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.i'.-' ' - - - .', ":r.\'.- "--"",,-,¯:,)'f:,'.'..<:,,..-- S --;-' :1,-..:..;;:!'%; 'o4d4 :de P1'04\1Otn),\t"!!1f, .. ',','''' ", ,;,'" ,"", <',ft:',', ?r-:
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,/ ... ','",. Là prisent* Invention Concerne perfectionnement *u procédé" de production de e.-urc tbu 0 r txenta4tiaa,..; ,..
Il est connu d'obtenir du p -carotène par fermentation submergé* de 11'fàQTft du genre <3to<nepho;e<. ou B<t]L'Mt.
. Diverses publication* ont décrit lc<t'Mnditiont favorisant la. pro- ta1 lau l-carotène. BARNETTE et coll, /science, Ï2±, 141 (1956)J7 ' ont montré que production du -carotène <Ntioy<< pty 1 culture smt:l.taée des formes opposées d'une même espèce. Cette étude <a ensuite été étendue à la culture ds 'oa;ss o3'icsée'àtep.. ces différentes Zoo 13Fd.t aa3.a, j&, U9 (1957)7. Les
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aUiwXd.ou1 tur.OJ1;' 4al. été n8,e p.,:&4.'ÎlQlîtr4'UCI
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, l'.a4'U..,f'ûn.. t1èr..oub1d1'C)l1s'&'" ,'UJ..fI..,4i'tal.., d'Agent* t<m$i&-<.ctifed'amti03tydtnt< et dpal 6i8S*nt8 Augmentait
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le ren4e#ent en p-oirotènt 0, .#1A>.WHil.1! oollê- 11 1 .1i1,1 Yocdo #-t
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i, 543 (1953)J7 #. CIRGLKR et eolVApp 940rob# It 94 et 98 (1959)J.
Enfin KAcnnEt et COU4, Il. M. Ohm. 80lh 2i# 3456 (1952)1 avaient montrâ quo 1 Addition -le P-Icmont à la outure
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statique d'un Phyoomy*4s atigmentait tortuent la tomation du ,...carol
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tènes au détriment d'autres pigments carot8notde.. 1lfDIRSOI et colle ont note 1* juta* effet un culture agite** avec des B14xeelea et Choantphora (loo. 01t.). Ce précurseur peut ètre r plao4 par d'iat- très produit* tels que 1* tr1a4th11-2#2,' cyclohezanone (d8lande frangaumpv 888,857 déposée le 22.2.62).
XI a été trouva et e* t ce qui fait l'objet de la pré* tente invention, que l'Addition aux milieux de culture de certains -autres produit! organiques oxygéné* entraîne une augmentation nota- ble du taux de production de ss-carotène.
Ces produits organiques peuvent être :
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1- ... des composés ayant une fonction u1d.} 0,..i1-41rll - soit des uide. de fo roule gèn4r&le
RCONR1R2 (I) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, un radical alooyle ayant au plus 6 Atomes de carbone,, un radical -aryle ou Aralcoyle et R1 et R2, semblables ou différent., représentent chacun un atome
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d'hydrogène ou un 1'.ad1cal .alc011e ayant au plus 4 atome de carbone, soit des laides d'acides cUC&rbox;
r11que. de formule générale
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z soit des lactansa de tQnIU1. $4niu±L*
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dans lsquel.es est un radical b1(U.'OO&r\>On' û1phaUqut 4201&1.'
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-ayant au plut 8 *te* t4* carbone et X un atoas d'hydrogène ou d'halogène qu un Mdiotl 4<3.coyle ou hydroxyalcoyle ayant u Baiiwum #4 $towew de oarbon , #";;#; .'.' .#.##;;iç!v-i;f>';";. ";.-..-,.., -;:>:i>:40-:ï:;;;;;:.V des dea diMylMM (XV ,40!)tJ.:.'ùX 41097le contiennent cbacmn au 1X:t,,J' "",.' ,f:.:roi':::',:}7i!';:::',;:::(:r\ .,,' ces aubttaaoex organique pouvant \'tr 43""f milieu '! ,'##,#" "-J*... "#..' "'' ';
# ".;# -<;, .i-..':' #'#;#;# # ,# de culture en quantités jdlant de 0,1 à 10 j/litre, >au départ ou m court de fermentation, en une QU,pl,si'*uro foii 1>8 pr4sdrenoe,, on emploie une quantité" comprise entre 0*5 et 2 VHtr ci8...:eo.PO"I, 1 ou IV ou 2 à i/lttre des coapo<<s 11 ou 0,5 à 6 g/litre dei 'oom posés III ou d'un mélange de O8I,411:tél't. composas et ett8tue l'addition en début de culture. QueJspue toient la quantité ajoutée
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et 1* =ment d'addition de ce* produits, il contient de poursuivre
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la culture pendant 6 à 10 jouye <pï$ren<Kmenoeman pour obtenir la production ux1male de -cu01;,n6.
Le milieu de culture peut
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varier mais contient essentiellement une source de carbone et une
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sourc. dat aasïra3lublast: .dea ,.1éat. minimaux -f%. 4iraatull6m at
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des facteur de croissance, â.G03Q1t,,s; ift ..,,' elt.4. ; .
-motifs, des $iâ 4 4 . 1 rri1 '".t':'. 'rf,.': H,ßr,(" ,';H .. : f 41r ,, Comme source de aar'boi0.e .ix.a.b3.e.-..atfu'tliser des hydrates de carbone tels que le glucose, les daei l,'.am9.doa ou des huilée animales ou Y484tazto comme l'huile de i*rd ou l'huile de soja ou de graine de coton', 1*4'sources '=v abl4j# 'a *sot
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a.,1DdJable sont extrêmement Y.;14. ,t <tll<9<' peur nt 4txt à i <Mb ttn4
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:0.' chimiques ou des sub contenant ,principalement X*4Utot sous forme protidique tell * que cafliine/ lactalbumine, gluten et leurs hydxolyaats4 -de aoj*r d'<!M.d<, <xtMtjL 4e Jnu1'" distiller*1 lublw.com-ept.'''' ."..'''''.- ,Parmi les élément. minéraux ajoutas, <tMt<w pouvant :V.
.&'fo1r un effet tampon ou neutralisant comte le 'pbo.m.tef".alcalinà 1 !##'. # ''"'*' '<''#' '-.y' # .'#>'# vv :;';'; #'v.-Vi ?i-'i'C: :#"#' ,' 'ù/ , '.#:,' ou &lc&l1no-terreux #.'.' " , # #- I .' > |p; #;-o;;',;v:1;;1à;ïi.V* -#* -*: # .- :::- V-'- -:;-.''."- 'f *'.##-.- ' ï"."' ..ÎS %Vv.f-' f ;..
