BE841185A - Procede pour appliquer un reactif sur un milieu - Google Patents

Description

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La présente invention se rapporte à un dispositifs qui est une pellicule et est donc appelé ci-après pellicule, et à un procédé pour l'utiliser et plus spécifiquement se rapporte 4 une pellicule et à un procédé pour appliquer une quantité mesurée d'un réactif soluble ou dispersante dans l'eau sur un milieu solide

  
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par diffusion moléculaire ou par affinité.

  
Diverses techniques analytiques ont été aises au point pour la séparation et l'identification des diverses espèces moléculaires d'un échantillon par application de ce dernier sur un milieu solide contenant de l'eau et induction d'une diftu-

  
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assurent la séparation de différentes espèces moléculaires par diffusion différentielle d'un échantillon dans un milieu solide contenant de l'eau. Au cours de tels procédés, il est possible également d'appliquer sur le milieu,avant, pendant ou après la séparation, divers réactifs qui agissent sur une ou plusieurs des espèces moléculaires de l'échantillon en vue de favoriser la séparation ou l'identification de ces espèces.

  
Ces réactifs ont déjà été introduits de diverses ma-

  
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dans le milieu lors de la fabrication de ce dernier, mais, dans la plupart des cas, ils sont appliquée à la surface du milieu solide contenant de l'eau au moment de leur utilisation soit par dépôt d'une solution ou dispersion liquide du réactif

  
à la sur:race du milieu, puis repose' soit par immersion du milieu solide dans une solution ou dispersion du réactif dans un

  
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difficile et improbable de mesurer avec précision la quantité

  
et la localisation de l'espèce moléculaire dans le milieu dans lequel le réactif diffuse. On a également proposé de disperser

  
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l'eau et contenant un réactif au contact de la surface d'un milieu absorbant ou contenant de l'eau, comme du papier, comme

  
 <EMI ID=7.1>  ou insolubles dans l'eau ne peuvent aisément être extraits en totalité et diffuser dans un milieu solide contenant de l'eau, ce qui rend impossible d'imposer et de mesurer la quantité qui en est introduite dans le milieu.

  
La présente invention a pour objet une pellicule et un procédé qui facilitent l'introduction précise et quantitative d'un réactif dans un milieu solide contenant de l'eau. utiliser dans des techniques de séparation par diffusion mole. culaire ou par affinité. L'invention est spécialement utile

  
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La présente invention a pour objet une pellicule permettant d'appliquer une quantité mesurée d'un réactif soluble ou dispersable dans l'eau sur un milieu solide contenant de l'eau à utiliser dans des techniques de séparation par diffusion moléculaire ou par affinité, la pellicule comprenant une feuille solide qui consiste essentiellement en un liant polymère organique solide filmogène- d'une solubilité dans l'eau

  
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feuille de liant, une quantité mesurée du réactif, étant entendu que la feuille a une forme et une dimension permettant de la placer au contact du milieu en vue de la diffusion complète

  
du réactif et du liant dans le milieu.

  
L'invention a également pour objet un procédé pour analyser un échantillon par une technique de séparation par diffusion moléculaire dans un milieu solide contenant de l'eau, 

  
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réactif dans ce milieu, suivant lequel on place une face de

  
la pellicule décrite en contact avec le milieu et on entretient le contact pendant un délai suffisant pour permettre au réactif et au liant de diffuser complètement dans le milieu. 

  
 <EMI ID=11.1>   <EMI ID=12.1>   <EMI ID=13.1>   <EMI ID=14.1> 

  
L'invention est illustrée sans être limitée par les exemples spécifiques ci-après 

  
 <EMI ID=15.1>  substrat disponible dans le commerce et d'un tampon. A 1 ml

  
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agite le mélange. On étale alors uniformément 5 ml de la so-

  
 <EMI ID=17.1> 

  
faite d'un poly(téréphtalate d'éthylène) hydrophile insoluble dans l'eau vendu sous le nom de "Cronar" et on sèche rapide-

  
 <EMI ID=18.1> 

  
cée pour constituer une feuille de liant contenant de la déshydrogénase lactique d'une épaisseur d'environ 0,02 mm sur le support.

  
On équilibre un milieu classique pour électrophorèse consistant en agarose hydraté (couche d'agarose hydraté de 1

  
à 2 mm d'épaisseur sur une feuille de Cronar comme support) au moyen d'une solution tampon aqueuse normalisée, on inocule du sérum humain et on soumet l'ensemble à l'électrophorèse. Au terme de l'électrophorèse, on place la pellicule de liant contenant la déshydrogénase lactique sur le milieu à l'agarose

  
en disposant le support vers le haut, puis on introduit le tout

  
 <EMI ID=19.1> 

  
visibles apparaissent dans le milieu et permettent la localisation des constituants du sérum avec lesquels la déshydrogénase lactique a réagi. On retire alors la feuille de support de

  
la surface du milieu, on lave rapidement celui-ci dans l'eau

  
 <EMI ID=20.1> 

  
poids pour fixer les lignes colorées et on sèche le produit pour obtenir un enregistrement permanent.

