<EMI ID=1.1>
La présente invention se rapporte à un dispositifs qui est une pellicule et est donc appelé ci-après pellicule, et à un procédé pour l'utiliser et plus spécifiquement se rapporte 4 une pellicule et à un procédé pour appliquer une quantité mesurée d'un réactif soluble ou dispersante dans l'eau sur un milieu solide
<EMI ID=2.1>
par diffusion moléculaire ou par affinité.
Diverses techniques analytiques ont été aises au point pour la séparation et l'identification des diverses espèces moléculaires d'un échantillon par application de ce dernier sur un milieu solide contenant de l'eau et induction d'une diftu-
<EMI ID=3.1>
assurent la séparation de différentes espèces moléculaires par diffusion différentielle d'un échantillon dans un milieu solide contenant de l'eau. Au cours de tels procédés, il est possible également d'appliquer sur le milieu,avant, pendant ou après la séparation, divers réactifs qui agissent sur une ou plusieurs des espèces moléculaires de l'échantillon en vue de favoriser la séparation ou l'identification de ces espèces.
Ces réactifs ont déjà été introduits de diverses ma-
<EMI ID=4.1>
dans le milieu lors de la fabrication de ce dernier, mais, dans la plupart des cas, ils sont appliquée à la surface du milieu solide contenant de l'eau au moment de leur utilisation soit par dépôt d'une solution ou dispersion liquide du réactif
à la sur:race du milieu, puis repose' soit par immersion du milieu solide dans une solution ou dispersion du réactif dans un
<EMI ID=5.1>
difficile et improbable de mesurer avec précision la quantité
et la localisation de l'espèce moléculaire dans le milieu dans lequel le réactif diffuse. On a également proposé de disperser
<EMI ID=6.1>
l'eau et contenant un réactif au contact de la surface d'un milieu absorbant ou contenant de l'eau, comme du papier, comme
<EMI ID=7.1> ou insolubles dans l'eau ne peuvent aisément être extraits en totalité et diffuser dans un milieu solide contenant de l'eau, ce qui rend impossible d'imposer et de mesurer la quantité qui en est introduite dans le milieu.
La présente invention a pour objet une pellicule et un procédé qui facilitent l'introduction précise et quantitative d'un réactif dans un milieu solide contenant de l'eau. utiliser dans des techniques de séparation par diffusion mole. culaire ou par affinité. L'invention est spécialement utile
<EMI ID=8.1>
La présente invention a pour objet une pellicule permettant d'appliquer une quantité mesurée d'un réactif soluble ou dispersable dans l'eau sur un milieu solide contenant de l'eau à utiliser dans des techniques de séparation par diffusion moléculaire ou par affinité, la pellicule comprenant une feuille solide qui consiste essentiellement en un liant polymère organique solide filmogène- d'une solubilité dans l'eau
<EMI ID=9.1>
feuille de liant, une quantité mesurée du réactif, étant entendu que la feuille a une forme et une dimension permettant de la placer au contact du milieu en vue de la diffusion complète
du réactif et du liant dans le milieu.
L'invention a également pour objet un procédé pour analyser un échantillon par une technique de séparation par diffusion moléculaire dans un milieu solide contenant de l'eau,
<EMI ID=10.1>
réactif dans ce milieu, suivant lequel on place une face de
la pellicule décrite en contact avec le milieu et on entretient le contact pendant un délai suffisant pour permettre au réactif et au liant de diffuser complètement dans le milieu.
<EMI ID=11.1> <EMI ID=12.1> <EMI ID=13.1> <EMI ID=14.1>
L'invention est illustrée sans être limitée par les exemples spécifiques ci-après
<EMI ID=15.1> substrat disponible dans le commerce et d'un tampon. A 1 ml
<EMI ID=16.1>
agite le mélange. On étale alors uniformément 5 ml de la so-
<EMI ID=17.1>
faite d'un poly(téréphtalate d'éthylène) hydrophile insoluble dans l'eau vendu sous le nom de "Cronar" et on sèche rapide-
<EMI ID=18.1>
cée pour constituer une feuille de liant contenant de la déshydrogénase lactique d'une épaisseur d'environ 0,02 mm sur le support.
