BE821742A

BE821742A - Amides a activite biologique

Info

Publication number: BE821742A
Application number: BE150110A
Authority: BE
Priority date: 1973-11-01
Filing date: 1974-10-31
Publication date: 1975-04-30
Also published as: ZA747020B

Description


  Amides à activité biologique.

  
La présente invention se rapporte à des peptides, à leurs sels d'addition d'acides et à des complexes de ces peptides avec des métaux pharmaceutiquement acceptables, ainsi qu'à la préparation de tels peptides, sels et complexes, à des compositions contenant ces peptides, sels ou complexes et au mode de préparation de telles compositions, outre à l'utilisation des peptides, sels et complexes en médecine humaine et vétérinaire.

  
Plus spécialement, la présente invention se rapporte à des analogues de l'hormone de libération (appelée ci-après facteur de libération) de l'hormone de lutéinisation (LH-RH) qui est un décapeptide de formule   <EMI ID=1.1> 

  
Les abréviations utilisées dans le présent mémoire pour les acides aminés et les radicaux qui en dérivent sont celles classiquement utilisées qui sont décrites, par exemple, dans 

  
 <EMI ID=2.1> 

  
fère aux acides aminés sous la forme L ainsi qu'à leurs radicaux,

  
si ce n'est dans le cas de la glycine et sauf indication contraire.

  
Le facteur de libération de l'hormone de lutéinisation

  
est dégagé de l'hypothalamus de mammifère dans les veines du système porte hypothalamo-hypophysaire et agit sur la glande pituitaire antérieure pour provoquer la libération de deux gonadotrophines, à savoir l'hormone de lutéinisation (LH) et l'hormone de sécrétion folliculinique (SFH). L'hormone de lutéinisation stimule la synthèse des hormones stéroïdes dans les gonades des deux sexes et, chez la femelle, induit également l'ovulation de follicules parvenus à maturité. L'hormone de sécrétion folliculinique stimule chez la femelle la croissance et la maturation des follicules ovariens et chez le mâle la croissance des tubules séminifères et les stades précoces

  
de la spermatogénèse. La maturation des spermatozoïdes chez le mâle est imposée par des androgènes dont la formation est réglée par l'hormone de lutéinisation.

  
La Demanderesse a constaté que si on écrit la séquence

  
des acides aminés du facteur de libération de l'hormone de lutéinisation sous la forme :

  

 <EMI ID=3.1> 


  
il ressort que les acides aminés sont répartis symétriquement par rapport au reste de tyrosine. On peut considérer que les acides aminés sont groupés par paires de la manière suivante, la tyrosine et l'amide de glycine ne comprenant pas de partenaire déterminés.

  

 <EMI ID=4.1> 


  
En ce qui concerne la symétrie de structure marquée,

  
il n'est pas inconcevable que cette symétrie apparaisse dans la forme active et que le récepteur présente la môme symétrie.

  
Sur base de cette hypothèse de symétrie entre le facteur de libération de l'hormone de lutéinisation et le récepteur, la Demanderesse a découvert à présent que des analogues du facteur de libération de l'hormone de lutéinisation, répondant à la formule :

  

 <EMI ID=5.1> 


  
où les symboles ont les valeurs définies ci-après, ainsi que leurs sels d'addition d'acides. manifestent une activité agoniste du facteur de libération de l'hormone de lutéinisation d ans des essais tant in vitro que in vivo. De manière générale, et aux fins de l'invention, par agoniste du facteur de libération de l'hormone

  
de lutéinisation, on entend un composé dont l'activité biologique ressemble à celle du facteur naturel. Ainsi, les composés de formule I et leurs sels d'addition d'acides induisent une augmentation de la libération de l'hormone de lutéinisation et de l'hormone de sécrétion folliculinique lors de l'incubation avec des glandes pituitaires antérieures isolées de rats, par rapport aux résultats témoins obtenus en l'absence de tels composés ou sels. 

  
Les composés de formule I et leurs sels d'addition d'acides se sont également révélés induire l'ovulation chez le hamster dont l'ovulation avait été supprimée au moyen de phénobarbital sodique de la manière décrite par Arimura et collaborateurs dans Science,
174, 511-512 (197D.

  
 <EMI ID=6.1> 

  
identiques ou différents, représente un radical phénylalanyle éventuellement substitué sur le cycle benzénique; chacun des symboles

  
 <EMI ID=7.1> 

  
 <EMI ID=8.1> 

  
présente un radical d'un acide aminé basique et W représente un radi-

  
 <EMI ID=9.1> 

  
les radicaux alkyle comptant 1 à 4 atomes de carbone et portant éventuellement un radical hydroxyle.

  
 <EMI ID=10.1> 

  
peut porter un ou plusieurs radicaux choisis parmi les radicaux alkoxy, par exemple méthoxy, alkyle, par exemple méthyle, hydroxyle, nitro et amino et les atomes d'halogène, par exemple de chlore, étant entendu que lorsque ce cycle ne porte qu'un seul substituant, celui-ci occupe de préférence la position 4 par rapport au reste de la molécule.

  
 <EMI ID=11.1> 

  
 <EMI ID=12.1> 

  
alanyle éventuellement substitués (comme décrit ci-dessus à propos

  
 <EMI ID=13.1> 

  
 <EMI ID=14.1> 

  
radicaux arginyle, lysyle, histidyle et homoarginyle.

  
Dans la mesure où les composés de formule I sont exempts

  
de radicaux séryle et tryptophyle, ils manifestent des avantages  sensibles en ce qui concerne la facilité de leur synthèse en comparaison tant avec le facteur de libération de l'hormone de lutéinisation lui-même qu'avec les analogues de ce facteur comprenant un de ces radicaux ou les deux. Une difficulté inhérente de l'introduction du radical séryle est que le radical hydroxyle qu'il comprend doit

  
être protégé lorsqu'il convient d'éviter l'0-acylation. Ainsi,

  
deux stades supplémentaires sont nécessaires dans un schéma compre-

  
 <EMI ID=15.1> 

  
radical'hydroxyle et l'élimination ultérieure du radical protecteur, la première de ces deux opérations étant d'habitude particulièrement laborieuse. Le radical triptophyle s'oxyde aisément, en particulier dans les conditions acides régnant d'habitude pour la synthèse des peptides lors de l'élimination des radicaux protecteurs,ce qui conduit à des sous-produits colorés difficiles

  
à séparer. Par conséquent, les peptides tels que le facteur de libération de l'hormone de lutéinisation contenant un radical triptophyle sont typiquement instables, inconvénient que ne présentent pas les composés de formule I.

