Néoschizophyllan du type à conformation hélicoïdale à trois chaîne son procédé de préparation et son application thérapeutique.
La présente invention concerne le néoschizophyllan de type à conformation hélicoïdale à trois chaînes, désigné ci-après sous le le nom de néoschizophyllan TSH en tant que polysaccharide particulier, ainsi que le procédé pour préparer ledit néoschizophyllan TSH.
Le néoschizophyllan TSH peut être obtenu par traitement du schizophyllan.
Le schizophyllan est un polysaccharide ayant une action anti-tumorale et anti-bactérienne, que l'on peut obtenir par extraction et purification d'une solution de culture de Schizophyllum commune Fries, qui appartient aux Basidiomycètes ou à leur fruit.
La structure, la préparation et l'action anti-tumorale du schizophyllan ont été décrites dans GANN 60, p. 137 à 144
(1969) et dans Japanese Journal of Antibiotics 26, p. 277 à
283 (1973), ainsi que dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3 943 247 qui font bien comprendre lesdites structure, préparation et action anti-tumorale du schizophyllan. Par conséquent, dans le cadre de l'invention, on ne reprend pas la description et les enseignements qui doivent être considérés
<EMI ID=1.1>
n[deg.] 3 943 247 et les publications précitées.
Le schizophyllan présente une excellente action antitumorale, comme il est décrit dans l'art antérieur. Toutefois, le schizophyllan est peu soluble dans l'eau et une solution aqueuse de schizopillan présente une viscosité élevée. Par conséquent, lorsqu'on l'administre par voie orale, l'absorption du schizophyllan est très faible, ce qui ne permet pratiquement pas d'obtenir un effet anti-tumoral.
Afin d'obtenir l'effet thérapeutique souhaité, il est nécessaire d'administrer une grande quantité de solution diluée de schizophyllan et, par conséquent, il est difficile d'administrer le schizophyllan à un être humain par
injection.
Dans l'injection sous-cutanée ou dans l'injection intramusculaire du schizophyllan, on provoque une douleur et une induration locale. Dans l'injection intraveineuse du La présente invention concerne le néoschizophyllan de type à conformation hélicoïdale à trois chaînes, désigné ci-après sous le le nom de néoschizophyllan TSH en tant que polysaccharide particulier, ainsi que le procédé pour préparer ledit néoschizophyllan TSH.
Le néoschizophyllan TSH peut être obtenu par traitement du schizophyllan.
Le schizophyllan est un polysaccharide ayant une action anti-tumorale et anti-bactérienne, que l'on peut obtenir par extraction et purification d'une solution de culture de Schizophyllum commune Fries, qui appartient aux Basidiomycètes ou
à leur fruit.
La structure, la préparation et l'action anti-tumorale du schizophyllan ont été décrites dans GANN 60, p. 137 à 144
(1969) et dans Japanese Journal of Antibiotics 26, p. 277 à
283 (1973), ainsi que dans le brevet des Etats-Unis d'Amérique n[deg.] 3 943 247 qui font bien comprendre lesdites structure, préparation et action anti-tumorale du schizophyllan. Par conséquent, dans le cadre de l'invention, on ne reprend pas la description et les enseignements qui doivent être considérés
comme étant ceux du brevet des Etats-Unis d'Amérique
n[deg.] 3 943 247 et les publications précitées.
Le schizophyllan présente une excellente action antitumorale, comme il est décrit dans l'art antérieur. Toutefois, le schizophyllan est peu soluble dans l'eau et une solution aqueuse de schizopillan présente une viscosité élevée. Par conséquent, lorsqu'on l'administre par voie orale, l'absorption du schizophyllan est très faible, ce qui ne permet pratiquement pas d'obtenir un effet anti-tumoral.
Afin d'obtenir l'effet thérapeutique souhaité, il est nécessaire d'administrer une grande quantité de solution diluée de schizophyllan et, par conséquent, il est difficile d'administrer le schizophyllan à un être humain par
injection.
Dans l'injection sous-cutanée ou dans l'injection intramusculaire du schizophyllan, on provoque une douleur et une induration locale. Dans l'injection intraveineuse du schizophyllan, on provoque l'occlusion des vaisseaux sanguins et d'autres troubles dans l'appareil circulatoire..
Par conséquent, le schizophyllan ne peut pas être utilisé comme médicament.
