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Procédé de préparation de la kasugamycine.
La présente invention concerne un nouveau procédé pour préparer par fermentation un antibiotique utile, connu sous le nom de kasugamycine. Plus spécialement, elle concerne un pro- cédé permettant d'obtenir cet antibiotion avec un rendement éle- vé par culture aérobie d'organismes produisant de la kasugamycine dans des milieux contenant des huiles végétales, des graines végétales, des huiles animales) des graisses animales, des acides gras ou des esters diacides gras comme principale source de car- bone,
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La kasugamycine est un antibiotique découvert par 1;.< ;i:;>c, fJkami, Hashimoto, Suhara, Hamada et Zakouahï (Journal blotios;, Series A, 18, 101-103, 1965), qui est obtenu ".>6',at cristallise sous forme de chlorhydrate de formule :
,î509N.HC1.H2 ,l qui est soluble dans l'eau, sensiblement dans le méthanol, 1$ dthanol, ljacdtonej l'acétate ,1.j:.#.g, i.>±tiier, le chloroforme et le benzéno$ ii0accuse pas v : djubsorption dans .L'U:!. travio:Let de 220 auu à 400 'tA/Ut ut." une réaction positive avec la ninhydrine dans la pyridine, ) dos réactions négatives de Sakaguchip 14olïsche Elson-Yior pollens et au chlorure ferrique.. accuse une dextrorota- .
;'.\"} Co.J5 de +120 (o le6e li 0)$ tond à 2:36-239 0 avec décom..
.< .:la,,".nn ot a des pK(inferieura à 2o 7, l, 10.. 6). La hasugamycine ' également sous forme diacide libre de formule 'J"1H2509N3.H20 qui est soluble dans .L'eau, fond à 207w216 C avec :\'F1)1Wosit:l.on et accuse une dextnorotatiin fafµ5 de +115 !,, Fi0). Suhara, Maeda., Omezawa, OhM (Tetrahedron Lettero> ,' 12, 1239-1244, 1966) ont établi que la kaougamyoino est de ,,.,,.j,¯11, ;
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Le diaminosucre est le 2e 3, 4,6-tétradsoxyw2,4-d1am1no- :, ..<nioxo;o La liaison glucosidique est en a. La partie de droite ':.: lù D-inositol. Les atomes d'hydrogène en Ci, C2) 3' 06 du l0Jitol nt axiaux et les atomes d'hydrogène en 4 et C 1>1:1;ux.
La kasugamycine inhibe cu ar e o zae provoquant ,I,C\ p1J.t:culari#a et diverses bactéries, en particulier Pseudomonâ
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... } -" ? r. ... 2" 1I":(:;'l;.hr,. <tL",, h:' ,'i.;: ." :-'tro1} .. ". :I< ".< :"':" .:':. :.:: f!;,.:,. ,..:-.:"" )=:.."-::\",-." '--':-:"j , ."",,,-:"'.(""'-' : ?ul;;..:' ..;:I." "-!.,;.;,.1-:;.!>' 1'\).,"7.! ,,<...'.,r - :;''{ef;
I;": .?i::-!l:l:'::'(;:)* 1C: :'/}lrlJfc .. ? 1 q} '\'y-, .ç n ;<.rOCU\0 Yl. : Î'5'tÉÙéid de: ]à$L"X>1 ±lÉwùii àé ti;: k r, , ',.1<"j "'"\:1"'c''''''!-'- -''.;"6 i;;;r ti"I1""1'''f\''. ,.11}or''''''''t:'m(''Ít' >toàoiitlLl% 1= la i ,j !(,31.' îll,:"ii (îes Milieux ÇlltùflùllÉ des. produ;lfr,t; çr; lhI1±ttn.:ycinc ;,:t:..\ (hH! uiJ,;;'t:Jux contcrW.l't dt.H.
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huiles vlict<;îes, des crusses <:éjétflléx> ds huiles ù;ii,ialém, des era1sQs n1alcs, des acides Gros ou des esters décides . gras comme principale source de carbone.
La milieu pout Sire additionna comme source d'azote de toute substance nutritive contenant de l'azote et n'inhibant pas la source productrice
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de kasuaamyoine ni la formation do la kasugamycino, Le miliou con-1 tient dos sois inorganiques neceslaires pour la croissance des or-1 ganismes produisant de la Hasugah/cine et stimulant la formation de la kasugamyoine. On peut égalcrent utiliser suivant I$Invonl tien une substance telle que des graines de soya broyées, des arachides boryées, etc., contenant à la fois la source d'azote et les huiles et graisses.
