BE879925A - Procede nouveau de preparation d'un derive n-acyle selectivement protege d'un antibiotique amino-glycosidique - Google Patents

Description

  "Procédé nouveau de préparation d'un dérivé N-acyl6 sélectivement protégé d'un antibiotique aminoglycosidique" La présente invention concerne un procède nouveau

  
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ment protégés ou bloques par un groupe acyle. Elle concerne donc un procédé nouveau de protection sélective de groupes amino ou nlkylamino qui occupent des positions particulières dans l'antibiotique aminoglycosidique. Son application principale réside dans la préparation d'un dérivé N-ocylé sélectivement protégé de l'antibiotique

  
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tion est applicable peut être défini de façon plus spécifique comme étant un antibiotique aminoglycosidique cons-

  
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alkanoyl)-aminoglycosidiques, qui sont connus comme agents antibactérien semi -synthétiques utiles, actifs contre les bacilles résistants.

  
Les antibiotiques aminoglycosidiques comme les ka-

  
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amino et plusieurs fonctions hydroxyle ayant des degrés de réactivité relativement élevés et divers. On a synthétisé de nombreuses sortes d'antibiotiques aminoglycosidiques

  
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est souvent nécessaire ou préférable de faire en sorte que certains groupes amino et/ou certains groupes hydroxy de

  
 <EMI ID=6.1>   <EMI ID=7.1> 

  
dique et elles ne posent pas de problème en ce qui con-

  
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contre, pour la protection sélective de certains groupes amino particuliers dans le grand nombre de ceux que comporte l'antibiotique aminoglycosidique, les procédés dont on dispose actuellement sont d'une mise en oeuvre diffi-

  
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en est que tous les groupes amino de l'antibiotique aminoglycosidique ne présentent entre eux que peu de diffé-

  
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tion de ce problème est fournie par le groupe 6'-amino de la kanamycine A. Ce groupe amino ou méthylamino, qui est lié A un certain atome de carbone lui-même lié à un seul atome de carbone dans la molécule d'aminoglycosidc

  
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même molécule. Pour cette raison, le groupe amino ou méthylamino premier cité peut réagir de façon beaucoup plus préférentielle avec un agent d'acylation,comportant un

  
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nier cité, d'où il résulte que le dérivé N-protégé dans lequel le groupe premier cité est bloqué préférentiellement par le groupe acyle peut être obtenu avec un rendement bien supérieur n celui qu'il est possible d'obtenir pour des dérivés N-protégés en d'autres positions. Il y

  
a plusieurs années, plusieurs des auteurs de la présente invention ont trouvé que lorsqu'un groupe amino et un groupe hydroxyle sont voisins dans une paire dans la configuration stérique de la molécule de l'antibiotique aminoglycosidique, ces deux groupes, amino et hydroxyle, peu- <EMI ID=14.1> 

  
choisi dans le groupe comprenant le cuivre (II), le nickel (Il) le cobalt (II) et le cadmium (il) est mis à réagir, dans un solvant organique inerte, avec un antibioti-

  
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6-0(aminoglycosyl)-2-désoxystreptamines, représentée parles kanamycines, les gentamycines et la sisomycine, ce cation de métal de transition bivalent est complexé avec une paire de groupes, l'un amino, l'autre hydroxyle, qui existent dans les positions particulières de relation "vicinale" dans la molécule d'aminoglycoside, formant ainsi

  
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tal de transition (cf. demande de brevet japonais en 1ère publication sous le n[deg.] Sho-52-153944 et la demande de brevet U.S. N[deg.] 697 297, pour laquelle un brevet a été

  
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ce complexe antibiotique aminoglycosidique-cation de métal de transition, le groupe amino complexé est bloqué par le cation du métal de transition bivalent. Lorsqu'on fait ensuite réagir ce complexe avec un réactif acylant ayant un groupe acyle, seuls les groupes amino non complexés 

  
du complexe, qui ne sont pas bloqués par le cation de métal bivalent, peuvent être acylés en grande partie, de sorte qu'on obtient une N-protection sélective par le groupe acyle. Ceci est illustré plus loin en prenant la kanamycine A comme exemple.

