JPS5955192A - 補酵素ｑ１０の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、補酵素ＱＩＯの製造法に関し、更に詳しくは
、培地にインペンテニルピロリン竺（、ＩＰＰ）４よび
ファルネシルピロリン酸（ＦＩ）　Ｐ　、）を添加し、
アルカリゲネスｓ、、ｐ、、、　Ｄ、ｌ　−６０５また
はアルカリゲネスｓ　ｐ、　ＤＩ（−，５Ｌ、！５を用
いて補酵素ＱｉＯを製造する方法に関する。

補酵素Ｑ工。は、生体内に広く分布し、末’ｌＩ４１ｉ
電子呼吸系の電子伝導体として重要な役割を果しており
、しかして近年これが医薬として各種疾病（たとえばう
つ血性心不全など）に対してすぐれた薬理作用、生理作
用を示すことが明らかにされている。従来、補酵素ｑ工
。を得る方法としては、動物または植物の組織から抽出
し精製する方法が知られている。しかし、この方竺は資
源的な制約など種々ρ問題を有している。この他、微生
物を用いる製法も知られている。、たとえば、補酵素Ｑ
ＩＯを産生ずる微生物には、シュードモナス・デニ）　
ＩＪフイキャンス、アグロバクテリウム・トウメファシ
エンス、グルコノバクタ−・サボーキシダンスなどの細
、菌、ロドスピリイリウーム・ルブラ、ロドシュードモ
ナス・カブスレイタ戊などの光合成細菌、ロドトルラ属
、り、リプトコツカス属、スポロボロミセス属、キャン
デイダ属なりの酵母などがあり、また、糸状菌ではアス
ペルギルス・フミガチス、タラトスボリウム・フルバム
、ウステイラコ・ツイアー、ノイロスポラ・クラツサ、
トレ□ メラ属、オーレオバシデイウム属、テイレテイオ□ブシ
ス属、エクソパンデイウム属なζ゛が知・らちで□。

いる。

さらにアルカリ土類金属に属する微生物、たとえばアル
カリゲネス・フェカリスＡＪ２５６０（微工研菌寄第８
４９号）により補酵素Ｑ工。を製造□する方法が知られ
ている（特公昭５１−１９０３４号公報）。しかしこれ
らの方法においては補酵素ＱＩＯの生産性が低（、現状
ではまた満足すべきものではない。

先に、本出願人＋ｉ　ｇＨ’酵素６凡の生産能、の高い
アルカリ土類金属に属す一一を見い出し、特許出願して
いる（特願昭５７．−２６．！５．９２号）。

本発明音らは、該特許出願に、開示されたアルカリゲネ
スｓｐ、　ＤＫ　−６Ｑ　５およびアルカリゲネスｓｐ
、ＤＫ−５１５を用いた補酵素ＱＩＯの生産効率を高め
るべく研究を重ねた結果、従来生閑内には取り込まれな
かったＩＩ’ＰおよびＦ　Ｐ　Ｐが前記両菌株には取り
込まれ、補酵素ＱＩＯの生産性が顕著に改良されること
を見い出した。

・′　　　１ すなわち、本発明の要旨は、アルカリゲネス、、手Ｐ：
２．：・：Ｆ？■ぐ二６０５またはアルカリゲネスＳ　
１〕、　１）Ｋ、、−，５，、，１，５を培養し、生成
した菌体より補、酵素、Ｑ　ｔ。

を採取することから成る補酵素Ｑ１ｏの製造法において
、培地にＩ　Ｉ）　ＰおよびＦＰＰを添加することを特
徴とする製造法に存する。

本発明で用いるアルカリゲネス５　ｐ、　ＤＫ　−６０
５およびアル’％　’　ＩＪゲ永スｓＰ、ＤＫ’５１５
は、それぞれ、微工研菌寄第６３４２号および第６３４
１号として工業技術院微生物工業技術研究所に寄託され
て□ おり、菌学的性質（、′！それ雪゛れ特願昭、５７−２
６５９０号および特願昭５７７２６５９１号に記載、さ
れている。　。

１ これら菌株の培養に際し、培地には使用する微生物が資
化しうる炭素源（たとえばグルコース、糖蜜、酢酸、コ
ハク酸、エタノーノペメタノールなど）、同化しうる窒
素源（たとえば酸１リエキス、ヘフトン、コーンスチー
プリカーーアンモニア、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウムなど）および生育に必要な各種無機塩などを含有
させ、さらにＩ　Ｉ）　１）およびＦＰＰを添加する。

ＩＰＰの添加用は、培地１ｆ当り０．１〜２　ｍＭ、好
ましくは０．５〜１．５ｍＭ、より好ましくは０１７〜
１ｍＭである。

Ｐ　Ｐ　Ｐ　ノ添力帽は、培地ＩＩ！当り０．０５〜１
：＋ｎＭ。

好ましくは０．１〜０．８　ｍＭ、より好ましくは０．
１５〜Ｑ、　５　ｍＭである。

培養は、培地をｐＨ５〜８、好ましくは６二７に調節し
、２０〜４０℃、好ましくは２５〜ｉ５℃において、少
くとも約２日間、好まし□くは艮〜′６日間、好気的に
振とうまたは攪拌して行う。培養後、培養液から常法（
たとえ１よ遠心分離、濾過んど）により菌体を分離する
。得られた菌体中には補酵素ｑ　が豊富に蓄積されてい
るアす、菌体を適当に処理し、菌体に含有されたままの
補ｉ素蚕栄養剤、医薬、飼料などに供することができる
。

