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Nouveaux agents antibactériens.
La présente invention se rapporte à des tétracyclines nouvelles et utiles et au procédé pour les produire. Plus particu- lièrement, la présente invention se rapporte aux 6-épi-6-désoxytéra- cyclines, à leurs analogues substitués sur le cycle D, à leurs analogues lla-substitués, et à leurs analogues cycle D-lla-substi- tués, de même qu'au procédé de fabrication de ces composés.
Selon la présente invention, on a trouvé que l'hydrogéna- tion de 6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracyclines, comprenant différents analogues substitués sur le cycle D et en lla-, est un procédé très valable pour produire des 6-désoxytétracyclines connues et de plus, produit une catégorie de dérivés nouveaux et utiles ayant des propriétés chimiques, physiques et biologiques différentes , de ces 6-désoxytétracyclines connues par suite d'une configura-
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tion stéréochimique modifiée.
Ces nouvelles tétracyclines ont une activité microbiologique définie contre une variété de microorga- nismes Gram-positifs et Gram.-négatifs et sont désignées correctement comme 6-épi-6-désoxytétracyclines puisque la configuration stérique du groupement 6-méthyl est l'opposé de celle des 6-désoxytétracycli- nes connues. Par conséquent, la nomenclature "6-épi" employée ici est absolument conforme à la nomenclature reconnue pour désigner les 4-épitétracyclines connues.
Selon le procédé de la présente invention, un composé tétracycline approprié défini ci-dessous, est dissous ou mis en suspension sous forme amphotère, ou sous forme d'un sel obtenu par addition d'acide ou sous forme d'un sel complexe avec un métal polyvalent, dans un solvant réactionnel inerte en présence d'une quantité catalytique d'un catalyseur qui est un métal noble et mis en présence d'hydrogène à une température et une pression convenables, jusqu'à ce que la réduction du groupement 6-méthylène ait lieu.
Ensuite, on peut récupérer un mélange de 6-épi-6-désoxytétracycline et de 6-désoxytétracycline par les procédés habituels comprenant la séparation du catalyseur et la récupération du solvant. Ce mélange peut ensuite être soumis à une chromatographie ou à d'autres procédés de séparation d'un tel mélange en ses composants.
L'expression "solvant réactionnel inerte" employée ici concerne n'importe quel milieu qui est un solvant ou un agent de suspension convenable pour le réactif antibiotique, qui est stable dans les conditions d'hydrogénation et qui ne modifie pas l'efficacité du catalyseur et qui ne réagit pas avec l'antibiotique. Les solvants organiques polaires conviennent généralement et comprennent les alcools inférieurs comme le méthanol, l'éthanol et le butanol, etc.; des éthers solubles dans l'eau, cycliques ou à chaîne ouverte, comme le dioxane, le tétrahydrofurane, l'éther diéthylèneglycol monométhylique, le 2-éthoxyéthanol, les acides monocarboxyliques inférieurs tels que l'acide acétique, l'acide propionique, des milieux aqueux contenant les solvants ci-dessus, de l'acide chlorhydrique aqueux dilué, etc.
On remarquera que ces solvants et d'autres sont cou-
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rants dans les techniques d'hydrogénation connues appliquées aux antibiotiques contenant des tétracyclines et par là-même, sont irréfutables. De meilleurs résultats sont néanmoins obtenus iorsçu'on emploie des milieux acides au lieu de milieux basiques qui peuvent provoquer des décompositions et réduire ainsi le rende:nent du pro- duit désiré. L'emploi des meilleurs solvants est illustré par les exemples ci-après.
La température n'est pas plus critique dans le présent procédé qu'elle ne l'est dans d'autres hydrogénations d'antibioti- ques de la série des tétracyclines. En fait, le meilleur domaine de température est de 0 à 60 C environ, la meilleure température dans ce domaine est de 10 à 50 C et de préférence à température ambiante.
Pour des températures inférieures à 0 C la réaction est excessivement lente et pour des températures au-dessus de 60 C des décompositions du produit de départ peuvent se produire. Comme on peut s'y attendre, plus la température est élevée, plus la réaction est rapide.
Les catalyseurs de métaux nobles utilisés dans la présente invention comprennent le platine, le palladium, le rhénium, le rhodium,et le ruthénium, soit avec, soit sans support, de même que leurs composés catalytiques connus tels que oxydes, chlorures, etc.
Des exemples de supports catalytiques convenables sont du carbone, de la silice et du sulfate de baryum. Les catalyseurs peuvent être préparés d'avance ou préparés in situ par préréduction d'un sel approprié du composé catalytique. Les meilleurs catalyseurs sont par exemple du palladium sur carbone 5%, du platine sur carbone 5%, du rhodium sur carbone 5%, du chlorure de platine, du chlorure de palladium, de l'oxyde de platine et de l'oxyde de ruthénium. Des produits comme ces derniers, dans lesquels le métal est sous une forme combinée, non élémentaire, requièrent généralement une préréduction avant que l'hydrogénation puisse être faite.
Ceci est réalisé simplement en suspendant le précurseur catalytique dans le milieu d'hydrogénation, en l'hydrogénant, en ajoutant le substrat et en continuant
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1-lhyd.ro-zena-uion. Loutre part, tous les composants peuvent ttre incorpores en une fois àt 2"xyàrog,en-tion peut être co:aEr.cëc. c.c procédé F- 1,F-,,-zznT,& c e de permettre 1"ipëraicùr de déter.aine r :;éc.i't'- ment la quantité d'hydrogène absorbée pendant la préréduction, catalytique et pendant la phase d'hydrogénolyse. L'avancement de l'hy-
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drogénation de l'antibiotique peut être alors contrôlée plus aisé- ment.
L'expression "quantité catalytique" employée ici sera facilement comprise par les spécialistes des hydrogénations de tétra- cyclines connues, c'est la mène quantité que celle employée dans les
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exesplep oui suivent.
Le rhodium est le meilleur catalyseur pour le procédé de la présente invention car il donne le rendement global le plus élevé
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en 6-tpi--céoY;- et c-âéso:ytëtr4cyclines. De plus, 1-1e--i,,loi dit rhodius permet le maintien d'un substituant 7-halogéné lorsque le produit de départ est', par exeniple, la 7-halo-6-désoxy-6-déraétryl-6mePylene-5-of-,ëtrüc;cline. Guand il n'est pas nécessaire de préserver un substituant 7-haloénéj il est préférable d'employer le palladium come catalyseur. Néanmoins, les autres catalyseurs de létaux nobles sont parfaitement convenables pour l'obtention des 6-épi-E-.àëso- et 6-désoxtétracyclines.
La pression employée pendant l'hydrogénation n'est pas critique mais dépend principalement des possibilités de l'appareil.
En général, les pressions employées vont de la pression atmosphéricue à des pressions de 2.000 livres/pouce carré (140 kg/cm2). Comme on le sait, l'hydrogénation à la pression atmosphérique est généralement effectuée dans un appareil dans lequel un volume déterminé d'hydrogène contenu dans un réservoir est relié à un manomètre de façon à pouvoir mesurer la quantité d'hydrogène consommé. On peut encore employer une bouteille de citrate ou de magnésie et un agitateur mécanique avec une jauge de pression étalonnée, ou un autoclave à hautes pressions avec agitation.
Pour le procédé de cette invention, les produits de départ
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convenables cO.:lprt.:nnt::rd" ceux oui ront. r;prt,senL:1; pe.r 1:: !c,- .,.':'\..5 suivantes :
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oà Y peut être un hydrogène ou un hydroxyle, X un hyàroiéne, un chlore, un iode ou un brome, X1 un hydrogène, un araino ou un alyl- amino inférieur, X2 un hydrogène ou un azote et Z un chlore ou un fluor. De plus, on peut employer les sels obtenus par addition d'acide et les sels complexes de métaux polyvalents de ces composas. Il faut remarquerque les configurations stériques des positions 5a et lla sont indiquées dans la seconde formule ci-dessus.
Puisque les produits de cépart du procédé de la présente invention décrits ci-dessus sont des composés de tétracyclines rela- tivement nouveaux bien que connus, on trouvera plus loin des exemples I à XXXI pour illustrer leur préparation et donner les produits de départ nécessaires. En général, le mode de préparation comprend le traitement d'un lla-halo-6,12-hémicétal d'une tétracycline appropriée avec un acide fort du type déshydratant comme l'acide sulfurique, trifluoracétique, polyphosphorique, perchlorique, fluorhydrique ou un autre du même genre. Parmi ceux-ci, on préférera l'acide fluorhydrique. Les conditions optimum sont d'habitude déterminées par la routine.
En général, l'hémicétal lla-halogéné dhoisi est simplement ajouté à l'acide choisi et on les laisse réagir à une température située au mieux entre 0 et 50 C etendant une durée
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tendant une dur'
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hilare de une ci plusieurs meures. Lorsque la réaction estconplète, le produit est isolé de façon appropriée, c'est-a-dire, dans le cas ('acides volatils, en évaporant ceux-ci pour obtenir le produit résiduel, et dans les autres cas, par des procédés habituels comme par exemple en agitant avec un solvant dans lequel le produit ne soit pas solrble (par exemple de l'étner diéthylique) afin de le précipiter.
Ces composés 0-méthylène peuvent être convertis avant l'hydrogénation en sels tels que des chlorhydrates, par les procédés habituels.
Des variations de substituants des produits de départ du procédt de la présente invention sont aussi illustrées dans les exemples ci-après.
En bref, la 7-halogénation du produit de départ peut être obtenue par halogénation directe d'une lla-halo-6-désoxy-6-déméthyl-6- méthylène-5-oxytétracycline par des réactifs bien connus tels que N-chloro-, N-bromo- et N-iocosuccinimide. tour rette réalisation, on a trouvé que l'acide fluorhydrique liquide est un excellent milieu réactionnel et que des températures allant de -40 C jusqu'à 60 C sont parfaitement convenables. Le composé 7,lla-dihalogéné résultant peut être employé tel quel ou peut être converti en dérivé lla-déshalogéné correspondant par les procédés illustrés dans l'exemple VI.
La nitration directe de la 6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracycline choisie convient pour préparer les produits de départ 9-nitro de la présente invention. On fait réagir le produit de départ avec de l'acide nitrique par se ou formé in situ, par exemple avec du nitrate de potassium et de l'acide sulfurique. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque la nitration est effectuée dans un solvant tel que l'acide fluorhydrique liquide, un acide alkylique inférieur, etc. Quand on emploie l'acide fluorhydrique comme solvant, il peut aussi agir comme donneur de protons et former l'acide nitrique in situ avec des nitrates.
Il faut éviter d'élever la température au-dessus de 50 C, les meilleurs résultats étant obtenus température ambiante et il faut même travailler à des températures inférieures quand on emploie l'acide fluorhydrique comme solvant.
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Les durées de réaction peuvent varier de 15 minutes à 12 heures.
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Lorsque le produit de départ souhaite est une lla-césnalo- 6-désoxy-b-déméthyl-b-méthylènetétracyclir¯e, la lla-déshalogénation peut être faite par réduction soit chimique, soit catalytique en utilisant les procédés bien connus des spécialistes. L'exemple XXXVII ci-dessous illustre la réduction par hydrogénation d'une
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lla-chloro-6-désoxy-6-déaéthyl-6-méthylènetétracycline Pour obtenir le dérivé lla-déchloruré correspondant et montre aussi que le groupement lla-fluoro n'est pas susceptible d'une réduction par ce procédé. Par contre, les groupements lla-fluoro sont éliminés dans les produits de départ souhaités par des procédés de réduction illustrés dans l'exemple IV, méthode D, dans lesquels on emploie jour faire la réduction du zinc en poudre et de l'acide chlorhydrique dilué.
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La préparation des produits de âtaart 9-à:xii;o èu procécé de la présente invention peut être faite par réduction des composés 9-nitro correspondants en utilisant les procédés généralement employés pour la conversion des composés nitro en composés amino.
De tels procédés sont illustrés par les exemples XIII, XIV et XXX. Les composés de départ 9-amino acylés de la présente invention sont
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sussi préparés par les procédés habituels dans ce conrine. Le meilleur procédé comprend l'acylation de la 9-nino-E-3ésoxy-bdéméthyl-6-séthylënetétracycline par l'anilydride diacide désiré ou par un équivalent de ce dernier tel qu' un chlorure d'acide en présence d'une base, par exemple une amine tertiaire telle que la pyridine, dans un solvant inerte. Les exemples XVIII et XIX, entre autres, illustrent ces techniques d'acylation.