  
Une sous-classe des composés de l'invention comprend les composés de formule I, éventuellement à l'état de sels, où chacun

  
 <EMI ID=16.1> 

  
dical phénylalanyle ou tyrosyle; X4 représente un radical glycyle

  
 <EMI ID=17.1> 

  
 <EMI ID=18.1> 

  
 <EMI ID=19.1> 

  
Une autre sous-classe des composés de l'invention comprend les composés, éventuellement sous forme de sels, répondant à la f ormule :

  

 <EMI ID=20.1> 
 

  
 <EMI ID=21.1> 

  
radical D-alanyle ou glycyle, X' représente le radical leucyle ou

  
 <EMI ID=22.1> 

  
La Demanderesse a également découvert que les analogues du facteur de libération de l'hormone de lutéinisation, éventuellement sous forme de sels d'addition d'acides, répondant à la formule :

  

 <EMI ID=23.1> 


  
 <EMI ID=24.1> 

  
 <EMI ID=25.1> 

  
radical phénylalanyle éventuellement substitué (comme décrit ci-

  
 <EMI ID=26.1> 

  
niste du facteur de libération de l'hormone de lutéinisation,comme

  
 <EMI ID=27.1> 

  
de noter que ces analogues présentent également les avantages d'une synthèse aisée mentionnés ci-dessus pour les autres composés.

  
 <EMI ID=28.1> 

  
le peptide et la nature de l'acide pour.les sels d'addition est de moindre importance,bien qu'à des fins thérapeutiques, l'acide soit de préférence pharmacologiquement et pharmaceutiquement acceptable. Des exemples de tels acides appropriés sont (a) les acides minéraux tels que les acides chlorhydrique, bromhydrique, phosphorique, métaphosphorique, nitrique et sulfurique, et (b) les acides organiques, tels que les acides tartrique, acétique, citrique, malique,

  
 <EMI ID=29.1> 

  
succinique et arylsulfoniques, comme l'acide p-toluènesultonique.

  
Les sels d'addition d'acides pharmaceutiquement et pharmacologiquement acceptables ainsi que les sels qui ne sont pas acceptables (par exemple les sels formés avec l'acide fluorhydrique

  
ou l'acide perchlorique) sont utiles pour l'isolement et la purification des peptides et, de manière évidente, les sels non acceptables sont également intéressants pour la préparation des sels acceptables suivant des techniques classiques. Les peptides contenant plusieurs radicaux amine libres peuvent être obtenus sous forme de monosels ou de polysels d'addition d'acides,ou bien sous forme de sels mixtes formés avec plusieurs acides.

  
 <EMI ID=30.1> 

  
suivant l'une quelconque des techniques classiques pour la préparation de composés de structure analogue. Ainsi, ils peuvent s'obtenir par condensation séquentielle des acides aminés convenables au moyen soit des techniques classiques de synthèse des peptides ou modes opératoires en phase solide,soit par préparation initiale et condensation ultérieure des sous-unités peptidiques. Ces réactions peuvent être menées, par exemple, par activation du radical acide carboxylique de l'acide aminé requis et protection des radicaux amino et acide carboxylique ne devant pas réagir. Ces techniques sont classiques.

   Des détails concernant les radicaux d'activation et de protection (masquage) convenables et les conditions de réaction appropriées (tant pour les condensations que pour l'élimination des radicaux protecteurs) assurant le minimum de racémisation peuvent être trouvés dans les références bibliographiques ciaprès,qui sont données simplement à titre d'exemple, sans limitation.

  
 <EMI ID=31.1> 
(d) Tilak, Tetrahedron Letters, 849 (1970). <EMI ID=32.1> 
(f) Stewart et Young, "Solide Phase Peptide Synthesis"
(W.H. Freeman et Co.) (1969).

  
Il est évident pour le spécialiste que les radicaux pyroglutamyle, arginyle et homoarginyle (Har) peuvent être intro-duits dans les composés de formules I et Ia de la manière ci-dessus,

  
 <EMI ID=33.1> 

  
blée ou bien dans une sous-unité peptidique, par conversion d'un précurseur approprié. Ainsi, les radicaux arginyle et homoarginyle peuvent être aisément formés par guanidation d'un radical ornithyle ou lysyle respectivement au moyen d'un réactif, tel que le 1-guanyl-

  
 <EMI ID=34.1> 

  
cyclisation d'un radical glutamyle ou glutaminyle qui peut lui-même être introduit sous la forme protégée convenable dans le polypeptide ou l'une de ses sous-unités, puis être débarrassé des radicaux protecteurs avant la cyclisation,comme décrit, par-exemple, dans 

  
 <EMI ID=35.1> 

  
Suivant les conditions de réaction, on obtient les compo-

  
 <EMI ID=36.1> 

  
sels d'addition d'acides. Les sels d'addition d'acides peuvent être convertis en bases libres ou en sels d'autres acides, cependant que les bases peuvent être converties en sels d'addition d'acides suivant les techniques classiques. 

  
Il est évident que les exemples ci-après de préparation des composés de formules I et la sont donnés uniquement à titre illustratif et ne limitent pas les techniques de synthèse et les conditions pouvant être appliquées. 

  
Les composés de formules I et la forment des complexes avec des métaux pharmaceutiquement acceptables, tels que le zinc, ces complexes manifestant une durée d'action in vivo après admini-  stration parentérale plus longue que celle des peptides non complexés et de leurs sels d'addition d'acides. Ces complexes peuvent être obtenus suivant des techniques analogues aux techniques classiques et, par exemple, comme décrit dans le brevet sud-africain

  
 <EMI ID=37.1>  exemple, par dissolution du peptide dans une solution aqueuse contenant un excès d'ions zinc et éventuellement aussi d'ions phosphate et par un ajustement du pH au moyen d'une solution diluée d'un hydroxyde de métal alcalin pour la précipitation du complexe. Les ions zinc peuvent provenir d'un composé ionisable du zinc comme le chlorure ou sulfate, cependant que les ions phosphate éventuellement présents peuvent dériver d'un phosphate de métal alcalin, comme le monohydrogénophosphate de sodium.

  
Ainsi, on peut obtenir les peptides de formule : 

  

 <EMI ID=38.1> 


  
 <EMI ID=39.1> 

  
 <EMI ID=40.1> 

  
tion d'acides et leurs complexes avec des métaux pharmaceutique- 

  
ment acceptables,par condensation d'un réactif de formule : 

  

 <EMI ID=41.1> 


  
 <EMI ID=42.1> 

  
en radical pyroglutamyle, ou un radical d'une séquence partielle portant un radical pyroglutamyle ou un radical cyclisable en un  radical pyroglutamyle à son extrémité portant un radical amino et  correspondant au peptide recherché défini ci-dessus, avec un réactif de formule : 

  

 <EMI ID=43.1> 


  
ou Y<2> correspond au reste du peptide recherché défini ci-dessus,

  
 <EMI ID=44.1> 

  
suivant les nécessités, comprenant éventuellement un radical ornithyle ou lysyle respectivement en remplacement d'un radical arginyle ou homoarginyle quelconque présent dans le produit recherché, puis, si la chose est nécessaire, par exécution d'un ou plusieurs  <EMI ID=45.1> 

  
ou homoarginyle respectivement, de conversion du produit en peptide on en sel d'addition d'acide et de complexation du peptide avec un 

  
 <EMI ID=46.1> 

  
Pour le choix des sous-unités peptidiques en vue de la synthèse avant la condensation finale, il est courant de tenir compte des facteurs ci-après : (i) pour réduire au minimum la racémisation, des fragments à radical glycyle C terminal sont avantageux; (ii) des fragments très peu solubles dans les solvants courants pour la synthèse des peptides sont désavantageux, et (iii) il est avantageux que les fragments soient cristallins. 

