BE844998A

BE844998A - Procede pour isoler des agents actifs d'extraits vegetaux

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Publication number: BE844998A
Application number: BE169656A
Authority: BE
Priority date: 1976-08-06
Filing date: 1976-08-06
Publication date: 1977-02-07

Description

<EMI ID=2.1> autre variété de l'espèce est Hontanoa floribunda. Cette plante est décrite avec détail dans Las Plantas Médicinales de Mexico,

Cette plante est utilisée depuis des siècles sous forme de"tisanes" ou d'autres préparations aqueuses sommaires, princi-

ou le rétablissement des règles. Cette application a déjà été décrite, mais aucune étude chimique ou pharmacologique définitive n'a encore été exécutée. Les quelques travaux publiés sont contradictoires dans leurs conclusions.

Suivant l'usage populaire, l'intéressée prend normale-

dans de l'eau censé peur la préparation d'une boisson chaude. Normalement, elle agit ainsi après une suppression des règles annon-

femmes indubitablement enceintes consomment la tisane pour interrompre une grossesse indésirable. Il est évident que cette tisane contient un mélange complexe d'agents dont beaucoup peuvent être indésirablesou inutilespour exercer l'effet recherché. Comme on

le sait, les substances végétales naturelles sont généralement

d'une composition extrêmement compliquée. Elles contiennent normalement de nombreux composés ayant des propriétés chimiques et physiques semblables et d'autres ayant des propriétés nettement différentes et leur séparation et leur identification est en général difficile. Aucun procédé pour isoler les agents actifs de Montanoa n'avait été décrit jusqu'à présent.

L'invention a pour but de procurer un procédé pour isoler d'extraits bruts de Kontanoa des agents actifs purifiés propres à évacuer l'utérus..

Elle a également pour but de procurer des composés sensiblemer.t purs isolés d'extraits bruts de Montanoa qui sont utiles comme agents actifs propres à évacuer l'utérus.

Procédé A

Suivant le procédé A) de l'invention, on effectue une extraction en milieu aqueux, mais qui est toujours précédée ou suivie d'une extraction en milieu organique. Par exemple, on peut avec avantage traiter une partie de la plante, de préférence les feuilles, contenant les agents actifs propres à évacuer l'utérus soit (a) en effectuant une extraction des feuilles à l'aide d'un milieu aqueux, puis en extrayant la couche aqueuse avec un solvant organique, soit (b) en effectuant une extraction des feuilles à l'aide d'un solvant organique,puis en extrayant la couche organique avec un milieu aqueux.

Par "agent actif propre à évacuer l'utérus", on entend un agent qui provoque la contraction de l'utérus ou l'expulsion de son contenu chez les homéothermes. De tels agents sont généralement utilisés pour faire apparaître les règles,pour expulser

d'un foetus, pour prcvoquer l'avortement et le travail différé

et dans différentes situations dans lesquelles le contenu de l'utérus, par exemple le foetus ou le placenta, doit être évacué .

La forme de réalisation préférée du procédé A) est

celle décrite sous (a). Des solvants normalement préférés pour

ce procédé sont les esters aliphatiques à chaîne courte non miscibles à l'eau comme l'acétate de méthyle, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle et divers esters à chaîne plus longue, les hydrocarbures aliphatiques comme le pentane, l'hexane ou l'heptane, les hydrocarbures chlorés comme le chloroforme, le tétrachlorure de carbone, le chlorure de méthylène et les hydrocarbures aromatiques comme le benzène, le toluène, le xylène etc., outre

les alcools aliphatiques supérieurs non miscibles à l'eau, comme le butanol et le pentanol. L'extraction en milieu aqueux est une opération importante du procédé, mais il convient da noter que

des solvants miscibles à l'eau peuvent être utilisés avec succès en mélange avec l'eau pendant l'extraction en milieu aqueux. Ainsi, l'éthanol aqueux et le méthanol aqueux conviennent pour l'extraction en milieu aqueux avant ou après l'extraction à l'aide d'un solvant organique. De plus, différentes opérations intermédiaires peuvent donner de bons résultats, comme il ressortira de la description plus détaillée de l'invention.

En pratique, on choisit une quantité convenable, à savoir

qu'on lave à l'eau froide ; éventuellement, on peut divi- ser les feuilles en petits fragments et extraire ceux-ci ensuite

indiqué de manière générale ci-dessus. L'extraction en milieu aqueux est avantageusement exécutée à une température de 25 à 100 [deg.]C , et de préférence à l'ébullition pendant 10 minutes ou davantage. Une extraction de plus de 2 heures n'est généralement pas nécessaire ni économique. La couche aqueuse résultante,qui est une solu- tion de couleur foncée,est alors séparée du résidu de plante.

Cette solution est alors soumise à l'extraction avec un

. solvant organique de la manière générale décrite ci-dessus. &#65533; pratique, il est préférable d'extraire la phase aqueuse avec un égal volume d'un solvant organique approprié. Cette opération est avantageusement exécutée à une température s'échelonnant d'un

;f

du solvant organique. Il est préférable d'effectuer l'extraction au point d'ébullition du solvant.

