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Publication number: BE459072A
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Description


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  MÉMOIRE DESCRIPTIF 
DEPOSÉ A L'APPUI D'UNE DEMANDE 
DE BREVET D'INVENTION la Société dite: IMPERIAL CHEMICAL INDUSTRIES LIMITED Procédé de préparation d'une matière fongistatique. Demande de brevet anglais du 4 Juillet 1944 en sa faveur et en faveur de Mr.P.W.BRIAN. 



   La présente invention se rapporte à la préparation d'une nouvelle substance fongistatique par fongiculture et à son isole- ment à un état pur. 



   Il a été trouvé suivant la présente invention que cer- taines variétés de trichoderma viride Pers.ex Fries. conduisent, lorsqu'elles sont cultivées en milieu convenable, à la formation d'une nouvelle substance fongistatique dénommée viridine. 



   Les variétés spécifiques, productrices de viridine, du   trichoderma viride.   se caractérisent par une production rapide d'un pigment jaune clair ou jaune brunâtre dans le milieu de culture lorsqu'elles sont cultivées dans des milieux contenant de l'azote de nitrate, tels que le milieu de culture de   Czapek-Dox.   



   Toutes les variétés de trichoderma viride qui forment un pigment de cette manière produisent de la viridine en quantités plus ou moins grandes, mais les meilleurs rendements sont obtenus d'une variété sélectionnée par la méthode suivante : 
Des portions de 30 ml chacune d'un milieu producteur préparé de : 
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<tb> 15,0 <SEP> gr. <SEP> de <SEP> dextrose
<tb> .2,0 <SEP> gr. <SEP> de <SEP> tartrate <SEP> d'ammonium
<tb> 2,0 <SEP> gr. <SEP> de <SEP> KH2F04
<tb> 1,0 <SEP> gr. <SEP> de <SEP> MgS04.7 <SEP> H20
<tb> 0,01 <SEP> gr. <SEP> de <SEP> FeS04.7 <SEP> H2O
<tb> 1 <SEP> litre <SEP> d'eau <SEP> de <SEP> distribution
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 et réglé à un pH = 3,5 par une addition d'acide chlorhydrique, sont réparties dans des flacons de 100 ml bouchés par de l'ouate et stérilisés en   autoclave..

   On   inocule à un petit nombre de ces flacons (3 à 5) une suspension de spores obtenues de cultures   d'une   variété pigmentée de trichoderma viride. Ces flacons inocu- lés sont incubés à 25 C pendant 5 jours. Le mycélium est séparé par filtration et le contenu des flacons de la culture est ras-   semblé   
Ce filtrat de culture est ensuite essayé de la manière suivante. Des dilutions sériales d'une série de X 2 reçoivent   en qualité de diluant le "milieu de germination" suivant (12,5 gr de dextrose, 1,0 gr. de tartrate d'ammonium. 1,0 gr de KH2PO4,   

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 0,5 gr. de MgSO.7 H20, 0,005 gr de Fe804.7 H20, 1000 ml d'eau de distribution, réglé à un pH = 3,5 au mpyen d'acide phosphorique). 



  A 2 ml de chaque dilution on ajoute 2 ml d'une suspension de spo- res de botrytis   allii   préparée dans le même milieu de germination. 



  Des taches de ces dilutions inoculées de botrytis   allii   sont dé- posées sur des glissières en verre propres dans des chambres humi- des et sont incubés pendant 18 à 20 heures à 25 C. Les gouttes sont ensuite examinées à l'objectif de faible puissance d'un microscope et les dilutions les plus étendues empêchant la germination des spores de   botrytis allii   sont enregistrées. Une variété productri- ce de viridine active doit produire dans ces conditions un filtrat de culture qui puisse être dilué jusqu'à au moins 1 pour 1000 et empêcher encore toujours la germination des spores de botrytis   allij   
Pour la préparation de viridine à partir de la variété sélectionnée on peut se servir très convenablement d'un milieu de le composition susmentionnée, réglé à un pH = 3,5.

   Pour l'ap- port du carbone, d'autres hydrates de carbone, par exemple la saccharose, la lactose,   l'amidon     ou*le   dextrine, peuvent être employés au lieu de dextrose. 



