<Desc/Clms Page number 1>
La présente invention se rapporte à une composition nouvelle et améliorée de vitamine B12 ainsi qu'à un procédé nou- veau et perfectionné pour stabiliser la vitamine B12.
A l'état solide, la vitamine B12 (aussi connue sous le nom de cyanocobalamine) a l'aspect de cristaux hygroscopiques, rouge sombre, stables à l'état solide. Un gramme de ce produit se dissout dans 80 cc environ d'eau à 25 C.
Cette vitamine B12 est stable à l'état solide ainsi qu'en solution aqueuse si elle est dissoute sans autres vitamines.
Lorsque la solution auqeuse, en plus de cette vitamine B12 contient d'autres vitamines dissoutes, et en particulier de la vitamine C (acide ascorbique), de la vitamine B1 et de la niacina- mide dissout'es, ,la vitamine B12 dissoute est instable.
Dans la préparation d'une solution aqueuse de vitamine B12, on sait qu'il faut ajouter différents ingrédients additionnels
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tels que des agents tampons, des agents préservatifs, des agents aromatiques etc. Ces ingrédients additionnels peuvent contenir de 1-1-extrait de foie qui peut contenir du fer à l'état combiné ou des sels minéraux qui peuvent contenir du fer à l'état combiné.
L'extrait de foie ou les sels minéraux mentionnés sont ajoutés à des fins thérapeutiques-
La littérature technique affirme que la vitamine B12 est incompatible avec le sulfate ferreux et est incompatible avec la vitamine C, la thiamine plus niacinamide et les substanc'es réduc- tric'es. Des composés ferreux 'en solution avec la vitamine B12 pro- voquent une destruction rapide de la vitamine B12 lorsque ceux--ci sont présents en concentrations thérapeutiques. Ceci a été vérifié par différents chercheurs. Des composés ferreux en concentration thérapeutique sont contre-indiqués même à l'état solide en mélange avec la vitamine B12, à causé de l'effet nuisible sur la stabilité de la vitamine B12.
D'autr'e part, conformément à cette invention, il a été découvert qu'une solution aqueuse de vitamine B12 et d'une autre vitamine ou d'autres vitamines,particulièrement une solution aqùeu- se contenant de la vitamine B12 et de la vitamine C peut 'être sta- bilisée par tous les composés de fer et les sels de fer. Cela étant, conformément à la présente invention, dès produits contenant dès vitamines variées, notamment la vitamine C et la vitamine B12, à l'état stable convenant à l'administration orale ou parentérale sont fabriqués en y ajoutant une petite proportion non thérapeuti- que d'un composé de fer ou de sels de fer.
Le degré de stabilisa- tion de la vitamine B12 obtenue dépend du composé ou sel de fer particulier utilisé, de la concentration du composé ou du sel de fer utilisé, et ceci particulièrement en rapport avec la concentra- tion de la vitamine B12 qui doit être stabilisée, et de la nature et de la concentration des autres substances présentes dans la solu- tion, mais en général on utilise une quantité de fer comprise entre
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15 à et 2500 micro-grammes par ml., calculée comme fer atomique. pour des solutions contenant de 1-2 à 25 micro-grammes de vitamirie B12 par ml.
Les sels ou les composés de fer stabilisants sont uti- lisés dans cette invention en tant qu'agents stabilisants, et non en tant qu'agents thérapeutiques, et en conséquence leur concentra- tion est inférieure à la-concentration thérapeutique. Comme il a été dit, si l'emploi de concentrations thérapeutiques de composés ferreux est contre-indiqué, ces mêmes composés ferreux en concen- tration très faible possèdent la propriété surprenante de stabili- ser la vitamine B12 en présence d'autres substances que l'on consi- dère normalement comme nuisibles à la stabilité de la vitamine B12 (par exemple:
la vitamine C, la thiamine et la niacinamide. Ces concentrations sont très inférieures aux quantités de fer que l'on utilise communément dans les préparations destinées à apporter la dose thérapeutique minimum quotidienne de fer (comme par exemple: pour les anémies hypochromes, etc.)
Les composés de fer ou sels de fer stabilisants de cette invention sont par exemple,. l'énumération n'étant pas limitative, les suivants: le peptona.te-de fer, le citrate double de fer ferrique et d'ammonium, le chlorure ferrique, le gluconate ferreux, le gly- cérophosphate ferrique, le sulfate ferrique, le sulfate ferreux, l'oxyde ferrique, l'oxyde ferreux, les complexes ferreux ou ferri- ques de substances comme l'acide éthylène-diamine-tétraacétique et ses sels.
On a également découvert que l'effet stabilisant se mani- feste à partir d'une certaine concentration minimum de fer dans la solution (calculée comme fer atomique); que cet effet stabilisant augmente jusqu'à une certaine concentration maximum en fer (calcu- lée comme fer atomique) et que l'effet stabilisant diminue lorsque cette concentration maximum, également calculée comme fer atomique, est dépassée. De même, l'effet stabilisant est fonction du composé de fer considéré, en plus de sa concentration. L'effet stabilisant dépend également des ingrédients dissous autres que la vitamine B12
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dissoute, qui pont dissous dans la solution.