Parmi les facteur., do les plu t Cúe..èÓ t':' , employés est la vitamine Bi ou thiame. Parmi JLe antioxydants on
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peut citer la 1 -à ny1 .: . dimalne, 1* trlMittiyl- 2,2 ithoiy-6 dhrdal, àai,l.'..,1:,..'.,,"Ls
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sorbique. Les agents tenuto-4o#'to' sont dt préférence du nenre non- ionique tels que des dériver du #0 des aid' g'lts a des produits à base -de condensât dfo;cde dethylenct les pidssiSMnts les plus habitu4Uoment'tuplovda' sont Itmidon 1 # utrboxyaithylcellulos , la glOBt*,1-;.1';;
' '##"''' '.#",' #*'#'#'.''# -'vl' Comme précurseur on peut utiliser un ou plusieurs ooawpo* ses du groupe comprenant la 0-ionone, la tintbtby12,2,b ro9otr none et les dérives de cette cétone tels que la smi.csrbacana l'oxime ou 1-1hyclrazonae Le milieu de culture ainsi prépare est ensuite enseaenc4 par une culture des formes,+ et # de Blakealea frispora (IMM 2456 et 2457) .. , , . , , .-.##-. -.;
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L'augmentation du taux d production de 0-carotêne e pré]
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sana$ d'un composé selon l'invention est plus ou oolns importante suivant les conditions opér41.r" < ,elle .,..r.tJ'o,:\v8 cependant, que l'on Ajoute ou non des .ant1-oqdalj8 ,o4. précurseur? -aux ' milieux de culture. /-.# ;\"l{v '#'#-.;. #;
' #'#'/-'# ;'"- ' "#';]'-\ bzz Les exemples sui-Mnts 4<mnli. titre non limitatif, ':,::< montrent comment l'invention peut %t?µ Mise an p;cat1q.'" / ;f' ;#'#' #'./-:#-# -'.X'fï ;' .:.v-'v..v'-'.-..;. ; ;--. >#-#,##<>## V,X3;'--r' :0-fi 'E 1..." ,. ,"', , . "':'i;Y ',.;}.;.',;;"\J5i:;,} t .*, .-; ,;on pr4pare un m.i.a.4e¯!19:x!- 4 ...3 7.. ::.;¯';â':: :'!" :.:-'.''""-..',...9 ...-. - . . ; . ,.. ..: "::;'>'1;;,:;;ttJ::ti²"'1 ;##'; .' '##:.';# v>r: 500 0143 d'eau Cautâxllt.'.q dr(' d3stila.rc WQ'.,1;',' ';' '.''..' "I;:"¯ 77 (,,",".-"'" '1.I,''¯";:'.:",,:(,,!-'
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/'sont portée à l'ébullition '4.\\;t'.nt,"5,:ut..,,'.
J.PQ' refroidi iet
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' on ajoute r #',, ::\'--:::y,Y/'y\Jr--"'-':\t!:X:: . .Am1dQn de =8.1, , ;vS-'- - #/#-'-#i&i'p Huile de. 803.. ". " ,,',:,>",:;1,;:.;...;:.,O (14':,;;' ","".':'{r;'it/\" ç." '' Huile de coton" "'/... 'h" 3a 'ar.:AV: p m-U: Tween 80 .. :ï.
Extraît de lewr ,:".":,,,;,t"'<"," 't"",'".' ;-! Phosphate 17. ;ïi ,0,5 . :::'::;':;"'ft'i" ' "';;, .#;-# Chloztydrate de thiealnf *M$W .tff:'O,01 lià
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,', . r : y::"; É-raoïplrr r .; ,-jw;.;-"¯x.al=F ... .' ;f,;.r,,j '. é'1')\l..t.;...: - c,. ¯ ''..-.",.'.'...; .<'- '' I ,-' '11.r.' t,x,!â' 4'J ;;':1 J." .4'1r1....,., de 300 e !$4plia4 'p8Q4anti'ao, ¯it.,"UO.J-'R'J:t4f..:, cwditMK&t < .44OUt* 0 t4 *tout doà4 oMqu' t1oi." og37 4i,.' ,'::.,,?: ,;'-; On prépare de la mont on un .u1'" #-.iesil iff'| ft: .j aat'.-''teoar'=,l, J.' 4,' ,vi,'';'t.bTl ,,(.... :",\', ,:,,,'/;''......:\ ,ItKâ !,!8!!!! . ßc;V;yprç'ee,i< w¯Y tol'll8ll14. Ift,X.,,), 'r';'\'6 ...\;.': ";,t,,i;';';., ',' " fin #rv , .'r F..¯ 1 TS4TTR ^iT T..nY.(P7'1 aw3l' '.!'0['.''"'-- -! # --1 ' 'é'ÇtI.",,,..fl.q3,.
Mt<KH<t *V . ' '',; : ' ';u.itu1'..aJ.,' qontenAnt ;## 4 et,- 4, 1* ioucht <'. :-;r ';'] Blak.J1,. trtopora (8RBX, 2456 et 1' 47 et# 4#4,% r,7-r, La'4- :t101.. ont n uit p404. t,1tab t$9R Mtt&tj.v to" J l v 1 ,t I 220 t/miQ dani un o.7l.,p",Jr. d' 1bat1oU chaque o3. fult t.rt9oit.i|4ç it o < 4t tro3. Ï'M cultures sont pqr'!1""d .t.tp"'.\1p¯t J004r da. plut. Au 1!.,', temps ',4UO, 4e p-oarq.t n* !f::,;H le dani toutes les ',a.as. :. 7:.'¯:: : -f,- -ï ,th t' \>J'\1 Y ' 7 '-,. '# lit 40..&. ite -4rtru <t .ttt9.1;4,' Mit 1 1.
JI1a.l1, est iapara par tUt1\l.qpA ,,, PM' de l'eau, puis eclvê pendant une nuit à 3J, Mua rida. tr,aixi lM t eau1 t, ex- trait par do .xisrrnr. On s4p*r J8 ,;ro11.:' ,4'., ,r...o.8.,t4nol- des pr4sante r une chmmatoïn" d :Piqtr4l ur <luadw. Les tract4ons 4"lut1on contenant le J-c*rot4ne sont témîts et diodes ,,p.otrophotoútr1qUfII1t par rappoxt à un ,401w1WJ.Q1 pur de 11- .....n8" !.':..,. ' '..'...' + \ '1' F.. $## .r4 4t||f. ony4A 4t4l. obt8!1U' ;;',",,' <:,{'" f' JW.1eu.4 42' -Îl '!1.:::', "?":,V;::,;,", ..1 -' , .... ''I",,,;; ,.J. :fi.\r:'.>1 ";f lie$ r'ia i " ¯ r ' a,.'jF, ;.,, ",v , ; ,. , , : , '1' ','1 ,,\ ');., R'.. ,';1"""''' IIIt-: j;èn, ,:,,',:h'';',,;,\,,,',:,: \".... II } . f' l ,', ,.. ';..1' =".. "'}, ' r'\' *.:t.