  
 <EMI ID=47.1> 

  
 <EMI ID=48.1> 

  
 <EMI ID=49.1> 

  
fragment hexapeptidique N terminal ou (d) au fragment heptapeptidi-

  
 <EMI ID=50.1> 

  
en correspondance.

  
Du fait de leur activité agoniste du facteur de libération de l'hormone de lutéinisation, comme défini et décrit ci-

  
 <EMI ID=51.1> 

  
d'acides pharmaceutiquement acceptables et leurs complexes avec des métaux pharmaceutiquement acceptables conviennent pour le traitement des mammifères en médecine tant humaine que vétérinaire lorsque l'hormone endogène naturelle, à savoir le facteur de libération de l'hormone de lutéinisation, est absente ou lorsqu'il est désirable d'accroître la teneur en l'hormone endogène.

   Ainsi, ces peptides, sels et complexes sont utiles, entre autres, pour le traitement des affections ci-après dans la mesure où celles-ci sont dues à un trouble hypothalamique, (i) chez la femelle, pour le traitement des perturbations du cycle menstruel, comme  l'aménorrhée; la stimulation de l'ovulation et la thérapie lors d'une perturbation du développement des caractères sexuels secondaires, outre (il) chez le mâle, pour l'induction de la maturation des spermatozoïdes et chez la femelle pour l'induction de l'ovulation, par exemple pour le traitement de la stérilité.

  
Une autre application des peptides, sels et complexes est leur utilisation à nouveau en médecine tant humaine que vétérinaire comme agents de diagnostic permettant de distinguer entre un trouble fonctionnel de l'hypothalamus et celui de la glande pituitaire antérieure.

  
Il est évident que, indépendamment de leur intérêt en médecine humaine, ces peptides, sels et complexes sont spécialement intéressants pour l'élevage industriel,du fait qu'ils favorisent la fécondité chez les animaux stériles ou peu féconds et favorisent ainsi la réussite de l'élevage.

  
Pour chacune des applications mentionnées ci-dessus, la quantité de peptide, sel ou complexe (appelé ci-après agent actif) requise varie évidemment tant avec la nature du constituant actif envisagé qu'avec le mode d'administration. En général, cependant, pour chacune de ces applications, la dose pour l'administration

  
 <EMI ID=52.1> 

  
 <EMI ID=53.1> 

  
 <EMI ID=54.1> 

  
kg, toutes les doses étant calculées sur la base libre, c'est-à-dire le peptide.

  
Il est possible d'administrer les agents actifs sous forme du composé chimique seul,mais il est préférable en raison

  
de leur efficacité de les présenter sous forme de compositions pharmaceutiques.

  
Les compositions de l'invention destinées tant à la médecine humaine qu'à la médecine vétérinaire comprennent un agent actif comme défini ci-dessus en association avec un ou plusieurs véhicules acceptables et éventuellement d'autres constituants thérapeutiques. Le ou les véhicules doivent être acceptables, c'est-àdire être compatibles avec les autres constituants de la composition

  
et ne pas nuire à l'organisme. Avantageusement, les compositions

  
sont exemptes d'agents oxydants et autres substances avec lesquels

  
on sait que les peptides sont incompatibles.

  
Les compositions sont notamment celles convenant pour l'usage oral, rectal, nasal, topique (buccal),vaginal ou parentéral
(notamment sous-cutané, intramusculaire et intraveineux),bien que

  
la voie la plus favorable dans un cas particulier dépende de la nature de l'agent actif. En variante, l'agent actif peut être présenté sous forme d'une composition à effet retard présentant des propriétés de dégagement lent et convenant pour l'implantation dans l'organisme, par exemple, par voie sous-cutanée,intrapéritonéale  ou intravaginale. Les compositions peuvent avantageusement être présentées sous forme de doses unitaires et être obtenues suivant

  
l'une quelconque des techniques classiques en pharmacie. Toutes les techniques comprennent l'association de l'agent actif avec le véhicule qui comprend un ou plusieurs constituants accessoires. En général, les compositions sont obtenues par mélange uniforme et intime de l'agent actif avec des véhicules liquides et/ou des véhicules solides finement divisés, puis, si nécessaire, par façonnage du produit à 

  
 <EMI ID=55.1> 

  
 <EMI ID=56.1> 

  
être présentées sous forme de doses unitaires distinctes, comme  des capsules, comprimés ou cachets contenant chacune une quantité  déterminée au préalable d'agent actif; sous forme de poudre ou de  granules ou bien sous forme d'une solution ou suspension dans un liquide aqueux ou non aqueux,ou bien sous forme d'une émulsion liquide huile-dans-eau ou eau-dans-huile. L'agent actif peut également être présenté sous forme d'un bol, d'un électuaire ou d'une pâte. 

  
Les comprimés peuvent être obtenus par pressage ou moulage éventuellement avec un ou plusieurs constituants accessoires. Les comprimés peuvent ainsi être obtenus par pressage dans une machine convenable de l'agent actif sous une forme meuble,comme une poudre ou des granules, éventuellement en mélange avec un liant, lubrifiant, diluant inerte, agent tensio-actif ou dispersant. Des comprimés peuvent aussi être obtenus par moulage dans une machine convenable d'un mélange du composé en poudre humecté d'un diluant liquide inerte. 

  
Les compositions à usage rectal peuvent être présentées sous forme de suppositoires avec les véhicules classiques, comme

  
du beurre de cacao, cependant qu'une composition convenant pour l'usage nasal consiste en gouttes nasales comprenant l'agent actif en solution aqueuse ou huileuse. 

  
Les compositions convenant pour l'application topique

  
dans la bouche sont notamment, les pastilles à sucer comprenant l'agent actif dans une base aromatisée qui est d'habitude du saccharose et de la gomme arabique ou de la gomme adragante, ainsi que sous forme de pastilles comprenant l'agent actif dans une base inerte, comme la gélatine ou de la glycérine, ou bien du saccharose et de la gomme arabique.

  
Les compositions à usage vaginal peuvent être présentées sous forme de pessaires, de crèmes, de pâtes ou de compositions

  
à pulvériser contenant, outre l'agent actif, les véhicules classiques à cette fin.

  
Des compositions à usage parentéral comprennent avantageusement des solutions aqueuses stériles de l'agent actif, ces solutions étant de préférence isotoniques, par rapport au sang. De telles compositions peuvent avantageusement être obtenues par dissolution de l'agent actif solide dans de l'eau pour l'obtention d'une solution aqueuse qui est alors rendue stérile et isotonique par rapport au sang. 

  
Un milieu convenable pour le dégagement lent en vue de l'obtention d'une composition à effet retard est le polyéthylèneglycol.

  
Il convient de noter que les compositions de l'invention peuvent comprendre, outre les constituants ci-dessus, un ou plusieurs autres constituants, comme des diluants, tampons, aromatisants, liants, tensio-actifs, épaississants, lubrifiants, agents de conservation (y compris antioxydants) et ainsi de suite.