  
En effet, lorsqu'on fait réagir avec la kanamycine A un cation de métal de transition bivalent (11++) choisi dans le groupe comprenant le cuivre (II), le nickel (II), le cobalt (II) et le cadmium (II), la réaction complexante du cation de métal bivalent (M++) se produit entre le  <EMI ID=18.1> 

  

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Dans la réaction complexante ci-dessus, on peut donc voir qu'il faut au moins 2.moles du sel de métal de transition pour 1 mole de kanamycine A. Lea groupes 1amino et 3-amino sont bloqués en même tempe dans le complexe métallique qui en résulte. Lorsqu'on traite le complexe de formule (I) avec un réactif d'acylation ayant un groupe acyle disponible comme groupe amino-protec teur connu dans la synthèse traditionnelle des polypeptidea,

  
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5253-5254 (197817.

  
Les auteurs de la présente invention ont reconnu le fait qui vient d'être rapporté, mais ils ont effectué  <EMI ID=21.1> 

  
des dérivés semi-synthétiques des antibiotiques aminoglycosidiquos. Comme résultat de ces recherches, ils ont constaté que bien que le cation de zinc bivalent ait des comportements nettement différents de ceux des cations bivalents des métaux énumérés plus haut, nickel, cobalt, cuivre et cadmium, il est finalement capable de complexer

  
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groupe 3uamino (ou 3"-alkylamino) et de bloquer ces groupes dans un composé aminoglycosidique (comme la kanamycine A, B ou C) qui comporte une fraction désoxystreptamine

  
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noglycosyle est lié au groupe 6-hydroxyle qu'elle contient.

  
Selon Nagabhushan et col., on peut s'attendre à ce que lorsqu'un cation de nickel, cobalt, cuivre ou cadmium

  
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ple, il se forme un complexe de kanamycine B et de sel métallique ayant la formule (II) ci-après:

  

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paires de groupes amino et hydroxyle vicinaux formeraient des complexes réversibles avec les cations de métaux de transition bivalents, compte tenu de ce que la kanamycine B contient trois de ces paires, à savoir entre les positions 1- et 2"-, entre les positions 2'- et 3'- et entre les positions 2"- et 3"- de la molécule de kanamycino B.

  
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a constaté que lorsqu'on fait réagir la kanamycine B avec un cation de métal bivalent, le cation de zinc, le complexe de kanamycine B et de sel de zinc qui se forme en réalité contient le groupe 2'-amino et le groupe 3'-hydroxyle libres, non bloqués par le cation de zinc. Même si la réaction complexante du cation de zinc avec les groupes 2'-amino et 3'hydroxyle se produit, la force complexante est extrêmement réduite, de sorte que dans la pratique les groupes 2'-amino et 3'-hydroxyle ne sont sensiblement pas bloqués. C'est pourquoi, lorsqu'on acyle ensuite le complexe kanamycine B-cation de zinc en le faisant réagir,

  
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introduire le groupe benzyloxycarbonyle comme groupe acyle amino-protecteur, il se produit un dérivé tri-3,2',6'-

  
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ont été acylés, avec un rendement plus important que les autres dérivés N-acylés, mais on ne peut alors obtenir

  
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présent mémoire). Ce fait expérimental suggère que le cation de zinc a un comportement différent de ceux des cations des quatre métaux précités et de comportement diffère notamment en ce que le cation de zinc ne forme pas

  
de complexe avec la paire de groupes vicinaux 2'-amino et 3 '-hydroxyle.