1I!'I"W'C)T.1l ,. "" -', ' "." ; 'l', ..,.. ,<'.. ' . ,', " , Ji( 'v' ,,,.'1::,1<, ." ,J':.",] .i, i '1/"\; ri ,1..ilt,' F r. I ,g, 1! ,. 11;1.i t dut , "ca;.w 1 lâs Jours do 44ariteni .... l'u¯pl 3. on ajoute stérilement 4&n. chaque f19t!, µ0 I 4. triutt,2,, cYaiah,eranana ('MC3) ta solution dan 0,1 ÇA3 de
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P étroit. ''O.t\,dUon l',.tur.. sont p<MMai.M 4tn$ 1..."..ond1t1on.'ci. vt.I4MbU', fit 4'.a.1t&UoQ plD4a .
Jour déplue , ' En le p-CârQfe*n coaae dans 1 tapit DU 1'' :,. Óu18 que les produatloni Qbt nu sont lot =Ivjmtts t ' ' f A, .... 'K111eu " ... r .... ,1' + (11I#) J... ... lau/1 ""''' xiiie B' (aveu + (11IQI> a '50 -Ill 1, .t,:, Lot milieux A et B Sont prîparâs et ent no4i M' f dan à 10 ex' "Pl* 1. apr bo'â ours d'Incubation dans les oonditlon décrites à <.x<otplo 1 on &out..urU..ent dans chaque t lo 30 w){ de P-ionout en solution dans 0,5 ca-7 dé pétrole* Âprbu o tt addition Ion cultures sont poursuivies dans Ion 1111a., condition 4.. température et d'agitation pendant 8 jours de plus* " '\:'1i1 donnt '11' $-carotène eoscat dans l'u-pll 1. on N1 ),< que le production obtenues sont les suivant* t Kili'tU, .1 + P-lonont s '170 -,Il KiliM B (avec D.II,,'.) ... '-10110n. s 885 .&/1 On prépare un milieu C come Il * été dit pour la aU1.
A à Itex ple 1 *"a après .t4r111aaUou et retmidlitumt on rM... place l'addition de pétrole par un addition, dent abaque ttalit de 0,5 ça3 d'un. solution .taril. de \r1Htb,y1-2,2,4 é\ïMq-6 41bJ4fO" , 1,2 quinoléine à 1% dans du pétrolt.
On pr<<pM< <g<l<a<mt un II1l1eu Dg comme il a été dit pour le milieu à à 1-44xemple 1 la au .Joutant, &1'" 1'u.14on, les bulles et les 4utres constituant du atilouj, 2 g/1 de d1útb11;" tormu1d.. Après Stérilisation "'1".('1"01cl1".801; on ajoute, dans chaque fiole, 0*5 08' d'une solution et4rne de tr1IIétb11'"'12,Z,,4 '1i;.
<<thoxy"6 dïhydro-1,92 quinoléine à 1% dans du pétrole.
Lot ttilieux C et 12 ont famite tn..8t104.. leu ou1'; tures sont développées coaae il tot dit à l'exemple 1. Après 2 jouis d'incubation chaque fiole 4# oultur8 reçoit stérilement 0#5 a3 d.
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pétrole Apres cette addition les cuitares sont pourlU1Y1e.
dans les feues conditions de température et d'agitation pendant 8 Jours de , plus
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Loo productions de p -carotène obtenues sont les otdvxmtws Xtlieu 0 MO ag/1 S3#MPLS 5.* UWILE âge {#es 1li11eux C et Dg sont prép*r4 *t *nous $noie 0=0 11
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ia 4 té 41 t à 18 exmpl 0 4, Aprfct 2 jour* d'Incubation, dans les conditions décri à 3.'<x<ap].< 1, chaque flole de culture reçoit otârllmont 50 xt ai
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tr18'tb11-2,2..6 eyelohexanone (mica) en solution dant 0,5 car do pétrole.
Les cultures sont encore poursuivies pendant $ jours de plus* Les productions de ss-carotène obtenues sont les suivantes Milieu C + (TMCH) 650 mg/l
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Milieu D2 (avec D.M.?*) + ('0!Ca) 840 . ,,, # EXEMPLE <, *""*- ' On prépare le milieu 0 et le milieu 1'.2 COU, il a 4tî dit à l'exemple 4. On prépare de même un milieu D1 et un milieu D4 comme il a été dit pour le milieu A à l'exemple 1 mais en ajoutant, avec l' ;amidon, les huiles et les autres constituants du milieu,
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respectivement 1 et 4 g/1 de d1m4th11tormam1de.
Apres stérilisation et refroidissement on ajoute encore dans chaque fiole 0,5 car d'une
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solution stérile de tr:1moth11-2,2,4 éthoxy-6 dih14ro..l,.2 quino141ne à 1% dans du pétrole,
Les milieux C,D1, D2, D4 sont ensemencés comme il a été dit à l'exemple 1. Après 2 jours d'incubation dans les conditions ;. décrites à l'exemple 1, chaque fiole de culture reçoit stérilement
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50 as de p'-ionone en solution dans 011$ car de pétrole. Après cette addition les cultures sont poursuives, dans les mêmes conditions de température et d'agitation pendant 8 jours de plus.
Les productions de ss-carotène obtenues sont les suivan-
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tes :
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Milieu C + 3-1onone . .1,r0, g/ .
Milieu D (avec D.M,F,) # .-oro l2.2O arl1 , , Milieu D2 (avec D.K.,.) + J..1QMnl 1275 ./1 r' z ," Milieu D4 (avec D.. ". t J-ionone i 1265 an/1 r y o - fr EXEMPLE 7. - On prépare un milieu a coasse il * été dit pour le milieu
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Bzz l'exemple 1 Mit en ajoutant avec ,'si.don les balles et les autres constituants du milieu, 100 -1/1 de . ,1' -<UpbéQ'lp..raphlnr. lène dUm1ne (DPPD). Après stérilisation et refroidissent cm tjou.1 te stérilement, dans chaque fiole, coma dans la préparation du milieu A, 0,5 cm3 de pétrole.