Les inventeurs ont répété la culture ;
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de monospoJex de StLyyt #z%ga¯ kagyy<s àiCC nc 15714 et 1;?15 avec ou M".!: =raitenent pax- les :rqOl1S ultra.violots, les rayons X
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et ICF< '\ "/'.;'< :-\'of,u.''nt nc s-ut :,:1C;l) :!'Ln trbt.c;r.ip dos aulJr;,u,.o . '-"''.;= \""1,....."",**,,,t, -i" .'.'... '-<.."",,(:', ....4<.,,, 1Iô..\"",!"') .e bouillon j - - .ati. ¯c .x .y , " .-< 1'..'." '"-y ,;.. ':11(;::: :2.. :;.;;:::;: -:i1.:(j:':t:;..ÙO.! ::.\:tf1! ;².: '.: \ .;\. :\1i'::f "j:::" ¯''O1¯.'¯; ',- DOl:t ',hT., . ., a w . :'l(t (1C' ,.i, -r, ç-y, , ,,..., .,.i. ,,-;é . ,,,,.> , SOvrC0S {1: :',l9-'h;r\ C\)V{;l:1 â, "<.. ,,:.( ;,,.JiS::;;111t".j Le a,;i.4.,3âni,c éi , 1;:" n2'od'Jct1on de ia I-:asu;asyciRC.
.":i't'ff;it C5.T5#"':;':'i.F:üJ:
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'L"- 3t¯;e de la liarugaicycine s P:ntrw .rl"ore.s..çns est inocula \ un milieu de culture inclina contenant 0,2;; de glutamate de sodium, O..2; de Y.2IW04' 0jl'i do MsClp.6HpO 0,1; de TÙ'ÎÔé*7i120> 2' À de saccharose O..2Í d'extrait de levure,
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0,5; de peptone et 1,2,1 daj3ar-agar,(pa 6,8) et incuba à 270C pen- dant 24 heures. A partir de cette culture, on introduit une
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quantité d'inoculum remplissant une bouclo de fil de platine dans un bouillon contenant 1%de glucose,en vue d'une incuba- tion de 24 heures à 27 C.
On étale dans une boite de Pétri @'un diamètre de 9 cm) 10 ml d'un milieu constitué par
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Oe5 % de glucose, 0,; de peptone et 2,O:: d'asar-Ilgar et on recouvre ce milieu au moyen d'une couche d'ensemencement faite de 5 mldu même milieu,1nooulé au moyen du bouillon de culture oï-demouojà une concentration de 5i Des disques(d'un diamètre de 8 sa) contenant l"ohant:Ll1on à essayer sont incubés à 2700 pendant 17-lÉ heures. l'éihantillon et le témoin (chlorhydrate de kasugamyc1ne pur ) sont dilues au moyen d'un tampon au phasph te ayant un pH de 7,0.
Habituellement, la katugamyoirie conduit à une inhibition sur un diamètre de 22 m%pôur une concentration de 400 microgramNes/ml, 2.- Culture agitée; l'opération est exécutée dans des ballons d'un volume de 500 ml sur une machine à mouvement alternatif (amplitude de 8 cm à 150 coups/minute) ou dans des fioles coniques d'un volume de 500 ml dans une machine rotative (200 tours/minute).
3.- Identification de la kasugamycinela kasugamycine du filtrat de la culture est adsorbée sur une résine échangeuse 'de cations dont les radicaux actifs sont des radicaux acide
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sulfoniquo et qui est du type il+ ou 1,,H Il'+e puis la lasugamyc3ns adsorbéo est 6luée au royen d'ammoniaque aqueuse diluée et, aprbs neutralisation au moyen de HCl dilué et con- centration, précipitée au moyen d'éthanol et séchée.La poudre est soumise à une électrophorèse sous haute différence de poten- tiel à savoir de 3000 volts/40 cm et comparée à la kasugamy- cine pure. Si nécessaire, le produit.est cristallisé à l'état
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de chlorhydrate dans .L'eau par addition d'&thana7..
