DK158743B - Fremgangsmaade til fremstilling af et levende, svaekket hepatitis a virus og diagnostisk praeparat opnaaet ved fremgangsmaaden - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af et levende, svaekket hepatitis a virus og diagnostisk praeparat opnaaet ved fremgangsmaaden Download PDFInfo
- Publication number
- DK158743B DK158743B DK343179A DK343179A DK158743B DK 158743 B DK158743 B DK 158743B DK 343179 A DK343179 A DK 343179A DK 343179 A DK343179 A DK 343179A DK 158743 B DK158743 B DK 158743B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- virus
- hepatitis
- cell culture
- culture
- monkey
- Prior art date
Links
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 title claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 10
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 50
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims abstract description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241000288906 Primates Species 0.000 claims abstract description 10
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 claims abstract 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 241000282695 Saimiri Species 0.000 claims description 14
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 14
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 claims description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 4
- 241000282709 Aotus trivirgatus Species 0.000 claims description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 claims description 2
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 claims description 2
- 241000288956 Saguinus mystax Species 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 2
- 241001312919 Saguinus labiatus Species 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 abstract description 5
- 229940124724 hepatitis-A vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- 229940038490 inactivated hepatitis a vaccine Drugs 0.000 abstract 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 26
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 7
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 5
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 241001243761 Human hepatitis A virus Species 0.000 description 4
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- 208000037319 Hepatitis infectious Diseases 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000001149 (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoate Substances 0.000 description 1
- WTTJVINHCBCLGX-UHFFFAOYSA-N (9trans,12cis)-methyl linoleate Natural products CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OC WTTJVINHCBCLGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LNJCGNRKWOHFFV-UHFFFAOYSA-N 3-(2-hydroxyethylsulfanyl)propanenitrile Chemical compound OCCSCCC#N LNJCGNRKWOHFFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 241000282551 Cercopithecus Species 0.000 description 1
- 206010061041 Chlamydial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 241000543381 Cliftonia monophylla Species 0.000 description 1
- 208000034657 Convalescence Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- PKIXXJPMNDDDOS-UHFFFAOYSA-N Methyl linoleate Natural products CCCCC=CCCC=CCCCCCCCC(=O)OC PKIXXJPMNDDDOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 description 1
- 241000191807 Sciurus stramineus Species 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000016540 Tyrosine aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010042606 Tyrosine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000004395 cytoplasmic granule Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32451—Methods of production or purification of viral material
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 158743B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et levende, svækket hepatitis A virus og et diagnostisk præparat opnået ved fremgangsmåden.
5 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav l’s kendetegnende del anførte, og præparatet ifølge opfindelsen er ejendommeligt ved det i krav 8's kendetegnende del anførte.
10 I US-A-3 105 011 påstås det, at der tilvejebringes fremgangsmåder til propagering af såvel hepatitis A virus som hepatitis B virus i vævskultur. Den påståede lære er imidlertid blevet modbevist af nyere, yderst pålidelige undersøgelser af forskere med særligt kendskab til hepa-15 titis. Der henvises i denne forbindelse til følgende artikler: - Science, bind. 182, dec. 1973, pp. 1026-1028, især side 1027, anden spalte, sidste sætning af det fuldstændige 20 afsnit; - Purcelle et al.. Am. J. Med. Sci., bind. 270, nr. 1, 1975, side 61-62; 25 - Cabasso et al., udg. Developments in Biological Stan dardization, bind. 30, pp. 390, 391 og 464, S. Karger Basel, 1975; og - Lenette et al., udg. Diagnostic Procedures for: Viral, 30 Rickettsial and Chlamydial Infections, 5. udg., side 907, American Public Health Assoc. 1979.
Disse artikler modbeviser den påståede lære fra US patentskrift nr. 3 105 011 og viser utvetydigt, at den på-35 ståede propagering af hepatitis A virus som anført i denne reference er ukorrekt.
2
DK 158743 B
Det er endvidere kendt, at hepatitis A har en diameter på ca. 27 nm (Feinstone et al., J. Virology, juni 1974, pp. 1412-1414). I US patentskrift nr. 3 105 011 anføres, at levende virus blev passeret gennem en række filtre med en 5 porediameter beliggende i intervallet 5,0 til 0,45 mu, som er det samme som en porediameter på 5,0 til 0,45 nm.
Da hepatitis A virus har en partikelstørrelse på 27 nm, er det fysisk umuligt for det at passere gennem filtre, hvis største porediameter er 5,0 nm. Det er derfor indly-10 sende, at hvilket materialet, der end er opnået ved den i US patentskriftet beskrevne proces, var det helt indlysende ikke hepatitis A virus.
Det har vist sig, at hepatitis A virus, som er blevet 15 adapteret ved mindst én passage i leveren af en modtagelig sub-human primat, f.eks. egernabe, ugleabe, afrikansk grøn abe, rhesusabe eller chimpanse, med held kan passeres i cellekultur. Der foretages foretrukkent mindst fem passager i den modtagelige sub-humane primat. Det fore-20 trækkes også, at der anvendes mindst to sub-humane prima tarter, og at der anvendes mindst to passager i hver art.