Comme on l'a dit ci-dessus, la réduction du groupement 6-méthylène d'un composé de départ choisi en accord avec la présente invention peut produire l'élimination d'un substituant 7-halogéné et produit l'élimination d'un substituant lla-chloro. Si l'on désire
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que de tels substituants existent dans le .:J.éla!1l>t: final ou dans chacun de ses composants, par exemple, la 6-épi-é-àésoxyLétracy"cline
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ou la 6-désoxytétracycline, ils peuvent être réintroduits par la technique de chloruration décrite ci-dessus et illustrée par les exemples XLI-XLV. En outre, en supposant qu'un produit de départ lla-fluoro soit utile pendant la réduction du groupement 6-méthylène, ce substituant peut être ensuite éliminé par le procédé décrit dans l'exemple XXXVIII.
Le choix d'une 9-nitro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène- tétracycline comme produit de départ du procédé de réduction de la présente invention causera la réduction du groupement 9-nitro en 9-amino. En conséquence, si l'on désire la 9-ni ne de configuration normale ou épimérique, le groupement 9-nitro devza être introduit dans le produit du procédé de réduction de la présente invention par les mêmes moyens de nitration que ceux décrits,' ci-dessus et illustrés par les exemples L, LIV, LV, LVI et LVIII.
Afin de stabiliser en milieu acide les produits 6-désoxy du procédé de la présente invention, les dérivés 9-amino substitués tels que la 6-épi -6-désoxy-9-amino-5-oxytétracycline peuvent être convertis en les composés 9-chloro correspondants. Ce procédé comprend une diazotation suivie d'une classique réaction de Sandmeyer et illustrée dans l'exemple LIII. On se rendra compte plus loin que cette réaction de Sandmeyer peut être appliquée à la préparation d'autres dérivés halogénés, nitriles, etc.
La nitration directe des produits finals ou des produits de départ du procédé de la présente invention favorise la substitution en position 9, des quantités minimes des dérivés 7-nitro étant parfois détectées. Pour préparer des produits de départ 7-amino ou des produits finals 7-amino dans le cadre de la présente invention, la meilleure technique comporte la préparation du dérivé 7-azo aromatique correspondant suivie d'une réduction qui donne le dérivé 7-amino désiré, réduction effectuée de préférence .par hydrolyse catalytique en présence d'un catalyseur-métal noble.
De manière générale, n'importe quelle amine primaire aromatique diazotable peut être employée pour préparer les composés 7-azo, et il est indispensable que la
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position 11, 12 énolique soit protégée par un groupement lla-halo- gène ou tout autre groupement approprié qui bloque. Pendant la réac- tion de couplage, il est préférable d'employer un excès de sel de diazonium et de maintenir la température de la réaction à 0-10 C.
Un mélange de solvants aqueux tel qu'une solution aqueuse à 50% d'un alcool inférieur soluble dans l'eau ou une cétone peut convenir. t
Les exemples XLVI-XLVII illustrent la réaction de couplage du diazonium suivie de réduction pour obtenir le composé 7-amino.
La description ci-dessus du procédé de la présente inven- tion montre que la substitution sur le cycle D du produit final peut être obtenue à partir d'un choix judicieux des produits de départ substitués sur le cycle D ou par une substitution judicieuse du cycle D des 6-épi6-désoxytétracycline ou 6-désoxytétracycline choisies. En général, la meilleure technique comprend la substitution;' du cycle D du produit résultant du procédé d'hydrogénation reven- diqué ici car les rendements qui en résultent sont d'habitude plus élevés.
En résumant le procédé de la'présente invention, on remar- quera qu'il constitue non seulement un moyen commode de produire de nouvelles et utiles 6-épi-6-désoxytétracyclines mais encore il donne des 6-désoxytétracyclines connues. Bien que ces derniers composés puissent être obtenus par hydrogénation d'un antibiotique tétracycli- que homologue, c'est-à-dire contenant à la fois un substituant 6- méthyl et 6-hydroxy, le procédé de la présente invention est cepen- dant meilleur car les rendements en sont nettement plus élevés que ceux obtenus par le procédé habituel.
L'hydrogénation des produits de départ 6-désoxy-6-déméthyl- 6-méthylènetétracycline de la présente invention, lorsqu'elle est menée dans les conditions acides qui sont les meilleures, produit parfois également une faible quantité de dérivés 4-épi. Si on le désire, ces composés 4-épi peuvent être séparés des composés ayant une configuration en position 4 normale par la chromatographie sur papier habituelle. De plus, les analogues 4-desdiméthylamino des pro-
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duits de départ de la présente invention définis précédemment peuvent être employés pour produire les analogues 4-desdiméthylamino des produits en question.
Les produits de la présente invention comprennent les 6-épi-6-désoxy-, 6-épi-6-désoxy-7-substitué-, 6-épi-6-désoxy-9substitué-, 6-épi-6-désoxy-lla-chloro-, 6-épi-6-désoxy-lla-fluoro-, 6-épi-6-désoxy-7,lla-dichloro-, 6-épi-6-désoxy-7-substitué-9-substi- tué-, et les analogues lla-fluoro- et chloro- de ce dernier composé et 6-épi-6-désoxy-7-chloro-lla-fluorotétracyclines, avec et sans substituant 5-hydroxyl-, de même que leurs sels obtenus par addition diacide et leurs sels métalliques acceptables du point de vue pharmaceutique, les substituants des positions 7 et 9 étant choisis parmi les groupements chloro, bromo, iodo, nitro, amino et alkylamino inférieur.
Parmi ceux-ci, un des meilleurs groupes de composés comprend ceux comprenant un substituant 5-hydroxyle, car ils ont une efficacité in vivo particulièrement bonne.
Les nouveaux composés qui viennent d'être décrits, à l'exception des composés 9-nitro-, sont utiles en raison de leur haute activité à la fois in vivo et in vitro contre toute une variété de microorganismes. Les composés 9-nitro- ont d'habitude une-activité plus faible. Ces composés nitro sont utiles pour la préparation des composés 9-amino- correspondants comme il est décrit ici.
Le tableau ci-après résume l'activité in vitro comparée de la 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline (1) et du chlorhydrate de 6désoxy-5-oxytétracycline (2) contre une variété de microorganismes destructeurs. La concentration inhibitrice minimum (MIC) est déterminée par la technique bien connue de la dilution en série.
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0i'Gf.?iIi14E* AIC (mc6fml) (1) (2) icrococcus pyogenes, var.aureus 0,78 0,78 Streptococcus pyogenes 0,09 0,09 Streptococcus fascalis 0,39 0,78 Diplococcus pneumoniae 0,19 (p.i.) 0,39 Erysipelothrix rhusiopathiae 0,39 0,39 Corynebacterium diphtheriae 0,19 1,56 Listeria monocytogenes 0,19 1,56 Bacillus subtilis 0,19 0,19
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Bacterium awnoniagenes - 0,78 Aerobacter aerogenes 6,3 12,5 Escherichia coli 3,12 12,5 Proteus vulgaris 100 > 200 Pseudononas aeruginosa 12,5 > 200 Salmonella typhosa 6,3 6,3 Salmonella gallinarum 3,12 12,5 Klebsiella pneumoniae 3,16 6,3 Neisseria gonorrhoeae 0,09 6,3 Hemophilus influenzae 0,09 0,39 Shigella sonnei 3,12 6,3 Brucella bronchiseptica 0,78 3,12 Malleomyces mallei 0,
78 25 Vibrio comma 0,39 6,3 Pasteurella multocida 0,19 Streptococcus agalactiae 0,19 -
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Souches résistantes aux antibiotiques de Micrococcus pyogenes var. aureus : 376 6,3 (p.i.) >200 400 6,3 (p.i.) 200 (p.i.) = inhibition partielle.
Dans le tableau qui suit sont comparées les propriétés
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de la 6-épi-6-d6soxY-5-oxy tétracycline (1) et de la 6-désoxY-5oxytétracycline (2) : Propriétés des 6-désoxy-oxytétracYclines.
(1) (2) Bioactivité contre K. pneumoniage
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(par rapport à l'ox.3rtétracTcline) Ca. 1500 y/mg Ca. 500 bzz 1 max HC1-jJ,éthanol 267 266 ( = 17.300) ( = 18.10Q)
351 343 ( @ = 13. 200) ( @ = 13.200) Rf@ 0,5 0,3
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x Chromatographie sur papier saturé avec un tampon aqueux ¯4ac ilvaîne pH 3,5, développé pendant une heure avec nitronéthzne:chlorororme: pyridine 0:10:3 en volume.
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Les .10u.veaux C0::lpOS:;S de La ô-c?i-6-a6soxyt-.c/lL.i.L-'i- .......1 --Y"! -..Pf '{ tf co-mùosi-.i-)ns ....".1 't'- piéciJ<-. pil=-.r.-.= r¯u", 11- s dans aifférentes CJ21JOS1. Ll'Wl:: ....<:-¯0,"". à celles des tétracyclines homologues dorn. ils dérivent. Ils son: utiles du point de vue thérapeutique cans les al inents ou C-j:..'t.
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stimulants de croissance, en pratique vétérinaire et en agriculture.
Pour la thérapeutique chez 1 'ho:'':le, la dose orde habi- tuelle de ces nouveaux composés est de environ 0,1 à environ par jour pcur un adulte moyen. Le produit est formulé sous forne de
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capsules ou de compri.nés contenant de 25 à 250 .1g d'antibiotique sur une base d' activité. Des suspensions et des solutions dns différents véhicules sont préparées en utilisant des concentrations c-llant' de 5 à 125 mg ml. Pour une administration parentércle intramusculaire ou intraveineuse, la dose journalière est réduite à environ 0,05 à 1,0 g. Les formulations intramusculaires comprennent ces solutions
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d'antibiotique à des concentrations aîia<;1 de 50 à 100 :nç/.al.
L'f1inistrtion intraveineuse se fait au .noyen de solutions isotoni- ques ayant une concentration en antibiotique d'environ 10 mg ml.
Les deux types de produits parentéraux sont distribués sous forme de compositions solides pour la reconstitution. Ces produits peuvent aussi être employés pour des applications sur les milieux qui se développent habituels. De toutes façons, le médecin traitant doit
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évidesunent indiquer la dose qui convient à chaque patient en parti- culier. On emploiera des doses moindres pour les enfants.
La présente invention concerne tous les sels, y compris les sels métalliques et ceux obtenus par addition d'acide, des antibiotiques amphotères nouvellement reconnus. Les procédés bien
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connus de préparation de sels des composés tétracycliqaes sont appli- cables dans ce cas et sont illustrées par des exemples ci-après. Ces sels peuvent être formés avec des métaux et des acides acceptables du point de vue pharmaceutique, mais aussi non acceptables. Par "accep- table du 'point de vue pharmaceutique",, on comprend les métaux et les acides susceptibles de former des sels qui n'augmentent pas de façon appréciable la toxicité des agents antimirobiens amphotères.
Les sels les meilleurs sont ceux obtenus par addition d'acide et les
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sels métalliques acceptables du point de vue pharmaceutique.
Les sels obtenus par addition diacide, acceptables au point de vue phammaceutique, sont particulièrement intéressants au point de vue thérapeutique. Ils comprennent des sels d'acides minéraux tels que les acides chlorhydrique, iodhydrique, bromhydri- que, phosphorique, métaphosphorique, nitrique et sulfurique, de même que des sels d'acides organiques tels que les acides tartrique, acétique, citrique, malique, benzoïque, glycolique, gluconique, gulonique, succinique, arylsulfoniques, par exemple p-toluène- sulfonique, et d'autres semblables. Les sels obtenus par addition d'acide inacceptables du point de vue pharmaceutique, bien qu'ils ne soient pas employés en téhrapeutique, peuvent être employés pour l'isolation et la purification du nouvel antibiotique reconnu.
