BE495401A - - Google Patents

Info

Publication number
BE495401A
BE495401A BE495401DA BE495401A BE 495401 A BE495401 A BE 495401A BE 495401D A BE495401D A BE 495401DA BE 495401 A BE495401 A BE 495401A
Authority
BE
Belgium
Prior art keywords
sep
antibiotic
broth
solution
butanol
Prior art date
Application number
Other languages
French (fr)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Publication of BE495401A publication Critical patent/BE495401A/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P29/00—Preparation of compounds containing a naphthacene ring system, e.g. tetracycline
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/59—Streptomyces rimosus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

       

   <Desc/Clms Page number 1> 
 



  PERFECTIONNEMENTS APPORTES AUX PROCEDES POUR LA PREPARATION D'ANTIBIO-   TIQUES...   
 EMI1.1 
 



  Yinv6nticl1 est relative a la. préparation de nouveaux antibiotiques utiles; et elle concerne plus particulièrement;, des procédés pour "l'obtention de ces produits par pour leur réc:.upêraticn, leur concentration à partir des solutions brutes y compris les bouillons de ferne-ntationi leur purification et la. préparation de leurs sels. Les antibiotiques et leurs sels;, 
 EMI1.2 
 obtenus selon 1 invention peuvent se présenter sous forme de solutions di- luées, de concentrats bruts ou à l"'état cristallise pur. 



  L'" a:ntibiotique est J?>tenu, au cours de la culture dans des condi- tions réglées s. pertir dune espèce de (, qui na pas encore été décrite jusque ici et qui est dénommé &to1JVcesûsuo La description de cet o.t'gal1isme en suivant la méthode adoptée par Bergey dans son 'Xaiual cf determinative Bac sixième édition, pages 929-933:; est donnée ci- dessous 
Les caractéristiques de la culture de cette espèce, voisine du 
 EMI1.3 
 Stre3,- mzees al-bus. en diffèrent par plusieurs particularités:, basées sur la souche d:> isolement;

   S 3279-et sont indiquées ci-dessous sous forme d'un ta- bleau (quand les couleurs sont. suivies de R, on se réfère à la table des cou- 
 EMI1.4 
 leurs donnée dans "Pddgiïa7j Color Standards and Les indications données sont basées sur les   constatations   faites avec six tubes ou plaques. 

 <Desc/Clms Page number 2> 

    



  COULEUR   
 EMI2.1 
 MOI" Degré de croi--- 1.1:tceli11L1 :tr3- Pi-Eien'o - milieu sance rien et spo- soluble J."emarques 
 EMI2.2 
 
<tb> ¯¯¯ <SEP> res
<tb> 
<tb> Plaques <SEP> Modère <SEP> entre <SEP> blanc <SEP> jaunâtre <SEP> Colonie <SEP> plate; <SEP> bords <SEP> ir-
<tb> 
 
 EMI2.3 
 glucose C, bon et gris p2.- très P8,- réguliers; surface lisser 
 EMI2.4 
 
<tb> asparagi- <SEP> La <SEP> plupart <SEP> le <SEP> (R) <SEP> le <SEP> sporulation <SEP> légère; <SEP> myce-
<tb> 
<tb> ne <SEP> agar <SEP> subnergé <SEP> lium <SEP> aérien <SEP> léger; <SEP> envers
<tb> 
<tb> presque <SEP> jaune; <SEP> ocre <SEP> (R)
<tb> 
<tb> 
<tb> au <SEP> centre; <SEP> chamois <SEP> colo-
<tb> 
<tb> nial <SEP> aux <SEP> bords; <SEP> spirales
<tb> 
<tb> très <SEP> nombreuses;

   <SEP> conidies
<tb> 
<tb> 
<tb> en <SEP> chaînes <SEP> 0,6 <SEP> à <SEP> 0,7 <SEP> x
<tb> 
 
 EMI2.5 
 0, (3 â 9!; courtes et cylï.dritess plaques de 
 EMI2.6 
 
<tb> . <SEP> dilution: <SEP> colonies <SEP> pour
<tb> ainsi <SEP> dire <SEP> semblables;
<tb> Colonies <SEP> isolées: <SEP> ensenbles <SEP> pelliculaires <SEP> ou <SEP> dispersés <SEP> de <SEP> grands <SEP> amas <SEP> de
<tb> spirales; <SEP> odeur <SEP> de <SEP> terre.
<tb> 
<tb> 



  Gélatine <SEP> modéré <SEP> blanc <SEP> aucune <SEP> liquéfaction <SEP> modérée
<tb> 
<tb> lait <SEP> de <SEP> bon <SEP> pellicule <SEP> blanc <SEP> gri- <SEP> partie <SEP> aucune <SEP> hydrolyse <SEP> ou <SEP> peptournesol <SEP> épaisse <SEP> sâtre <SEP> inférieure <SEP> Ionisation; <SEP> le <SEP> pH <SEP> est <SEP> in-
<tb> (à <SEP> 28 ) <SEP> du <SEP> tube <SEP> changé.
<tb> plus <SEP> légère <SEP> que <SEP> le
<tb> repère
<tb> 
<tb> (à <SEP> 37 ) <SEP> très <SEP> bon <SEP> blanc <SEP> gri- <SEP> partie <SEP> su- <SEP> aucune <SEP> hydrolyse <SEP> ou <SEP> pep-
<tb> 
 
 EMI2.7 
 sâtre périeure Ionisation;

   le pu a pas- du liquide se de 6,,l a 6,6-7? 02. 
 EMI2.8 
 
<tb> presque
<tb> noire
<tb> 
<tb> glucose <SEP> modérée <SEP> plus <SEP> clair <SEP> brun <SEP> jau- <SEP> envers <SEP> presque <SEP> orange
<tb> 
 
 EMI2.9 
 eùgz-r sec, sur- du gris Nou- nâtre (cl1I'o:WD:te) de sine CR) et face craque- ris pâle orange OC1'91.:;;:

   (R) 
 EMI2.10 
 
<tb> !ce <SEP> par <SEP> crois- <SEP> (R)
<tb> sance <SEP> conti-
<tb> 
 
 EMI2.11 
 melle de bij- 
 EMI2.12 
 
<tb> phes <SEP> végétatifs
<tb> 
<tb> agar <SEP> pauvre <SEP> aucun <SEP> my- <SEP> jaune <SEP> très <SEP> envers <SEP> presque <SEP> chamois
<tb> nutritif <SEP> celium <SEP> aé- <SEP> faible <SEP> et <SEP> jaune <SEP> de <SEP> miel <SEP> (R).
<tb> rien;

   <SEP> cireux
<tb> 
 
 EMI2.13 
 bout de modéré plissé blanchâ- légerenent sycelium presque ocre 
 EMI2.14 
 
<tb> pomme <SEP> de <SEP> tre <SEP> à <SEP> gris <SEP> jaunâtre <SEP> fauve <SEP> (R)
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> terre <SEP> pale <SEP> (R)
<tb> 
 
 EMI2.15 
 nalate de pauvre, plat aucun 1JI..yce- aucun 
 EMI2.16 
 
<tb> calcium <SEP> lium <SEP> aérien;
<tb> 
<tb> colonie <SEP> pres-
<tb> 
<tb> 
<tb> que <SEP> jaune <SEP> de
<tb> 
<tb> Mars <SEP> CI;.)
<tb> 
 

 <Desc/Clms Page number 3> 

    COULEUR   
 EMI3.1 
 
<tb> Degré <SEP> de <SEP> crois- <SEP> Mycélium <SEP> aé- <SEP> Pigment
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Milieu <SEP> sance <SEP> rien <SEP> et <SEP> spo- <SEP> soluble <SEP> Remarques.
<tb> 
<tb> 
<tb> res
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> plaques <SEP> pauvre;

  , <SEP> très <SEP> peu <SEP> de <SEP> aucun <SEP> légère <SEP> hydrolyse
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> d'amidon <SEP> mince <SEP> mycelium <SEP> aé-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> rien; <SEP> colo-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> nie <SEP> jaune
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> cannelle
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> clair <SEP> (R)
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> agar <SEP> aucun
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> synthé-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> rique
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Cellulose <SEP> aucun
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Milieu <SEP> modéré <SEP> à <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> pâle <SEP> envers <SEP> presque <SEP> orange <SEP> de
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> d'Emerson <SEP> bon; <SEP> sur- <SEP> pâle <SEP> (R) <SEP> ;

   <SEP> co- <SEP> brun <SEP> zinc <SEP> (chromate <SEP> de <SEP> Zn)
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> face <SEP> fen- <SEP> lonie <SEP> en <SEP> masse <SEP> jaunâ-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> dillée <SEP> en <SEP> presque <SEP> jaune <SEP> tre <SEP> (R)
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> plusieurs <SEP> de <SEP> miel <SEP> à <SEP> cran-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> petites <SEP> piè- <SEP> ge <SEP> de <SEP> zinc <SEP> ou
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> ces <SEP> éventuel- <SEP> orange <SEP> ocreux
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> lement <SEP> (R)

  
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Bouillon <SEP> modéré <SEP> avec <SEP> jaune <SEP> réduction <SEP> du <SEP> nitrate <SEP> de- <SEP> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Dextrose <SEP> une <SEP> pell <SEP> i- <SEP> puis <SEP> faible <SEP> à <SEP> forte <SEP> dans
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> nitrate <SEP> cule <SEP> plusieurs <SEP> tubes
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Cette <SEP> espèce <SEP> diffère <SEP> de <SEP> S. <SEP> albus <SEP> des <SEP> manières <SEP> suivantes:

  
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> S. <SEP> albus <SEP> (Rossi <SEP> Doria <SEP> amend. <SEP> Krainsky) <SEP> S. <SEP> rimosus
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Waksman <SEP> et <SEP> Henrici
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 1. <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> abondant <SEP> 1. <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> pauvre
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 2. <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> blanc <SEP> 2. <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> non <SEP> pas
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> d'un <SEP> blanc <SEP> pur <SEP> mais <SEP> pres-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> que <SEP> d'un <SEP> gris <SEP> pâle <SEP> (R)
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 3.

   <SEP> pas <SEP> de <SEP> fendillement <SEP> de <SEP> la <SEP> colonie <SEP> 3 <SEP> , <SEP> quand <SEP> une <SEP> croissance <SEP> vigou-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> reuse <SEP> se <SEP> produit, <SEP> les <SEP> colo-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> nies <SEP> se <SEP> fendillent, <SEP> d'abord
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> à <SEP> la <SEP> périphérie <SEP> et <SEP> ensuite
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> sur <SEP> toute <SEP> la <SEP> surface <SEP> et <SEP> la
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> couche <SEP> sporifère <SEP> se <SEP> craquel-
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> le <SEP> en <SEP> petites <SEP> pièces <SEP> qud <SEP> se <SEP> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> détachent <SEP> par <SEP> la <SEP> croissance
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> continuelle <SEP> des <SEP> hyphes <SEP> de
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> dessous.
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 



  4. <SEP> Le <SEP> lait <SEP> est <SEP> pentonisé <SEP> après <SEP> coa- <SEP> 4. <SEP> Le <SEP> lait <SEP> 11.' <SEP> est <SEP> pas <SEP> hydrolyse
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> gulation <SEP> ni <SEP> peptonisé.
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 



  5. <SEP> Croissance <SEP> sur <SEP> agar <SEP> synthétique <SEP> 5. <SEP> Aucune <SEP> croissance <SEP> sur <SEP> l'agar
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> abondante <SEP> et <SEP> étalés <SEP> synthétique.
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 



  6. <SEP> colonies <SEP> sur <SEP> la <SEP> fécule <SEP> de <SEP> pommes <SEP> 6. <SEP> Mycelium <SEP> est <SEP> presque <SEP> ocre
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> de <SEP> terre. <SEP> fauve <SEP> (R).
<tb> 
 

 <Desc/Clms Page number 4> 

 
 EMI4.1 
 



  Le nom spécifique provient de i'lTi .Ss.#.S ce qui signifie 11 crac.luelélf , à cause de l'aspect fendiller craquelé de certaines colonies. 



  Il est à nober (lue pour la production de ces antibiotiques on ne désire pas se limiter à ce ou Go ces organismes parbiculiersy qui correspon- dent a la description indiquée plus haut et qui ont été do'nnés uniquement 
 EMI4.2 
 pour des raisons explicatives. On désire Également y inclure les organismes 
 EMI4.3 
 qui sont des espèces mutantes obtenues à partir du ou des organismes susdits par des moyens de mutation tels que des rayons X, des rayons ultra--rdolets, 
 EMI4.4 
 des moutardes d'azote, etc.. 



  Les produits, obtenus selon l'invention, partagent avec les anti- 
 EMI4.5 
 biotiques préparés è. partir d'autres streptomyces la propriété d'avoir un 
 EMI4.6 
 spectre antibiotique étendu, surtout parmi les bactéries de la gamme néga- tive de Gram. 
 EMI4.7 
 



  Paimi les orgro1iSQes, dont la croissance est ipl1ibitée par des concentrations très faibles des nouveaux antibiotiques on peut citer les Sl1Í- vants: le Aerobacter aer,enes, le Aerol,1'1,cter ero zeres ou le Salmonella m- ratX)2hv A résistant à la st-eptotl1ricLLw, le laJzzo==*&e¯¯pe,raki%h±¯à ou le ;almonel 7..a para ;yphi.

   B résistant à la stJept011lycille, le Sa.J.:8onella paratypIJJ, 3 lEscherichia eoli,le Pceudomonas .ê&±"1:i:.10sa.? le zF 3 albus le 3tap-Îlvlococqus aure1f., le 3aCÍllus subs-ï s, le Bacillus :my:coid&, 1'Eber thellajtyphosay le Shisella. po.Í'c.d18e::'1teri, le zle'Dsiella pneumoniae. ou la $c'1lonella pullorum, résistant su c'tilorsnphenicol 
 EMI4.8 
 Le tableau suivant montre les spectres comparatifs de diverses 
 EMI4.9 
 préparations de streptomycine;, sti=e=ototl?oeichie, chloramphenicol et aurcomyoi- ne et des antibiotiques préparés selon la présente invention. L' 6,ct:L{ité des diverses préparations antibiotiques utilisées est exprimée de deux manières: l) en unités de dilr-tion i coli et./'ou 2) en unités chlorampheniool par milli- 3à cmJ± . On entend par unité de c:ilL t3o:. =, oLz.