Efter den sidste passage fjernes den inficerede lever, og 25 den homogeniseres og klares og anvendes til inokulering af cellekulturer.
Cellekulturerne kan være primære egernabe-levercellekul-turer, primære afrikansk grøn åbe-nyrecellekulturer, pri-30 mære rhesusabe-nyrecellekulturer, primære cynomolgus abe-nyrecellekulturer, rhesusabefoster-nyrecellekulturer, cercopithecus-abefoster-nyrecellekulturer, rufiventer-egernabefoster-nyrecellekulturer, eller en vilkårlig, kontinuert eller transformeret nyre- eller levercellekul-35 tur afledt fra et menneske eller en sub-human primat, som er modtagelig for hepatitis A virus-infektion. Cellekulturerne kan også bestå af primære hele kyllingefostre el-
DK 158743 B
3 ler andefosterceller eller celler afledt fra nyrerne af nyfødte kyllinger eller ællinger.
Cellekulturen inkuberes ved ca. 33 °C til ca. 39 °C, fo-5 retrukkent ved ca. 35 °C til ca. 37 °C, indtil hepatitis A antigen kan påvises enten i cellelaget eller i vævskulturvæsken. Typisk kræves ca. 7 til ca. 35 dage for udvikling af påviseligt hepatitis A antigen. Antigenet påvises hensigtsmæssigt i cellelaget ved fluorescens-antistofme-10 toder, og i vævskulturvæsken enten ved immun-adhærens-hæ-magglutinationsprøve eller ved radioimmun prøve.
Seriepassager in vitro kan udføres ubegrænset. Med efterfølgende passager opnås der bedre adaption af virus til 15 in vitro dyrkning, hvilket sandsynliggøres ved hurtigere forekomst af hepatitis A antigen og produktionen af større mængder af det virale antigen.
Efter fem eller flere seriepassager in vitro af hepatitis 20 A virus i de i det foregående nævnte celletyper viser det sig, at viruset modificeres således, at det let kan dyrkes i yderligere celletyper som følger: humane føtale di-ploide lungefibroblastceller, føtale rhesus-diploide lungeceller og føtale cercopithecus-diploide lungeceller.
25 Disse celletyper er alle hensigtsmæssige til anvendelse ved fremstillingen af levende svækkede humane viralvacci-ner.
Det humane hepatitis A virus kan således modificeres ved 30 seriepassager i levere fra sub-humane primater og påfølgende seriepassager i cellekulturen og kan anvendes til tilvejebringelse af en levende, svækket human viralvacci-ne og kan desuden dyrkes på økonomisk måde i så stor mængde i cellekultur, at det muliggør produktion af en 35 tilstrækkelig mængde viralantigen til fremstilling af en antigen, immunogen viralvaccine og også til fremstilling af hepatitis A antigen til diagnostiske præparater. Hel
DK 158743B
4 virus er fordelagtigt frem for virale underenheder ved diagnose og påvisning af hepatitis. Det er endvidere en fordel ved præparatet ifølge opfindelsen, at man undgår at anvende det farlige, patogene virus i diagnostiske la-5 boratorier.
Hepatitis A antigenet kan inaktiveres til anvendelse som vaccine mod hepatitis A virus. Inaktivering af infektivi-tet kan opnås ved behandling med formalin. Den mængde 10 formalin, der anvendes, er effektiv til at inaktivere in-fektiviteten af antigenet, mens det beholder immunogeni-teten, så at materialet er effektivt som vaccine. Typisk fortyndes formalin, 37%'s formaldehydopløsning, i ca.
1000 til ca. 10 000 dele af antigenpræparatet, og der om-15 røres ved ca. 4 °C til ca. 60 “C i ca. 2 timer til ca. 30 dage, idet formalinen fortrinsvis fortyndes i ca. 2000 til ca. 6000 dele viruspræparat ved ca. 20 °C til ca. 45 “C i ca. 2 dage til ca. 6 dage, særligt foretrukkent ved ca. 37 “C i ca. 3 dage.
20
Vaccinen kan anvendes til at immunisere mod hepatitis A virus i modtagelige pattedyrearter, som f.eks. egernaber og chimpanser.
25 De efterfølgende eksempler forklarer opfindelsen nærmere. EKSEMPEL 1
Seriepassage af hepatitis A virus i egernaber til frem-30 stilling af en viral stamme til in vitro dyrkning (1) Human hepatitis A virus, stamme CR326, overføres til en gruppe på 6 Saguinus mystax egernaber ved intravenøs inokulering af blod fra et akut sygt menneske 35 med hepatitis A efter proceduren af Mascoli et al., P.S.E.B.M. 142, 276-282, 1973.
DK 158743 B
5 (2) Disse inokulerede egernaber udvikler forøgelse af serum-isocitrin-dehydrogenase (ICD) enzymværdier inden for 30-50 dage efter inokulationen såvel som histologiske ændringer i leveren på grund af viral he- 5 patitis.
(3) En anden passage af CR326-midlet udføres i mystax egernaber ved intravenøs inokulering af serum taget fra dyr fra første passage i den periode, hvor ICD- 10 forøgelsen finder sted, til en anden gruppe mystax egernaber. Denne procedure øger yderligere ICD-dan-nelsen og leverændringerne som angivet i det foregående.