L'extraction par le solvant organique est poursuivie jusqu'à collecte de la quantité voulue de substance, à savoir d'habitude 1 à 2 heures. Les extraits organiques sont mélangés, évaporés à siccité,de préférence sous pression réduite et avantageusement à des températures de 30 à 80[deg.]C.

Comme indicée ci-dessus, l'extraction en milieu aqueux peut être précédée de l'extraction par le solvant organique. Dans ce cas, les conditions mentionnées pour chaque stade d'extraction sont également d'application pour l'extraction des feuilles ou l'extraction de l'élirait des feuilles. De plus, le produit résultant de la double extraction peut subir des traitements sup-

Cet aspect de l'invention est illustré dans les exemples et spécialement dans l'exemple 1.

Le procède ci-dessus donne un extrait propre à évacuer l'utérus qui contient beaucoup moins d'impuretés que la matière première.

Les agents actifs propre à évacuer l'utérus sont mis

en évidence dans l'entrait brut par observation des contractions utérines et de l'interruption de l'état de gravidité sur des animaux. Les contractions utérines sous l'effet de l'extrait brut sont décelables à des doses d'extrait d'environ 150 à 500 mg/kg. L'interruption de l'état de gravidité chez le cobaye est observable pour des doses d'extrait brut de 300 à 500 mg/kg.

Procédé B

Le produit obtenu par le procédé d'extraction A),bien que contenant le principe actif et manifestant une utile activité biologique, contient encore des constituants indésirables qui ne sont pas nécessaires pour obtenir l'effet recherché. Cet extrait

exemple celui obterm par extraction en milieu aqueux et par un solvant organique suivait le procédé A). Suivant une forme de réalisation, le produit à purifier est d'abord dissous dans un solvant organique,puis la solution résultante est filtrée et lavée avec une solution aqueuse d'une base de force moyenne,comme le bicarbo-

en vue de l'élimination des impuretés hydrosolubles et acides. Il est préférable d'utiliser une solution saturée de la base. Des solvants organiques appropriés sont notamment les éthers aliphatiques inférieurs, conne l'éther diéthylique ou dibutylique, les esters aliphatiques inférieurs comme l'acétate de méthyle, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle et d'autres esters à longue chaîne, les hydrocarbures aliphatiques comme le pentane, l'hexane ou l'heptane, les hydrocarbures chlorés comme le chloroforme, le tétrachlorure de carbone ou le chlorure de méthylène et les hydrocar-

tion peut être concentrée et utilisée directement pour le stade suivant, ou bien le solvant organique peut être chassé suivant des techniques classiques et le résidu mélangé à un solvant organique peut être versé dans une colonne d'un agent adsorbant. Des solvants

gel de silice et l'alusine. L'agent adsorbant préféré est un copolymère d'acétate de vinyle. Différentes fractions sont d'habitude recueillies et l'agent biologiquement actif de chacune des fractions est décelé par chromatographie en couche mince. Toutefois lorsqu'un produit plus pur est préféré, les fractions contenant l'agent actif sont combinées et chronatographiées sur un agent adsorbant tel que le gel de silice, l'alumine ou celui vendu sous le nom de Florisil. La colonne est éluée avec un solvant organique ou un mélange de tels solvants. Des solvants appropriés sont notamment les hydrocarbures aromatiques, comme le benzène, le toluène, le xylène etc. et les esters aliphatiques inférieurs comme l'acétate de méthyle, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle etc. ou encore des mélanges de ces mêmes solvants.

Diverses fractions sont collectées et l'agent actif est à nouveau décelé par chromatographie en couche mince. Les fractions contenant l'agent recherché sont combinées et le solvant en est chassé pour laisser subsister un résidu d'agent actif propre à évacuer l'utérus.

rification initiale peut être davantage purifié par chromatographie sur des agents adsorbants comme l'acide silicique, le gel de silice ou celui vendu sous le nom de Florisil au moyen de mélanges de solvants polaires et non polaires pour l'élution. L'agent adsorbant préféré est l'acide silicique. L'acide silicique neutre ou acide, convient mais l'acide silicique neutre est préféré. La substance

à chromatographier est de préférence d'abord dissoute dans l'un

ou l'autre solvant convenable, parmi lesquels le solvant préféré est le chloroforme,puis la solution est versée sur une colonne

de l'agent adsorbant mélangé à un solvant approprié, après quoi la colonne est éluée avec un sélange d'un solvant polaire et d'un solvant non polaire. Des solvants polaires qui conviennent sont notamment les alcanols inférieurs tels que l'éthanol, le méthanol,

le propanol, l'isopropanol, le butanol etc. les esters alkyliques inférieurs comme l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle etc., et les cétones aliphatiques comme l'acétone, la méthyléthylcétone, la méthylisobutylcétone etc.. Des solvants non polaires utiles sont les hydrocarbures chlorés comme le chloroforme, les hydrocarbures comme le pentane, l'hexane, l'heptane etc. et les hydrocarbures aromatiques comme le benzène, le toluène etc. Le mélange préféré 'de solvants est un mélange d'isopropanol et de chloroforme.