   (UDG) par milligramme, le vo- lume maximum de bouillon nutritif en millilitres dans lequel un milligramme de la préparation antibiotiques (qui peut avoir un degré de pureté variable) peut être dilué et qui, en étant inoculé svec une dilution 10-6 (PUlle culture de 18 heures de "coli ayant poussé dsns les mêmes conditions, ne présente néanmoins aucune croissance bactérienne à la fin ci'u:i1e incubation de là heu- res a 7  a Pûr unités chlorsnphénicol ( ,il.) parmilligrsime pn entend le résultat (i'un essai pour lequel on se sert eoùzae organisme dressai du Klebsiella pneumoniae, PCI 602, et comme milieu dressai d'un bouillon :.' épreu- ve antibiotique du Laboratoire biologique de 3ëltimore, préparée selon la f croule de la Food a.nd Drug Administration pour le bouillon d'ép::'euve turbi# ,-iI.l6trique pour la streptomycine.

   La m.étl1oë:.e adoptée' pour l'essai es celle c'te 1-1c Mebor" J.R. (JoBiolo Ghen, Vol. 153 ? pages 2L;,9-25, avril 19l+4) pour laquelle on a utilisé 10 mg de chlorrmphenicol nosnalisé et cristallisé ::;:8-1' litro. 

 <Desc/Clms Page number 5> 

 
 EMI5.1 
 TABLEAU 1 
 EMI5.2 
 Concentrations de la préparation antibiotique par milli- litre cPagar nutritif nécessaire pour empêcher la crois- sance bactérienne à la surface de plaques de Pétri. 



  1. Antibiotique :2..ia-réor:cine :3-Cllloro- 14.Strep- :5. Strep- sui;riOEi'i 1 ? ixi- : amphoni- tothri- toBTyci- vention col cille ne LDC/1né , g Ch l oro 'TJDC/ir4&-,. : 0 liloro-UDC/-. 0 hl o-" tc/i. Ti-D 0/mg. tl/T"lÔ. Ullpg 1 86 . ru ..... / 
 EMI5.3 
 
<tb> 
<tb> 
 
 EMI5.4 
 2 65 3840 7500 :1000: 1000: 2200 4000 ...., ¯¯¯-¯¯ ¯-¯¯¯ ; -¯¯¯ , --- ; ---....¯¯- e .r....------ a L¯'.1 chlore 't1, UDC Chio- UDG Chio- HDC UDO ro u. ro t1 . r. , lTli20 â, -2 2-6 J..2-20 344 1-2 4-la : 7e5 1-5 <5 2-6 12-20 e J. f-'.r'!ô3.i.ov.7C. 



  173 120-40f 65 192-384 375- 100- 100 220-2200 200 750 1000 S.pare.- dysente" rixe 1 1 '1 4 7,5 ici 5 2-6 4 K. pneuiM- '-bzz niae 132 24   > 5 (51 < 2 1,0   e o   134 2-5 z a 3¯9zri5-3rf5a5-?o 10 2-6 20-40 s;jul,ioz<oe1 136 tu .-65 3S 75 10 z 40-200 $JÇ,1 ±¯û5TiJbÙ là9 2-5 6-65 3S-192 75-375 5-10 5 22-110 20-40 'L.coli 21 2 5 6-65   1,'-.3 z   10 t 10 6 20-40 A.aeroge- nés 2 a os2 ¯ \0,5 <4 . a o 5. \5 2-6 zelf ? ;

   Proteus Sp. 20-40 13o 3jo   3U/,,^ :750- 10 ' 10 %-lu 4-12 ... 3840 7500 Monilia aI bicans : 6o â .o .., ooo2z . o00 ô00 looo 22¯00 a2 , o00 s * au+eus 3 1-2 4-5 o , 5 4 : ' 5-in 10 6-11 S.alLlus 5-1 4 3S-192f 75 z.0 10 6-H 2 suiD.til' ruz .7 >6C) , 65 38-192:7,5-75 1-5 e 5 : 22-110 12 

 <Desc/Clms Page number 6> 

 
 EMI6.1 
 = , lyeoidos 1" i 0,2 o,E t <o; 5 r ± il-5 1 1 110-220 12-2' 2.subtilis t t 219 :a,2-: 0, 1-3 2 a   <0 , 3 4 1-3 t a * (5 : 1-2 <2 
 EMI6.2 
 
<tb> : <SEP> 1,0 <SEP> 1,0 <SEP> :
<tb> 
 
 EMI6.3 
 1. - An, Ob' t. M . 0" brute "" "1 , "1 II . l. - Antibiotique - Matière brute préparée coBEie C2..l1S - exeY,lp..t.e II CÎ- selon l'invention dessous, le produit   précipite   avec un pH=9   étant   filtre, remis en suspension dans l'eau et séché 
 EMI6.4 
 après congélation. 



  2. - Aureomvcine - Chlorhydrate cristeJJ¯isé 3 . - Ciiloraùpheaiicol - Cristallise /. # Streptoth.rici>.1e - Sulfate de streptothricine (ex helianthate cris- tQ1lisé, SOO 1;/ù.g streptomycine) 3. - St:i.e:ptor.;vci..'1e - Sulfate de stTeptoiycine (750 u/rr..g de streptoI--   cille) .    



  Un   intérêt     additionnel     présente     Inactivité   observée pour -une série 
 EMI6.5 
 do :1Íco-o:;:,s 1Ís.TD.e quand on se sert di l' 211t.i'biotique à l'état cristallisé. 



  Il est 8. noter que les différences entre les résultats obtenus avec la natiëre N.lûe ,!.."1 la oCÈ.u7..' rlS' .7.5 e'L24''E':.1'i: G 'i'e 'GZ'"'222eS c. C!BS ipL t"e'G8S G'ü1 se   trouvent     dans   la   matière     brute.   
 EMI6.6 
 .AB1E.AU- II 
 EMI6.7 
 
<tb> Poids <SEP> du <SEP> produit <SEP> antibiotique <SEP> obtenu <SEP> selon <SEP> 'invention <SEP> et <SEP> l'état
<tb> 
 
 EMI6.8 
 cristallise nécessaire pour produire l'in11ibition complète de le or- 
 EMI6.9 
 
<tb> ganisme <SEP> dressai.
<tb> 
<tb> 
<tb> 



  Espèce <SEP> meg/ml.
<tb> 
<tb> 



  A. <SEP> aerogenes <SEP> 1. <SEP> 0
<tb> 
 
 EMI6.10 
 1± lév i iel 1 a pneiamoi-iae 3.0 E.coli 5.0 1 , tjçp#io s a, 3.0 S.parat-pIiî.iA 1.0 5,p#,ra,tàTplii±1 1.0 S.paradysentsriae 1.0 S.p'ullorum 10.0 i# soEJtilis (7j)A 219) 3 .0 
 EMI6.11 
 
<tb> S.albus <SEP> 1.0
<tb> 
<tb> S.aureus <SEP> @ <SEP> 1.0
<tb> 
<tb> M.albicans <SEP> 1000
<tb> 
<tb> Proteus <SEP> sp. <SEP> 1000
<tb> 
 
 EMI6.12 
 Ps.aerug10sa 100 Br . b#.lci'..isepticus 3.0 
 EMI6.13 
 Une autre méthode pour distinguer l' a;n.tibiotique, préparé selon l' L"'1ve:J.tion, d'autres antibiotiques est 12. détermination de son. action sur des variétés de bactéries rendues résistances à divers   antibiotiques   par leur trans- fert par portions dans des bouillons   contenant   des   concentrations   progressive- 

 <Desc/Clms Page number 7> 

 
 EMI7.1 
 :z#:

  ='; croissants s deis mtibiotiqu-es par lc'nnOlt la variété ol'3i '""Jle2 'J C¯'l,1 3::::' illisible a tous les :? û1tJ10Î'! slleS, Pour Inexpérience ci-dessous on plan- a. ; un disque de 12 D...1l. :.0 papier filtrant stérile dan.:. un horcillo:.l #.2 cul- -Cura de l' 6:lTGibiotique et on le pose au centre de la surface d'une plaque 
 EMI7.2 
 nutritive d'agar. Sur le disque on recueille des cultures de Aerobacter ae- 
 EMI7.3 
 rogenes l) sensible au cliloi<ezphenicol, à la streptomycine et à la s Lrepto- 3..ric.ne, 2) résistant à la streptomycine;, 3) résistffiTG à ? la streptothrici- ne, ;':.) résista!.T.t au chloremphe=lcol* Après une incubation de 18 heures à. 



  37 , on trouve des sones d'inhibition pour toutes les cultures excepté celle qui était résistante au èhlor#ûphenicol, ce qui distingue 1'8ltibiotique, préparé selon l'invention;, de la sti?eptoh3-cbie et de la streptothricine. Il se distingue toutefois du ohloramphenicol par analyse polarigraphique par la- quelle la demi-onde caractéristique du chloramphenicol (pour un pH de 4,5 environ -0, G5 volts par rapport au puits de mercure mais normalise interieu- =": ûi1') n'était pas observée. 



  La toxicité de l' ^iîl o ? cue9 préparé selon l'invention, peut être estiEiée par rapport aux autres antibiotiques en se basant sur les consi- dérations suivantes. Une préparation de cet aDGibiotique, comparée a255 -c./'s:. de cI11018J#.I?he:nicol et à. 2000 u/mg de s rep'coi ci.e avait un ID 0 de .3,: 1:?',' quand elle était injectée dans les veines Ct'ti=.2F.' souris de 20 grs. ce qui correspond a 0,Ù93 Big de chloramphenicol et 7 mg de streptomycine. Ces anti- biotiques ont un LDO' pour une souris de 20 gruz respectivement de 0,6 5#g et de 2,5 11:.g. L'elltibiotique, préparé selon l',¯u er.i,.o2 et a l'état cristal- liss et quand il est injecté dans les veines a un IDO de 3,0 Ing pour une sou- ris due 20 Gr et 1J.:l ID 50 de L, 0 Big pour une souris de 20 gr.

   Pour ci'autres 0ôsci3 on a trouvé que le LD 0 intraveineux pour le chlorhydrate de cet anti- biotique est équivalent à 103 ug du composé siaphotérique cristallisé par poids en kilogrsames des souris alors que le ID 50 est équivalent à 192 ing çr'lo;rar:le; On voit que .les impuretés;, qui se trouvent dans l'acWizov.- . J.,-e brut utilisé ci-dessus;, ont à peu près la T.10n:e toxicité que 1'a#itLDio- ticue li,1-réùie. 



  .,' a: L¯FJ  o - cue9 préparé selon 'l' .¯wen 'c- o5x9 se distingue de l'au- reomycine par son mode d' e=rlra,ction par solvants. Une solution el' aureomycine ayant un pE de 2,0 de &,5 ou de 9,0, quand elle est extraite par l'éther, le butanol noInal, l'acétate d'éthyle;, le cétone métbyl-isobutyle, le benzène ou 
 EMI7.4 
 le chloroforme;, perd'son activité alors qu'une solution de l'antibiotique, 
 EMI7.5 
 obtenu selon l'invention, peut être extraite seulement par du butanol normal. 



  De meue, le. stabilité pour la chaleur est différente pour les doux antibioti- 
 EMI7.6 
 ques. TABLEAU III 
 EMI7.7 
 % de Inactivité normale 
 EMI7.8 
 100  pendant 15 min. 2 5  pendant une heure pli antibiotique A1..1reOTIr,f- antibiotique selon l' .3Ver1 selon . i? ii eî1- chie tien. 
 EMI7.9 
 
<tb> tien
<tb> 
 
 EMI7.10 
 2,0 40 CO 100 
 EMI7.11 
 
<tb> 6,5 <SEP> 50 <SEP> <25 <SEP> 100
<tb> 
 
 EMI7.12 
 9,0 80 a5 zozo 
 EMI7.13 
 Les comportements des différents antibiotiques ont été comparés, 
 EMI7.14 
 par des chromatogras.;Iaies sur papier pour lesquels on s'est servi de deux mo- des de sola'cs différents;, par des essais à 2Go pendant 24 heures, en se servant du B, xubtilns cosme organisme dressai. 

 <Desc/Clms Page number 8> 

 



  TABLEAU   IV   Valeur RF 
 EMI8.1 
 
<tb> Solvant: <SEP> eau <SEP> saturée <SEP> de <SEP> Solvant: <SEP> eau <SEP> saturée <SEP> de
<tb> 
<tb> n-butanol <SEP> plus <SEP> 2 <SEP> % <SEP> diacide <SEP> n-butanol.
<tb> 
<tb> p-toluènesulfonique <SEP> plus
<tb> 
<tb> 2 <SEP> % <SEP> pipéridine
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> antibiotique <SEP> selon <SEP> l'inven-
<tb> 
<tb> 
<tb> tion <SEP> -entre <SEP> 0, <SEP> 0-05 <SEP> entre <SEP> 0,0-0,1
<tb> 
<tb> 
<tb> aureomycine <SEP> -entre <SEP> 0,0-1,0 <SEP> entre <SEP> 0,0-0,5
<tb> 
<tb> Chloramphenicol <SEP> -1,0 <SEP> 1, <SEP> 0 <SEP> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Streptomycine <SEP> A <SEP> - <SEP> 0,2 <SEP> 0, <SEP> 0 <SEP> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Streptothricine <SEP> - <SEP> 0,03 <SEP> 0,

  0
<tb> 
 
L'invention consiste également en un procédé pour faire croître une espèce nouvelle et non encore décrite jusqu'ici de   micro-organismes.,     S. rimosus, de préférence à 24-30 , dans des conditions submergées d'agitation et d'aération, sur un milieu constitué par une source d'hydrates de carbone,   telles que des sucres, l'amidon, du glycérol; une source organique d'azote,. telle que de la farine de fèves de soja, du gluten de blé, de la farine de graines de coton, de la lactalbumine, une digestion enzymatique de   caséine,   du   tryptone;   une source de substances de croissance telles que des matières solubles de distilleries, de l'extrait de levure; des sels minéraux tels que le chlorure de sodium, du phosphate de potassium., du sulfate de magnésium., du nitrate de sodium;

   un agent tampon, tel que du carbonate de   calcium;   et une huile végétale. Quand la croissance est achevée, le   mycélium   est séparé d'avec le bouillon qui contient maintenant l'antibiotique et celui-ci est re- cueilli hors du bouillon par extraction à l'aide de solvants organiques à un pH convenable ou par adsorption de l'antibiotique hors du bouillon sur du carbone activé et en le séparant d'avec le carbone à l'aide de solvants orga- niques ou d'eau à un pH approprié ou par d'autres moyens bien connus. L'an- tibiotique ainsi obtenu possède des propriétés uniques et de valeur qui le distinguent de tous les antibiotiques connus et décrits   jusque ici.   