15 (4) Tredje, fjerde og femte passage af CR326-midlet i mystax egernaber udføres på lignende måde. Ekstensive serumneutraliseringsprøver udføres for at bevise, at CR326-midlet som propageret i egernaberne faktisk er humant hepatitis A virus efter proceduren beskre- 20 vet af Provost et al., P.S.E.B.M. 142, 1267, 1973.
(5) Efter det femte passageniveau udtages levervæv fra en inficeret mystax egernabe på det tidspunkt, hvor den første igangsætning af serum-ICD-forøgelsen fin- 25 der sted.
(6) En 1:1500 fortynding af den homogeniserede lever anvendes til at overføre CR326-infektionen til S. la-biatus (rufiventer) egernaber ved intravenøs inoku- 30 lering. Dette udgør den sjette seriepassage i egern aber, og den første passage i rufiventer egernaber. Levervæv udtages på det tidspunkt, hvor ICD-forøgelsen indtræder, efter den procedure, der beskrives af Provost et al., P.S.E.B.M, 155, 283-286, 1977.
35 (7) En 1:100 opløsning af den homogeniserede lever anvendes til at udføre en anden seriepassage af CR326- 6
DK 158743 B
midlet i en gruppe på 24 rufiventer-egernaber. Der udtages lever af disse dyr som angivet i det foregående.
5 (8) Der udføres ialt 26 seriepassager af CR326-midlet i rufiventer-egernaber ved gentagelse af leverudtagelse, homogenisering, fortynding og intravenøs injektion.
10 (9) CR326-midlet seriepasseres således ialt fem gange i mystax egernaber og yderligere ialt 26 gange i rufi-venter egernaber som beskrevet i trin 1-8.
(10) Levervæv fra inficerede rufiventer egernaber ved den 15 24. til 31. egernabe-passage homogeniseres og kla res. Dette homogeniserede og klarede levervævsprodukt tjener som podemedium til in vitro dyrkning af hepatitis A virus.
20 EKSEMPEL 2
Dyrkning af hepatitis A virus i egernabe levercellekulturer 25 (1) En rufiventer egernabe inokuleres intravenøst med 1 ml af en 1:100 fortynding af homogeniseret, klaret, inficeret levervæv i form af en vandig ekstrakt fremstillet som i eksempel 1.
30 (2) 24-48 timer efter inokulering, før sygdom indtræder, fjernes en del af leveren fra dyret kirurgisk.
(3) Levervævet hakkes fint på en plastoverflade med et barberblad med enkelt kant. Stykkerne vaskes omhyg- 35 geligt med celledyrkningsmedium indeholdende 20% kalvefosterserum. De vaskede stykker lægges på dyrkningsbeholdere af plast eller glas og tilføres tre
DK 158743 B
7 gange pr. uge et dyrkningsmedium indeholdende Williams medium E (indeholdende uorganiske salte, aminosyre, vitaminer, D-glucose, glutathion, methyllin-oleat, phenolrødt og natriumpyruvat) plus 20% normal 5 egernabeserum plus 10”^ molær glucagon plus glut- amin, penicillin og streptomycin i de sædvanligt anvendte mængder. Dexamethason, 9-fluor-ll/J, 17,21-tri-hydroxy-16a-methylpregna-l,4-dien-3,20-dion og insulin kan eventuelt være til stede i en koncentration 10 på ca. 10” molær. Mediet anvendes i tynde lag, 2 f.eks. 2 ml pr. 25 cm dyrkningskolbe. Inkubering foretages ved 35 0C på en vippeplatform for at give maksimal luftning. Gasatmosfæren består af 5% carbondioxid i luft.
15 (4) I løbet af 7 dage begynder en voldsom udgroning af hepatocyt-lignende epitelceller. Denne udvækst af store øer af hepatocyt-lignende celler fra vævsstykkerne fortsætter langsomt i flere uger. Der kan ved-20 ligeholdes kulturer i yderligere mange uger. Hepato- cyt-funktion identificeres ved iagttagelse af albumin-produktion og produktion af tyrosinaminotransfe-rase.
25 (5) Beskrivelsen af egernabe levercellekulturer i 3 og 4 gælder, hvad enten leveren opås fra normale eller med hepatitis A inokulerede egernaber.
(6) Hepatitis A viral antigen bestemmes i de kulturer, 30 der er fremstillet ud fra med virus inokulerede dyr, begyndende ca. 7 dage efter fremstillingen af kulturen. En sådan iagttagelse muliggøres ved påføring af fluorescein-mærket humant globulin fremstillet ud fra human sera fra hepatitis A rekonvalescent på 35 acetone-fikserede dækglas-kulturer. Disse præparater undersøges i et lodret fluorescens-Zeiss mikroskop med et 63X planapochromat objektiv og 10X okularer.
8
DK 158743 B
(7) Hepatitis A viral antigen bestemmes som lysende grønne fluorescerende granuler lokaliseret i celle-cytoplasmaet i hepatocyt-lignende celler. Både antallet af granuler og deres størrelse forøges i lø- 5 bet af et tidsrum på ca. 10 uger efter kulturstart.
Store mængder af antigenet forefindes i mindst 16 uger efter kulturstart.
