<Desc/Clms Page number 1>
Procédé d'isolement de nouveaux composés.
La présente invention a pour objet un procédé de prépara- tion de nouveaux dérivés de la verrucarine A, antibiotique prove- nant du Myrothecium. La verrucarine A, corps neutre liposoluble de constitution encore inconnue et de formule brute probable C27H34O9, possède un groupe hydroxylique et elle peut être trans- formée, par réaction avec des dérivés réactifs d'acides carboxyli- ques contenant au moins 3 atomes de carbone, en composés acylés correspondants. Les dérivés réactifs que l'on peut utiliser seront par exemple des halogénures ou des anhydrides d'acides contenant au moins 3 atomes de carbone.
Les acides correspondant à ces déri- vés réactifs seront surtout des acides physiologiquement tolérés, car les dérivés acylés de la verrucarine A sont des antibiotiques
<Desc/Clms Page number 2>
très efficaces qui peuvent être utilisés comme médicaments pour le traitement de maladies infectieuses. De plus, les nouveaux com- posés ont une activité antimitotique qui les rend tout à fait aptes à être utilisés en thérapeutique pour combattre les tumeurs. L'ac- tion cytostatique des nouveaux composés a été déterminée in vitro, sur le mastocytome P 815 de la souris, par l'inhibition de la multi- plication des cellules tumorales.
En outre, les nouveaux composés se distinguent par leur activité insecticide et c'est pourquoi ils peuvent également trou- ver des applications comme pesticides.
Les nouveaux composés peuvent être utilisés comme médica- ments, par exemple sous forme de )réparations pharmaceutiques con- tenant les composés en question en mélange avec un excipient orga- nique ou minéral approprié pour l'administration par la voie en- térale, parentérale ou locale. On peut envisager comme excipients les corps qui ne réagissent pas avec les nouveaux composés, comme par exemple la gélatine, le lactose, l'amidon, le stéarate de ma- gnésium, le talc, des huiles végétales, l'alcool benzylique, la tomme arabique, les polyalkylène-glycols, la vaseline, le cholesté- rol ou d'autres matières supports pour médicaments.
Les produits pharmaceutiques peuvent être présentés par exemple sous forme de comprimés, de dragées, de poudres, de crèmes ou de suppositoires, ou à l'état liquide sous forme de solutions, de suspensions ou d'émulsions. S'il y a lieu on les stérilise et/ou on leur adjoint des corps auxiliaires, tels que des agents de conservation, des sta- bilisants, des mouillants ou des émulsionnants. Ils peuvent égale- ment contenir d'autres substances douées d'activités thérapeutiques.
Le composé de départ, c'est-à-dire la verrucarine A, peut être obtenu à partir des liquides de culture et/ou des mycéliums de souches des mycètes Myrothecium verrucaria (Albertini et Schweinitz) Ditmar ex Pries et Myrothecium roridum Tode ex Friea.
On obtient un mélange de plusieurs antibiotiques, mélange que l'on ! peut séparer en ses composantes par précipitation, répartition,
<Desc/Clms Page number 3>
chromatographie d'adsorption, chromatographie de partage ou réparti- tion à contre courant (répartition fractionnée). Comme matière de départ on peut cependant utiliser non seulement le liquide de cul- ture et/ou le mycélium de souches des deux mycètes, mentionnés ci- dessus, mais également le liquide de culture et le mucélium de n'importe ':uels variants de ces organismes. On a isolé des colonies des inycètes Myrothecium verrucaria et Myrothecium roridum d'échan- tillons de sols de provenances très diverses.
Du point de vue mor- phologique toutes ces souches correspondent aux descriptions des espèces, telles qu'elles ont été données par exemple dans Gilman, J.C, 1957, A Manual of Soil Fungi, 2ème édition, The Iowa State Collège Press, Ames. Iowa, E. U.A. Elles peuvent être cultivées sur des milieux nutritifs de divers types avec les autres mycètes.
Les exemples suivants illustrent la présente invention sans aucunement en limiter la portée. Les points de fusion sont don- ns non corrigés, EXEMPLE 1.-- Mono-0-benzoyl-verrucarine A.
Une solution de 101 mg de verrucarine A cristallisée et 1 ml de chlorure de benzoyle dans 3 ml de pyridine est abandonnée pendant 15 heures à 22 C, puis elle est additionnéeà 0 C, de 0,5 ml de méthanol, elle est abandonnée encore une fois à 22 C pendant 30 minutes, puis elle est évaporée sous :ression réduite. On re- prend le résidu dans du chloroforme. On lave l'extrait chlorofor- inique avec de l'acide chlorhydrique binormal, avec une solution binor:nale de carbonate de sodium et avec de l'eau, on le sèche sar sulfate de sodium et on l'évapore sous pression réduite. On chro- matographie le résidu sur 5 g d'alumine d'activité I.