   Un inoculum peut être obtenu en utilisant une culture fournie à partir de souches ou flacons   Roux 'inoculée   avec du S. rimosus. Des milieux so-   lides,   qui conviennent à cette culture initiale, sont le lactose de boeuf ou de l'agar d'Emerson. Cette   culture   est utilisée pour inoculer le contenu de flacons secoués (shakers) où des cuves à inoculum submergées. On peut égale- ment inoculer le contenu des cuves à inoculum submergées par celui de flacons secoués. Toute culture dans des flacons secoués atteint généralement son ma- ximum en quatre jours alors que l'inoculum dans les cuves submergées se for- me, généralement, de la manière la plus favorable en deux jours.

   Depuis la cuve à inoculum le bouillon contenant le micro-organisme est refoulé dans l'appareil de fermentation dans des conditons absolument aseptiques et la croissance se fait pendant une nouvelle période de deux jours. Pendant tout le temps l'aération est maintenue dans les cuves en insufflant dans celle-ci de l'air stérile par un pulvérisateur d'air avec un débit de   0,5   à 2 volumes d'air libre par volume de bouillon et par minute. Si l'on rencontre des dif- ficultés pour éviter la formation d'écumes dans la cuve, on y ajoute des an- ti-mousses tels que des huiles végétales ou animales ou des agents similaires, pour rompre l'écume.

   Pendant que le bouillon est agité à une vitesse qui dé- pend du genre de l'agitateur, des conditions   absolument   aseptiques sont main- tenues et la température du bouillon agité reste entre 24 et 30 . 



   L'antibiotique peut être récupéré hors du bouillon de fermentation dans lequel il est formé de différentes manières. Le mycélium, dans le   bouil-   lon de fermentation, doit d'abord être enlevé et on constate que cela se fait au mieux en rendant le mélange acide, de préférence avec un pH en dessous de 

 <Desc/Clms Page number 9> 

 4, après quoi on sépare le   mycélium   par filtration. Si ce réglage du pH n'a .pas   lieu;,   une partie de l'antibiotique reste sur le   mycélium.   
 EMI9.1 
 Le peut être récupéré 1'êta- pur en -braita,it le bouil- lon de fermentation filtré avec du carbone activé à un pH voisin de la neu- tralité.

   L'antibiotique peut être repris de l'adsorbant à l'aide d'eau sa-   turée     d'un   alcool partiellement miscible dans l'eau, tel que le butanol, le pH étant réglé à 1,5 par un acide, tel que l'acide chlorhydrique.   Après   la séparation par filtration de l'adsorbant épuisé, le pH du filtrat peut être réglé à   6-9   et   l'antibiotique   solide peut être récupéré par séchage après 
 EMI9.2 
 congélation et dans le vide. Plutôt que de sécher le filtrat, l'antibioti- que peut être extrait hors de celui-ci dans du butanol après avoir réglé le pH à environ 9.

   L'extrait au butanol peut ensuite être concentré jusqu'à obtenir un antibiotique purifié ou cet extrait peut, à son tour, être soumis   tire   extraction par un acide   aqueuse   tel que l'acide chlorhydrique dilué. 



  Après séparation de la phase aqueuse, son pH peut être réglé à 6-9 par l'ad-   dition     d'une   base ou par le traitement avec un échangeur d'anions, tel que 
 EMI9.3 
 l'Amberlite Ill4 (un produit résineux fabriqué par la Société Rol1I!l & Haas) . 



   Plutôt que d'absorber l'antibiotique hors d'un bouillon filtré sur un adsorbant solide,l'antibiotique peut être extrait hors de ce bouillon par certains solvants ayant un pH basique, de préférence voisin de 9. Parmi les solvants, qui peuvent être utilisés, on peut citer le butanol, l'alcool amy- 
 EMI9.4 
 lique et le phenylcellosolve. L'antibiotique peut être extrait avec un pH aci-   de, de   préférence inférieur à 3,5. Le   phenylcellosolve   peut être utilisé   à   cet effet. Après l'extraction de l'antibiotique hors du bouillon filtré avec un pH de 9 et à l'aide de butanol, le solvant peut être concentré sous vide jusqu'à une fraction de son volume initial.

   Après extraction du concentrât 
 EMI9.5 
 au butanol à l'aide d'un acide dilué, après séparation des phases et après   réglage de   la phase aqueuse à un pH 6-7, on   obtient la   séparation d'un anti- biotique   solide ,   Ce produit peut ¯être filtré et séché, après quoi il a une activité d'environ 600   microgrammes   d'antibiotique pur par milligramme. 



   Pour mesurer l'activité des produits   purifiés,   l'antibiotique pur, à l'état cristallisé et préparé comme décrit ci-après, est pris comme norme 
 EMI9.6 
 et son activité est désignée par 1000 microgrammas par milligramme (mcg/mg). 



  Pour l'expérience on se sert d'un organisme d'essai le Klebsiella j2-neil-r-oiiiae. 



  Pi I 602 et comBe milieu d'essai le bouillon d'essai antibiotique du Labora- toire Biologique de Baltimore, préparé d'après la iobnule de la Food and Drug Administration pour les bouillons d'essais turbidimétriques de la strep- tomycine. La méthode d'essai est celle de Me Nahon J.R. (J.Bioi.Cb-emVol 153, pages ?.ç-5, avril 1944.). On peut également avoir recours à du chloramphe- nicol   cristallisé   comme norme de   comparaison   et on trouve que chaque milli- gramme d'antibiotique cristallisé, obtenu selon l'invention, a une activité 
 EMI9.7 
 4qdV±-eifLe à celle de 3,15 milligrammes de cor2mphenicol cristallisé. 



   L'antibiotique cristallisé peut être obtenu   à   partir de la matière   solide   amorphe, telle qu'obtenue par le processus de récupération indiqué plus haut (activité environ 600-650   mcg/mg).   Ceci est obtenu en réglant le pH de la matière brute dans l'eau à 2,8 à   l'aide   d'un acide, tel que l'acide chlorhydrique, en filtrant la solution obtenue et en évaporant partiellement la solution sous vide. Les cristaux séparés sont filtrés, lavés et séchés. 



  Ils donnent 850-900   mcg/mg.   



   Un autre procédé pour obtenir l'antibiotique cristallisé consiste à dissoudre l'antibiotique brut, donnant à l'essai environ 670 mcg/mg, dans de l'acide chlorhydrique avec un pH 2,5. La solution aqueuse est filtrée et traitée avec du chlorure de sodium et un peu plus que la moitié de son   volu-   me d'alcool butylique. Après avoir secoué soigneusement le mélange, le soli- de séparé est enlevé par filtration. Il est dissous à nouveau dans le   métha-   nol et on ajoute un volume réduit d'eau. Après   -Lui   repos   d'une   nuit dans un réfrigérateur, les cristaux formés sont filtrés, lavés et séchés. La masse cristalline, obtenue de cette manière, donne à l'essai environ 860 mcg/mg et forme une base antibiotique mélangée à du chlorure de calcium. 



   Une autre méthodepour obtenir   l'antibiotique   cristallisé consiste 

 <Desc/Clms Page number 10> 

 
 EMI10.1 
 1 soumettre la matière aJOlj?l1e, donnsjit à l'essai environ 650 B-cg/ng avec une distribution à contre-courante cor::ne proposé par Craig (J. Biol. Chen. volume 155, psge 1 i i4rl . Le solvant utilisé est de l'eau, réglé à un pE   de .5   par de l'acide chlorhydrique, et de l'alcool butylique. La phase aqueuse de tubes sélectionnés est évaporée sous vide pour procurer des cristaux blancs, 
 EMI10.2 
 prismatiques de l'antibiotique, donnant a l'essai environ 950 >icgllnig. 



   On peut préparer divers sels   de   l'antibiotique, le plus simplement en ajoutant l'acide voulu,   minéral   ou organique, à l'antibiotique dans l'eau jusqu'à ce qu'on obtienne une solution limpide. Les sels solides peuvent être préparés en réglant le   pH     d'une   telle solution saline de l'antibiotique au point juste en dessous de celui auquel l'antibiotique commencerait. à se sé- parer (environ   2,5).   La solution peut alors être séchée, par exemple en sou- mettant la solution congelée à un vide. Des sels acides et cristallisés de l'antibiotique sont obtenus par l'évaporation d'une solution du sel dans l'eau avec un pH réduit.

   Comme acides minéraux on peut utiliser l'acide chlor- hydrique, sulfurique ou phosphorique et comme acides organiques l'acide ci- trique, tartrique, gluconique, etc. Gomme l'antibiotique est   amphotérique,   on peut préparer les sels de différents éléments métalliques l'aide de l'anti- biotique. En particulier,les sels des métaux alcalins de l'antibiotique sont préparés en traitant une suspension aqueuse de l'antibiotique par   un   hydroxy- de alcalin. Les sels métalliques solides de l'antibiotique sont obtenus par l'évaporation d'une solution aqueuse de l'antibiotique avec   un     pH   convenable. 



   Diverses autres méthodes peuvent être utilisées pour purifier l'an- 
 EMI10.3 
 tibiotique. Il peut être extrait hors du bouillon de feruentation filtré sous forme   d'un   sel à l'aide d'un des acides d'un groupe d'acides   sulfoniques   or -   ganiques.   Il peut être précipité hors de solutions acides aqueuses de   lama-   tière brute à l'aide de l'acide picrique.

   L'antibiotique peut également être précipité hors d'une solution diluée de la matière   br@te   à l'aide d'un acide 
 EMI10.4 
 arylasosulfonique ayant un pH faible, par exemple le colorant Orange II ayant un pH   2 .   L'antibiotique peut être récupéré hors du sel colorant par des ré- actifs tels que le chlorure de baryum qui précipite le sel de   baryum   du co-   lorant   en laissant une solution de l'antibiotique qui peut être séchée. Il est évident que d'autres sels métalliques conviennent tout aussi bien. L'ac- tivité et la couleur de l'antibiotique impur peuvent être améliorées en dis- solvant le produit dans un acide minéral dilué et en ajoutant du naphtalène sulfonate d'ammonium à la solution.

   Le précipite', de couleur sombre, est fil- tré et le pH du filtrat est   augmenté   pour obtenir un précipité de   l'antibio-   tique dont la couleur et   l'activité sont   améliorées. 



   L'antibiotique cristallise sous diverses formes suivant, le traite- ment utilisé pour sa préparation. Une de ces formes est constituée par des plaques hexagonales épaisses et une autre par des aiguilles épaisses. Les   in-   
 EMI10.5 
 dices de réfraction de la première de ces formes sont: = bzz 0,004; 13 = 1,648 f 0,004. 1 est plus grand que 1,700. La rotation optique ou le pouvoir rotatoire d'une solution du composé cristallisé pur, dans le métha- nol,  diminue   rapidement au repos à la température ambiante. Si la rotation spécifique est lue peu après que la solution est préparée, elle a la valeur   suivante: ([alpha])D25 ¯ égal à 26  (0,5 % dans le méthanol).

   L'addition de chlorure de calcium à la solution méthanolique provoque un changement notable de   la rotation spécifique jusqu'à une valeur fortement négative. Le mélange cris-   tallisé   de l'antibiotique et du chlorure de calcium a également une rotation spécifique fortement négative dans.   le--méthanol.   La rotation spécifique dans 
 EMI10.6 
 1-'acide, chlorhydrique dilué est de ()D2 égal 'à :t 196  (0,5 % dans l'acide chlorhydrique N/10. 



   Quand le spectre d'absorption de rayons ultra-violets d'un   échan-   tillon d'antibiotique cristallisé est déterminé, à l'aide d'un spectrophoto- mètre au quartz de   Beckman -   Modèle   DU, . dans   une solution aqueuse contenant 
 EMI10.7 
 i;jl0 de phosphate de potassium dihydrogéné (pH 4, 5) dans des cellules de leze, on trouve les maxima suivants: pour 'P.1% cm a 353,2 m. on a = 27,7; à 2'75s 0 m, on a à= 299 et à 247,5 m. on   a [gamma]    = 236.   

 <Desc/Clms Page number 11> 

 



     Quand   le spectre d'absorption de rayons ultra-violets de l'an- est   déterminé   dans une solution   diacide   phosphorique dilué avec 
 EMI11.1 
 un pH 1,7 on obtient les maxima suivants pour E3-% a 352,5 m on a J= 277 età   267,5     :ci   on a   [gamma]= 379.   



     L'antibiotique   est un composé   amphotérique   contenant des groupements faiblement basiques et faiblement acides. Il contient les éléments carbone,hydrogène, azote et oxygène. Les analyses chimiques de la masse cristalline   donnent,   en moyenne, 53,05 % de carbone,   5,91 %   d'hydrogène, 
 EMI11.2 
 53c';. % d' azote et 35,4 d'oxygène (par différence). La matière est exempte de cendres. Elle a un point de fusion voisin de 185  et une certaine décom- position se produit à cette température. Elle est soluble dans le méthanol,   l'éthanol,'   l'acétone et le glycol   propylénique,   dans l'eau jusqu'à 0,25 mg par ml. à 25  et elle est insoluble dans l'éther et dans l'éther de pétrole. 



   L'antibiotique cristallisé, mélangé à de l'huile minérale, possè- de plusieurs bandes d'absorption caractéristiques dans l'infra rouge, parmi celles-ci se trouvent les fréquences suivantes (en centimètres   réciproques):   
 EMI11.3 
 3460, 3360, 1590, 1318, 1280, 1242, 1l22, 1090, 1076, 105/j., 1031, 1012, 938, 863, 839, 772, 705, 679. Cette détermination a été faite à raide d'U11 mé- lange â l'huile minérale de la matière. 



  Les propriétés ci-dessus montrent que l'a<Wibzoticue9 obtenu se- lon l'invention, est nettement différent d'un quelconque des antibiotiques connus. 



   Les exemples, donnés ci-après, montrent comment les antibiotiques peuvent être formés, récupérés,   concentrés,   purifiés et convertis finalement à   l'état   pur et cristallisé. Les antibiotiques cristallisés et leurs sels cristallisés ont une valeur particulière à cause de leurs pureté et effica- cité élevées. Les exemples donnés ne sont nullement limitatifs ou restric- 
 EMI11.4 
 tifs. On se sert chaque fois d'une variété de sBreotor1Tces rimosus désignée Par le numéro d'isolement S.   3279.   