(8) Forholdet mellem granulerne og hepatitis A virus 10 bevises med de fakta, at a) leverkulturer fremstil let fra normale egernaber og ikke udsat for virus viser aldrig udvikling af den granulære fluorescens, og b) den granulære fluorescens blokeres specifikt ved forudgående tilførsel til de fikserede 15 præparater af human konvalesens hepatitis A sera, men ikke ved sera fra samme patienter før sygdommen.
(9) Det vises også, at disse leverkulturer tilvejebrin-20 ger in vitro mangfoldiggørelse af hepatitis A virus
som følger, a) 4 uger efter etablering af kulturerne producerer såvel overliggende væsker som cellekulturekstrakter hepatitis A infektion ved intravenøs inokulering i rufiventer egernabe, b) efter 3 ugers 25 forløb og senere kan der vises typiske hepatitis A
viralpartikler, der har de egenskaber, der er beskrevet af Provost et al., P.S.E.B.M. 148, 532-533, 1975 i kulturekstrakter ved immun-elektronmikrosko-pi, og c) efter 3 ugers forløb og mere kan hepatitis 30 A viral antigen bestemmes ved immun-adhærenshæmag- glutination kulturekstrakter efter proceduren af Miller et al., P.S.E.B.M., 149, 254-261, 1975.
35
DK 158743 B
9 EKSEMPEL 3
Dyrkning og seriepassage af hepatitis A virus i egernabe-levercellekulturer inokuleret in vitro 5 (1) Levervæv kirurgisk fjernet fra en normal rufiventer egernabe pakkes, og der fremstilles cellekulturer ved samme metode som anvendt for inficeret levervæv i eksempel 2.
10 (2) Ca. 7 dage efter fremstillingen af cellekulturerne, når udvæksten af hepatocyter er begyndt, inokuleres 2 kulturerne i 25 cm kolber med hepatitis A virus i form af 0,1 ml af en 4%'s vandig ekstrakt af infice- 15 ret egernabelever fremstillet som i eksempel 1.
(3) De med virus inokulerede levercellekulturer og som kontrol anvendte uinokulerede kulturer inkuberes ved 35 °C og behandles tre gange pr, uge som i eksempel 20 2.
(4) Dækglas fjernes, der acetone-fikseres, farves med fluorescein-mærket hepatitis A antistof-holdigt globulin og undersøges ved fluorescens-mikrokskopi som 25 angivet i eksempel 2.
(5) Hepatitis A viral antigen bestemmes i virus-inokule-rede kulturer, men ikke i kontrolkulturer, fra ca. 7 dage efter inokulering og i stigende grad en 3 ugers 30 periode til 28 dage. Som i eksempel 2 er antigenet synligt som lysende grønne fluorescerende cytoplas-magranuler. Specificitet bevises som i eksempel 2.
(6) Celler og væsker fra såvel kontrolkulturer som vi- 35 rus-inokulerede kulturer høstes 3-4 uger efter in okulering ved frysning og tørring af kulturerne tre gange. Blandingen af brudte celler og dyrkningsvæske 10
DK 158743 B
klares ved centrifugering ved lav hastighed.
(7) En sådan kulturhøst vises yderligere at indeholde hepatitis A ved a) intravenøs inokulering og opnåel-5 se af infektion på egernabe, b) elektronmikroskopi og c) immunadhærens-hæmagglutination som i eksempel 2. I alle tilfælde er høstede kontrolkulturer negative for hepatitis A virus aktivitet.
10 (8) En anden in vitro passage af viruset i levercelle kultur foretages ved inokulering af 0,2 ml af høsten fra passage 1 (trin 6) i det foregående) i nye cel- 2 lekulturer i 25 cm kolber fremstillet ud fra normal abenyrelever. Et mønster af viral vækst og bestem-15 melse opnås, som i meget høj grad svarer til det, der skitseret i trin 5-7.
(9) En sådan seriepassage in vitro af viruset i egern-abeleverkulturer udføres fem gange og kan udføres 20 uendeligt. Med øget antal passager opnås bedre adap tion af viruset til in vitro vækst med hurtigere tilsynekomst af store mængder cytoplasmiske fluorescerende granuler.
25 (10) Der anvendes også et yderligere kriterium for at vi se, at det i denne cellekultur dannede stof rent faktisk er human hepatitis A virus. Høsten fra fjerde seriepassage får lov at reagere med serum fra human hepatitis A patienter på præsygdomsstadiet og 30 ved rekonvalescensstadiet før inokulation af celle kulturer. Viruset neutraliseres, dvs. det overfører ikke infektion til cellekulturen, af rekonvalen-scenssera, men ikke af præsygdomssera.
35
DK 158743 E
11 EKSEMPEL 4
Dyrkning og seriepassage af hepatitis A virus i primære afrikansk grøn abe-nyrecellekulturer 5 (1) Nyrer fjernes kirurgisk fra hepatitis A antistoffrie afrikanske grønne aber. Ved standardteknologi hakkes nyrerne og trypsiniseres, og der fremstilles enkeltlagscellekulturer.
10 (2) Cellekulturerne vokser næsten sammen i løbet af 5-7 dage på et medium bestående af Eagle minimal essential medium indeholdende 10% kalvefosterserum.
tao 15 (3) Ved næsten sammenvoksning erstattes kulturmediet med samme medium, men kun med 0,5% kalvef osterserum.