De plus, ils peuvent être employés pour la préparation de sels accepta- bles du point de vue pharmaceutique, Parmi ceux-ci, les plus courants comprennent les sels formés avec les acides fluorhydrique et perchlorique. Les fluorhydrates sont particulièrementutiles pour la préparation de sels acceptables du point de vue pharmaceutique, par exemple le chlorhydrate, par solution dans de l'acide chlorhydrique et cristallisation du chlorhydrate obtenu. Les sels d'acide perchlorique sont utiles pour la purification et la cristallisation du nouvel antibiotique.
Tandis que tous les sels métalliques peuvent être préparés et sont employés à différentes fins, les sels métalliques acdeptables du point de vue pharmaceutique ont une valeur particulière à cause de leur utilité en thérapeutique. Les métaux acceptables du point de vue pharmaceutique comprennent le plus souvent le sodium, le potassium et les métaux alcalino-terreux de nombre atomique inférieur ou égal à 20, comme le magnésium et le calcium, et également lalu- minium, le zinc, le fer et le manganèse, entre autres. En effet, les sels métalliques comprennent des sels complexes tels que les chélates métalliques, qui sont bien connus dans le domaine de la tétracycline.
Les sels métalliques inacceptables du point de vue
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pharmaceutique comprennent le plus souvent les sels de lithium et de .:létaux alcalino-terreux de nombre atomique supérieur a 20, co.n.ne le baryum et le strontium, qui sont utilisés pour l'isolation et la purification, de l'antibiotique. Du fait que le nouvel antibotique est amphotère, il forme également des sels avec les a.nines suffisam- ment basiques.
Il est évident que, en plus de leur qualités thérapeuti- ques, les sels métalliques et acides acceptables du point de vue pharmaceutique sont également utiles pour l'isolation et la purifi- cation.
Les exemples suivants sont donnes à titre indicatif et ne limitent en aucune façon l'invention, de nombreuses variantes étant possibles dans le cadre de celle-ci.
EXEMPLE I . - 11a-fluoro-5-oxytétracycline-6,12-hémicétal.
1 un mélange de 6,9 g de la base oxytétracycline anhydre dissous aans 285 :nl de méthanol refroidi au bain de glace, on ajoute un équivalent d'une solution 1N de méthoxyde de sodium dans le méthanol. Le sel de sodium jaune précipite. On fait passer un courant de fluorure de perchloryle qui dissout le sel de sodium, uand le mélange approche de la neutralité, un précipité lourd commence à se former. L'excès de fluorure de perchoryle est chassé par un courant d'azote, le produit est séparé par filtration, lavé avec du méthanol froid et séché sous vide à température ambiante pour obtenir 5,1 g de cristaux jaune pâle. L'absorption infrarouge ne montre pas d'absorption due au carbonyle en dessous de 6 microns.
Un essai biologique sur K.pneumoniae montre une activité de 4 meg mg a l'échelle de la tétracycline. L'absorption ultraviolette montre des maxima à 265 et 335 microns. L'analyse élémentaire donne après recristallisation du produit dans l'eau les résultats suivants : Calculé pour C22H23O9N2F.2H2O: C, 51,4; H, 5,25; N, 5,5 Trouvé C, 51,2; H, 5,3; N, 5,7.
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."¯..i..¯':i'L .l.l.lla-cnloro-5-oxytétracycline-6,12-hémicÉtal.
On dissout 23 g d'oxytétracycline anhydre dans 250 :.il de 1,2-âiméthoxyéthane et on ajoute ensuite 3 4--e N-chlorosuccini- mide. On agite le mélange pendant deux minutes et on le verse ensuite dans 1 litre d'eau en agitant. Le produit qui se sépare est recueilli par filtration, lavé à l'eau et séché. L'analyse infrarouge du produit (KBr à une concentration de 1%) ne contre pas d'absorption due au carbonyle dans la région de 5-6 microns mais
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contre les pics principaux suivants: b,12, 6,35, 6,66, 6,5, 7,;z, 7,55, 7,75, 7,92, 8,1..4., 8,36, 8,7ô, 9,18, 9,43 iicrons, Un essai biologique contre une activité de la tétracycline de 4 c/. .
.:0#.IPLE III . lla-chloro-6-âéso -6-dééth 1-b-:néthvlàne---o tétrac cline.
On ajoute 5 g de lla-chloro-5-ox,tétracycline-b,12-héi- cétal à 15 ;nI d'acide fluorhydrique liquide et sec et le mélange est agité pendant 3,5 heures à la température du bain de glace. L'acide fluorhydrique est évaporé en chauffant sous un courant d'azote our obtenir le fluorhydrate.
Le fluorhydrate brut est dissous dans de l'eau et on ajouLe goutte à goutte de l'HCl concentré ou de l'acide perchlorique
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(70;) pour précipiter les chlorhydrate ou perchlorate. L'i0èhyàrate est précipité à partir d'une solution dans l'acétone du fluorhydrate brut par addition d'acide iodhydrique à 47%.
Ou, en variante, le mélange réactionnel initial est cilué avec 6 ou 7 volumes d'eau et de glace et on ajoute de l'acide perchlorique ou de l'acide naphtalènesulfonique (acide concentré) pour précipiter leurs sels respectifs. Une dilution dans l'acétone du mélange réactionnel initial, suivie de l'addition d'HI, précipite l'iochydrate.
EMI15.4
L'analyse élémentaire de l'iodhydrate donne les valeurs suivantes: Calculé pour C22H21Ii20gC1.FiI : C, 43,7; IM, 3,7; 11, 4,6; Cl, 5,8 Trouvé C, 44,0; H, 4,0; N, 4,2; Cl,5,5.
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L'analyse ultraviolette montre les maxima suivants : 222, 270 et 372 m. L'analyse infrarouge montre les pics principaux à 3,05,3,2, 5,7,
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6,Ô2, 6,03, 6,22, 6,., 6,88, 7,4, 7,$, 8,1, 8,9, et 9,1 microns. Le perchlorate montre à l'analyse ultraviolette des maxima à 237, 270 et 372 m.
EMI16.2
La lla-fluoro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétra- cycline est préparée de la même façon en utilisant du lla-fluoro-5- ' o: tétracycline-b,12-hémieétal comme composé de départ.
EXE4PLE IV.- 6-désoxt-6-déméthyl-6-méthYlène-5-oxytétracycline.
Procédé A.
A une solution de 5 g du produit de l'exemple III (sous
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forme d'iodhydrate) dans 125 ml d'acide chlorhydrique dilué (1 partie d'HCl concentré dans 55 parties d'eau) à 20 C on ajoute 2 g de zinc en poudre. Après avoir agité pendant 10 minutes, on élimine le zinc par filtration, on amène le filtrat à un pH de 0,3 et on l'extrait avec du butanol. L'extrait butanolique est concentré sous pression réduite jusqu'à obtention d'un résidu qui est trituré avec de l'éther. Le résidu insoluble dans l'éther est cristallisé à partir d'un mélange méthanol-acétone-HCl conc.-éther pour obtenir le chlor-
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hydrate-aononéthanolate (2,5 g) qui fond en se décomposant à 205 C.
L'analyse ultraviolette dans l'HCl 0,01N dans le méthanol montre les
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maxima 1\ max 252 n / u, h' 1 cm 450 et max 345 bzz' Ll' 1 cm 302; dans NaOR OOIN dans méthanol, 235 mu, ig ., 442; dans le NAOH O'Olli dans le méthanol, max 235 m/u, E 1 cm j42; ; 4u. 1& .40g; À 385 5 m,,U.J, 1 -:1, 329; max 2' m/u E 1 cm, 408; max 38S m!u cm' 39, ninf 2b0 m/u' El' 1 cmj, 329; dans le MgC12 0,01N dans le méthanol, À max 240 m/u, Eloem 1 461; Max 277 n/u, E1/, 1 cm 326; À max 351 m u, E1% cm, 282.
L'analyse infrarouge montre les pics principaux à 6,03; 6,2; 6,37 et 6,87 microns. Un essai biologique montre une valeur de 2. 000 à
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2.400 mcg/mg (essai turbimétrique sur K. pneumoniae en se rapportant à l'oxytétracyclinc). L'analyse élémentaire du produit donne les valeurs suivantes: C, 55,0; H, 5,2; N, 5,5 ; Cl, 7,0; OCH3, 3,4.
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Le produit montre des valeurs de Rf de 0 et de 0,35 respectivement dans les systèmes suivants :
Phase mobile Phase immobile (1) 20:3 toluène-pyridine tampon pH 4,2 (aqueux) saturé avec un tampon pH 4,2 (2) 20 :10:3 tampon pH 3,5 (aqueux) chloroforme, pyridine saturé avec un tampon pH 3,5.
Procédé B.
Un mélange de 1 g du produit lla-chloro- de l'exemple III dans 10 ml de méthanol contenant 200 mg de rhodium à 5% sur du carbone est hydrogéné à la température ambiante et sous une atmosphè- re d'hydrogène jusqu'à ce qu'une quantité équimolaire d'hydrogène soit absorbée (2 heures). Le catalyseur est filtré, le filtrat est évaporé à sec et le résidu cristallisé comme dans la méthode A.
Procédé C.
Un mélange d'l g du produit lla-chloro- de l'exemple III dans 70 ml d'eau contenant 1 g d'hydrosulfite de sodium est agité pendant 0,5 heure à température ambiante. On extrait ensuite le mélange avec du butanol et l'extrait butanolique est évaporé à sec.
Le produit est cristallisé à partir du résidu cornue dans le procédé A.
Procédé B.
En utilisant la procédure du procédé A, on réduit du
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perchlorate de lla-rluÉro-6-désoxy-6-dénéthyl-6-méthylène-5- oxytétracycline en 6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline.
Le chlorhydrate-méthanolate cristallin de cet exemple peut être recristallisé à partir d'isopropanol pour donner du chlor-
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hydrate de 6-désoxy-b-déméthyl-6-mQthylène-5-o?ry tétracycline. Le produit recristallisé montre les pics suivants à l'analyse infrarouge : 3,1,3,75, 6,02, 6,23, 6,36,6,55, 6,9, 7,35, 7,7,7,8, 8,15, 8,26, 8,5, 9,27, 9,95, 10,55, 10,8, 11,53, 11,93 et 12,15 microns.
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EXEMPLE V.-
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7,lla-dichlojo-6-désoxv-6-dénéthyl-6-méthYlène-5.-oxYtétracvcline.
Procédé A.
On ajoute 1,5 g de N-chlorosuccinimide à 5 g d'iodhydrate
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de lla-chloro-d-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline dans 15 ml d'acide fluorhydrique liquide à la température du bain de glace. La solution est agitée à la température du bain de glace pendant 1,5 heure. Le produit brut est précipité par l'addition de 500 ml d'éther et recueilli par filtration.
Le produit brut est repris dans du méthanol à température ambiante, le produit insoluble est filtré, le filtrat est traité au carbone réactif, filtré et concentré sous pression réduite. Le résidu restant est repris dans de l'acide chlorhydrique dilué à partir duquel le produit est recristallisé en tant que chlorhydrate.
L'analyse ultraviolette dans le HCl 0,01N dans le méthanol montre
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Àmax239 mû 1 m 352, À max 37ô mu El%cm 1 60, \ion z5g mou E1% cm 324. L'analyse I.R. montre les bandes principales à 5,7, 6,0 et 5, 9 /u.
Procédé B.-
On ajoute 5 g de lla-chloro-5-oxytétracycline-6,12- hémicétal à 15 ml d'acide fluorhydrique liquide à la température du bain de glace. Après savoir agité pendant 3,5 heures à la température du bain de glace, on applique le procédé A après addition du même poids de N-chlorosuccinimide pour obtenir le produit.
Un autre procédé un peu meilleur est le suivant. Après avoir éliminé la plus grande partie de l'acide fluorhydrique liquide, on ajoute 100 ml d'eau et ensuite 5 g d'acide -naphtalènesulfonique.
Le produit précipite en tant que -naphtalènesulfonate et est recueilli par filtration.
Un autre procédé comprend la dilution du mélange réactionnel initial dans 6 à 7 volumes d'eau, suivie par l'addition goutte à goutte de l'acide concentré pour précipiter le perchlorate et le @-
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nàphtalénesulfonzte cornue il est décrit dans l'exemple III. Le per-
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chlorate brut ainsi obtenu est cristallisé sous forme de longues aiguilles à partir d'isopropanol et montre à l'analyse ultraviolette des maxima à 260 et 377 m/u et une inflexion à 260 m . L'analyse infrarouge montre des Dics à 5,7, 6,0, 6,26, 6,55, 6,88, 7,2, 7,85 et 8,35 microns.