  
Comme autre exemple, lorsqu'on fait réagir la kanamycine A avec le cation de zinc et qu'on acyle ensuite avec le groupe benzyloxycarbonyle (cf. formule (I) ci-des- <EMI ID=31.1> 

  
mycino A se forme comme produit d'ncylation principal dans le cas où l'on prévoit comme proportion de cation de zinc légèrement plus de 1 mole par mole de kanamycine A. Dans co cas, il convient de noter que cette réaction d'acylntion donne lieu simultanément, dans une certaine mesure,

  
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bonyle de la kanamycine A et à celle de kanamycine initiale, non acylée, mais qu'elle ne provoque en réalité la

  
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cation fournie par Nagabhushan et col. du mécanisme réactionnel, selon laquelle on devait s'attendre ce que le

  
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Exemple 7 du présent mémoire). Dans le mémoire descriptif

  
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nécessaire d'employer un sel d'un métal de transition bivalent comme le cuivre (I), nickel (II), cobalt (II), etc., dans une proportion totale d'au moins 2 moles par

  
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plexe de kanamycinc A et de sel de métal de transition, comme le montre la formule (I) ci-dessus. Les expériences

  
 <EMI ID=37.1> 

  
la différence des cations des quatre métaux de transition précités, le cation de zinc est capable de bloquer les groupes 1-amino et 3"-amino do la kanamycine A lorsqu'on l'utilise dans une proportion totale d'au moins 1 mole

  
par mole de kanamycine A. Leurs essais ont permis de constater que lorsqu'on fait réagir un sel de nickel dans une

  
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namycine A, puis qu'on acyle avec le groupe bcnzyloxycarbonyle le complexe kanamycino A-sel de nickel qui en ré-

  
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cine A qu'avec un rendement très faible, alors qu'on obtiendrait un rendement considérable de ce dérivé en acy- <EMI ID=40.1> 

  
le complexe aminoglycoside-cation de zinc a une stabilité propre qui est différente de celle du complexe de l'amino-

  
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de cuivre (II) ou de cadmium (II). Pour complexer- le cation de zinc avec l'antibiotique aminoglycosidique, on

  
 <EMI ID=42.1> 

  
qui est avantageusement d'un coût modique et qui présente peu de risques de pollution pour l'environnement.

  
En conséquence, les auteurs de la présente inven-

  
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réagir dans un solvant organique inerte avec un antibiotique aminoglycosidique contenant une fraction désoxystreptaminc dans Laquelle le groupe 6-hydroxyle est lié

  
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lié à un groupe aminoglycosyle, le cation de zinc est complexé avec des paires amino-hydroxyle qu'il bloque et dont la position peut varier suivant la nature de l'antibiotique aminoglycosidique, et que lorsqu'on met à réagir

  
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ainsi formé avec un réactif d'acylation ayant un groupe acyle qui est utilisé traditionnellement pour introduire un groupe amino-protecteur lors de la synthèse des polypeptides, ce réactif acyle au moins un des groupes &#65533;mino de l'antibiotique qui no sont pas complexés avec le cation de zinc et par conséquent pas bloques par ce cation, de sorte que le groupe amino ainsi acylé est protégé, et enfin que lorsque le produit résultant do l'acylation (c'

  
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cation de zinc ayant au moins un groupe amino acylé) est traite avec un réactif convenable qui élimine du dit pro- <EMI ID=47.1> 

  
Sous un premier aspect, l'invention fournit donc un procédé de préparation d'un dérivé N-protégé, sélectivement acylé, d'un antibiotique aminoglycosidiquo, le dit

  
 <EMI ID=48.1>  qui a été formé par réaction du dit antibiotique aminoglycosidique avec un sel de zinc dans un solvant organique inerte pour produire un complexe de cations de zinc avec

  
le dérivé N-acylé sélectivement protégé de l'antibiotique aminoglycosidique ayant les groupes amino initialement non complexés acylés, et <EMI ID=49.1>  dérivn sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidiquc avec un réactif qui élimine les cations de zinc du

  
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ment acylé de l'antibiotique aminoglycosidique.