En vue d'obtenir des polysaccharides ayant un effet antitumorale exempt des inconvénients précités, la demanderesse a effectué des recherches concernant de nombreux dérivés et produits de dégradation du schizophyllan� En conséquence de
ces recherches, elle a trouvé que, par le traitement aux ultrasons du schizophyllan, on peut obtenir un nouveau produit dégradé de polysaccharide qui ne présente pas les inconvénients précités et qui a une activité pharmacologique égale ou supérieure à celle du schizophyllan, en présentant par ailleurs
une faible toxicité et une basse viscosité sous forme de solution aqueuse. Toutefois, les produits dégradés du schizophyllan contiennent d'autres polysaccharides qui inhibent,
ou ne présentent pas, l'effet pharmacologique, en particulier l'effet antitumoral
La demanderesse a poursuivi ses recherches concernant les polysaccharides présentant une action pharmacologique, en particulier l'effet antitumoral. Ces recherches sont à la base de
la présente invention.
Ainsi, le but de l'invention est de préparer un polysaccharide particulier du néoschizophyllan TSH, qui présente une faible viscosité et la viscosité intrinsèque spécifique, sous la forme d'une solution aqueuse et qui puisse être appliqué
à des fins thérapeutiques.
Selon un autre objectif de l'invention, on propose un polysaccharide particulier du néoschizophyllan TSH, qui présente une faible toxicité.
L'invention vise encore un polysaccharide spécifique du néoschizophyllan TSH.
Les objectifs précités de l'invention sont atteints par un traitement aux ultrasons du schizophyllan dans des conditions particulières et une précipitation par addition d'un solvant hydrophile particulier à la solution colloïdale de schizophyllan ainsi traité aux ultrasons, à une concentration particulière .
Le néoschizophyllan du type à conformation hélicoïdale à �rois chaînes est un polysaccharide particulier dont <EMI ID=2.1>
la structure de base des motifs répondant à la formule I suivante :
<EMI ID=3.1>
qui présente une viscosité intrinsèque de 0,5 à 20, en particulier 1 à 8 et qui ne contient pratiquement pas d'autre type de polysaccharide .
On prépare le néoschizophyllan du type à conformation hélicoïdale à trois chaînes en dissolvant le schizophyllan dans l'eau pour obtenir une solution colloïdale et en soumettant à
un traitement aux ultrasons la solution aqueuse colloïdale de schizophyllan ainsi obtenue sans augmenter son pH à une valeur supérieure à 10, pour former une solution, puis en ajoutant un solvant hydrophile choisi dans le groupe comprenant des alcools en
<EMI ID=4.1>
aqueuse résultant du traitement aux ultrasons, de façon à ce
que ladite addition comprenne 20 à 40% en volume dudit solvant hydrophile par rapport au total formé par le solvant et l'eau. lien
<EMI ID=5.1>
hélicoïdale à trois chaînes, que l'on sépare du milieu. Apres addition du solvant à la solution de schizophyllan,
on chauffe de préférence la solution obtenue jusqu'à ce que le précipité se dissolve, puis on la refroidit pour obtenir un précipité du néoschizophyllan TSH hautement purifié. On sépare
le précipité par centrifugation et on le dissout
dans de l'eau, on concentre la solution obtenue pour réaliser l'évaporation du solvant, avantde filtrer ladite solution
sur membrane.
Le néoschizophyllan du type à conformation hélicoïdale à trois chaînes (néoschizophyllan TSH) est une nouvelle sorte de schizophyllan qui ne contient pas d'autres types de polysaccharides, mais renferme par contre le polysaccharide du type à conformation hélicoïdale à trois chaînes contenant les motifs principale de formule I et présentant une viscosité intrinsèque de 0,5 à 20,généralement de 1 à 8, en particulier de 3 à 8, que l'on sépare par addition du solvant hydrophile spécifique à la solution obtenue par traitement aux ultrasons de la solution aqueuse colloïdale de schizophyllan, de façon à obtenir 20 à 40% en volume dudit solvant hydrophile par rapport au total du solvant et de l'eau, en précipitant.ainsi ledit schizophyllan TSH.
Le type et la concentration du solvant hydrophile particulier sont des facteurs importants, de même que les conditions du traitement ultrasonore d'une solution aqueuse colloïdale du schizophyllan, pour la préparation du néoschizophyllan TSH.
