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'< La présente invention est relative à la production, dans
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les glandes mammaires des ondulés, d'un anticorps ou principe
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protecteur très spécificJ.u6 contre une large gamme d'antigènes.
L'invention est relative égalenent à l'isolement et à la séparation d'un. nrincipe actif à partir du lait, et à l'utilisation du ri-inci-
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pe protecteur dans la prévention et le traitement des maladies de
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1 'h0111!'le et des animaux et dans la préparation et la purification
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de substances biologiques, protéines, antigènes, etc.
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L'importance du cnlostruln des vaches COt!J,rrJ8 source el 1 anticorps pour les veaux nouveau-nés est reconnue depuis de nombreuses années et a été très étudiée. Le travail menant a la présente invention a été orienté' vero/-L'Rnp1icAtion de ces rh0l1.0m.ènes de base
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connus, a un plus 1:;e 1. l't1"'-iJl'r., ti()r f;uc= l'f' '1'( ,! .. #;vlble dans ce qui )o\n'l[lit être ! p C.1, 1(H ;,;3c;>1;1 ;:1 < : rtat:: .a¯:.. 7 <>!'ii (.l'U1e 1)'C'[.lière recherche, on n découvert cuf Je !!('Il (le... ,r'or1!1c'V;r)fi des anticorps dans le des bovidés se trouve dvr18 les (;01J 111 <::8 protoplasmiques interstitielles. On n trouvé (IIlC eos cellules vw rient en nombre avec la nroù\1ction d'anticorps.
On fi découvert alors que l'animal pourrait être forcu de -ro7uire dcn rl!lticor}}s choisis par infusion, dons le pis, d'espèces particulières de ;;;1cro-organismes, L:orts ou en vie, et par une apnlicf'tion sirJi18ire d'antigènes de protéine et dlcnti,enes de tissu, nori.:oux ou pathologiques.
On a découvert que la qlllmti té de corns 5¯rruns 8:'Jécifir#s revenant dans le lait des animaux ainsi traités était rehaussée par des applications de renfort des antigènes, localement et systéma-
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tiQ.L1ement. rne application pratique de la matière imsume dans la prévention et le traitement des maladies des hOffi:1tes et des animaux était rendue possible par la découverte des inventeurs que, soit l'ingestion du lait contenant cette matière, soit une rerfusion dans l'intestion permettaient l'absorption des corps immuns dans des la circulation ou le cours du sang/animaux plus vieux, de même que chez les animaux nouveau-nés et les animaux d'une espèce différente
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de celle des donneiirs.
Des ap.l.'-4-cations parentérales de l'anticorps ou du principe protecteur ont été réalisées sur des animaux de la même espèce que celle du donneur et sur des animaux d'espèce différente.
La fraction du lait portant la matière immune peut être sé-
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parée par centrifupation à des conditions de pll et de température déterminées, Le lait fortifié par anticorps provenant d'ondulés
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stirmlés suivant la présente invention peut étre préservé xtar pas- teurisation ou par dessiccation.
'n but principal de la présente invention est de -or--voir
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un procédé permettant d'amener dons les -inondes f'1or11'l[d rCD des on- cles, un anticorps ou un principe Drotccteur trèsspécifique contre une large gamme d'antigènes.
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Un autre but pribcipal (le la prése ate invention est de pro- curer un procédé d'application de corps immune provehant des glandes mammaires des on?;, lés, en médccine et en élevage,
Un autre but de la -or'sente invention est (la procurer, comme composé nouveau, un lait de titre élevé, riche en principe protecteur spécifique contre l'un quelconque d'une large série d'antigènes, ou de combinaisous d'antigènes.
Un autre but encore de la présente invention est de procu- rer un procédé d'isolement et de séparation d'anticorps ou de prin- cipes protecteurs, hors du lait provenant de glandes mammaires sti- mulées d'ongulés.
D'autres buts de l'invention apparaîtront de la descrip- tion suivante.
Pour atteindre les buts précédents et d'autres apparentés, la présente invention comprend les caractéristiques décrites plus en détails ci-après et reprises aux revendications, la description suivante donnant certaines fornes .d'application non limitatives de l'invention, les principes de celle-ci pouvant être appliqués de bien d'autres manières.
Production du principe protecteur
Un anticorps très spécifique dans le lait des ongulés (spécialement vaches, chèvres, moutons, etc,) est produit contre n'importe quel antigène en introduisant un .tel antigène dans le pis de l'animal. Un anticorps spécifique dans le lait est produit par l'introduction de l'antigène dans les canaux des trayons de l'animal à un moment quelconque. Cependant, la réaction d'anticorps la plus élevée se produit après l'introduction de l'antigène durant la période sèche de l'animal et spécialement après une série d'introductions, connues sous le nom de renforts, espacées sur une certains période de temps.
Bien que les quantités d'antigène introduit, la fréquence (intervalle de temps) et le nombre de doses de renfort puissent varier largemet, la réaction la plus élevée d'anticorps résulte de l'injection d'une série de doses de quantités croissantes ans
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le pisi,un dans sa période sèche, sur une dur.'c <<c: P1IJn]'('Jc semaines.
Le volume et la concentration des doses .t'a;nti,Frc ne sont pas critiques mais sont choisis pour Ifl coMmodité. On sa trouvé que ltlàtgmentnition ou la diminution du volume d 1'.injection d'an- @
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tigène ne produit pas une augmentation ou une diminution du titre du principe protecteur du lait résultant. I¯ü .btence antigène -oeut être injectée à n'importe quel moment mets dans le cas (j'une vache ne donnant pas de lait, il est souvent préférable pour la C OflffiO dit , que l'ahtigène sont introduit vers la fin de la période de ges-
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tation.
C'est ainsi, par exemple, que les jtgeotions initiales peu- vent être données de deux à huit semaines environ avant la parturition.-
Des injections de renfort, lorsqu'on en donne, peuvent également être espacées à la convenance de l'opérateur, sauf que
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les injections devraient être faites suffisamment fréquemrient pour qu'une réaction antiphylactique ne se produise pas. Pour la plupart des espèces, ce temps est inférieur à environ 10 à 14 jours. Pour éviter une irritation et une congestion locales, on préfère habituellement que les injections de renfort ne soient pas données plus
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fréquemment que chaque jour. L?"' substances antigènes sont r.ises en suspenstion dans un milieu liquide, pour l'injection, tel que, par exemple, une solution saline physiologique stérile.
L'injection est réalisée dans le système de canaux du pis par le méat des trayons et dans le réservoir glandulaire. Le pis peut, si on le désire, être massé en vue d'obtenir une meilleure pénétration de l'antigène dans le système de canaux du pis.
Lorsque des injections d'antigène eont faites à la vache
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sèche, le principe protecteur est présent dans le lait dès 1 ' a ppa-' rition de celui-ci. Des injections de renfort sont [-!lors données par voies intraveineuse , intramusculaire ou Fous-cutanée pour maintenir la production du principe protecteur a un degré (il, té.
Pour les vaches donnant du lait, l'injection initiale et
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les injections de renfort peuvent être faites director:J'èl1t dons le
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pis. Le principe protecteur apparaît dune le lait environ, deux jours à deux serines sprès l'injection initiale, on veriant qualque peu suivent l'antigène particulier utilisa, Par exemple, on notait le streptococcus agalactica duns le lait le dixième jour après l'inoculation d'une vache donnent du lait. lesw substances antigènes qui sont utilisées dans la. pise en oeuvre de la présente invention pour la production d'un principe protecteur sont les bactéries, virus, protéines, moisissures et fongi mycotiques, tissus, pollens, et substances similaires qui sont 'antigènes.