On équilibre un milieu classique pour électrophorèse consistant en agarose hydraté (couche d'agarose hydraté de 1
à 2 mm d'épaisseur sur une feuille de Cronar comme support) au moyen d'une solution tampon aqueuse normalisée, on inocule du sérum humain et on soumet l'ensemble à l'électrophorèse. Au terme de l'électrophorèse, on place la pellicule de liant contenant la déshydrogénase lactique sur le milieu à l'agarose
en disposant le support vers le haut, puis on introduit le tout
<EMI ID=19.1>
visibles apparaissent dans le milieu et permettent la localisation des constituants du sérum avec lesquels la déshydrogénase lactique a réagi. On retire alors la feuille de support de
la surface du milieu, on lave rapidement celui-ci dans l'eau
<EMI ID=20.1>
poids pour fixer les lignes colorées et on sèche le produit pour obtenir un enregistrement permanent.
Si la chose est désirée, il est possible d'entreposer indéfiniment la feuille de liant contenant le réactif après
sa préparation et avant son utilisation,en l'emballant dans un
<EMI ID=21.1>
<EMI ID=22.1>
On prépare une feuille de liant contenant un réactif
<EMI ID=23.1>
hydrogénase lactique indicatrice, puis on sèche l'ensemble. On utilise la pellicule résultante comme décrit à l'exemple 1. EXEMPLE'. -
<EMI ID=24.1>
chèvre antihumain comme réactif et on agite le mélange pendant un court délai: On répartit ? ml de ce mélange sur une feuille de support de 8,26 cm x 10,2 cm comme à l'exemple 1, puis on sèche
<EMI ID=25.1>
On utilise la pellicule résultante en plaçant.la feuille de liant contenant le réactif au contact d'un milieu d'élec-
<EMI ID=26.1>
évacue le liquide résiduel des creux pour échantillon et on introduit des échantillons de sérum dans les creux. Après
<EMI ID=27.1>
tif a réagi avec les constituants du sérum,
EXEMPLE 4.-
On place la feuille de liant contenant le réactif et préparée comme décrit à l'exemple 3 au contact d'un gel
<EMI ID=28.1> <EMI ID=29.1>
biante, on retire la feuille de support et on évacue le liquide résiduel des creux. On place ensuite dans les creux des fractions de 5 microlitres de sérum humain et on introduit le gel dans une chambre humide. Après 24 heures, le gel présente les anneaux voulus de précipitine autour des creux indiquant la localisation des produits de réaction du sérum avec le réactif après la diffusion.
EXEMPLE 5.-
On prépare également une feuille de liant contenant
un réactif et pouvant s'utiliser dans les opérations décrites
<EMI ID=30.1>
solide lyophilisé sur un support en matière plastique portant une mince couche d'une feuille de polyvinylpyrrolidone humide ou d'un autre adhésif de contact.
EXEMPLE 6.-
<EMI ID=31.1>
en prenant comme réactif pour la feuille de liant l'antigène que constitue le sérum humain normal, l'anticorps constituant l'échantillon essayé.
<EMI ID=32.1> liant. De plus, on remplace la feuille de support par des feuilles de poly(chlorure de vinylidène) (vendu sous le nom
de Saran), de polycarbonate, de poly(méthacrylate de méthyle) et d'acétate de cellulose qui sont toutes Insolubles dans l'eau. On prépare des feuilles se passant de support faites du liant et contenant le réactif à partir des mélanges cidessus en prenant comme support une feuille de polytétrafluoroéthylène vendu sous le nom de Teflon et, avant l'utilisation, en séparant du support la feuille de liant contenant le réactif qui a été séchée.
EXEMPLE 8.-
On dissout 0, 2 g du rouge gras 7B pour la coloration
<EMI ID=33.1>
on étale le mélange rapidement et uniformément sur une feuille de support de 8,26 cm x 10,2 cm faite de poly(téréphtalate d'éthylène) hydrophile et on laisse durcir le produit. On utilise la feuille résultante sans la traiter autrement en plaçant la surface de la feuille de liant contenant le réactif
au contact de la surface d'un gel d'agarose hydraté dans lequel on a déjà exécuté l'électrophorèse des protéines sériques.