EXEMPLE VI.-
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?-chloro-b-désox-b-déméthvl-b-méthYlène-5-oxytétracycl ne.
Procédé A.
On ajoute 0,45 g d'hydrosulfite de sodium à une solution
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de 0,5 g de perchlorate de 7,lla-dichloro-6-désoxy-6-déxéthyl-6méthylène-5-oxytétracyclin.e dans 7,5 ml d'eau et le mélange obtenu est agité pendant 12 minutes. Le produit se sépare et est recueilli par filtration. Un essai biologique du produit donne une valeur de 3.400 mcg mg (essai turbimétrique sur K.pneumoniae en se rapportant
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à l'oxytétracycline (1000 mcg/mg)).
Procédé B.
20 g du -rphtalènesu1fonate de l'exemple précédent sont misen suspension dans 500 ml de méthanol contenant 5 g de rhodium à 5% sur du carbone et le mélange est hydrogéné à température ambiante sous 1 atmosphère d'hydrogène. Lorsque 700 ml d'hydrogène ont été absorbés, le mélange réactionnel est filtré et le filtrat évaporé à sec pour obtenir 15,4 g de résidu.
La solution méthanolique de 11 g du résidu est alors ajustée à un pH de 6,5 avec de la triéthylamine et passée à travers une colonne de 8 x 100 cm contenant 2 kg de poudre de cellulose, l'eau étant la phase fixe. La colonne est éluée avec de l'acétate d' éthyle saturé d'eau et on recueille des fractions de 45 ml. L'évolution de l'élution est suivie par chromatographie sur papier et les fractions 132 à 260 sont recueillies, évaporées à sec, agitées dans l'éther et filtrées pour donner 2,74 g d'un produit amphotère pur et amorphe.
Le produit est cristallisé en dissolvant 1,6 g dans 40 ml de méthanol chaud et en grattant. On filtre et on recueille 890 mg du
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produis sous forme de base &-:1;>:-10 t:::re. J..:' (,.::é;.l::e infrarouge 1<:OE'i± les pics suivants : 2.9C, 3,29, 3,4z, 6,06, 6,1, 6,30, ,5?, -, 7,19, 7,4, 7,70, 3,ij, 9,06, 9,33, 1063,..0,92, 11,55 et 11,76 ';1crons.
L'anal;se ultraviolette .contre : dans 15Cl 0,011; dans le méthanol, des :na::i:1& à 247 :'1/u (106 t: 4,2<D) et 346 ID/u (log é. 4,J2) et une inflexion à 370 -./ -1 u (lot 1 3,9;3); dans lià0E O,OlN dans le méthanol, ces ::Iéxiuê. à 23 ./u (logÉ4,24), 253 :a/u (log E. 4,22) et 389 :au (log 4,12) et une inflexion à 284 :"/1.1 (log E. 4,07); dans :3Cl..:: 301.-! dans le '1{té.nol, (es Jl.xi.ll6. à 241 ::1/1.1 (logg4,32), 349 mu (low <4,04) et 372 a/1i (epauleaent) {loË ,.,02).
Le produit contre les valeurs de Hf suivantes dans les systèmes de solvants indiques :
EMI20.2
Valeur dc Lf Phase !lobile 2ystène c'e solvants Phase iJ1TIobilE.
O,JS acétate d'éthyle tampon phosphate aqueux sature d' e4u JE 3 ,J,33 acétate d'éthyle tcuapon de :1étc Ilvaine sature G'ea"01 pH 4, Un ess¯1 tiologicue (sur K. PEE:u:10nié...e en se n.9;:ort&n ;- l'oY'tétré::.- cycline) conne une valeur de 6000 mcg/mg.
EMI20.3
Le perchlorate cristallin du produit de exemple précé- dent est kydrogéné pour donner ce produit qui est cristallisé à. partir de méthanol et d'acide perchloricue à 70.,. Le perchlorate du produit contre un spectre ultraviolet identique à celui de la base amphotère.
Procédé C.
Ce produit peut également être obtenu par réduction du composé de départ du procédé ± avec du zinc et un acide suivant le procédé de l'exeple IV.
EXEMPLE VII . -
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7-bro yo-lla-chloro-6-désox;y-6-déméthvl-6-:uc thyléne-5-oxytétrac rcline.
Ce produit est préparé suivant les procédés A et B de
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1."exe;lple V en utilisant une quantité équivalente de À-broL-1osuccIni- mide au lieu de N-chlorosucciniraide.
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EXEMPLE VIII. -
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7-br :o--d soxa-,-dc : thYl-6-,:,ë tb:l Àne--o-r. tr trr c;cl in c .
Ce produit est obtenu à partir du produit de 1-l'E,-.,,-,,-LVII en le traitant ar de l'hydrosulfite de sorii n courte décrit ans l'exemple VI.
Les composes suivants sont préparés à partir des composes
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1?a-halogénés correspondants par le procède des e: e¯.ples procèdent?: 7-chloro-lla-:luoro-ô-désoxy-6-démé thyl-6-:aé thyléne-5-oz.y tétrüc,cline '; -iodo-11G-chloro-6-désoxy-6-déméthyl-6-:ct :;lène-5-o:.,té trac;cli¯e 7-broo-lla-fluoro-é-désor-6-dérnéth;l--aÉtbylène-5-oryt4 trac;,cline.
Ces composes sont convertis en leurs dérivas 11a-déshalogénés correspondants par les procédés mentionnes ci-aessus.
EXEMPLE IX. -
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7 -cz:lo ro-9-ni tro-6-d é sox.y-6-dérné thYl-ô-mé th=Tléne-5-o y té trn c¯,cl in e.
A une solution de 1,0 g de la base 7-chloro-6-cïésox,-6- à..ét¯ßl-6-méthylène-5-oxtétrac3cline dans :3 .:il diacide fluorh;cricuc liquide anhydre (3F) à 0 C, on ajoute 220 .n#; de Le :.1f:l&r:;e est agité pendant 30 minutes à 0 C et HF est chassé par un courant d'azote. Le résidu est trituré dans de l'éther sec, filtré et séché.
Ci-dessous sont notées les valeurs de Rf dans les systèmes de sol- vants indiqués: Rf Système de solvants-
Phase mobile Phase immobile 0,2 acétate d'éthyle tampon phosphate aqueux saturé d'eau (pH on p 0,55 nitrométhane, tampon de Mac Ilvaine toluène, pyridine (pH = 3,5) (20:10:3) L'analyse ultraviolette dans NaOH 0,01 M dans le méthanol contre des maxima à 248, 341 et 447 m/u et un épaulement à 275 m . Un essai biologique montre une valeur inférieure à 100 mcg/mg (essai turbimé- trique sur K.pneumoniae en comparaison avec l'oxytétracycline).
EXEMPLE X. -
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9-nitro-7,lla-dichloro-6-désoxv-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracvc7 A une solution de 600 mg de perchlorate de 7,lla-di-
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chloI'O-O-désoxy-o-èé.:.tétY.y:-o-.n.jt:-:Jl;:;ne-5-o;;Q t.trilcycl in dans .1.,:..::1 décide fluorhydrique liquide ûni¯y:.rc, on ajoute 100 'Olt. de .r:t03" Le mélange est agité à 5 C pendant 15 -minutes, et le produit estalors précipité avec de l'éther et recueilli par filtration, après lavage à l'éther.
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EXE.:.1PLE I . - 9-nitro-6-désoxv-6-déréthyl-6-céthyléne-5-oxxtétr4c- cli.^.e.
A un mélange de 500 ng de 6-désoxy-6-déEiéthyl-6-méthylene- 5-oxytétracycline dans 1,5 ml d'acide fluorhydrique anhydre et
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liçuide, on ajoute 100 mg de SN03. Le mélange est agité à 15 C pen- dant 30 minutes et ensuite évaporé à sec. Le résièu est trituré dans l'éther et filtré pour obtenir le produit brut qui ast trituré
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dans HCl aqueux 5ro et extrait avec du butanol. L'extriit butanolique est concentré jour obtenir le produit. EXEMPLE XII.-
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nitro-lla-chloro-6-déso;g-6-ddaéthyl-à-.aéthylène-5-->atétr-c;.cline.
On laisse reposer une sulution de 5 de lla-chloro-3oxytétracycl-ine-6,12-hé-icétal dans 10 inl d'acide fluoI'Ïlycricue an- hydre pendant 3 1/ : h. puiscn y ajoute 1, 2 g de KNO3 en agitant. L'agitation est poursuivie pendant 1 heure à la température du bain de glace et le mélange est alors versé dans 200 ml d'éther sec, filtré et lavé à l'éther pour obtenir le produit brut.
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EXE."IPLE XIZI. - 7-chloro-9-0.nino-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline. h une solution de 1,42 g de 7-chloro-9-nitro-6-désoxy-6déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline dans 50 :ni d'eau et 2ul d'HCl cane., on ajoute à 20 1,3 g de zinc en poudre en agitant.
Après 15 minutes, le mélange est filtré, le pH ajusté à 2,5 et le mélange est extrait avec du butanol (5 x 30 ni). L'extrait butanolique donne, après concentration, 760 mg du produit (sous forme de
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chlorhydrate). Un essai biologique (K.pneuraoniae) donne une valeur dE 1680 mcg/mg. L'analyse ultraviolette dans HCl 0,01 N dans MeOH
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montre des maxima à 262 et 348 m/u; dans NaOH 0,01À-;.le0E, à 264 et
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350 L I u.
Le'produit donne les valeurs de Pffuivantes :
Rf Système de solvants
Phase mobile Phase immobile
0,2 acétate d'éthyle tampon aqueux saturé d'eau (pH = 3)
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0,35 nitronéthane, tampon de Me Ilvaine chloroforme, pyridine (pH = 3,5) (20: 10:3) Ce produit peut également être obtenu par réduction (avec
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de l'hydrosuifi e de sodium aqueux) de la 9-ritro-7,lla-ci^hloro-6désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxyté tracycline.
EXEMPLE XIV.- 9-a.ino-é-dé soxy--défe th vl-d-é thvlène-5-oxytétr4ccline.
Ce produit est obtenu par réduction du dérivé 9-nitrocorrespondant par de l'hydrosulfite de sodium dans de l'eau ou SnCl2 dans ce l'acide chlorhydrique aqueux.
EXEMPLE XV.-
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-nitro-lla-chloro-6-déso;v-à-àéxéthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline. r une solution de 1 g de lla-chloro-6-désoxy-6-dé'nëthyl-6- :éthylêne-5-oxytétracyclire dans 20 :nl diacide acétique, on ajoute 1 ml d'acide nitrique concentré. On laisse reposer le mélange pendant 2 heures, on l'évaporé ensuite au quart de son volume initial et on ajoute alors 200 ml d'éther. Le produit se sépare sous forme de nitra. te et est recueilli par filtration.
On prépare de la même façon le dérivé lla-fluorocorrespondant.
EXEMPLE XVI . -
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-aino-6-désoxsr-6-dëétnvl-6-néthvlène-5-oxytétracycline.
Ce produit est obtenu par réduction du produit de l'exemple précédent selon le procédé de l'exemple IV.
Ce produit peut aussi être obtenu par réduction chimique
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ou catalytique de la 9-nitro-6-àésoxy-6-àéméthyl-6-métiayléne-5- oxytétracycline.
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EXEMPLE XVII . -
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7 lla-dichloro- -n:itro-6-désc -6-déméthT 1-6-méth lène- -o¯ té:tra- cycline. cycline. 1 g de chlorhydrate de 7,lla-dietdoro-6-désozy-6- déméthyl-6-mthylène-5-OxYtétracycline est dissous dans 20 ml d'aci- de acétique et on y ajoute 1 ml d'HNO3 conc.. Le mélange est laissé au repos pendant 12 heures et ensuite est concentré au quart de son volume initial. On y ajoute goutte à goutte 200 ml d'éther en agitant et en maintenant dans un bain de glace- 1;'agitation est continuée pendant 3 heures puis on recueille le solide par filtration.