EMI4.1
La vitamine B12 peut être mÓlangée'à l'agent stabilisant sous formé solide, et le mélange peut être dissous dans 1-l'eau pour 1 -emploi.
Cette invention comprend donc les mélanges de solides aussi bien que les solutions de ces mélanges.
L'invention est illustrée par les exemples suivants qui en montreront quelques caractéristiques 'et les meilleurs moyens d'application, mais rie constituent pas une limitation. Toutes les déterminations de pH dont il est fait- mention sont faites à 20 C - 30 C au moyen d'une électrode en verre.
Dans les exemples 1 à 9 qui suivent, deux solutions aqueuses ayant la composition suivante ont été utilisées:
SOLUTION I
EMI4.2
<tb> Pour <SEP> 5 <SEP> cc <SEP> de <SEP> solution
<tb>
<tb> Vitamine <SEP> A <SEP> 3000 <SEP> unités <SEP> U.S.P.
<tb>
<tb> Vitamine <SEP> D <SEP> 1000 <SEP> unités <SEP> U.S.P.
<tb>
EMI4.3
Vitamine B1 1, 5 mg.
Vitamine B2 l, 2 .g.
Vitamine Blz (cyanocobolami-ne) 6 micrograHmies Vitamine C (acide ascorbique) 60 mg.
Niacinamide-<nicotinamid'e) 10 mg.
On peut ajouter à cette solution des agents aromatisants
EMI4.4
convenables (comme par exemple l'acide citrique, le sucre, la saccharine, le propylène glycol, l'essence de citron etc.), des agents solubilisants pour la vitamine A et D (cor.me lé polysorbate 80), des agents de conservation (comme le parahydroxybensoate de butyle ou le benzoate de sodium) et des agents épaississants (C01TIne la carboi-3méthylcellulose).
WJLVTIOII II A part la concentration de la vitanine TI12' tette sol-a- tion présente la mêr.1G coMposition fiao le =.J3--il,soii 1 c'rî.hù ci- dessus. Pour 5 cc. de solution II 'j 1. ,.,':IT r lh 3 ' ',':1',' .1.':' les de
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EMI5.1
vitamine B (cyanocobalamine) c'est-à-dire la moitié de la quan- tité présente dans la solution I.
Ces solutions sont subdivisées et du peptonate de fer ou
EMI5.2
du citrate de fer ferriqu'e 'et d'ai1Jmoniu'1l 'est ajouté en quantité indiquée ci-après aux fractions séparées, qui sont ensuite cons'er- vé'es à 37 C pendant une durée de 3 semaines. Après cette période, la concentration en vitamine B12 des solutions est déterminée par
EMI5.3
le procédé microbiologique décrit dans la pharmacopée auiéricain'e., XIV, 3eme supplément. Ce procédé, dans son application usuelle, dorr ne une précision de 'plus ou moins 10-20% écart qui est tout à fait raisonnable pour une détermination microbiologique de ce type.
TABLEAU I
EMI5.4
<tb> N <SEP> de <SEP> Solu- <SEP> Stabilisateur <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> Détermination
<tb>
EMI5.5
1"ereifl- tion uti- utilisé stabilisateur de vitamine Bi2
EMI5.6
<tb> ple <SEP> lisée <SEP> après <SEP> conserva-
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> tion <SEP> à <SEP> 37
<tb>
EMI5.7
1 1 peptonate de fer 0,1 mg/c.3 7,05 mcg/5cm3 2 1 il il il 1,0 il 5,46 il 3 I il il lQ9Q " 6,50 "
EMI5.8
<tb> 4 <SEP> I <SEP> citrate <SEP> de <SEP> fer <SEP> 0,1 <SEP> " <SEP> 4,35 <SEP> "
<tb> ferrique <SEP> et <SEP> d'ammonium
<tb>
<tb> 5 <SEP> I <SEP> " <SEP> 1,0 <SEP> " <SEP> 2,58 <SEP> "
<tb>
EMI5.9
61 Il 10, 0 " 2,04 if
EMI5.10
<tb> 7 <SEP> II <SEP> p'eptonat'e <SEP> de <SEP> fer <SEP> 10,0 <SEP> " <SEP> 3,19 <SEP> "
<tb>
<tb> 8 <SEP> I <SEP> aucun <SEP> - <SEP> 1,
78 <SEP> "
<tb>
<tb> 9 <SEP> II <SEP> aucun <SEP> 0
<tb>
EMI5.11
mcg = microgramaie.
Dans les exemples 10 à 12, on utilise une solution qui contient par cm3 les quantités suivantes de vitamines.
EMI5.12
<tb>
Vitamine <SEP> A <SEP> (palmitate) <SEP> 8330 <SEP> Unités <SEP> U.S.P.'