2
Hver 25 cm kolbekultur indeholdende 5 ml medium in-okuleres med 0,2 ml af en 4%’s vandig ekstrakt af egernabelever fremstillet som de i eksempel 1.
20 (4) Kulturerne inkuberes ved 35 °C og behandles en gang om ugen. Dækglas fjernes, der fikseres og undersøges ved immunofluorescens som i eksempel 2 med periodiske intervaller.
25 (5) Hepatitis A viral antigen bestemmes således i virus-inokuleret, men ikke i uinokuleret kontrolkultur, begyndende ca. 7 dage efter inokulering og stigende i løbet af en 3 ugers periode til 28 dage. Som i 30 eksempel 2 og 3 er antigenet synligt som lysende grønne fluorescerende cytoplastiske granuler. Specificitet bevises som i eksempel 2 og 3.
(6) Cellekulturer høstes som i eksempel 3.
35 (7) Tilstedeværelsen af hepatitis A virus vises yderligere i cellekulturhøst ved a) inokulering af egern- 12
DK 158743 B
aber med sygdom til følge, b) immun-elektronmikro-skopi og c) immun-adhærenshæmagglutination som i eksempel 2 og 3. I alle tilfælde er produkter høstet fra uinokulerede kontrolkulturer frie for hepatitis 5 A virus.
(8) Seriepassage in vitro af hepatitis A virus i primære grøn abe nyrecellekulturer udføres på samme måde som beskrevet for egernabe-leverkulturer i eksempel 3.
10 Sådan seriepassage kan udføres uendeligt.
EKSEMPEL 5
Dyrkning og seriepassage af hepatitis A virus i andre 15 cellekulturer (1) Under anvendelse af metoder som beskrevet i eksempel 4 viser det sig, at hepatitis A virus også kan dyrkes og seriepasseres i cellekulturer af følgende ty- 20 per: a) føtal rhesusabe-nyrecellelinie (FRhK-6), b) primære kyllingefoster-cellekulturer og c) føtal ru-, fiventer egernabe-nyrecellelinie. Positive resulta ter i alle disse kulturer er baseret på inokulering af kulturerne med hepatitis A virus afledt som i 25 eksempel 1.
(2) Hepatitis A virus seriepasseres fem gange i FRhK-6 cellelinie som i det foregående. Virushøsten fra femte passageniveau viser sig positivt at inficere 30 humane diploide lungefibroblast-cellekulturer, ba seret på kriterier som i eksempel 2, 3 og 4. Hepatitis A virus infektionen kan derefter seriepasseres i den humane diploide linie.
35 (3) Hepatitis A virus seriepasseres fem gange i FRhK-6 cellelinie som i (1). Den ved femte passageniveau opnåede virushøst findes positivt at inficere føtale
DK 158743 B
13 diploide rhesusabe-lungecellekulturer (FRhL-2), baseret på kriterier som i eksempel 2, 3 og 4. Hepatitis A virusinfektionen kan derefter seriepasseres i rhesus-diploidlinien.
5 EKSEMPEL 6
Fremstilling af vævskulturdyrket, levende, svækket hepatitis A viral vaccine 10 (1) Hepatitis A virus fremstillet som i eksempell seriepasseres in vitro i primære afrikansk grøn abe-nyrecellekulturer som angivet i eksempel 4. Cellekulturhøst af viruset ved passageniveau 5 og derover 15 vises at inducere hepatitis A antistof ved intrave nøs inokulering i rufiventer egernaber i en mængde på 1000 50%'s vævskultur-infektionsdoser som fremstillet ved fortynding af høsten i fysiologisk saltvand, men ikke at bevirke åbenbar sygdom i dyrene 20 som målt ved serum-isocitrindehydrogenase-værdier (ingen overskred 1500 sigmaenheder) og leverhistopa-thologien (der blev kun noteret mindre ændringer).
De dyr, hvori hepatitis A antistof dannes mod det vævskulturdyrkede virus, bliver resistente over for 25 infektion, hvilket infektionsforsøg med 1000 50%’s egernabe-infektionsdoser af hepatitis A virus injiceret intravenøst viser. Det vævskultur-passerede hepatitis A virus er modificeret således ved fremgangsmåden, at det udgør en levende, svækket hepati-30 tis A viralvaccine.
(2) Hepatitis A virus, der på tilsvarende måde blev passeret in vitro i kulturer af føtale rhesusabe-nyre-celler (FRhK-6) eller føtale rhesusabe-diploid lun- 35 geceller (FRhK-6) eller primære kyllingefosterceller eller humane diploide lungefibroblastceller (MRC5, WI-38) eller føtale rufiventer egernabe-nyrecel-
DK 158743 B
' 14 lelinier, blev -tilsvarende svækket efter 5 eller flere seriepassager og kunne anvendes som en levende, svækket vaccine.
5 EKSEMPEL 7
Fremstilling af vavskulturdyrket, formalin-inaktiveret hepatitis A viral vaccine 10 (1) Hepatitis A virus fremstillet som i eksempel 1 og 6 udsættes for 5 seriepassager in vitro i cellekulturer i primære abenyreceller som i eksempel 4 og 5.