  
Le procède selon ce premier aspect de l'invention

  
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acylé d'un antibiotique aminoglycosidique par acylation

  
de certains groupes amino autres que les groupes 1- et 3"-

  
 <EMI ID=52.1> 

  
ce dérivé N-protégé sélectivement acylé est utile dans la synthèse chimique de dérivés 1-N-aminoacylés d'antibiotiques aminoglycosidiques comme les knnamycines, y compris

  
 <EMI ID=53.1>   <EMI ID=54.1> 

  
antibactérienne vis-&#65533;-vis des bacilles résistants contre lesquels les antibiotiques aminoglycosidiques paronts n' agissent pas, et l'on améliore en outre leur activité antibactérienne contre une plus large variété do souches de bacilles par rapport aux dits antibiotiques parents.

  
La mise en oeuvre du procédé selon ce premier as-

  
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L'antibiotique aminoglycosidique qui doit être mis

  
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de zinc (qu'on pourrait aussi appeler sel de complexe de zinc) selon l'invention peut être tout antibiotique com-

  
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être occasionnellement substitué par un groupe aminoglycosyle. Plus particulièrement, l'antibiotique aminoglycosidiquc dont on peut disposer dans la présente invention

  
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tre défini comme étant un antibiotique constitué par

  
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ques de la catégorie dont on peut disposer dans le procédé selon l'invention, on peut citer les antibiotiques du  <EMI ID=60.1> 

  
ne C, les gentamycines A, B et C, la verdamycine, la sisomycine et la nétilmycine (c'est-à-dire la 1-N-éthylsisomycino), ainsi que les autres aminoglycosides connus. Il va de soi que le procédé selon ce premier aspect de l'invention est applicable non seulement à un antibiotique aminoglycosidique nouveau, qui n'est pas encore connu actuellement et sera découvert plus tard, mais aussi aux

  
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glycosidiques, qui seront produits dans l'avenir par transformation chimique d'antibiotiques aminoglycosidiques connus. 

  
Comme exemples typiques des antibiotiques aminoglycosidiques auxquels la présente invention est applicable, on peut citer la kanamycine A, la kanamycine 0, la kanamycine C et les dérivés désoxy de ces kanamycines, ainsi que leurs dérivés 6'-N-alkyles, toua représentés par la formule générale (III) ci-après: 

  

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dans laquelle R est un groupe hydroxyle ou un groupe a -

  
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groupe hydroxyle, et R4 est un groupe hydroxyle, un groupe amino ou un groupe alkylamino dans lequel le groupe

  
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dique-cations de zinc selon l'invention en faisant réagir l'antibiotique aminoglycosidique avec les cations de zinc, on peut faire dissoudre ou mettre en suspension dans un solvant organique approprié, mélangé ou non à de l'eau, un antibiotique aminoglycosidique particulier aoua la forme de sa base libre ou celle d'un sel d'addition d'acide du dit antibiotique et ajouter à la solution ou suspension ainsi obtenue un sel de zinc approprié dans une proportion d'au moins 1 mole par mole de l'antibiotique aminoglycosidique employé. On peut utiliser à cet effet n'importe quel solvant organique ordinaire, dans la mesure où le complexe do zinc formé après l'addition du  <EMI ID=65.1> 

  
organique polaire et en particulier un plus grand volume d'eau, car la présence du solvant organique polaire et de l'eau est susceptible de diminuer la stabilité du complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc qui en résulte, ne permettant pas à la réaction d'acylation ultérieure pour l'introduction du groupe amino-protecteur de donner des résultats satisfaisants.

  
Il est donc désirable, pour le solvant dans lequel le complexe de zinc doit se former, de choisir un solvant organique puissant, comme le diméthyl-sulfoxyde, mais on peut aussi utiliser le diméthylsulfoxyde aqueux, le diméthylformamide, le diméthylformamide aqueux, un mélange de diina thylaul f oxyde et de diméthylformamide, le tétrahydrofuranne, le tétrahydrofuranne aqueux et même un alcanol inférieur comme le méthanol, l'éthanol et le méthanol aqueux.