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Diverses sources de carbone sont ajoutées à un milieu
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contenant 2,5;1 de farine de soya, 0 de Nacl, 0.,1 ' de X2UP04' 0,05% de rg50.fiHOsen vue d'établir les rendements en Itasugamy- cine dans les divers milieux. On introduit 70 ml de chaque mi-
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lieu dans chaque ballon en vue d'uno culture en ag.tateur mouvement de va-et-vient. On stérilise le milieu à 120 C pen- dant 15 minutes. On inocule une suspension de spores d'une cul-
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ture de Strebtam.y.ces lrasugapnsis.
Dans de telles conditions, le rendement le plus élevé est obtenu dans tous les cas après 6 ou 7 jours, les résultats étant ies suivants : 1360 mLcrogramwes/ml pour 3,0'7-1 de maltose, 1400 nicrogiammes/mi pour 1,0,-0' d'huile de soya, 2240 microgrammes/ml pour 2,0% d'huile de soya, 2120 micro- grammes/ml pour 3,0% d'huile de soya. Ainsi, il apparaît que l'huile de soya n'est pas inférieure au maltose comme source
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de carbone pour la production de la .asugalUycine.>mais même supérieure, Les impuretés du maltose réduisent souvent le ren- dement en kasueamyoine et pour cette raison, l'huile de soya est, en pratique, beaucoup supérieure au maltose pour la produc-
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tion.
Le maltose et ie glyoéroi ont été décrits comme étant les meilleures sources de carbone pour ia production. En utilisant le même milieu de base que celui décrit- ci-dessus) on ajoute diverses
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huiles et graisses à raison do 2, avant de cultiver suyreptomYtO..$, kasugaensis de la même façon en milieu agite. Dans cos condi- tions, les rendements les plus élèves sont les suivants :
2400 mierogrammes/ml avec l'huile de coprah, 2750 microgrammes/ml
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avec l'huile d'arachide, 1800 mici,ojr'alnlnes/mi avec 'huile d'c;li- voe 2500 m.crcüxain.mas'm1 avec l'huile do soya.. 2300 NisrograNmos/ml avec i'huile de h1n.. 2400 mico5lr'amiiies/Wl avec 1>huile de colza, 2350 tu3,crograr.me.fml avec .t'huile de coton, 2050 m1crogrammes/ml avec l'huile de baleine, 2400 micrograBimes/tal avec l'axonge, et 2300 .CX.çT,'.t'.â:.lQS1'Iw avec le beurre. Dans les essais décrits ...' dS?: âl.l=; ;.:1 farine de soya utilisuc est la poudre id,?i.':iFR3'
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des huiles et graisses. Au cas où la substance i" ist u aomne source d'azote contient des huilos et gra5,us, les-c1 peuvent être utilisées pour la production avec on sans addition d'huile.
Les huiles ou graisses de substances telles que les graines de soya, les graines d'arachide, les @
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nes de coton, etc., peuvent être utiliséas =.":û. ; oiux de <"i:J.l''''' bone pour la culture d'organisées produis"s& 0 l â.ugayeine et la. production de la kasugaaycine. lu co\rs dâun eceai vexé- cuté de la façon décrite ci-dessus en inoculant une souche prao- e,.sant de la Imsugamycille à im Siilieu contenar.c 6 jà de graines de soya broyées, q=05:: de KiIP04' 0,1 , de liac!) O,05iv de mgso 4.7p-,O, on obtient 2720 m1crogrammes/ml de kasugar.yc3:ae en 7 jours,par culture agitée. On obtient en 7 jours 2460 microgrammes/ml de kasugamycine dans un milieu contenant 8,0% de graines d'arachide broyées au lieu de graines de.soya broyées.
Les huiles et graisses sont des sources de carbone
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utiles pour la production de la kasugamycineaussi dans des milieux contenant d'autres sources d'azote que la farine de soya.
