BE835074A - Vaccin contre la rhinotracheite virale des felides et procede pour le preparer - Google Patents

Description

  Vaccin contre la rhinotrachéite virale des félidés et procédé pour

  
le préparer.

  
 <EMI ID=1.1> 

  
provoque chez ceux-ci une rhinotrachéite qualifiée par les auteurs

  
Anglo-Saxons de "féline viral rhinotracheitis", de même qu'un

  
 <EMI ID=2.1> 

  
active. L'invention concerne en particulier un procédé pour atténuer le virus herpétique des félidés par des passages en série

  
de ce virus dans des cultures de tissu un certain nombres de fois

  
et dans des conditions d'incubation telles que le virus devienne

  
 <EMI ID=3.1>  ractère antigénique,

  
La rhinotrachéite virale des félidés est une infection spécifique par le virus herpétique chez le chat. Le virus herpétique des félidés provoque en particulier une infection et se nultiplie dans les cellules épithéliales du nez, de la cavité buccale et de

  
la trachée et il provoque de la nécrose s'accompagnant d'éternue-

  
 <EMI ID=4.1> 

  
est également attaqué avec établissement d'une grave conjonctivite. Les bronches et bronchioles majeures peuvent parfois être infectées aussi. A l'occasion, l'épithélium de la langue est attaqué et conduit à une inflammation ulcéreuse de cette dernière. La maladie

  
se manifeste par le développement de la conjonctivite,du catarrhe oculaire et nasal et des éternuements. Dès son premier isolement,

  
il est apparu que le virus herpétique est généralement présent chez le félidé normal.

  
Le virus herpétique de la rhinotrachéite virale des félidés est un virus à acide désoxyribonucléique spécifique de l'espèce. les félidés sont les seuls hôtes sur lesquels ce virus est

  
isolé. Le virus peut être propagé dans des cultures de cellules

  
de chat,mais jusqu'à présent ne peut encore l'être dans d'autres systèmes comme des cultures de cellules de tissus animaux appartenant à d'autres espèces, des oeufs embryonnés ou des animaux d'essai.

  
Le virus exerce un effet cytopathogène spécifique dans les cultures de cellules de tissu. En outre, des corpuscules intranucléaires inclus peuvent être mis en évidence dans les cultures infectées.

  
Les premiers stades de la rhinotrachéite virale des félidés se traduisent par une légère augmentation de la température du corps, des éternuements, de la salivation et un larmoiement séreux.

  
A mesure que la maladie progresse, la température du corps s'élève, le chat contaminé devient déprimé et des écoulements mucopurul&#65533;nts pro fus s'établissent aux narines et aux yeux. Des croûtes apparais-

  
 <EMI ID=5.1>   <EMI ID=6.1> 

  
Il s'établit une leucocyte se avec un nombre total de leucocytes de 3 0.000 à 50.000 par ml. Les altérations pathologiques les plus évidentes sont limitées aux voies respiratoires supérieures. En général, aucune inflammation pulmonaire ne s'établit, sauf en présence accidentelle de bactéries et de mycoplasmes. 

  
Des expériences sur de jeunes chats d'état biologique connu ont montré que le pouvoir pathogène du virus herpétique chez les félidés ne dépend pas de la flore microbienne des voies respiratoires. Des chats d'état biologique connu infectés par voie nasale du virus herpétique deviennent fiévreux et prennent une infection grave des voies respiratoires supérieures se caractérisant par des éternuements, de la toux, du catarrhe nasal et oculaire, de la dyspnée, de l'anorexie, de la dépression et de la perte de poids. On observe, outre des altérations épithéliales, une nécrose de l&#65533;épithélium du cornet nasal, tandis que des altérations ostéolytique s nettement perceptibles se développent dans le cornet nasal.

   Il a été établi que chez les félidés le virus herpétique se multiplie préférentiellement et induit des nécroses dans les zone.- de croissance du squelette.