<tb> Vitamine <SEP> D <SEP> 2000 <SEP> Unités <SEP> U.S.P.
<tb>
EMI5.13
Vitamine BI 3,33 mg. Vitamine B2 OS3 xtz
EMI5.14
<tb> Vital:aine <SEP> B6 <SEP> 1,67 <SEP> mg.
<tb>
<Desc/Clms Page number 6>
EMI6.1
<tb>
Vitamine <SEP> C <SEP> 100 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
<tb> Niacinamide-(Nicotinamide) <SEP> 16,67 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
Acide <SEP> pantothénique <SEP> (comme <SEP> panthénol) <SEP> 5 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Chlorhydrate <SEP> de <SEP> choline <SEP> 12 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Inositol <SEP> 7 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Vitamine <SEP> E <SEP> (mélange <SEP> de <SEP> tocophérols) <SEP> 1,67 <SEP> mg.
<tb>
Cette solution contient de plus comme agents aromatisants} de la glycérine, du propylène glycol, de la saccharine, de l'essen- c'e de framboise; comme agents solubilisants pour les vitamines A, D, et E : dumonolaurat'e de polyoxyéthylène sorbitane, ou du 'poly- sorbate 80; et comme agents de conservation du parahydroxybenzoate de méthyle et/ou du benzoat'e de sodium.
On utilise comme solvant un mélange de glycérol, de pro- phlène glycol et d'eau distillée. A la solution ainsi préparée on ajoute la vitamine B12 (cyanocobolamine) de manière à obtenir une concentration approximative de 14 microgrammes par cm3. La solution ainsi obtenue,qui sera appelée ci-après "Solution III", est subdi- visée en diverses fractions, auxquelles les agents stabilisants qui figurent dans le tableau II sont ajoutés 'et qui sont ensuite conser- vées à 37 C pendant 3 semaines.
Après conservation, la détermination de la concentration de la vitamine B12 donne les résultats suivants:
TABLEAU 2
EMI6.2
<tb> N <SEP> de <SEP> Solu- <SEP> Stabilisateur <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> Détermination <SEP> de
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> l'exem- <SEP> tion <SEP> uti- <SEP> utilisé <SEP> stabilisateur <SEP> vitamine <SEP> B12 <SEP> après
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> ple <SEP> lisée <SEP> conservation <SEP> à <SEP> 37
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 10 <SEP> III <SEP> peptonate <SEP> de <SEP> fer <SEP> 10 <SEP> mg./cm3 <SEP> 14,65 <SEP> mcg/cm3
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 11 <SEP> III <SEP> citrate <SEP> de <SEP> fer <SEP> 10 <SEP> Il <SEP> Il,
40 <SEP> Il
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> ferrique <SEP> et <SEP> d'am-
<tb>
<tb>
<tb> monivm
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 12 <SEP> III <SEP> aucun <SEP> - <SEP> 0 <SEP> "
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> mcg <SEP> = <SEP> microgramme
<tb>
Dans les exemples 13-19, on utilisé une solution aqueuse qui sera appelée ci-après "Solution IV" et qui contient par cm3 les quantités suivantes de vitamine:
<Desc/Clms Page number 7>
EMI7.1
<tb> B1 <SEP> 100 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
B2 <SEP> 1 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
B6 <SEP> 2 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
B12 <SEP> (Cyanocobalamine) <SEP> 23 <SEP> microgrammes
<tb>
EMI7.2
Niacinamide-Nicotinamide 100 mg. Acide pantothënique (Panthénol) 10 mg.
EMI7.3
<tb> Alcool <SEP> benzylique <SEP> 1,5% <SEP> (en <SEP> poids <SEP> par <SEP> rapport <SEP> au
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> volume)
<tb>
Cette solution est divisée en différentes parties, auxquelles on ajoute les agents stabilisateurs énumérés dans le tableau 3. Les solutions sont gardées à 37 C pendant 3 semaines et après c'e temps leur contenu en vitamine B12 a été dosé.
Les résultats sont prés'entés dans le tableau ci-après:
TABLEAU 3
EMI7.4
<tb> N <SEP> de <SEP> Solution <SEP> Stabilisateur <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> Dosage <SEP> de <SEP> la
<tb>
EMI7.5
lëx'em- utilisée stabilisateur vitamine B après pie conservation à 37 C 13 IV p éptonat'e de fer 0,1 mg /.cra3 25, 2 mcg./cm3 14 IV Il 'sr Il 1 a p rr 19,1 Il 15 IV 11 11 Il 10,0 Il 18,1 11
EMI7.6
<tb> 16 <SEP> IV <SEP> citrate <SEP> d'e <SEP> fer <SEP> 'et <SEP> 0,1 <SEP> " <SEP> 19,9 <SEP> "
<tb>
EMI7.7
d'an11l1oniuro.