Des exemples d'antigènes sont pour les bactéries : Salmonella pullorum,. Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Staphylococcus aureus, staphylococcus albus, staphylococcus pyogenes, pneumocoques, streptocoques, etc ; pour les virus: Influenza Type A, varicelle, variole, herpes simplex, etc; pour les protéines : albumine de l'oeuf, tissu de souris, tissu embryonnaire de l'oeuf, etc; pour les tissus : sang et sperme. Il doit être entendu que ces matières sont simplement des exemples du nombre et de variétés presque infinis des substances antigènes contre lesquelles des anticorps ou principes protecteurs spécifiques peuvent être produits dans le pis des ongulés.
Les expressions "substance antigène" et ''matière antigène" sont utilisées pour désigner des matières qui sont antigènes en elles-mêmes et également des matières non antigènes niais qui agissent comme 'antigènes en présence d'adjuvants. Les organisraes de maladies antigènes sont notamment compris dans ces expres- sions.
EXEMPLE 1
Le sujet expérimental était une vache de jersey, 5 semaines avant parturition. L'antigène était du Salmonella pullorum mort.
La dose initiale d'antigène était injectée dans le canal du trayon: 1 ml d'antigène par quartier, contenant environ 5 billions d'organismes. La première dose de renfort était -Injectée une semaine plus tard, à savoir 1 ml d'antigène par quartier, contenant environ 10 billions d'organismes. Des injections suivantes de renfort de 1 ml par qartier, contenant des concentrations progressivement plus
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fraudes de In Matière nEi;;:ne, respectives enb environ ',0, ::c. el.
40 billions dforr::\ni'tH1'CD l'arts, z La5f,t1-G f':itc j iJG' 1I1:.',rv: lIE,::': d'une seniaine. Le lait --r)r(o r.rturit9csn ..<.;.Ji>LJn..51: 1;.,,t;:-r.rze à plus de 100.000 dilutions.
L'anticorps ou principe protecteur d!,!!a Je, corT;,,, ciii.:ini x5' ra1;Jidenent après parturition,. depuis une i,1;jlutination 1; clus de 100;OOÔ dilutions immédiatement après la parturition jusqu'à une agglutination à 1000 dilutions seulement en quatre saines. Le niveau du principe protecteur peut être élevé et maintenu, par l'administration systématique d'antigène. Après parturition, des doses de renfort de l'antigène peuvent être administrées par injection parentérale de la matière antigène, injection intraveineuse, intramusculaire ou similaire. Des injections de renfort postérieures à la parturition ne peuvent pas être faites dans les canaux des trayons mais doivent l'être de façon parentérale pour éviter une réaction allergique.
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EIFYJIfiLE II
Le processus de l'exemple 1 était répété sur une autre vache, la seule différence étant que les doses d'antigène injecté, à la fois dans l'injection initiale et dans les injections de renfort, étaient d'une concentration qui n'atteignait qu'un dixième de celle utilisée à l'exemple T. Ie lait résultant était de teneur élevée en principe protecteur, aucune différence n'étant apparente par rapport au lait du premier exemple.
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IJr'- ; l'1,E III Un principe protecteur était produit dans une vache donnant
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du lait, par injection de streptococcus agalaotica. L'injection initiale était réalisée dans un quartier et consistait en une dose de 5 ml, contenant environ un billion d'organismes. Cette vache montrait une réaction négative avant l'administration initiale de l'antigène. Le principe protecteur apparaissait dans le lait au
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dixième jour. A le fin d'une période de quinze j.>,>rs, le lait avait un titre élevé qui était révélé par une réaction .le précipitation.
Une réinjection de 1rnti:;Ene dans le plême quartier au seizième
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jour produisait une forte rcacbion :l'] e1',',1(1\)('.
2.:;:l\}}',.. IX 1,n6 injection de 3 rt1 cotiien:Wt environ (JG'(r '}l.i..1':.cn d'orf,5anismes était faite (1:.1118 un quartier. titre du lr,it du jour d'injection due 1/;jQ, Seize jours plu. tard,le titre était de 1/5/.120
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@i iol"1 ]T De 1':scherichia coli était injecté duns une vche donnât du lait en une injection initiale 1.fitra-ni;mwnni.e , <ions un cmrt¯er9 de 5 ird contenant environ :±0Q millions de b.ot6rics. Le lait, <zuéatorze jours plus tard, montrait une aeglutin1.tion to't.cle en une dilution 1/30.
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EyB'PiE vi Un stapk.ylocoeeus 1 <.ii'etls était injecté ûuns le 11Í3 à' une vache en lactation. La vaci n'était pas traite pendant un jour et ensuite la traite était reprise à des intervalles réguliers. Le lait, dix jours après injection, montrait une agglutination totale à une dilution 1/10.
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''i:Pr VII
Pour montrer la production de principe protecteur contre une combinaison spécifique de substances antigènes, un mélange en nombres à peu près égaux de pneumocoques- type 1, de .pneumocoques
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type 2, de Salmonella typhi, de Salmonella paàtynhi et de Sthphy- lococcus albus était injecté dans le pis d'une vache, deux semaines avant parturition. Un mélange similaire lui était donné comme ren-
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fort une semaine plus tard.
Le lait après parturition C'.of.1.tr1it une forte réaction pour l'anticorps contre toutes les espèces injectées.
EXEMPEL VIII
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Une dose de SO mgr d'un virus couritut de varicelle dans m1. d'sou était injectée dans un quartier d'une v,,iulie. 1"[\ croissance du virus dans l'euu niait tnonbrce 7:r 'une rieacti.on c in'-l j jc7xrs plus tard. g{:';1 TI:l!: REG Tour illustrer encore; (l'un virus, 1 ml de
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Herpès 1.1.1)1C:X (:Cil.tl',Cl C i::7 C. JII)tCi.s <1: n : un 1'" l'i.Î-cr <" iJ"1'; ".<;"4<et avait pour ru:'ulL-L 1 .1'lJdnüLÍcHl d'un 1)1'fi,,;j, -s:rc,z:c-:r¯ur. :.-:.i,j- virus.
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Deux nl de bl<10C d'ocuF strient n.iecac:;s rns tin quartier + d'une vrche en l:l-ct:ltion. Il n'y ;iv;<1.t 1JnD do r'r?cton u "or;nt de l'administration, ct le -tect d< nr.'.ai.yi'taijiox3 >lLr-s ric.""'tif.
Douze jours plus tard, le lait uontr.-it une. forte r4.f?ction 'le précipitation. Le lendensain, une injection d'une quantité .^-.r,ppl'¯en- taire de 2 ml de blanc d'oeuf dons le môme quartier amenait une violente réaction allergique.
EXEM '1?LE XI
La production d'un principe protecteur dans des chèvres était réalisée en donnant journellement des infusions de 1 ml d'une suspension de Salmonella pullorum par les canaux de trayon d'une chèvre gravide. Les infusions journalières étaient faites sur une période de plus de quatre mois avant parturition.
L'anticorps ou principe protecteur peut être conservé dans du lait pasteurisé, du lait condensé, du lait desséché et dans la globuline gamma isolée du lait. Les températures de pasteurisa- tion avivent être soigneusement contrôlées. Ene pasteurisation normale (c'est-à-dire, à 1 F pendant 30 minutes) n'a pas d'ef- fet désavantageux sur le principe protecteur. Il faut prendre soin d'empêcher la température de relever pendant une période de temps appréciable. Par exemple, lorsqu'on effectue une pasteurisation à l55 F, on a trouvé que le principe protecteur dens le lait tombe de moitié. Le refroidissement du lait pasteurisé doit être rapide afin de conserver le principe protecteur.