  
Il existe de nombreuses preuves cliniques et expérimentales prouvant que le virus herpétique provoque chez l'homme et les animaux inférieurs des infections des voies génitales et les infections innées sont connues chez de nombreuses espèces d'animaux. Les preuves expérimentales montrent que le virus herpétique peut provoquer des infections des organes génitaux des félidés et peut provoquer une infection généralisée innée grave chez les jeunes chats nés

  
de chattes qui ont été infectées au dernier stade de leur gravidité. L'avortement est provoqué par inoculation tant intraveineuse qu'intranasale des chattes au dernier temps de leur gravidité. L'infection vaginale des chattes gravides, qui provoque la vaginite et des infections systémiques fatales des chats nouveaux-nés, est expérimentalement reproductible. Les jeunes chats infectés présentent de la bronchopneumonie et des inclusions hépatiques.

  
 <EMI ID=7.1> 

  
l'objet de longues études, on ne dispose jusqu'à présent d'aucun vaccin pour combattre cette infection et/ou la prévenir.

  
L'invention vise à permettre la préparation d'un vaccin propre à immuniser différentes espèces de la famille des félidés contre la rhinotrachéite virale des félidés, qui s'obtient par atténuation d'une souche virulente du virus herpétique jusqu'à l'état non virulent avec conservation du pouvoir antigénique.

  
En résumé, l'invention concerne un vaccin qu'on prépare par un procédé comprenant les stades ci-après: isolement d'un virus herpétique virulent pur chez un félidé, inoculation d'une culture

  
de cellules de tissu au moyen du virus pour en assurer la reproduction, passage en série du virus ainsi propagé dans des cultures de cellules de tissu supplémentaires,avec un nombre de passages suffisant et dans des conditions telles que le virus soit atténué jusqu'à l'état avirulent sans perdre son caractère antigénique.

  
L'atténuation ou la modification du caractère virulent

  
ou pathogène des virus ou des bactéries jusqu'à l'état avirulent

  
ou non pathogène est connue.

  
La modification ou L'atténuation de la morphologie et/ou du caractère pathogène se réalise suivant de nombreux procédés. Par-

  
 <EMI ID=8.1> 

  
les germes de la maladie, le passage en série dans un tissu différent de celui de l'hôte conduit à une atténuation, le choc chimique de l'organisme, l'irradiation, le passage à basse température et différentes autres techniques sont applicables en bactériologie et en virologie pour obtenir des organismes non pathogènes qui conservent leur capacité de faire apparaître chez l'hôte des anticorps qui sont propres à neutraliser efficacement les germes de la maladie. L'atténuation sans perte du pouvoir antigénique d'un organisme vivant  <EMI ID=9.1> 

  
révélée applicable à un virus d'un certain type n'est pas toujours applicable à un virus d'un autre type. Jusqu'à présent, aucun procédé n'a été décrit pour l'atténuation du virus herpétique chez le chat. Au cours d'une expérience déterminée, le virus n'a pas été atténué même après 150 passages dans une culture de tissu de chat. Le virus final inoculé à un jeune chat non immunisé s'est révélé avoir un degré de virulence non inférieur à celui du virus initial.

  
La Demanderesse a toutefois découvert à présent que lorsqu'une culture de tissu,qui est en état d'entretenir sa croissance, est inoculée d'un virus herpétique des félidés et exposée à une température fort réduite, par exemple du domaine de 23 à 33 [deg.]C, le virus s'atténue jusqu'à l'état avirulent tout en conservant son caractère antigénique, c'est-à-dire que lorsqu'il est inoculé à un chat sensible, il va inciter le mécanisme immunologique à produire des anticorps viraux. Le chat est alors immunisé contre les infections ultérieures.

  
L'application des passages en série classiques a fait ressortir que le caractère avirulent désiré s'est établi sans perte du pouvoir antigénique après environ 50 passages à une température d'environ 23 à 33[deg.]C. Il est cependant possible d'effectuer environ
250 à 300 passages.

