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" ANTIBIOTIQUES ".
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La présente invention est relative à des sels thérapeutiquement actifs améliorés de kanamycine et plus particulièrement au glucuronate de kanamycine.
La kanamycine est une base tétra-aminée de formu- le empirique C18H35O11N4. Elle est active vis-à-vis de nombreuses souches da bactéries gram-positives et gram-négatives, y compris des souches qui résistent à d'autres antibiotiques. L'emploi de kanamycine a été fortement limité par le fait que cet antibiotique pro- duit une perte d'audition après administration prolongée.
Les effets o@otoxiques de la kanamycine sont fortement mi- tigés par l'administration d'un nouveau glucuronate de kanamyoine "A" suivant la présente invention. Le glu- curonate de kanamycine peut être administré en quantités beaucoup plus importantes que les formes thérapeutiques connues précédemment de kanamycine, sans perte d'audition.
Le glucuronate de kanamyoine suivant la présente invention englobe à la fois le glucuronate de kanamycine solide et les solutions de glucuronate de kanamycine, dans lesquelles le rapport molaire d'acide glucuroni- que à la kanamycine est comprise entre environ 1 :1 environ 4 :1. L'expression" solutions de glucuronate de kanamycine" englobe les solutions dans lesquelles le glucuronate de kanamycine dissous se présente sous forme moléculaire ou sous forme ionique, sous forme d'ions kanamycine et glucuronate . Le glucuronate de kanamycine en solution aqueuse, par exemple, est pro- bablement sous forme ionique.
L'expression "solutions de
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glucuronate de kanamyoine" englobe également les solu- tions contenant des ions kanamycine et glucuronate, ainsi que des ions non toxiques et thérapeutiquement inactifs additionnels, telles que les solutions aqueuses d'ions kanamycine, glucuronate, sodium et sulfate, obtenues en mélangeant du sulfate de kanemycine"A, et du glucuronate de sodium.
Le glucuronate de kanamycine peut se préparer par neutralisation de kanamyoine, sous forme de base li- bre, avec la qualité sensiblement stoechiométrique d'aoide glucuronique équivalent au rapport molaire d'acide glucuronique à la kanamycine désiré dans le glucuronate de kanamycine résultant. Le monoglucuro- nate de kanamyciné, le diglucuronate de kanamycine, le triglucuronate de kanamycine et le tétraglucuronate de kanamyoine peuvent se préparer en faisant réagir respectivement 1, 2, 3 ou 4 moles d'acide glucuronique avec de la kanamyoine base. Cette réaction est avanta- geusement exécutée dans de l'eau. Le produit, qui est soluble dans l'eau, peut être récupéré par évaporation de l'eau, par exemple par séchage par congélation.
Un autre procédé de préparation de glucuronate de kanamycine consiste à faire réagir du sulfate de kanamycine avec un glucuronate de métal alcalino- terreux, tel que le glucuronate de calcium ou le glu- curonate de baryum, dans un milieu aqueux: La préci- pitation de sulfate de calcium ou de sulfate de baryum fait progresser la réaction vers son achèvement, en sorte qu'on obtient du glucuronate de kanamyoine en solution aqueuse. Le glucuronate de kanamycine peut être récupéré de la solution par des moyens habituels, par exemple par séchage par congélation, comme incliqué plus haut.
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Bien que l'on ait indiqué que le glucuronate de kanamycine peut être récupéré à l'état solide et ses, il n'est par nécessaire d'opérer ainsi. Des solu- tions et spécialement des solutions aqueus de, glucu- ronate de kanamycine conviennent pour être administrées et présentent un effet ootoxique sensiblement réduit, en comparaison des formes thérapeutiques connues pré- cédemment de kanamyoine.
Les solutions et spécialement les solutions aqueuses de glucuronate de kanamyoine et d'une ou plusieurs substances non toxiques additionnelles tom- bent également dans le cadre de la présente invention.
Une solution préférée de ce type est une solution pré- parée en mélangeant du sulfate de kanamycine avec du glucuronate de sodium dans la proportion de 1 à 4 moles de glucuronate par mole de sulfate de kanamycine. Une telle solution contient des ions kanamycine, glucuro- nate, sodium et sulfate en solution, avec un rapport ionique des ions glucuronate aux ions kanawycine d'en- viron 1 :1 4:1. Le rapport ionique des ions glucuro- nate aux ions kanamycine est le même que le rapport @ @ molaire'acide glucuronique à la kanamycine.