La pasteurisation peut être réalisée par les néthodes "flash" ou "holding" connues, le lait contenant un principe protecteur peut être condensé sous un
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réglage soigneux de la te;:>pàrr:tL1re. Le l3it dE'SS0Ché contenant lynnticorps ou le nrincipc protecteur est, de ;r.µ±éi¯,ence , 1'1'ép:",rú P partir du trodt-it non condensé. Cependant, le 1:>1.t condensl peut être; utilisé, s'il est d'abord ccnc3cnacs so:i.','np.tJ;}1-".-ent (te bosses
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températures pour éviter une destruction du. principe protecteur. la dessiccation peutêtre réalisé par les procèdes à ',ion ou à rouleaux sous des conditions convenablement contrôlées afin de conserver le principe protecteur.
De hautes températures ne sont pas en elles-mêmes désavantageuses pour leprincipes protecteur, sauf lorsqu'elles sont entretenues pendant une certaine période de minutes. C' est ainsi que le lait peut être desséché dansun dessiccateur dans lequel des températures de 300 à 400 F sont atteintes mais le lait n'est à ces températures que pendant un instant.
Un virus proliférant peut être administré au pis par une opération à deux phases. La première inoculation est faite de la manière normale. La seconde inoculation est alors réalisée dans le lait résultant de la première, les antigènes de tissus concomitants étant enlevés par dilution.
Ce processus de tamisage est illustré ci-après.
EXEMPE XII
On faisait à une vache une infusion dans les canaux de trayon avec un virus Herpès Simplex en suspension dans de la cervelle de souris. La vache était en période de lactation et était traite régulièrement ensuite. Le jour suivant, la vahhe montrait un test positif de Whiteside. Le second jour après l'inoculation, le lait était utilisé pour une injection dans le pis d'une vache sèche par les canaux des trayons.
Le résultat était le transfert du virus sans les antigènes de la cervelle de souris,
Application du principe portecteur
L'anticorps ou principe protecteur, qui est le produit de la présente jnvention, est intéressant d'une série de manières. 0 a découvert que le principe protecteur ou l'anticorps est absorbé dans le système après que le lait provenant de pis stimulas a été ingéré ou administré, par protoclyse. Le principe protecteur isolé et séparé peut être administré par voie buccale, par voie rectale, par voie parentérale ou localement. Le principe protecteur est in- téressant dans l'immunisation et le traitement de l'home et des animaux.
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L'application du principe protecteur de la présente inven- tion est illustrée aux exemples suivants.
EXEMPLE XITI
Les sujets expérimentaux étaient quatre hommes adultes.
Le principe protecteur était prépare d'une façon générale suivant le processus de l'exemple 1, le lait résultant contenant l'anti- corps contre les bactéries de Salmonella pullorum. Tous les sujets étaient négatifs à un test d'agglutination avant ingestion du lait.
Les sujets consommaient environ un demi-litre à un litre du lait contenant le principe protecteur. Tous absorbaient l'anticorps, de leur appareil digestif dans leur circulation sanguine, comme le montrait le test d'agglutination. Un des sujets consommant un litre de lait par jour développait un titre d'agglutination dans le sang, dix fois plus dilué.
EXMEPLE XIV
Le principe protecteur contre le Salmonella pullorum était appliqué également à de la volaille. Les sujets expérimentaux étaient six poules adultes toutes négatives au test d'anticorps de Salmonella. Après une alimentation du lait contenant le principe protecteur, toutes les poules développaient une réaction fortement positive.
EXEMPLE XV
Une autre application du principe protecteur de la présente invention était faite à des poulets et rentrait une protection positive fournie par Gagent protecteur. Des poulets de 20 jours étaient divisés en un groupe expérimental de dix, et en un groupe témoin de dix. Les poulets expérimentaux étaient alimentes avec un lait produit suivant la présente invention et ayant un titre élevé (1/1000) contre le Salmonella pullorum: Le Salmonella pullorum est un organisme de maladie de la volaille. Les poulets du groupe témoin étaient alimentés avec un lait ne contenant pas l'anticorps spécifique, Durant le premier jour de l'expérience. les deux groupes recevaient une injection dans le coeur avec une infusion de Salmonella pullorum vivant, en culture.
La mortalité des témoins
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était élevée, le PO I,11(t .-tant Hort Il:,tlf1 10[; :,/Ï heures, tandis que, dans le -roupc expÔ1'ÍD'Cll Vll, In dJ1'\ui(I:'I .0 r:r. a,tsrvenait Qu'après 1.O heures. T,'ét,st <;àn;li<;<1 do santé de. ;,,a7¯at;, témoins était pauvre COIllVl\l'utivcll'ent a. c<;. des poulet, du :':1'0111'0 ceci Lsli un tect s6v..e du principe protecteur cnr les orgnnistl16,s étaient injectes direoteL'on.t c1úrlfJ lc coeur (3 c, F, u jets d'expérience, soit un rode de trùl1uOlis[;ion qui ne :;ex.::5't j8mois rencontré norm;aletsamt, T,es poulot8 on..t=Fin.t qu' 6 s-.-,(; ce sont évider:If.1.ent de loin différents des vaches.
Tc principe protecteur ' produit dans la vache est donc facilement trul1spor't{: pllI' le lait dans la circuD-tion s;.nt;uine des poulets par. absor:ptj on ner l'ap-
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pareil digestif.
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E')i. J.?]il }f.Y1.
Le principe protecteur était appliqué à des sujets bovins.
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Les sujets étaient deux veaux de cinq mois à panse fonctionnant
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normalement. Les veaux étaient négatifs L1 test de 1'anticorps de Salmonella. Après deux slimentptions du 1,it contenant le principe rrotecteur contre le 3almonella r1Ullortim ces veaux dÓvelopp8ient une réaction d'agglutination très Dositive dens le sang.
K;:::=':: TI.'':; 0.cJI
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Des animaux de la race porcine étaient également soumis à des tests. Les sujets expérimentaux étaient deux porcs adultes pe-
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sant environ oo livres, chacun et négatifs test de l'anticorps.
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Après une alimentation de lait contenant le principe protecteur
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contre le Salmonella pulloru.m, les deux Dores développaient une faible réaction. Après deux r-limentatiotls du lait, ils contre vent
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une forte réaction dans le sang.
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'S?Qé? .TT>E :-''ITI Un homme adulte de 90 jt1rils exposé au. Sr.lmonell:' ;niforum et suns titre dans le sang d(;r:lOntrable, recevait une injecti.on rectule d'une solution de 1,. gr d'une fraction de .-.globuline ;.r2rr:a J-YOPhi-iée de loios.iJ=uin ir,lJ!1Un, produit aLilvant la présente invention et qui GOEé=it <>¯n titre de 1/J00. n1J'f)if quarts d'heure plus tard, aucun "n'ticorps irr<1<.i>in <n.i nc- pouvant 0tre trouvé dans
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le s.mg du bout doo doigte, et on in,jc.ct. il, neuve.- u Ci,<5 ':r-r]c. 1.:., même matière. Le jour uuivanb, me r(,:1cticJ1l d:cc.l.,:7¯e ' <i:.c "11<:tion 1/5 était obtenue. Ce mêll'o r,:nn] tc.t 6tni L .r ïrr:l.: le second jour après l'injection.
11::j 1I:l; t:r; Une fraction lyophil6e de colostrum était ed. :inistr46 è, un venu, par voie rectale, COt!lP'C suit : u partir du colostrwa d'une vache dans laquelle un principe protecteur contre le Salmonelle pullorum a été produit suivant 1.' invention, une fraction de titre élevé était isolée par précipitation à froid avec de l'alcool.
