" Vaccin vivant antigrippal" La présente invention est relative à un nouveau vaccin vivant antigrippal administrable par voie
nasale.
Jusqu'à présent, on a atténué le virus grippal par différents procédés: soit par recombinaison d'une souche pathogène avec une souche atténuée et antigéniquement différente soit par passages en série du virus à basse température de façon à obtenir des souches "froides" et transfert par recombinaison de la caractéristique "froid" à des souches pathogènes, soit par induction de souches thermosensibles
à l'aide d'agents mutagènes et transfert par recombinaison
de la caractéristique "thermosensibilité" à des souches pathogènes, soit par sélection de souches résistantes aux inhibiteurs sériques(J.Infect. Dis. 129 (6): 750-71, 1974).
_Des vaccins vivants contre la grippe obtenus suivant l'un ou l'autre des procédés ont déjà été décrits, entre autres en Union Soviétique (ZYKOV M.P. et coll.: Am. Rev. Resp.Dis. 110: 537-41, 1974), aux Etats-Unis (Maasab H.F. et coll.: Bull. OMS 41 : 589-94, 1969) et en Europe (Peetermans J. et coll.: Symp.Series Immunobiol.Standard 20: 208-13,1973; Brevet belge N[deg.] 822.736).
On constate que, presque chaque année, le sérotype des souches de virus grippal de type A circulant dans le monde diffère légèrement du sérotype des souches observées jusque là. Cette modification antigénique crée des problèmes particuliers pour l'immunisation contre le virus grippal de type A. En effet pour obtenir une efficacité maximale, l'antigène vaccinal doit être le plus proche possible de celui du virus dominant et,
de ce fait, les vaccins contre la grippe doivent être périodiquement adaptés, de façon à protéger contre ces nouvelles souches.
<EMI ID=1.1>
pal de type A obtenus par multiplication de la souche atténuée A/PR8/34 en présence de la souche pathogène A/Scotland/840/74 mais ces reccmbinants sont encore faiblement pathogènes et donc inutilisables pour l'usage vaccinal (Beare.A.S. et coll.:
Lancet 729-32, 18 oct 1975).
En recombinant la souche atténuée de virus grippal
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<EMI ID=3.1>
A/Scotland/840/74 (sérotype H3N2), nous avons maintenant obtenu une nouvelle souche atténuée de virus grippal
dénommée RIT 4025 qui possède une capacité de croissance intermédiaire entre celles des souches A/PR8/34 et A/Scotland/
840/74, est pratiquement non-pathogène et de valeur pour la production d'un vaccin contre la souche de virus grippal A/Scotland 840/74.
La souche de virus grippal recombinant RIT 4025
a été déposée dans la collection de virus du WHO Collaborating Centre for Collection and Evaluattion of Data on Comparative Virology at the Institut für Medizinische Mikrobiologie
<EMI ID=4.1>
La présente invention est donc relative à un vaccin vivant contre la grippe comprenant une dose efficace d'une souche de virus grippal de tyne A obtenue par recombinaison de la souche atténuée A/PR8/34 et de la souche pathogène A/Scotland/840/74- à savoir la souche de virus grippal de type A P/76/ 6 - et un diluant pharmaceutique pour inoculation nasale.
La souche de virus recombinant P/76/6 a été
obtenue par mélange et incubation d'aliquotes (par exemple
des aliquotes de 0,2ml) des souches A/PR8/34 et A/Scotland/
840/74, inoculation du mélange incubé dans la cavité allantoidienne d'oeufs embryonr.és de poule, incubation des oeufs inoculés, récolte du matériel viral obtenu et clonage
du matériel viral par passages en dilution limite.
Pour préparer le vaccin suivant l'invention,on cultive la souche de virus grippal recombinant dans des oeufs embryonnés et plus particulièrement dans la cavité allantoîdienne d'oeufs embryonnés de poule, suivant l'une
ou l'autre des techniques connues pour la production de vaccins de façon à obtenir une quantité importante dudit
virus et, si on le désire, on ajoute éventuellement un stabilisateur (par exemple de la pentone ou du saccharose).
Le matériel viral ainsi obtenu est alors réparti dans des flacons contenant des doses unitaires ou multiples
de vaccin . Une dose unitaire contient de préférence au
<EMI ID=5.1>
La préparation est de préférence lyophilisée pour assurer
sa .conservation.
Le vaccin de l'invention est administré par voie nasale, le cas échéant après avoir été rehydraté extemporanément. Pour assurer une réponse vaccinale optimale, l'administration du vaccin peut se faire par inoculation de deux doses unitaires successives; la seconde dose étant inoculée une semaine environ après la première.
Les exemples qui suivent illustrent la présente invention et ne sont pas destinés à en limiter l'étendue.
EXEMPLE 1
A 0,2ml de liquide allantoïdien d'oeufs embryonnés de poule
<EMI ID=6.1>
grippal A/Scotland/840/74 par millilitre et on conserve le mélange à 4[deg.]C pendant une nuit.
Le mélange est ensuite inoculé dans la cavité allantoïdienne d'oeufs embryonnés de poule qui sont incubés à 35[deg.]C pendant 20 heures.
On récolte la progéniture de cette infection mixte et on la clone par passages en dilution limite dans des oeufs
embryonnés de poule en présence de sérum de poule anti.
A/PR8/34.
On récolte le virus ainsi obtenu et, pour chacun d'eux, on effectue successivement un passage dans des oeufs embryonnés de poule en présence de sérum normal de cobaye et de sérum de poule anti A/PR8/34 et deux passages en dilution limite dans des oeufs embryonnés de poule en présence de sérum normal de cobaye.