(2) Ved det femte passageniveau eller ved højere passa- 15 geniveauer høstes cellekulturerne efter 3 ugers in kuber ing ved 35 °C, eller på et sådant tidspunkt, hvor indholdet af hepatitis A viral antigen fra den homogeniserede kultur er på ca. 8 eller flere enheder målt ved immun-adhærenshæmagglutination.
20 (3) Cellekulturhøst opnås ved frysetørring af de hele kulturer to gange, afstrygning af cellelagene over i kulturvæsken og homogenisering af hele blandingen ved udsættelse for ultralyd i 15 sekunder.
25 (4) Produktet klares ved centrifugering ved lav hastighed, opvarmes ved 60 °C i 1/2 time, og gencentrifugeres ved lav hastighed til yderligere klaring af væsken.
30 (5) Væsken filtreres derpå gennem 0,45 mikron kalve-in-fusionsbehandlet Millipore-filtre. Dette produkt behandles med 1:4000 formalin i 4 dage ved 35 °C under kontinuerlig omrøring. Formalinen neutraliseres del- 35 vis efter endt behandling med natriumbisulfit, hvil ket giver et restformalinindhold på 10 Ag/ml produkt.
15
DK 158743 B
(6) Produktet indstilles med phosphatpufret saltvand til 10 at indeholde 10 27 nm hepatitis A virus partikler pr. ml og opbevares ved 4 °C.
5 (7) Produktet er fri for infektiøs hepatitis A virus, når det prøves ved intravenøs inokulering i rufiven-ter egernaber.
(8) Produktet er potent som hepatitis A viral vaccine, 10 idet en eller flere subcutane injektioner på 1 ml i ---------------------rvifivervtef egernaber bevirker dannelsen af påviseligt hepatitis A antistof, og dyrene gøres immune for udsættelse for 1000 50%'s egernabe-infektionsdoser af hepatitis A virus.
15 (9) Hepatitis A virus behandlet på tilsvarende måde, bortset fra, at det føres gennem 5 seriepassager in vitro i cellekultur i trin 1 i føtal rhesusabenyre-cellelinie (FRhK-6) eller i primære kyllingefoster- 20 celler, eller i humane diploide lungefibroblastcel- ler (MRC5 eller Wi-38), eller i føtale rhesusabe-di-ploid lungefibroblaster (FRhL-2) giver et tilsvarende produkt, der er frit for infektiøs hepatitis A virus, men er potent som hepatitis A viral vaccine.
25 EKSEMPEL 8
Et diagnostisk antigen omfattende enten levende hepatitis A virus fremstillet som i eksempel 1-7 eller samme virus 30 efter formalininaktivering anvendes i serologiske tests (f.eks. radioimmunoprøven med hel virus som angivet i Purcelle et al., J. Immunol. 116, 349 (1976)) til diagnose af hepatitis A sygdom.
35
Claims (9)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et levende, svækket 5 hepatitis A virus ved modificering og dyrkning af hepatitis A viruset i cellekultur, kendetegnet ved, at man modificerer viruset ved mindst én passage deraf i en modtagelig sub-human primat, fjerner den inficerede lever, inokulerer en in vitro cellekultur med den infice-10 rede lever, dyrker ved inkubering af cellekulturen, indtil hepatitis A antigen kan påvises i kulturcellerne eller -væsken, og passerer viruset yderligere mindst én gang in vitro i cellekultur.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den sub-humane primat er en egernabe, en ugleabe, en rhesusabe, en afrikansk grøn abe, en cynomolgus abe eller en chimpanse.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at egernaben er Saguinus mystax eller S. labiatus (rufiventer).
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet 25 ved, at man anvender mindst fem passager af hepatitis A virus i sub-humane primater.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at viruset passeres mindst to gange i hver af to 30 forskellige arter af modtagelige sub-humane primater.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at cellekulturerne består af primære, kontinuerligt dyrkede eller transformerede celler afledt fra primat- 35 lever eller -nyre. DK 158743 B
7. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at hepatitis A viruset seriepasseres mindst fem gange i en cellekultur, der er egnet til brug i forbindelse med human vaccine, hvilken cellekultur er valgt 5 blandt humane diploide lungefibroblaster, primære afrikansk grøn abe nyreceller, primære kyllingefoster-fi-broblaster eller føtale rhesus-diploide lungeceller.
8. Diagnostisk præparat omfattende et levende, svækket 10 hepatitis A virus, kendetegnet ved, at viruset er opnået ved fremgangsmåden ifølge krav 1.