  Exemple I 
 EMI11.5 
 Milieu Formation et récupération de 1 antibioti- 
 EMI11.6 
 
<tb> ¯¯¯ <SEP> que
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> farine <SEP> de <SEP> fèves <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> gr.
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 



  Cerelose <SEP> 10 <SEP> gr.
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> Solubles <SEP> de <SEP> distilleries <SEP> 0,5 <SEP> gr.
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 



  Chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 5 <SEP> gr.
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> 
<tb> eau <SEP> distillée <SEP> pour <SEP> faire <SEP> 1000 <SEP> ml.
<tb> 
 
 EMI11.7 
 



  Le pH est réglé a 7,0 avec de la soude caustique et on ajoute du carbonate de calcium en quantité de 1 gr par   litre.   



   On introduit cinq cents parties en m1. du milieu ci-dessus à des flacons   Fernbach   qui sont alors stérilisés à 1210 pendant 30 minutes. Après 
 EMI11.8 
 refroidissement, les flacons sont inoculés avec une suspension de la culture de 12. rimo5us obtenue à la surface de souches lactose de boeuf-agar et les flacons sont secoués pendant 4 jours à   28    dans un   shaker   rotatif ayant un 
 EMI11.9 
 déplacement de 5 cm. pendant qu'il tourne, â 200 v/r.m, A la fin de ce -brai tement on constate que le bouillon, contient 640 ûDClml. et 400 u/1al de chlor- , S!J1phenicol. Le nyeelizns est séparé du bouillon par filtration et le pi de ce dernier est réglé à 9,0. L'antibiotique est extrait hors du bouillon par du butanol normal.

   Quand on observe le spectre d'absorption ultra-violets 
 EMI11.10 
 pour la solution butanolique de l' 811tibiotique, les pointes de la courbe d'absorption se trouvent à 385 et 270 millimicrons. 

 <Desc/Clms Page number 12> 

 
 EMI12.1 
 >;em±le II Formation et récupération dantibioti- 
 EMI12.2 
 
<tb> que <SEP> brut
<tb> 
<tb> Milieu
<tb> 
<tb> 
<tb> farine <SEP> de <SEP> fèves <SEP> de <SEP> soja <SEP> 30 <SEP> gr.
<tb> 
<tb> 
<tb> amidon <SEP> de <SEP> blé <SEP> 5 <SEP> gr.
<tb> 
 
 EMI12.3 
 ii-Z-Indne-B (digestion enzymatique 
 EMI12.4 
 
<tb> de <SEP> caséine) <SEP> 1 <SEP> gr.
<tb> 
 
 EMI12.5 
 [Iitrate de sodium 3 ger. 
 EMI12.6 
 
<tb> de <SEP> l'eau <SEP> pour <SEP> faire <SEP> 1000 <SEP> ml.
<tb> 
 
 EMI12.7 
 Le pli est réglé à 7,0 et 5 gr.' de carbonate de calcium. sont aj 011- tés à chaque litre. 



   Deux litres de ce   milieu   sont dispersés dans plusieurs vases en 
 EMI12.8 
 verre ayant une capacité de 3,5 1. contenant des agitateurs et des a"ioniseurs pour l'admission d'air stérile. L'appareil et le milieu sont stérilisés à 121  pendant une heure, Après refroidissement, les contenus desvases étaient inoculés avec 50 ni. d'une suspension de 12. rirnosus, Après une agitation pen- dant 40 heures à 1800 t/m. on constate que le bouillon contient 1600 u/:m1 de chloramphenicol et 1280-2560 ü1JC/ml. 



  Sept litres de bouillon, ainsi préparé, sont séparés d'avec le my- 
 EMI12.9 
 célium par filtration et le pH est réglé à 7,0. On ajoute 70 gr. de A   (un   charbon activé) et l'ensemble est agité à la température ambiante pendant une heure. Le bouillon épuisé est séparé par filtration du charbon qui con- tient l'antibiotique par filtration et le gateau est lavé à l'eau distillée. 



  L'antibiotique est repis à partir du charbon activé à l'aide   d'un   litre d'eau distillée saturée avec du butanol normal et dont le   pH   est réglé à 1,5 à l' ai- 
 EMI12.10 
 de d'acide chlorhydrique. Le pri de la masse reprise est réglé â ;90 et elle est extraite avec un litre de n-butanol. La couche surnageant du butanol est séparée d'avec la phase aqueuse et est extraite par l'acide chlorhydrique 
 EMI12.11 
 I:10, La couche aqueuse et acide est séparée du butanol et son pH est ramené à 5,0 par agitation avec de   l'Amberlite     (un   échangeur d'ions résineux) qui est séparée d'avec la solution d'antibiotique par filtration.

   Cette solu- tion est congelée et séchée et   donne   2,0 gr d'une poudre d'un brun-jaunâtre. 
 EMI12.12 
 Cette préparation donnait à l'essai 255 u/mg de chloramphénicol et 2000 u/isg de streptomycine. 
 EMI12.13 
 lXOE2LP--ILI Formation d'antibiotique 
 EMI12.14 
 
<tb> Milieu <SEP> inoculum
<tb> 
 
 EMI12.15 
 lF-à-1hìe B (digestion enzymatique 
 EMI12.16 
 
<tb> de <SEP> caséine) <SEP> 1 <SEP> %
<tb> 
<tb> Cerelose <SEP> 1 <SEP> %
<tb> 
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> levure <SEP> 0,5 <SEP> %
<tb> Chlorure <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 0,5 <SEP> %
<tb> 
<tb> Carbonate <SEP> de <SEP> calcium <SEP> 0,1 <SEP> %
<tb> 
 On complète avec de   l'eau   du robinet pour faire   'un litre   et on 
 EMI12.17 
 règle le pE à 6,

  7 avec du KOEL Environ 875 litres du milieu sont introduits dans une cuve d' inoculum de 1LOO litres et maintenus à 121  pendant une heu- re. Après refroidissement à 2$ , le milieu est inoculé avec un litre d'une suspension du S.rimosus. Le contenu de la cuve est aéré et agité pendant 25 heures avant d'être utilisé pour inoculer le contenu de 1'appareil de fermen-   tation.   
 EMI12.18 
 



  Le milieu de fennentation est constitué courne suit: 

 <Desc/Clms Page number 13> 

 
 EMI13.1 
 
<tb> farine <SEP> de <SEP> fèves <SEP> de <SEP> soja
<tb> 
 
 EMI13.2 
 cnicioiz de blé Oy5 % ;:Y-Z-J1Jnil1e B 0,1 % i:.'Lr2-e de sodium 0,3 % carbonate de calci-um 0,5 % 
 EMI13.3 
 
<tb> huile <SEP> végétale <SEP> 0,4
<tb> 
 
 EMI13.4 
 On ccaNpIete avec de l'eau du robinet, on règle le pH à 7,0 et on stérilise en   maintenant   le milieu à -une température de 121  pendant   une   heure. 



   Après refroidissement à 28 , le milieu de fermentation est   inocu-   
 EMI13.5 
 lé avec le contenu de la cuve el'inocuJ.'U111, dont question plus haut, Après 47 heures,,le pH est élevé à   8,0.   On trouve que le bouillon a une activité de 
 EMI13.6 
 335 u/mg de chloramphénicol ou 20 uDC/ml. 



  Exemple IV. Récupération de l' 8l1tibiotique depuis le ---------- bouillon par adsorption.- On prend sept litres d'un bouillon de fermentation de l'antibiotique, séparé par filtration du mycélium de fermentation à un pH inférieur à 4, et qui donne à l' analyse 190 mcg/ja1, et on règle son pH à ', 0 . 0n y ajoute 70   gr.   de Norit A (un charbon activé). Après avoir agité pendant une heure, le charbon est filtré et lavé à   l'eau.   L'antibiotique est séparé de l'absor- bant par de l'eau saturée de butanol et dont le pH est réglé à   1,5, avec   de 
 EMI13.7 
 lucide chlorhydrique. Le pH de la masse reprise est réglé à geo après quoi l'antibiotique est extrait dans du butanol. La phase butanol est extraite à nouveau av ce un petit volume diacide clllorhydrique r,;fl0.

   Le pH de la solution aqueuse est ajusté à 590 â l'aide'de l'Amberlite IR-4 (un échangeur d'anions synthétiques et résineux fabriqué par la Société Rohm. et Haas). 1,' mtibioti- que est alors récupéré   à.   l'état solide en séchant la solution aqueuse après congélation. Il pèse 1,5 gr. et a une   activité   de 80   mcg/mg.   temple V. Récupération de l'antibiotique depuis le bouillon par extraction. 



   On règle le   pH   à 2,5 de 8 litres   d'un   bouillon de fermentation de 
 EMI13.8 
 .' a.nzxbâ.OtiCue, par de l'acide sulfurique et' on filtre le mycelium. Le filtrat contient 2.400.000 mcg de antibiotique. Son pII est réglé à , 0 et il est eGr8it par trois litres de butanol en différentes parties et les extraits mélangés contiennent 1.600.000 mcg de l'al1"tlbiotique. Les extraits au butanol sont concentrés sous vide jusque 650 nez cette solution contenant 2400 mcg/ mu de l'antibiotique. La solution butanolique est extraite avec un litre d'acide chlorhydrique lI/10 en plusieurs parties et les phases aqueuses mélan- gées ont leur pH réglé à   7,5   avec de la soude caustique diluée. Le produit 
 EMI13.9 
 précipité est filtré et séché.

   Il pèse 1,69 gr. et a une activité de 625--mcg/'--- mg en antibiotique.   @   
 EMI13.10 
 temple VI. Préparation de l' antibiotique cristallisé 
L'antibiotique amorphe (20   gr.),   donnant à   1.'essai   625 mcg/mg, est dissous dams 400 ml d'eau en ajoutant de l'acide chlorhydrique   jusqu'%.   ce que le pH soit de   2,5.   La solution filtrée a un volume de 480   ml   et donne à l'es- 
 EMI13.11 
 bali 26.400 l11cg/:mJ.. Après - addition de 50 gr, de chlorure de sodium et 300 Ni de butanol humide, le mélange est secoué soigneusement. Le précipité solide est filtré et dissous dans 150 ml. de méthanol.

   La solution méthanolique don- 
 EMI13.12 
 nait à l'essai..31.000 racgrl, Après addition de 5 m.. d'eau, de l'arGib2oti.- que cristallisé commence à se former. On ajouteà nouveau 20 ml   d'eau   et le mélange est laissé au repos pendant une nuit dans un réfrigérateur. Le produit filtré et sec pèse 5,8   gr.   Il a une activité de   860   mcg/mg. 

 <Desc/Clms Page number 14> 

 
 EMI14.1 
 



  .r-:L:31:'T.,... Pj::;c::Cc.:î:..0== ds fantibiotique cristallise   par ëictribution en contre-coursnt. 



  On dissout de 1 ' a=iti Diotiq.ae anorphey donnsnt à 1'essai 640 Iilcg/1!l6, dans de l'eau en règlent le pH à environ 3 avec de   1-'acide     chlorhydrique.   La solution est saturée avec du butanol et ensuite soumise à une distribution en contre-courant dans neuf tubes séparateurs en se servant de volumes égaux de butanol humide et d'acide   chlorhydrique   dilué (pH 3) saturé de butanol . 



  Chacune des phases aqueuses et butanoliques est essayée pour son activité et on a choisi les phases aqueuses estubes   6   et   7.   Ces phases sont mélangées 
 EMI14.2 
 et concentrées sous vide jusqueà un petit volume. Les cristaux b1 J1;z séparés sont centrifugés et lavés   successivement     à   l'eau, à l'acétone et à   1? éther.   



  Le produit séché a une activité de   945   mcg/mg. 
 EMI14.3 
 



  '.:era.nle VIII. Préparation du chlorhydrate de 1? a>-1-tibiotique. L' antibiotique de n' :importe quelle pureté peut être converti en chlorhydrate en traitant la matière dans l'eau, avec de l'acide chlorhydrique jusqu'à ce   qu'on   obtienne une solution limpide. Le pH de la solution est alors réglé à une valeur voisine de 2,5. La solution est congelée et séchée sous vide pour donner une poudre aisément soluble. 



     L'allure   de la diffraction d'un rayon X de   chlorhydrate   pulvérisé 
 EMI14.4 
 de 1'antibiotique cristallisé est d6terninée dans une caméra Philips, ayant un razron de 57,3 1î1!D.. et en se servant du ra;rOlll1eL1eIlt alpha du cuivre ji. 



  Ci-dessous, on donne les écarts approximatifs des cristaux dans Ull plan ( d en unités  -71gstrom) calculés à l' Gide des traits plus L-itelise5 mar- nués sur un film photographique et 1-lintensi-t',é relative et approxinative (I) de ces traits en adoptant pour le trait le plus intense la valeur 1,00. 
 EMI14.5 
 
<tb> I <SEP> d <SEP> en-unités <SEP> A 
<tb> 
<tb> 
<tb> 0,9 <SEP> 10,32
<tb> 
<tb> 
<tb> 0,8 <SEP> 9,39
<tb> 
<tb> 
<tb> 0,6 <SEP> 8,30
<tb> 
<tb> 
<tb> 0,2 <SEP> 5,26
<tb> 
<tb> 
<tb> 1,0 <SEP> 4,19
<tb> 
<tb> 
<tb> 0,5 <SEP> 3,92
<tb> 
<tb> 
<tb> 0,2 <SEP> 3,20
<tb> 
 Exemple IX. Préparation du sel sodique de l'antibiotique. 



   L'antibiotique, de n'importe quelle pureté,   peut-'être   converti en son sel de sodium en traitant la matière dans l'eau avec de la soude causti- 
 EMI14.6 
 que jusque a ce que son pH soit supérieur à 9, ;- Za solution est alors conge- lée et séchée sous le vide, ce qui donne sel sodique sec sous la forme   d'une   poudre soluble dans l'eau. 