  
Lorsque la composition destinée à la médecine humaine ou vétérinaire est présentée sous forme de doses unitaires, par exemple des doses unitaires mentionnées spécifiquement ci-dessus, chaque

  
dose contient avantageusement l'agent actif comme défini ci-dessus dans les quantités ci-après qui se réfèrent à la base libre (peptide).

  
 <EMI ID=57.1> 

  
 <EMI ID=58.1> 

  
Sous ses divers aspects, l'invention a donc pour objet : <EMI ID=59.1>  d'addition d'acides et leurs complexes avec des métaux pharmaceutiquement acceptables,
(b) des procédés de préparation des peptides, sels et complexes décrits ci-dessus,
(c) les compositions pharmaceutiques comprenant un peptide de formule 1 ou la, un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable ou un complexe avec un métal pharmacentiquement acceptable d'un tel peptide en association avec un véhicule acceptable,
(d) des procédés de préparation des compositions pharmaceutiques définies en (c) ci-dessus.
(e) un procédé pour induire la maturation des spermatozoïdes chez le mammifère mâle ou pour induire l'ovulation chez le mammifère <EMI ID=60.1>  

  
éventuellement sous forme de sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable ou de complexe avec un métal pharmaceutiquement  acceptable, et
(f) un procédé pour le traitement de la stérilité d'origine hypothalamique chez le mammifère,suivant lequel on administre au mammifère un peptide de formule I ou la, éventuellement sous forme de sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable ou de complexe avec un métal pharmaceutiquement acceptable.

  
L'invention est illustrée sans être limitée par les exemples suivants dans lesquels les températures sont données en [deg.]C. EXEMPLE 1.-

  
 <EMI ID=61.1> 

  
(composé A).

  
On prépare ce composé suivant le schéma mentionné au tableau

  
 <EMI ID=62.1> 

  
suivants :

  
Z : benzyloxycarbonyle

  
But . t-butyle

  
 <EMI ID=63.1> 

  
BOC : t-butyloxycarbonyle

  
On condense les esters activés dans du diméthylformamide

  
 <EMI ID=64.1> 

  
sations en présence de dicyclohexylcarbodiimide dans le diméthylformamide; après une réaction initiale de 30 minutes à -10[deg.], on

  
 <EMI ID=65.1> 

  
deux peptides, on incorpore au mélange de réaction 1 équivalent de 1-hydroxybenzotriazole.

  
On obtient le dipeptide (i) par saponification prudente

  
de l'ester méthylique correspondant, puis par extraction au diméthylformamide chaud et cristallisation ultérieure dans le méthanol comme schématisé au tableau ci-après. 

  

 <EMI ID=66.1> 


  

 <EMI ID=67.1> 
 

  
 <EMI ID=68.1> 

  
liques d'acides aminés protégés par un radical Z approprié.. Pour chaque condensation, on fait réagir le dérivé acylant en léger

  
 <EMI ID=69.1> 

  
 <EMI ID=70.1> 

  
On chasse le trichlorophénol des esters Z-peptide-tbutyliques par hydrogénolyse du radical Z et partage du mélange résultant de peptide partiellement protégé et de trichlorophénol

  
 <EMI ID=71.1> 

  
nolyse dans du méthanol sous la pression atmosphérique au moyen de

  
 <EMI ID=72.1> 

  
décrite. Après la lyophilisation de l'extrait aqueux et trituration du résidu solide en présence d'éther, on obtient le H-Gly-Leu-OBut à l'état cristallin. Le produit obtenu par condensation de Z-Tyr-OCP avec H-Gly-Leu-OBu est obtenu initialement sous forme d'une huile qu'on purifie alors par traitement d'une solution méthanolique du produit brut avec la résine échangeuse d'anions fortement basique du type polystyrène vendue sous le nom de DOWEX 2.

  
On condense le dipeptide (i) et l'ester pentapeptidique
(ii) en présence de dicyclohexylcarbodiimide et de 1-hydroxybenzotriazole. En raison de la faible solubilité du composé (i) dans le diméthylformamide, on exécute la réaction dans un mélange de diméthylformamide et d'eau. 

  
Par traitement de l'ester heptapeptidique (iii) résultant avec de l'acide trifluoroacétique en présence d'anisole, on obtient le composé (iv) qu'on purifie par chromatographie sur une colonne de silice. 

  
On prépare l'éthylamide de Z-Pro-OH par condensation avec

  
 <EMI ID=73.1> 

  
sépare par extraction exhaustive avec de l'eau du dipeptide un

  
peu plus hydrophile de la solution dans l'acétate d'éthyle du mélange. Le produit (v) obtenu par lyophilisation des extraits aqueux est pur à la chromatographie en couche mince et présente l'analyse élémentaire voulue.

  
Après élimination des radicaux protecteurs du composé (v)

  
au moyen d'acide chlorhydrique dans de l'acide acétique, on condense le dipeptide (vi) avec le composé (iv) en présence de dicyclohexyl-  carbodiimide et de 1-hydroxybenzotriazole. On hydrogène alors le  produit de réaction (vii) pour obtenir le composé (A) brut dans  les mêmes conditions et en présence du même catalyseur que ci-dessus,

  
 <EMI ID=74.1> 

  
méthanol, d'eau et d'acide acétique. On purifie le produit final 
(sous forme du diacétate comme sel d'addition) d'abord par chromatographie sur une colonne de silice, puis par chromatographie avec gradient d'élution sur de la carboxyméthylcellulose.

  
Le produit donne une réaction positive au réactif de Pauly

  
 <EMI ID=75.1> 

  
tement au moyen du réactif général pour les peptides comprenant de l'hypochlorite de t-butyle, de l'iodure de potassium et de l'amidon ne conduit qu'à une seule tache. Le produit sous forme du diacétate d'addition se comporte comme un seul constituant lors de la chromatographie en couche mince au moyen,comme système solvant, d'un

  
 <EMI ID=76.1>  pendant 24 heures, on obtient les rapports d'acides aminés ci-après:

  
 <EMI ID=77.1> 

  
Isolement : 91% (calculé sous forme du diacétate). Caractérisation  <EMI ID=78.1> 

  
On mesure le pouvoir rotatoire sur le polarimètre automatique Bendix-WPL.

  
EXEMPLE 2. -

  
Par un mode opératoire analogue à celui de l'exemple 1, on prépare et on purifie les peptides ci-après :

  

 <EMI ID=79.1> 


  
Durant les synthèses, on assemble initialement les fragments peptidiques intermédiaires sous une forme protégée, puis on les condense entre eux pour produire le produit final de la manière suivante : 

  

 <EMI ID=80.1> 


  
On obtient sans difficulté,à partir de Z-(BOC)-Lys-OCP

  
 <EMI ID=81.1>  au cas du composé (v) de l'exemple 1. Par hydrogénolyse dans les conditions de l'exemple 1, puis condensation donnant les deux heptapeptides appropriés, on obtient les analogues (C) et (D).

  
Chacun des composés (B), (C) et (D) (sous forme du diacétate d'addition) se comporte comme un seul constituant à la chromatographie en couche mince avec chacun des trois systèmes solvants

  
de l'exemple 1. Le composé (B) donne une réaction positive au réactif de Sakaguchi et les composés (B), (C) et (D) donnent une réaction positive au réactif de Pauly et ne donnent qu'une seule tache avec le système hypochlorite de t-butyle/iodure de potassium/amidon.