Les fractions collectées sont évaporées à siccité à des tempéra-

La composition des fractions collectées est observée par chromatographie en couche nince ou chromatographie en phase gazeuse.

En variante, la solution de l'extrait brut peut être chromatographiée directement sans élimination du solvant. Pour la commodité des manipulations, la solution peut être concentrée avant la chromatographie.

Suivant une autre forme de réalisation, l'extrait semipur peut être purifié par chromatographie en phase liquide sous haute pression. La matière première est dissoute dans un solvant organique convenable et la solution obtenue est lavée avec un alcali de force moyenne. Le solvant est classe -le manière classique et le résidu est mélangé avec une petite quantité de l'agent adsorbant utilisé pour la chromatographie en phase liquide. Différentes variétés de gel de silice, d'alumine et de pellicules de polyamide conviennent comme agents adsorbants. Il est préférable de garnir la colonne de gel de silice.

Le mélange de résidu et d'agent adsorbant est introduit dans une colonne préparative contenant un supplément d'agent adsorbant, puis la colonne est éluée avec un solvant non polaire ou un mélange de solvants non polaires comme le dioxanne, l'heptane, l'hexane, le pentane etc. La composition des fractions collectées est observée par chromatographie en phase gazeuse et/ou chromatographie en couche mince. Les fractions contenant le principe actif sont alors combinées et le solvant en est chassé. Des pressions d'environ 21 à 35 kg/cm<2> conviennent pour la chromatographie en phase liquide sous haute

Les purifications ci-dessus donnent des agents actifs propres à évacuer l'utérus qui contiennent au moins trois constituants majeurs,comme le montre la chromatographie en phase gazeuse. Les agents actifs propresà évacuer l'utérus sont mis

en évidence dans le mélange par observation des contractions utérines et de l'interruption de l'état de gravidité chez les animaux. L'interruption de l'état de gravidité chez le cobaye est observable lorsque le mélange est administré en doses d'environ 75 à

100 mg/kg. Les contractions utérines sont observées pour des doses du mélange d'environ 2,5 à 5,0 mg/kg.

Procédé C

Les agents actifs purifiés propres à évacuer l'utérus peuvent être isolés des extraits ci-dessus par des opérations sup-plémentaires de purification.

L'extrait initial à partir duquel les agents actifs purifiés propres à évacuer l'utérus sont obtenus s'obtient à

1 partir de Montanoa par une série d'extractions et de puri- fications. Suivant l'un des procédés, les feuilles sont d'abord mises en suspension dans de l'eau et le mélange est chauffé à environ 98-100[deg.]C pendant quelques heures. Le mélange chaud est filtré et le résidu solide est lavé à l'eau chaude. Le nouveau mélange est filtré et les filtrats sont combinés. Le mélange des extraits aqueux est extrait à plusieurs reprises avec un solvant organique. Après séparation de la phase aqueuse et de la phase

non aqueuse, le solvant organique est chassé d'une façon classique. Des solvants convenant pour l'extraction en milieu organique sont notamment les esters aliphatiques non miscibles à l'eau comme l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, les hydrocarbures aliphatiques comme le pentane, l'hexane et l'heptane, les hydrocarbures chlorés comme le chloroforme, le tétrachlorure de carbone et

le chlorure de méthylène, les hydrocarbures aromatiques comme

le benzène et le toluène et les alcools aliphatiques non miscibles à l'eau comme le butanol, le pentanol, l'hexanol etc. Le solvant préféré est l'acétate d'éthyle. Le résidu obtenu après élimina- tion du solvant organique est alors extrait à plusieurs reprises avec un solvant organique chaud tel que le benzène ou le toluène. Le solvant est à nouveau chassé et le résidu est lavé plusieurs fois avec un solvant organique chaud et de préférence avec de l'hexane bouillant au reflux. Pour une purification supplémentaire,;

charbon actif. Le résidu obtenu par filtration et élimination du solvant constitue la matière première permettant de préparer les agents actifs purifiés propres à évacuer l'utérus qui font l'objet de l'invention.

Les agents actifs purifiés propres à évacuer l'utérus

qui font l'objet de l'invention s'obtiennent par dissolution de l'extrait brut obtenu par le procédé A dans un solvant organique non miscible à l'eau, par filtration de la solution résultante

et par lavage du filtrat avec une solution aqueuse d'une base

de force moyenne, comme le bicarbonate de sodium, le bicarbonate

de potassium, le carbonate de sodium o.u le carbonate de potassium entre autres, en vue de la séparation des impuretés hydrosolubles

et acides. Il est préférable d'utiliser une solution saturée de

la base. Des solvants organiques appropriés sont notamment les éthers aliphatiques inférieurs, comme l'éther diéthylique, l'éther di-n-propylique, l'éther diisopropylique, l'éther méthylique de n-butyle, l'éther éthylique de n-butyle et l'éther dibutylique,

les esters aliphatiques inférieurs,comme l'acétate de méthyle, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle, le propionate d'éthyle et d'autres esters à chaîne longue, comme l'acétate d'amyle, l'acétate d'hexyle, etc., les hydrocarbures chlorés comme le chloroforme, le tétrachlorure de carbone et le chlorure de méthylène et les hydrocarbures aromatiques comme le benzène, le toluène, le xylène etc.