Une des souches ainsi isolées, a été sélectionnée et caractérisée. Elle a reçu l'appellation RIT 4025 et a
<EMI ID=7.1>
Centre for Collection and Evaluation of Data on Comparative
<EMI ID=8.1>
Infektions -und Seuchenmedizin der Ludwig-MaximilliansUniversitât à Munich (République Fédérale d'Allemagne) sous le numéro P/76/6.
EXEMPLE 2
!
<EMI ID=9.1>
La souche RIT 4025 (P/76/6) a été étudiée au point de vue ! sérotype, production d'hémagglutinine dans des oeufs embryonnés'
<EMI ID=10.1>
sensibilité au chlorhydrate d'amantadine et multiplication à
39[deg.]C et à 35[deg.]C, comparativement aux souches parentales A/PR8/34 et A/Scotland/840/74.
Les caractéristiques des souches parentales et de la
<EMI ID=11.1>
<EMI ID=12.1>
la moyenne géométrique du titre hémagglutinant (MGT) sur
<EMI ID=13.1>
au chlorhydrate d'amantadine est exprimée par la différence
<EMI ID=14.1>
croissance à différentes températures est exprimée par la différence entre les titres infectieux en C.C.R.P. à 35[deg.]C et
39[deg.]C.
TABLEAU I
<EMI ID=15.1>
Ainsi que le montre le tableau I, la souche RIT 4025 (P/76/6 ) possède le sérotype de la souche pathogène A/Scotland/840/74 et les autres caractéristiques étudiées de la souche A/PR8/34.
EXEMPLE 3
Production de vaccins
On utilise les virus récoltés au dernier passage obtenu
par la méthode décrite dans l'exemple 1 comme inoculum pour la production des lots d'ensemencement de vaccin.
On inocule un échantillon de la souche P/76/6 obtenue à l'exemple 1 dans la cavité allantoidienne d'oeufs embryonnés de poule qui sont ensuite incubés à 35[deg.]C pendant
3 à 5 jours.
On récolte et on mélange les liquides allantoïdiens contenant la souche P/76/6 , on en teste la stérilité
et l'innocuité et on ajoute de la peptone de façon à
obtenir une concentration finale de 5% en peptone.
On répartit la suspension virale dans des flacons
de 3ml de façon à obtenir des doses unitaires (au moins
<EMI ID=16.1>
les flacons sont ensuite bouchés hermétiquement.
Le vaccin est reconstitué au moment de l'inoculation par addition de 0,5 ml d'un diluant qui peut être par exemple de l'eau distillée, du sérum physiologique ou une solution aqueuse de saccharose à 5% et on administre dans les narines le vaccin ainsi reconstitué.
EXEMPLE
Essais cliniques. EXEMPLE
Des doses unitaires du vaccin obtenu par la méthode décrite dans l'exemple 3 ont été reconstituées par addition
<EMI ID=17.1>
inoculées à 9 volontaires sains à raison de 5 gouttes par
narine.
A titre de contrôle, on a inoculé la solution aqueuse stérile de saccharose seule à 2 volontaires.
Tous les volontaires ont été examinés quotidiennement durant six jours après l'inoculation pour détecter d'éventuels symptômes grippaux.
Au. troisième et quatrième jours après l'inoculation, on
a effectué des lavages du nez et de la gorge de chaque
volontaire pour déterminer la présence de virus.
On a prélevé des échantillons de sang avant et
2 à 3 semaines après l'inoculation afin de déterminer le
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Les résultats des essais cliniques sont repris dans le tableau II ci-après:
TABLEAU II
<EMI ID=19.1>
(x) La détermination de l'échelle des réactions cliniques utilisée dans le tableau II est basée sur les descriptions
<EMI ID=20.1>
Edw; Arnold Publ., London 1965).
Ainsi que le montre le tableau II, la souche P/76/6 est atténuée et induit la séroconversion chez près de 90% des vaccinés.
EXEMPLE 5
Des doses unitaires du vaccin obtenu par la méthode décrite dans l'exemple 3 ont été reconstituées par addition de 0,5ml d'une solution aqueuse stérile de saccharose à
5% et inoculées à 17 volontaires sains à raison de 5 gouttes par narine.
A titre de..contrôle, on a inoculé la solution aqueuse stérile de saccharose seule à 15 volontaires.
Environ 7 semaines après la vaccination,on a inoculé
<EMI ID=21.1>
A/Scotland /840/74 dans les narines de chaque volontaire.
Après l'inoculation, chaque volontaire a été isolé
<EMI ID=22.1>
pour détecter d'éventuels symptômes grippaux.
<EMI ID=23.1>
déterminer la présence de virus.
On a également prélevé des échantillons de sang au moment
de l'épreuve et environ 3 semaines après l'inoculation. Les résultats de l'épreuve sont repris dans le tableau III ci-après: <EMI ID=24.1>
TABLEAU III
<EMI ID=25.1>
(x) Déterminé soit par isolement de virus A/Scotland/840/74
soit par un symptôme de type grippal avec multiplication par 4 du taux d'anticorps contre la souche de virus A/Scotland/840/74.
Comme il résulte de la différence entre le taux de réisolement du virus d'épreuve chez les vaccinés et le taux de réisolement du virus d'épreuve chez les témoins, la souche vaccinale P/76/6 présente un taux de protection significatif contre
la souche homologue A/Scotland/840/74.
<EMI ID=26.1>
REVENDICATIONS S
1) Vaccin antigrippal vivant administrable par voie nasale
comprenant une dose efficace de la souche de virus grippal . de type A P/76/6 et un diluant pharmaceutique pour administration par voie nasale.