On prépare de la même façon un milieu F coma* il a été dit pour le milieu A à l'exemple 1 la en ajoutent avec l'amidon, les huiles et les autres constituants du milieu 100 mg/l de (DPPD)
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et 4 g/1 de dimdthyltoramide, Après stérilisation et refroidisse- ment on joute, stérilement, dans chaque fiole comme dans la prépara- tion du milieu A, 0,5 cm3 de pétrole.
Les milieux E et F sont ensemencés comme il a été dit à l'exemple 1..Après 2 jours d'incubation dans les conditions décrites à l'exemple 1., chaque fiole de culture reçoit 0,5 cm3 de pétrole stérile.
Après cette addition le Cultures sont poursuivies dans les mêmes conditions de température et d'Agitation pendant 8 jours de plus.
Les productions de ss-carotène obtenues sont les suivan- tes :
Milieu E 435 mg/l Milieu ? (avec D.M.F.) :525 mg/l
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Les milieux E et r .ont préparé. et <M<oae9$ COJIID. U .. ét' dit à l"exemple 7.
Apre b 2 Jours 4'inoubat1o)1, djus 1 condition! 44crt..
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"."'"J.,,, ,1Ç1.",f .ft , 4. '. "-'. '''':, .\"nJ;'u" "0', '" ,"""'1.,,", q, , .' '>"'" "Qa"" "",... ',,' .t"i.,, T o.t oi\, !To' '11111Y iA'!IY ,A , , rMr \r 1.' ¯''',lIS .
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,'..,t4 h ln"^'^wl..¯^71 7.'"'';':\''' !",""'("'it''1'''YÍ ,\"".,;,,,,t.I,I;"'''';'''':'':':Y,J\;).'>.''\J\, >r t< ',; IU'" 2 ou. 4'qo.b&U9*(t,W).,' 1."OÓ1ftitJ9nI.,,4'crl.' f,;11'a:¯pl.,lqu. 0. 4. ou1' ,J'6Ço1t '.térU.¯': ,a. };,:..
#¯:..d '....1on. :101Uon dM$ o,',..' ,4. )t:,\4Pt.e.,,,,' r:. 1OD. 1 cul tut.. IOn t ' pouo8U1-n".'' 1..'."", OOJi.d1;U.' "',1:'< : ' ! *>? - ' "'", ,', ' , :..-'. 1:t '''.. . ':. !: "1;","C"1(';,,"'i',*:.J'-t:: ;o/',: It-p',1;U,r, .et, 4,..1t&Uon pendant 8 jouri 41'plu..'''::J..: production a-.,. ' . ' , 1 ; '.' " 3..' ; .,.;;,; .'... ; ..'<;;4:: t:':>4.
B-crctn obtu Mnt 1* lU3,.-.t..-,,' ,.; :,,:,,:': ':;A:iv/I:,4."1:'I,,:,, ; ' - yyy . '1 . ,,",.:..' . '....f"' ,;;aasTiG,q..a"s'n3,.,A'''r'.' nF1111v11 il'A 11/rVMrlIa "'.;". ".t * '8" ./J,."'l ':" k ,',1!'1"\, '",n ,L": -#.. , [.l.,,a.i,.['.ksa,â,.r,.n.3kpAR,.,. p fi s ,qll.k. 4 It'',1lr!' JiWF,, *",'t"'tVav+ 1 lOS' !,!,,y 'k''r;. .. ''' r, âa-. n.4:, (,1... ## ':{" " . -;.## . '\' -, il: :-i : 1.; :./..ry:';.:.,':r;:l" .'SEEMM.'- ; " ,'" '. , . ,,'.., "" ,'1.. ",,;,,, i' ,q", v , on .,'',p,, 1U1 IUl1." :0',-- U . <t4 dit à l' xinpH i- .. . ".J,.,!. '.'1 :.;,"': ft, -Zi';: 1 On 11,7,' 4al8lent un 11.'. "0 031°!t: .. 4t;4. Q% pÓ1.u': ..i:'" L,!v " , . # #.#-'# : HÈlÈf '#?'## ;r [ à tiXtj"1 1 xtâie en joutant .y" .x3dQl, 11t1r,'ï11t1i".ll" 1 x; ,urr aaaai.' du a111eu.j +1"4e::d:1a'711\U:toX;yc1, (5,1.8.).
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5,. ' 1r' u.l" ..:.'1": t1,Q" ; 4':- p; .,' cl'.;co:1' 9tfftlM*n%:$0 Hfd i-i- ,-4 H1u 1,.Î,,S; dt p4tr le# p :oF'tiot1" |l i cal turf* font poupauLiviM dans les ataes conditions de tempéra -
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p; " ,",.'. 'j 4 \: >4 <-;f.9", #;.# ...######;>/,:1î"!A(;F);s-"' V-'.X-';jr:v'.:tj>;:if--l4r-1 ''. 'On été <!At'*<p3. on pr4p&e.P4:".Qt:"ün"' coma x 4 44t"*" :,po\\r 1:'.111w .1.". Â'". :,1:',,"1, tn, gouttât *v<eo Jr'a1.: J.t, pwUw ##* li ;'..:;'o.'tÍ':4Ü oUitu, 2 'all,d'0¯4.;::' Aprii .t'l':l.l1..Uo <t rtfroidi aent on .aJot..t4rU.--.."., chaque fi oomt dans X* pi?<p*rAt4.on du adiieu C, 0.5 c*3 4'Wt$ solution. de 'trim4thfl,24" .ÓJ;Y.4d1h1dro....a qu1nol.1n. k 1$ dans du, pétrole j , ''': Le Jit1lieux C et'# ioât n a eno4i oOM' U .. 4tf 44t Pl a' '1:
Apr'. a jours ,4'1noubaUon dams les OQu41t1cm. bzz l'MMmple 1, hqu fio3.< de <tultuy< regoit et4rilmfmt 0 ))K de µ-louons en Mlution dans 0 5 011' de pétrole, Àprès cette addition les cultu1"e" Sont poursuites dans les méats condition)* de tt p4K tur .t 4'.ap.tat1on pendant 0 jours de plus.