  
Le cation de zinc peut être introduit sous la forme d'un sel de zinc dans le système réactionnel où se forme le complexe. On peut utiliser pour les effets de la présente invention tout sel de zinc formé par la réaction d'un cation de zinc avec un acide inorganique ou organique ordinaire. Il est toutefois désirable, en général, d'utiliser un sel de zinc d'un acide faible, comme l'acétate de zinc, car il est courant que parmi les complexes métalliques contenant un groupe amino, un complexe de groupe amino non quaternaire avec un sel métallique soit plus stable qu'un complexe d'une amine de type ammonium avec un sel de métal et parce que l'utilisation du sel de

  
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formation du complexe de métal relativement instable qui contient une "mine de type ammonium. Lorsqu'on emploie le sel de zinc d'un acide fort, par exemple du' chlorure de

  
 <EMI ID=67.1> 

  
alcalin, comme 1 * acétate de sodium, en plus du sel de zinc  <EMI ID=68.1> 

  
aminoglycosidique de déport est utilisé sous la forme de son sel d'addition avec un acide fort, tel que l'acide chlorhydrique. Dans ce cas, il faut cependant veiller à

  
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agent neutralisant, sinon il peut se produire une précipitation d'hydroxyde de zinc qui perturbera la formation

  
du complexe. Par exemple, lorsqu'on utilise pour la formation du complexe un tétrachlorhydrate de l'antibiotique aminoglycosidique, il faut ajouter de préférence 4 moles d'hydroxyde de sodium pour neutraliser le mélange réactionnel.

  
La réaction complexante peut se poursuivre aussi longtemps que la quantité molaire totale du sel de zinc

  
qui est utilisée est au moins égale à la quantité molaire totale de l'antibiotique aminoglycosidique. Il est toutefois préférable d'utiliser le sel de zinc dans une proportion sensiblement supérieure à 1 mole par mole de l'antibiotique aminoglycosidique, de façon que l'équilibre de

  
la réaction complexante soit déplacé en faveur de la formation du complexe. On peut obtenir un rendement intéressant de complexe de zinc en utilisant le sel de zinc dans une proportion de 2,3 à 6 moles par mole de l'aminoglycoside, mais il est bien préférable dans la pratique d'utiliser le sel de zinc dans une proportion comprise entre

  
4 et 5 moles par mole d'aminoglycoside. Le temps nécessaire pour une réaction complexante complète après l'addition

  
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vant organique utilisé et il peut être compris entre "instantanément" (lorsqu'on utilise un solvant organique aqueux) et 20 heures. La réaction complexante peut s'effec-

  
 <EMI ID=71.1> 

  
aussi réchauffer ou refroidir.

  
On prépare de cette manière une solution ou suapen-

  
 <EMI ID=72.1>   <EMI ID=73.1> 

  
lon l'invention peut être un réactif amino-protecteur courant, et il est utilisé pour faire en sorte que les groupes nmino libres, non complexés, dans le complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc obtenu soient acylés et bloqués par le groupe acyle du réactif précité. Le groupe acyle peut être un groupe alcanoyle, un groupe

  
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sulfonyle, qui sont tous des groupes amino-protecteurs classiques. Le réactif aèylant dont on peut disposer &#65533; cet effet peut être, soit un acide carboxylique ayant la formule générale (IVa) suivante:

  

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dans laquelle R5 est l'hydrogène, un groupe alkyle, en

  
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de carbone, un groupe aryle, en particulier le phényle, ou un groupe aralkyle, spécialement le benzyle, cos groupes étant occasionnellement encore substitués, ou un halogénure d'acide, un anhydride d'acide ou un ester actif du dit acide carboxylique (IVa), soit un chloroformiate de formule générale (IVb):

  

 <EMI ID=77.1> 


  
 <EMI ID=78.1> 

  

 <EMI ID=79.1> 


  
soit un ester actif de N-hydroxysuccinimide ayant la formule générale suivante:

  

 <EMI ID=80.1> 


  
soit encore un azidoformiatc de formule (IVc):

  