Lorsqu'on dissout le schizophyllan une première fois en vue de forrrer une conformation à une seule chaîne, il est difficile de former la conformation hélicoïdale à trois chaînes, mais on obtient, au contraire, un gel.
Le néoschizophyllan TSH a les caractéristiques particulières suivantes, de même que la conformation hélicoïdale à trois chaînes et la viscosité intrinsèque spécifique.
Les propriétés pharmacologiques du néoschizophyllan TSH sont nettement différentes de celles du schizophyllan.
<EMI ID=6.1>
par comparaison à celle du schizophyllan. Par exemple, la DL 50 (par voie intraveineuse) du schizophyllan est de 30mg/kg
<EMI ID=7.1>
TSH est de 730 mg/kg.
Comme montré dans l'Essai 1 suivant, la dose optimale de schizophyllan est supérieure à 2 mg/kg, tandis que la dose
<EMI ID=8.1>
la manifestation de l'effet le .meilleur.
Lorsqu'on dégrade chimiquement ou enzymatiquement le schizophyllan respectivement par un acide ou une enzyme, l'effet pharmacologique diminue et, dans la plupart des cas, on ne peut pas obtenir un produit dégradé homogène.
En conséquence, le néoschizophyllan TSH est tout à fait différent des produits dégradés, obtenus par les procédés chimiques ou enzymatiques.
Les propriétés physiques du néoschizophyllan TSH sont les suivantes : :
1) Poudre blanche, pas de goQt, pas d'odeur 2) Structure de hase : (telle qu'établie ci-dessus)
3) Poids moléculaire moyen : 106 000-630 000
<EMI ID=9.1>
5 000 000-7 000 000)
4) Analyse élémentaire : Pas d'azote
<EMI ID=10.1>
5) Viscosité intrinsèque : 1 à 8 (dl/g)
(Schizophyllan : 100 à 200 (dl/g)
<EMI ID=11.1>
Schlieren)
(Schizophyllan 10 à 13)
7) Réactions colorées :
Négative pour la réaction à l'iode ; positive pour les
<EMI ID=12.1>
l'anthrone.
8) Solubilité :
Un gramme de néoschizophyllan TSH se dissout complètement dans 9 ml d'eau après une agitation de dix minutes à la température ambiante, alors que le schizophyllan demeure non dissous même après une agitation
d'une heure dans les mêmes conditions.
<EMI ID=13.1>
<EMI ID=14.1>
La viscosité intrinsèque du schizophyllan est d'environ
100 à 200 (dl/g) tandis que la viscosité intrinsèque du néoschizophyllan TSH est d'environ 1 à 3 (dl/g).
Le néoschizophyllan TSH est tout à fait différent du schizophyllan, ce dernier présentant une conformation en pelote à structure aléatoire ou en gel. L'effet: antitumoral du néoschizophyllan
<EMI ID=15.1>
effets secondaires du néoschizophyllan TSH sont relativement plus faibles que ceux du schizophyllan, du fait de la présence du polysaccharide particulier de poids moléculaire uniforme.
<EMI ID=16.1> stables, en raison de la présence d'impuretés moindres de la conformation hélicoïdale à trois chaînes et du poids moléculaire uniforme.
Les produits obtenus par traitement du schizophyllan aux ultrasons renferment des impuretés, tels que d'autres polysaccharides, des saccharides, des protéines, des composés azotés, par exemple des amino-acides, des résidus ou cendres et également des produits de traitement du schizophyllan aux ultrasons, ayant divers poids moléculaires. On peut éliminer les impuretés de faible poids moléculaire, par une méthode d'échange d'ions, une dialyse, une ultrafiltration et une méthode d'osmose inverse,
mais on ne peut pas séparer, par contre, aisément les polysaccharides par ces méthodes. Le produit obtenu par traitement du schizophyllan aux ultrasons contient d'autres polysaccharides dont les poids moléculaires sont voisins des poids moléculaires du néoschizophyllan TSH, et qui sont des molécules fibreuses contenant des groupes polaires. On ne peut pas séparer aisément ces autres polysaccharides par lesdites méthodes. On sait que l'on peut séparer les composés macromoléculaires par une chromatographie par pénétration sur gel, en utilisant,entre autres, des produits mis sur le marché sous le nom de Sephadex, Sephalose, et des perles de verre poreux. Toutefois, le néoschizophyllan TSH présente une viscosité élevée, si bien que l'on
ne peut pas obtenir ledit néoschizophyllan TSH par cette méthode.