17 IV il 1,0 Il 16; 5 11 18 IV " 10,0 fi 14,8 tir
EMI7.8
<tb> 19 <SEP> IV <SEP> aucun <SEP> - <SEP> 0 <SEP> "
<tb>
<tb> mcg <SEP> = <SEP> micro <SEP> gramme <SEP>
<tb>
Dans l'es exemples 20 à 22, on utilisé une solution qui sera appelée ci-après "Solution V", et qui contient par cm3les quantités suivantes des divers ingrédients:
EMI7.9
<tb> Vitamine <SEP> B1 <SEP> 100 <SEP> mg.
<tb> Vitamine <SEP> B <SEP> 1 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
Vitamine <SEP> B6 <SEP> 2 <SEP> mg.
<tb>
<tb> Niacinamide <SEP> 50 <SEP> mg.
<tb>
<tb> Pantothénol <SEP> 10 <SEP> mg.
<tb>
<Desc/Clms Page number 8>
EMI8.1
<tb>
Vitamine <SEP> B12 <SEP> (cyanocobalamine) <SEP> 15 <SEP> microgrammes
<tb>
<tb>
<tb> Vitamine <SEP> C <SEP> 100 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
Tampons, <SEP> agents <SEP> de <SEP> conservation, <SEP> etc. <SEP> 6% <SEP> (en <SEP> poids <SEP> par <SEP> rap-
<tb>
<tb> port <SEP> au <SEP> volume0
<tb>
<tb> Eau <SEP> distillée <SEP> q.s.
<tb>
On utilise comme agents tampons et comme agents de con- servation du citrate de sodium (solution à 2% poids/volume) de l'alcool benzylique (solution à 1% poids/volume) et l'éthanolamide de l'acide gentisicue (solution à 3% poids/volume). Le dosage ini- tial sur cette solution donne wie teneur en vitamine B12 de 16,1 micro grammes par cm3.
EXEMPLE 20
On ajoute une solution de p'eptonat'e de fer contenant 0,5 mg. parcm3à une partie de la'solution V et la solution obte- nue est conservée à 37 C pendant une semaine. Après cette période de conservation le dosage de la vitamine B12 indique une teneur de 15 microgrammes par cm3. Comme cette solution contenant initiale- ment 15 microgrammes de cyanocobalamine par cm3, le dosage micro- biologique démontre que la solution- a conservé 100% de son activité.
EXEMPLE 21
On ajoute une solution contenant 12 mg. de peptonat'e de fer par cm3 à une partie de la solution V et la solution obtenue est conservée à 37 C pendant 3 semaines. Après cette période, le dosage de la vitamine B12 donne 7 microgrammes par cm3. Donc, dans ce cas la concentration en cyanocobalamine trouvée par 1-l'essai microbiologique est approximativement 50% de la concentration ini- tiale.
EXEMPLE 22
Après conservation à 37 C pendant 3 semaines et sans aucune addition d'agent stabilisant, une partie de la solution V se révèle contenir moins d'un microgramme par cm3 de vitamine B12.
Dans les exemples 20 et 22 qui précèdent, on trouve une démonstra- tion de la diminution de la stabilisation obtenue pour la vitamine
<Desc/Clms Page number 9>
B12 lorsque la concentration du composé de fer se rapproche de la concentration thérapeutique de ce compose. La solution V, qui con-
EMI9.1
tient de l'acide ascorbique, de la thiamine et de la niacinamidë est considérée en général comme un milieu impropre à la bonne con-
EMI9.2
servation de la vitaminé B, ce que démontre 1'* exemple 22. Il-a-d- dit-ion d'rlne petite quantité d-'iIn composé de fer (un demi n par eu de peptonate de fer) conduit à une solution dans laquelle la vitamine B 12 présente une bonne stabilité;, corme lé montre 1-IOX'CM- ple 20.
Une concentration (plus élevée) du même composé de fer,
EMI9.3
comme celle ou'on utilise dans l"exemple 21, met 'en évidence, la diminution rapide de la stabilité de la vitamine B12 par rapport à celle de l'exemple 20. Il faut noter que la concentration en fer
EMI9.4
atomique de l'ex#lple 21 est de 2 mg. par cïa3. La dose normale de cette préparation est de 1 cm3.
Cette préparation apporte donc un cinquième de la dose de fer exigée quotidiennement par l'homme adulte;, par dos'e. Cependant, cette concentration 'en, fer par rapport à celle des autres ingrédients produit une stabilisation de la vita- mine B12 moins favorable que la concentration beaucoup plus faible utilisée dans l'exemple 20. C'eci est destiné à démontrer que la stabilisation optimum de la vitamine B12 est obtenue par l'addi- tion de composé de fer en quantité beaucoup plus petite que celle qui correspond au niveau thérapeutique.
-EXEMPLE 23
On prépare une solution qui correspond à celle utilisée dans les exemples 10 à 12 'et qui contient par cm3 les quantités suivantes de vitamine:
EMI9.5
Vitamine A (palanitate) 5330 unîtes U.S.P.