  
Après hydrolyse comme à l'exemple 1, les rapports des acides aminés sont les suivants :
(B) Glu : 1,04 Phe : 0,97 Gly : 2,01 Tyr : 0,97 Leu : 1,00

  
Pro : 0,95

  
 <EMI ID=82.1> 

  
(C) Glu : 1,00 His : 0,97 Phe : 0,96 Ala : 0,99 Tyr : 0,96

  
 <EMI ID=83.1> 

  
Isolement : 90% (calculé sous forme du diacétate).

  
(D) Glu : 1,03 His : 1,02 Phe : 0,98 Gly : 2,03 Tyr : 0,98

  
Leu : 1,00 Lys : 1,02 Pro : 0,88

  
Isolement : 90% (calculé sous forme du diacétate). Caractérisation <EMI ID=84.1> 

  
pour le composé (B) -50,2[deg.] (C = 1); pour le composé (C) -63,0[deg.]
(C = 0,33); et pour le composé (D) -50,8[deg.] (C = 1).

  
(b) Spectre d'absorption dans l'ultraviolet (dans l'hydroxyde de <EMI ID=85.1>  

EXEMPLE &#65533;.-

  
 <EMI ID=86.1> 

  
(composé F).

  
On prépare ces composés par guanidation des restes de lysine 8 des composés (C) et (D) respectivement de l'exemple 2 ci-dessus. Des détails spécifiques de la préparation du composé (E) sont mentionnés ci-après.

  
 <EMI ID=87.1> 

  
nyrazole dans 1 ml de diméthylformamide et on ajuste le pH de la solution à 9 - 10 au moyen de triéthylamine à 10% dans le diméthylformamide.On ajoute alors une solution de 70 mg (0,059 millimole) du composé (C) dans 1 ml de diméthylformamide et on laisse reposer le mélange à la température ambiante pendant 4 jours. Après avoir chassé le solvant, on triture le produit brut dans l'éther et on

  
le purifie sous forme du diacétate d'addition par chromatographie avec gradient de concentration sur la carboxyméthylcellulose.

  
Le produit purifié (sous forme du diacétate d'addition) donne à la chromatographie une seule tache qui est positive au réactif de Pauly et au réactif de Sakaguchi dans chacun des trois systèmes solvants mentionnés à l'exemple 1 pour la chromatographie en couche mince.

  
Après hydrolyse comme à l'exemple 1, on détermine les rapports d'acides aminés ci-après :

  
Glu : 1,13 His : 0,96 Phe : 0,98 Ala : 1,01 Tyr : 0,96

  
Gly : 0,99 Leu : 1,00 Har : 0,99 Pro : 0,98 

  
On convertit exactement de la même manière le composé (D) en composé (F). Le produit (sous forme de diacétate d'addition)

  
est homogène à la chromatographie dans les trois systèmes solvants décrits précédemment et présente les rapports d'acides aminés cidessous,après hydrolyse acide comme à l'exemple 1 :

  
 <EMI ID=88.1>  Tyr : 0,98 Leu : 1,00 Har : 0,97 Pro : 0,96 EXEMPLE 4.-

  
 <EMI ID=89.1> 

  
des acides aminés benzyloxycarbonylés de la manière décrite à l'exemple 1 (voir au tableau).

  
On condense le chlorhydrate du 1-méthyl-5-aminométhyltétrazole avec l'ester p-nitrophénylique de la benzyloxycarbonylproline dans le diméthylformamide en présence de 1 équivalent de triéthylamine. On agite le mélange de réaction à la température ambiante pendant une Luit, puis on le traite pour obtenir un produit cristallin fondant à 91-92[deg.]. On élimine le radical benzyloxy-

  
 <EMI ID=90.1> 

  
5-aminométhyl)tétrazole résultant avec le BOC-Arg(N02)-OH dans le diméthylformamide (BOC a la signification de l'exemple 1) par le procédé au diimide. Cette réaction s'accompagne de la formation d'un lactame comme décrit à l'exemple 1 et on sépare le produit recherché du lactame constituant l'impureté suivant un mode d'extraction semblable. Par lyophilisation de l'extrait aqueux, on obtient un produit (il) qui est pur à la chromatographie en couche mince et présente l'analyse élémentaire voulue. 

  
Après avoir éliminé les radicaux protecteurs du composé

  
 <EMI ID=91.1> 

  
et.avoir neutralisé le mélange avec la triéthylamine, on condense le dipeptide avec le composé (i) en présence de dicyclohexylcarbodiimide et d'hydroxybenzotriazole. On chasse le radical nitro par hydrogénolyse et on purifie le produit résultant (sous forme de l'acétate d'addition) sur de la carboxyméthylcellulose.

  
Le produit (sous forme de l'acétate d'addition) donne une réaction positive au réactif de Pauly et au réactif de Sakaguchi et présente,après hydrolyse acide comme décrit à l'exemple l,les rapports d'acides aminés ci-après :

  
 <EMI ID=92.1> 

  
Isolement : 93% (calculé sous forme de l'acétate).

  
Caractérisation

  
 <EMI ID=93.1> 

  
Dans la description ci-après, BOC représente le radical t-butyloxycarbonyle et Bzl représente le radical benzyle.

  
On synthétise les composés (H) à (M) ci-dessus à partir

  
 <EMI ID=94.1> 

  
chaque cas, on exécute les cinq stades de condensation suivants suivant le mode opératoire répétitif avec excès d'anhydride mixte

  
 <EMI ID=95.1> 

  
reté au terme de chaque stade intermédiaire par chromatographie en couche mince. On introduit le reste de tyrosine dans chacun des composés à partir de BOC-Tyr(Bzl)-OH et on exécute un lavage soigneux pour éliminer l'excès de ce composé du peptide isolé. On condense alors chacun des heptapeptides correspondant à la séquence partielle 3-9 des composés (H) à (M) avec du &#65533;lu-His-OH en présence de dicyclohexylcarbodiimide et de 1-hydroxybenzotriazole. On sépare facilement les composés de départ éventuellement inchangés du pro-

  
 <EMI ID=96.1>  des radicaux protecteurs restants par hydrogénation.

  
Des détails expérimentaux spécifiques de la préparation du composé (H) sont mentionnés ci-après.

  
 <EMI ID=97.1> 

  
acétique et d'acide chlorhydrique N pendant 30 minutes à la tempé-

  
 <EMI ID=98.1> 

  
fie le résidu par trituration dans l'éther. On collecte par filtration le peptide débarrassé des radicaux protecteurs qu'on sèche soigneusement sur du pentoxyde de phosphore et des pastilles d'hydroxyde de sodium, puis qu'on dissout dans 15 ml de diméthylforma-

  
 <EMI ID=99.1> 

  
la solution du composé aminé dans le diméthylformamide et on agite le mélange à -15[deg.]C pendant 2 heures et 30 minutes. On élève alors la température à 0[deg.] et on décompose l'excès d'anhydride mixte par

  
 <EMI ID=100.1> 

  
tes d'agitation à 0[deg.], on verse le mélange sur 200 ml d'une solu-

  
 <EMI ID=101.1> 

  
huileux avec deux fractions de 150 ml d'acétate d'éthyle. On lave les extraits dans l'acétate d'éthyle combinés avec 40 ml d'une solu-

  
 <EMI ID=102.1> 

  
chage sur du sulfate de magnésium et évaporation du solvant, on solidifie le produit par trituration dans l'éther,de manière à obte-

  
 <EMI ID=103.1>  ce produit par chromatographie en couche mince avec les trois systèmes solvants de l'exemple 1. 