Le solide est trituré plusieurs fois dans l'éther et ensuite séché et on) obtient ainsi le produit sous forme de chlorhydrate.
En utilisant le même procédé, on a obtenu, au départ des dérivés initiaux correspondants, les produits suivants :
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7-chloro-lla-fluoro-9-nitro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5oxytétracycline 7-brono-lla-chloro-9-nitro-6-désox3r-6-dé.nétiayl-6-méthyléne-5-oxy.tétracycline 7-iodo-lla-fluoro-9-nitro-6-àésoxy-6-dénméthyl-6-méthylène-5-oxytétra- cyline.
Ces produits sont convertis en 7-broino-, 7-iodo- et 7-
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chloro-9-amino-6-désoxy-6-déméthyl-6-néthylène-5-oytétracycline par les procédés de réduction des exemples précédents. EXEMPLE XVIII.-
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-form lamino-6-déso. -6-déméth 1-6-aéth lène- -o tétrac cline A une solution de 4,5 g de 1; hase 9-amino-6-désoxy-6démétàyl-6-;éthyléne-5-oxytétracycline dans 40 ml de pyridine sèche, on ajoute 20 ml d'acide acétylformique à la température du bain de glace. Le mélange est agité pendant 15 minutes à la température du ain de glace puis 1 litre d'éther sec est,* ajouté goutte à goutte. Le produit final est filtré, remis en suspension dans de l'éther et refiltré.
Le produit brut est mis en suspension dans 100 ml d'eau
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réalisant une solution de pH : 4,2 et agité pendant 10 minutes afin d'hydrolyser les groupements 0-formyle. Le pH du mélange est alors ajusté à pH = 5,5 et la solution est séchée en la congelant, ce qui donne le produit brut qui est ensuite chromatographié sur une colonne de cellulose de façon à obtenir le produit purifié dans la fraction principale.
EXEMPLE XIX.-
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9-aeétvla.nino-6-désoxy-6-déméthvl-6-méthse-5-oxytétraeycline
A une solution de 4,2 g du produit de départ de l'exemple XVII dans 200 ml de tétrahydrofurane sec et 200 ml de méthanol sec, on ajoute 20 ml d'anhydride acétique et le mélange est agité pendant 45 minutes à la température ambiante. On enlève alors la plus grande partie du solvant et le mélange est versé goutte à goutte dans de l'éther sec, filtré et le magma solide est retrituré dans de l'éther, filtré et séché pour donner le produit brut.
Le produit brut est chromatographié comme dans l'exemple XVIII et la fraction principale donne le produit purifié.
En employant les procédés des exemples XVIII et XIX, les produits suivants ont été préparés :
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9-formylamino-7-chloro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylëne-5-oxytétracyline 9-acétalamino-7-chlaro-6-désoxy-6-dététhyl-6-méthylène-5-axytÉtraculine 9-butyrylamino-7-chloro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline 9-propionylanino-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylëne-5-oxytétracycline 9-valérylamino-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline.
EXEMPLE XX. - lla-chlorotétracycline-6,12-hémicétal.
Ce composé est préparé suivant le procédé de 1-'exemple II en substituant l'oxytétracycline de l'exemple II par une quantité équivalente de tétracycline.
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:EXEMPLE XXI.-
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.7,lla-dichlorotétracycline-6,12-hémicétal.
Ce composé esc préparé selon le procédé de l'exemple XX en employant une quantité équivalente de tétracycline et en rempla- çant l'eau par de l'éther ou un mélange éther-hexane pour précipiter le produit.
EXEMPLE XXII.-
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lla-chloro-6-désoxy-6-déméthYl-6-méth,lénetêtracycline.
Le lla-chlorotétracycline-6,12-hémicétal est dissous dans de l'acide fluorhydrique liquide (à raison de 2 g/15 ml) à 0 C. Le mélange est maintenu à cette température pendant 10-15 minutes, puis l'acide fluorhydrique est chassé. Le résidu est trituré avec de l'éther et on obtient un produit solide, la 11a-chloro-6-désoxy-6déméthyl-6-méthylènetétracycline, sous forme de son chlorhydrate qui est recristallisé dans le méthanol.
En variante, le fluorhydrate brut (10 g) est dissous dans 350 ml d'eau en chauffant et en agitant. Un volume égal d'acide chlorhydrique concentré est ajouté à la solution limpide et le produit cristallise sous forme de son chlorhydrate. L'analyse élémentaire du chlorhydrate ainsi obtenu donne les résultats suivants:
EMI26.3
Calculé CEz0NzCi: C, 53,11; He 4,56; N, 5,63; chlorure 7,13 Trouvé C, 52,62; H, 4,63; N, 5,54; chlorure 6,84.
L'analyse infrarouge du produit en tant que chlorhydrate dans une pastille de KBr à une concentration de 1% montre une absorption due au carbonyle à 5,70 de même que les pics significatifs suivants: 6,1, 6,2", 6,36, 6,45 (épaulement), 6,91, 7,85, 8,14, 8,55, 10,22,
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10,55 et 10, 9 Un essai biologique du produit (K.pneumoniae) montre une activité de l'oxytétracycline de 50-100 mcg/mg. L'analyse ultra-
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violette de l'échantillon dans 0,01#1 HCl-méthano1 montre des maxima à 376, 278 et 242 m/u.
Le produit a une valeur Rf de 0,2 à 0,3 dans le système suivant : Phase mobile Phase immobile 20 :3 toluène-pyridine tampon aqueux à pH 4,saturé par un tampon à pH 4,2
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En examinant le chromatogramme en lumière ultraviolette, on remarque que la tache du produit n'est pas très fluorescente. Cependant, en pulvérisant dessus de l'hydrosulfite de sodium aqueux, elle devient fortement fluorescente.
L'épimère en C.4 de ce produit, présent à l'état d'impure- té, montre un Rf = 0,1 dans ce système.
EXEMPLE XXIII. -
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iia-fluoro-6-dôsoxz-6-àéméthyl-6-zéthyiénetitr c cline. ¯ On agite 250 ag de lla-fluoro-té-tracyclîne-6,12-hénicëtal dans 2 ml d'acide perchlorique aqueux à 63%. Le solide se dissout en chauffant à 60-65 C pendant 15 minutes, après quoi le mélange est refroidi et de l'eau y est ajoutée et on obtient la 11a-fluoro-6-
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désoxy-6-déxiéthyl-6-a&thylènetétracycline sous for-ne de son chlor- hydrate. L'analyse ultraviolette révèle une absorption semblable à celle de l'exemple XXII.
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XE:.fPL r.:CT V . Les composés ci-dessous sont préparés au départ des llah.?oté',râcyclines-b,12-héicétGls correspondants, les composés lla- fluoro par le procédé de l'exemple XXIII et les autres composés 1-lahalogénés par le procédé de l'exemple XXII :
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7,lla-dichloro-b-désoxy-6-d ¯ é t'¯.;1-'v-é tb.rlènetétracrcline 7-chloro-lla-fluoro-6-désoxy-6-déJéthyl-b-2(thylènetétracycline 'l-bromo-Ila-chloro-6-désor-6-né.nétnyl-6-r^ét:lylènetétrücycline 7-iodo-lla-chloro-6-dGsoxy-6-dé3Léthyl-6-"iéthylënetétracycline EJ#.'iPLE XXV.- 6-dnsot-ô-dé¯néthyl-b-méthylènetétracycline.
Méthode A.
Le produit de l'exemple XXII (5 mg) est dissous dans 3 ml de méthanol et on y ajoute une solution fraîchement préparée d'hydrosulfite de sodium (20 mg dans 2 ml d'eau). On laisse reposer le mélange pendant 15 minutes à la température ambiante, après quoi on le débarrasse du méthanol et on l'extrait avec du butanol.
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L'extrait :.'i ï;:lJl7.i:,lt. est CO:1C:¯n I'', ¯¯our obtenir 1 .1'.)c'..iit .. 7: - -C¯¯''.߯'1T1--:àt:t:jil ¯ïlP.t"irF..C;,rClî:l'. L: ¯rC".it " v C¯;,c.llL¯ partir .^¯'2'¯I sous 1'<;'..ie ce J.J-tOl11-':Í..Á-L:!1é.t. par ic<ôiliJ=i <;', <1.. p-toluënesulfonique. Ou encore, il est cristallisa 2: partir .-,i.u sous forze ée chloyàrte &r 4ûci tion -11-z-Cl concentra. ôn essai sur 1±, piùewioniac contre nue le produits u-e activité 0'o.xyttra.c.'Ícline d-au --,oins 11'jO .1Cs/lg.
Le y3Z'O i.;1 c. ;3.1's= valeur hf de 36 dans le syst:;.;1", décrit dans 1'c:CF. ;lE 1.Ziii r une valeur r,r (:e 8,9 dans le S7St;l8 suivant : Phase ;labilE: t'flL,S 1:1.mobile ?liti,o.Jé.it;ini-chloroJfor,Je- t<,-:pon r¯c;ux 3>5 pyridine 1(): 3 L'0..::Ji:"1?1',:: '.:on C. t;. de cette substance z =es :1<..1 :.C"' mf d'-:-1l'.'L-')2: 1,L, et C'CfiVlrC?1 06 oans les deux syst.:les.
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Méthode
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,'18 .'1oc:e On refroioit a. 4C au bain 6e lbce ur,. "oution é:1 5') b de chlorhydrate ce i14-chlor.-b-c% .::r--:.¯.t:¯;'-.
;.1t710ne.;trèc7cline dans 500 :il à ' é t' = e r ...on3-ithyli:,uc ou ct'u'-i éne Clycol et cette solution agitée neiC;1J.s.ent est traitée par 30 g due pourre de zinc ajoutes ;Z'&Ci,lC.l.lE''?E'= en 10 'îl.¯"I',lvë environ. La t-::::.1,t;sré:. Lure s'élève à 12 C pendant cette addition.
'Lorsque l'addition est terninée, la température C()J'1("nce à baisser.' Après une durée réactionnelle totale de 15 minutes, le zinc
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est élimine par filtration rapide et lavé avec un solvant. On
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ajoute 1 litre d'E:.é:.1.1 au filtrat, graduellement en 10 minutes environ. Le complexe du produit avec le zinc for2e une boue jaune.
Le pi de la solution est ensuite ajusté à 6,8 avec de l'hydroxyde de sodium aqueux à 10,:.
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On laisse reposer la boue résultante pendant environ 1 1/2 heure dans un bain de glace et on la filtre. Le gâteau humide est ensuite trituré dans 750 ml d'eau et on ajoute de l'HCl concentré goutte à goutte jusqu'à obtention d'une solution limpide. Un léger excès d'HCl concentré provoque la cristallisation rapide du chlorhydrate de 6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylèneté- tracycline sous forme d'aiguilles brillantes. Après un repos d'une heure, le produit est filtré et séché. Le rendement est de 37,8 g.
Le produit fond en se décomposant à 213,8-214,2 C.
EXEMPLE XXVI . -
Le procédé de l'exemple XXV est répété pour déchlorer les lla-chloro-6-méthylènetétracycline des exemples précédents, pour obtenir les produits suivants :
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7-bromo-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracycline 7-chloro-f-désoxy-b-déméthyl-E-méthylènetétracycline Les épimères en C.4 peuvent apparaitre sous forme d'impuretés. EXEMPLE XXVII,-
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lla-chloro- -nitro-b-déso -6-démé h 1-6-mpth lénetétr c c ne
On laisse reposer pendant 12 heures un mélange de 1 g du produit de l'exemple XXII dans 20 ml d'acide acétique contenant 1 ml d'HNO3 concentré, après quoi l'addition de 20 ml d'H20 cristallise le produit sous forme de nitrate.
Le produit est recueilli par filtration, lavé à l'eau et séché.
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EXJ24PLE XKVI I I . - -nitro-6-dés 1-6-méth énetétrac cline.-
Ce produit est obtenu à partir du composé lla-chlorocorrespondant ('exemple XXVII) en traitant 1 g dans 70 ml d'eau avec un équivalent d'hydrosulfite de sodium. Le mélange réactionnel est agité à la température ambiante pendant 1/2 heure et le produit désiré est obtenu par extraction butanolique et évaporation à sec de l'extrait sous pression réduite.