Ces composés donnent des rendements élevés en kasugamycine dans des milieux contenant de l'extrait de levure, de l'extrait de viande, de la peptone, du petit lait ou de l'azote minéral comma source d'azote. Non seulement les huiles végétales, graisses
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végétales, huiles animaies et graisses animales; 1.'111s également les acides gras et leurs esters sont des sources de carbone
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convenant pour la production de la kasueamycine, Au cours dres- sais exécutes de ia façon dcrito ci-dessus mais au Moyen d\mQ sous-culture différente de :tY m;rce,s kflW.z!tên 1,f. on u )btl::nu les quantités ci-apràs de kasuga:nyc.no dans des milieux conte- nant 2,0 d'acides cras ou leurs esters: 1050 zcrcgratrn;s/"; 1 avec l'acide palmitique; 1200 i7t:.4.C3;,,rK.:3'<"if.''5. '-.;
r's'. lucide ct411- Pique, 320 k?'..'i.'x'aI'à."';:±>,û. .W..1C le tl'isMi1'!';;tt \.lC- e:'.? :'c1,
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10" ' . : . . fl ...... ? it v o x ' e- ''-.: '.':. c.: ;+e . 1 . 1 . = µ *,J 'j.L-:.-'- r-t-'..'' ,i:"i',1.taE ?1 - ":.. - î.=j !-' ''''-'' VCC c ;, . t ' -' <t"1 <b - ' 1 <:j '5. " , 12 " ;; F ...> ;ù t: , ;u- ,'<.-'.'. r'. ' 5 1 ] l a "; ± ' Ét?,j,l ,t '?'"- '"''crrsos/. vi :. ' i:141. i + 3 J b<# lj'<>, J20 h'à,it;ç<;= ¯ (1""'r""'" (.., <..i< n 1: . de g ;ytclJc?. cL CC lcyoysic/1 avec 3,0µJ de rii.i rj. >'..i<.rfl.> T'on spulc's-'.'r'' e ilyclrol -galement les acides gras qui sont: les produits d'hydrolyse d'huiles et graisses sont utilisés pour .La production de la kasugamycine.
La souche produisant le plus de kasugamycine qui ait été obtenue donne 10.000 microgrammes/ml de kasugamycine dans un milieu com- prenant 6,0% d'huile de soya et 5,0% de farine de soya (le pH initial étant ajuste à 6,5)par culture agitée.
La présente invention concerne un procédé de production de kasugamycine par culture aérobie d'une souche produisant de la kasugamycine dans des milieux @@ntenant des glycérides, acides gras ou esters diacides gras conne principale source de carbone. Ces composés peuvent être ajoutés dès le début de la fermentation ou bien par fractions pendant la fermentation . La quantité totale d'huile ou de graisse utilisée est, en général, non inférieure à 2,0% du milieu.
La quantité la plusfavorable dépend de la souche et des conditions de fermentation, comme le degré d'aération, la nature des autres substances nutritives et
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la tenp' =: ;i faLt <iu.. ;'.1 .i ":..:ié; i,çi;rii & ?l,lcsinr<,rt; cji<e les huiles J .<' .: j, < .. à. < 5 , f:r4:t:;f;Ú:1 1. < < i ' < # ; .." i i t:1:..-,1;""f j+ i; ij i = - x<;s an''.: \r-'...:.;ic: ¯r . et- '':"'. i";1.=.. o;"';1C :','nv:cnn<.t. cE;i;:e s''"c <.' curboe prince rr.'.',' 1d"J:: . ;;r=<:#clj,on ;lc< ia puf;a::yc:e. liM-'r.ion ncs!, si,;s J.if.dtt'e auX éxéinplcs dé- crits ci-,ij>r?ii.
EXEMPLE 1. -
On introduit dans un ballon do 500 ml, puis on stéri- lise à 120 C pendant 20 minutes, 70 ml d'un milieu contenant 0,3% d'extrait de levure, 0,4% de peptone, 0,1% de K2PHO4
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-0-1'f.: ', '? 1:' r.5.: I 4. ::; 1 -:. ¯ '..; = , , ;. 5> 1., <: r d1"'\'"(" <' 1 ) , ;?;"a", 'lT à 1. t<E ,.lÎ 1 1 . ''' '¯eû ,\:,"j""\.'4.,31 j i as Î ):r-C r < 1 " ;:;.,(): ,:':'.t(1:l;t(; Î, <>0 -.:: .;\... . 'I 4' ,....... n1-. 4 ..x x s4i.r 1 Y vl,... .
F 1-' : . 1: 1;<:>" Àl..Î l ll . i>1 1 = $ .. -- .41- 9 ballonp cr'-'""1"t'''' "./1'" v>*a...>m ,.s4...n".. 5. ;Ji :>;1.#,r di
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culture 4àâ milieu agité an ;où.en de la l1Jacbine Îet souvenant ci±) va-et-vient ,% 28-300C# Pendant 3 a culture agité, on ajoute de l'huile de soya à raison de 0,5% toutes les 24 heures à quatre reprises. Dans ces conditions, la concentration moyenne
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en kasugamycine dans les 5 ballons est de 2880 microgransnes/mit Les bouillons des 5 ballons sont combinés et filtrés pour donner
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280 ml de filtrat contenant 2900 microgrammas/ml de kasugamycine.