15 gr de cette fraction étaient administrés, dans 50 M1 d'eau. par infusion, dans le rectum d'un veau de deux semaines. L'anus était ligaturé par des points de suture. Le veau était alors saigné et son sérum montrait, par une agglutination positive par rapport au Salmonella pullorum, qu'une absorption dans la circulation sanguine s'était produite.
Les expériences avec les humains, les veaux et les porcs montrant qutavec une ingestion poursuivie du lait contenant l'anticorps, les niveaux de l'agent protecteur continuent à augmenter dans le sang. Des expériences avec des humains et des veaux montrent également que le principe protecteur est absorbé à partir du rectum. Le degré d'absorption à partir du rectum est inférieur à celui à partir de la partie. antérieure du système. on peut cependant avoir recours à une absorption rectale si une administra- tion buccale est contre-indiquée, La matière contenant l'anticorps ou le principe protecteur peut être appliquée topiquement (onction) dans le traitement d'irritations locales dues à l'allergie.
L'antigène Salmonella pullorum a été utilisé dans les traveaux expérimentaux décrits dans les exemples précédents, car il est relativement inoffensif pour le sujet expérimental; il est aisément disponible, facilement identifié, et son absorption dans le
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système du sujet peut être facilement suivie par le test d'a; ,lutinu.%ion, Il doit cependant être enter.du cane cet Antirpne bactérien particulier est illusGr: ii titre exeripintif séEle::cnt et. suns d.0-
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sir de limiter l'inventif..
Il est reconnu que la globuline gamme .réduite dans un .ni- mal est antigène sous certaines circonstances dans d'autres espè- ces. Par exemple.la globuline gamma d'une 1 che est antigène dans les espèces non bovines. Il y a des occasions, cependant, d'utili- ser de la globuline gamma isolée, provenant de vaches, ayant u.n principe protecteur ou un anticorps spécifique élevé, et ce par voie parentérale, dans¯d'autres espèces. Par exemple, la globuline gamma provenant d'un lait de vache, contenant un principe protec- teur contre la peste procine peut être administrée à des porcs et à des pourceaux.
La globuline gamma ayant un principe protecteur puissant, produite suivant la présente invention, a une utilisation efficace dans le traitement d'autres animaux de la même espèce, dans les- quels elle n'est pas antigène; par exemple, de la glubuline gamma séparée provenant de vaches est intéressante pour les veaux ou autres bestiaux.
Avec la découverte que le principe protecteur ou anticorps peut être absorbé partir de l'appareil digestif, et qu'il est possible de produire un anticorps spécifique dans le lait contre la plupart, si pas tous les antigènes par un traitement convenable des ongulés pour stimuler le développement de cet anticorps ou agent protecteur, on a ouvert des voies nouvelles pour la préven- tion et le traitement des maladies des humains et des animaux.
La phase initiale est la production d'un principe protec- teur spécifique contre un mélange de tous les antigènes connus pour les humains ou les animaux inférieurs, ou la production, d'un prin- cipe protecteur spécifique, tel qu'un anticorps, contre un antigène particulier, par exemple, du pollen de Jacobée.
Comme les glandes mammaires, spécialement de la vache, produiront un anticorps ou un principe protecteur spécifique con- tre tout antigène bactérien, de virus, mycotique, protéique. etc, du leit peut être préparé avec un principe protecteur utile contre les organismes de maladies infectieuses et autres antigènes des
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hummins et animaux inférieurs. On peut produire en particulier un lait préparé contenant des anticorps spécifiques coutre des @@ls- dies spécifiques bien que rares, et autres conditions produisant des antigènes spécifiques.
Par exemple, une protection pour ceux qui souffrent de la fièvre des foins provenant du pollen de jacobée est permise pur la consommation de luit ayant un principe protecteur élevé contre ce pollen de jacobée.
Comme la littérature indique le caractère antigène de tu- meurs, lorsqu'un tel antigène est isolé et injecté dans le pis. un anticorps spécifique peut tre produit contre cet antigène., Lorsque du lait contenant un tel principe protecteur spécifique est inséré ou administré autrement, il peut retarder ou même -orovoquer l'involution complète d'une telle tumeur.
Du lait séché contenant un anticorps ou un principe protec- teur produit spécifiquement peut être transformé en cataplasmes dans le traitement d'allergies de contact. De la globuline gamma isolée, provenant de lait contenant Lui principe protecteur peut être humidifiée et appliquée de même sous forme de cataplasme.
Par exemple, on produit un lait contenant un anticorps contre l'antigène de toxicodendron, et on l'applique à la surface de la peau qui est entrée en contact avec l'antigène, pour neutraliser le principe toxique.
Une application importante du principe protecteur de la ,présente invention dans le domaine du traitement des animaux est la fourniture de colostrum protecteur pour les veaux. Actuellement, il a été estimé que 20 environ des veaux nés en vie 'eurent dons les quelques premières semaines de leur vie. Leur mort est provoquée principalement par des organismes inf@etieux contre les tels des anticorps peuvent être développés. On peut préparer et injecter, de façon appropriée, dans les pis de vaches sèches, des mélanges d'antigènes de toutes les maladies infectieuses courantes, qui tuent les veaux.
Le colostrum provenant de ces pis stipulés est séché, empaqueté et ainsi rendu disponible pour l'alimentation g des veaux imadiatement après lu naigsance, pour donner ainsi aux
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veaux 1.c niveau. 1l0{}CD['tro c:!'ïnt:i.acx h: pour lçu ;f)11LcniL' d\n' IJi.;. l partie critique de leur v:io. rour 1 ' cJ d i,ii n 5 1> .l i,c 1; ion du principe protecteur de J. .n>= >1 :; < r= t invontion aux lllUT1ttÍrW, une id6bhode pr6f6rue consiste l'incorpo- rer dans le lait et autres produits de laiterie. Comme le principe
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protecteur s'agglutine à des dilutions flttûie:rll1nt 100.000, le bU initial contenant l'agent rtrotooteur peut ttl:1"0 fortement dilue avec un lait non protecteur, et distribue et :Üi!:JcntÓ cours cette :1'01';,'.6.
Du lait ordinaire peut donc recevoir un niveau protecteur ::leva
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contre les Matières antigènes spécj ficlues. due le dilu- tion dépend du titre du luit enrichi de principe protecteur, et du niveau requis d'anticorps nécessaires pour combattre efficacement
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l'antigène spécifique. 1.. titre d'exemple, un {;;selon du l..it initial de titre élevé (soit 1f10i.000) provenant d';;
ne vache traitée pour produire un principe protacteur contre un antigène, particulier quelconque peut être avec 89 gallons de lait entier non protecteur ordinaire, pour donner ainsi 100 allons de lait de ti- tre suffisamment élevé (1/1000) pour être efficace contre la subs-
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te-rice ontigèp-e particulière, De se#blsble manière, le principe pro- tecteur peut être mélangé avec d'autres produits laitiers, tels que des boissons de luiteries, crèmes Glacées, sorbets, fromages, etc.
Dans le traitement des animaux et des humains naïades, l'administration parentérale de globuline gamme ayant un anticorps une puissant contre/infection particulière s'est avérée efficace. LTn principe protecteur isolé du lait provenant de pis stimulés, sui- vant l'invention, est utilisable pour une administration parenté- rale sur les veaux, afin d'amener l'anticorps spécifique à des niveaux élevés dans le sang immédiatemet après l'administration.