EXEMPLE XXIX.-
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7-chlçro-4-r¯i tro-6-d ésoxy-E-démé thZrh6-réth,,l ène té raçyçlin
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On ajoute 220 mg de KNO3à une solution de 1,0 g de
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7-cbacro-6-désaxy-6-déméthyl-6-môthylénetétracycline dans 8 ml d'acide fluorhydrique liquide anhydre (HF) à 19 C. Le mélange est agité pendant 30 minutes à 0 C et le HF évaporé sous un courant d'azote. Le résidu est trituré dans de l'éther sec, filtré et séché.
EXEMPLE XXX. -
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7-chloro-9-nmino-6-désoxv-6-déméthyl-6-méthylèhetétracycline
On ajoute en agitant à 20 C , 1,3 g de poudre de zinc à une solution de 1,42 g de 7-chloro-9-nitro-6-déscxy-6-déméthyl-6- méthylène-tétracycline dissoute dans 50 ml d'eau et 2 ml d'@Cl concentré. Après 15 minutes, le mélange est filtré, le pH est ajusté à 2,5 et le mélange est extrait avec cinq fois 30 ml de butanol. La concentration de l'extrait butanolique donne le produit désiré scus forme de dichlorhydrate.
EXEMPLE XXXI . -
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7lla-dichloro-9-r.itro-6-désoxy-6-démél-6-mé.thylènetétracvcline On dissout 1 g de chlorhydrate de 7,lla-dichloro-6-désoxy- 6-déméthyl-6-r.:éthylènetétracyclin: dans 20 ml d'acide acétique et on ajoute 1 ml d'acide nitrique concentré. On laisse reposer le mélange pendant 12 heures et ensuite on le concentre à 1/4 du volume original. On l'ajoute goutte à goutte @ 200 ml d'éther en agitant à la température du bain de glace. On continue à agiter pendant 3 heures et le solide est récupéré par filtration. Le solide est trituré plusieurs fois dans l'éther et ensuite séché pour obtenir le produit sous forme de chlorhydrate.
En employant, le même procédé on obtient les produits suivants à partir des composés de départ correspondants : 7-chloro-lla-fluoro-9-nitro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracy- cline 7-bromo-lla-chloro-9-nitro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracy- cline
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7-iodo-Ila-fluoro-9-nitro-6-désoxy-6-dénéthyl-6-réthylènetétracy- cline
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Ces produits sont convertis en 7-bromo-, 7-iodo- et 7-
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chloro-9-amino-6-fiésoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracycline par les procédés de réduction des exemples précédents. EXEMPLE XXXII.-
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z0 g de 6-désoxy-6-déméthyl-6-réthylène-5-oxytétracycline, %5,1 de HC1 0,01N et 40 g de rhodium sur carbone à 5p sont intro- duits dans un appareil à hydrogénation courant.
On introduit alors de l'hydrogène dans l'appareil et on le maintient à une pression de 1800 livres/Douce carré (126 kg/cm2) à la température de 30 C pendant 20 heures. Ensuite le catalyseur est filtré et le filtrat est congelé et séché pour obtenir 23,9 g de solide, un mélange de 6-
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désoxy-5-cxytétracycline et 6-épi-6-désoxy-5-cxrtétracycline. Le rendement de cette opération, s'élevant à environ 60%, peut être amélioré en employant du rhodium à 5% sur un support de sulfate de baryum afin de réduire les pertes par absorption sur le carbone catalyique de support.
On emploie un mélange de méthanol et d'eau (25 ml de chacun) pour dissoudre 20,8 g des solides bruts de l'cpération précédente. On y ajoute une solution de 20 g d'acide sulfesalycilique dans un mélange de méthanol et d'eau(50 ml de chacun). Les
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6-dêsexy-5-oxSTtétracyclinescristallisent aisément srus forne de sulfosalycilates. La boue est ensuite filtrée et le gâteau est lavé avec du méthanol aqueux à 50% et séché pour obtenir 24 2 g de sel (rendement de l'opération 75%).
On emploie une distribution à contre-courant pour séparer
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la6-épi-&ohsoxy-5-oxytëtracycline de la 6-désoxy-5-oxytétracycline.
Dans ce but, on dissout 500 mg du sel de l'opération précédente dans 30 ml d'acétate d'éthyle plus 10 ml de phosphate acide de sodium 2M. Les deux phases résultantes sont agitées et le pH ajusté à 6,8 par.addition de Na2HPO4. La phase aqueuse est séparée dans une ampoule à décanter et équilibrée avec 30 ml d'acétate d'éthyle frais. Cette opération est encore répétée deux fois avec des portions fraîches d'acétate d'éthyle et la phase aqueuse est alors mise de
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côté. Le tampon aqueux Na2HP04-KHZP04 de pH 6,8 (10 ml) est équili- bré avec chacune des couches d'acétate d'éthyle dans s quatre ampoules et ensuite mis de côté. Cette opération est encore répétée deux fois avec un tampon frais de pH 6,8.
Les quatre couches d'acétate d'éthyle sont réunies et évaporées à sec pour donner 172 mg de 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline pratiquement pure (rendement de l'opération environ 50%). Le produit restant dans les couches du tampon aqueux est concentré pour donner de la 6-désoxy-5,oxytétracycline (rendement de l'opération environ 50%).
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La 6-épi-6-désoay-5-oxytétrayline de l'opération pré- cédente est finalement purifiée en la dissolvant dans 1 ml d'éthanol et en y ajoutant 3 gouttes d'HC1 concentré. Elle cristallise sous forme de chlorhydrate pur dont l'analyse est :
Trouvé : C, 53,69; H, 5,81
Calculé: C, 53,86; H, 5,70
Ce produit essayé contre l'oxytétracycline sur les K.pneu- moniae accuse 1400 unités par milligramme.
EXEMPLE XXXIII.-
On introduit de l'hydrogène dans un appareil à hydrogénation normal contenant 10 g de chlorhydrate de 6-désoxy-6-déméthyl-
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6-méthy2ène-5-azcytétracycline, 150 ml de méthanol et 5 g de rhodium sur carbone à 5%. La pression est maintenue à 50 livres/pouce carré (3,5 kg/cm2) avec agitation à la température ambiante pendant 24 heures. Le catalyseur est alors filtré; le gâteau lavé avec du méthanol et les filtrats réunis sont évaporés à sec. Les solides séchés sont triturés dans de l'éther, filtrés et séchés à nouveau. Les solides résultants ont une activité biologique de 1345 unités par milligramme vis-à-vis de K.pneumoniae.
35 ml d'eau sont employés pour dissoudre 8,5 g du produit ci-dessus et le pH est ajusté à 6 avec de la triéthylamine,
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en ajoutant suffisamment de diilléthylformamide pour rraintenir les solides en solution. On met en suspension 2 kg de poudre de cellulose dans de l'eau saturée d'acétate d'éthyle et on verse le tout dans une colonne d'environ 9 cm de diamètre et d'une hauteur de
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0,9 m. La solution du produit est alors chromatographiée sur cette colonne, en éluant avec environ 12 litres d'eau saturée d'acétate d'éthyle. La première fraction contenant du produit recueillie sous la colonne fournit 1,85 g de 6-épi-6-désoxy-5- oxytétracycline. La fraction suivante contient 2,Og de 6-désoxy-
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6-démétbyl-6-méthylène-5-ozytétracycline.
La troisième fraction donne z8 g de 6-désoxy-5-oxytétracyclme.
EXEMPLE XXXIV.-
A une solution de 500 mg de chlorhydrate de 7-chloro-
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6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylèhe-5-oxytétracycline dans 25 ml de méthanol, on ajoute 500 mg de palladium sur carbone à 5%. La suspension est hydrogénée à la pression atmosphérique jusqu'à ce qu'il n'y ait plus d'absorption d'hydrogène. Le catalyseur est séparé par filtration et le filtrat est évaporé à sec in vacuo. Une chromatographie sur papier du résidu révèle de fortes concentrations de 6-
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épi-6-désoxy-5-oxytétracycline et 6-désoxy-5-OxYtétracycline avec des traces de produit de départ.
Le procédé du paragraphe précédent est répété en employant comme produit de départ les chlorhydrates des produits suivants :
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7-bromo-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthyléne-5-oxytétracycline 7-iodo-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylèhe-5-oxytétracycline 7-chloro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline pour obtenir des mélanges séparables des 7-déshalo-6-épi-6-désoxytétracyclines et 7-déshalo-6-désoxytétracycline correspondantes.
De la même façon, on réduit les chlorhydrates de 7-chloro-
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9-amino-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylène-5-oxytétracycline, 7-chloro- 9-acétylamino-6-àésoy-6-déméthyl-6-méthyléne-5-oxytétracyclme et 7chloro-9-amino-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracycline pour obtenir des mélanges séparables des 7-déshalo-9-substitués-6-épi-6désoxytétracycllnes et 7-déshalo-9-substitués-6-désoxytétracyclines.
De la même façon, les chlorhydrates de ?lla-dichloro-9-ni= tro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylénetétracycline et de 7-bromo-lla- chloro-9-nitro-6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracycline sont ré- duits en mélanges séparables de 9-amino-6-épi-désoxytétracycline et de 9-amino-6-désoxytétracycline.
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EXEMPLE XXXV.-
A une solution de 500 mg de chlorhydrate de 7-chloro-6- désoxy-6-d--'méthyl-6-méthYlène-5-oxytitracycline dans 25 ml de méthanol, on ajoute 500 mg de rhodium sur carbone 5%. La suspension est hydrogénée à une pression de 2.000 p.s.i. jusqu'à ce qu'une mole d'hydrogène soit absorbée. Le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat évaporé à sec in vacuo. Une chromatographie sur papier utilisant le système de solvants acétate d'éthyle-eau est employée pour isoler la 7-chloro-6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline.
EXEMPLE XXXVI.-
On sature en hydrogène une suspension de lg de dioxyde de platine dans 500 ml de méthanol. On y ajoute une solution de 15g
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de 9¯nitro-b-méthyléne-5-oxytétracycline dans 200 ml de méthanol et 1 ml d'acide chbrhydrique concentré. La suspension xst hydrogénée aux conditions atmosphériques jusqu'avec que 3 moles d'hydrogène aient été consommées. L'élimination du catalyseur par filtration et l'évaporation du filtrat donne un résidu qui est la 9-amino-6- méthylène-5-oxytétracycline.
EXEMPLE XXXVU:.-
On ajoute 500 mg de palladium sur carbone 5% à des solu-
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tions séparées de 500 mg de chlohydrate de lla-chlcro-6-désoxy-6- déméthyl-6-méthylènetétracycline et du dérivé lla-fluoro- correspondant dans 25 ml de méthanol. Chaque suspensbn est ensuite hydrogénée à la pression atmosphérique jusqu'à ce qu'une mole d'hydrogène ait été absorbée. Le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat évaporé à sec in vacuo . Les composés séparés sent
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respectivement la 6-désoxy-6-déméthyl-6-méthylènetétracycline et un mélange de lla-fluoro-6-désoxytétracycline et lla-fluoro-6-6pi-6- désoxytétracycline.
EXEMPLE XXXVIII. - A 50 g d'un mélange des produits lla-fluoro-6-désoxytétra-
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cycline et lla-fluoro-6-épi-6-déooxytétracycline de l'exemple XXXVII dissous dans 1,25 ml d'HCl aqueux 1%, on ajoute 30 g de zinc
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en poudre et le mélange est agité pendant 15 minutes à 20 C . Le zinc est éliminé par filtration et le produit est extrait du mélange réactionnel avec du butanol. Après éva;oration à sec, on obtient un mélange de 6-désoxytétracycline et de 6-épi-6-désoxytétracycline.
EXEMPLE XXXIX.-
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Sels obtenus ar addition d'acide de 6-é i-6-déao -c. tétrac cline La 6-épi-6-désoay-5-oaytétracycline est dissoute dans du méthanol contenant une quantité équimolaire d'acide chlorhydrique.
Le chlorhydrate est alors précipité par addition d'éther et est recueilli par filtration et séché. Le chlorhydrate est recristallisé dans le butanol.