  
Par une autre succession d'éliminations des radicaux pro-  tecteurs et da copulations avec un excès d'anhydride mixte s'exécutant exactement comme décrit ci-dessus, on prépare les peptides intermédiaires ci-après qui sont purs à la chromatographie : 

  
 <EMI ID=104.1> 

  
La seule variante dans la technique réside dans le traitement après la décomposition de l'excès d'anhydride mixte. Pour l'hexapeptide et l'heptapeptide, on verse le mélangé de réaction sur de l'eau et on isole par filtration le produit solide qu'on lave et qu'on 

  
 <EMI ID=105.1> 

  
(sous forme du chlorhydrate d'addition) dans 10 ml de diméthyl-  formamide et on neutralise la solution avec 101 mg de N-méthylmorpholine dans 1 ml de diméthylformamide. On ajoute 319 mg (1,2 millimole) '

  
 <EMI ID=106.1> 

  
mole) de 1-hydroxybenzotriazole dans 2,5 ml de diméthylformamide.  On ajoute un supplément de 6 ml de diméthylformamide et on refroidit 

  
 <EMI ID=107.1> 

  
 <EMI ID=108.1> 

  
 <EMI ID=109.1> 

  
d'acide acétique et on porte la température à 20[deg.] pendant 30 mi-  nutes avant de séparer la dicyclohexylurée par filtration. On con-  centre le filtrat sous vide et on triture le résidu successivement  en présence d'éther, de carbonate de sodium à 5% et d'eau. 

  
On élimine les radicaux protecteurs en chaîne latérale

  
par hydrogénation pendant 24 heures dans 30 ml de méthanol, 6 ml

  
 <EMI ID=110.1> 

  
 <EMI ID=111.1>   <EMI ID=112.1> 

  
on filtre la solution pour séparer un peu de dicyclohexylurée et on dilue alors le filtrat jusqu'à 100 ml avec de l'eau avant de lyophiliser le mélange. On purifie le produit sur une colonne de carboxyméthylcellulose avec élution au moyen d'acétate d'ammonium 

  
 <EMI ID=113.1> 

  
posé(H)recherché en rassemblant les fractions convenables et en ré-  pétant la lyophilisation pour séparer l'acétate d'ammonium. Le pro-  duit se révèle pur à la chromatographie en couche mince avec chacun  des trois systèmes solvants de l'exemple 1.

  
 <EMI ID=114.1> 

  
 <EMI ID=115.1> 

  
dicyclohexylcarbodiimide et de 1-hydroxybenzotriazole de la manière mentionnée ci-dessus pour le composé (H). Chacun des composés (K), 

  
(L) et (M) se révèle pur à la chromatographie en couche mince avec

  
les trois systèmes solvants de l'exemple 1. 

  
Après hydrolyse acide comme à l'exemple 1, on détermine les  rapports d'acides aminés ci-après :  Composé (H) Glu : 1,03 His : 0,97 Phe : 2,00 Ala : 0,95 

  
Tyr : 1,04 Gly : 0,97 Arg : 0,94 Pro : 0,96 

  
 <EMI ID=116.1> 

  
 <EMI ID=117.1> 

  
Composé (L) Glu : 1,05 His : 1,03 Tyr : 0,99 Ala : 1,02

  
Phe : 1,00 Gly : 1,07 Leu : 1,00 -Arg : 0,94 Pro : 1,02

  
 <EMI ID=118.1> 

  
Composé (M) Glu : 1,02 His : 0,99 Phe : 0,96 Ala : 0,98

  
 <EMI ID=119.1>  

  
Pouvoirs rotatoires (c = 1 dans l'acide acétique à 1%) 

  

 <EMI ID=120.1> 


  
 <EMI ID=121.1> 

  
Compositions pharmaceutiques. 

  
On prépare deux séries de compositions détaillées ci-après. 

  
 <EMI ID=122.1> 

  
 <EMI ID=123.1> 

  
de formule I est le composé (K) de l'exemple 5. Pour chaque composi-  tion, le composé voulu est présent sous forme du diacétate d'addition, mais la quantité mentionnée ci-après est déterminée par rapport à la base libre, c'est-à-dire au peptide.

  
(i) Comprimés (par comprimé).

  

 <EMI ID=124.1> 


  
On mélange intimement le composé de formule I avec l'amidon et le lactose et on granule le mélange au moyen d'une solution de la polyvinylpyrrolidone dans de l'eau. On sèche ensuite les granules, on ajoute le stéarate de magnésium et on prépare les comprimés par pressage. 

  
(il) Pessaires (par pessaire).

  

 <EMI ID=125.1> 


  
On forme une pâte lisse avec le composé de formule I et

  
un peu du beurre de cacao fondu à une température n'excédant pas
450. On incorpore alors la pâte au reste du beurre de cacao en fusion et on verse le mélange dans desmoules lubrifiés convenables dans lesquels on le laisse faire prise. 

  
(iii) Comprimés vaginaux (par comprimé).

  

 <EMI ID=126.1> 


  
On mélange intimement le composé de formule I avec l'amidon et le lactose et on granule le mélange avec une solution de polyéthylèneglycol 6000 dans de l'eau. On sèche les granules, on ajoute

  
le stéarate de magnésium et on forme des comprimés par pressage

  
dans une matrice de forme convenable. 
(iv) Solutions à injecter. 

  

 <EMI ID=127.1> 


  
On dissout le composé de formule (I) dans les 9/10 du vo-  lume final d'eau dont le pH a été ajusté à 3,0 - 4,0 au moyen d'acide  acétique dilué. On ajoute alors le chlorocrésol qu'on dissout et 

  
on ajuste le volume du mélange au moyen du reste de l'eau. On stéri- 

  
 <EMI ID=128.1> 

  
cron,puis on la répartit de manière aseptique dans des ampoules de
10 ml. On ferme chacune des ampoules au moyen d'un bouchon de caoutchouc stérile qu'on fixe en place avec un collier d'aluminium.

  
Les trois solutions décrites contiennent respectivement

  
 <EMI ID=129.1> 

  
EXEMPLE 7 . - 

  
 <EMI ID=130.1> 

  
(composé N). 