Isolement de globuline gamma avec -principe Protecteur
Un principe protecteur provenant de lait contenant un an-
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ticqrps ou un principe protecteur produit par stimulation des ,-lt),ndea mqmriaires d'enfuies peut être isole et ex vue d'une utilisation pur adrt3i.:tr=tion porcntf.rle, T,e 1..:it cicréraê contenant le ,rnaire protecteur est, d'abord, s<iiJaré cbnn un (;l'l1:t'l-)teur cen-
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triture de crcmo h >bitu<,1 pnur <;nl<;v<;r J, ."1:. i;' 1 <...": ,;,1..,::'it est ràglù 1# environ 4,6 'our pi:,,rli) 1 Utr 1 r: c v; it::, r J ; i i; ]vj" peut être dilué aV8nt :iCidific:\ Lion, ::i on 7¯ '".,;?rc. L' c:.i;.5.i.r.<; est enlevée pur sÀdiinent; .i:j.on, t'-i7t,rnt:par. on ermtr1.fun;'1;jo!l.
I o filtrat est ré'lé uns force i ,d'lUe ri'crmircn c ,4ù Û,.5 et est refroidi l environ -:--, (;. De lt.:Lli t:a1 ci;1; <.,jr-,utà 1, cotte teup6roture pour ['élire J:#, enviroi] hl x.,;i.!>...<;s, 7 ï..ïl¯ob LV.cc . (:11;:na précipite et peut être enleviSe ier cc.rtnr.v f;y tion, s'dil'i6nt.:. 'li:i on ou fliltration à environ -5Q<?.
Li= globuline z;.1-uiu- brute contennnt le principe protecteur est purifiée en la redispersunt dens une sollltjon V.tt'6u::;e c'un col et en la reprécipitant avec de l'picool à -:3 C. Apres purification, la globuline g8mm.a est séchée ovec réfrigération, sous le vide, à environ -5 C. Le séchage à réfrigérabion est ;;r=jn'.er:ent facilité par lavilge de la globuline FI!",.mCJ e.vec de grandes qu?ntités d'alcool
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pour enlever l'eau.
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:fl-.1 ± '9LE lI.l La préparation et 1 ' isole¯ ent de la friction active con'tenant le principe protecteur est illustrée COG1'''.e s<,it : une VL'ohe gravide était d'abord traitée avec une infusion de Salmonella pur-
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lorum, environ 5 semaines avant narturition. Des doses de renfort
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étaient administrées hebdomadairement jusqutà le nsissenoe du veau.
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Le lait de colostrum titrait 1/10.000. Deux gallons de ce lait ê-
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taient centrifugés pour enlever la graisse. Le lait était #.lors dilué quatre fois en volumes et le r.T étoit abaissé à ,5 en utilisant une solution 1 bt d'acide chlorhydrique. La caséine précipitait et était enlevée. 1.6 filtrat était ré;lé un prT de 6,F avec une solution 1 N de soude criustique. Il était placé dans un rfrigérateur à -5 C pour y refroidir au. repos pendnnt G heures.
On ajoutait de 1téthAno1 absolu, 6,->,lerient à -5 C, en une quantité égale à 25µfi en volumes. Ce mélanGe reposait pend-fnt 8 heitres et était centrifugé a -5 C. La fraction active précipitée é tnit airlsi concentrée et enlevée. Elle était dis.,,ouito Hvec un "bib volume d'eau à -5 C et mise dans un flocon de liTonhi7¯tion ,iç,jr y être
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lyophilée à -79 C pendant 8 heures. 1.t fraction active était ainsi transformée en une poudre blanche sèche.
Il est évident que de nombreuses modifications et variantes de la @@fésente invention peuvent être prévues sons sortir du cadre du présent brevet. T,es formes de réalisation particulières décrites sont données à titre d'exemples seulement.
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Ril"YXNDILµµ.TI<14S
1. Un procédé de production d'un principe protecteur spéci- fique contre une substance antigène, caractérisé en ce qu'on injec- .le la matière antigène dans les glandes mammaires d'un animal on- gulé, on répète l'injection à des intervalles espacés de temps pour augmenter la production de principe protecteur, et on trait ensuite l'animal.
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'<The present invention relates to the production, in
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the mammary glands of the wavy, antibody or principle
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highly specific protector against a wide range of antigens.
The invention also relates to the isolation and separation of a. nrinciple active from milk, and the use of ri-inci-
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eg protective in the prevention and treatment of diseases of
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1 'h0111!' The and animals and in the preparation and purification
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biological substances, proteins, antigens, etc.
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The importance of COt! J, rrJ8 source and antibody cnlostruln for newborn calves has been recognized for many years and has been widely studied. The work leading up to the present invention has been directed towards the rnp1icAtion of these basic rh01.0m.enes.
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known, has a plus 1:; e 1. l't1 "'- iJl'r., ti () rf; uc = l'f' '1' (,! .. #; vlble in which) o \ n'l [reads to be! p C.1, 1 (H;,; 3c;> 1; 1;: 1 <: rtat :: .ā: .. 7 <>! 'ii (.l'U1e 1 ) 'C' [. Lière research, we n discovered cuf Je !! ('Il (le ..., r'or1! 1c'V; r) fi antibodies in the bovidae is found dvr18 les (; 01J 111 Interstitial protoplasmics <:: 8 Cells were found to increase in number with the change of antibodies.
It was then discovered that the animal could be forced to -ro7uire dcn rl! Lticor}} s chosen by infusion, at the udder, of particular species of ;;; 1cro-organisms, L: orts or alive, and by a sirJi18ire application of protein and dlcnti antigens, tissue enes, mild or pathological.
It was found that the qlllmti ty of corns 5¯rruns 8: 'Jécifir # s recurring in the milk of animals thus treated was enhanced by reinforcing applications of the antigens, locally and systematically.
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tiQ.L1ement. A practical application of the imsume material in the prevention and treatment of diseases of hOffi: 1tes and animals was made possible by the discovery of the inventors that either the ingestion of the milk containing this material or a rerfusion into the intestion allowed absorption of immune bodies into the circulation or blood stream / older animals, as well as in newborn animals and animals of a different species
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of data.
Parenteral ap.l .'- 4-cations of the antibody or of the protective principle were carried out on animals of the same species as that of the donor and on animals of different species.
The fraction of milk carrying the immune material can be se-
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trimmed by centrifupation at determined pll and temperature conditions, Milk fortified with antibodies from corrugated
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Stilted according to the present invention can be preserved by pasteurization or by desiccation.
'n main aim of the present invention is to -or - see
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a process for bringing in the f'1or11'l [d rCD unkeys, an antibody or a very specific drug against a wide range of antigens.
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Another main object (the present invention is to provide a method of applying immune bodies originating from the mammary glands of animals, in medicine and in breeding,
Another object of the present invention is (to provide it, as a new compound, a milk of high titer, rich in specific protective principle against any one of a wide series of antigens, or combinations of antigens. .
Yet another object of the present invention is to provide a method of isolating and separating antibodies or protective principles from milk originating from mammary glands stimulated by ungulates.
Other objects of the invention will become apparent from the following description.
In order to achieve the foregoing and other related objects, the present invention comprises the characteristics described in more detail below and repeated in the claims, the following description giving certain forms of non-limiting application of the invention, the principles of this invention. it can be applied in many other ways.
Production of the protective principle
A very specific antibody in the milk of ungulates (especially cows, goats, sheep, etc.) is produced against any antigen by introducing such an antigen into the udder of the animal. A specific antibody in milk is produced by introducing the antigen into the teat ducts of the animal at any time. However, the highest antibody reaction occurs after the introduction of the antigen during the dry period of the animal and especially after a series of introductions, known as reinforcements, spaced over a period of time. time.
Although the amounts of antigen introduced, the frequency (time interval) and the number of back-up doses can vary widely, the highest antibody reaction results from the injection of a series of doses of increasing amounts over time.
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the pisi, one in its dry period, on a hard. 'c << c: P1IJn]' ('Jc weeks.