 <EMI ID=81.1> 


  
 <EMI ID=82.1> 

  
finitions que dans la formule (IVa), soit enfin un acide  <EMI ID=83.1> 

  

 <EMI ID=84.1> 


  
 <EMI ID=85.1> 

  
core substitues, ou un halogénurc d'acide, un anhydride d'acide ou un ester actif du dit acide sulfonique. Il est évident, en conséquence, que la réaction d'acylation pour

  
 <EMI ID=86.1> 

  
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tyle, l'anhydride propionique, l'ester de l'acide trifluoracétique et du p-nitrophénol, l'ester d'acide trifluoracé-

  
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carbonyle, le chlorure de tosyle, le chlorure de mésylc et d'autres.

  
Le réactif d'acylation peut être ajouté, soit tel

  
 <EMI ID=89.1> 

  
complexe antibiotique aminoglycosidique-zinc. La quantité molaire du réactif d'acylation ajouté peut être habituellement égale ou légèrement supérieure au nombre de groupes amino non complexes avec lesquels le produit acylant doit réagir. Dans certains cas, toutefois, la quantité molaire

  
 <EMI ID=90.1>  foie le nombre des groupes amino non complexés. Le réactif d'acylation peut êtro ajouta, soit en une seule fois, soit

  
 <EMI ID=91.1> 

  
heures, bion qu'il puisse être habituellement ajouté sur

  
 <EMI ID=92.1> 

  
acylation peut être conduite à une température comprise

  
 <EMI ID=93.1> 

  
tuer à une température comprise entre 0*C et la température ambiante. Dans quelques cas, la température de la réaction peut être maintenue basse au moment de l'addition

  
 <EMI ID=94.1> 

  
à mesure que l'acylation progresse. Normalement, la réaction d'acylation peut n'effectuer in situ dans le solvant organique dans lequel le complexe antibiotique aminoglycoaidique-catfona de zinc a été formé. Cette acylation du complexe de zinc produit le complexe de zinc N-acylé, c'

  
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sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique.

  
Dans le procédé selon le premier aspect de l'invention, l'étape de l'acylation du complexe de l'antibiotique aminoglycosidique et des cations de zinc est suivie de celle de l'élimination de ces derniers du complexe Nacylé (notamment la destruction du complexe de zinc) pour donner le dérivé N-acylé sélectivement protégé de l'antibiotique aminoglycosidique, qui est libéré de ses cations de zinc.

  
Pour éliminer les cations de zinc du complexe de zinc N-acylé, il est nécessaire de traiter le dit complexe avec un réactif approprié qui enlève les cations. Pour cela, on dispose d'un grand nombre de méthodes. La première consiste à faire réagir un agent de précipitation du zinc, qui est capable de convertir les cations de zinc en un composé de zinc insoluble dans l'eau, comme le sulfure de zinc, l'hydroxyde de zinc ou le carbonate de zinc, tandis que le complexe de zinc N-acylé reste toujours dissous dans le mélange réactionnel d'acylation, où le complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc a été acylé, ou après qu'il a été transféré du dit mélange ré-

  
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vant organique frais.

  
Parmi les agents de précipitation du zinc dont on dispose pour la mise en oeuvre de cette première méthode, on peut citer l'hydrogène sulfuré, un sulfure de métal alcalin, comme le sulfure de sodium, le sulfure d'ammonium, un sulfure de métal alcalino-terreux, comme le sulfure de calcium, un carbonate de métal alcalin, comme le carbonate de sodium, ou l'hydroxyde d'ammonium. Dans certains cas, l'élimination des cations de zinc du complexe de zinc N-acylé peut s'effectuer en ajoutant simplement de l'eau. Dans cette première méthode, l'addition de l'agent de précipitation du zinc à la solution du complexe de zinc Nacylé provoque une précipitation comparativement rapide du composé de zinc insoluble formé avec les cations de zinc, et le précipité peut être enlevé par filtration.