De la même façon, d'autres sels obtenus par addition
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d'acide de la 6-épi-6-désoxY-5-OxYtétracycline sont préparés en utilisant, au lieu d'acide chlorhydrique, les acides sulfurique, nitrique, perchloricue, bromhydrique, phosphorique, fluorhydrique, p-toluènesulfonique, iodhydrique, tartrique, acétique, citrique, malique, benzoïque glycollique, gluconique, gulonique, succinique et sulfosalycilique.
On prépare aussi de la même façon les sels obtenus par addition d'acide des produits cités dans les exemples ci-dessous. Ces sels obtenus par addition d'acide qui ne sont pas acceptables du point de vue pharmaceutique, peuvent être employés de la façon habituelle pour la purification dans la préparation , soit des composés amphotères, soit de leurs sels obtenus par addition d'acide
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acceptables du point de vueipharmaceutique. De plus, les sels obtenus par addition d'acide inacceptables du point de vue pharmaceutique sont utiles en tant qu'intermédiaites dans la préparation d'autres produits de la présente invention comme on le verra dans les exemples ci-dessous.
EXEMPLE XL,- Sels métalliques de la 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline
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Le sel de sodium de la 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline est préparé en dissolvant le composé amphotère dans du méthanol conte-
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nant une quantité équimoléculaire d'hydroxyde de sodium et en évaporant le mélange résultant in vacuo. D'autres sels métalliques sont préparés de la même façon, parmi lesquels des sels de potassiun calcium, baryum, lithium et strontium.
Les complexes-sels métalliques de la 6-épi-6-désoxy-6-oxy- tétracycline sont préparés en la dissolvant dans un alcool aliphatique inférieur, de préférence, du méthanol et en la traitant avec une quantité équimoléculaire du sel métallique choisi, dissous de préférence dans l'alcool choisi. Les complexes-sels métalliques insolubles sont isolés par simple filtration. Cependant, de manière générale, la plupart d'entre eux sont solubles dans l'alcool et ils sont récupérés en évaporant le solvant ou en ajoutant un nonsolvant tel que l'éther diéthylique.
De cette manière, les complexes-sels métallique de la 6- épi-6-désoxy-5-oxytétracycline représentés principalement par des composés contenant le métal et la 6-épi-6-désoxytétracycline dans le rapport 1/1, sont préparés en employant les sels métalliques suivants: chlorure de calcium, chlorure de cobalt, sulfate de magnésium, chlorure de magnésium, chlorure stanneux, ch-orure de zinc, chlorure de cadmium, chlorure de baryum, nitrate d'argent, nitrate stanneux, nitrate de strontium, acétate de magnésium, chlorure de palladium, chlorure de magnanèse, chlorure de cérium, chlorure de titane, chlorure de platine, chlorure de vanadium, acétate de plomb, bromure stanneux sulfate de zinc, chlorure de chrome, et chlorure de nickel.
Et on prépare de la même façon également les complexessels des mêmes métaux des produits des exemples ci-dessous.
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EXI14PLg¯UI 2 - 6-é i-6-déso -Ila-ehloro- -o tétrac eline On ajoute 0,35 g de N-chlorosuccinimide à une solution froide et agitée de 1 g de 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline dans 15 ml de diméthoxyéthane. Après 20 minutes à 0-5 C, le produit est précipité par addition d'éther, filtré et lavé à l'éther.
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EXEMPLE XLII.- . 6-épi-6-désoxy-13a-fluoro-5-oxytétrac''ccline
Une suspension de 4,8 g .'le chlorhydrate de 6-épi-6-désoxy- 5-oxytétracycline dans 100 ml de méthanol est refroidie à 0 C tan@iis qu'on y fait passer un courant d'azote. On y ajoute 20 ml d'une solution normale de méthoxyde de sodium dans du méthanol et le nélange est saturé de fluorure de perchloryle. On dépose le mélange au réfrigérateur pendant 24 heures, temps au bout duquel les cristaux de chlorate du produit désiré se sont formés. Le filtrat donne encore un second jet de cristaux moins purs.
EXEMPLE XLV.-
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6¯éui-b-désox9-?-choro-5-oxsrtétacvcline (1) 1 g du produit de l'exemple XLIII est ajouté à 50 ml de méthanol contenant 100 mg de rhodium sur carbone 5%. Le mêange est soumis à une pression de 3 atmosphères d'hydrogène à une température de 32 C. L'hydrogénation est arrêtée lorsqu'il n'y a plus d'hydrogène absorbé ; le mélange est filtré et la solution résultante est évaporée à sec sous pression réduite. Le résidu est trituré dans 25 ml d'éther, filtré et séché, pour obtenir le produit désiré.
(2) Des quantités équivalenes de 6-épi-6-désoxy-7,lla-dichlo-
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ro-5-oxytétracycline, d'iodure de sodium et de poudre de zinc sont chauffées à reflux dans l'acétone pendant 30 minutes. Le mélange réactionnel est refroidi et concentré sous pression réduite pour obtenir le produit désiré.
(3) On ajoute 0,45 g d'hydrosulfite de sodium à une solution
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de 0 , 45 g de perchlorate de 6-épi-6-àésoxy-7,lla-dichloro-5-oxyté- tracycline et le mélange résultant est agité pendant 12 minutes. Le produit se sépare et est recueilli par filtration.
EXEMPLE XLVI.-
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6-é i-b-déso -7- hén lazo-lla-chloro- -o tétrac cline
Une quantité molaire d'aniline est dissoute dans de l'acide chlorhydrique AN, à raison de 20 ml par gramme d'aniline, et cettesoli tion est traitée avec un équivalent de nitrile de sodium à la tem-
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pérature de 0 C. La solution résultante de chlorure de benzène diazonium est mélangée à une température allant de 0 C à 20 C, avec une solution aqueuse d'un équivalent de 6-épi-6¯désoxy-llachloro-5-oxytétracycline et d'une quantité équivalente d'hydroxyde de sodium, cette solution contenant suffisamment de carbonate de sodium pour neutraliser l'excès d'acide chlorhydrique présent dans la solution d'aniline diazotée. Le pH de la solution résultante est de l'ordre de 8 à 10.
On continue l'agitation à 0 C pendant environ 2 heures, au cours desquelles la 6-épi-6-désoxy-7-phénylazolla-chloro-5-oxytétracycline se sépare. Ce produit est filtré, lavé et séché.
EXEMPLE XLVII.-
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6-épi-6-désoxy-7-amino-5-oxytétracycline
Une partie en poids de 6-épi-6-désoxy-7-phénylazo-lla- chloro-5-oxytétracycline est mélangée avec 20 parties en poids de méthanol et 1/5 de partie en poids de palladium sur carbone 5% (catalyseur d'hydrogénation) y est ajoutée. Le mélange est alors hydrogéné à 30-45 p.s.i. dans un appareil courant à 30 C usqu'à ce que l'absorption d'hydrogène césse. Le catalyseur est alors filtré et le filtrat évaporé à sec. Le résidu est un mélange d'aniline et
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de 6-épi-6.lésaxy-?-a.a:.nü-5-oxytétracycline. L'aniline est éliminée du résidu en le lavant à l'éther.
EXEMPLE XLVIII.-
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6-6pi-6-désoXV-7-.nl¯ro-5-oxytétracygline 4,58 g de 6-ôpi-6-désoxy-7-amino-5-oxytétracycline sont dissous dans 20 ml d'acide nitrique 6N, à 0 C, et trait4s par 0,7 g de nitrite de sodium. On ajoute alors à cette solution une suspension d'oxyde de cuivre dans de l'eau, préparée par réduction d'une solution aqueuse de sulfate de cuivre (environ 5 g dans 50 ml d'eau) par une solution alcaline de glucose suivie d'une neutralisation par de l'acide acétique. Une réaction a lieu, au cours de laquelle de l'azote se dégage. Le mélange est fortement acidifié pour décom-
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poser les complexes du cuivre et la 6-épi-6-désoxy-7-nitro-5-oxy-
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tétracycline est extraite de la solution avec de la méthylisobutylcétone.
Ce composé peut aussi être préparé, en même temps que
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la 6-bpi-6-désoxy-9-nitro-5-oxytêtracycline par nitration directe de la 6-épi-6-désoxy-5-owtétrac îine. En pratique, on disscout 0,96 g de chlorhydrate de¯¯6-épi-6-désoxy-5-ox,; tétracyline à 0-5 C dans 10 ml d'acide sulfuricue concentré puis on traite goutte à goutte par 1,4 ml d'une solution 10:1 d'acide sulfurique concentré et d'acide nitrique 70%, en agitant et en maintenant la même tempé- rature pendant une durée de 15 minutes. La solution est alors ver-
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sée dans 400 ml d'éther anhydre et les 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycli. nes nitrées précipitent sous forme de leur sulfate acide. Le précipité est filtré, lavé et séché.
Ce produit brut de nitration est recristal. lisé dans 5 ml environ de méthanol et donne un mélange de 7-nitro-
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et 9-nitro-6-épi-6-d6soXY-5-oxytétracycline. Le mélange est séparé par chromatographie de partage sur une colonne avec le syste t,'luène-pyridine-eau. Comme le composé 7-nitro est le moins polaire, il est élue le premier.
La technique du diazonium présente l'avantage de donner le dérivé 7-nitro seul et d'éviter cette séparation.
EXEMPLE XLIX. -
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6i-6-désoxy-?-acétv2amino-5-o¯xtétracvline , On ajoute 20 ml d'anhydride acétique ¯¯ une solution de 4,58 g de 6-épi-6-désoxy-7-aràno-5-oxytétracycline dans 200 ml de tétrahydrofurane et 200 ml de méthanol sec, et le mélange est agité pendant 45 minutes à la température ambiante. Le mélange est alors débarrassé de la plus grande partie du solvant et versé goutte à goutte dans de l'éther sec, filtré et le gâteau solide est retrituré dans de l'éther, filtré et séché pour obtenir le produit brut. Le produit brut est chromatographié sur une colonne de cellulose et le produit purifié est obtenu dans la fraction principale.
En employant le même procédé, on a préparé les produits suivants :
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0...01;' 1.-t>- t$O" ) ('."'" 1':)!",,\y 1 &.111 n..'- II; ...t!:.ty tÁ t.rac)' cl1n- Ó..Áp!-o-d,:s.)r:y.."1.but'1 ry ,,'l'1o--I)t".cylln 6.. 6;11. ..d S.:J r:y- ?-prop1'ny la ltlno-li..ot8 tl"aCTclln. b;:i-t5-â,'soxy-'wt'Lé3aatixo.-oxyrttraayclW e KOEùa,X1,.b.,-..
¯..", 3. .,i"".."'.ic3 ' ' TS'al On ajout* 100 18& de nitrate de .'fotass1\.1l .\ <<n "\.;':':u'H. de 1?G 1ft de 6-3pi-6-d6soXr-o3-oxytétracyclin* dana 5,0 ml décide flurrir1('Hle liquida anhyttre. Le ;,±lange est Aclt4 . 15.C rendant '40 1!t1nl1t.. t '-nIP11 t 8vapor4 à sec. 1... :-Lidu est trituré d'ml de l'éther et n.l..tré pour obtenir lo produit brut qui est tritura dans de ...'aclde chlorhydrtouf &011..\1X À 5'< et ensuit. extrait avec du OO1;8no1. L'extrait butlhlo11que est concentre pour obtenir le produit ('ui est tecPiD%JliS4 dans de l'eau et de l'acide chlorhydrique.
Lm1 LI.= -ci-b- é,c.:r>--.r -Qçi'ttracvci3n On a,; ou te en agitant, à 20oC, .1, 3 g de zinc en poudre à une luH-'m de 2,5 5 g de 6-<!pi-6-deaoxy-9-nitro-5'-oxyt4tracyclitie dans 50 1 à'eal et 2 al d'HCl c-'ncentI 4. Aprea 15 minutes, le mélange est filtré, le pli est ajuste à 2,5 pt le élange est extrait avec au butanol. L'extrait butanG11que eat concentra et donne le produit i4stPé sous for-né de dlchlorhydrate.