On fait passer la filtrat sur une colonne d'un diamètre de 1 cm contenant 50 ml de résine sulfurique acide sous forme NH +. Après passage de 500 ml d'eau, on fait passer du NH40H 0,5 N pour obte- nir 32 ml d'une fraction d'élution accusant de l'activité. On neu- tralise la fraction au moyen de HCl 1N et après concentration sous vide et séchage, on obtient 2,1 g d'une poudre brunâtre claire*
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Cette poudra contient !P+O mg de kasugamycine et l'électrophorèse sous hn111.c diffcrancc do potentiel indique qua',a no contient que de la km::uf.t1i!lyc;ine cosnc substance a.n.t1:nic:robitnnc r T:é'' % a
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r:r appliquant le IPÛ\; "5^'¯aKi.r. q'. T ):,,:i- iw''" . fst4''w . g :':: . 2:."k n 4. 'v 5 tn r im r:,ta,* .y ' : '. '.'x 1" >"1 { ... , s .. az l' i, t" , ,:.â ,û'f"'o! sL"..
'nil$ol\ t.t:..,r \r':r:±\:'ún;:11t 2 ,;;: 1" 1?1t.1:-; .....- ,:t. ,,::.:..'t±l'1. ,.!oU ?'=. ''il.,,ii± OJ,.' '' '4 ù2U; <-' v",J 1,&(;., "('!."'1 #p." t.t.:! "'h'-40.:;;2V \;1.';:1/,'
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de glucose et 1 ,5)j d'huilg dO s::;ru... 0a :;.{t'<'\i').1t .; ml du 'bou1.1lofl obtenu dans 10 litros d'un miliou ccntommt 2,? du farine de soya (débarrassée d la graissa), 1 Ollei; de X2 IIPOIT 0,05%< de 4%.ISS040711200 2,2% d'huile do baleine purifiée, 0,02% do résine de silicone, comme agent antimousse (le pH étant ajusta initialement à 6,8) ayant subi une stérilisation à 1200C pendant 20 minutes dans une
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cuve de fermentation d'une capacité de 20 litres.
On exécute la fermentation au moyen d'un agitateur animé d'une vitesse de 300 tours par minute en introduisant 10 litres d'air par minute à 28 C.
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Ainsi, on obtient après 96 heures 2350 minrogrammes/ml de kasu. gamycine. On prélève 300 ml du milieu et on en extrait la kasugamyci- ne coma décrit ci-dessus pour obtenir 2,1 g d'un?poudre contenant 415 mg de kasugamycine. On dissout cette poudre dans 100 ml d'eau distillée et on la fait passer dans une colonne (d'un diamètre de 1 cm) contenant 50 ml de résine sulfurique acide (Amberlite XE-100)
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sous forme i3 et après avoir fait passer 50ù ml d'oau,
on 61ue la kasugamycine adsorbée au moyen de HC1 IMt On obtient une frac- '1 tion d'élution de 23 ml accusant une activité antimicrobienno et on l'ajuste à pH 5,0 au moyen d'une résine échangeuse d'anions
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(Amber11te IRA-411),après quoi on la concentre sous vide jusqu'à un volume de ? ml avant d'y ajouter 50 ml d'éthanol. Le chlorhy- drate de kasugamyc1nde formule 14H2509N3H01.H20cr1stallise alors on quantité do 210 mg.
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::#!.ftliJ:tJ. -
En appliquant le môme procédé que celui de l'exemple 2 on cultive une souche produisant da la kasugamycine dans une cuve de fermentation. Le milieu que contient la cuve comprend
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3,0% d'extrait de levure, 0,1% de MaCl, '0,1% de K2HP04 ' 0,0?% de Xgs04.7H20 et 2,0% d'huile de lard .
Après 92 heures, on ob- tient 2860 microgrammas/ml de kasugamycine' EXEMPLE 4.-
On introduit 1 litre d'un milieu contenant 4,0% d'huile de soya, 5,0% de farine de soya, 1,0% de glucose, 0,1% de K2HPO4 dans une fiole conique d'une capacité de 5 litres et on le stérilise à 120 C pendant 20 minutes. On y introduit aussi
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des spores d'une culture de Strptamyés as±gaensi9 et on exécute la culture en milieu agité à 2?-28 C pendant 48 heures sur une ma-
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chine rotative. On ajuste le pH initial du milieu a 6,5. On in- troduit 19 bouillon obtenu, dans 1200 litres d'un J1:t::"::'et:. C 011 o..n.Î.