Les pz94not4ont 4. '-OA:rQ"-t1,obtenu..aont les ttUyp- "toi, 1 ;#>#;#' Kili<u C t '''''lonon8 1040 ag/1 X1118\\ a (i\o.tuü4e) ... ¯-10n0ne t X245 se/1 EXEMPLE . - ' . :.",-.,,., #,,..:'#; . On préparil.un Milieu C comaa 11 * été dit 1 On prépare 4pl.8nt,'l'.à111 ":", 1408. U fi 4f4 dit p ailiM 4 'liu¯pl' 1 jMiw eatt$c l'd, 1<< 1...autr..qcm.t1 tuant. du 11111""";,,,: ' :#.; ¯ # ""ï; ' ; ' \;.! , ;''|:'" -# !--;-: /1 4 'dia<thn*<taBidt''--!2v; ou , . 1 d< propi<mAd<''''i:,(miU' :.'' 2 ail 4e butyl'8.11.:1.de ;:..'v:ff:i (i I) IVt'' #" #--'h>V'-. #-#,# #-.#?;: ##;.'>>:;? ->' Après stérilisation *| àrtfwidii ta iti 04tue-
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dans, chaque comge dans Xa préparation du milieu C, 0,5 o 3 d'un J01UiU"4' trimé thjrX a,2,4 .tb.oq-6d1'o-3.#2 quinoXéiae à X* dans < p<lr','\' ,.'.
:; .' '. "L"JI11ieu.xC,,:J,'J".,aé J"."".Q"4:'"':..tA;,' i'MpIt. jr.jM4' conditions déogites à 1* emplo 1$ ohteo 'QW.wr..'r.coii.ri1"' 50 8. de $-Ionone en 8Olutio""."4''tl"Oi,:,p. cette, addition, le' cultures sont pouaui.$4an..l"Ía"8;;OoX!.diUon'd. température et d'agitation rendant jours dé Les productions d...o.r.o"n.obtenU"80nt.
K111eu C + 9-îonone U95 a * * Milieu lC (d1méthyl&cétuûd')+J:t.onon 1 U60IL;;":':¯:: Xilleu L (Propionmîde) 1995 ag/l * .Milieu N (butyromide) t. ,"ionone. :,,11370 g/X SXMSMJUxr * '.' J;l:i.,;',.,ii"1:²,ft Dans un fermenteur de 30 litres" on charge 1 v" ..' #.''. Bau 101Ub1e'., ,'lm'!1!;Â211&'.('!,: . f ; Le mélange eaf.:1.tf4t1;\:qti','::95'¯',;-p':O")ûnute..
#' Après refroidisssment on' .U'<l ,ji 6îfo '(IQ'ém',!1.'$OÜd" ' lQI et on complète l',.'.....!,':1f,1' premières suivantes* Amidon de maïs ' ,->* #$*> "*%, Vgv'5; Etils de soja nulle de **ton '" iW1 ' ')'# ; * ;fî%' , tween 80 '-"")" ""\ri3i:t1R;;"""'''''''.' " """" .tit de .=;:!rJ1¯1]Í;;:,:i1jf[\t;..... i 4 ;';k;-; Phosphate monopotassiqui >Vt ;" ' / 7,58.;','", sulfate de ma.1iins..QnOhldr.t4"';;""'""1 .."\,,.;.:,,\;:,", 1:;:m: feo=;+c\f7',::fë>, "i.jC;!'..)(;;, th am g/i fi:v\.H'.i( , >><\ 144 volume elt.-t'9-,.f,,i "''':f.ftO,, ï(i * j est à 6,20. L;t1i(i;h:;;î';f;m!I"1ziut+.
\:'(!, "'ViC 1nJ action de ,!lAp:;r':::::f:r> . ,.t;dJ,88..ezdf:L.'pB t ",, 'i:, ".
' lele est :,s,'1fEf';i1t{t,fpf'thf
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. On ajoute alors sterilewent ltµ 8 de tna'tb1i.a,*:s, éthozy-6 ahydro-l,,2 quinoleine dans 150 =3 de p4t1. ..l leur est ensuite ensemence ..avec ,1,' litre d'une culture inoçtatu en fermenteur contenant les deux formes de la souche Z141xog*a trispora (lm 246 et NBEL 24")' et Agée de 49 boureup 14 cul w, est développée z 270 arec Agitation par turbine tournant" 409 /!n et aération Avec un débit de 1,2 m3/b- Iprés 40 heures de deve3,op" pement on ajoute stérilement 15 cm3 de ss-ionione en solution dans 150 cm3 de pétrole. Apres cette addition la culture est poursuivie dans les mêmes conditions d'aération d'agitation et de température pendant 5 jours de plus.
La production en -carotène dose comme il a été dit à
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l'exempl- 1 est de i 1335 mg/1.
Dans un autre fermenteur de 30 litres on prépare de la même façon le milieu décrit ci-dessus*
Après stérilisation et refroidissement, on ajoute stéri-
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lement 1,5 g de triméth11-2,2,4 ethoxy"6 d1h)rdJ;'o..lf2 quinolee dans 150 =31 de pétrole et 30 cor de d1Inéth71tormam:14e. lot Milieu' est *lors ensemencé dans les conditions décrites ci-dessus avec la même culture inoculu, Après 40 heures de développement on ajoute stérilement 15 cm3 de p-ionone dans 150 car de pétrole..Après cette addition la culture est poursuivie dans les mêmes conditions d'aéra- tion, d'agitation et de température pendant 5 jours de plus.
Le production de ± -carotène obtenue est de :1620 mg/l.
EXEMPLE 14. -
On prépare un milieu de culture C comme décrit l'exem- ple 4.
On prépare de la même façon le milieu de culture en ajoutant avec l'amidon, les tuiles et les autres constituants de
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milieu C, 4 8/1 de SUCC1n1m1dt,' Après stérilisation et ,h'Q1 U..... ment on ajoute dans chaque fiole 0,; car d'une solutioa ttl|iit'if tr1méth11-2,2,4 êthoxv-6 dibyuo-142 quinoléine à1% dan.,4Ù : .
' pétrole. . \ ?' - ..-:'&4 "'i
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|p ettbt*. dans i..' ,tOndi ',;4. J;tP..%,::P.'(.:JoU" ;': emr.,' .;. ?'"'' 1,03 cultur"'.,JOnt' pourl1ÛY1e. 4*ni l i ...... :(Umd1t1.0D';:'''''',';';: t*Q\\l'J d, pl\\." j,t'pout' 4."o.,:.":..4ù4tiOh,','4.: ,.d ';5;.'",:; est xaxjmj 0due-, |: :; ' ; DLU 1 C # t :,,' prip*r9 ':,' '<.,'..;:.;i;; ' Jia -'". '.' L.(a11ietU: c et tMt*' 4t4 inaqlx4 pmi '1.,', IX¯pl.. 4.,.'\' r,':?' ' " Ap< .; zum' 'tn<m&$" 1$'<< l'u¯pl, 0:2\ .JCNQ.t4nl..,:..'''t1.1:., tri...