On peut par contre obtenir le néoschizophyllan TSH par l'addition d'un solvant hydrophile spécifique choisi dans le
<EMI ID=17.1>
et le tétrahydrofuranne, a une solution obtenue par le traitement des schizophyllan aux ultrasons sans augmenter le pH à une valeur supérieure à 10, en obtenant ainsi le précipité de néoschizophyllan TSH.
On peut utiliser ledit solvant en mélange, mais le rapport volumétrique entre le solvant et le total formé par le solvant et l'eau (solution) est toutefois limité à 20-40% en volume.
<EMI ID=18.1>
supérieur à 10 ou lorsque la solution obtenue par le traitement
aux ultrasons, présente un pH supérieur à 10, la conformation en pelote à structure aléatoire du schizophyllan se transforme en une conformation en gel, quand on le neutralise par un acide.
<EMI ID=19.1> <EMI ID=20.1>
<EMI ID=21.1>
ultérieurement en gel par dilution avec de l'eau.
On a étudié dans le cadre de l'invention les relations entre la viscosité intrinsèque] }'? et le poids moléculaire
<EMI ID=22.1>
dans l'eau. Le poids moléculaire du produit de l'invention, mesuré par la méthode d'ultracontrifugation, est d'environ trois fois celui du produit antérieur obtenu en utilisant le dimêthylsulfoxyde.
<EMI ID=23.1>
l'invention et de 0,68 dans le produit antérieur obtenu en utilisant le dimêthylsulfoxyde. Ces faits montrent que le produit de l'invention possède une conformation hélicoïdale à trois chaînes.
On peut effectuer le traitement aux ultrasons dans diverses conditions.
Le rendement du traitement aux ultrasons peut être donné par l'équation suivante :
<EMI ID=24.1>
dans laquelle
W : rendement par unité de surface
<EMI ID=25.1>
C : vitesse du son dans la solution
F : fréquence
A : amplitutude.
Dans le traitement aux ultrasons, la concentration de la solution de schizophyllan est habituellement supérieure à 0,1% en poids, de préférence à 0,5% en poids. Lorsque la concentration du schizophyllan est élevée, ledit schizophyllan ne se dissout pas et la viscosité reste élevée, ce qui diminue l'effet du traitement aux ultrasons. Par suite, elle est habituellement inférieure à. 5% en poids.
Dans le traitement par ultrasons, il est préférable d'assurer une grande amplitude, c'est-à-dire 5 à 500 microns,
en particulier 10 à 200 microns, sous la fréquence de 5 à 50 KHz de 8 à 30 KHz. Il est préférable d'assurer une amplitude supérieure, encore qu'il faille considérer qu'une corrosion de la plaque vibrante et d'autres perturbations de l'appareil puissent se produire dans le cas d'une amplitude élevée. Lorsque la fréquence est trop faible, il en résulte un bruit tandis lorsque la fréquence est trop élevée, on ne peut pas obtenir une amplitude souhaitée.
Dans le traitement aux ultrasons, l'énergie totale produite est habituellement de 0,1 à 50 watts-heure pour 1 cm3, et plus particulièrement de 0,5 à 10 watts-heure pour 1 cm3, de la dispersion colloïdale de schizophyllan. Lorsque la concentration de schizophyllan est faible, le rendement énergétique total obtenu peut être faible.
Il est préférable de recyler la solution dans le traitement aux ultrasons, de telle sorte que ladite solution soit mise
en contact d'une manière uniforme avec la plaque vibrante.
Dans le traitement aux ultrasons, il est préférable de choisir la forme du récipient, de telle façon que l'on mette
en contact d'une manière efficace et uniforme, les molécules de schizophyllan avec la surface de la plaque vibrante ou de munir l'appareil d'un agitateur désiré.
Les conditions optimales dépendent de la concentration du schizophyllan, de la fréquence d'oscillations, du rendement, de la forme et la dimension du récipient et de l'agitateur.
Habituellement, lorsque l'on traite aux ultrasons 2 litres
<EMI ID=26.1>
appliquer une énergie de 500 W pendant six à huit heures. Lorsque l'on augmente la quantité de la solution et la concentration du schizophyllan, on peut prolonger le temps de traitement aux ultra-
<EMI ID=27.1>
en suspension sont contenues dans la solution, il faut envisager une atténuation de l'énergie, Le temps de traitement aux ultrasons doit être prolongé lorsque l'agitation n'est pas suffisante ou lorsque la solution renferme des bulles.