Le solvant organique est chassé suivant des techniques classiques, de préférence sous vide, et l'extrait semi-purifié résultant est purifié davantage par chromatographie sur un agent adsorbant, par exemple l'acide silicique, le gel de silice ou celui vendu sous le nom de Florisil, au moyen de mélanges de solvants polaires et non polaires pour l'élution. L'agent adsorbant

CD

préféré est l'acide silicique. L'acide silicique neutre ou acide convient)mais l'acide silicique neutre est préférable. Le produit à chromatographier est de préférence dissous d'abord dans l'un ou

le chloroforme, puis la solution est versée sur une colonne de l'agent adsorbant mélangé à un solvant approprié, après quoi la colonne est éluée avec un mélange d'un solvant polaire et d'un solvant non polaire. Des solvants polaires qui conviennent sont notamment les alcanols inférieurs, comme l'éthanol, le méthanol,

le propanol, l'isopropanol, le butanol etc., les esters alkyliques inférieurs comme l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle etc., et les cétones aliphatiques confie l'acétone, la méthyléthylcétone,

la méthylisobutylcétone etc. D'utiles solvants non polaires sont notamment les hydrocarbures chlorés comme le chloroforme, le chlorure de méthylène et le tétrachlorure de carbone, les hydro- ' ' carbures aliphatiques comme le pentane, l'hexane, l'heptane etc. et les hydrocarbures aromatiques comme le benzène, le toluène etc.

Le mélange préféré de solvants est un mélange d'isopropanol et de chloroforme. Les fractions collectées sont évaporées à siccité

à des températures s'échelonnant de la température ambiante à en-

par chromatographie en couche mince ou chromatographie en phase gazeuse. En variante, la solution de l'extrait brut peut être chromatographiée directement sans élimination du solvant. Pour la commodité des manipulations, la solution peut être concentrée

La purification ci-dessus donne des agents actifs propres à évacuer l'utérus qui contiennent au moins trois constituants majeurs comme le montre la chromatographie en phase gazeuse. Les agents actifs propres à évacuer l'utérus sont mis

100 mg/kg. Les contractions utérines sont observées pour des doses

Les fractions contenant les agents actifs propres à évacuer l'utérus sont combinées et chromatographiées sur une colonne d'un gel comprenant un polymère organique qui gonfle dans les ' solvants organiques. Des polymères qui conviennent sont notaient des copolymères de l'acétate de vinyle, le dextrane réticulé et

le polystyrène. Des solvants utiles sont,entre autres,le benzène, le toluène, le tétrahydrofuranne, le cyclohexane etc. Le polymère préféré est un copolymère d'acétate de vinyle. La colonne est éluée avec un solvant organique, qui est de préférence celui dans lequel le résidu est dissous. En général, différentes fractions sont collectées et leur composition est observée par chromatographie en phase gazeuse ou chromatographie en couche mince. Ce mode opératoire donne au moins deux composés chimiquement distincts propres à évacuer l'utérus,comme l'indiquent la chromatographie en phase gazeuse et l'analyse spectroscopique. La capacité à provoquer l'évacuation de l'utérus que manifestent les composés isolés est déterminée par mesure des contractions utérines et de l'effica- cité d'interruption de l'état de gravidité chez les animaux.

Si la chose est désirée, des impuretés mineures peuvent être séparées des compensa déjà purifiés par de nouvelles chromatographies sur certains agents adsorbants, par exemple l'acide silicique ou celui vendu sous le nom de Florisil. La colonne est à cette fin éluée avec un solvant organique ou un mélange de tels solvants, parmi lesquels un mélange de chloroforme et d'isopropanol est préféré et la composition des fractions éluées est observée par chromatographie en couche mince.

Les composés purifiés propres à évacuer l'utérus sont
- efficaces en doses de 1,0 à environ 100 mg/kg. La dose choisie dépend de l'espèce à laquelle appartient l'homéotherme auquel elle est administrée.

Les composés peuvent être administrés sous forme de compositions préparées suivant des techniques pharmaceutiques convenables. Des compositions appropriées sont notamment les solutions, suspensions et formes dosées solides.

Les exemples ci-après illustrent des formes de réalisation spécifiques de l'invention.

Procédé A

EXEMPLE 1 -

Extraction des feuilles au moyen d'un solvant organique, puis extraction en milieu aqueux de la couche organique_____________

On chauffe au reflux pendant 1 heure 2,0 kg de feuilles sèches de Montanoa dans du chloroforme. Après filtration, on concentre l'extrait chloroformique à siccité sous pression réduite

à nouveau au moyen de chloroforme,puis on sépare la couche chloroformique et on la concentre à siccité sous pression réduite pour obtenir un sirop brun jaune. On dissout le sirop dans de l'éther et on lave cette solution avec une solution aqueuse saturée de

de sodium et avec de l'eau, après quoi on sèche la solution sur du sulfate de sodium anhydre. Par évaporation de l'éther, on obtient
11,9 g de l'extrait brut se présentant sous la forme d'une huile jaune.