   Dans les exemples ci-dessus, les compositions des   milieu::   de cul- ture sont données uniquement à titre indicatif et peuvent varier entre des limites relativement écartées, par exemple en remplaçant la farine de fèves de soja par la lactalbumine, de la farine de graines de lin ou de coton;, de la farine d'arachides, de la protéine de blé, du gluten de blé, etc.. De   mène,   les conditions de fermentation,telles que l'agitation, les degrés d'aération, la température, etc. peuvent être modifiées d'une manière considérable. De plus, d'autres méthodes ou des variantes de celles décrites pour récupérer, 
 EMI14.7 
 concentrer et purifier 1 antibiotique et ses sels peuvent être adoptées.

   Par- mi les méthodes de récupération possibles on peut citer celle qui consiste à adsorber   l'antibiotique   directement hors du bouillon de fermentation sur des 
 EMI14.8 
 échangeurs datons résineux. Corme pour Ilaureolwci-ne et le c'hloramph8l1..Ícol, 

 <Desc/Clms Page number 15> 

 l'antibiotique est actif in vivo aussi bien qu'in vitro et présente   une   ac-   tivité  chimothérapeutique marquée contre   l'infection   expérimentale des souris et qui est   due   au streptococcus hemolyticus, au D. pneumoniae, au K pneumoniae, au S. thyphosa et autres organismes.

   Le nouvel antibiotique possède une acti- vité définie   antirachitique   pour l'oeuf de poule   embryonnaire   et pour des concentrations élevées il empêche l'infection de l'embryon du poulet par une souche PR8 du virus d'influenza A. 



   L'antibiotique a donc une grande valeur pour le traitement de dif-   férentes   infections des   humains et   animaux. Il peut être administré par injec- tion   parentérale,   par voie bucale ou localement avec des dosages usuels. 



     Gomme   il va de soi et comme il résulte,   d'ailleurs,   déjà de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à celui de ses modes d'appli- cations non plus qu'à ceux des modes de réalisation de ses diverses parties,   ayant   plus spécialement été indiqués; elle en embrasse, au contraire, toutes les   variantes.   



   REVENDICATIONS. 



   1. Procédé pour la préparation, d'un antibiotique, dans lequel pro- cédé on cultive une souche de Streptomyces rimosus dans une solution aqueuse, nutritive et contenant des hydrates de carbone dans des conditions aérobiques submergées jusqu'à ce que ladite solution présente une activité antibactérien- ne substantielle, après quoi on récupère l'antibiotique ainsi obtenu hors du bouillon de fermentation   2.   Procédé pour la préparation d'un antibiotiquedans lequel pro- cédé on cultive une souche de Streptomyces rimosus dans un milieu de culture aqueux contenant une substance promotrice de croissance et maintenue dans ces conditions   aérobiques   submergées, à une température comprise entre 24 C et   30 C   environ, pendant une période allant de 2 jours   à   une   semaine,

     après quai en récupère l'antibiotique ainsi obtenu hors du bouillon de fermentation. 



     3. -   Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, dans lequel procédé la récupération de l'antibiotique comprend le stade d'ad- sorption de l'antibiotique sur du charbon activé. 



     4.   Procédé suivant   l'une ou   l'autre des revendications 1 et 2, dans lequel procédé la récupération de l'antibiotique comprend le stade d'ex- traction de celui-ci dans un solvant organique non miscible à l'eau et dans des conditions légèrement alcalines. 



   5 . - Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 1 et 2, dans lequel procédé la récupération de l'antibiotique comprend le stade   d' ex-   traction de celui-ci dans un solvant organique non miscible à l'eau et dans des conditions fortement acides. 



   6. - Procédé de production d'un antibiotique en substance tel que décrit dans les exemples ci-dessus. 



   7. - Nouvel antibiotique préparé par un procédé suivant   l'une   ou l'autre des revendications précédentes.



   <Desc / Clms Page number 1>
 



  IMPROVEMENTS IN PROCESSES FOR THE PREPARATION OF ANTIBIOTICS ...
 EMI1.1
 



  Yinv6nticl1 relates to the. preparation of new useful antibiotics; and it relates more particularly ;, processes for "obtaining these products by for their recovery: .uperation, their concentration from crude solutions including the fermentation broths, their purification and the preparation of their salts. Antibiotics and their salts;
 EMI1.2
 obtained according to the invention can be provided in the form of diluted solutions, crude concentrates or in the pure crystallized state.



  The "a: ntibiotic is held, during cultivation under controlled conditions to pertain to a species of (, which has not yet been described so far and which is called & to1JVcesûsuo The description of this o. t'gal1isme by following the method adopted by Bergey in his' Xaiual cf determinative Bac sixth edition, pages 929-933 :; is given below
The characteristics of the culture of this species, close to
 EMI1.3
 Stre3, - mzees al-bus. differ in several features :, based on strain d:> isolation;

   S 3279-and are shown below in the form of a table (when the colors are followed by R, reference is made to the table of colors.
 EMI1.4
 their data in "Pddgiïa7j Color Standards and The indications given are based on observations made with six tubes or plates.

 <Desc / Clms Page number 2>

    



  COLOR
 EMI2.1
 ME "Degree of cross --- 1.1: tceli11L1: tr3- Pi-Eien'o - medium sance nothing and spo- soluble J." notes
 EMI2.2
 
<tb> ¯¯¯ <SEP> res
<tb>
<tb> Plates <SEP> Moderate <SEP> between white <SEP> yellowish <SEP> <SEP> Colony <SEP> flat; <SEP> edges <SEP> ir-
<tb>
 
 EMI2.3
 glucose C, good and gray p2.- very P8, - regular; smooth surface
 EMI2.4
 
<tb> asparagi- <SEP> Most <SEP> <SEP> <SEP> (R) <SEP> <SEP> light <SEP> sporulation; <SEP> myce-
<tb>
<tb> ne <SEP> subnergated <SEP> agar <SEP> light <SEP> air <SEP>; <SEP> backwards
<tb>
<tb> almost <SEP> yellow; <SEP> ocher <SEP> (R)
<tb>
<tb>
<tb> at the center <SEP>; <SEP> chamois <SEP> colo-
<tb>
<tb> nial <SEP> at the <SEP> edges; <SEP> spirals
<tb>
<tb> very <SEP> numerous;

   <SEP> conidia
<tb>
<tb>
<tb> in <SEP> strings <SEP> 0.6 <SEP> to <SEP> 0.7 <SEP> x
<tb>
 
 EMI2.5
 0, (3 â 9 !; short and cylï.dritess plates
 EMI2.6
 
<tb>. <SEP> dilution: <SEP> colonies <SEP> for
<tb> so <SEP> say <SEP> alike;
<tb> Isolated <SEP> colonies: <SEP> sets <SEP> pellicular <SEP> or <SEP> dispersed <SEP> of <SEP> large <SEP> clusters <SEP> of
<tb> spirals; <SEP> smell <SEP> of <SEP> earth.
<tb>
<tb>



  Gelatin <SEP> moderate <SEP> white <SEP> none <SEP> liquefaction <SEP> moderate
<tb>
<tb> milk <SEP> of <SEP> good <SEP> film <SEP> white <SEP> gri- <SEP> part <SEP> none <SEP> hydrolysis <SEP> or <SEP> peptournesol <SEP> thick < SEP> saster <SEP> lower <SEP> Ionization; <SEP> the <SEP> pH <SEP> is <SEP> in-
<tb> (at <SEP> 28) <SEP> of the <SEP> tube <SEP> changed.
<tb> lighter <SEP> <SEP> than <SEP> on
<tb> landmark
<tb>
<tb> (at <SEP> 37) <SEP> very <SEP> good <SEP> white <SEP> gri- <SEP> part <SEP> su- <SEP> none <SEP> hydrolysis <SEP> or <SEP > pep-
<tb>
 
 EMI2.7
 saster lower Ionization;

   the pu has passed the liquid is 6,, l a 6,6-7? 02.
 EMI2.8
 
<tb> almost
<tb> black
<tb>
<tb> glucose <SEP> moderate <SEP> plus <SEP> light <SEP> brown <SEP> yellow- <SEP> backwards <SEP> almost <SEP> orange
<tb>
 
 EMI2.9
 dry eùgz-r, sur- du gray Nou- nâtre (cl1I'o: WD: te) of sine CR) and cracked face pale orange OC1'91.: ;;:

   (R)
 EMI2.10
 
<tb>! this <SEP> by <SEP> believe- <SEP> (R)
<tb> session <SEP> continue
<tb>
 
 EMI2.11
 melle de bij-
 EMI2.12
 
Vegetative <tb> <SEP> phes
<tb>
<tb> agar <SEP> poor <SEP> none <SEP> my- <SEP> yellow <SEP> very <SEP> towards <SEP> almost <SEP> buff
<tb> nutritious <SEP> celium <SEP> a- <SEP> low <SEP> and <SEP> yellow <SEP> of <SEP> honey <SEP> (R).
<tb> nothing;

   <SEP> waxy
<tb>
 
 EMI2.13
 tip of moderate whitish pleated light sycelium almost ocher
 EMI2.14
 
<tb> apple <SEP> from <SEP> tre <SEP> to <SEP> gray <SEP> yellowish <SEP> fawn <SEP> (R)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> earth <SEP> pale <SEP> (R)
<tb>
 
 EMI2.15
 poor nalate, flat none 1JI..yce- none
 EMI2.16
 
<tb> calcium <SEP> lium <SEP> air;
<tb>
<tb> colony <SEP> pres-
<tb>
<tb>
<tb> that <SEP> yellow <SEP> of
<tb>
<tb> March <SEP> CI ;.)
<tb>
 

 <Desc / Clms Page number 3>

    COLOR
 EMI3.1
 
<tb> Degree <SEP> of <SEP> grow- <SEP> Mycelium <SEP> a- <SEP> Pigment
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Medium <SEP> sance <SEP> nothing <SEP> and <SEP> spo- <SEP> soluble <SEP> Remarks.
<tb>
<tb>
<tb> res
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> plates <SEP> poor;

  , <SEP> very <SEP> little <SEP> of <SEP> none <SEP> slight <SEP> hydrolysis
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> starch <SEP> thin <SEP> mycelium <SEP> a-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nothing; <SEP> colo-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> denies <SEP> yellow
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> cinnamon
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> clear <SEP> (R)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> agar <SEP> none
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> synth-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> rique
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Cellulose <SEP> none
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Medium <SEP> moderate <SEP> to <SEP> white <SEP> to <SEP> gray <SEP> pale <SEP> towards <SEP> almost <SEP> orange <SEP> of
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> from Emerson <SEP> good; <SEP> on- <SEP> pale <SEP> (R) <SEP>;

   <SEP> co- <SEP> brown <SEP> zinc <SEP> (chromate <SEP> of <SEP> Zn)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> face <SEP> fen- <SEP> lony <SEP> en <SEP> mass <SEP> yellowâ-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> dill <SEP> in <SEP> almost <SEP> yellow <SEP> be <SEP> (R)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> several <SEP> from <SEP> honey <SEP> to <SEP> screen
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> small <SEP> trap <SEP> ge <SEP> of <SEP> zinc <SEP> or
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> these <SEP> possible- <SEP> orange <SEP> ocher
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> element <SEP> (R)

  
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Broth <SEP> moderate <SEP> with yellow <SEP> <SEP> reduction <SEP> of <SEP> nitrate <SEP> of- <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Dextrose <SEP> a <SEP> pell <SEP> i- <SEP> then <SEP> weak <SEP> to <SEP> strong <SEP> in
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nitrate <SEP> computes <SEP> several <SEP> tubes
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> This <SEP> species <SEP> differs <SEP> from <SEP> S. <SEP> albus <SEP> in the following <SEP> <SEP> ways:

  
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> S. <SEP> albus <SEP> (Rossi <SEP> Doria <SEP> amend. <SEP> Krainsky) <SEP> S. <SEP> rimosus
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Waksman <SEP> and <SEP> Henrici
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 1. <SEP> Mycelium <SEP> aerial <SEP> abundant <SEP> 1. <SEP> Mycelium <SEP> aerial <SEP> poor
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 2. <SEP> Mycelium <SEP> aerial <SEP> white <SEP> 2. <SEP> Mycelium <SEP> aerial <SEP> no <SEP> not
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> of a pure white <SEP> <SEP> <SEP> but <SEP> press
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> than <SEP> of a light gray <SEP> <SEP> <SEP> (R)
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 3.

   <SEP> not <SEP> of <SEP> cracking <SEP> of <SEP> the <SEP> colony <SEP> 3 <SEP>, <SEP> when <SEP> a <SEP> growth <SEP> vigou-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> reuse <SEP> is <SEP> produced, <SEP> the <SEP> colo-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> nies <SEP> <SEP> crack, <SEP> first
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> to <SEP> the <SEP> periphery <SEP> and <SEP> then
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> on <SEP> all <SEP> the <SEP> surface <SEP> and <SEP> the
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> layer <SEP> spore <SEP> se <SEP> crackle-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> the <SEP> in <SEP> small <SEP> parts <SEP> qud <SEP> se <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Detach <SEP> by <SEP> <SEP> growth
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> continuous <SEP> of the <SEP> hyphae <SEP> of
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> below.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>



  4. <SEP> The <SEP> milk <SEP> is <SEP> pentonized <SEP> after <SEP> coa- <SEP> 4. <SEP> The <SEP> milk <SEP> 11. ' <SEP> is <SEP> not <SEP> hydrolysis
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> gulation <SEP> nor <SEP> peptonized.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>



  5. <SEP> Growth <SEP> on <SEP> synthetic <SEP> agar <SEP> 5. <SEP> None <SEP> growth <SEP> on <SEP> agar
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> abundant <SEP> and <SEP> spread <SEP> synthetic.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>



  6. <SEP> colonies <SEP> on <SEP> the <SEP> starch <SEP> of <SEP> apples <SEP> 6. <SEP> Mycelium <SEP> is <SEP> almost <SEP> ocher
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> from <SEP> earth. <SEP> fawn <SEP> (R).
<tb>
 

 <Desc / Clms Page number 4>

 
 EMI4.1
 



  The specific name comes from i'lTi .Ss. #. S which means 11 crac.luelélf, because of the cracked cleavage aspect of some colonies.



  It is to be nobed (read for the production of these antibiotics one does not wish to be limited to this or Go these particular organisms which correspond to the description indicated above and which have been given only
 EMI4.2
 for explanatory reasons. We also want to include organizations
 EMI4.3
 which are mutant species obtained from the aforesaid organism (s) by means of mutation such as X-rays, ultra-rdolets rays,
 EMI4.4
 nitrogen mustards, etc.