EMI9.6
<tb> Vitamine <SEP> D <SEP> 2000 <SEP> unités <SEP> U.S.P.
<tb>
EMI9.7
Vitamine I31 ' 3,33 ng. Vitwnine D2 0, $3 r-ig.
Vitamine 136 l, 67 ;"1% .
Vitamine C 100 ris. lTiacinaaic1e (nicotin ':lic1e) 16,67 :.is.
Acide pantothenique (C0Ji1lî18 panthonol) 5 i11:;.
<Desc/Clms Page number 10>
EMI10.1
<tb> Chlorhydrate <SEP> de <SEP> choline <SEP> 12 <SEP> mg.
<tb>
EMI10.2
nos.to7. 7 mg. - ,llit-=.ine 1 E (mélange de tocophérols) 1,67 iago
Cette solution contient également comme agents aroma- tisants : de la glycérine, du propylène glycol, de la saccharine, de l'essence de framboise; comme agent solubilisant pour les vi-
EMI10.3
tamines A, D et E: du monolaurat'e de polyoxyéthylène sorbitane ou du polysorbate 80 et comme agent de < conservation: du paraoxy- benzoate de méthyle et/ou du benzoate de sodium. Le solvant uti- lisé est un mélange de glycérol, de propylène glycol et d'eau distillée.
La solution obtenue est divisée en trois fractions et la vitamine B12 y est ajoutée comme suit: a) à la première fraction on ajouté une substance type S
EMI10.4
(Herck) correspondant à une activité vitaminique Bla de 10 micro- grnuùes de B par m3 c'est-à-dire une vitamine B12 consistant en un produit de iemaentation partiellement raffiné d'activité vitaminique B12 dont l'activité est entièrement c.?..e à la cyanoco- balamine et qui a été mélangée avec des ingrédients inertes, de
EMI10.5
manière à rendre la manipulation en vrac cOTIID10de, jusqu'à une concentration correspondant à une activité vitaminique de 1 mg. de vitamine B12 par gr. de poids brut.
b) à la secondé fraction on ajoute par cm3 un produit à activité vitaminique B12 correspondant à l'activité de 10 nicro-
EMI10.6
graDID1CS de vitamine B12 ' sous la forme de solides convenant pour l'ingestion orale (Calco), consistant en un concentrât de composés semi-purifiés à activité vitaminique B12 obtenus par fermentation microbiologique, convenant pour l'ingestion orale et mélangé avec des ingrédients inertes de manière à obtenir une activité vitaminique B12 correspondant à 1 mg. de vitamine B12 pour un
EMI10.7
gramme dé poids brut.
L'activité vital:1i!lique Bl est due pour environ 75-00% à l'hydroxy cobala;tine, le reste étant principale-
<Desc/Clms Page number 11>
nient de la cyanocobalamine. c) à la troisième fraction on ajoute par cm3 ce qui correspond à l'activité vitaminique B12 de 10 microgrammes de vitamine B12, sous la forme de cyanocobalamine cristallisée U.S.P.
Chacune de ces fractions (a), (b) et (c) est à son tour divisée en trois parties et l'on ajoute du peptonate de fer en quantité indiquée ci-dessous à certaines d'entre elles. Le dosage est effectué au moment de la préparation puis après conservation pendant trois semaines à 37 C. Les résultats sont rapportés dans le tableau 4.
TABLEAU 4
EMI11.1
<tb> Dosage <SEP> initial <SEP> Dosage <SEP> après <SEP> 3 <SEP> semaines <SEP> de <SEP> conservation
<tb>
<tb>
<tb> Fraction <SEP> de <SEP> la <SEP> vitamine <SEP> à <SEP> 37 C <SEP> en <SEP> présence <SEP> de:
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> B12 <SEP> 0,0 <SEP> mg <SEP> 0,1 <SEP> mg/cm3 <SEP> 1 <SEP> mg/cm3
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> de <SEP> peptonate <SEP> de <SEP> fer
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (a) <SEP> 10,4 <SEP> mcg/cm3 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 8,2 <SEP> mcg/cm3
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (b) <SEP> 8,7 <SEP> " <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 9,1 <SEP> "
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (c) <SEP> Il,4 <SEP> " <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 9,7 <SEP> "
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> mcg <SEP> = <SEP> micro <SEP> gramme <SEP>
<tb>
Les valeurs ci-dessus mettent en évidence que 1 mg.
par cm3 de p'eptonate de fer stabilise également bien les trois types de préparation de vitamine B12 ici décrits.
EXEMPLE 24
On prépare une solution complexe de diverses vitamines contenant par cm3 les ingrédients suivants (Solution VI):
EMI11.2
<tb> Vitamine <SEP> A <SEP> (palmitate) <SEP> 8300 <SEP> unités <SEP> U.S.P.
<tb>
<tb> Vitamine <SEP> D <SEP> 2000 <SEP> unités <SEP> U.S.P.