:'.4th71-22,6 qclh (D[CJd./io;:j)4'< le, l'se Cultures sont poursuivies pendMt'& S -jef< ''''p-y 3.M *bats oondltiono* Les productions dt ,-qal'Qtlta:. "8.:1.0,. "1tt¯.,,..::,, sont 1#8 l\ÛY1U'1t...,., "i, # v '<'#""''#:> i''';:"::;:;-:? " Milieu C + 1'XCH 56o 1 fi KUitU P (*v e de) 'BtCa't 690 ' wl - Leil nuit= 0 et p sont préparés t n m *e4f co a* Indiqué pour los *'XOMP100 4 #* 34*','" # :[, > ##'f>?- .'--; ' ##'# $##'-# "#'#- #"'#.'#' #: :--'i '-J-Â ,*#',..'' Après 2 jours dpinoul*U= dans les éOn4i., diorlwo .. l'exemple 1 on --'out..U1"11¯t' dans obs4ue t1Oi. :" /j|g de ?, .t81rbuon. de la "ffl sous for4iè -de,ceoU= et.,0'5 '4f# pétro Les cultures sont pursuitlt ; |tad nt | Jquf dt piùi tsa* %*$ !.,.III,.. condjt1..., ...."--..4-'''" ': ' #.#### .-':" -#' ,: '#'#* i:''yWP/Ç'-j:>jlX' ' Les productions de p-çisrotikit sont- es m&mtkiifcf-i's''" ' õ' ' )U1eu (;
...e#1carbuon. de 3 Gg':? 540 'mg/lMM$ .
!### ' XW (tMreo lUooi%).1.#1de) +, ':c,... 'J'640 g/i'V.f.1; ' - ". t...:1$UX 0"*t p t9nt priparés' et ''.e 10'" eo s i di
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qui pour log exemptée  , 14.. ' .' -.' ' # ? t> J.;tt. a o\t. fl'1nouU- 4ans 1.. oon41UQl1f 4'.ri¯. l'exemple 1 on --:Qut..dr11cent, dent chaque fiole, !0 us des P-ionous en solution dsus 005 en* de pétrole* JLpree cette .au. ' leu culture. sont poursuivi dans 1...hI.. conditions ',. :ktp4.. tire et d'agitation pendant 8 Jour* de plut. Les production! et ±* carotène obtenue,% sont les suivantes:
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' K1J.:f.eo. a z '!"1on.on. :
t <l;, ¯-' ' 880 l/±V/ 5'( Milieu (avec lUoc1n:f..) + ..1onon. 1'90 no/1 ' fil erl =*yoro de 00 OX3 on prépare les *ai= 0# B P cornas indiqué pour leu Me<Mp3. 4 et 14. On prépare 4C81...¯, le milieu Q on coûtant "'0 l'Amidon !#µ huilât <t les ,ut,.," ² fi constituants au milieu C 2 g/1 de d1lulth11f'o1'1lwd. et $ C/1 de l .uce:1na1de..Apr..t4r.:U.t..at1on et refroidissement on oute' ( 6D. chaque fiole 0#5 en* d'Orne solution stérile de triai thyl-2'i4 ethoxy-6 dihydro"ljt2 quinoléine à 1 dans du pétrole.
Chaque fiole des 4 Bilieux* ensemencée et mise à Incuber dans les condition* décrites à l'exemple 1, reçoit stérilement au bout de 2 jours de culture $0 mg de 0-ionone en solution dans 0,5 car de pétrole* Loti cultures sont poursuivies pendant 8 jouis de plus dans les mêmes conditions de température et d'agitation
Les productions de ss-carotène obtenue sont les suivan- tes :
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Milieu 0 + ±¯lonont 1125 as/l Milieu Dz (avec tta) + ,..1onon.. 1360 at/I Milieu Q (avec 00 ot euceiniadde) t p-ionone a 1635 w</l Milieu f eayte IUco1n1a!de) ., > 4- 0-tonous m 1700 .&/1 '". : .
UW'I19 i<*- ? ' .
' * "" ,f0o.J'' Dama un fementeur de 39 litres, on cherté Distilleras solubles :1500 ' Eau 11 litres
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Le mélange est agita* e'eheuff à 950 pendent 10 xlvmteo.
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Après refroidissement m Juste a pH 6,45 reç 70 ca3 de soude 10 1 .et comète le milieu mvec i attèv premières suivantes ;;, Amidon *J-qx hsad - -; "* ,;t > h;t>.;':.;::"l<';',iL::,:i;:t'Í;,';'±é*1',\ soja Huilt *# coton " ',' ",','",,', ,', ',,",',',' ,,","'" .., "'. """," '," "","""",";"',c.,".";;!:"""'''''''''',","'N,",', ,..., ',".:,;""'1>' '. ,'" ;;' ,Hu..U.. ,4.,IO. :'''''''':<':':J' l"'" "1,r:(;..,..,,-:.,..t\'>'" Phosphate mono po ta a81qut;:"":> ,t; lI"" \: (;; :q/,;:!i'ê'::)"J CvTr'i' 'tr1m4 '1..2 2 étho "...6;";'t:'d':i", ptiol(jfcto ?* 1,5 <a3 VJ ". Sulfate de manganèse monohydTJitl'V, ; #jf'cM ' .##vBj Solu t10n de cb.lorh1drA t'l1.tI1,,,; ;;Qï;t;Sll;:jf' a'¯:',{:H,,:'%i':", Le volume est.t.,ài:U,'Ut1'4USV.':,a.,';:11ë&u.J,""pa,: 4U mélange est 6,40.
Le milieu, *v6c injection de vapeur* Après refroicllsseinent'le pH est 5, et le volume est de 14.J1',;wj(';H!,r{C:?iN$t";,,":tL,(; " On aJoute .lora. WrU¯fj#1i :;ltQ,' c."4.:,pjtioôiè: et de 41It4tb11tonum1c\.. ,,i'f?,t,,...",:';C: :",v.,(.
.culture inoculum en tf)t#i:iie"::Y;;';î>.ii.3',1OD de % ' .
- 750 CfA" d'une cul tur., o':' i ;,1jrt ,t,::(êjj:'l';lIP04\\' \\ ' NRRL 2456) ' . , r ;, ' ; # :', '7 SO ov.' d'un. cul ture ocfQ.l dt ,,'J..a'to1W.';;":'(Bilièli.., trispor* ttOOT 2457) NRBL2457). , .. ¯ . ,,;# #-':r r , ;,.¯ 'La culture est développée à ±7* tes *fclt*tlon par toybi- ;; . ne k 400 t/m et ¯'ri ti:ic.)f4.,J.&;i S heures de développement a* -adepte styteileoent 15;(î | 4# -lonone "- .. .- #i>sJz;-* dans '150 on-1 culture $ -Q- t4 2MIÀ vit dans les p%tst"#mdioasô s*enip|r*tftre, â *glt tlon! ;; ' t d'Aération pendant, 1 #' ' La Po.tio.'$te tf.,:9',&t,J:,)\:'{' ,;;,:';,), ' !? .