  The products obtained according to the invention share with the anti-
 EMI4.5
 biotics prepared è. from other streptomyces the property of having a
 EMI4.6
 extended antibiotic spectrum, especially among bacteria of the Gram negative range.
 EMI4.7
 



  Among the organics, whose growth is limited by very low concentrations of the new antibiotics, we can cite the Sl1Ívants: Aerobacter aer, enes, Aerol, 1'1, cter ero zeres or Salmonella m- ratX) 2hv A resistant to st-eptotl1ricLLw, laJzzo == * & ē¯pe, raki% h ± ¯à or; almonel 7..a para; yphi.

   B resistant to stJept011lycilla, Sa.J.:8onella paratypIJJ, 3 lEscherichia eoli, Pceudomonas .ê & ± "1: i: .10sa.? ZF 3 albus 3tap-Îlvlococqus aure1f., 3aCÍllus subs-ï s , Bacillus: my: coid &, Eber thellajtyphosay Shisella. po.Í'c.d18e :: '1teri, zle'Dsiella pneumoniae. or $ c'1lonella pullorum, resistant to c'tilorsnphenicol
 EMI4.8
 The following table shows the comparative spectra of various
 EMI4.9
 streptomycin preparations ;, sti = e = ototl? oeichie, chloramphenicol and aurcomyoin and antibiotics prepared according to the present invention. L '6, ct: L {ity of the various antibiotic preparations used is expressed in two ways: 1) in units of coli dilr-tion and./'or 2) in units of chlorampheniool per milli- 3 to cmJ ±. By unit of c: ilL t3o: is meant. =, oLz.

   (UDG) per milligram, the maximum volume of nutrient broth in milliliters in which one milligram of the antibiotic preparation (which may have varying degrees of purity) can be diluted and which, when inoculated with a 10-6 dilution ( The 18 hour culture of coli grown under the same conditions, however, shows no bacterial growth at the end of this: the incubation of 1 hour at 7 to 5 units of chlorsnphenicol (, il.) By milligrsime pn means the result (in a test for which the trained organism of Klebsiella pneumoniae, PCI 602 is used, and as a medium prepared for a broth:. the antibiotic test from the Biological Laboratory of 3ëltimore, prepared according to the food industry. a.nd Drug Administration for ep :: 'euve turbi #, -iI.létric broth for streptomycin.

   The m.étl1oë: .e adopted for the test is that c'te 1-1c Mebor "JR (JoBiolo Ghen, Vol. 153? Pages 2L;, 9-25, April 19l + 4) for which we used 10 mg of nosnalised and crystallized chlorrmphenicol ::;: 8-1 'litro.

 <Desc / Clms Page number 5>

 
 EMI5.1
 TABLE 1
 EMI5.2
 Concentrations of the antibiotic preparation per milliliter cPagar nutrient required to prevent bacterial growth on the surface of Petri plates.



  1. Antibiotic: 2..ia-réor: cine: 3-Cllloro- 14.Strep-: 5. Strep- sui; riOEi'i 1? ixi-: amphoni- tothri- toBTyci- vention col cille ne LDC / 1né, g Ch l oro 'TJDC / ir4 & - ,. : 0 liloro-UDC / -. 0 hl o- "tc / i. Ti-D 0 / mg. Tl / T" 10. Ullpg 1 86. ru ..... /
 EMI5.3
 
<tb>
<tb>
 
 EMI5.4
 2 65 3840 7500: 1000: 1000: 2200 4000 ...., ¯¯¯-¯¯ ¯-¯¯¯; -¯¯¯, ---; ---.... ¯¯- e .r ....------ a L¯'.1 chlorine 't1, UDC Chio- UDG Chio- HDC UDO ro u. ro t1. r. , lTli20 â, -2 2-6 J..2-20 344 1-2 4-la: 7e5 1-5 <5 2-6 12-20 e J. f - '. r'! ô3.i.ov .7C.



  173 120-40f 65 192-384 375- 100- 100 220-2200 200 750 1000 S.pare.- dysente "brawl 1 1 '1 4 7.5 here 5 2-6 4 K. tireiM-' -bzz niae 132 24> 5 (51 <2 1.0 eo 134 2-5 za 3¯9zri5-3rf5a5-? O 10 2-6 20-40 s; jul, ioz <oe1 136 tu.-65 3S 75 10 z 40-200 $ JÇ, 1 ± ¯û5TiJbÙ l9 2-5 6-65 3S-192 75-375 5-10 5 22-110 20-40 'L.coli 21 2 5 6-65 1,' -. 3 z 10 t 10 6 20-40 A.aerogenes 2 a os2 ¯ \ 0.5 <4. ao 5. \ 5 2-6 zelf?;

   Proteus Sp. 20-40 13o 3jo 3U / ,, ^: 750- 10 '10% -lu 4-12 ... 3840 7500 Monilia aI bicans: 6o â .o .., ooo2z. o00 ô00 looo 22¯00 a2, o00 s * au + eus 3 1-2 4-5 o, 5 4: '5-in 10 6-11 S. alLlus 5-1 4 3S-192f 75 z.0 10 6 -H 2 suiD.til 'ruz .7> 6C), 65 38-192: 7.5-75 1-5 e 5: 22-110 12

 <Desc / Clms Page number 6>

 
 EMI6.1
 =, lyeoidos 1 "i 0.2 o, E t <o; 5 r ± il-5 1 1 110-220 12-2 '2.subtilis tt 219: a, 2-: 0, 1-3 2 a < 0, 3 4 1-3 ta * (5: 1-2 <2
 EMI6.2
 
<tb>: <SEP> 1.0 <SEP> 1.0 <SEP>:
<tb>
 
 EMI6.3
 1. - An, Ob 't. Mr. 0 "crude" "" 1, "1 II. - Antibiotic - Crude material prepared coBEie C2..l1S - exeY, lp..te II CÎ- according to the invention below, the product precipitates with a pH = 9 being filter, resuspended in water and dried
 EMI6.4
 after freezing.



  2. - Aureomvcine - CristeJJ¯ized hydrochloride 3. - Ciiloraùpheaiicol - Crystallizes /. # Streptoth.rici> .1e - Streptothricin sulphate (ex helianthate cris- tQ1lisé, SOO 1; /ù.g streptomycin) 3. - St: ie: ptor.; Vci .. '1e - Sulfate of stTeptoyycin (750 u / rr..g of streptoI-- cille).



  An additional interest is Inactivity observed for -a series
 EMI6.5
 do: 1Íco-o:;:, s 1Ís.TD.e when using the 211t.i'biotic in the crystallized state.



  Note that the differences between the results obtained with the N.lûe natiëre,! .. "1 the oCÈ.u7 .. 'rlS' .7.5 e'L24''E ':. 1'i: G' i'e 'GZ' "'222eS c. C! BS ipL t "e'G8S G'ü1 are found in the raw material.
 EMI6.6
 .AB1E.AU- II
 EMI6.7
 
<tb> Weight <SEP> of the <SEP> product <SEP> antibiotic <SEP> obtained <SEP> according to <SEP> 'invention <SEP> and <SEP> state
<tb>
 
 EMI6.8
 crystallizes necessary to produce the complete in11ibition of gold
 EMI6.9
 
<tb> ganism <SEP> drawn up.
<tb>
<tb>
<tb>



  Species <SEP> meg / ml.
<tb>
<tb>



  A. <SEP> aerogenes <SEP> 1. <SEP> 0
<tb>
 
 EMI6.10
 1 ± lev i iel 1 a pneiamoi-iae 3.0 E.coli 5.0 1, tjçp # io sa, 3.0 S.parat-pIiî.iA 1.0 5, p #, ra, tàTplii ± 1 1.0 S.paradysentsriae 1.0 S.p ' ullorum 10.0 i # soEJtilis (7j) A 219) 3 .0
 EMI6.11
 
<tb> S.albus <SEP> 1.0
<tb>
<tb> S.aureus <SEP> @ <SEP> 1.0
<tb>
<tb> M.albicans <SEP> 1000
<tb>
<tb> Proteus <SEP> sp. <SEP> 1000
<tb>
 
 EMI6.12
 Ps.aerug10sa 100 Br. b # .lci '.. isepticus 3.0
 EMI6.13
 Another method of distinguishing the antibiotic, prepared according to L "'1ve: J.tion, from other antibiotics is 12. determination of its action on varieties of bacteria rendered resistance to various antibiotics by their. transfer in portions into broths containing gradual concentrations

 <Desc / Clms Page number 7>

 
 EMI7.1
 : z #:

  = '; crescents deis mtibiotic-es by lc'nnOlt the variety ol'3i '"" Jle2' J C¯'l, 1 3 :::: 'illegible at all:? û1tJ10î '! slleS, For the inexperience below we plan- a. ; a 12 D disc ... 1l. : .0 sterile filter paper dan.:. a horcillo: .l # .2 cul- -Cura de l '6: lTGibiotique and it is placed in the center of the surface of a plate
 EMI7.2
 nutrient agar. Cultures of Aerobacter ae-
 EMI7.3
 rogenes l) susceptible to clilol <ezphenicol, streptomycin and s Lrepto- 3..ric.ne, 2) resistant to streptomycin ;, 3) resistffiTG to? streptothricine,; ':.) was resistant! .T.t to chloremphe = lcol * After an incubation of 18 hours at.



  37, inhibitory sones are found for all cultures except the one which was resistant to ethylphenicol, which distinguishes the antibiotic, prepared according to the invention, from stieptoh3-cbie and streptothricin. It is however distinguished from ohloramphenicol by polarigraphic analysis by which the characteristic half-wave of chloramphenicol (for a pH of approximately 4.5 -0, G5 volts compared to the mercury sink but normalizes interieu- = ": ûi1 ') was not observed.



  The toxicity of ^ iîl o? cue9 prepared according to the invention can be judged relative to other antibiotics based on the following considerations. A preparation of this aDGibiotic, compared to a255 -c./'s :. of cI11018J # .I? he: nicol and to. 2000 u / mg of rep'coi ci.e had an ID 0 of .3 ,: 1 :? ',' when injected into the veins Ct'ti = .2F. ' mouse of 20 grs. which corresponds to 0.13 Big of chloramphenicol and 7 mg of streptomycin. These antibiotics have an LDO 'for a 20 gruz mouse of 0.65 µg and 2.5 µg, respectively. The elltibiotic, prepared according to the, ¯u er.i, .o2 and in the crystallized state and when it is injected into the veins has an IDO of 3.0 Ing for a mouse due 20 Gr and 1J.:l ID 50 of L, 0 Big for a mouse of 20 gr.

   For other 0osci3 it has been found that the intravenous LD 0 for the hydrochloride of this antibiotic is equivalent to 103 µg of the crystallized siaphoteric compound by weight in kilograms of mice while the ID 50 is equivalent to 192 ing çr'lo; rar: the; It can be seen that. Impurities ;, which are found in acWizov.-. J., - the crude used above ;, have about the T. 10n: the toxicity that li, 1-ripe a # itLDioticue.



  ., 'a: L¯FJ o - cue9 prepared according to' l '.¯wen' c- o5x9 is distinguished from au- reomycin by its mode of e = rlra, ction by solvents. Aureomycin solution having a pE of 2.0 of &, 5 or 9,0, when extracted with ether, nonInal butanol, ethyl acetate ;, methyl-isobutyl ketone, benzene or
 EMI7.4
 chloroform ;, loses its activity while a solution of the antibiotic,
 EMI7.5
 obtained according to the invention, can be extracted only with normal butanol.



  De meue, the. stability for heat is different for mild antibiotics.
 EMI7.6
 ques. TABLE III
 EMI7.7
 % of Normal Inactivity
 EMI7.8
 100 for 15 min. 2 5 for one hour fold antibiotic A1..1reOTIr, f- antibiotic according to .3Ver1 according to. i? ii eî1- chie tien.
 EMI7.9
 
<tb> yours
<tb>
 
 EMI7.10
 2.0 40 CO 100
 EMI7.11
 
<tb> 6.5 <SEP> 50 <SEP> <25 <SEP> 100
<tb>
 
 EMI7.12
 9.0 80 a5 zozo
 EMI7.13
 The behaviors of the different antibiotics were compared,
 EMI7.14
 by chromatographies.; Iaies on paper for which two different modes of solids were used, by tests at 2 Gb for 24 hours, by using B, xubtilns cosme trained organism.

 <Desc / Clms Page number 8>

 



  TABLE IV RF value
 EMI8.1
 
<tb> Solvent: <SEP> water <SEP> saturated <SEP> of <SEP> Solvent: <SEP> water <SEP> saturated <SEP> of
<tb>
<tb> n-butanol <SEP> plus <SEP> 2 <SEP>% <SEP> diacid <SEP> n-butanol.
<tb>
<tb> p-toluenesulfonic <SEP> more
<tb>
<tb> 2 <SEP>% <SEP> piperidine
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> antibiotic <SEP> according to <SEP> the invention
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> -enter <SEP> 0, <SEP> 0-05 <SEP> between <SEP> 0.0-0.1
<tb>
<tb>
<tb> aureomycin <SEP> -enter <SEP> 0.0-1.0 <SEP> between <SEP> 0.0-0.5
<tb>
<tb> Chloramphenicol <SEP> -1.0 <SEP> 1, <SEP> 0 <SEP>
<tb>
<tb>
<tb> Streptomycin <SEP> A <SEP> - <SEP> 0.2 <SEP> 0, <SEP> 0 <SEP>
<tb>
<tb>
<tb> Streptothricin <SEP> - <SEP> 0.03 <SEP> 0,

  0
<tb>
 
The invention also consists of a method for growing a new and heretofore undescribed species of microorganisms, S. rimosus, preferably at 24-30, under submerged conditions of agitation and aeration, on a medium consisting of a source of carbohydrates, such as sugars, starch, glycerol; an organic source of nitrogen ,. such as soybean flour, wheat gluten, cottonseed flour, lactalbumin, enzymatic digestion of casein, tryptone; a source of growth substances such as soluble distilleries, yeast extract; mineral salts such as sodium chloride, potassium phosphate, magnesium sulfate, sodium nitrate;

   a buffering agent, such as calcium carbonate; and a vegetable oil. When growth is complete, the mycelium is separated from the broth which now contains the antibiotic and this is collected from the broth by extraction with organic solvents at a suitable pH or by adsorption of the liquid. antibiotic out of the broth onto activated carbon and separating it from the carbon using organic solvents or water at an appropriate pH or by other well known means. The antibiotic thus obtained possesses unique and valuable properties which distinguish it from all the antibiotics known and described heretofore.