  
Suivant un second aspect de l'invention, on peut obtenir

  
un virus antigénique avirulent à partir d'un virus herpétique virulent provoquant la rhinotrachéite des félidés chez ceux-ci,suivant

  
un procédé comprenant les stades suivante: la mise en culture d'un virus isolé dans une culture de cellules de tissu, par exemple de cellules de rein de chat,susceptible d'entretenir la croissance

  
du virus jusqu'au titre viral désiré, l'inoculation d'une couche unique de la culture de cellulesau moyen du virus par application  <EMI ID=10.1> 

  
est mise en incubation sous une solution nutritive semi-solide,habituellement un récipient du type des boîtes de Petri, l'incubation à
25[deg.]C jusqu'à évidence d'une dégénération cellulaire maximale, habituellement après environ 10 à 12 jours, puis la sélection des petites plaques gonflées irrégulières formées qui sont présentes en. même temps que des plaques plus grandes régulières non gonflées, la conduite de 1 à 3 passages de ces petites plaques dans une couche unique de culture de cellules de tissu de la manière habituelle

  
et la récolte du virus après manifestation d'une génération cellulaire maximale. Cette technique sélective permet d'obtenir un virus antigénique avirulent avec un nombre minimal de passages.

  
On pourrait admettre que l'incubation à une basse température conduit à un mélange de colonies ou plaques plus atténuées et moins atténuées du virus .âpres quoi la sélection des petites plaques ou colonies que permet cette technique des plaques conduit à un virus atténué sans qu'il soit nécessaire d'effectuer sans interruption des passages à basse température pour atténuer l'ensemble de

  
la souche virulente de l'inoculum initial.

  
Le vaccin contre la rhinotrachéite des félidés faisant l'objet de l'invention peut être administré à des animaux de tout genre de la famille des félidés par voie extraparentérale ou intraparentérale. Le vaccin sous forme liquide peut être administré par

  
 <EMI ID=11.1> 

  
à l'administration extraparentérale. Comme d'habitude pour les vaccins de ce genre, une seule dose administrée contient 3000 à 20.000

  
 <EMI ID=12.1> 

  
Une particularité spéciale du virus de la rhinotrachéite virale des félidés dont on admet qu'elle est unique est que même les jeunes chats qui ont un titre élevé en anticorps maternels,c'est-à-dire les jeunes chats d'un âge s'échelonnant de la naissance à environ 5 semaines, se révèlent infectes par le virus herpétique dans les tissus épithéliaux des canaux du nez et des yeux .

   Il est admis que cet état peut exister du fait que le virus tend à se localiser dans le tissu épithélial où les anticorps circulant du sang ne peuvent neutraliser le virus et à se répandre lentement à partir de cet endroit, tandis que les particules virales sont rendues inoffensives par les anticorps maternels. lorsqu* ultérieurement le titre en anticorps maternels du jeune chat baisse, le virus en cours de diffusion peut provoquer une infection systémique du jeune chat, se traduisant normalement par la rhinotrachéite virale.

  
Les jeunes chats protégés par les anticorps maternels peuvent être inoculés du vaccin conforme à l'invention contre l'infection par la rhinotrachéite virale des félidés par administration

  
 <EMI ID=13.1> 

  
Après la disparition des anticorps maternels, le vaccin antiviral peut être administré par voie extraparentérale ou parentérale, par

  
 <EMI ID=14.1> 

  
l'administration intranasale, intraauriculaire, ou intraoculaire du vaccin est efficace, tant chez les jeunes chats protégés par les anticorps maternels que chez les chats adultes, ce mode d'inoculation est préféré pour la vaccination des jeunes animaux pour lesquels on admet que les anticorps maternels sont encore présents. A ce stade, la détermination du titre en anticorps maternels n'est pas nécessaire.

  
Les stades du procédé de l'invention sont décrits plus en détail ci-après.

  
1. ISOLEMENT DU VIRUS

  
Suivant une technique classique , on effectue un frottis chez un chat qui a souffert d'une affection des voies respiratoires supérieures et présenté les symptômes caractéristiques de la rhinotrachéite virale des félidés. On introduit la substance du frottis dans une culture de cellule de tissu rénal de chat et on en isole

  
le virus herpétique des félidés qu'on identifie par les techniques im&#65533;unologiques habituelles.au moyen d'un antisérum mono spécifique pour ce virus.

  
2. REPRODUCTION DU VIRUS

  
On prépare des cultures de cellules de tissu rénal de chat. On ensemence un fermenteur en verre ordinaire au moyen d'une suspension trypsinisée de cellules rénales de chat contenant süffisamment de milieu nutritif pour que les cellules soient immergées

  
à une profondeur d'environ 13 mm. On utilise du Milieu Minimum Essen-

  
 <EMI ID=15.1> 

  
de veau.

