- posés carbonyliques homologues ou de leurs dérivés à un procédé d'adsorption sélectif.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.