The volume and concentration of the doses .t'a; nti, Frc are not critical but are chosen for convenience. It has been found that the increase or decrease in the volume of injection of an- @
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tigene does not produce an increase or decrease in the titre of the resulting protective principle of the milk. I¯ü .btence antigen - can be injected at any time put in the case (i a cow not giving milk, it is often better for the C OflffiO said, that the ahtigen are introduced towards the end of the period of ges-
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tation.
Thus, for example, the initial jtgeotions can be given about two to eight weeks before parturition.
Reinforcement injections, when given, may also be spaced at the convenience of the operator, except that
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injections should be given frequently enough so that an antiphylactic reaction does not occur. For most species, this time is less than about 10 to 14 days. To avoid local irritation and congestion, it is usually preferred that back-up injections not be given more.
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frequently than every day. The antigenic substances are suspended in a liquid medium, for injection, such as, for example, sterile physiological saline solution.
The injection is made into the udder duct system through the teat meatus and into the glandular reservoir. The udder can, if desired, be massaged in order to achieve better penetration of the antigen into the udder duct system.
When antigen injections have been given to the cow
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dry, the protective principle is present in the milk as soon as it appears. Reinforcement injections are [-! When given intravenously, intramuscularly or subcutaneously to maintain the production of the protective principle to a degree (il, té.
For cows giving milk, the initial injection and
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reinforcement injections can be given director: I can give
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worse. The protective principle appears in the milk approximately, two to two days after the initial injection, we can see that shortly after the particular antigen used, For example, streptococcus agalactica was noted in the milk on the tenth day after the inoculation of 'a cow give milk. the antigenic substances which are used in the. Examples of the present invention for the production of a protective principle are bacteria, viruses, proteins, mycotic molds and fungi, tissues, pollen, and the like which are antigens.
Examples of antigens are for bacteria: Salmonella pullorum ,. Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Staphylococcus aureus, staphylococcus albus, staphylococcus pyogenes, pneumococci, streptococci, etc; for viruses: Influenza Type A, chickenpox, smallpox, herpes simplex, etc; for proteins: egg albumin, mouse tissue, embryonic egg tissue, etc; for tissues: blood and semen. It should be understood that these materials are merely examples of the almost infinite number and varieties of antigenic substances against which antibodies or specific protective principles may be produced in the udder of ungulates.
The terms "antigenic substance" and "antigenic material" are used to denote materials which are antigenic in themselves and also non-antigenic materials but which act as antigens in the presence of adjuvants. Antigenic disease organizations include included in these expressions.
EXAMPLE 1
The experimental subject was a jersey cow, 5 weeks before parturition. The antigen was dead Salmonella pullorum.
The initial dose of antigen was injected into the teat canal: 1 ml of antigen per quarter, containing about 5 trillion organisms. The first reinforcing dose was -Injected one week later, namely 1 ml of antigen per quarter, containing approximately 10 trillion organisms. Subsequent back-up injections of 1 ml per quarter, containing progressively higher concentrations
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frauds of In Matter nEi ;;: ne, respective enb approximately ', 0, :: c. el.
40 billion dforr :: \ ni'tH1'CD art, z La5f, t1-G f ': itc j iJG' 1I1:. ', Rv: lIE, ::': of a seniaine. Milk --r) r (o r.rturit9csn .. <.;. Ji> LJn..51: 1;. ,, t;: - r.rze to more than 100,000 dilutions.
The antibody or protective principle d!, !! a Je, corT; ,,, ciii.:ini x5 'ra1; Jidenent after parturition ,. from an i, 1; jlutination 1; more than 100; OOO dilutions immediately after parturition until agglutination at only 1000 dilutions in healthy four. The level of the protective principle can be raised and maintained by the systematic administration of antigen. After parturition, boosting doses of the antigen can be administered by parenteral injection of the antigen material, intravenous, intramuscular or the like injection. Postparturition reinforcement injections cannot be given into the teat ducts but must be given parenterally to avoid an allergic reaction.
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EIFYJIfiLE II
The process of Example 1 was repeated on another cow, the only difference being that the doses of antigen injected, both in the initial injection and in the back-up injections, were at a concentration which did not reach than a tenth of that used in Example T. The resulting milk was high in protective principle, no difference being apparent compared to the milk of the first example.
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IJr'-; l'1, E III A protective principle was produced in a cow giving
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milk, by injection of streptococcus agalaotica. The initial injection was given into a quarter and consisted of a 5 ml dose, containing about one trillion organisms. This cow showed a negative reaction before the initial administration of the antigen. The protective principle appeared in milk at
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tenth day. At the end of a fifteen day period, the milk had a high titer which was revealed by a precipitation reaction.
A reinjection of 1rnti:; Ene in the pleme district in the sixteenth
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day produced a strong rcacbion: l '] e1', ', 1 (1 \) ('.
2.:;: L \}} ', .. IX 1, n6 injection of 3 rt1 cotiien: Wt approximately (JG' (r '} li.1':. Cn d'orf, 5anismes was made (1 :. 1118 a quarter. Titer of the lr, it of the day of injection due 1 /; dQ, Sixteen days later. Late, the titer was 1/5 /. 120
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@i iol "1] T De 1 ': scherichia coli was injected into a cow which gave milk in an initial injection 1.fitra-ni; mwnni.e, <ions a cmrt¯er9 of 5 ird containing approximately: ± 0Q millions The milk, <fourteen days later, showed complete aeglutination in a 1/30 dilution.
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EyB'PiE vi A stapk.ylocoeeus 1 <.ii'etls was injected on 11Í3 into a lactating cow. The vaci was not milked for one day and then the milking was resumed at regular intervals. The milk, ten days after injection, showed complete agglutination at a 1/10 dilution.
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i: Pr VII
To show the production of a protective principle against a specific combination of antigenic substances, a mixture of approximately equal numbers of pneumococci-type 1, pneumococci
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type 2, of Salmonella typhi, of Salmonella paàtynhi and of Sthphylococcus albus was injected into the udder of a cow two weeks before parturition. A similar mixture was given to him as a
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strong a week later.
Milk after parturition C'.of.1.tr1it a strong reaction for the antibody against all the injected species.
EXEMPEL VIII
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A dose of SO mg from a chickenpox virus ran into m1. d'sou was injected into a neighborhood of a v ,, iulie. 1 "[\ growth of the virus in the euu denied tnonbrce 7: r 'a rieacti.on c in'-lj jc7xrs later. G {:'; 1 TI: l !: REG Tour illustrate further; (the one virus, 1 ml of
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Herpes 1.1.1) 1C: X (: Cil.tl ', Cl C i :: 7 C. JII) tCi.s <1: n: un 1' "l'i.Î-cr <" iJ "1 ' ; ". <;" 4 <and had for ru: 'ulL-L 1 .1'lJdnüLÍcHl of a 1) 1'fi ,,; j, -s: rc, z: c-: r¯ur.: .- :. i, j- virus.
@
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Two nl of wheat <10C of ocuF strip n.iecac:; s rns tin quarter + of a vrche in l: l-ct: ltion. There; iv; <1.t 1JnD do r'r? Cton u "or; nt of the administration, and the -tect of <nr. '. Ai.yi'taijiox3> lLr-s ric." "'tif.
Twelve days later, the milk appeared. strong r4.f? ction 'precipitation. The following day, an injection of a maximum quantity of 2 ml of egg white in the same quarter produced a violent allergic reaction.
EXEM '1? THE XI
The production of a protective principle in goats was achieved by giving daily infusions of 1 ml of a suspension of Salmonella pullorum through the teat ducts of a pregnant goat. The daily infusions were made over a period of more than four months before parturition.