  
On peut toutefois utiliser tout milieu de culture normal, comme du milieu à l'hydrolysat de lactalbumine dans de la solution

  
 <EMI ID=16.1> 

  
incubation à 37[deg.]C pendant 1 à 3 jours,de manière à obtenir une couche monocellulaire de cellules de rein de chat.

  
On inocule le fermenteur au moyen du virus herpétique

  
 <EMI ID=17.1> 

  
logique sur les cellules est pratiquement complet, ce qui indique que le virus s'est reproduit. Un titrage par dilution indique que

  
 <EMI ID=18.1> 

  
de la culture à un chat sensible à l'infection. Après 5 à 7 jours, on constate les symptômes cliniques d'un cas typique d'infection par la rhinotrachéite virale des félidés, ce qui démontre que la dose administrée contient du virus herpétique virulent.

  
Le Tableau ci-après donne une description d'une infection typique par la rhinotrachéite virale des félidés. 

  
Dates Observations s

  
 <EMI ID=19.1> 

  
La chatte ne présente pas de particularités. Un frottis de gorge de la chatte se révèle contenir du virus herpétique. 

  
2-5-73 La chatte et les 5 jeunes chats sont photographiés,et

  
un frottis de gorge est réalisé chez les chatons. Les yeux de ces derniers ne sont pas encore ouverts. Le virus herpétique n'est pas isolé chez les jeunes chats.
18-5-73 Les premiers symptômes cliniques se manifestent chez

  
3 des jeunes chats par un certain catarrhe oculaire.

  
On photographie les jeunes chats et on effectue des frottis de gorge qui se révèlent positifs pour le virus herpétique.

  
23-5-73 Mucopurulence des yeux chez les 5 jeunes chats.
29-5-73 Mucopurulence des yeux et des narines chez les 5 jeunes

  
chats.

  
1-6-73 Mucopurulence des yeux et des narines chez les 5 jeunes

  
chats.

  
4-6-73 Paupières fermement collées fermées par l'exsudat

  
mucopurulent chez les 5 jeunes chats.

  
5-6-73 Engorgement grave des yeux et des narines chez les 5

  
jeunes chats, et respiration difficile par la cavité buccale.

  
8-6-73 Tableau clinique très grave d'infection par le virus de

  
la rhinotrachéite chez les 5 jeunes chats. On les photographie et on effectue des frottis de gorge qui se révèlent positifs pour le virus herpétique.

  
10-6-73 Mort d'un jeune chat, attribuée après autopsie à la 

  
 <EMI ID=20.1> 

  
12-6-73 Mort de deux jeunes chats, attribuée après autopsie à

  
la rhinotrachéite virale des félidés. 

  
13-6-73 Mort d'un jeune chat,attribuée après autopsie à la

  
rhinotrachéite virale des félidés.

  
21-6-73 Mort d'un jeune chat, attribuée après autopsie à la

  
rhinotrachéite virale des félidés.

  
 <EMI ID=21.1> 

  
On prépare des cultures de cellules rénales de chat en couches monocellulaires dans du Milieu Minimum Essentiel d'Eagles

  
dans des flacons pour culture de cellules de tissu de type classique.. On inocule les flacons au moyen d'environ 100 DI50CT/ml du virus

  
 <EMI ID=22.1> 

  
environ 8 à 10 jours, en peut observer un petit domaine de dégénérescence cellulaire et on effectue un second passage en série avec une petite quantité du milieu liquide. On poursuit l'incubation à

  
 <EMI ID=23.1> 

  
de l'effet cytopathologique. Après environ 15 à 20 passages en série, on atteint l'état cytopathologique complet en 3 à 5 jours d'incubation à 25[deg.] C .

  
On observe soigneusement l'atténuation et à peu près tous les 10 passages en série, on inocule par voie intranasale des chats

  
 <EMI ID=24.1> 

  
ainsi infectés manifestent le tableau clinique typique de la rhinotrachéite virale des félidés après jusqu'au 50e passage en série série. Ensuite, les symptômes deviennent progressivement de moins en moins graves, prouvant ainsi que le virus s'affaiblit dans les conditions d'incubation à basse température.