  
On condense le pentapeptide H-Phe-Ala-Tyr-Gly-Leu-OBu t  obtenu à l'exemple 1 avec du &#65533;Glu-His-OH en présence de dicyclo-  hexylcarbodiimide et de 1-hydroxybenzotriazole dans du diméthyl-

  
 <EMI ID=131.1> 

  
On débarrasse ce dernier des radicaux protecteurs dans l'acide trifluoracétique contenant de l'anisole (pendant 1 heure à la température ambiante) et on purifie l'heptapeptide résultant par chromatographie sur colonne sèche de gel de silice au moyen, comme éluant, d'un mélange 60:45:20 de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque d'une densité de 0,880. On condense le produit purifié avec du

  
 <EMI ID=132.1> 

  
benzotriazole dans du diméthylformamide, puis on débarrasse l'octa-  peptide résultant des radicaux protecteurs dans de l'acide trifluorc-  acétique et de l'anisole, c'est-à-dire qu'on élimine le radical  t-butyle d'estérification. Par une nouvelle condensation avec le  H-Pro-NH.C2H5 en présence de carbodiimide et de triazole dans du  diméthylf ormamide comme ci-dessus, on obtient le nonapeptide brut  recherché N. On purifie le produit d'abord par chromatographie avec

  
 <EMI ID=133.1> 

  
par chromatographie sur une colonne sèche de gel de silice au moyen du mélange 60:45:20 de chloroforme, de méthanol et d'acide acétique à 32%. A titre de purification finale, on fait passer le produit

  
 <EMI ID=134.1> 

  
à 2%. Le produit final, sous forme d'acétate d'addition, a une réaction positive au réactif de Pauly et est pur à la chromatographie

  
en couche mince avec chacun des trois systèmes solvants de l'exemple 1

  
Après hydrolyse acide comme à l'exemple 1, on détermine

  
les rapports d'acides aminés ci-après 

  

 <EMI ID=135.1> 


  
 <EMI ID=136.1> 

  
 <EMI ID=137.1> 

  
acétique à 1%). 

  
EXEMPLE 8.-

  
 <EMI ID=138.1> 

  
(composé P).

  
On condense le pentapeptide H-Phe-Gly-Tyr-Gly-Leu-OBut

  
 <EMI ID=139.1> 

  
hexylcarbodiimide et de 1-hydroxybenzotriazole dans du diméthylformamide aqueux et on débarrasse le produit des radicaux protecteurs dans un mélange d'acide trifluoracétique et d'anisole (1 heure à la température ambiante). On purifie l'heptapeptide résultant par chromatographie sur une colonne sèche de gel de silice au moyen

  
 <EMI ID=140.1> 

  
puis on le condense avec du H-Phe -OBut en présence du carbodiimide et du triazole comme précédemment. Après élimination des radicaux protecteurs dans un mélange d'acide trifluoroacétique et d'anisole

  
 <EMI ID=141.1> 

  
carbodiimide et de triazole comme précédemment, on obtient le nonapeptide brut recherché (P). On purifie ce dernier par chromatographie avec gradient de concentration sur de la carboxyméthylcellulose.

  
Le composé (P) purifié (sous forme d'acétate d'addition) donne une réaction positive au réactif de Pauly et se comporte comme un seul composé à la chromatographie en couche mince avec chacun des trois systèmes solvants de l'exemple 1.

  
Après hydrolyse acide comme à l'exemple 1, on détermine les rapports d'acides aminés ci-après :

  
Glu : 1,07 His : 1,00 Phe : 2,01 Gly : 2,03 Tyr : 0,99

  
Leu : 1,00 Pro : 0,87

  
Isolement : 96% (calculé sous la forme d'acétate).

  
 <EMI ID=142.1> 

  
acétique à 1%).

Claims

REVENDICATIONS

1.- Peptide de formule: <EMI ID=143.1> <EMI ID=144.1>

sente un radical phénylalanyle éventuellement substitué sur le

<EMI ID=145.1>

férents, représente un radical glycyle, alanyle (D- ou L-) ou

<EMI ID=146.1>

<EMI ID=147.1>

dical d'un acide aminé basique ou le radical glycyle ou phénylalanyle éventuellement substitué sur le cycle benzénique, et W représente un

<EMI ID=148.1>

les radicaux alkyle comptant 1 à 4 atomes de carbone et portant éventuellement un radical hydroxyle, toutes les références se rapportant aux acides aminés sous forme L et à leurs radicaux, si ce

n'est pour la glycine et sauf indication contraire, ainsi que ses sels d'addition d'acides et ses complexes avec des métaux pharmaceutiquement acceptables.

2.- Peptide de formule :

<EMI ID=149.1>

<EMI ID=150.1>

férents, représente un radical glycyle, alanyle ou asparaginyle;

<EMI ID=151.1>

<EMI ID=152.1>

basique et W représente un radical amide de glycine ou un radical <EMI ID=153.1>

1 à 4 atomes de carbone et portant éventuellement un radical hydroxyle, toutes les références se rapportant aux acides aminés sous forme L et à leurs radicaux, si ce n'est pour la glycine.

3.- Peptide, sel d'addition d'acide ou complexe suivant

<EMI ID=154.1>

glycyle ou phénylalanyle éventuellement substitué sur le cycle benzénique.

4.- Peptide, sel d'addition d'acide ou complexe suivant la revendication 1 ou 3, dans la formule duquel au moins un des symboles X4 et X6 représente le radical D-alanyle.

<EMI ID=155.1>

<EMI ID=156.1>

X7 représente le radical leucyle, isoleucyle, valyle ou phénylalanyle éventuellement substitué sur le cycle benzénique.

6.- Peptide ou sel d'addition d'acide suivant la reven-

<EMI ID=157.1>

ou phénylalanyle éventuellement substitué sur le cycle benzénique.

7.- Peptide, sel d'addition d'acide ou complexe suivant l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans la formule duquel

X8 représente un radical arginyle, lysyle, histidyle ou homoarginyle, comme approprié.

8.- Peptide, sel d'addition d'acide ou complexe suivant l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans la formule duquel

<EMI ID=158.1>

tuellement substitué sur le cycle benzénique par un ou plusieurs radicaux choisis parmi les radicaux méthoxy, méthyle, hydroxyle, nitro et amino et l'atome de chlore.

9.- Peptide, sel d'addition d'acide ou complexe suivant la revendication 1, dans la formule duquel chacun des symboles X<3> <EMI ID=159.1>

<EMI ID=160.1>

<EMI ID=161.1>

<EMI ID=162.1>

lysyle ou homoarginyle et W représente un radical N-alkylamino . dont le radical alkyle compte 1 ou 2 atomes de carbone, ou bien

<EMI ID=163.1>

10.- Peptide, sel d'addition d'acide ou complexe suivant la revendication 1, dans la formule duquel X<3> représente le radical

<EMI ID=164.1>

présente le radical tyrosyle; X représente un radical D-alanyle ou glycyle; X7 représente le radical leucyle ou phénylalanyle; X8 représente un radical arginyle et W représente un radical N-alkylamino dont le radical alkyle compte 1 ou 2 atomes de carbone.

<EMI ID=165.1>

aminométhyltétrazole suivant la revendication 1 et ses sels d'addition d'acides.

<EMI ID=166.1> suivant la revendication 1 et ses sels d'addition d'acides.

<EMI ID=167.1>

d'un peptide suivant l'une quelconque des revendications 1 à 23.

25.- Sel d'addition de l'acide acétique d'un peptide suivant l'une quelconque des revendications 1 à 23.