Lorsque l'énergie de traitement aux ultrasons est trop faible, celle-ci ne suffit pas pour transformer le schizophyllan si bien qu'il subsiste du schizophyllan proprement dit et du schizophyllan faiblement dégradé. Pour l'utilisation en tant que médicament, il n'est pas toujours nécessaire de les séparer, lorsque les quantités restantes de schizophyllan et de schizophyllan faiblement dégradées, sont faibles.
Dans la précipitation du néoschizophyllan TSH à partir de la solution obtenue par le traitement du schizophyllan aux ultrasons, on doit respecter les conditions suivantes :
La concentration de la solution obtenue par le traitement du schizophyllan aux ultrasons est définie*de la manière suivante :
<EMI ID=28.1>
<EMI ID=29.1>
et C la concentration du schizophyllan (% en poids).
Lorsque la concentration est trop élevée, les distances entre les molécules de néoschizophyllan TSH et les autres polysaccharides sont trop courtes pour entraîner une action mutuelle, si bien que la formation et la séparation du néoschizophyllan TSH ne sont pas satisfaisantes. Lorsque la concentration est trop faible, la quantité du solvant hydrophile particulier
se trouve accrue et la taille de l'appareil doit être agrandie, ce qui entraîne, des difficultés pour la mise en oeuvre industrielle.
Les solvants hydrophiles spécifiques utilisés dans la préparation du néoschizophyllan TSH, sont miscibles à l'eau et ont une action faiblement dissolvante. vis-à-vis du néoschizophyllan TSH, de sorte qu'on peut les séparer .complètement dudit néoschizophyllan TSH., lesdits solvants ayant encore -un faible point d'ébullition et une faible toxicité.
On ajoute graduellement le solvant hydrophile spécifique,
à la solution obtenue par le traitement aux ultrasons, jusqu'à ce que le rapport volumétrique entre le solvant et le total formé par le solvant et l'eau (.solution) atteigne 20 à 40% en
<EMI ID=30.1>
est inférieur à 20% en volume, le néoschizophyllan TSH ne précipite pratiquement pas, alors que lorsque ledit rapport est supérieur à 40% en volume on obtient un produit impur contenant les
autres polysaccharides.
La température utilisée dans le traitement est de préférence comprise dans l'intervalle de 0[deg.]C à 40[deg.]C, en particulier
10 à 35[deg.]C. On n'obtient pas le néoschizophyllan TSH de façon satisfaisante à une température supérieure à 40[deg.]C dans le traitement par le solvant hydrophile particulier, car la solubilité du produit devient trop élevée dans la solution obtenue avec
le solvant.'
Il est préférable d'ajouter le solvant hydrophile particulier à la concentration spécifique pour obtenir le précipité
de néoschizophyllan TSH, puis de chauffer le mélange à 45[deg.]C-75[deg.]C <EMI ID=31.1>
de façon à dissoudre le néoschizophyllan TSH sans variation notable de la concentration du solvant, et de refroidir ensuite
la solution à 10[deg.]C-35[deg.]C de façon à précipiter le néoschizophyllan TSH de pureté plus élevée.
Le traitement de la solution, obtenue par application des ultrasons, à l'aide du solvant hydrophile particulier dans le rapport spécifique est très important pour obtenir le néoschi.zophyllan TSH. La conformation hélicoïdale à trois chaînes
se forme par le traitement au solvant hydrophile particulier dans le rapport spécifique. On sépare, de préférence, le néoschizophyllan TSH.par centrifugation. On peut effectuer la filtration sur membrane de la solution, avant l'addition du solvant hydrophile particulier.
On peut dissoudre le néoschizophyllan TSH dans de l'eau
ou dans une solution aqueuse., telle qu'une solution saline. Si cela est nécessaire,on applique un traitement par ultrasons pour dissoudre le néoschizophyllan TSH. Les conditions de ce traitement doivent alors être-modérées.
On peut encore traiter la solution de néoschizophyllan
TSH par la filtration sur membrane, opération requise pour la préparation d'un médicament. On peut utiliser un filtre millipore.
Suivant la caractéristique préférée, de l'invention, on
<EMI ID=32.1>
tion d'une proportion. spécifique du -solvant hydrophile particulier, à- une séparation par centrifugation.
Le précipité séparé contient une faible quantité
du solvant particulier.