  
Pour démontrer que le passage en série du virus aux tempe -

  
 <EMI ID=25.1> 

  
virulence du virus, on administre des échantillons du virus do la rhinotrachéite des félidés, pris au 60e passage en série et au

  
 <EMI ID=26.1>  

  
Le.fende pour les tableaux:

  
0 = pas de symptôme caractéristique de l'infection par la rhinotrach&ite virale des félidés

  
1 = activité réduite, voix faible

  
2 = éternuements 

  
3 = larmoiement, yeux humides, catarrhe séreux, nez humide 

  
&#65533; = diminution. de l'apétit

  
5 = apétit pratiquement nul, consommation d'un peu de lait et d'eau

  
 <EMI ID=27.1> 

  
l'animal ne réagit plus du tout et a un aspect négligé pitoyable

  
9 = mort de l'animal. 

  

 <EMI ID=28.1> 


  

 <EMI ID=29.1> 
 

  

 <EMI ID=30.1> 


  

 <EMI ID=31.1> 
 

  
La comparaison des résultats au Tableau I et au Tableau II montre que le virus est pratiquenent aussi virulent au 103e passace qu'au 60e; que l'atténuation du virus est donc à peu près nulle.

  
Les Tableaux ci-après montrent l'effet du passage en série du virus conformément à l'invention. Les valeurs sont représenta-

  
 <EMI ID=32.1> 

  
encore au niveau du 85e passage en série. 

  

 <EMI ID=33.1> 


  

 <EMI ID=34.1> 
 

  

 <EMI ID=35.1> 


  

 <EMI ID=36.1> 
 

  
o

  
 <EMI ID=37.1> 

  
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in ci

  
 <EMI ID=38.1> 

  

 <EMI ID=39.1> 
 

  
D es chats qui ont été inoculés au moyen du virus du type que concernent les Tableaux III, IV et V, échappent à la rhinotrachéite virale des félidés lorsqu'ils sont exposés à des virus virulents, ce qui démontre que le virus avirulent n'a pas perdu son activité antigénique.

  
 <EMI ID=40.1> 

  
On cultive en grandes quantités le vaccin atténué obtenu comme décrit ci-dessus, et dans le même milieu de culture que précédemment, dans des flacons normaux pour couches monocellulaires de

  
 <EMI ID=41.1> 

  
cytopathologique complet, c'est-à-dire habituellement pendant 3 à 4 jours. On collecte ensuite le milieu de culture qu'on mélange avec une solution stabilisée prise en quantité égale et on le répartit en doses unitaires d'environ 1.000 à 10.000 DI50CT/ml dans des

  
 <EMI ID=42.1> 

  
fioles qu'on scelle ensuite.

  
Bien que la culture et la propagation du virus herpétique aient été décrites comme s'exécutant avec des cellules rénales de chat, il convient de noter que toute lignée cellulaire stable de tissu de chat convient. Les lignées cellulaires peuvent être obtenues par des passages en série de cellules de chat ou être d'origine commerciale. Par culture de cellulesde tissu, il convient d'entendre, aux fins de l'invention, soit les cellules rénales primaires de chat, soit les lignées cellulaires stables qui en proviennent.

  
En résumé, l'invention concerne donc un nouveau vaccin contre la rhinotrachéite virale des félidés et un procédé pour le  préparer. Le procédé de l'invention comprend les stades suivants  introduction d'un virus herpétique virulent et vivant dans une culture de cellules de tissu; incubation de la culture jusqu'à évidente cytopathologie cellulaire; récolte d'une fraction du virus ainsi reproduit et nouvelle inoculation du virus récolté dans une nouvelle culture de tissu; répétition du passage en série du virus dans do la culture de tissu un nombre suffisant de fois à une température d'incubation qui est suffisante pour la production d'un virus aviru-

  
 <EMI ID=43.1> 

  
partir du milieu de culture du tissu précité. Le domaine de température d'incubation choisi par préférence s'étend de 23 à environ

  
 <EMI ID=44.1> 

  
Lors de l'application des techniques classiques de passage en série, il faut environ 50 passages pour atténuer suffisamment le virus. Toutefois, lors de l'application de la technique des plaques, l'atténuation requise peut être atteinte plus rapidement. Du tissu de chat, par exemple du tissu rénal de chat ou une lignée cellulaire stable qui en provient,se prête à la multiplication du virus. 