26.- Complexe avec un métal pharmaceutiquement acceptable d'un peptide suivant l'une quelconque des revendications 1 à 23,

27.- Complexe avec le zinc d'un peptide suivant l'une quelconque des revendications 1 à 23.

28.- Procédé de préparation d'un peptide, sel d'addition d'acide ou complexe suivant l'une quelconque des revendications 1 à 27, caractérisé en ce qu'on condense un réactif de formule :

<EMI ID=168.1>

<EMI ID=169.1>

en radical pyroglutamyle, ou un radical d'une séquence partielle portant un radical pyroglutamyle ou un radical cyclisable en un radical pyroglutamyle à son extrémité portant un radical amino et correspondant au peptide recherché défini ci-dessus, avec un réactif de formule :

<EMI ID=170.1>

<EMI ID=171.1>

<EMI ID=172.1> <EMI ID=173.1>

activés lorsque la chose est nécessaire,et les radicaux Y et Y , suivant les nécessités, comprenant éventuellement un radical ornithyle ou lysyle respectivement en remplacement d'un radical arginyle ou homoarginyle quelconque présent dans le produit recher- ché, après quoi, si la chose est nécessaire, on exécute un ou plu- sieurs stades d'élimination de radicaux protecteurs du produit, de cyclisation du radical N terminal en radical pyroglutamyle, de guanidation d'un radical ornithyle ou lysyle éventuel en le radical arginyle ou homoarginyle respectivement, de conversion du produit

en peptide ou en sel d'addition d'acide et de complexation du peptide avec un métal pharmaceutiquement acceptable.

29.- Procédé suivant la revendication 28, caractérisé en

<EMI ID=174.1>

N terminal du peptide recherché.

30.- Procédé suivant la revendication 28, caractérisé en ce que le réactif de formule Y -OH correspond au fragment heptapeptidique N terminal du peptide recherché.

31.- Procédé suivant la revendication 28, caractérisé en ce que le réactif de formule Y -OH correspond au fragment octapeptidique N terminal du peptide recherché.

32.- Procédé suivant la revendication 28, caractérisé en ce que le réactif de formule Y -OH comprend un radical glycidyle

en position C terminale.

33.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 28 à 32, caractérisé en ce qu'on exécute la condensation en présence de dicyclohexylcarbodiimide et de 1-hydroxybenzotriazole.

<EMI ID=175.1>

ce qu'on exécute la condensation en présence de diméthylformamide comme solvant.

35.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications

<EMI ID=176.1>

le radical pyroglutamyle en position N terminale. 36.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications

<EMI ID=177.1>

<EMI ID=178.1>

amide suivant la revendication 1 ou l'un de ses sels d'addition d'acides.

38.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications

<EMI ID=179.1>

avec le zinc en dissolvant le peptide dans une solution aqueuse contenant un excès d'ions zinc et en ajoutant un hydroxyde de métal alcalin dilué.

39.- Peptide ou sel d'addition d'acide ou complexe suivant l'une quelconque des revendications 1 à 27, obtenu par un procédé suivant l'une quelconque des revendications 28 à 38.

<EMI ID=180.1>

amide, ses sels d'addition d'acides et ses complexes suivant la revendication 1, obtenu par un procédé suivant l'une quelconque des revendications 28 à 38.

41.- Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un peptide éventuellement sous forme de sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable ou de complexe avec un métal pharmaceutiquement acceptable, suivant l'une quelconque des revendications 1 à 27, en association avec un véhicule acceptable.

<EMI ID=181.1>

en ce qu'elle comprend le peptide ou un de ses sels d'addition d'acides en association avec le véhicule.

<EMI ID=182.1>

en ce que le peptide est présent sous forme de complexe avec le zinc.

44.- Composition suivant l'une quelconque des revendications

<EMI ID=183.1> <EMI ID=184.1>

<EMI ID=185.1>

de doses unitaires.

48.- Composition suivant l'une quelconque des revendica-

<EMI ID=186.1>

en ce qu'elle convient pour l'administration par voie nasale ou parentérale et comprend le peptide, éventuellement sous forme de

<EMI ID=187.1>

à calculer en peptide, par dose unitaire.

<EMI ID=188.1>

en ce qu'elle convient pour l'administration par voie orale ou vaginale et comprend le peptide, éventuellement sous forme de sel

<EMI ID=189.1>

à calculer en peptide, par dose unitaire.

<EMI ID=190.1>

en ce qu'elle se présente sous forme de comprimés.

<EMI ID=191.1>

en ce qu'il s'agit d'une solution ou d'une suspension stérile.

53.- Procédé de préparation d'une composition pharmaceu-

<EMI ID=192.1>

térisé en ce qu'on mélange le peptide, éventuellement sous forme de sel d'addition d'acide ou de complexe.avec le véhicule acceptable.

54.- Composition pharmaceutique suivant l'une quelconque

<EMI ID=193.1>

revendication 53. 55.- Procédé de traitement de la stérilité d'origine hypothalamique chez un mammifère, caractérisé en ce qu'on administre au mammifère un peptide,éventuellement sous forme de sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable ou de complexe avec un métal pharmaceutiquement acceptable,suivant l'une quelconque des revendications 1 à 27.

56.- Procédé pour induire la maturation des spermatozoïdes chez le mammifère mâle ou l'induction de l'ovulation chez le mammifère femelle, caractérisé en ce qu'on administre au mammifère un peptide, éventuellement sous forme de sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable ou de complexe avec un métal pharmaceutiquement acceptable, suivant l'une quelconque des revendications 1 à 27.

<EMI ID=194.1>

un métal pharmaceutiquement acceptable, en substance comme décrit dans l'une quelconque des revendications 1 à 27, avec référence

<EMI ID=195.1>

58.- Procédé de préparation d'un peptide, éventuellement sous forme de sel d'addition d'acide ou de complexe avec un métal pharmaceutiquement acceptable,suivant l'une quelconque des revendications 1 à 27, en substance comme décrit ci-dessus avec

<EMI ID=196.1>

59.- Composition pharmaceutique qui comprend un peptide, éventuellement sous forme de sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable ou de complexe avec un métal pharmaceutiquement acceptable,suivant l'une quelconque des revendications 1 à 27,en association avec un véhicule acceptable, en substance comme décrit

<EMI ID=197.1> NOTE D'INFORMATION

La société :THE WELLCOME FOUNDATION LIMITED, titulaire

<EMI ID=198.1>

à activité biologique" signale les erreurs matérielles suivantes dans le mémoire descriptif déposé à l'appui de ce brevet:

<EMI ID=199.1>

La soussignée n'ignore pas qu'aucun document joint au dossier d'un brevet d'invention ne peut être de nature à apporter, soit à la description, soit aux dessins, des modifications de fond et déclare que le contenu de cette note n'apporte pas de telles modifications et n'a d'autre objet que de signaler une ou plusieurs erreurs matérielles.

Elle reconnaît que le contenu de cet�e note ne peut avoir pour effet de rendre valable totalement ou partiellement le brevet n[deg.] 821.742 si celui-ci ne l'était pas en tout ou en partie en vertu de la législation actuellement en vigueur.

Elle autorise l'Administration à joindre cette note au dossier du brevet et à en délivrer photocopie.