<EMI ID=34.1>
che la feuille de support et on constate la présence de bandes visibles de lipoprotéine ayant réagi dans le milieu.
Suivant une autre forme de réalisation, on ajoute au mélange de liant et de réactif 0,01 g d'un agent tensio-actif non ionique, 4 savoir le produit de condensation de 9 à 10 mo-
<EMI ID=35.1>
<EMI ID=36.1>
une électrophorèse.
EXEMPLE 10. "
<EMI ID=37.1> <EMI ID=38.1>
<EMI ID=39.1>
<EMI ID=40.1>
qu'elle comprend une feuille solide consistant essentiellement
<EMI ID=41.1>
<EMI ID = 1.1>
The present invention relates to a device which is a film and is therefore hereinafter referred to as a film, and to a method for using it and more specifically relates to a film and to a method for applying a measured amount of a reagent. soluble or dispersant in water on a solid medium
<EMI ID = 2.1>
by molecular diffusion or by affinity.
Various analytical techniques have been developed for the separation and identification of the various molecular species of a sample by applying the sample to a solid medium containing water and inducing a difference.
<EMI ID = 3.1>
ensure the separation of different molecular species by differential diffusion of a sample in a solid medium containing water. During such methods, it is also possible to apply to the medium, before, during or after the separation, various reagents which act on one or more of the molecular species of the sample in order to promote the separation or the identification. of these species.
These reagents have already been introduced in various ways.
<EMI ID = 4.1>
in the medium during the manufacture of the latter, but, in most cases, they are applied to the surface of the solid medium containing water at the time of their use either by depositing a solution or liquid dispersion of the reagent
to the sur: race of the medium, then rests' either by immersion of the solid medium in a solution or dispersion of the reagent in a
<EMI ID = 5.1>
difficult and unlikely to accurately measure the quantity
and locating the molecular species in the medium into which the reagent diffuses. It has also been proposed to disperse
<EMI ID = 6.1>
water and containing a reagent in contact with the surface of an absorbent or water-containing medium, such as paper, such as
<EMI ID = 7.1> or insoluble in water cannot easily be completely extracted and diffused in a solid medium containing water, which makes it impossible to impose and measure the quantity which is introduced into the medium .
The present invention relates to a film and a method which facilitate the precise and quantitative introduction of a reagent into a solid medium containing water. use in mole diffusion separation techniques. cular or by affinity. The invention is especially useful
<EMI ID = 8.1>
The present invention relates to a film for applying a measured amount of a reagent soluble or dispersible in water to a solid medium containing water for use in separation techniques by molecular diffusion or by affinity, the film comprising a solid sheet which consists essentially of a film-forming solid organic polymeric binder of solubility in water
<EMI ID = 9.1>
binder sheet, a measured quantity of the reagent, it being understood that the sheet has a shape and a dimension allowing it to be placed in contact with the medium with a view to complete diffusion
reagent and binder in the medium.
A subject of the invention is also a method for analyzing a sample by a separation technique by molecular diffusion in a solid medium containing water,
<EMI ID = 10.1>
reactive in this medium, according to which one places a face of
the film described in contact with the medium and the contact is maintained for a sufficient time to allow the reagent and the binder to diffuse completely in the medium.
<EMI ID = 11.1> <EMI ID = 12.1> <EMI ID = 13.1> <EMI ID = 14.1>
The invention is illustrated without being limited by the specific examples below.
<EMI ID = 15.1> commercially available substrate and buffer. At 1 ml
<EMI ID = 16.1>
stir the mixture. 5 ml of the sol-
<EMI ID = 17.1>
made of a hydrophilic, water-insoluble poly (ethylene terephthalate) sold under the name "Cronar" and dried quickly.
<EMI ID = 18.1>
cée to constitute a binder sheet containing lactic dehydrogenase with a thickness of about 0.02 mm on the support.