   An inoculum can be obtained using a culture supplied from Roux strains or flasks inoculated with S. rimosus. Solid media which are suitable for this initial culture are beef lactose or Emerson's agar. This culture is used to inoculate the contents of shaken flasks (shakers) or submerged inoculum tanks. The contents of submerged inoculum tanks can also be inoculated with those of shaken vials. Any culture in shaken flasks generally reaches its maximum in four days, while inoculum in submerged vessels usually forms most favorably within two days.

   From the inoculum tank, the broth containing the micro-organism is pumped into the fermentation apparatus under absolutely aseptic conditions and growth takes place for a further period of two days. Throughout the time the aeration is maintained in the tanks by blowing sterile air therein by an air sprayer with a flow rate of 0.5 to 2 volumes of free air per volume of broth and per minute . If difficulty is encountered in preventing the formation of scum in the tank, antifoams such as vegetable or animal oils or the like are added to break up the scum.

   While the broth is stirred at a speed which depends on the type of stirrer, absolutely aseptic conditions are maintained and the temperature of the stirred broth remains between 24 and 30.



   The antibiotic can be recovered from the fermentation broth in which it is formed in various ways. The mycelium in the fermentation broth must first be removed and it is found that this is best done by making the mixture acidic, preferably with a pH below

 <Desc / Clms Page number 9>

 4, after which the mycelium is separated by filtration. If this pH adjustment does not take place, part of the antibiotic remains on the mycelium.
 EMI9.1
 The pure eta can be recovered by -braita, or the fermentation broth filtered with activated carbon at a pH near neutral.

   The antibiotic can be taken up from the adsorbent using water saturated with an alcohol partially miscible in water, such as butanol, the pH being adjusted to 1.5 with an acid, such as hydrochloric acid. After filtering off the spent adsorbent, the pH of the filtrate can be adjusted to 6-9 and the solid antibiotic can be recovered by drying after
 EMI9.2
 freezing and in vacuum. Rather than drying the filtrate, the antibiotic can be extracted out of it into butanol after adjusting the pH to about 9.

   The butanol extract can then be concentrated to obtain a purified antibiotic or this extract can, in turn, be subjected to extraction with an aqueous acid such as dilute hydrochloric acid.



  After separation of the aqueous phase, its pH can be adjusted to 6-9 by the addition of a base or by treatment with an anion exchanger, such as
 EMI9.3
 Amberlite Ill4 (a resinous product manufactured by the Company Rol1I! l & Haas).



   Rather than absorbing the antibiotic out of a broth filtered through a solid adsorbent, the antibiotic can be extracted out of this broth by certain solvents having a basic pH, preferably in the region of 9. Among the solvents, which can be used include butanol, amyl alcohol
 EMI9.4
 lic and phenylcellosolve. The antibiotic can be extracted with an acidic pH, preferably less than 3.5. Phenylcellosolve can be used for this purpose. After extracting the antibiotic from the filtered broth with a pH of 9 and using butanol, the solvent can be concentrated in vacuo to a fraction of its original volume.

   After extracting the concentrate
 EMI9.5
 with butanol using a dilute acid, after separation of the phases and after adjusting the aqueous phase to a pH 6-7, the separation of a solid antibiotic is obtained. This product can be filtered and dried , after which it has an activity of about 600 micrograms of pure antibiotic per milligram.



   To measure the activity of the purified products, the pure antibiotic, in the crystallized state and prepared as described below, is taken as a standard.
 EMI9.6
 and its activity is denoted by 1000 microgrammas per milligram (mcg / mg).



  For the experiment a test organism Klebsiella j2-neil-r-oiiiae is used.



  Pi I 602 and assay medium are Baltimore Biological Laboratory antibiotic test broth prepared according to the Food and Drug Administration guideline for streptomycin turbidimetric test broths. The test method is that of Me Nahon J.R. (J. Bioi.Cb-emVol 153, pages? .Ç-5, April 1944.). Crystallized chloramphenicol can also be used as a standard of comparison and it is found that each milligram of crystallized antibiotic obtained according to the invention has an activity.
 EMI9.7
 4qdV ± -eifLe to that of 3.15 milligrams of crystallized cor2mphenicol.



   The crystallized antibiotic can be obtained from the amorphous solid material, as obtained by the recovery procedure indicated above (activity about 600-650 mcg / mg). This is achieved by adjusting the pH of the raw material in water to 2.8 using an acid, such as hydrochloric acid, filtering the resulting solution and partially evaporating the solution in vacuo. The separated crystals are filtered, washed and dried.



  They give 850-900 mcg / mg.



   Another method of obtaining the crystallized antibiotic is to dissolve the crude antibiotic, giving the test about 670 mcg / mg, in hydrochloric acid with a pH of 2.5. The aqueous solution is filtered and treated with sodium chloride and a little more than half its volume of butyl alcohol. After thoroughly shaking the mixture, the separated solid is removed by filtration. It is dissolved again in methanol and a reduced volume of water is added. After standing overnight in a refrigerator, the crystals formed are filtered, washed and dried. The crystalline mass, obtained in this way, gives the test about 860 mcg / mg and forms an antibiotic base mixed with calcium chloride.



   Another method to obtain the crystallized antibiotic is

 <Desc / Clms Page number 10>

 
 EMI10.1
 1 subject the added material, given to the test approximately 650 B-cg / ng with a countercurrent distribution cor :: ne proposed by Craig (J. Biol. Chen. Volume 155, psge 1 i i4rl. The solvent used is water, adjusted to a pE of .5 with hydrochloric acid, and butyl alcohol. The aqueous phase of selected tubes is evaporated in vacuo to give white crystals,
 EMI10.2
 prismatic agents of the antibiotic, giving the test about 950> icgllnig.



   Various salts of the antibiotic can be prepared, most simply by adding the desired acid, mineral or organic, to the antibiotic in water until a clear solution is obtained. Solid salts can be prepared by adjusting the pH of such a saline solution of the antibiotic to the point just below where the antibiotic would start. to separate (about 2.5). The solution can then be dried, for example by subjecting the frozen solution to a vacuum. Acidic and crystallized salts of the antibiotic are obtained by evaporating a solution of the salt in water with reduced pH.

   Hydrochloric, sulfuric or phosphoric acid can be used as mineral acids and citric, tartaric, gluconic acid, etc. as organic acids. Since the antibiotic is amphoteric, the salts of different metal elements can be prepared with the help of the antibiotic. In particular, the alkali metal salts of the antibiotic are prepared by treating an aqueous suspension of the antibiotic with an alkali hydroxide. The solid metal salts of the antibiotic are obtained by evaporating an aqueous solution of the antibiotic with a suitable pH.



   Various other methods can be used to purify the an-
 EMI10.3
 tibiotic. It can be extracted out of the filtered fermentation broth as a salt using one of the acids from a group of organic sulfonic acids. It can be precipitated out of aqueous acidic solutions of crude material using picric acid.

   The antibiotic can also be precipitated out of a dilute solution of the raw material using an acid.
 EMI10.4
 arylasosulfonic acid having a low pH, for example Orange II dye having a pH 2. The antibiotic can be recovered from the coloring salt by reagents such as barium chloride which precipitates the barium salt from the dye leaving a solution of the antibiotic which can be dried. It is obvious that other metal salts are equally suitable. The activity and color of the impure antibiotic can be improved by dissolving the product in dilute mineral acid and adding ammonium naphthalene sulfonate to the solution.

   The dark colored precipitate is filtered and the pH of the filtrate is increased to obtain a precipitate of the antibiotic with improved color and activity.



   The antibiotic crystallizes in various forms depending on the treatment used for its preparation. One of these shapes is thick hexagonal plates and another is thick needles. The in-
 EMI10.5
 The refractive dices of the first of these forms are: = bzz 0.004; 13 = 1.648 f 0.004. 1 is greater than 1,700. The optical rotation or optical rotation of a solution of the pure crystalline compound in methanol decreases rapidly on standing at room temperature. If the specific rotation is read soon after the solution is prepared, it has the following value: ([alpha]) D25 ¯ equal to 26 (0.5% in methanol).

   The addition of calcium chloride to the methanolic solution causes a noticeable change in the specific rotation to a strongly negative value. The crystallized mixture of antibiotic and calcium chloride also has a strongly negative specific rotation in. methanol. The specific rotation in
 EMI10.6
 Dilute hydrochloric 1-acid is () D2 equal to: t 196 (0.5% in N / 10 hydrochloric acid.



   When the absorption spectrum of ultraviolet rays of a sample of crystallized antibiotic is determined, using a Beckman quartz spectrophotometer - Model DU,. in an aqueous solution containing
 EMI10.7
 For dihydrogenated potassium phosphate (pH 4.5) in leze cells, the following maxima are found: for P.1% cm at 353.2 m. we have = 27.7; at 2'75s 0 m, we have at = 299 and at 247.5 m. we have [gamma] = 236.

 <Desc / Clms Page number 11>

 



     When the absorption spectrum of ultraviolet rays of an- is determined in a solution of phosphoric acid diluted with
 EMI11.1
 a pH of 1.7 the following maxima are obtained for E3-% at 352.5 m we have J = 277 and at 267.5: here we have [gamma] = 379.



     The antibiotic is an amphoteric compound containing weakly basic and weakly acidic groups. It contains the elements carbon, hydrogen, nitrogen and oxygen. Chemical analyzes of the crystalline mass give, on average, 53.05% carbon, 5.91% hydrogen,
 EMI11.2
 53c ';. % nitrogen and 35.4 oxygen (by difference). The material is free of ash. It has a melting point of around 185 and some decomposition occurs at this temperature. It is soluble in methanol, ethanol, acetone and propylene glycol, in water up to 0.25 mg per ml. to 25 and it is insoluble in ether and in petroleum ether.



   The crystallized antibiotic, mixed with mineral oil, has several characteristic absorption bands in the infrared, among these are the following frequencies (in reciprocal centimeters):
 EMI11.3
 3460, 3360, 1590, 1318, 1280, 1242, 1l22, 1090, 1076, 105 / j., 1031, 1012, 938, 863, 839, 772, 705, 679. This determination was made with stiff U11 m - mineral oil mixture of the material.



  The above properties show that the α-Wibzoticue9 obtained according to the invention is markedly different from any of the known antibiotics.



   The examples, given below, show how antibiotics can be formed, recovered, concentrated, purified and ultimately converted to pure and crystallized state. Crystallized antibiotics and their crystallized salts are of particular value because of their high purity and efficacy. The examples given are in no way limiting or restricting.
 EMI11.4
 tifs. Each time a variety of sBreotor1Tces rimosus is used, designated by the isolation number S. 3279.



  Example I
 EMI11.5
 Medium Formation and recovery of 1 antibiotic
 EMI11.6
 
<tb> ¯¯¯ <SEP> that
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> flour <SEP> from <SEP> beans <SEP> from <SEP> soybeans <SEP> 10 <SEP> gr.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>



  Cerelose <SEP> 10 <SEP> gr.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Solubles <SEP> from <SEP> distilleries <SEP> 0.5 <SEP> gr.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>



  Sodium <SEP> <SEP> <SEP> 5 <SEP> gr.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> <SEP> distilled water <SEP> for <SEP> to make <SEP> 1000 <SEP> ml.
<tb>
 
 EMI11.7
 



  The pH is adjusted to 7.0 with caustic soda and calcium carbonate is added in an amount of 1 g per liter.



   We introduce five hundred parts in m1. from the above medium to Fernbach vials which are then sterilized at 1210 for 30 minutes. After
 EMI11.8
 cooling, the flasks are inoculated with a suspension of the 12 rimo5us culture obtained on the surface of lactose beef-agar strains and the flasks are shaken for 4 days at 28 in a rotary shaker having a
 EMI11.9
 displacement of 5 cm. while it rotates, at 200 v / r.m, At the end of this -brai tement it is found that the broth contains 640 ûDClml. and 400 µ / l of chlor-, S! J1phenicol. The nyeelizns is separated from the broth by filtration and the pl of the latter is set to 9.0. The antibiotic is extracted out of the broth with normal butanol.

   When we observe the ultraviolet absorption spectrum
 EMI11.10
 for the butanol solution of the antibiotic, the peaks of the absorption curve are at 385 and 270 millimicrons.

 <Desc / Clms Page number 12>

 
 EMI12.1
 >; em ± le II Formation and recovery of antibiotics
 EMI12.2
 
<tb> than raw <SEP>
<tb>
<tb> Middle
<tb>
<tb>
<tb> flour <SEP> from <SEP> beans <SEP> from <SEP> soybeans <SEP> 30 <SEP> gr.
<tb>
<tb>
<tb> starch <SEP> from <SEP> wheat <SEP> 5 <SEP> gr.
<tb>
 
 EMI12.3
 ii-Z-Indne-B (enzymatic digestion
 EMI12.4
 
<tb> of <SEP> casein) <SEP> 1 <SEP> gr.
<tb>
 
 EMI12.5
 [Sodium nitrate 3 ger.
 EMI12.6
 
<tb> of <SEP> water <SEP> for <SEP> to make <SEP> 1000 <SEP> ml.
<tb>
 
 EMI12.7
 The fold is set at 7.0 and 5 gr. ' of calcium carbonate. are added to each liter.



   Two liters of this medium are dispersed in several vases in
 EMI12.8
 glass having a capacity of 3.5 liters containing stirrers and ionizers for the admission of sterile air. The apparatus and the medium are sterilized at 121 for one hour. After cooling, the contents of the vessels were inoculated with 50 µl of a 12 rnosus suspension After stirring for 40 hours at 1800 rpm the broth was found to contain 1600 µ /: ml of chloramphenicol and 1280-2560 µl / ml.



  Seven liters of broth, thus prepared, are separated from the my-
 EMI12.9
 celium by filtration and the pH is adjusted to 7.0. 70 gr are added. of A (an activated carbon) and the whole is stirred at room temperature for one hour. The spent broth is filtered off from the charcoal which contains the antibiotic by filtration and the cake is washed with distilled water.



  The antibiotic is taken again from the activated charcoal using a liter of distilled water saturated with normal butanol and the pH of which is adjusted to 1.5 at AI.
 EMI12.10
 hydrochloric acid. The price of the recovered mass is set at 90 and it is extracted with one liter of n-butanol. The supernatant layer of the butanol is separated from the aqueous phase and is extracted with hydrochloric acid.
 EMI12.11
 I: 10, The aqueous and acidic layer is separated from the butanol and its pH is brought back to 5.0 by stirring with Amberlite (a resinous ion exchanger) which is separated from the antibiotic solution by filtration .