   Le dérivé N-acylé d'antibiotique aminoglycosidique qui reste alors dans la solution filtrée peut être récupéré par concentration de la solution ou par extraction hors de cette solution et, si cela est nécessaire, il peut être purifié ultérieurement. Pour cette purification, on peut avoir recours, par exemple, à la chromatographie sur colonne de gel de silice.

   Une deuxième méthode consiste (a) à concentrer, à siccité ou non, par évaporation du solvant ou (b) à diluer avec un diluant liquide, le mélange de réaction d'acylation précité ou la nouvelle solution obtenue en transférant le complexe de zinc N-acylé dans un volume de solvant organique frais, de façon à obtenir un dépôt, concentré ou résidu huileux ou solide, après quoi on récupère d'une quelconque manière le dérivé N-acylé désiré de l'antibiotique aminoglycosidique, dérivé présent dans le dépôt, le concentré ou le résidu. Le diluant liquide qui peut être utilisé dans cette deuxième méthode est l'eau ou un liquide organique dans lequel la solubilité du complexe de zinc N-acylé pris dans son ensemble ou celle de sa fraction constituée par le dérivé N-acylé d'antibioti-que aminoglycoaidique est faible ou nulle.

  
Selon cette deuxième méthode, on concentre tout d' abord, à siccité ou non, le mélange de la réaction d'acylation contenant le complexe de zinc N-acylé (ou la nouvelle solution obtenue en transférant le dit complexe dans du solvant organique frais) pour obtenir le dépôt ou réaidu huileux ou solide. Lorsqu'on a utilisé comme milieu réactionnel pour la N-acylation du complexe de zinc un solvant organique difficilement évaporable, comme le diméthylsulfoxyde, etc., il est possible d'incorporer le mélange de réaction d'acylation contenant le complexe de zinc Nacylé à un liquide organique diluant tel que l'éther ordinaire de façon que le dit solvant organique difficilement évaporable choisi comme milieu se dissolve dans le diluant ou soit dilué par celui-ci, ce qui provoque le dépôt d'une substance solide ou huileuse contenant le complexe de zinc N-acylé.

   On obtient de ces diverses manières un dépôt ou résidu huileux ou solide qui est normalement un mélange compose: (a) du complexe de zinc N-acylé, c'est-à-dire le complexe des cations de zinc avec le

  
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béré par la destruction de l'association complexante dans

  
 <EMI ID=98.1> 

  
absence substantielle du milieu solvant organique, (c) d'

  
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truction de l'association complexante dans la partie du complexe de zinc N-acylé, (d) d'une quantité du sel de zinc qui a été ajoutée initialement en excès et qui n'a pas réagi au cours de la réaction complexante, et éventuellement ( e ) d'un certain rente du solvant organique utilisé au cours des opérations précédentes.

  
Le dépôt ou résidu huileux ou solide précité (ci

  
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dures (a), (b) et (c) ci-dessous. 

  
 <EMI ID=101.1> 

  
que polaire, aqueux ou non, seul ou mélangé à d'autres, du type des liquides organiques polaires qui ont pour ef-

  
 <EMI ID=102.1> 

  
zinc dans le complexe N-acylé présent dans le dit dépôt ou réuidu et dans lesquels les quantités de sel de zinc libérées et celles initialement présentes et qui n'ont pas réagi sont solubles, mais qui ne dissolvent pas le dérivé N-acylé désiré de l'antibiotique aminoglycosidique. De cette manière, le complexe de zinc N-acylé est détruit pour libérer les cations de ce métal et leur permettre

  
de se dissoudre sous la forme de sel de zinc dans l'eau ou le(a) solvant(.) organique(s), aqueux ou non, précité(s) en laissant le dérivé N-acylé désiré d'antibiotique

  
 <EMI ID=103.1> 

  
récupérer. Ce résidu peut être facultativement purifié

  
en le faisant dissoudre de nouveau dans un solvant organique. Les solvants organiques polaires dont on peut disposer dans cette procédure (a ) sont, par exemple, le méthanol, l'éthanol, l'ammoniaque, l'éthylamine et la triéthylamine. En conséquence, ces solvants organiques polaires et l'eau servent de réactif d'élimination des cations de zinc.