EXEMPLE 2 -

Extraction des feuilles en milieu aqueux,puis extraction de la couche aqueuse à l'aide d'un solvant organique

et on l'extrait au chloroforme. On sèche la phase chloroformique et on la filtre, puis on évapore le solvant du filtrat sous près- .

extrait la phase aqueuse une nouvelle fois à l'acétate d'éthyle. On sèche la phase organique sur du sulfate de sodium anhydre, on la filtre et on la concentre sous pression réduite pour obtenir 1,99 g de résidu. On mélange le résidu de l'extraction par le chlo- <EMI ID=29.1>

tenir l'extrait brut.

EXEMPLE 3 -

Extraction des feuilles en milieu aqueux)puis extraction de la couche aqueuse au moyen d'acétate d'éthyle

sèches de Montanoa dans 2,5 litres d'eau. On concentre l'extrait aqueux jusqu'à un volume total de 250 ml et on l'extrait quatre

organiques et on les sèche sur du sulfate de sodium anhydre. Par filtration et élimination du solvant sous vide, on obtient 1,3 g d'une masse de couleur foncée. On extrait ce résidu avec
100 ml de chloroforme, on filtre le tout et on concentre le filtrat sous vide pour obtenir 0,840 g d'un résidu brut.

EXEMPLE 4 -

Extraction des feuilles au moyen d'hexane

On chauffe 966 g de feuilles sèches de Montanoa au reflux pendant 3 heures avec suffisamment d'hexane pour couvrir complètement les feuilles. Après filtration, on concentre le liquide

d'un extrait brut verdatre foncé.

EXEMPLE ? -

Extraction à l'hexane puis extraction à l'eau de la couche organique, puis nouvelle extraction à l'acétate d'éthyle de la couche aqueuse

de Montanoa et on chauffe le mélange sous agitation pendant 15 à 20 minutes jusqu'à début d'ébullition. On décante l'extrait dans l'hexane, on le filtre et on y ajoute un égal volume d'eau

couche organique à nouveau un égal volume d'eau, sous agitation. Après avoir séparé les couches, on traite la phase organique

les extrait trois fois avec un égal volume d'acétate d'éthyle.

fractions d'hexane, cosse décrit ci-dessus' à propos de l'extraction au benzène, jusqu'à ce que l'hexane.soit incolore. On obtient ainsi un résidu d'environ 8 g ayant la consistance d'un sirop épais.

ajoute à la solution 5 g du charbon actif vendu sous le nota de Darco. On agite le mélange à la température ambiante pendant 1 heure au terne de laquelle le charbon est floculé. Cn filtre

le mélange et on évapore le filtrat à siccité sous vide à température peu élevée (30[deg.]C) pour obtenir 4 à 6 g d'extrait brut. Procédé B

avec 50 ml d'une solution sa ferrée de bicarbonate de sodium. On sèche la solution éthérée sur &#65533;1 sulfate de sodium anhydre, on la

d'une huile jaune clair. On dissout l'huile jaune dans 50 ml

contenant 2 kg d'un copolynère d'acétate de vinyle gonflant dans les solvants organiques vendu sous le nom de OR-PVA Merck-0-Gel

benzène, on collecte les fractions et on en évapore le solvant.

Procédé B

EXEMPLE 3 -

benzène, on collecte les fractions et on en évapore le solvant.

On dissout les solides de la fraction n[deg.]3, à savoir

sèche de 60 g de gel de silice de 1 m x 2 cm. On élue la colonne

collecté 25 fractions chacune de 125 ml, on remplace l'éluant par

un mélange 1:1 de benzène et d'acétate d'éthyle. On recueille

i chromatographie en couche mince. On chasse le solvant de la frac-

; forme, puis on verse la solution sur 5 plaques de chromatographie en couche mince préparative et on développe les plaques six fois au

1 benzène et trois fois avec un mélange 4:1 de benzène et d'acétate d'éthyle. On recueille la bande principale qu'on élue à l'acétate d'éthyle. On chasse le solvant pour obtenir un produit semi-purifié.

EXEMPLE 9 -

7 dans 50 ml d'éther et on filtre la solution,puis on lave le

On sèche la solution éthérée sur du sulfate de sodium, on la filtre et on évapore le filtrat à siccité. On dissout le résidu de 3,6 g dans 25 ml de chloroforme et on verse la solution sur une colonne

dans du chloroforme. On élue la colonne avec du chloroforme et avec des mélanges de chloroforme et d'isopropanol en recueillant des fractions de 25 ni. On combine cinq fractions successives

de 25 ml pour obtenir une fraction de 125 ml. On recueille à peu près 75 fractions de 125 ml et on les évapore à siccité sous vide

On vérifie le contenu des fractions par chromatographie

de la chromatographie en couche mince, on combine les fractions

sidu huileux.

On purifie ce résidu davantage sur des plaques de chromatographie en couche mince préparative garnies de gel de silice.

se présentant sous la forme d'une huile.