Dans un -autre fezmenteur de 30 1 on prépare d* Xa même''' '# façon le milieu décrit o1e.",..:\J.priu'.téf;f4'aaiiil.QP.:.et"r.tro1..u1' *ont, .on-* joute 1 t4ruera,;;q,,,,.t.iWi%'è!i;;{Qj; II:' :i;'eD'",ol\1Qn dans 500 om3 4*e#ttl>iXe .lll eu' estj 'alors ensemencé darn***- :;4].e. ac1i tionl dearitet.eie.M.t..8
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inocula Apres 48 h de 4é:rFP,.'!Î' on ...o\\>;.ti1.P','t,'" k ' t ,..". ., i,,, at..". de ,-ionone "SQlut1on .:x::7:e;;, t tien la cultuJ'{t t pour çi4ti >ead itµ our ..u' ',z;Yr. mêmes cooditiona df tsapM''<jt<t4.<?n .t,4'':,.1:;:f),itF ;.'.,..."...'...' ..I-pHp ,'<t9$.Mm ,4.,,'- .iI;;::g) ' LE O,-" '.rÂy.;,, ryÇlk : : , ,', ',' "':""0'- , p xre¯un :, d, u.lur G camw . -rt ,, l'exemple 4.
De la même taçon on prépare egtdeeent un J/d,11fU ;4t4;;;v: culture R en joutant Avec l'.a:#j,do,' le huilée et lei autr ', .'
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constituants du milieu C 2 s/1 4* Y broll.08Ucc1J;l181de..Âp. réparti- tien en fioles d'EJ."lenme;yer de 300 c 3 4 1".1IOn de 50 ont? par t !*,, stérilisation et retr01d1lsement on * joute dans chaque t101'', conaa dans la préparation du milieu C,0 S cm? d'une solution de trim4tbyl 2,4 éthoxy-6 dihydro-1,2 q1ÜnOléine à 1% dans du pètrQI0, Les fioles de culture des milieux C et R ont eneemencees
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et misée à incuber dans les conditions décrites à 3,'exemple 3, 4P?tl . Z jours d'incubation on .-joute gt4elogel dans clique fiait $0 g de P-lonone Ma solution dan. ,;0" ca3 de pétrole* 4pl:b#"éotté tien les culture* sont po:'miide$ dan lelf mtmé, condition dé température et d'agitation pendant a jours de plu..
Bn dosant le carotène comme indiqué à l'exemple 1 on * obtenu lee productions suivantes ###.j-y-f-- < -# # 11eu'C (avec 'ion(me)"',-.-'.'''','/- ";' ... "'''"5:*µi(fl>|f.' -.-:'. .' ¯ Hilie'R (avec I.bromoeue.. ,.t:)...cmQr18) '</9'))t' ;-.; ,-rrnn t-,: ##t.,rr.j...-, - .. "' .Vï*'" ' '#?!l -''# ' ''' ## 'On' pr4pare un DÙ.11'$t ,'..;tur a 'dtAil'':flA|t)ia ftt4wtâ:"ji*; . 500 cm,4'''U contenant 90 1 4e',;dt.tUlert' ogolub1w, *out poçt|j|jàT ' l' dbul1;f.
Uon durant. z15 minutefi.- -Après rel'roidlsffément on ajouta |:? -, # . ##'.'#. , '#...- .'.## ' iVift Ir, Amidon de mais #-.>{ 'p&M .% "r'.r y- ... #### #?*#.;",# "-!# .,. ,.Amidon 40,00ja, :Vii,'!;''/r''fjW.\;:/(< ,Tween 80 -'tu<.." ,.:fut"'1' ")-tr,\'t:{.,)[":., "je\,:, l levure,";,,:'. ,'<,;',},i:, ,:"'I :êJ;;l-:\.(,\:\:t:.
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l "'ho.phat. pot&..lqu, ;-s: '.''t''j':''''i.'(' Chlorhyd ' ;:itj;'î'x ; !1:3" . .-'-'j; ,,"'''''':/'..''?'''''*''.'''' pendant 20 ÍaW1ute. 120-91 ,..&pr'...t4ri.li' WSt" on ajoute, 4'unè ,1OUïi'.' ,;., "'tb11-2,a,,'-ItboX²-Ó': 'd:ro';'l;.',i..' èt . :"f":\'.l.;';
1 4. . 'Le m111tU4.. cmltUra Dard, . . ' -.v.":-' '#'"### '.'''-'''-''.'/ ,?:'1. aû1ieu C. 4p< $yilis*tio.t';-yefyo;!.cd<e<a6nt oo*,.- chaque flole Oà5 c 3 d'une de /1 .tho...6 41b1dro-l,2 qujzoléne ,'1:' dan. da pétrole, te ptma solution stérile de l"h1d:romét.b11fUCC4':";"';',4. fe.'. Les ìgloo 4. cultue','., i1euX 8'',t.e)<'''''. odes et mises à incuber dans les, qomU1on. dOt'a'j)' à 3L'<a6<p * 4près 2 jours d'incubation on a.1out.'.t6ru¯t,q;i.'t101e: if 50 III de P-lonono en solution dans 0#5 o 3 de pétrole.
Apre cette
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!'# .addition, les cultures sont poursuivies dans les mbea condition de k- température et d'Agitation pendant 8 jour. de ' , f 4 production* t-'û* -carotène obtenu.. sont les suivantes '/-.l. #:$..',:> '.'.?\ µ"# .'.#'""#''"##.###-##" "; (.'K1118U, 8 (aT" ..1onone),- '"' ###'#-, .j- ..i.l. ,B/1 . t. h H111w T (avec Jf...tqdroxYDtéU111\1Oo1n1Jú4. et .i,cxj..i' 13 w$/3.
U On pr,par., ua ad.H< .4'-cye'y 'pMam .t.,<.:.'...' .....'.....
<M ......,. , ","as.,r"i:'. .; t- .';iß>..'-il.;"n:*'''.;,.:;'E''µ ¯ - ''$00 aa3 d'eau contenant 60 1 4,f,til,i,:.r.'t, 'ij'.':-\:'pp.rt8. .