Les fractions éluées avec de l'éther et du chloroforme fournissent, après re- cristallisation dans un mélange 1 :1 debenzène et d'éther, le mo- nobenzoate (C34H38O10) cristallisé pur sous forme d'aiguilles inco- lores fondant à 217-221 C [a]D21 = +80 ¯2 (c = 1,261 dans le chloroforme)
<Desc/Clms Page number 4>
EXMEPLE 2.-
EMI4.1
Mono-4-succ3noyl..verrucarine A.
A une solution de 200 mg de verrucarine A cristalline dans 5 ml de pyridine ori ajoute 800 mg d'anhydride succinique et on abandonne le tout à 37 C pendant 20 heures. Après évaporation sous pression réduite on reprend le résidu dans du chloroforme, on lave la solution d'abord avec de l'acide chlorhydrique binormal puis plusieurs fois avec une solution binormale de carbonate de sodium. On mélange les extraits obtenus par extraction au carbonate de sodium,,on ajoute à la solution, à 0 C, de l'acide chlorhydrique concentré jusqu'à réaction acide au congo et on extrait au chloro- forme.
Le résidu obtenu après séchage sur sulfate de sodium et éva- poration du chloroforme sous pression réduite fournit, après re- cristallisation dans du méthanol, le monosuccinate acide (Ce 38012) cristallisé pur sous forme d'aiguilles incolores fondant à 188-193 C
EMI4.2
/"<=L7 pl= + 127 t 2 (c = 1,002 dans le chloroforme). pK = 6,95 (méthylcellosolve à 80%). Poids équivalent s 570 (calculé : 602).
EXEMPLE 3.-
EMI4.3
ldono-0-phtaloyl-verrucarine A.
On chauffe à 100 C pendant 2 heures, à l'abri de l'humi- dité, 104 ml de verrucarine A, 304 mg d'anhydride phtalique et 3 ml de pyridine. Après quoi on évapore sous pression réduite, on re- prend le résidu dans du chloroforme, on lave la solution d'abord avec de l'acide chorhydrique binormal et ensuite plusieurs fois avec une solution binormale de carbonate de sodium. La solution obte nue en mélangeant les extraits de carbonate de sodium est rendue acide au congo et est extraite au chloroforme. Après lavage de la solution avec de l'eau, séchage sur sulfate de sodium et évapora- tion du solvant sous pression réduite on obtient la mono-O-phtaloyl-
EMI4.4
verrucarine A acide (C35 H38u12) pure et amorphe. Z""a-7n s +9>0 +2 (c =. 0,937 dans le chloroforme). pK = 6,07 (méthylcellosolve à 80%).
Poids équivalent : 712 (calculé : 650).
<Desc/Clms Page number 5>
EXEMPLE 4.-
EMI5.1
Mona-4-propionyl-verrucarire A.
On laisse reposer à 24 C pendant 26 heures une solution de 102 mg de verrucarine A cristallisée dans 2 ml de pyridine et 2 ml d'anhydride propionique, on la dilue avec du chloroforme, on la lave d'abord avec de l'acide chlorhydrique binormal, puis avec une solution binormale de carbonate de sodium et enfin avec de l'eau/ on la sèche sur sulfate de sodium et on évapore le solvant sous pression réduite.
Après addition d'éther de pétrole on obtient le mono-propionate (C30H38O10) cristallisé pur sous forme d'ai- guilles incolores présentant un double point de fusion à 150 et 185 C. Après recristallisation dans un mélange d'acétone et d'é- ther de pétrole on obtient le corps sous forme d'aiguilles fondant à 151-155 C. [a]D23= +126 +2 (c = 1,112 dans l'éthanol). Spectre ultraviolet: max = 260 m/u (log± 4,4). Spectre infrarouge
EMI5.2
dans le chlorure de méthylène: bandes à 5,77 lU, 5,87 /u. 6'14 lU et 6,32 zou.
RESUME.
La présente invention comprend notamment
1 ) A titre de produits industriels nouveaux, les déri- vés acylés de la verrucarine A dont le reste acyle contient au moins 3 atomes de carbone, et en particulier : a) la mono-0-propionyl-verrucaTine A;
EMI5.3
b) la mono-0-b4-nzoyl-verrucarine A; c) la mono-0-succinoyl-verrucarine A; d) la mono-0-phtaloyl-verrucarine A.
2 ) Un procédé de préparation des nouveaux composés spé- cifiés sous 1 , selon lequel on acyle la verrucarine A au moyen d'acides mono- ou poly-carboxyliques aliphatiques ou aromatiques contenant au moins 3 atomes de carbone, ou de dérivés réactifs de tels acides.
<Desc/Clms Page number 6>
3 ) Produits et procédé en substance comme ci-dessus aécrit avec référence aux exemples cités.