The antibody or protective principle can be stored in pasteurized milk, condensed milk, dried milk and in gamma globulin isolated from milk. Pasteurization temperatures must be carefully controlled. Normal pasteurization (ie, at 1 F for 30 minutes) does not adversely affect the protective principle. Care must be taken to keep the temperature from rising for an appreciable period of time. For example, when pasteurizing at 155 ° F, it has been found that the protective principle in the milk falls in half. The cooling of pasteurized milk must be rapid in order to maintain the protective principle.
Pasteurization can be carried out by known "flash" or "holding" methods, the milk containing a protective principle can be condensed under a
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careful adjustment of the te;:> pàrr: tL1re. The l3it ofE'SS0Ché containing the antibody or the protective nrincipc is, from; r.µ ± éī, ence, 1'1'ép: ", rú P from the uncondensed trodt-it. However, the 1:> 1. t condensl can be; used, if it is first ccnc3cnacs so: i. ',' np.tJ;} 1 - ".- ent (te bosses
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temperatures to avoid destruction of the. protective principle. the desiccation can be carried out by the processes with ', ion or rollers under conditions suitably controlled in order to maintain the protective principle.
High temperatures are not in themselves disadvantageous to the protective principle, except when maintained for a period of minutes. This is how milk can be dried in a desiccator in which temperatures of 300 to 400 F are reached but the milk is only at these temperatures for a moment.
A proliferating virus can be delivered to the udder by a two-step operation. The first inoculation is done in the normal way. The second inoculation is then carried out in the milk resulting from the first, the concomitant tissue antigens being removed by dilution.
This sieving process is illustrated below.
EXEMP XII
A cow was infused into the teat ducts with a Herpes Simplex virus suspended in the brains of mice. The cow was lactating and was milked regularly thereafter. The next day, the vahhe showed a positive Whiteside test. On the second day after inoculation, the milk was used for injection into the udder of a dry cow through the teat ducts.
The result was the transfer of the virus without the antigens from the mouse brains,
Application of the supporting principle
The antibody or protective principle, which is the product of the present invention, is of interest in a number of ways. 0 has found that the protective principle or antibody is absorbed into the system after milk from udder stimulas has been ingested, or administered, by protoclysis. The isolated and separate protective principle can be administered orally, rectally, parenterally or locally. The protective principle is of interest in the immunization and treatment of humans and animals.
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The application of the protective principle of the present invention is illustrated in the following examples.
EXAMPLE XITI
The experimental subjects were four adult males.
The protective principle was generally prepared according to the procedure of Example 1, the resulting milk containing the antibody against Salmonella pullorum bacteria. All subjects were negative on an agglutination test before ingestion of milk.
The subjects consumed about half a liter to one liter of the milk containing the protective principle. All of them absorbed the antibody from their digestive tract into their bloodstream, as shown by the agglutination test. One of the subjects consuming one liter of milk per day developed an agglutination titer in the blood, ten times more diluted.
EXAMPLE XIV
The protective principle against Salmonella pullorum was also applied to poultry. The experimental subjects were six adult hens, all negative on the Salmonella antibody test. After feeding milk containing the protective principle, all the hens developed a strongly positive reaction.
EXAMPLE XV
Another application of the protective principle of the present invention was made to chickens and took in the positive protection provided by the protective agent. 20-day-old chickens were divided into an experimental group of ten, and a control group of ten. The experimental chickens were fed with milk produced according to the present invention and having a high titer (1/1000) against Salmonella pullorum: Salmonella pullorum is a disease organism of poultry. The chickens in the control group were fed with milk which did not contain the specific antibody, during the first day of the experiment. both groups were injected into the heart with an infusion of live, cultured Salmonella pullorum.
Witness mortality
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was high, the PO I, 11 (t.-tant Hort Il:, tlf1 10 [;:, / Ï hours, while, in the -roupc expÔ1'ÍD'Cll Vll, In dJ1 '\ ui (I:' I .0 r: r. A, tsr came That after 1.O hours. T, 'ét, st <; àn; li <; <1 do health of.; ,, a7¯at ;, witnesses was poor COIllVl \ the use of chickens, from: ': 1'0111'0 this Lsli a clear tect of the protective principle cnr the orgnnistl16, s were injected sayoteL'on.t c1úrlfJ the heart ( 3 c, F, u experiment jets, that is to say a rode of trùl1uOlis [; ion which does not:; ex. :: 5't j8mois met norm; aletsamt, T, es poulot8 on..t = Fin.t que ' 6 s -.-, (; these are hollow out: If.1.ent from afar different from cows.
The protective principle 'produced in the cow is therefore easily trul1spor't {: pllI' the milk in the circuD-tion s; .nt; uine of chickens by. absor: ptj on ner the ap-
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such digestive.
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E ') i. J.?ialisil} f.Y1.
The protective principle was applied to bovine subjects.
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The subjects were two five month old calves with functioning bellies
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normally. The calves were negative for the Salmonella antibody test. After two selections of 1, it containing the protective principle against 3almonella r1Ullortim, these calves develop a very dositive agglutination reaction in the blood.
K; ::: = ':: TI.' ':; 0.cJI
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Animals of the porcine breed were also tested. The experimental subjects were two adult pigs pe-
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about oo pounds each and antibody test negative.
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After feeding with milk containing the protective principle
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against Salmonella pulloru.m, the two Dores developed a weak reaction. After two re-feeding of the milk, they upwind
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a strong reaction in the blood.
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'S? Qé? .TT> E: - '' ITI An adult male of 90 jt1rils exposed to. Sr.lmonell: '; niforum and suns titre in the blood of (; r: lOntrable, received a rectule injection of a solution of 1 ,. gr of a fraction of .-. Globulin; .r2rr: a J -YOPhi-iée de loios.iJ = uin ir, lJ! 1Un, produced by the present invention and which GOEé = it <> ¯n title of 1 / J00. N1J'f) if quarter of an hour later, no " irr <1 <.i> in <ni nc- antibody can be found in
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the s.mg of the end doo fingers, and we in, jc.ct. il, new.- u Ci, <5 ': r-r] c. 1.:., Same material. On the day uuivanb, me r (,: 1cticJ1l d: cc.l.,: 7¯e '<i: .c "11 <: tion 1/5 was obtained. This mll'o r,: nn] tc.t 6tni L .r ïrr: l .: the second day after the injection.
11 :: j 1I: l; t: r; A lyophilic fraction of colostrum was ed. : inistr46 è, a come, rectally, COt! lP'C follows: u from the colostrwa of a cow in which a protective principle against Salmonella pullorum has been produced according to 1. ' invention, a high titer fraction was isolated by cold precipitation with alcohol.
15 g of this fraction were administered in 50 M1 of water. by infusion into the rectum of a two week old calf. The anus was tied off with stitches. The calf was then bled and its serum showed, by positive agglutination against Salmonella pullorum, that absorption into the bloodstream had occurred.
Experiments with humans, calves and pigs show that with continued ingestion of milk containing the antibody, levels of the protective agent continue to increase in the blood. Experiments with humans and calves also show that the protective principle is absorbed from the rectum. The degree of absorption from the rectum is less than that from the part. system earlier. rectal absorption may, however, be used if oral administration is contraindicated. The material containing the antibody or the protective principle may be applied topically (anointing) in the treatment of local irritations due to allergy.
The Salmonella pullorum antigen was used in the experimental work described in the previous examples because it is relatively harmless to the experimental subject; it is readily available, easily identified, and its absorption in the
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subject's system can be easily followed by a test; , lutinu.% ion, It must however be entered. of the cane this particular bacterial antirpne is illusGr: ii exeripintive title select :: cnt and. suns d.0-
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sir to limit the inventive.