. l.1 dultTiir ,.al'xt.'#'t.df.A,#1,'¯.. r .As140n ",' ," ' 'L ,",' ,',;.:;,,;, ',60 '1 ", ,,' '" ",,''''J' )';""''6; "",'n";'" '', f BuiK e IOJ. #'.;.. -"y...- . , .. , . ,i , . ^,..e.ai ' , fi ' ' ' v"..,;,'.. ,ï '' ' y; f ,ß a'^ ß,: #'; ;,.
.;.,Bu11. de ootoA '# -:* \S5' w5'' ' -,,it.,' ,- ,.; ,:¯ .-''#' : . ..-' .-.'.--.;- .;}{';i:;:?:\I,::;1:r;:"" J'\,) .1! rf ü 80' " '011'; W ."i'1'a..,'-'Y. '. " .: S' 1;.... , f'; Extrait d ux - , 1 ,=i ç., t :. ,:;;;" ,. ... ,. vs , ,- , , y :A:.:.,:;;4..,v ,'.¯. " ## ' $#"<# Phosphate opota.a1qu. .,.' ? ..,, j ' # s ' J1'.. ,' :' ty r.;'.3..' Y , ..
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Sulfate de iMagMtCMMMhydMte 0,1 g .' chlorhy4mtt de ttú. 0,01 t ; . : on complète le' vol=* 1000 cm3 par de l'wu dlt,Wi...
1.e mdlimst est Ajusté à Pa 6,3 avec do 1& loude, répar4 11\ ftol.. d)Erlenme\de 300 0tI\3 raison da %0 oo3 par fiole, VUO gt4tet#4 pendant 20 m.1nut.... 120'. ..A.prè..t8r,1J,.i..t1on et l'etJoiü...en1' on ajoute dans chaque fiole 0#5 om3 4#lme solution 1 t'rU. de tri* '.4thyl-2,,2,4 ,ethosr.-6 d.Ï.byd'4t q<dno'in< à 1$ dans dÙ. p4:tro:t." On pripar* do 1. mèze t4gon un milieu de <Mltr$ tX;
joutant arec l'amidon, les huiles et les autres constituant! du milieu V, 1 g/l de caprolactame Après stérilisation et refroidi - ment on Ajoute dans chaque fiole 0,5 cm3 d'une solution stérile de
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tr1méthfl-2,2,4 ethoxy-6 dihydrû-1,2 quinoléine à 1% dans du pétale
Chaque fiole des milieux V et W ensemencée et aise * incuber clan. les conditions décrites à l'exemple 1, reçoit .Utile- ment au bout de 2 Jours de culture 50 mg de ±¯ionone en solution dans 0,
5 cm3 de pétrole* Les cultures sont poursuivies pendant 0 jours de plus dans les mènes conditions de température et d'agita- tion.
Les production* en ± -carotène, doué corne indiqua à l'exemple 1 sont les suivantes : .
Milieu V + ss-ionone m 1463 mg/l Milieu W (avec caprolactane) + ss-ionone- 1730 mg/l
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On prépare en fioles d'8r7.euere de 300 m le milieu de culture V comme Il est dit à l'exemple 22 ci-desous, On pr4p*jpf également de la r8a façon, les odiiwnx de cuivre 7 et, X, ao joutant avoo l'.,,dca les huilei et les autrea omet4tuot1g 4 milieu t respect4vement 1 et 3 a/1 d'ar..dcr Après r4p&r tition en fioles d'Exaruaeer, stÀ2UI tt= et rof=id4sommt 0a ajoute encore dans chaque fiole 0,5 cm3 d'un solution stérile de
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tyimethyl-2,2,4 ethoxy-6 d1h14ro..l, qu1nolcU.n. à 1$ Uni dU p4trol*| Chaque fiole d.e..u1eux V, et .7,, enteatenoee et Ú..
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t iaou",f. 4an.,.., oond1t1n., écr1t.. 'à lexemple ,..eço1t st4n..
V 11liitü bout de 2 j<'UM !I1 QLtI'CIIT't 50 Mt de p-loacae en solution duo 4, de pétrole* lots cul tu rtes sont poursu1!t.' pendan,t 9 ; jours 4e' plu. ,dan. les rakià, 4$t.1. 4, t8llP'nw." et 4'a tâ.... tion. . ' . ^,srSriai'.vr,r:r," r ..., . . .Y" ,,., : ,, ,,..; :,ti'.^.a.yr,... , .
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;f ' '"# ±## pro4uoUnÍd."JrO.¯,'Ótènue' sont Un suiTwntesi J" ".'.1. ,,1 .f, t ' ., .,' . ,
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KiMeM V fi-ionon* ;<# U65 mg/1 milieu XI (a-foc 1 Il d'Q..pyrro11done) + ...10noJ1,. 1730 mt/i
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X3 (avec' 9/1 cp''''Plrrol1done)+ ±-ionone * 1970 as/i.
R 1 V E 1 D 3 C .A :t 0 . i ',; Procédé de production du ,-ca1'Otn. par ,trmentat1on "'l'Ob1e d'une culture des tomes t et', de BJ..ù:e81M. triapora sur
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un milieu convenable et dans les condition habituelle$ pour ce
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genre de culture, hoUri8é en de qu'on ajoute au Milieu au 00infi'
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un activatour choisi dans 1< groupe qui comprend 1) les c=posés à fonction ,aa.ide,. et nottuament *. les =ides de formule géndrale t BCONRI itc .-/ry'''''.';''"
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(dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, un radical .alco1- le ayant *u plus 6 atomes de carbone, un radical aryle. ou aralaoyle 0 tBl%s semblables ou différents, représentent chacun un tome 4'h)'d1"9sène ou un radical alooyle ayant aU i4igeo de carbone) >'! v-, ... 1.. 11I1d.. de formule; générale l'-'#5;v. ###;:.
V
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(dan4 laquelle Rg reposent* un radical hyd=oarbon .. 41,Db*tiW"è di- l Iraient -ayaot plus 8 -atomes de crboM et 3xn,q d'drQx. ou d''t.c8n cu un radical *10OY10, ou bydpojtyicçyle zou
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r m.xiJlwu'4,atomes de carbone) '#\:'h}':ï'¯>y-->'\:;$:*'""'-:,-i ;/-\' - les lactamGs 'de't'ormul'.: .4:r.-.J.e,'(:j',;;;,;
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(dan. laquelle, i-a: est d4mi OÓU. ;'O...c1..IU' ;t '::,;':17:{;i:;':' \,:.:,:\;:;;<;" " ,'...,,)':1o.,.\t..lCOT1Wlt'ôqc1.;.²dOt'1.j,t.M.i;4tôol1.Î::;" ;. tiennent M3dao:w''4t<cs .d'<fboM.'..-' \- '':0:'µiB% ff