FPLF LI 6-ti-6-âs,z -' c- c e
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20 ml diacide acétylformique sont ajoutés, à la tempé-
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rature du bain de glace, à une solution e z0 g de 6-épi-6¯dèsoxy- ' 1ino-5-oxytétracycline dans 40 mi da Pl1.,Une sëche .Le mélange est 1 à cette température pendant 15 minutes puis versé goutte A goutte ? 1 litre d'éther sec. Le produit est filtré, retrituré dans due l' éther r refiltré. Le produit brut est mis en suspension dans ir 'Tl d'eau réa'Ntjnt une solution de pH 4,2 et agité pendant 10 minutes pour ,' aroupaaents 0-foryrle. Le >H du mélange est Rlr ajusta 55 5 t solution est, congela et s4chée
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pour donner :<* produit brut qui est chromatographip r une colonne de cellulose et l'on obtient le produit purifié dans 1<: fraction
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principale.
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1) ,; 1ItICO façon, les produits suivants ont été prépara : 6-6pi-6-désoxy-9-acéùyInmo-5-oxyté%raoyclin* -pi-t-àsoxr..9-butrryiamiao-5 oxtrracTaiae ô-n; -6-désary--proay2,antno5-axyttracycline 6-'pi-6-désaxy-9-vaiôry1-o-5-aqù qam* EXEMPL! MH.- 6-ui-6oaoxv-<)-chioro-5-ûTVt<tMColin< A une solution, refroidie ctana un bain de Ilace, de 1,04. C de corhyrate da b-âpi-b-déso-9-ato-j-osftilqtclaae dana 5 al d'eau et 2 ml d'aclete ehtorldriqte ocra08Vi. on ajout. , dessous de la surface du l1qu1de. 150 as 4e ni%P1%O de 80àiUQ dans 2 mil d'eau, 1rès avoir agi%4 ,...&an' 20 ir"les \Ml ajoute 50 mg d'urne pour détruire 1'exo%s 4"014. ni%ronX. On ajoute du chlorure cuivreux/HCl et le m41ange est ttit la température ambiante pendant 5 minutes. Il est ..on 111. au bain d'eau à *!0*C pendant 20 minutes, refroidi, et extrait .....0 du butanol normal.
L'extrait est séché sur sulfate dar 8Od1- et drssspoi â sed.
J..8 chlorure cuivreux sst pNporé en aJoutant une solution chaude de 600 mg de sulfate de cuivra pentab7dra"..t 160 1111 de chlorure de sodium dans 2 ml d'ean à 160 .. de 1d.n.lf1te de sodium dans 1,7 ml d'hydroxyde de sodium 1.lN. Le melan<e est refroidi et le solide est lavé avec 1 ml d'eau. Il est alors dissous dans 1 ml
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d'HCl concentré et employé ci-dessus.
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Le p-toluènesulfonate cristallin est prépaa4 pat la
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technique habituelle.
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E.1CEMP lJE LIV.- 7=ChIOrO-9-ni%ro-6-éPi-4ôsoxY-5-oxvtétrjczcime On ajoute 220 g de gN03 à icho solution de 1g de la base 7-chloro-6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline dans 8 ml d'acide fluorhydrique liquide anhydre à 0 C. Le mélange est agité pendant 30 minutes
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à 0 C et l'acide fluorhydrique est chassé par un courant d'azote.
Le résidu est trituré dans de l'éther sec, filtré et séché poia r obtenir le produit désiré.
EXEMPLE LV.-
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9-ni v- a-d c o -.6- 1-6-déso -o tétra cline 100 mg de KNO3 sont ajoutés à une-solution de 600 mg de perchlorate de 7ella-dichloro-6-6pi-6-désoxy-5-ozytétracycline dans 1,5 ml d'acide fluorhydrique liquide anhydre. Le mélange est agité à 15 C pendant 30 minutes et ensuite évaporé à sec. Le résidu est trituré dans de l'éther et filtré pour obtenir le produit brut qui est trituré dans HCl aqueux 5% et extrait avec du butanol.
L'extrait butanolique est concentré et l'on obtient le produit qui est recristallisé dans de l'eau et de l'acide chlorhydrique.
EXEMPLE LVI. -
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9 -é -f-déso tétrac eline Une solution de 5 g de lla-chloro-6-épi-6-désoxy-5-oxy- tétracycline dans 10 ml d'acide fluorhydrique anhydre est laissée au repos pendant 3 1/2 heures, après quoi on y ajoute en agitant 1,2 g de KNO3. L'agitation est poursuivie pendant 1 heure encore à la température du bain de glace et le mélange est versé dans 200 ml d'éther sec. Le précipité formé est filtré, lavé avec de
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l'ether pour oben1 le produit brut. lIJ'JDI'P1.B g L ..g,K-t.rcLb-ui-6-riéc,x 5-Q.xS'tétrac9cline On ajoute, en agibcnt à 20 C, 1,3 g de zinc en poudre !mie scJ!uti"n do 1,4/. g de 7-càioro-9-nitro-6-6pi-6-désoxy-5oIQ"t4trJIttc;'lue dissous dans 50 ml d'eau et 2 ml d'HCl concentré.
Aprèn 15 minutes, le mélange est filré le pH ajusté à 2,5 et le ntlat"t'. 38 *7t"it 5 fois avec :30 l1Ù. de butanol par extraction.
Les rrc;cnits butanolique réunis donnent après concentration le 1iJ'e i dési rd sous forme de dichlorhydrate.
On obtient le même produit par réductiü..1. avec de l'hydreaulfite de sodiim "queux de la 3-nl.tro-'7,lla-dichlc.o-6-épi-6d6svxy--oxydtracyc:l ine.
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EXEMPLE LVIII.-
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'7.,lla-dichloro-9-nit o-6-é i-6-déso -o tétrac cline On dissout 1 g de chlorhydrate de 7,lla-dichloro-6-6pi- 6-désoxy-5-oxytétracycline-dans 20 ml d'acide acétique et on ajoute 1 ml d'HN03 concentré. On laisse reposer le mélange pendant 12 heures et ensuite on le concentre jusqu'à 1/4 de son volume initial. On l'ajoute goûte à goutte à 200 ml d'éther en agitant à la température du bain de glace. On continue à agiter pendant 3 heures et on récupère ensuite le solide par filtration. Le solide est trituré plusieurs fois dans l'éther et ensuite séché pour obtenir le produit sous forme de chlorhydrate.
En employant le même procédé, on a obtenu les produits suivants à partir des composés de départ correspondants ;
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7-ehloro-lla-fluoro-9-nitro-6-épi-6-désoxY-5-oxytétracycline 7-brano-lla-chloro-9-nitro-6-épi-6-désc:xy-5-oxytétracycline 7=iodo-lla-fluoro-9-nitro-6-épi-6-désoxy-5-oa3'tétracycline Ces produits sont convertis respectivement en 7-ehlro-, 7-bromo-, et 7-iodo-9-amino-6-6pi-6-désoxy-5-OxYtétracyclines par les procédés de réduction des exemples précédents. EXEMPLE LIX.-
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fo 1 n - -c oro-6- i-6-déso -o tétracvcline A une solution de 4,5 g de la base 9-amino-7-chloro-6- épi-6-désoxy-5-oxytétracycline dans 40 ml de pyridine sèche, on ajoute 20 ml d'acide acétylformique à la température du bain de glace.
Le mélange est agité pendant 15 minues à cette température, puis ajouté goutteà goutte à 1 litre d'éther sec. Le produit est filtré, trituré dans l'éther et à nouveau trituré. Le produit brut est ensuite suspendu dans 100 ml d'eau réalisant une solution de pH 4,2 et agité pendant 10 minutes pour hydrolyser les groupements C-formyle. Le pH du mélange est ensuite ajusté à 5,5 et la solution est congelée et séchée pour obtenir un produit brut qui est chromatographié sur une colonne de cellulose pour obtenir le produit purifié dans la fraction principale.
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EXEMPLE LX. -
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-acétvlamino-7-chloro-b-i-b-desoxy- -trr=---cvçline A une solution de ±,2 g de la base ï-c.hloro- -a:nir:-é- épi-6-désoxy-5-oxytétracycline dans 200 mi detéti'xt;ydr7iuran-ne sec et 200 ml de méthanol sec, on ajoute 20 wl d' anhydrl<1t-' ac4tiq e et le mélange est agité pendant 45 minutes à la températur- a,nblante. Le mélange est ensuite débarrassé de la @lus grande partie du solvant et versé dans de l'éther sec, filtré et le gâteau solide est retrituré dans l'éther, filtré et séché pour obtenir le produit brut. Le produit brut est chromatographié comme dans l'exemple LIX our obtenir le produit purifié dans la fraction -rincipale.
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En utilisant les procédés de l'exemple LIX set de l'E'x'>'1le présent, on obtient les produits sut8nts : 9-butyamino-?-chloro-6-ép.b-dés ,xy-5-oxyté tracy cl ine 9-propionylamino-7-chloro-6épi-6-désoxy-5-oxytétraglycline 9-valéryaminO:7-chloro-6-épi-6-désoXY-5-oxytétracycline EXE1P LE LXI.'7-Une suspension de 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline est préparée avec les compositions suivantes antibiotique 31,42 g sorbitol aqueux 70% 714,29 g glycérine U.S.P. 185,35 g gomme acacia (solution 10%) 100 ml pyrrolidone de polyvinyle 0,5 g parahydroxybenzoate de butyle (préservatif) 0,172g parahydroxybenzoate de propyle (préservatif) 0,094g eau distillée, pour obtenir 1 litre A cette suspension on peut ajouter au choix différents agents édulcolorants et aromatisants, de même que des colorants acceptables.
La suspension contient approximativement 25 mg d'activité antibiotique par litre.
EXEMPLE LXII,-
Une suspension de 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracycline est
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préparée avec les compositions suivantes : antibiotique 30,22 g chlorure de magnésium hexahydratë 12,36 g
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wonoéthanolamine 8,85 ml propylène glycol 376 g ea 94 ml
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s 1 a une concentration de 50 mg/:nl et conviert pour l'acLnin -1. F - ra tion -ntArAle et sp4etaleinent oour yadninistration cintramusculaire.
E,>::;<:;1t' J., E .weI H . - Une base de compr qat préparée en inélangearit les ingrédients suivants : dansdes pr@ criions indiquées en poids: sucrose U.S.P. 80,3
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a'!11don de tapioca . 13, 2 stéarate de magnésium 6,5 A cette base, on mélange surf1sa!n.!n'nt de 6-Pi-h¯.P.S, -,xyttracycii.ne pour obtenir des comprLI1Ps contenant ?5, 100 et 25<))7 d'ingrédients actifs.
EXEMPLE LXIV,-
On prépare un mélange contenant les ingrédlpnts suivants : car@onate de calcium U.S.p. 17,6 g phosphate dicalcique 18,8
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trisilic>x:.e duo magnésium U.S.P. 5,2 lactone U.@.@. 5,2
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amidon de POltU;-,O'? de terre 5,2 stéarate de magnés@um A 0,8 stéarate de magnésium B 0,35
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tan ajouté à ce mélange zfisa'7ment de 6-épi-6-dcsox,-h-oxftcira- cycline pour obtenir des essuies contenant 25, 100 et 250 mg d'ingrédients actifs. EXEMPLE LXV. -
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1000 g de 6-épi-6-desoxy-f:-oxytetracycline sont intimement mélangés et broyés avec 2500 g ,.1 'tcoroate de 900i1'11.
Le mélange broyé et sec est vers dans des t'l.:i,as, st4rilLs±> avec de
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l'oxyde d'étt1':,lr..ne et les files sent 5('ell."'t>s 'ho fa.on stérile.
Pour i'ad!....istr3tion iatravettneuse, ou aJout= 3ufr1q'W1!)".l?nt d'eau aux fioles WH..." obtenir une solution contenant 0 mg f:tnr= il.errt actif par .Il.
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REVEND r C A T I 0 ii S . ------------------------------ 1.- Procédé pour la préparation d'une 6-désoxytétracyclinc, caractérisé en ce qu'on hydrogène un composa ayant la formule I ou II donnée ci-dessus, en présence d'un catalyseur de -étal noble.
2.- Procédé pour la production d'un mélange d'une 6-
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désorr-5-oxytétracycline et d'une 6-épi-6-désoxy-5-oxytétracyc;ine, caractérisa en ce qu'on hydrogène un composé ayant la formule I ou II donné::' ci-dessus, où ia substance Y est OH, en présence d'un catalyseur de métal noble.