EXEMPLE 10 -

bonate de sodinm pendant 1 minute, puis on centrifuge le mélange et on sépare la couche éthérée. On lave la solution de bicarbonate de sodium avec encore 2 fois 2 ml d'éther. On combine les extraits éthérés et on en chasse le solvant par évaporation. On mélange

le résidu sec avec une petite quantité de gel de silice convenant

la colonne dans le chronatographe en phase liquide type 830 de la Société du Pont et on élue la colonne avec un gradient s'éche-

de dioxanne dans l'hexane pendant 30 minutes et avec 7,5% de dioxanne dans l'hexane pendant 30 minutes. Cn observe la composition des fractions recueillies par chromatographie en phase gazeuse et chromatographie en couche mince en décelant le composé recherché dans l'ultraviolet à une longueur d'onde de

fié.

Procédé C

Préparation de la matière première

On introduit 10 kg de feuilles de Montanoa et 114 litres d'eau dans une cuve en acier inoxydable d'une capacité de 380 litres munie d'une chemise pour le chauffage à la vapeur. On chauffe

à autre. On filtre le mélange à chaud sur un linge pour obtenir une infusion foncée limpide d'un volume d'environ 95 litres. On lave le résidu solide dans la cuve avec 15,2 litres d'eau chaude, on filtre le tout et on mélange le filtrat avec l'infusion obtenue ci-dessus. On soumet le mélange des extraits aqueux à

le mélange vivement puis on le laisse reposer. Au moyen d'un siphon, on sépare la couche mousseuse supérieure pour rompre l'éaulsion et collecter autant d'acétate d'éthyle que possible. On ajoute 76 litres d'acétate d'éthyle au mélange et on répète l'ope- '

extraits dans l'acétate d'éthyle. On extrait le résidu avec

trois fractions de benzène chauffé à 75-80[deg.]C et pris en une quantité totale de 10 litres. On évapore les extraits benzéniques

à 50[deg.]C sous vide et on lave le résidu trois fois avec un total

de 8 litres d'hexane bouillant au reflux. Cn dissout le résidu

lavé à l'hexane dans 2 litres d'acétone, on y ajoute 10 g du charbon vendu sous le nom de Nuchar et on agite le mélange pendant

1 heure à la température ambiante. On sépare le charbon par filtration,puis on évapore le filtrat par distillation à 30[deg.]C sous vi d e pour obtenir 69 g d'extrait brut.

TEMPLE 11 -

On dissout 50 g de l'extrait brut constituant la sa- tière première dans 5 litras d'éther,puis on filtre la solution

de chloroforme et on verse la solution sur une colonne de 122 cm x
12,5 cm contenant 2,5 kg d'acide silicique neutre tassé dans du chloroforme. On élue la colonne au chloroforme et avec des mélanges de chloroforme et d'isopropanol de manière à recueillir 110 fractions. On évapore les fractions utiles à siccité sous vide

indiqué ci-après:

On dissout 3,2 g de ce résidu dans 50 ml de benzène et on verse la solution sur une colonne de 89 cm x 10 cm

2000 dans du benzène. On élue la colonne avec du benzène et on

position des fractions.

mélange introduit dans la colonne.

ayant les propriétés spectroscopiques ci-après:

1,01 ppm.

B) On évapore la fraction 31 pour obtenir 0,326 g d'un composé se présentant sous la forme d'une huile et ayant les pro- <EMI ID=85.1> <EMI ID=86.1>

On applique le code opératoire général ci-après pour déceler les contractions utérines chez les animaux de laboratoire.

On anesthésie des femelles à maturité de lapin de Nouvelle-Zélande au moyen de pentobarbital sodique et on procède

à l'ovariectomie. Après 1 semaine de convalescence, on administre

par jour de 17P-oestradiol,puis par voie sous-cutanée, pendant 7 jours consécutif s, 1,0 mg par jour de progestérone. Cn perfuse l'utérus et les oviductes pendant 72 heures après la dernière ad-

(Fertil. Steril. 2&#65533;:221-229) en effectuant quelques modifications. On perfuse les oviductes et l'utérus à raison de 53 /il par minute. On effectue la perfusion de l'utérus avec un tube pénétrant de

1,0 cm dans la lumière de l'utérus à partir du cOté de l'oviducte . On ligature l'utérus à la jonction avec le tube. On insère une autre canule jusqu'à 1,0 cm dans l'utérus par une petite incision

veineuse, on administre le composé à essayer dans la veine jugulaire en mélange avec un. véhicule contenant du polyéthylèneglycol 200,

On attache la canule à un transducteur de marque P23-Dc Stathan raccordé à son tour à un enregistreur polygraphe Grass, modèle et on mesure les contractions de l'utérus.

Une administration intraveineuse du composé obtenu dans

re les contractions de l'utérus et la relaxation de l'oviducte chez les lapines privées de progestérone depuis 72 heures. Le <EMI ID=93.1>

On applique le mode opératoire général ci-après pour apprécier l'interruption de l'état de gravidité après nidation. Mode opératoire II

On fait cohabiter sans interruption (monogamie) des

jusqu'au moment où on constate que la copulation a eu lieu. On considère que ce ocrent est le jour 1 de l'état de gravidité. On administre par voie intrapéritonéale les composés à essayer,dans le véhicule décrit pour le mode opératoire I,au 22e jour de gestation aux femelles groupées par 5 ou 6. On sacrifie les cobayes

Administré par voie intrapéritonéale en doses de 25 à
85 mg/kg, le composé isolé de la fraction 31 est efficace pour interrompre l'état de gravidité.