9. Præparat ifølge krav 8, kendetegnet ved, at det er inaktiveret ved kontakt med et middel, der er i 15 stand til at inaktivere viruset. 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/934,293 US4164566A (en) | 1978-08-17 | 1978-08-17 | Hepatitis a virus cell culture in vitro |
| US93429378 | 1978-08-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK343179A DK343179A (da) | 1980-02-18 |
| DK158743B true DK158743B (da) | 1990-07-09 |
| DK158743C DK158743C (da) | 1990-12-10 |
Family
ID=25465313
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK343179A DK158743C (da) | 1978-08-17 | 1979-08-16 | Fremgangsmaade til fremstilling af et levende, svaekket hepatitis a virus og diagnostisk praeparat opnaaet ved fremgangsmaaden |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4164566A (da) |
| EP (1) | EP0008559B1 (da) |
| JP (1) | JPS5548389A (da) |
| AT (1) | ATE2014T1 (da) |
| CA (1) | CA1135621A (da) |
| DE (1) | DE2964276D1 (da) |
| DK (1) | DK158743C (da) |
| IE (1) | IE48399B1 (da) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6268122B1 (en) | 1978-12-22 | 2001-07-31 | Biogen, Inc. | Recombinant DNA molecules and their method of production |
| US4395395A (en) * | 1979-05-21 | 1983-07-26 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Detection of non-A, non-B hepatitis associated antigen |
| PT71739B (en) | 1979-09-04 | 1982-01-26 | Merck & Co Inc | Process for preparing a cell culture of hepatitis a virus |
| US5514376A (en) * | 1979-09-04 | 1996-05-07 | Merck & Co., Inc. | Cell culture of hepatitis A virus |
| US4301250A (en) * | 1979-11-02 | 1981-11-17 | Merck & Co., Inc. | Method of producing hepatitis B surface antigen |
| PT72015B (en) * | 1979-11-13 | 1982-06-20 | Merck & Co Inc | Process for preparing "invitro" cultures of hepatitis b virus |
| US4382076A (en) * | 1979-11-26 | 1983-05-03 | Merck & Co., Inc. | Hepatitis A antibody assay |
| US4393133A (en) * | 1980-06-12 | 1983-07-12 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Human hepatoma derived cell line, process for preparation thereof, and uses therefor |
| US4301249A (en) * | 1980-07-23 | 1981-11-17 | Merck & Co., Inc. | High titer production of hepatitis A virus |
| AU8746582A (en) * | 1981-09-02 | 1983-03-10 | Biogen N.V. | Hepatitis b virus e type antigen |
| DE3135599A1 (de) * | 1981-09-09 | 1983-08-25 | Flehmig Bertram | An menschliche fibroblastenzellen adaptierte hepatitis-a-viren |
| US4721675A (en) * | 1982-02-01 | 1988-01-26 | Abbott Laboratories | Production of hepatitis A virus in vitro utilizing a persistently virus infected cell culture system |
| US4412002A (en) * | 1982-02-26 | 1983-10-25 | Merck & Co., Inc. | Process for preparing hepatitis A virus |
| USRE37381E1 (en) * | 1982-04-07 | 2001-09-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against hepatitis A virus |
| US4620978A (en) * | 1982-04-07 | 1986-11-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Hepatitis A virus purified and triply cloned |
| US4894228A (en) * | 1982-04-07 | 1990-01-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against hepatitis A virus |
| US4532215A (en) * | 1982-04-07 | 1985-07-30 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Isolation of hepatitis A virus strain HM-175 |
| US4636469A (en) * | 1982-04-07 | 1987-01-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services | Isolation of hepatitis A virus strain HM-175 |
| US5478746A (en) * | 1982-04-07 | 1995-12-26 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | cDNA encoding attenuated cell culture adapted hepatitis A virus genome |
| CA1324094C (en) * | 1985-04-03 | 1993-11-09 | Dino Dina | Hepatitis a virus vaccines |
| US4783407A (en) * | 1985-09-30 | 1988-11-08 | Merck & Co., Inc. | Growth of hepatitus A virus in vero cells |
| EP0261233A4 (en) * | 1986-04-01 | 1988-08-29 | Genelabs Inc | IMMORTALIZED TISSUE CELLS WITH VIRAL SPECIFICITY. |
| DE3633550A1 (de) * | 1986-10-02 | 1988-04-14 | Behringwerke Ag | Vaccine gegen hepatitis a |
| NZ225583A (en) * | 1987-08-06 | 1991-07-26 | Merck & Co Inc | Process for purifying hepatitis a virions (hav) |
| JPH085804B2 (ja) * | 1988-04-28 | 1996-01-24 | 財団法人化学及血清療法研究所 | Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン |
| JPH0751513B2 (ja) * | 1988-04-28 | 1995-06-05 | 国立予防衛生研究所長 | Ａ型肝炎ワクチン |
| JPH0761955B2 (ja) * | 1988-04-28 | 1995-07-05 | 国立予防衛生研究所長 | 凍結乾燥ａ型肝炎ワクチン |
| US6117674A (en) * | 1988-06-30 | 2000-09-12 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Pathogen propagation in cultured three-dimensional tissue mass |