On dissout le précipite dans de l'eau ou dans une solution salins, avec ou sans séchage dudit précipite . On peut éliminer le solvant spécifique restant, en concentrant la solution au cas ou du solvant demeure dans la solution.
On filtre la solution de néoschizophyllan TSH sur
filtre à membrane, de façon à séparer les germes tels que les bactéries,en particulier des germes produisant des effets pyrogènes, On peut utiliser le filtrat comme solution injectable. On peut en outre concentrer le filtrat et le sécher, puis dissoudre le néoschizophyllan TSH pulvérulent dans une solution saline pour obtenir une solution injectable.
La caractéristique importante de l'invention consiste, à éliminer le solvant hydrophile spécifique à partir de la solu-
<EMI ID=33.1>
Les autres avantages de l'invention résident dans le fait que celle-ci permet de préparer une solution ayant une concentration élevée de néoschizophyllan TSH. La concentration maxi-
<EMI ID=34.1>
qu'il est facile de préparer une solution de néoschizophyllan TSH à 3 - 5% sans aucune difficulté dans le cadre de la préparation d'un médicament.
Il est possible de préparer une solution pour '.médicament, ayant une faible viscosité et une concentration élevée, en utilisant le néoschizophyllan TSH, de sorte que les inconvénients du schizophyllan dans la préparation d'un médicament peuvent être ainsi évités de façon satisfaisante.
L'avantage le plus important conféré par l'invention,
<EMI ID=35.1>
qui présente une excellente activité pharmacologique et qui montre une toxicité remarquablement faible.
Le néoschizophyllan TSH est absorbé dans le sang et les tissus, plus rapidement que le schizophyllan.
On peut également utiliser le néoschizophyllan TSH comme intermédiaire pour la préparation de divers dérivés.
<EMI ID=36.1>
suivant diverses méthodes, telles qu'une administration par voie orale, une injection sous-cutanée, une injection intramusculaire et une injection intraveineuse.
On peut doser le néoschizophyllan TSH sous toutes formes désirées, tels qu'un comprimé, une capsule, une solution injectable, un sirop ou d'autres compositions pharmaceutiques.
On peut combiner le néoschizophyllan TSH avec un autre
<EMI ID=37.1>
La dose de néoschizophyllan TSH est habituellement comprise entre 0,005 et 10 mg/kg/jour, de préférence entre 0,05 et
2 mg/kg/jour. La concentration de la.solution injectable est est de préférence de 0,05 à 4%.
L'invention sera maintenant illustrée avec plus de détails <EMI ID=38.1>
invention dans son cadre et son esprit.
EXEMPLE 1
On disperse dans 500 ml d'eau chaude, une quantité de
10 g d'une poudre de schizophyllan qui a été préparée par précipitation par addition d'un solvant organique miscible
<EMI ID=39.1>
commune Fries.
On traite la solution colloïdale de schizophyllan par
des ultrasons, sous une fréquence d'oscillations de 20 KHz,
avec une amplitude de 20 microns et une énergie de 100 W,
en agitant la solution de telle sorte qu'il se produise un contact uniforme avec la plaque vibrante sans production de bulles.
L'alimentation du réservoir en solution colloïdale de schizophyllan se fait par le fonds dudit réservoir, tandis que l'on recueille l'écoulement de trop plein à la partie supérieure du réservoir. On plonge la plaque vibrante dans la solution colloïdale de façon à appliquer les ultrasons à ladite solution colloïdale avant son écoulement à la partie supérieure, si
bien que ladite application des ultrasons se fait en continu
en formant une solution du produit ayant;.une viscosité intrinsèque de 4,6 (dl/g).
On ajoute goutte à goutte 280 ml d'acétone à 500 ml de la solution du produit (10 g) (36% en volume d'acétone) en obtenant ainsi la précipitation du néoschizophyllan TSH. On sépare
<EMI ID=40.1>
on sèche le précipité ainsi..séparé, en obtenant 8,4 g de néoschizophyllan TSH en poudre, ayant une viscosité intrinsèque de
<EMI ID=41.1>
chaînes du produit par la méthode décrite ci-dessus.
On concentre et on sèche le surnageant séparé par centrifugation, en obtenant un composant
solide ayant une viscosité intrinsèque de 1,5 (dl/g).