A standard medium for electrophoresis consisting of hydrated agarose (hydrated agarose layer of 1
2 mm thick on a Cronar sheet as a support) using a standard aqueous buffer solution, human serum is inoculated and the whole is subjected to electrophoresis. At the end of the electrophoresis, the film of binder containing the lactic dehydrogenase is placed on the agarose medium.
by placing the support upwards, then inserting everything
<EMI ID = 19.1>
visible appear in the medium and allow the localization of the constituents of the serum with which the lactic dehydrogenase reacted. The backing sheet is then removed from
the surface of the medium, it is washed quickly in water
<EMI ID = 20.1>
weight to fix the colored lines and the product is dried to obtain a permanent record.
If desired, it is possible to store the binder sheet containing the reagent indefinitely after
its preparation and before its use, by packing it in a
<EMI ID = 21.1>
<EMI ID = 22.1>
A binder sheet is prepared containing a reagent
<EMI ID = 23.1>
indicator lactic hydrogenase, then the whole is dried. The resulting film was used as described in Example 1. EXAMPLE '. -
<EMI ID = 24.1>
goat antihuman as a reagent and we stir the mixture for a short time: We distribute? ml of this mixture on a support sheet of 8.26 cm x 10.2 cm as in Example 1, then dried
<EMI ID = 25.1>
The resulting film is used by placing the binder sheet containing the reagent in contact with an electrical medium.
<EMI ID = 26.1>
drain residual liquid from the sample pits and serum samples are introduced into the pits. After
<EMI ID = 27.1>
tif reacted with the constituents of the serum,
EXAMPLE 4.-
The binder sheet containing the reagent and prepared as described in Example 3 is placed in contact with a gel
<EMI ID = 28.1> <EMI ID = 29.1>
biante, the backing sheet is removed and the residual liquid is drained from the pits. Fractions of 5 microliters of human serum are then placed in the hollows and the gel is introduced into a humid chamber. After 24 hours, the gel exhibits the desired rings of precipitin around the depressions indicating the location of the reaction products of the serum with the reagent after diffusion.
EXAMPLE 5.-
A binder sheet is also prepared containing
a reagent that can be used in the operations described
<EMI ID = 30.1>
A lyophilized solid on a plastic backing carrying a thin layer of a wet polyvinylpyrrolidone sheet or other contact adhesive.
EXAMPLE 6.-
<EMI ID = 31.1>
taking as a reagent for the binder sheet the antigen which constitutes the normal human serum, the antibody constituting the sample tested.
<EMI ID = 32.1> binder. In addition, the backing sheet is replaced by poly (vinylidene chloride) sheets (sold under the name
from Saran), polycarbonate, poly (methyl methacrylate) and cellulose acetate which are all insoluble in water. Carrier-free sheets made of the binder and containing the reagent were prepared from the above mixtures by taking as a carrier a polytetrafluoroethylene sheet sold under the name Teflon and, before use, separating the binder sheet containing the carrier from the carrier. the reagent that has been dried.
EXAMPLE 8.-
0.2 g of fatty red 7B is dissolved for coloring
<EMI ID = 33.1>
The mixture was quickly and evenly spread onto an 8.26 cm x 10.2 cm carrier sheet made of hydrophilic poly (ethylene terephthalate) and the product allowed to cure. The resulting sheet is used without further processing by placing the surface of the binder sheet containing the reagent
in contact with the surface of a hydrated agarose gel in which electrophoresis of serum proteins has already been carried out.
<EMI ID = 34.1>
che the support sheet and there is the presence of visible bands of reacted lipoprotein in the medium.
According to another embodiment, 0.01 g of a nonionic surfactant, namely the condensation product of 9 to 10 mol, is added to the mixture of binder and reagent.
<EMI ID = 35.1>
<EMI ID = 36.1>
electrophoresis.
EXAMPLE 10. "
<EMI ID = 37.1> <EMI ID = 38.1>
<EMI ID = 39.1>
<EMI ID = 40.1>
that it comprises a solid sheet consisting essentially
<EMI ID = 41.1>