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dans une cuve de fermentation en acier 1noxyct;i,,;'-, ," i4,e ...;aa té de 2000 litres.
Ce milieu contient 410 duili :,v:. 0 de farine de snya, u,1% de K2HP04' On ajusta iait;i:li:ùint ,..ô à ûl3. On exécute la fermentation à 2o C sous agitation à 200 tours/minute avec unapport d'air de 400 l1tros/r.l.tluts pend:.
2iJ. heures. On introduit le bouillon obtena dr,. : :j :â¯ros uni Milieu trouvant dans une cuve de E3i'7=iC:4es.." w.. ''';I.'! pr x3g'ta,:±'t'.i"9 d'une capacité do 25000 litres. La I11iL'" conti..r1; 5,u> d'!:ul1e de r:oyu..7,O, do farine de goya et 0,'; de K2HPO.,11'!> ri initial (Jet d ,3b 4.. On exécute la tormontat1on fi 8 C sous agitation ? 0 tours/minutes avec apport de 5000 litres !a1r/m1nute.
Après 20 heures,on ramène à 6,$',par addition d'acide phosphorique le pH qui s'est élevé jusqu'à 7,8. On ajuste le pH de cette fa- çon également à la 25 et 29 ème heure .Après $6 heures, on obtient
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2300 mierogrammes/ml de kasugamyoine, le pH étant alors de 7,2.
Après 160 heures, on obtient 5900 m1crogrammes/ml de kasugamyoine, 11 pH étant de e>Oo Après 220 heures, on obtient 7900 m1crogrammos/ml de kasugamyoine, le pH étant de 5,3* On interrompt la fermentation et on ajuste le pH à 5,0 au moyon d'acide sUlfur1queJaprès quoi on filtre le bouillon après addition de 100 kg de terre de diatomées.
On lave le tourteau avec de l'eau et on ajoute les eaux de lavage au filtrat pour obtenir 30000 litres de liqueur contenant 111 kg de kasugamycino. On fait passer le produit à travers une colonne d'un diamètre de 2,5 m contenant 5000 litres de résine sulfurique (Amberlite XE-100) sous forme Na+.Par la suite, on fait passer du NaCH 0,5N,La première fraction d'élution (4000 litres) contenant de la kasugamycine est noutre et la seconde est alcaline et ast neutralisée au moyen d'une résine carboxylique sous forme H+ (IRC-50). Au moyen d'acide sulfurique on règle à 5,0 le pH des fractions dilution combi-
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néas.
On concentre les fractions à 500 litres au !!.oyen d'un leva- porateur à couche minco et on ecnûentre la u,.C,m ? % 1",iôil.,1
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.. 3> apparail de séchage par pulvérisation. On obtient ainsi 's " .1:: 'f d'une poudre contenant 83 kg de kas ugamyc 1ne . Cette poudre 3Ey3 ar les applications en agriculture. On dissout 500 g . ''':0:, poudre dans 3500 ml d'eau distillée et on fait passer . s..:,:vn travers une colonne contenant ,1500 ml d'une résine "" ry d'anions (Amberlite xï'1w0.i sous forme OH", On fait - ' / ' $eau dans la colonne puis on ajuste 4 et0e.au moyen v4a chlorhydrique, le pli de la solution accusant l'ac - .1 .:rt: . On concentre la solution à un volume de moins d'en- ...;?1 2 litres,ce qui fait apparattre des cristaux.
On poursuit ..ca trs.tion jusqueh un volume de +00 mlsaprès quoi ! on par i'iltration les cristaux qui sont apparus après refroi" t ; <.nt. 0n obtient ainsi 155 g de chlorhydrate de kasugamycine J :1.,ùt cristallin.
REVENDICATION.
--....--.---.-.-...---....
Procédé de production de la kaougamyoinet caractérisé qu'on cultiva une souche produisant do la kasugamyoine en J.!1110u.. contenant des huiles végétales, des graisses végétales, hl.d 10$ animales ) des graisses animales) des acides gras ou des .rs d'acides grau comme principale source de carbone,en milieu i "11.') on immersion jusqu'à formation d'une quantité sensible '.sunamycine dans le milieu.