EXEMPLE 2 :
On dissout 2 g de poudre de schizophyllan de l'exemple 1, dans 100 ml d'eau et on traite la solution colloïdale obtenue, par des ultrasons à fréquence d'oscillations de 20 KHz avec une
<EMI ID=42.1> ambiante, en agitant, de façon à obtenir la solution du produit ayant une viscosité intrinsèque de 5,9 (dl/g).
On ajoute goutte à goutte 45 ml de tétrahydrofuranne, à
100 ml de la solution du produit (2 g) (31% en volume de tétra-
<EMI ID=43.1>
phyllan TSII. On sépare le précipité par centrigation
à 5 000 tours par minute et on sèche le précipité ainsi séparé,
<EMI ID=44.1>
viscosité intrinsèque de 7,1 (dl/g).
On concentre et sèche le surnageant, séparé par la méthode de séparation centrifuge, en obtenant un composant solide ayant une viscosité intrinsèque de 2,7 (dl/g).
EXEMPLE 3 :
En se conformant au mode opératoire de l'exemple 1, excepté
<EMI ID=45.1>
solution obtenue par traitement aux ultrasons, on effectue l'addition du solvant et la séparation du néoschizophyllan TSH. Les résultats obtenus sont les suivants :
<EMI ID=46.1>
EXEMPLE 4 :
On dissout dans 1 litre d'eau, 10 g de schizophyllan brut,
<EMI ID=47.1>
saccharide différent du schizophyllan, et on traite la solution obtenue par ultrasons, puis on la sèche. On dissout dans chaque cas 5 g du produit résultant, chaque fois dans 250 ml d'eau, séparément. On verse 160 ml d'acétone dans chaque solution obtenue, en procédant goutte à goutte, et on sépare le précipité obtenu par centrifugation avant de la sécher, en obtenant 4,5 g de néoschizophyllan TSH ayant une viscosité intrinsèque <EMI ID=48.1>
une viscosité intrinsèque de 2,8 (dl/g) à partir du surnageant, ce composant contenant 26 mg de cendre, 2 mg d'azote et 255 mg de polysaccharide impur.
D'une manière similaire, on verse 160 ml d'acétone dans
<EMI ID=49.1>
le précipité se dissolve parfaitement, puis on la laisse reposer pendant une nuit pour la refroidir à 25[deg.]C. On obtient par centrifugation et séchage à partir de la solution, 4,6 g de néoschizophyllan TSH dont la viscosité intrinsèque est de 7,5
(dl/g). On récupère à partir du surnageant, 0,4 g d'un solide ayant une viscosité intrinsèque de 2,5 (dl/g), ce solide contenant 27,2 mg de cendre, 2,8 mg d'azote et 296,8 mg de polysaccharide impur.
EXEMPLE 5 :
On dissout respectivement les néoschizophyllan TSH obtenus dans les exemples 1 et 3, dans une solution saline physiologique à la concentration de 10 g/litre et on procède au traitement par ultrasons de chaque dispersion, par le mode opératoire de l'exemple 1. On obtient chaque solution de schizophyllan TSH. On peut utiliser ces solutions pour injection.
On présente ci-après certains exemples de compositions
de néoschizophyllan TSH.
préparation 1 (solution injectable).
On chauffe et on dissout, dans 100 ml, 0,5 g de néoschizopyllan TSH et 0,9 g de chlorure de sodium. On filtre la solution
sur une .membrane ayant une dimension de pore de 0,45 micron et on remplit à l'aide de la solution ainsi filtrée chaque ampoule pour préparer une solution pour injection.
<EMI ID=55.1>
<EMI ID=50.1>
On dissout par chauffage dans 100 ml d'eau 3,0 g de néoschizophyllan TSH, 20 g de sucre, 0,03 g de para-hydroxy-
<EMI ID=51.1>
On effectue aisément la filtration sur membrane. Cette filtration sur membrane est indispensable.
ESSAI 1. :
On compare l'effet antitumorale du néoschizophyllan TSH sur une tumeur de Sarcome 180, en comparaison avec celui du schizophyllan.
<EMI ID=52.1>
<EMI ID=53.1>
On administre la solution à des souris par injection intra-
<EMI ID=54.1>
heures après la transplantation de la tumeur. Les résultats sont représentés dans le tableau suivant.
dudit tableau, le néoschizophyllan TSH présente un effet supérieur par rapport aux produits obtenus par traitement aux ultrasons de la dispersion de schizophyllan.
Tableau
<EMI ID=56.1>