   This solution is frozen and dried to give 2.0 g of a yellowish-brown powder.
 EMI12.12
 This preparation gave in the test 255 u / mg of chloramphenicol and 2000 u / isg of streptomycin.
 EMI12.13
 lXOE2LP - ILI Antibiotic formation
 EMI12.14
 
<tb> Medium <SEP> inoculum
<tb>
 
 EMI12.15
 lF-à-1hìe B (enzymatic digestion
 EMI12.16
 
<tb> of <SEP> casein) <SEP> 1 <SEP>%
<tb>
<tb> Cerelose <SEP> 1 <SEP>%
<tb>
<tb> Extract <SEP> of <SEP> yeast <SEP> 0.5 <SEP>%
<tb> <SEP> sodium <SEP> <SEP> 0.5 <SEP>% chloride
<tb>
<tb> Carbonate <SEP> of <SEP> calcium <SEP> 0.1 <SEP>%
<tb>
 We complete with tap water to make 'a liter and we
 EMI12.17
 set the pE to 6,

  7 with KOEL About 875 liters of the medium is placed in a 1000 liter inoculum tank and maintained at 121 for one hour. After cooling to $ 2, the medium is inoculated with one liter of a suspension of S. trimosus. The contents of the vessel are aerated and stirred for 25 hours before being used to inoculate the contents of the fermentation apparatus.
 EMI12.18
 



  The fermentation medium is made up as follows:

 <Desc / Clms Page number 13>

 
 EMI13.1
 
<tb> flour <SEP> from <SEP> soybeans <SEP> <SEP>
<tb>
 
 EMI13.2
 wheat cnicioiz Oy5%;: Y-Z-J1Jnil1e B 0.1% i:. 'Lr2-e sodium 0.3% calcium carbonate 0.5%
 EMI13.3
 
<tb> vegetable <SEP> oil <SEP> 0.4
<tb>
 
 EMI13.4
 The mixture is packed with tap water, the pH is adjusted to 7.0 and sterilized by maintaining the medium at a temperature of 121 for one hour.



   After cooling to 28, the fermentation medium is inoculated.
 EMI13.5
 Le with the contents of the cell el'inocuJ.'U111, mentioned above, After 47 hours, the pH is raised to 8.0. It is found that the broth has an activity of
 EMI13.6
 335 u / mg chloramphenicol or 20 uDC / ml.



  Example IV. Recovery of the 8l1tibiotic from the ---------- broth by adsorption.- Seven liters of an antibiotic fermentation broth is taken, separated by filtration from the fermentation mycelium at a pH below 4 , and which gives on analysis 190 mcg / ja1, and its pH is adjusted to 1.0. We add 70 gr. of Norit A (an activated carbon). After stirring for one hour, the charcoal is filtered off and washed with water. The antibiotic is separated from the absorbent by water saturated with butanol and the pH of which is adjusted to 1.5, with
 EMI13.7
 lucid hydrochloric acid. The pH of the collected mass is adjusted to geo after which the antibiotic is extracted into butanol. The butanol phase is extracted again with a small volume of hydrochloric diacid r,; fl0.

   The pH of the aqueous solution is adjusted to 590 using Amberlite IR-4 (a synthetic and resinous anion exchanger manufactured by Rohm. And Haas). 1, the antibiotic is then recovered from. the solid state by drying the aqueous solution after freezing. It weighs 1.5 gr. and has an activity of 80 mcg / mg. temple V. Recovery of the antibiotic from the broth by extraction.



   The pH is adjusted to 2.5 of 8 liters of a fermentation broth of
 EMI13.8
 . ' a.nzxbâ.OtiCue, by sulfuric acid and 'the mycelium is filtered. The filtrate contains 2,400,000 mcg of antibiotic. Its pII is set to .0 and it is expressed by three liters of butanol in different parts and the mixed extracts contain 1,600,000 mcg of the al1 "tlbiotic. The butanol extracts are concentrated in vacuo up to 650 in this solution containing 2400. mcg / mu of the antibiotic The butanolic solution is extracted with one liter of hydrochloric acid 11/10 in several parts and the mixed aqueous phases have their pH adjusted to 7.5 with dilute caustic soda.
 EMI13.9
 precipitate is filtered off and dried.

   It weighs 1.69 gr. and has an antibiotic activity of 625 - mcg / '--- mg. @
 EMI13.10
 temple VI. Preparation of the crystallized antibiotic
The amorphous antibiotic (20 gr.), Giving the test 625 mcg / mg, is dissolved in 400 ml of water by adding up to% hydrochloric acid. that the pH is 2.5. The filtered solution has a volume of 480 ml and gives the es-
 EMI13.11
 bali 26.400 l11cg /: mJ .. After - addition of 50 g of sodium chloride and 300 Ni of wet butanol, the mixture is shaken thoroughly. The solid precipitate is filtered off and dissolved in 150 ml. of methanol.

   The methanolic solution gives
 EMI13.12
 Born on the test..31,000 racgrl, After addition of 5 m .. of water, argib2oti.- that crystallized begins to form. Another 20 ml of water is added and the mixture is left to stand overnight in a refrigerator. The filtered and dry product weighs 5.8 gr. It has an activity of 860 mcg / mg.

 <Desc / Clms Page number 14>

 
 EMI14.1
 



  .r-: L: 31: 'T., ... Pj ::; c :: Cc.: î: .. 0 == ds phantibiotic crystallizes by countercurrent ëictribution.



  The anorphey a = iti Diotiq.ae given in assay 640 µg / 16 is dissolved in water and adjusted to pH about 3 with hydrochloric acid. The solution is saturated with butanol and then subjected to countercurrent distribution through nine separator tubes using equal volumes of wet butanol and dilute hydrochloric acid (pH 3) saturated with butanol.



  Each of the aqueous and butanolic phases is tested for its activity and the aqueous phases are chosen in estubes 6 and 7. These phases are mixed.
 EMI14.2
 and concentrated in vacuo to a small volume. The crystals b1 J1; z separated are centrifuged and washed successively with water, acetone and 1? ether.



  The dried product has an activity of 945 mcg / mg.
 EMI14.3
 



  '.: era.nle VIII. Preparation of hydrochloride of 1? a> -1-tibiotic. Antibiotic of any purity can be converted to the hydrochloride by treating the material in water with hydrochloric acid until a clear solution is obtained. The pH of the solution is then adjusted to a value close to 2.5. The solution is frozen and dried in vacuo to give an easily soluble powder.



     The diffraction pattern of an X-ray of pulverized hydrochloride
 EMI14.4
 Crystallized antibiotic is determined in a Philips camera, having a razron of 57.3 1! D .. and using the alpha ra; rOlll1eL1eIlt of the copper.



  Below, we give the approximate deviations of the crystals in Ull plane (d in units -71gstrom) calculated using the Gide of the lines plus L-itelise5 mar- nued on a photographic film and 1-lintensi-t ', é relative and approximate (I) of these lines by adopting for the most intense line the value 1.00.
 EMI14.5
 
<tb> I <SEP> d <SEP> in-units <SEP> A
<tb>
<tb>
<tb> 0.9 <SEP> 10.32
<tb>
<tb>
<tb> 0.8 <SEP> 9.39
<tb>
<tb>
<tb> 0.6 <SEP> 8.30
<tb>
<tb>
<tb> 0.2 <SEP> 5.26
<tb>
<tb>
<tb> 1.0 <SEP> 4.19
<tb>
<tb>
<tb> 0.5 <SEP> 3.92
<tb>
<tb>
<tb> 0.2 <SEP> 3.20
<tb>
 Example IX. Preparation of sodium salt for the antibiotic.



   The antibiotic, of any purity, can be converted to its sodium salt by treating the material in the water with caustic soda.
 EMI14.6
 that until its pH is greater than 9, the solution is then frozen and dried in vacuo to give dry sodium salt in the form of a water soluble powder.



   In the above examples, the compositions of the culture mediums are given only as a guide and can vary between relatively wide limits, for example by replacing soybean flour with lactalbumin, soybean flour. linseed or cottonseed; peanut flour, wheat protein, wheat gluten, etc. As a result, the fermentation conditions, such as agitation, degrees of aeration, temperature, etc. can be changed in a big way. In addition, other methods or variants of those described to recover,
 EMI14.7
 concentrate and purify 1 antibiotic and its salts can be adopted.

   Among the possible recovery methods we can cite that which consists in adsorbing the antibiotic directly out of the fermentation broth on
 EMI14.8
 resinous date exchangers. Corme for Ilaureolwci-ne and c'hloramph8l1..Ícol,

 <Desc / Clms Page number 15>

 the antibiotic is active in vivo as well as in vitro and shows marked chemotherapeutic activity against experimental infection of mice which is caused by streptococcus hemolyticus, D. pneumoniae, K pneumoniae, S. thyphosa and other organizations.

   The new antibiotic has definite anti-rickety activity against embryonic hen egg and at high concentrations it prevents infection of the chick embryo with a PR8 strain of influenza A virus.



   The antibiotic is therefore of great value for the treatment of various infections of humans and animals. It can be administered by parenteral injection, orally or locally with usual dosages.



     As it goes without saying and as it follows, moreover, already from the foregoing, the invention is in no way limited to that of its modes of application nor to those of the embodiments of its various. parts, having been more especially indicated; on the contrary, it embraces all the variants.



   CLAIMS.



   1. A process for the preparation of an antibiotic, in which a process of culturing a strain of Streptomyces rimosus in an aqueous, nutritious and carbohydrate-containing solution under submerged aerobic conditions until said solution exhibits a substantial antibacterial activity, after which the antibiotic thus obtained is recovered from the fermentation broth 2. Process for the preparation of an antibiotic, in which the process is cultured a strain of Streptomyces rimosus in an aqueous culture medium containing a substance. growth promoter and maintained in these submerged aerobic conditions, at a temperature of between 24 C and 30 C approximately, for a period ranging from 2 days to a week,

     after quay, the antibiotic thus obtained is recovered from the fermentation broth.



     3. - A method according to either of claims 1 and 2, wherein the method of recovering the antibiotic comprises the step of adsorbing the antibiotic onto activated charcoal.



     4. A method according to either of claims 1 and 2, wherein the method of recovering the antibiotic comprises the step of extracting it in an organic solvent immiscible with water and in water. slightly alkaline conditions.



   5. A method according to either of claims 1 and 2, wherein the method of recovering the antibiotic comprises the step of extracting the latter in an organic solvent immiscible with water and in strongly acidic conditions.



   6. - A method of producing an antibiotic in substance as described in the examples above.



   7. A novel antibiotic prepared by a process according to any one of the preceding claims.

Claims (1)

8. - Sel de l'antibiotique suivant la revendication 7. 8. - Salt of the antibiotic according to claim 7. 9. - Antibiotique suivant la revendication 7, sous forme cristal- line. 9. An antibiotic according to claim 7, in crystalline form. 10. - Sels d'acide cristallins de l'antibiotique suivant la reven- dication 7. 10. - Crystalline acid salts of the antibiotic according to claim 7. 11. - Sels de métal cristallins de l'antibiotique suivant la reven- dication 7, 12. - Nouvel antibiotique et ses sels possédant les caractéristi- ques spécifiées dans le présent mémoire d'un antibiotique obtenu en culti- vant une souche de Streptomyces rimosus. <Desc/Clms Page number 16> EMI16.1 11. - Crystalline metal salts of the antibiotic according to claim 7, 12. A novel antibiotic and its salts having the characteristics specified herein of an antibiotic obtained by culturing a strain of Streptomyces rimosus. <Desc / Clms Page number 16> EMI16.1 130 - Nouvel antibiotique et -ses sels, en suhst 1.CB: tels que dé- EMI16.2 crits ci-dessus. EMI16.3 Note rectificative EMI16.4 à ' là page 10, remplacer les lignes 59 et 60 par: "suivants; à353,2n..u= z1 1% a',d. CI 3 53 9 2 eau 1 277 Il à z5, o IIltl = 299 si s. 247,5 ±1 /U = 236 A la page Il, remplacer les lignes 3 et 4 par :"les Raxicia suivants: 1µ/ a 352,5 . = 277 11 â 2'!, 5 f- = 379 130 - New antibiotic and -its salts, in suhst 1.CB: as de- EMI16.2 writings above. EMI16.3 Corrigendum note EMI16.4 on page 10, replace lines 59 and 60 by: "following; à353,2n..u = z1 1% a ', d. CI 3 53 9 2 water 1 277 Il at z5, o IIltl = 299 if s . 247.5 ± 1 / U = 236 On page II, replace lines 3 and 4 by: "the following Raxicia: 1µ / a 352.5. = 277 11 â 2 '!, 5 f- = 379
BE495401D 1949-10-13 BE495401A (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US684417XA 1949-10-13 1949-10-13
US1019927XA 1949-10-13 1949-10-13
US304875XA 1949-10-13 1949-10-13

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BE495401A true BE495401A (en)

Family

ID=34831043

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BE495401D BE495401A (en) 1949-10-13

Country Status (4)

Country Link
BE (1) BE495401A (en)
DE (1) DE862647C (en)
FR (1) FR1019927A (en)
NL (1) NL75521C (en)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1025573B (en) * 1955-05-20 1958-03-06 Parke Davis & Co Production and extraction of paromomycin
DE1213568B (en) * 1959-11-24 1966-03-31 Franciszek Ulak Dipl Ing Use of Actinomyces varsoviensis for the production of oxytetracycline in the usual biological way

Also Published As

Publication number Publication date
NL75521C (en)
DE862647C (en) 1953-01-12
FR1019927A (en) 1953-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CH304875A (en) Process for the preparation of a new antibiotic substance.
BE530983A (en)
BE569728A (en)
BE487301A (en)
DE2528984B2 (en) Bestatin, its use and process for its production
US2914525A (en) Nucleocidin and the process of obtaining the same
BE697319A (en)
BE600096A (en)
BE544035A (en)
BE507951A (en)
CH267223A (en) Process for the preparation of a novel antibiotic.
CH333722A (en) Process for preparing a new antibiotic
BE496100A (en)
BE530635A (en)
BE545646A (en)
BE511759A (en)
BE511318A (en)
BE619532A (en)
BE566261A (en)
BE572570A (en)
BE529358A (en)
BE558382A (en)
CH318710A (en) Process for preparing a new antibiotic
BE543959A (en)
BE482061A (en)