Les ions glucuronate présents dans un tel mélange dans les proportions définies mitigent sensiblement les effets ototoxiques normalement associés à la kanamyoine, et les ions sodium et sulfate ne paraissent pas avoir d'effet défavorable sur l'activité thérapeutique ou sur l'oo- toxicité de la solution.
Les compositions suivant la présente invention peuvent être administrées à un patient selon les tech- niques courantes pour l'administration d'antibiotiques.
Le glucuronate de kanamyoine et les compositions à base de ce composé suivant l'invention ..ont sensiblement
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le même effet thérapeutique qu'une quantité équivalente de kanamycine, avec beaucoup moins d'effets secondaires et, en particulier beaucoup moins de dommage pour l'au- dition que les formes précédemment connues de kanamycine.
L'invention sera décrite à présent plus en d é- tails dans les exemples suivants.
Exemple 1.
Préparation de monoglucuronate de kanamycine .
Une solution de 3,92 g (0,814 millimole) de kanamyoine base dans 10 ml d'eau a été mélangée à 1,54 g (0,795 millimole) d'acide glucuronique dans 15 ml d'eau. Le pH de la solution était de 0,6 après mélange.
La solution a été séchée par congélation et le produit a été séché 50 C pendant 2 heures sous vide, en sorte que l'on a obtenu 5,0 g de produit solide.
Analyse : calculé pour C18H36N4O11 C6H10O7
EMI5.1
0=43,47% ; Ha 6,85%; N- 8,26. Trouvé : c-42,52% ; H-7,5%; N = 8,5%.
L'analyse a révélé que ce produit contenait l'équivalent de 65% de kanamycine base, en comparaison à une valeur théorique de 71%.
Exemple 2.
Diglucuronate de kanamycine.
Une solution de 3,92 g (0,814 millimole) de kanamycine base dans 10 ml d'eau a été mélangée à 3,08 g (1,59 millimole) d'acide glucuronique dans 30 ml d'eau. Le pH de la solution était de 7,8 après mélange.
Le mélange a été séché par congélation et::le produit a encore été séché à 5090 pendant 2 heures sous vide, en sorte que l'on a obtenu 7,08 g de produit bolide.
EMI5.2
Analyse : calculé pour C18H3gNÓll.2CgH1009 0=41,28%; H-6,47%; N-6,42%. Trouvé : 0-40,84%; H-7,14%; N- 6,96%.
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Ce produit contenait l'équivalent de 50% de kanamycine base, en comparaison d'un équivalent théorique de 55,5.
Exemple 3.
Préparation de triglucoronate de kanamycine.
Une solution de 3,92 g (0,814 millimole) de kanamycine base dans 10 ml d'eau a été mélangée à 4,62 g (2,38 millimol d'acide glucuronique dans 45 ml d'eau.
Le pH de la solution était de 7,0 après mélange. Le mélange a été séché par congélation et le produit a été encore séché à 50 C pendant 2 heures sous vide.
Rendement : 9,0 g.
EMI6.1
Analysé: Caclulé pour CENO.3CH±0 : C=40,52%, H= 6,24% ; N=5,25% Trouvé != C - 39,67% ; H = 6,59 ; N = 5,68%.
On a constaté que ce produit contenait l'équi- valent de 43% kanamycine base, en comparaison d'un équi- valent théorique de 50%.
Exemple 4.
Préparation de tétraglucuronate de kanamycine.
A 24,2 g ( 0,05 millimole) de kanamycine base, on a ajouté 752 ml d'une solution d'acide glucuronique contenant 39,3 g (0,202 millimole) d'acide glucuronique.
La solution résultante avait un pH de 4,8. Cette so- lution a été séchée par congélation, en sorte qye l'on a obtenu 61,8 g de produit âolide.
EMI6.2
Analyse : Cacculé pour C18H38N40114CgH100? : c= 40,00% ; H = 6,07 %; N = 4,44%. Trouvé : C = 40,04%; H = 6,25%; N - 3,90%.
Exemple 5 Préparation de glucuronate de kanamycine en solution aqueuse.
Une solution de sulfate de kanamycine "A" a été
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préparée en dissolvant 4,875 g de sulfate de kanamycine "A" dans 10 ce d'eau. Ceci a donné l'équivalent de
0,4 g de kanamycine à base libre par ce. A cette solu- tion, on a ajouté 10 cc d'une solution aqueuse contenant 0,4 g par ce? de glucuronate de calcium. Un précipité s'est formé et a été séparé par filtration. La solution rastante était une solution de glucuronate de kanamycine contenant l'équivalent de 2,26 moles d'acide glucuronique par mole de kanamycine base libre.
Exemple 6.
Préparation de glucuronate de kanamycine en solution aqueuse.