<tb>
<tb>
Vitamine <SEP> B1 <SEP> 3,33 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
Vitamine <SEP> B2 <SEP> 0,83 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
Vitamine <SEP> B6 <SEP> 1,67 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
Vitaminée <SEP> 100 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
Niacinamide <SEP> (nicotinamid'e) <SEP> 16,67 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
Acide <SEP> pantothénique <SEP> (comme <SEP> panthénol) <SEP> 5 <SEP> mg.
<tb>
<tb>
<Desc/Clms Page number 12>
Vitamine E (mélange de Tocophérols) 1,67 mg.
Dans cette préparation, qui est similaire à celle qui a servi dans les exemples 10 à 12 sauf en ce que l'on a omis le chlorhydrate de choline et l'inositol, on a utilisé le même agent aromatisant et le même solvant que dans les exemples 10 à 12.
On ajoute à cette préparation de la vitamine B12 (cyano- cobalamine) de manière à obtenir une concentration d'environ 4 microgrammes par cm3. Cette solution est divisée en 13 fractions, et on ajoute à ces fractions des composés de fer, comme décrit ci-dessous. Après conservation pendant trois semaines à 37 C on dose la vitamine B12 et on obtient les résultats ci-après:
TABLEAU 5
EMI12.1
<tb> Stabilisateur <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> fer <SEP> Dosage <SEP> de <SEP> la
<tb>
<tb> utilisé <SEP> stabilisateur <SEP> par <SEP> cm3 <SEP> Vitamine <SEP> B12
<tb>
<tb>
<tb> en <SEP> microgrammes <SEP> après <SEP> 3 <SEP> semai-
<tb>
<tb>
<tb> nes <SEP> à <SEP> 37 C.
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
(a) <SEP> aucun- <SEP> 0 <SEP> 0
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (b) <SEP> chlorure <SEP> ferrique <SEP> 1 <SEP> mg/cm3 <SEP> 200 <SEP> mcg/cm3 <SEP> 2,24 <SEP> mcg/cm3
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (c) <SEP> chlorure <SEP> ferrique <SEP> 1 <SEP> - <SEP> " <SEP> 200 <SEP> " <SEP> 2,23 <SEP> "
<tb>
<tb> avec <SEP> peptone <SEP> de <SEP> boeuf <SEP> 2 <SEP> "
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (d) <SEP> gluconate <SEP> ferreux <SEP> 1 <SEP> " <SEP> 116 <SEP> " <SEP> 1,89 <SEP> "
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> (e) <SEP> gluconate <SEP> ferreux
<tb>
EMI12.2
avec peptone de boeuf 1 11 116 - -- 1,$0 Il
EMI12.3
<tb> (f) <SEP> glycérophosphate
<tb> ferrique <SEP> 1 <SEP> " <SEP> 180 <SEP> " <SEP> 2,84 <SEP> "
<tb>
<tb> (g) <SEP> citrate <SEP> de <SEP> fer <SEP> (III)
<tb> et <SEP> d'ammonium.
<SEP> 1 <SEP> " <SEP> 160 <SEP> " <SEP> 2,24 <SEP> "
<tb>
<tb> (h) <SEP> sulfate <SEP> ferrique <SEP> 1 <SEP> " <SEP> 280 <SEP> " <SEP> 3,35 <SEP> "
<tb>
<tb> (i) <SEP> sulfate <SEP> ferreux <SEP> 1 <SEP> " <SEP> 200 <SEP> " <SEP> 2,76 <SEP> "
<tb>
<tb> (j) <SEP> peptonate <SEP> de <SEP> fer <SEP> 0,01 <SEP> " <SEP> 1,6 <SEP> " <SEP> 0 <SEP> "
<tb>
EMI12.4
(k) fi fi 0,1 Il 16 Il 0 II
EMI12.5
<tb> (1) <SEP> peptonate <SEP> de <SEP> fer <SEP> 1,0 <SEP> " <SEP> 160 <SEP> " <SEP> 1;
38 <SEP>
<tb>
EMI12.6
(m) Il Il 10,0 " 1600 Il z1$
EMI12.7
<tb> mcg <SEP> = <SEP> micro <SEP> gramme <SEP>
<tb>
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Ces résultats démontrent que tous les composés de fer ont un effet stabilisant sur la vitamine B12 dans cette prépara- tion qui contient de l'acide ascorbique ainsi que de la thiamine, de la niacinamide, et d'autres vitamines. Quand il n'y a pas de stabilisateur, la vitamine B12 se décompose rapidement.
Les résul- tats obtenus avec l'e peptonate de fer (essais "j" à "m") indiquent qu'une quantité minimum de fer est nécessaire pour obtenir la sta- bilisation de la vitamine B12 dans cette préparation, et que l'ef- fet de stabilisation augmente parallèlement à la quantité de fer, au moins dans la gamme des concentrations utilisées dans ces. essais.