REVENDICATIONS.

propres à évacuer l'utérus, caractérisé en ce que a) on traite une parti'e de Montanoa contenant ces agents actifs propres à évacuer l'utérus avec de l'eau à une température élevée pour obtenir un mélange qui comprend une phase aqueuse contenant au soins une partie des agents actifs propres à évacuer l'utérus et une phase solide, b) on sépare la phase aqueuse de la phase solide, c) on traite la phase aqueuse avec un solvant organique non miscible à l'eau peur extraire de la phase aqueuse au moins une partie des agents actifs propres à évacuer l'utérus.

Claims

<EMI ID=98.1>

ce que Montanoa appartient à la variété Montanoa tomentosa ou Montanoa f loribunda.

3 - Procédé suivant la revendication 2, caractérisé en

<EMI ID=99.1>

4 - Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que le solvant organique comprend un ester aliphatique inférieur, un hydrocarbure aliphatique, un hydrocarbure aromatique ou un alcool aliphatique.

5 - Procédé suivant la revendication 4, caractérisé

en ce que le solvant organique est l'acétate d'éthyle, l'hexane, le chloroforme ou le benzène.

6 - Procédé pour extraire de Montanoa des agents actifs propres à évacuer l'utérus, caractérisé en ce que:

a) on traite une partie de Montanoa contenant ces agents actifs propres à évacuer l'utérus au moyen d'un solvant organique non miscible à l'eau pour obtenir un mélange qui comprend une phase organique contenant au moins une partie des agents actifs propres à évacuer l'utérus et une phase solide, <EMI ID=100.1> et c) on ferais la phase organique avec de l'eau pour <EMI ID=101.1>

actifs propres à évacuer L'utérus.

7 - Procède serrant la revendication 6, caractérisé en ce que Montanca appariiez à la variété Montanoa tomentosa ou Montanoa floribunda.

8 - Procède serrant la revendication 7, caractérisé

<EMI ID=102.1>

le chloroforme ou le berbère.

11 - Agent actif propre à évacuer l'utérus obtenu par

<EMI ID=103.1>

Montanoa par le procédé Etirant la revendication 1 ou 6, caractérisé en ce que :

a) on traite l'extrait au moyen d'un solvant organi- <EMI ID=104.1> <EMI ID=105.1>

<EMI ID=106.1> <EMI ID=107.1>

la phase organique au soins une fois sur une colonne d'un agent d'adsorption pour séparer de cette phase organique les agents actifs propres à évacuer l'utérus,et d) on élue la colonne avec un second solvant ou un mélange de solvants.

<EMI ID=108.1>

en ce que le solvant organique comprend un ester aliphatique inférieur, un hydrocarbure aliphatique, un hydrocarbure aromatique,

- un hydrocarbure chloré eu un éther aliphatique.

16 - Procédé suivant la revendication 15, caractérisé en ce que le solvant organique est le chloroforme, le tétrachlorure

<EMI ID=109.1>

17 - Procédé suivant la revendication 13, caractérisé en ce que l'éluant est un hydrocarbure aromatique,un ester aliphatique inférieur ou un mélange de solvant polaire et de solvant non polaire.

18 - Procédé suivant la revendication 17, caractérisé en ce que le solvant est un mélange.de benzène et d'acétate d'éthyle.

19 - Procédé suivant la revendication 17, caractérisé

en ce que le mélange de solvant polaire et de solvant non polaire comprend de l'isopropacol et du chloroforme.

20 - Procédé suivant la revendication 13, caractérisé

en ce que l'agent adsorbant est un copolymère d'acétate de vinyle.

21 - Procédé suivant la revendication 13, caractérisé

en ce que l'agent adsorbant est l'acide silicique.

22 - Procédé pour purifier des extraits contenant des agents actifs propres à évacuer l'utérus obtenus à partir de Montanoa par le procédé suivant la revendication 1 ou 6, caractérisé en ce que :

a) on traite l'extrait au moyen d'un solvant organi- que non miscible à l'eau, b) on traite la solution résultante au moyen d'une solution aqueuse d'une base de force moyenne pour éliminer les impuretés hydrosolubles et acides, et c) on fait passer les constituants solubles dans la phase organique dans une colonne de chronatographie en phase liquide sous haute pression contenant un agent adsorbant et on élue la colonne avec un second solvant organique ou un mélange de solvants sous une pression de 21 à 35 kg/cm<2>.

23 - Procédé suivant la revendication 22, caractérisé en ce que le premier solvant organique comprend un ester aliphatique inférieur, un hydrocarbure aliphatique, un hydrocarbure aromatique, un éther aliphatique ou un hydrocarbure chloré.