REVENDICATIONS

  
1. Procédé pour produire un virus herpétique vivant de félidés, atténué et antigéniquement actif, caractérisé en ce qu'il comprend les stades suivants :
a) introduction d'un virus herpétique virulent et vivant dans une culture de cellulesde tissu;  b) incubation de la culture jusqu'à évidence de cytopathologie cellulaire; c) récolte du virus ainsi produit et introduction du virus récolté dans une nouvelle culture de tissu; d) répétition du passage en série du virus dans de la culture de tissu un nombre de fois suffisant à une température d'incubation suffisante pour produire un virus avirulent, vivant et antigéniquement actif; e) isolement du virus précité du milieu de culture de tissu précité.

Claims (1)

1. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la culture de cellulesde tissu précités est une culture de cellulesd'un tissu d'un membre de la famille des félidés.

   3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de cellules de tissu de chat. <EMI ID=45.1>

   que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de cellules de tissu rénal de chat.

   5. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la température d'incubation pour les passages en série est maintenue à une valeur d'environ 23 à 33[deg.]C.

   6. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en

   ce que la température d'incubation à chaque passage en série est

   <EMI ID=46.1>

   <EMI ID=47.1> que le passage en série est exécuté au moins 50 fois.

   8. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce

   <EMI ID=48.1>

   une température d'incubation d'environ 23 à 33[deg.]C.

   9. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de'li" gnée cellulaire stable dérivant d'un tissu primaire de chat.

   10. Procédé pour produire un virus herpétique vivant atténué antigéniquement actif, caractérisé en ce qu'il comprend les stades suivants :

   a) introduction d'un virus herpétique virulent et vivant dans une couche monocellulaire d'une culture de cellules de tissu provenant de cellules rénales de chat; b) incubation de la culture pendant environ 3 à 5 jours à une <EMI ID=49.1>

   cellules;

   c) récolte d'une fraction du virus ainsi produit et introduction du virus récolté dans une couche monocellulaire fraîchement préparée dérivant d'un tissu rénal de chat; d) incubation de la culture précitée à une température d'environ 25[deg.]C pendant une durée suffisante pour conduire à la cytopathologie d'au moins une partie des cellules de tissu de chat; e) passage en série d'une partie du virus ainsi produit dans des cellules provenant de tissu de chat à raison d'au moins 50 fois

   à une température d'incubation d'environ 25[deg.]C pour l'obtention d'un virus avirulent vivant, antigéniquement actif;

   f) isolement du virus précité du dernier passage en série.

   11. Vaccin de virus herpétique vivant atténué, caractérisé en ce qu'il comprend une quantité efficace de virus herpétique vivant, avirulent , antigéniquement actif produit par un procédé comprenant les stades suivants :

   a) introduction d'un virus herpétique virulent et vivant dans une culture de cellulesde tissu; b) incubation de la culture jusque évidence de cytopathologie cellulaire; c) récolte du virus ainsi produit et introduction du virus récolté dans une nouvelle culture de tissu; , d) répétition du passage en série du virus dans de la culture de tissu un nombre de fois suffisant à une température d'incubation suffisante pour produire un virus avirulent, vivant et antigéniquenent actif; e) isolement du virus précité du milieu de culture de tissu ci-dessus; et f) addition du virus isolé précité à une solution stabilisante pour en former un vaccin.

   12. Vaccin suivant la revendication 11, caractérisé en

   ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de cellules d'un tissu d'un membre de la famille des félidés.

   13. Vaccin suivant la revendication 11, caractérisé en ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de cellules de tissu de chat,

   <EMI ID=50.1>

   ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de cellules de tissu rénal de chat.

   15. Vaccin suivant la revendication 11, caractérisé en ce que la température d'incubation pour les passages en série est main-

   <EMI ID=51.1>

   16. Vaccin suivant la revendication 11, caractérisé en ce que la température d'incubation à chaque passage en série est

   <EMI ID=52.1>

   17. Vaccin suivant la revendication 11, caractérisé en

   <EMI ID=53.1>

   18. Vaccin suivant la revendication 11, caractérisé en ce que les passages en série sont exécutés au nombre d'au moins 50, à une température d'incubation d'environ 23 à 33[deg.]C.