また、補酵素ｑ　を菌体から分離するために、菌体は、
生菌体、乾燥菌体または菌体処理物のいずれでも使用で
きる。

補酵素ＱＩＯの単離は、常套の方法で行うことができる
が、その−例を示せは次の通りである：まずケン化する
ためにメタノール、水酸化ナトリウムおよびピロガロー
ルの混液を菌体含有液に添加し、６０〜９０°Ｃで１〜
２時間還流加熱抽出する。次いで、抽出液をｎ−ヘキサ
ンなどの溶媒で抽出し、溶媒相を水洗し、脱水した後、
濃縮する。濃縮物□をシリカゲルなどのカラムに添加し
、ベンゼンなどの溶媒で展開すると補酵素Ｑ□。が溶出
する。補酵素ＱＩＯを含む両分を濃縮乾固し、エタノー
ル可溶部分を冷却放置すると赤黄色の補酵素Ｑ１ｏ粗結
晶が得られる。・さらにエタノールから再結晶をくり返
すと補酵素Ｑ１０の純結晶が得られ乞。どのほか、包接
化合物による分離、分子蒸留などを行うことも効果的で
ある。

次に実施例および比較例を示し、本発明を具体的に説明
する。

実施例 グｈｔｒ−ｙ、’２０”ｉ、ＫＨ２Ｐ　０４２．１　ｇ
、Ｎａ２１１Ｐ０４−１２　”’２０１２９　、”９　
ＳＯ，ｉ　、７■−■２００．３　！、Ｎａ　２　Ｓ　
Ｏ４ｏ、、ｓ゛グ、′Ｍ４Ｃｌ′１ｇ、酵母エキス１ｙ
、Ｉ　ＰＰ　Ｑ、旧ｍＭおよびＦＩ’　Ｐ　Ｑ、　２　
ｍＭを水道水１１に溶解して培地とした。この培地１０
０ｍ７！のｐＩ−ＩをＩＮ硫酸またはＩＮ水酸化ナトリ
ウム溶液により７．０に調節した後、５００　ｍｌ三角
フラスコに注入し、殺菌した。

」二記と同一組成の培地を用い、試験管で前培養したア
ルカリゲネスＳｌ）、　ＤＫ　７６０５を上記フラスコ
に接種し、培養温度３０℃において、２２０ｒ　ｌＢｎ
で回転振とう培養した。

７２時間培養した後、培養液の補酵素ＱＩＯの濃度を液
体クロマトグラフィにより測定したところ乾燥物１７当
り補酵素Ｑ□。２．４ｍ！７が含まれていた。

比較例１ １１）　ＰおよびＦ　Ｐ　Ｉ）を添加しない培地を用い
る以外は実施例１と同様の手順を繰り返し、乾燥物１７
当り補酵素Ｑ□。２．０ｍグを得た。

実施例２ アルカリゲネスＳＰ、ＤＫ−６０５の代りにアルカリゲ
ネスｓｐ、ＤＫ−５１５を用いる以外は実施例１と同様
の手順を繰り返して乾燥物１７当り補酵素ＱＩＯ１，、
７ｍグを得た。

比較例２ アルカリゲネスｓｐ、　Ｉ）Ｋ　−６０５の代りにアル
カリゲネスｓｐ、　ＤＫ−５１５を用い、Ｉ　Ｉ）　Ｉ
’およびＦ　Ｐ　Ｉ）を添加しない培地を用いる以外は
実施例１と同様の手順を繰り返して乾燥物１７当り補酵
素Ｑ１ｏ１．４　ｍ！を得た。

特許出願人　ダイキン工業株式会社 代　却　人　弁理士　前出　葆　（外２名）手　　続　
　補　　正　　書　（自発）昭和５７年１１月　８日 特許庁長官殿 ２、発明の名称 補酵素Ｑ２．、の製造法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　大阪府大阪市北区梅ａ１１丁目１２番３９号新阪
急ビル 名称　（２８５）　　ダイキン工業株式会社代表者　山
　１１１　　　稔 ４、代理人　〒５４１ 住所　大阪府大阪市東区本町２−１０　　本町ビル内氏
名　弁理士　（６２１４）　　青　山　　葆　　（ばか
２名）５、補正命令の１旧τ１：（自　発） ６、補正の対象： 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、補正の内容 明細書の発明の詳細な説明の欄中、次の箇所を補正しま
す。

（１）　３真下から３〜２行、１従来生菌内には・・・
・・・なかった］を削除。

（２）　４頁１６〜１７行、「グルコース、稠密、」を
削除。

（３）　４頁１８〜１９行、「酵母エキス、ペプトン、
コーンスチープリカー、」を削除。

（４）　６頁１８行、「グルコース２（１８ｊを「グリ
セロール５ｇＪと訂正。

（５）　６頁２０行、「酵母エキス１ｇ、」を削除。

（６）　７頁１行、ｌ”０．２ＪをＪｏ、６Ｊと訂正。

以　１ニ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アルカリゲネス５Ｐ９Ｄ外、、、、！３０５または
   アルカリゲネスＳ　Ｉ）、　ＤＫ　−５１５を、樟養し
   、生成、Ｌ、た菌体より補酵素ｑ□。を採取す否ことか
   ら感る補酵、素Ｑ１ｏ・の製造法において１．培地番、
   ごインペイテニルピロリン酸およびファノーネｚノ、ヒ
   、ピロ、リン酸を添加すすることを特徴とする製、造法
   。、　　、　　。 ２、アルカリゲネスｓ　ｐ、、ＤＫ　、＝　、、６　、
   Ｑ　、、５を」、１．る特許請求の範囲第１項記載の、
   製造法。 ３、アルカリゲネスｓ　ｌ）＝　ＰＫ−５１５を用いる
   特許請求の範囲第１項記載の製造法。