  
Si la chose est désirée, il est possible d'entreposer indéfiniment la feuille de liant contenant le réactif après

  
sa préparation et avant son utilisation,en l'emballant dans un

  
 <EMI ID=21.1>  

  
 <EMI ID=22.1> 

  
On prépare une feuille de liant contenant un réactif

  
 <EMI ID=23.1> 

  
hydrogénase lactique indicatrice, puis on sèche l'ensemble. On utilise la pellicule résultante comme décrit à l'exemple 1. EXEMPLE'. -

  
 <EMI ID=24.1> 

  
chèvre antihumain comme réactif et on agite le mélange pendant un court délai: On répartit ? ml de ce mélange sur une feuille de support de 8,26 cm x 10,2 cm comme à l'exemple 1, puis on sèche

  
 <EMI ID=25.1> 

  
On utilise la pellicule résultante en plaçant.la feuille de liant contenant le réactif au contact d'un milieu d'élec-

  
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évacue le liquide résiduel des creux pour échantillon et on introduit des échantillons de sérum dans les creux. Après

  
 <EMI ID=27.1> 

  
tif a réagi avec les constituants du sérum,

  
EXEMPLE 4.-

  
On place la feuille de liant contenant le réactif et préparée comme décrit à l'exemple 3 au contact d'un gel

  
 <EMI ID=28.1>   <EMI ID=29.1> 

  
biante, on retire la feuille de support et on évacue le liquide résiduel des creux. On place ensuite dans les creux des fractions de 5 microlitres de sérum humain et on introduit le gel dans une chambre humide. Après 24 heures, le gel présente les anneaux voulus de précipitine autour des creux indiquant la localisation des produits de réaction du sérum avec le réactif après la diffusion.

  
EXEMPLE 5.-

  
On prépare également une feuille de liant contenant

  
un réactif et pouvant s'utiliser dans les opérations décrites

  
 <EMI ID=30.1> 

  
solide lyophilisé sur un support en matière plastique portant une mince couche d'une feuille de polyvinylpyrrolidone humide ou d'un autre adhésif de contact.

  
EXEMPLE 6.-

  
 <EMI ID=31.1> 

  
en prenant comme réactif pour la feuille de liant l'antigène que constitue le sérum humain normal, l'anticorps constituant l'échantillon essayé.

  
 <EMI ID=32.1>  liant. De plus, on remplace la feuille de support par des feuilles de poly(chlorure de vinylidène) (vendu sous le nom

  
de Saran), de polycarbonate, de poly(méthacrylate de méthyle) et d'acétate de cellulose qui sont toutes Insolubles dans l'eau. On prépare des feuilles se passant de support faites du liant et contenant le réactif à partir des mélanges cidessus en prenant comme support une feuille de polytétrafluoroéthylène vendu sous le nom de Teflon et, avant l'utilisation, en séparant du support la feuille de liant contenant le réactif qui a été séchée.

  
EXEMPLE 8.-

  
On dissout 0, 2 g du rouge gras 7B pour la coloration

  
 <EMI ID=33.1> 

  
on étale le mélange rapidement et uniformément sur une feuille de support de 8,26 cm x 10,2 cm faite de poly(téréphtalate d'éthylène) hydrophile et on laisse durcir le produit. On utilise la feuille résultante sans la traiter autrement en plaçant la surface de la feuille de liant contenant le réactif

  
au contact de la surface d'un gel d'agarose hydraté dans lequel on a déjà exécuté l'électrophorèse des protéines sériques.

  
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che la feuille de support et on constate la présence de bandes visibles de lipoprotéine ayant réagi dans le milieu.

  
Suivant une autre forme de réalisation, on ajoute au mélange de liant et de réactif 0,01 g d'un agent tensio-actif non ionique, 4 savoir le produit de condensation de 9 à 10 mo-

  
 <EMI ID=35.1>  

  
 <EMI ID=36.1> 

  
une électrophorèse.

  
EXEMPLE 10. "

  
 <EMI ID=37.1>   <EMI ID=38.1>  

  
 <EMI ID=39.1> 

  
 <EMI ID=40.1> 

  
qu'elle comprend une feuille solide consistant essentiellement

  
 <EMI ID=41.1> 

Claims (1)

1. <EMI ID=42.1>

   réactif et du liant dans le milieu. <EMI ID=43.1>