En général, sauf quelques exceptions, les valeurs montrent que la stabilisation de la vitamine B12 augmente dans cette préparation parallèlement à l'augmentation de la concentration en fer, au moins dans la gamme limitée des concentrations utilisées. Ceci reste vrai quel que soit le type de composé de fer utilisé.
Dans certains types de préparation à base de vitamines il peut sembler inopportun d'ajouter des quantités appréciables de composés de fer qui donnent en solution des quantités appréciables 'd'ions ferriques ou ferreux (comme par exemple le chlorure ferrique.
On connaît en effet l'action défavorable des ions ferriques sur la stabilité de certaines vitamines (par exemple vitaminé A, chlorhy- drate de pyridoxine, etc.). Toutefois on sait que le fer peut cepen- dant se présenter dans ces solutions s'il se trouve sous la forme de complexes ou de chélatés. Les ions ferreux ou ferriques, ainsi liés, et sous forme soluble ne sont que très faiblement dissociés.
Les ions ferreux et ferriques sont ainsi liés sous forme d'un com- posé soluble,qui n'est que très faiblement dissocié en formes ioni- ques du fer. Certains des stabilisateurs utilisés dans les exemples qui précèdent sont des exemples de tels complexés (le citrate de fer ferrique et d'ammonium, le peptonate de fer etc.). Une dès formes les plus efficaces de ces agents de chélation est l'acide éthylène diamine tétraacétique et ses sels ("E.D.T.A."ou "Versène" (R). Cet agent qui est si efficace qu'il a été recommandé pour
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la stabilisation, des préparations de vitamine du complexe B, d'aci-
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de ascorbique et d'autres vita:aines, afin d'éviter la dégradation de ces vita.es par la présence de fer sous ior#ie ionique.
Il est souvent utilise à cause de cette propriété stabilisateur dans @
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ces préparations. Cependant, or- présence les compo- sés de fer stabilisent la vitamine B12 dans les préparations couple-'
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xes de vitaaines. Cette propriété surprenante et inattendue est d'une grande importance pratique puisqu'elle rend possible l'usage
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de composés de fer pour la stabilisation de la vitanine B dans les préparations complexes de vitamines et que cependant le fer y est si parfaite2ent combiné sous fO2e de chélate que la stabilité des autres vitanines dans la préparation reste excellente. C' est c que contre l'exemple 25 qui suit.
EXEMPLE 25
On prépare une solution identique à la solution I et II,
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sauf en ce que la concentration initiale de la vi taïzine B (cyanocobalamine) est de 1.,0 icrogra:.l1es pour 5 cc. Cette solution qui sera appelée ci-aprjs "Solution VII", est subdivisée en diverses fractions auxquelles on ajoute des agents stabilisants et de
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l'B.D.T.I.. corme mentionné dans le tableau 6.
Après conservation pendant trois semaines à 37 C, la vitamine B 12 est dosée et les résultats suivants sont obtenus:
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TABLEAU 6
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<tb> Fraction <SEP> Stabilisateur <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> ' <SEP> Quantité <SEP> de <SEP> @ <SEP> Quantité <SEP> Dosage <SEP> de <SEP> la <SEP> Vitamine
<tb> utilisé <SEP> stabilisateur <SEP> fer <SEP> par <SEP> cm <SEP> d'EDTA <SEP> B12 <SEP> après <SEP> 3 <SEP> semaines
<tb> à <SEP> 37 C
<tb> (a) <SEP> aucun <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1,1 <SEP> meg/5 <SEP> cm3
<tb> (la} <SEP> aucun <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> mg./ <SEP> cm3 <SEP> 0,8 <SEP> "
<tb> (c) <SEP> chlorure <SEP> ferrique <SEP> 0,5 <SEP> mg/cm3 <SEP> 0,1 <SEP> mg:
/cm3 <SEP> 1 <SEP> " <SEP> 3,6 <SEP> "
<tb> hexahydraté
<tb> (d) <SEP> chlorure <SEP> ferrique <SEP> 0,5 <SEP> " <SEP> 0,1 <SEP> " <SEP> 0 <SEP> 3,7 <SEP> "
<tb> hexahydraté
<tb> (e) <SEP> peptonate <SEP> de <SEP> fer <SEP> 0,6 <SEP> " <SEP> 0,1 <SEP> " <SEP> 1 <SEP> mg./cm3 <SEP> 3,7 <SEP> "
<tb> (f) <SEP> n <SEP> tr <SEP> 0,6 <SEP> " <SEP> 0,1 <SEP> " <SEP> 0 <SEP> 4,3 <SEP> "
<tb> (g) <SEP> citrate <SEP> de <SEP> fer <SEP> 0,7 <SEP> " <SEP> 0,1 <SEP> " <SEP> 1 <SEP> mg./em3 <SEP> 4,1 <SEP> "
<tb> ferrique <SEP> et <SEP> d'ammonium
<tb> (h) <SEP> " <SEP> 0,7 <SEP> " <SEP> 0,1 <SEP> " <SEP> 0 <SEP> 4,0 <SEP> "
<tb>
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Les valeurs qui figurent dans le tableau 6 montrent .que
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la vitamine I312 dans cette préparation (qui contient ég2.lo"1<mt des vitaaines A,C,D, de la thia:î1ine, de la niacina:
1ide et d'autres vitamines) est instable si l'on n'ajoute aucun compose de fer.