| DE542949T1 (de) * | 1991-05-08 | 1993-09-02 | Schweiz. Serum- & Impfinstitut Bern, Bern | Hepatitis a virusstamm, verfahren zur isolierung eines hepatitis a virusstammes und vakzine hepatitis a. |
| US5549896A (en) * | 1991-05-08 | 1996-08-27 | Schweiz. Serum- & Impfinstitut Bern | Hepatitis a virus strain, method for the isolation of new hepatitis a virus strains and hepatitis a vaccines |
| US5506129A (en) * | 1991-05-24 | 1996-04-09 | Evans Medical Limited | Virus production |
| DZ1706A1 (fr) | 1992-08-07 | 2002-02-17 | Merck & Co Inc | Vaccin contre le virus de l'hepatite a. |
| HRP950097A2 (en) | 1994-03-08 | 1997-06-30 | Merck & Co Inc | Hepatitis a virus culture process |
| US6190859B1 (en) | 1995-04-17 | 2001-02-20 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method and kit for detection of dengue virus |
| US6562562B2 (en) * | 2000-03-10 | 2003-05-13 | Pharmacia & Upjohn S.P.A. | Procedure for partial liver resection in nonhuman primates |
| EP2686423A4 (en) | 2011-03-14 | 2015-01-28 | Nat Res Council Canada | Method of viral production in cells |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3105011A (en) * | 1961-06-19 | 1963-09-24 | Parke Davis & Co | Antigens and process of producing same |
| US3935066A (en) * | 1969-07-03 | 1976-01-27 | Burroughs Wellcome Co. | Cell lines |
| US4029764A (en) * | 1974-12-09 | 1977-06-14 | Merck & Co., Inc. | Hepatitis A antigen |
| US4031203A (en) * | 1974-12-09 | 1977-06-21 | Merck & Co., Inc. | Hepatitis A antigen |
| FR2398504A1 (fr) * | 1977-07-29 | 1979-02-23 | Tours Inst Virologie | Culture de virus de l'hepatite a, in vitro. application a la production d'un antigene reactif, d'immunserums specifiques et de vaccins contre l'hepatite a |
-
1978
- 1978-08-17 US US05/934,293 patent/US4164566A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-08-07 CA CA000333321A patent/CA1135621A/en not_active Expired
- 1979-08-16 IE IE1575/79A patent/IE48399B1/en not_active IP Right Cessation
- 1979-08-16 JP JP10364379A patent/JPS5548389A/ja active Granted
- 1979-08-16 DK DK343179A patent/DK158743C/da not_active IP Right Cessation
- 1979-08-17 AT AT79400577T patent/ATE2014T1/de not_active IP Right Cessation
- 1979-08-17 EP EP79400577A patent/EP0008559B1/en not_active Expired
- 1979-08-17 DE DE7979400577T patent/DE2964276D1/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK343179A (da) | 1980-02-18 |
| DE2964276D1 (en) | 1983-01-20 |
| IE48399B1 (en) | 1985-01-09 |
| EP0008559B1 (en) | 1982-12-15 |
| US4164566A (en) | 1979-08-14 |
| JPH0157954B2 (da) | 1989-12-08 |
| IE791575L (en) | 1980-02-17 |
| EP0008559A1 (en) | 1980-03-05 |
| CA1135621A (en) | 1982-11-16 |
| JPS5548389A (en) | 1980-04-07 |
| DK158743C (da) | 1990-12-10 |
| ATE2014T1 (de) | 1982-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0008559B1 (en) | Live attenuated human hepatitis-a-virus, method for growing it in cell culture in vitro and composition comprising it | |
| Wheeler et al. | Adsorption, purification, and growth characteristics of hepatitis A virus strain HAS-15 propagated in fetal rhesus monkey kidney cells | |
| Conant et al. | Rhinoviruses: Basis for a Numbering System: 1. HeLa Cells for Propagation and Serologic Procedures | |
| CA1164799A (en) | Cell culture of hepatitis a virus | |
| US20080193478A1 (en) | Inactivated Poliomyelitis Vaccine Derived From Sabin Strain Of Polio Virus | |
| KR101617464B1 (ko) | Ｉｐｖ―ｄｐｔ 백신 | |
| US4029764A (en) | Hepatitis A antigen | |
| US4031203A (en) | Hepatitis A antigen | |
| CA1229565A (en) | Propagation of group ii avian adeno (aa) virus in avian cell culture and vaccine produced | |
| CN106563125A (zh) | 鸭甲肝病毒ⅲ型复合物活疫苗及其制备方法 | |
| JPS5817169B2 (ja) | シンセイコウシゲリワクチンノ セイホウ | |
| CN104031888A (zh) | 鸡新城疫病毒弱毒株、灭活疫苗及其应用 | |
| RU2266326C1 (ru) | Штамм "ленинградский" вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2751664C1 (ru) | Способ получения иммуногенных компонентов культурального вируса ящура типов А, О, Азия-1 с применением бессывороточной среды "Cellventoтм ВНК-200" для изготовления противоящурных вакцин | |
| RU2850549C1 (ru) | Вакцина против ящура генотипа SAT-1/IX культуральная инактивированная эмульсионная | |
| US5766603A (en) | Cell culture of hepatitis A virus | |
| CN1059836C (zh) | 应用金黄地鼠肾原代细胞生产流行性出血热灭活疫苗 | |
| JP5084214B2 (ja) | Ｉｐｖワクチン | |
| CN117338916A (zh) | 猪a型塞内卡病毒、猪水泡性口炎病毒二联灭活疫苗及其制备方法 | |
| Ryden | A Study of the Vaccinia Virus in Stable Strains of Tissue Cells Cultivated in Vitro | |
| HK1129836B (en) | Ipv-dpt vaccine | |
| CN106085966A (zh) | 一种禽流感病毒株 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |