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La présente invention a trait à un procédé pour la préparation de nouvelles substances antibiotiques. Les nouveaux antibiotiques sont préparés à partir de souches d'actinomycetes thermophiles isolées pour la première fois. Des échantillons des nouvelles souches ont été dé- posés à 1' "American Type Culture Collection* sous les numéros ATCC 14760, ATCC 14761 et ATCC 14762.
Les nouvelles souches d'aotinomycetes thermophiles peuvent être isolées de milieux de culture par les méthodes bactériologiques usuelles d'isolement de cultures purent Lorsqu'on cultive ces micro-organismes dans un milieu de con- servation tel que le milieu la de Tendler et Burkholder (Applied Miorobiology 394-399 (September 1961)], ils montrent des sporophores courts en spirale; lorsqu'on les cultive, par contre, dans un Milieu du type décrit ci-après, il% présentent des formations à sports uniques ou % deux spores.
Les spores sont de couleur blanche ; lors du vieillisse* ment, la coloration tourne au crème, puis au gris, et enfin au noir Couleur au revers tournant du Jaune au gris, puiau noir*.
Spectre excenzymatique : caséinase, gélatinase, amylase, lipase.
On peut préparer les nouvelles substances antibiotiques, en cultivant des micro-organismes appartenant a l'une des souches du groupe ATCC 14760, ATCC 14761 ou Arec 14762 a une température d'environ 37-560 dans un milieu de culture li- quide stérilisé contenant des sources assimilables de carbone @ et d'azote, et séparant, le cas échéant, les substances du
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milieu. Les micro-organismes montrent une croissance optimum à une température d'environ 48 , le pH pouvant varier, de 6,1 à 8,4.
Un milieu de culture approprié contient les composants suivants:
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Comjposan aut1t!
EMI3.2
<tb> Produit <SEP> de <SEP> digestion <SEP> pancréatique
<tb> de <SEP> caséine <SEP> 0,5 <SEP> % <SEP>
<tb>
<tb> (Sheffield <SEP> Chemin! <SEP> Co.
<tb>
N-Z <SEP> Amine <SEP> Type <SEP> B)
<tb>
<tb> Produit <SEP> de <SEP> digestion <SEP> de <SEP> protéines
<tb> de <SEP> soja <SEP> 0,2 <SEP> % <SEP>
<tb>
<tb> (Soytone)
<tb>
<tb> Extrait <SEP> de <SEP> levure <SEP> 0,2 <SEP> % <SEP>
<tb>
<tb> Amidon <SEP> soluble <SEP> 1,0 <SEP> %
<tb>
<tb> D-Mannitol <SEP> 0,5 <SEP> % <SEP>
<tb>
EMI3.3
Mgs04.7H20 0,05% Solution d'oligo-élément8 * 0,1 ml/100 ml
EMI3.4
* Solution de base d1 oligo-éléments j par ml
EMI3.5
Fe sous forme de Fe(NH4)2S04 1,0 mg
EMI3.6
<tb> Zn <SEP> nous <SEP> forme <SEP> de <SEP> ZnSO <SEP> 1,0 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Mn <SEP> sous <SEP> forme <SEP> de <SEP> MnSO4 <SEP> 0,5 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Cu <SEP> sous <SEP> forme <SEP> de <SEP> CuS04 <SEP> 0,
08 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Co <SEP> sous <SEP> forme <SEP> de <SEP> CoSO4 <SEP> 0,1 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> B <SEP> sous <SEP> forme <SEP> de <SEP> H3BO3 <SEP> 0,1 <SEP> mg
<tb>
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Les substances actives peuvent 8tre Isolée* par pré- cipitation. Suivant l'une des Niées en oeuvre, on peut isoler les substances actives du milieu de oulture filtré ou centrifugé, ou de fractions dégelées du milieu de culture congelé, en les relarguant, par exemple au moyen de sulfate d'ammonium.
Les substances antibiotiques, obtenues suivant le pro- cédé de l'invention, exercent une action oncostatique et on- colytique chez les êtres humains et les animaux et peuvent donc être utilisées comme agents antitumorales.
L'exemple ci-après est destiné a illustrer la fabri- cation, par la culture de ATCC 14760, de préparations anti- tumorales. @ Exemple
Le milieu de culture est inocula avec une culture du micro-organisme, puis laissé à fermenter pendant environ 17 1/2 heures à 48 . En agitant constamment, on congelé presque complètement le milieu de culture filtré ou centrifugée puis laisse dégeler a environ 1/10 du volume total, sépare la portion dégelée par décantation ou filtration et la olarifie ensuite par centrifugation. La solution surnageante est traitée avec environ 30% en poids de sulfate d'ammonium.
Le précipita qui en résulte est dissous dans une solution saline physiolo- gique. On ajuste au titre désiré, en se basant sur l'activité
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antibiotique contre le staphylccocus aureus ATCC 13680 (déterminée selon la méthode de titration par disque).
Une préparation, ajustée pour une zone d'inhibition de4 mm (par la méthode de titration par disque-) est stérili-
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té** en vue de l'injection intramusculaire ou saut autanëe,, peut 1\tt'1'" administrée à ca:.; r, journalières de 2,0 ml, après une lente progression.
On peut obtenir des préparations antitumorales simi- luires, en cultivant de la même manière des souches ATCC 14761 et ATCC 14762. Aucun effet toxique général n'a été constaté.
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The present invention relates to a process for the preparation of novel antibiotic substances. The new antibiotics are prepared from strains of thermophilic actinomycetes isolated for the first time. Samples of the new strains have been deposited with the American Type Culture Collection * under the numbers ATCC 14760, ATCC 14761 and ATCC 14762.
The new strains of thermophilic aotinomycetes can be isolated from culture media by the usual bacteriological methods of isolating cultures. When these microorganisms are cultivated in a storage medium such as Tendler's and Burkholder's 1a medium ( Applied Miorobiology 394-399 (September 1961)], they show short, spiraling sporophores; when cultured, on the other hand, in a medium of the type described below, they show either single sports formations or% two spores. .
The spores are white in color; during aging, the coloring turns to cream, then to gray, and finally to black Color on the reverse side turning from yellow to gray, then black *.
Excenzymatic spectrum: caseinase, gelatinase, amylase, lipase.
The new antibiotic substances can be prepared by culturing microorganisms belonging to one of the strains of the group ATCC 14760, ATCC 14761 or Arec 14762 at a temperature of about 37-560 in a sterilized liquid culture medium containing assimilable sources of carbon @ and nitrogen, and separating, where appropriate, the substances from
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middle. The microorganisms show optimum growth at a temperature of about 48, the pH varying from 6.1 to 8.4.
A suitable culture medium contains the following components:
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Comjposan aut1t!
EMI3.2
<tb> Pancreatic <SEP> digestion <SEP> product <SEP>
<tb> of <SEP> casein <SEP> 0.5 <SEP>% <SEP>
<tb>
<tb> (Sheffield <SEP> Path! <SEP> Co.
<tb>
N-Z <SEP> Amine <SEP> Type <SEP> B)
<tb>
<tb> Product <SEP> of <SEP> digestion <SEP> of <SEP> proteins
<tb> of <SEP> soy <SEP> 0.2 <SEP>% <SEP>
<tb>
<tb> (Soytone)
<tb>
<tb> Extract <SEP> of <SEP> yeast <SEP> 0.2 <SEP>% <SEP>
<tb>
<tb> Starch <SEP> soluble <SEP> 1.0 <SEP>%
<tb>
<tb> D-Mannitol <SEP> 0.5 <SEP>% <SEP>
<tb>
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Mgs04.7H20 0.05% Trace element solution8 * 0.1 ml / 100 ml
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* Basic solution of 1 trace elements j per ml
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Fe as Fe (NH4) 2S04 1.0 mg
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<tb> Zn <SEP> we <SEP> form <SEP> of <SEP> ZnSO <SEP> 1.0 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Mn <SEP> in <SEP> form <SEP> of <SEP> MnSO4 <SEP> 0.5 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Cu <SEP> in <SEP> form <SEP> of <SEP> CuS04 <SEP> 0,
08 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Co <SEP> in <SEP> form <SEP> of <SEP> CoSO4 <SEP> 0.1 <SEP> mg
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> B <SEP> in <SEP> form <SEP> of <SEP> H3BO3 <SEP> 0.1 <SEP> mg
<tb>
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The active substances can be isolated * by precipitation. According to one of the negatives in operation, the active substances can be isolated from the filtered or centrifuged oiling medium, or from thawed fractions of the frozen culture medium, by releasing them, for example by means of ammonium sulphate.
The antibiotic substances obtained by the process of the invention exert an oncostatic and oncolytic action in humans and animals and can therefore be used as antitumor agents.
The following example is intended to illustrate the manufacture, by culturing ATCC 14760, of anti-tumor preparations. @ Example
The culture medium is inoculated with a culture of the microorganism, then allowed to ferment for approximately 17 1/2 hours to 48 hours. With constant stirring, the filtered or centrifuged culture medium is almost completely frozen and then allowed to thaw to about 1/10 of the total volume, the thawed portion separated by decantation or filtration and then olarified by centrifugation. The supernatant solution is treated with about 30% by weight of ammonium sulfate.
The resulting precipitate is dissolved in physiological saline solution. We adjust to the desired titer, based on the activity
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antibiotic against Staphylccocus aureus ATCC 13680 (determined by the disc titration method).
A preparation, adjusted for an inhibition zone of 4 mm (by the disc titration method) is sterilized.
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té ** for intramuscular injection or autaneous jump, can 1 \ tt'1 '"administered to ca:.; r, daily of 2.0 ml, after a slow progression.
Similar antitumor preparations can be obtained by culturing strains ATCC 14761 and ATCC 14762 in the same manner. No general toxic effects were observed.