L'addition de l'un des trois types de composé de fer utilise (soit
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compose entièrement ionisé CO':.1,e le chlorure ferrirue, soit partiel- lement ionisé co...e le citrate de fer et d'e:a:zoniun,, soit encore non ionisé C#.1ne le peptonate de fer) augmente notablement la sta- bi.lité de la vitamine B12. L'addition d'E.D.T.A. sans addition de composé de fer (fraction b) ne stabilise en aucune manière la pré- paration. L'addition simultanée d'un composé de fer et d'E.D.T.A.
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ns réduit pas appr éciable ent l'effet stabilisant sur la vitamine B12 des composés de fer. Il convient de noter que les quantités
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ajoutées d'E.D.T. 1, sont dans chaque cas supérieures à celles qui sont nécessaires pour chélater la quantité totale de fer ajoutée.
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Dans les fractions (c), (e) et (g) la quantité d'L.T.!'.h. ajoutée est suffisante pour assurer la protection des autres vitamines con- tre la dégradation causée par le fer, de telle =.zanire qu'aUCUl1.e réduction appréciable de l'activité de la vitamine A, de la thia- mine, de la pyridoxine, de l'acide ascorbique, de la riboflavine
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ni des autres vitamines ne se llal1.ifeste.
Les valeurs du tableau 6 mettent aussi en évidence le principe qui consiste à utiliser un agent complexant du fer pour
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protéger les conposés vit 1iniques autres que la vitamine B de l'instabilité accessoire causée par l'usage du fer cote stabilisa- tueur. En plus,d'e 1-IE.D.T.A. d' autrés agents couplexants ou chélatants peuvent être utilisés, soit seuls soit en mélanges.
Parmi les nom- preux agents coaploxants qui conviennent pour cet usage, on peut citer: l'acide éthylène diamine bêta éthanol triacétique et ses sels (Versénol (11 , l'acide d-saccharique d-saccha.rique et ses sclsj l'ion cyanure (ou l'ion ferI'o-cyal1.ur'e et ferr i-ctraïur e) , les sols de l'acide pyrophosphorique, hei,ia-i.1<sta-piiosiJhorique, !-,acide tripo- 1p- liosphorique, l'acide lacto b:Lonicl1.lC, l'acide tattrà-iiue, 1-tici(-10
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citrique etc.,et le dextrane, l'algine et les autres formes de gels d'hydrate';,de carbone.
Des essais ont montré que ces agents complexants sont utiles pour stabiliser les vitamines autres que la vitamine B12 contre la dégradation causée par le stabilisateur contenant. du fer, et n'interférent pas sur l'effet de stabilisation désirable du fer sur la vitamine B12.
Les essais rapportés ici concernent des solutions dont le solvant contient de 1-l'eau et dans lesquels la concentration initiale en acide ascorbique dissous est plus grande que la concen- tration initiale en cyanocobalamine dissoute. Dans les solutions soumises au dosage, la concentration en acide ascorbique dissous. était suffisante pour produire la décomposition de la cyanocobala- mine dissoute ce qui aurait entraîné la destruction complète ou partielle de la cyanocobalamine après la conservation de trois semaines à 37 C, en l'absence d'une proportion convenable d'un agent stabilisant ajouté.
Les solutions auxquelles, dans l'application de cette invention, on ajoute un agent stabilisant, ont un pH compris entre '3 et 7. Par exemple les pH des solutions décrites précédemment sont les suivants : solution I: 5,0 " II 5,2 " III 5,1 " IV 4,3 " V 4,5 " VI : 5, 0 " VII 5,0
On comprendra que la présente invention est aplicable à tout'es les formes de vitamine B12 comme; par exemple, la cyanoco- balaminc cristallisée, la cyanocobalamine partiellement raffinée non cristallisée et les mélanges semi-raffinés de cyanocobalamine et d'hydroxy-cobalamine.
On comprendra également que cette inven-
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tien. il-'est pas limitée aux matières, proportions, opérations et. autres détails spécifiquement décrits ci-dessus et peut être mise en oeuvre avec diverses modifications sans que l'on sorte de son cadre.
REVENDICATIONS
1.- Procédé pour la préparation d'un produit aqueux con- tenant plusieurs vitamines et contenant de la vitamine B12 sous forme stable, caractérisé en ce que l'o@ combine en solution aqueu- se de la vitamine B12, au moins une autre vitamine qui est norma- lement incompatible avec la vitamine B12 et, comme agent stabili- sant, un composé de fer en quantité suffisante pour fournir de 15 à 2500 micro grammes de fer, calculé comme fer atomique, par ml. de- solution.