It is recognized that the reduced gamut globulin in one animal is antigenic under certain circumstances in other species. For example, gamma globulin from 1 che is antigenic in non-bovine species. There are opportunities, however, to use isolated gamma globulin from cows with a high protective principle or specific antibody parenterally in other species. For example, gamma globulin from cow's milk containing a protective principle against procine plague can be administered to pigs and pigs.
The potently protective gamma globulin produced according to the present invention has effective use in the treatment of other animals of the same species, in which it is not antigen; for example, separated gamma glubulin from cows is useful for calves or other livestock.
With the discovery that the protective principle or antibody can be absorbed from the digestive tract, and that it is possible to produce a specific antibody in milk against most, if not all, antigens by proper treatment of ungulates to stimulate The development of this antibody or protective agent has opened up new avenues for the prevention and treatment of diseases in humans and animals.
The initial phase is the production of a specific protective principle against a mixture of all antigens known to humans or lower animals, or the production of a specific protective principle, such as an antibody, against a particular antigen, for example, from Jacobean pollen.
Like the mammary glands, especially of the cow, will produce an antibody or a specific protective principle against any bacterial, virus, mycotic or protein antigens. etc., leit can be prepared with a useful protective principle against infectious disease organisms and other antigens of
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hummins and lower animals. In particular, prepared milk containing specific antibodies can be produced under specific, although rare, diseases and other conditions which produce specific antigens.
For example, protection for those suffering from hay fever from ragweed pollen is permitted by the consumption of fruit having a high protective principle against this ragweed pollen.
As the literature indicates the antigenicity of tumors, when such an antigen is isolated and injected into the udder. a specific antibody can be produced against this antigen. When milk containing such a specific protective principle is inserted or otherwise administered, it can delay or even cause the complete involution of such a tumor.
Dried milk containing a specifically produced antibody or protective principle can be made into poultices in the treatment of contact allergies. Isolated gamma globulin from milk containing its protective principle can be moistened and similarly applied in the form of a poultice.
For example, a milk is produced containing an antibody against the toxicodendron antigen, and it is applied to the surface of the skin which has come into contact with the antigen, to neutralize the toxic principle.
An important application of the protective principle of the present invention in the field of animal treatment is the provision of protective colostrum for calves. Currently, it has been estimated that about 20 of the calves born alive were given the first few weeks of life. Their death is caused mainly by organisms infectious against such antibodies can be developed. Mixtures of antigens of all common infectious diseases which kill calves can be suitably prepared and injected into the udders of dry cows.
Colostrum from these stipulated udders is dried, packaged and thus made available for feeding to the calves immediately after birth, thereby giving the
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calves 1.c level. 1l0 {} CD ['tro c:!' Ïnt: i.acx h: pour lçu; f) 11LcniL 'd \ n' IJi.;. the critical part of their v: io. rour 1 'cJ d i, ii n 5 1> .l i, c 1; ion of the protective principle of J. .n> => 1:; <r = t invontion to lllUT1ttîrW, a preferred method is to incorporate it in milk and other dairy products. As the principle
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protector agglutinates at dilutions flattened: rll1nt 100,000, the initial bu containing the retrotooting agent can be strongly diluted with non-protective milk, and dispense and: Üi!: JcntÓ during this: 1'01 '; , '. 6.
Regular milk can therefore be given a protective level :: leva
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against specific antigenic materials. due the dilution depends on the titre of the luit enriched with protective principle, and on the required level of antibodies necessary to fight effectively
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the specific antigen. 1 .. for example, a {;; according to the initial l..it of high titer (ie 1f10i.000) from ;;
a cow treated to produce a protactant principle against an antigen, any particular one may be with 89 gallons of ordinary non-protective whole milk, thereby to give 100 vons of milk of sufficiently high titer (1/1000) to be effective against the substance. -
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In particular, the protective principle can be mixed with other dairy products, such as ice cream drinks, ice creams, sorbets, cheeses, etc.
In the treatment of naive animals and humans, parenteral administration of globulin range having a particular potent anti / infection antibody has been shown to be effective. The protective principle isolated from milk from stimulated udders, according to the invention, is useful for parenteral administration to calves, in order to bring the specific antibody to high levels in the blood immediately after administration. .
Isolation of gamma globulin with -principle Protector
A protective principle derived from milk containing one year
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ticqrps or a protective principle produced by stimulation of the, -lt), ndea mqmriaires of children can be isolated and ex seen of a pure use adrt3i.:tr=tion porcntf.rle, T, e 1 ..: it cicréraê containing the, rnary protector is, first, s <iiJaré cbnn un (; l'l1: t'l-) cent
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triturating crcmo h> bitu <, 1 pnur <; nl <; v <; r J,. "1 :. i; ' 1 <... ":,;, 1 .., :: 'it is set 1 # about 4.6' our pi: ,, rli) 1 Utr 1 r: c v; it ::, r J; i i; ] vj "can be diluted aV8nt: iCidific: \ Lion, :: i on 7¯ '".,;? rc. The c: .i; .5.i.r. <; is removed pure sÀdiinent; .i: j.on, t'-i7t, rnt: par. on ermtr1.fun; '1; jo! l.
I o filtrate is re'lé un force i, d'lUe ri'crmircn c, 4ù Û, .5 and is cooled l approximately -: -, (;. De lt.:Lli t: a1 ci; 1; < ., jr-, utà 1, cotte teup6roture for ['elect J: #, enviroi] hl x.,; i.!> ... <; s, 7 ï..ïl¯ob LV.cc. (: 11 ;: na precipitates and can be removed ier cc.rtnr.vf; y tion, s'dil'i6nt.:. 'li: i on or fliltration at about -5Q <?.
Li = globulin z; .1-uiu- crude containing the protective principle is purified by redispersing it in a solltjon V.tt'6u ::; e c'e a neck and reprecipitating it with picool at -: 3 C After purification, the globulin g8mm.a is dried by refrigeration, under vacuum, at about -5 C. Drying in refrigeration is ;; r = jn'.er: ent facilitated by washing the globulin FI! ",. mCJ e. with large amounts of alcohol
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to remove the water.
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: fl-.1 ± '9LE lI.l The preparation and isolation of active friction containing the protective principle is illustrated COG1' ''. es <, it: a gravid VL'ohe was first treated with an infusion of pure Salmonella
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lorum, about 5 weeks before narturition. Reinforcing doses
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were administered weekly until nsissenoe of the calf.
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Colostrum milk titrated 1 / 10,000. Two gallons of this milk ê-
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were centrifuged to remove grease. The milk was then diluted four times in volume and the r.T was lowered to .5 using a 1 bt hydrochloric acid solution. The casein precipitated and was removed. 1.6 filtrate was real a prT of 6, F with a 1N solution of criustic soda. It was placed in a refrigerator at -5 C to cool there. rest for G hours.
Absolute 1tethAno1, 6, ->, lerient at -5 ° C., in an amount equal to 25 μfi by volume was added. This mixture stood for 8 heitres and was centrifuged at -5 C. The precipitated active fraction was then concentrated and removed. She was said. ,, ouito Hvec a "bib volume of water at -5 C and put in a liTonhi7¯tion flake, here, jr be there
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lyophilized at -79 C for 8 hours. The active fraction was thus transformed into a dry white powder.
It is evident that many modifications and variations of the present invention can be expected outside the scope of the present patent. The particular embodiments described are given by way of example only.
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1. A method of producing a specific protective principle against an antigenic substance, characterized in that the antigenic material is injected into the mammary glands of an ungulate animal, the injection is repeated at spaced intervals of time to increase the production of protective principle, and then the animal is treated.