   19. Vaccin suivant la revendication 11, caractérisé en

   ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de lignée cellulaire stable dérivant d'un tissu primaire de chat. '

   20. Vaccin de virus herpétique vivant atténué, caractérisé en ce qu'il comprend une quantité efficace d'un virus herpétique vivant avirulent antigéniquement actif, produit par un procédé com-

   <EMI ID=54.1>

   a) introduction d'un virus herpétique virulent et vivant dans une couche monocellulaire d'une culture de cellules de tissu provenant de cellules rénales de chat; b) incubation de la culture pendant environ 3 à 5 jours à une température de 35[deg.]C jusqu'à cytopathologie pratiquement complète des cellules; c) récolte d'une fraction du virus ainsi produit et introduction du virus récolté dans une couche monocellulaire fraîchement préparée dérivant d'un tissu rénal de chat; d) incubation de la culture précitée à une température d'environ <EMI ID=55.1>

   gie d'au moins une partie des cellules de tissu de chat;

   e) passage en série d'une partie du virus ainsi produit dans des cellules provenant de tissu de chat à raison d'au moins 50 fois <EMI ID=56.1>

   d'un virus avirulent vivant, antigéniquement actif;

   f) isolement du virus précité du dernier passage en série.

   21. Procédé pour protéger des chats sensibles contre l'infection par le virus herpétique, caractérisé en ce qu'on administre aux chats un vaccin de virus herpétique vivant atténué qui comprend une quantité efficace d'un virus herpétique vivant atténué, antigéniquement actif produit par procédé comprenant les stades suivants: a) introduction d'un virus herpétique virulent et vivant dans une culture de cellules de tissu; b) incubation de la culture jusqu'à évidence de cytopathologie cellulaire; c) récolte du virus ainsi produit et introduction du virus récolté dans une nouvelle culture de tissu;

   d) répétition du passage en série du virus dans de la culture de tissu un nombre de fois suffisant à une température d'incubation suffisante pour produire un virus avirulent, vivant et antigéniquement actif; e) isolement du virus précité du milieu de culture de tissu précité; f) addition du virus isolé précité à une solution stabilisante aux fins d'en former un vaccin.

   22. Procédé suivant la revendication 21, caractérisé en ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de cellules d'un tissu d'un membre de la famille des félidés.

   <EMI ID=57.1>

   ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de cellules de tissu de chat.

   <EMI ID=58.1>

   ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de cellules de tissu rénal de chat.

   25. Procédé suivant la revendication 21, caractérisé en ce que la température d'incubation pour les passages en série est

   <EMI ID=59.1>

   26. Procédé suivant la revendication 21, caractérisé en ce que la température d'incubation à chaque passage en série est d'environ 25[deg.]C.

   <EMI ID=60.1>

   ce que le passage en série est exécuté au moins 50 fois. 28. Procédé suivant la revendication 21, caractérisé en ce que les passages en série sont exécutés au nombre d'au moins

   <EMI ID=61.1>

   29. Procédé suivant la revendication 21, caractérisé en

   ce que la culture de cellules de tissu précitée est une culture de lignée cellulaire stable dérivant d'un tissu primaire de chat.

   30. Procédé pour protéger des chats sensibles contre une infection par le virus herpétique, caractérisé en ce qu'on administre aux chats une dose efficace d'un vaccin de virus herpétique atténué vivant, préparé par un procédé comprenant les stades suivants:

   a) introduction d'un virus herpétique virulent et vivant dans une couche monocellulaire d'une culture de cellules de tissu provenant de cellules rénales de chat; b) incubation de la culture pendant environ 3 à 5 jours à une température de 35[deg.]C jusqu'à cytopathologie pratiquement complète des cellules; c) récolte d'une fraction du virus ainsi produit et introduction du virus récolté dans une couche monocellulaire fraîchement préparée dérivant d'un tissu rénal de chat; d) incubation de la culture précitée à une température d'environ 25[deg.]C pendant une durée suffisante pour conduire à la cytopathologie d'au moins une partie des cellules de tissu de chat; e) passage en série d'une partie du virus ainsi produit dans <EMI ID=62.1>

   à une température d'incubation d'environ 25[deg.]C pour l'obtention d'un virus avirulent vivant, antigéniquement actif;

   f) isolement du virus précité du dernier passage en. série.