   Le milieu, après avoir été préalablement stérilisé, est placé dans des récipients convenables, par couches de 0,5 à 2,0 cm de profondeur, et est inoculé en ajoutant à chaque récipient quelques ml de la suspension de spores du champignon choisi. Après une incubation à 25 C pendant quelques jours (4 à 12, suivant l'épaisseur de la couche) on retire le milieu se trouvant au-des- sous de la bourre mycélienne dans le récipient de culture et on le filtre à travers de la mousseline. Le filtrat est extrait deux fois au moyen d'environ   un   dixième de son volumede chloroforme et après   évaporpticn   du chloroforme l'extrait laisse une masse gommeuse rouge brunâtre contenant de la matière cristalline.

   En séparant cette dernière par cristallisation à partir d'alcool éthylique on obtient de la viridine pratiquement pure sous forme d'aiguilles jaunâtres, le rendement étant d'environ 1,0 gr à partir de 68 litres du milieu de culture. Par recristallisation à partir d'alcool éthylique on obtient ce le viridine pure sous forme d'aiguilles incolores. 
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  La viridine a pour formule [C1 1480F)n (il a été trouvé 68,3% de C, 4,3% de H; ClOH803 exige   68,2%   de C et 4,6% de H. 



  Dans les milieux acides (pH = 3,5 ou moins) elle exerce une action   fongistaticue   remarquable qui empêche la. germination des spores de botrytis allii unn. dans des dilutions de 0,001 gr par   ml.   A un   pH supérieur a 3,5 les solutions perdent rapidement leur activité, la perte étant presque instantanée à un pH = 8,0 à 25 C. La viri-   dine ne manifeste point d'activité   antibactérienne   dans des solu- tions neutres (pH = 7.0). 
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  S¯E¯V¯ E N,D¯I¯C¯A¯T¯I¯0¯N¯S 
1) Prociédé de préparation d'une nouvelle matière fon- gistatious la viridine, caractérisé en ce qu'il comprend les opé- rations consistant à cultiver une variété de   trichoderma   viride qui, lorsqu'on la cultive dans le milieu de Czapek-Dox, produit dans le milieu un pigment jaune clair ou jaune brunâtre, à extraire au chloroforme la liqueur filtrée, à éliminer le chloroforme de l'extrait, et à recristalliser éventuellement le résidu. 



   2) Procédé de préparation d'une nouvelle matière fon-   gistatique   la viridine, caractérisé en ce qu'il comprend les opé- rations qui consistent à extraire au chloroforme la liqueur fil- trée produite par une variété de trichoderma   viride   formatrice d'un pigment jaune et à éliminer le chloroforme de l'extrait, ces opé- rations étant suivies éventuellement par une recristallisation du résidu à partir d'un alcool, par exemple d'alcool éthylique.

Claims

3) Procédé suivant la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que la variété de trichoderma viride est sélectionnée sui- <Desc/Clms Page number 3> vant la méthode décrite plus haut.

4) Procédé de préparation d'une matière fongistatique en substance comme décrit ci-dessus avec référence aux exemples cités.

5) A titre de produit industriel nouveau la matière fongistatique dite viridine, préparée par le procédé suivant les revendications préèédentes, ou par ses équivalents chimiques évidents.

Monsieur le Ministre, Nous référant à la demande de brevet introduite le 22 juin 1945 au nom de notre commettante la Société dite: IMPERIAL CHEMICAL INDUSTRIES LIMITED ayant pour objet: "Procédé de préparation d'une matière fongistique" nous avons l'honneur de vous signaler que dans le mémoire descriptif déposé à l'appui de cette demande de brevet, l'expression "gr" devrait être remplacée par l'expression "ug" à la page 2 ligne 41.

Nous vous prions de bien vouloir faire annexer la présente lettre rectificative au dossier de la demande de brevet pour valoir comme de droit et pour qu'une copie en soit jointe a tout copie du brevet qui sera délivrée.

Veuillez agréer, Monsieur le Ministre, l'assurance de notre très haute considération.

LP/MF. OFFICE KIRKPATRICK @