2� - Procédé suivant la revendication 22, caractérisé en ce que le second solvant organique comprend un hydrocarbure

<EMI ID=110.1>

25 - Procédé suivant la revendication 24, caractérisé en ce que le solvant est un mélange d'hexane et de dioxanne.

<2>6 - Procédé suivant la revendication 22, caractérisé

<EMI ID=111.1>

27 - Procédé suivant la revendication 22, caractérisé

en ce que l'agent adsorbant est le gel de silice.

28 - Procédé suivant la revendication 22, caractérisé en ce que Montanoa appartient à la variété Montanoa tomentosa ou Montanoa floribunda.

29 - Agent actif propre à évacuer l'utérus obtenu par

le procédé suivant la revendication 13.

30 - Agent actif propre à évacuer l'utérus obtenu par

le procédé suivant la revendication 22.

31 - Procédé pour purifier des extraits contenant des agents actifs propres à évacuer l'utérus obtenus à partir de Hontanoa par le procédé suivant la revendication 1 ou 6, caractérisé en ce qu'on dissout l'extrait dans un solvant organique non miscible à l'eau, on lave la solution résultante avec une solution aqueuse d'une base de force moyenne et on sépare la phase organique de la phase aqueuse, on chromatographie -la solution organique sur une colonne d'un agent adsorbant, on élue la colonne avec un

<EMI ID=112.1>

bine les fractions contenant les agents actifs propres à évacuer l'utérus et on en chasse le solvant, on dissout le résidu dans un solvant organique non miscible à l'eau, on chromatographie la solution sur une colonne d'un gel organique polymère, on élue la colonne avec un solvant organique non polaire et on recueille les fractions contenant les agents actifs propres à évacuer l'utérus.

32 - Procédé suivant la revendication 31, caractérisé en ce que Montanoa appartient à la variété Montanoa tomentosa ou Montanoa floribunda.

33 - Procédé suivant la revendication 31, caractérisé

en ce que lé solvant organique non miscible à l'eau est choisi parmi les hydrocarbures aromatiques, les hydrocarbures chlorés et les éthers aliphatiques.

34 - Procédé suivant la revendication 33, caractérisé

en ce que le solvant organique est choisi parai l'éther diéthylique, le chloroforme et le benzène.

<EMI ID=113.1>

en ce que l'agent adsorbant est choisi parmi l'acide silicique, le gel de silice et l'agent vendu sous le non de Florisil.

36 - Procédé suivant la revendication 31, caractérisé

<EMI ID=114.1>

laire comprend du chloroforme et de l'isopropanol.

37 - Procédé suivant la revendication 31, caractérisé en ce que le gel polymère est un copolymère d'acétate de vinyle.

38 - Procédé suivant la revendication 31, caractérisé en ce que le solvant non polaire est le benzène. 39 - Procédé suivant la revendication 31, caractérisé en ce que la base de force moyenne est le bicarbonate de sodium.

40 - Composé propre à évacuer l'utérus obtenu par le procédé suivant la revendication 31-et ayant les constantes physiques suivantes:

spectre de résonance magnétique nucléaire(CDC13 avec tétranéthyl-

<EMI ID=115.1>

1,01 ppm,

<EMI ID=116.1>

procédé suivant la revendication 31 et ayant les constantes physi- ques suivantes:

<EMI ID=117.1>

risé en ce qu'on dissout l'extrait dans un éther aliphatique in- férieur, on lave la solution avec une solution aqueuse d'une base

de force moyenne et on sépare la phase organique de la phase aqueuse, on chromatographie la solution organique sur une colonne d'un agent adsorbant, on élue la colonne avec un mélange d'un solvant polaire et d'un solvant non polaire, on combine les fractions contenant les agents actifs propres à évacuer l'utérus et on en élimine le solvant, on dissout le résidu dans un hydro- carbure aromatique, on chromatographie cette solution sur une colonne d'un gel polymère, on élue la colonne avec un hydrocarbure aromatique et on recueille les fractions contenant les agents actifs propres à évacuer l'utérus.

43 - Procédé suivant la revendication 42, caractérisé en <EMI ID=118.1>

Hontanoa floribunda.

44 - Procédé suivant la revendication 42, caractérisé

<EMI ID=119.1>

en ce que l'agent adsorbant est l'acide silicique ou le gel de silice.

<EMI ID=120.1>

ce que le mélange d'un solvant polaire et d'un solvant non polaire comprend du chloroforme et de l'isopropanol.

<EMI ID=121.1>

en ce que l'hydrocarbure aromatique est le benzène.

48 - Procédé suivant la revendication 42, caractérisa en ce que le gel polymère est un copolymère d'acétate de vinyle.

<EMI ID=122.1>

<EMI ID=123.1>

50 - Procédé pour induire les contractions utérines,

<EMI ID=124.1>

51 - Procédé pour interrompre l'état de gravidité, caractérisé en ce qu'on administre à la femelle d'un homéotherme

<EMI ID=125.1>

52 - Procédé pour purifier des extraits contenant des

<EMI ID=126.1>

crit ci-dessus avec référence aux exemples.

53 - Composé propre à évacuer l'utérus obtenu par le pro-cédé suivant la revendication 52.