Une solution de sulfate de kanamycine "A" a été préparée par dissolution de 4,875 g de sulfate de kanamycine "A" dans 10 cc. d'eau. Ceci a donné l'équi- valent de 0,4 g de kanamycine base libre par cc. A cette solution on a ajouté 10 cc d'une solution aqueuse contenant 0,4 g par cc. de glucuronate de baryum. Un précipité s'est formé et a été séparé par filtration. La solution restante était une solution de gluchronate de kanamycine contenant l'équivalent de 1,84 mole d'acide glucuronique par mole de kanamycine base libre.
Exemple 7.
Solution mixte de glucuronate de kanamycine et de sulfate de potassium.
Une solution de sulfate de kanamycine "A" a été préparée par dissolution de 4,875 g de sulfate de kana- mycine "A" dans 10 ce. d'eau. Ceci a donné l'équivalent de 0,4 g de kanamyoine base libre par cc. A cette solution, on a ajouté 10 cc. d'une solution aqueuse contenant 0,4 g par cc. de glucuronate de potassium. La solu- tion résultante de glucuronate de kanamycine et de sulfate de potassium contenait l'équivalent de 2,08 moles d'acide glucuronique par mole de kanamycine base libre.
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Exemple 8.
Solution mixte de glucuronate de kanamycine et de salfate de sodium.
Une solution a été préparée en dissolvant 10 g de sulfate de kanamycine "A" dans 68,4 cc. d'eau, et en ajoutant 4,01 g de glucuronate de sodium monohydraté.
Cette dosolution a été désignée comme "solution A".
Cette solution contenait 1 mole de glucuronate de so- dium par mole de sulfate de kanamyoine, et contenait l'équivalent de 0,12 g de kanamyoine base par cc.
Les solutions B, C et D oontenant chacune 10 g de sulfate de kanamyoine "A" dans 68,4 cc. d'eau et contenant aussi 8,02 g, 12,03 g et 16,04 g respectivement de glucuronate de sodium mono hydraté; ont été préparées de la même manière que la solution A.'Les solutions B, C et D contenaient 2, 3 et 4 moles respectivement de glu- curonate de sodium par mole de sulfate de kanamycine.
Les solutions A, B, C et D ont été utilisées pour l'ototoxioité selon l'essai de l'exemple 9. exemple 9.
Ototoxicité de solutions de glucuronate de kanamyoine chez les rats.
Des rats males Holtzman., pesant 65 à 85 g ont été répartis en groupes de cinq animaux chacun. Les rats ont été maintenus au cours de l'essai sous un régime habitel et ont reçu de l'eau à volonté. Les animaux du groupe I ont reçu des injections sous cu- tanées quotidiennes de solution A, décrite dans l'exemple
EMI8.1
8, à raison de 5 eu ( ce qui équivaut a 600 mag) de kanamyoine base par kilogramme de poids du corps et par jour.
Les animaux dasgroupes 2,3 et 4 ont reçu des quantités identiques de solutions B, C et D de l'exemple a
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Les animaux des groupes 5 et 6 ont reçu une quantité équivalente d'une solution de sulfate de kanamyoine (préparée en dissolvant 10 g de sulfate de kanamyoine "A", dans 68,4 ce d'eau), à laquelle on n'avait pas ajouté du glucuronate de sodium. Les animaux du groupe 7 ont servi de contrôle.
La perte d'audition chez les animaux a été dé- terminée journellement en faisant retentir un sifflet de Galton près des animaux.L'absence de réaction de l'animal a indiqué une surdité substantielle. Cet essai a été poursuivi pendant 62 jours. Au bout de cette pé- riode, tous les animaux, sauf ceux de contrôle, étaient sourds.
Les résultats de l'essai, avec indication du nombre d'animaux de chaque groupe de cinq qui était devenu sourd au jour indiqué, sont résumés dans le ta- bleau I suivant.
EMI9.1
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Jour <SEP> 30 <SEP> 32 <SEP> 33 <SEP> 35 <SEP> 37 <SEP> 38 <SEP> 39 <SEP> 44 <SEP> 45 <SEP> 46 <SEP> 52 <SEP> 53 <SEP> 54
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<tb> Groupe <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5
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<tb> Groupe <SEP> 2 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 5
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<tb> Groupe <SEP> 3 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 5
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<tb> Groupe <SEP> 4 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 4 <SEP> 5
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<tb> Groupe <SEP> 5 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5
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<tb> Groupe
<SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 5
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<tb> Groupe <SEP> 7 <SEP> (contrôle) <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
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REVENDICATIONS.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.