  
(b) Comme variante, on peut mélanger le dépôt ou <EMI ID=104.1> 

  
type de solvant organique polaire, soit anhydre, soit aqueux, qui a pour effet de détruire l'association complexante des cations de zinc dans le complexe N-acylé de ce métal qui est présent dans le dit dépôt ou résidu, et dans lequel le sel de zinc libéré n'est pas aoluble, tandis que le dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique

  
 <EMI ID=105.1> 

  
acylé est détruit pour libérer le dérivé précité et lui permettre de se dissoudre dans le dit solvant organique polaire et d'en être extrait et, par convoquent, d'être .'par' du sel de zinc, lequel est libéré, mais rente  <EMI ID=106.1> 

  
airé d'antibiotique aminoglycosidique dans le solvant organique polaire et, ai on le désire, on peut le purifier,

  
 <EMI ID=107.1> 

  
tion purifiée pour isoler le dérivé en question.

  
(c) Comme autre variante, on peut faire dissoudre le déposé ou résidu huileux ou solide (le mélange précité) obtenu par la deuxième méthode décrite plus haut, tel quel, dans un solvant organique approprié contenant une proportion d'eau, si l'ensemble du dépôt ou du résidu est soluble dans l'eau, au moins dans une mesure substantielle.

  
On peut soumettre la solution ainsi obtenue à un traitement chroma to graphique au cours duquel le sel de zinc libéré et le dérivé N-acylé libéré peuvent être extraits séparément de la solution. Les auteurs de la présente invention ont constaté qu'on peut utiliser pour ce traitement chromatographique diverses sortes de résines cationiques, de résines anionique", de résines échangeuses de chélates et de hauts-polymères insolubles dans l'eau et qui contiennent dea groupes fonctionnels capables de se combiner avec un métal, comme la chitine ou le chitosan. Parmi les sortes de résines cationiques qui peuvent être utilisées dans ce but on peut citer celles qui contiennent des groupes carboxyliques (-COOH) comme groupes actifs et celles dans lesquelles les fonctions d'échange sont assurées par des

  
 <EMI ID=108.1> 

  
groupes actifs, on fait dissoudre le dépôt ou résidu huileux ou solide (le mélange précité) dans un solvant organique aqueux approprié, par exemple un mélange d'eau et

  
 <EMI ID=109.1>   <EMI ID=110.1> 

  
une autre quantité de ce solvant contenant en outre une proportion d'un acide ou d'une base. Dana le cas d'un acide, on peut employer un acide organique faible, comme l'acide acétique, ou un acide inorganique dilué, comme

  
 <EMI ID=111.1> 

  
hydroxyde d'ammonium peut être utilisé dans la plupart des cas. La concentration de l'acide ou de la base dans le solvant de développement (l'éluant) peut être comprise

  
 <EMI ID=112.1> 

  
 <EMI ID=113.1> 

  
des cations de zinc complexante pendant le processus de développement, car la résine cationique utilisée présente des affinités adaorptivea différentes à l'égard de l'aminoglycoaide N-acylé désire et des cations de zinc, de aorte que la force qui pousse le premier à *'associer à la résine est différente de celle qui tend à associer ces

  
 <EMI ID=114.1> 

  
 <EMI ID=115.1> 

  
 <EMI ID=116.1>   <EMI ID=117.1> 

  
sion ionique entre elles, de sorte que le développement do la colonne de résine anionique avec un solvant organique aqueux approprié permet d'éluer hors do la colonne le

  
 <EMI ID=118.1> 

  
que les cations de zinc restent dans cotte dernière.

  
Lorsque le processus chromatographique a li&#65533;u en utilisant une résine échangeuse de chélates, qui peut se combiner aux cations de zinc grâce à la faculté qu'elle

  
a de former un chélate avec les métaux, on place une solu-

  
 <EMI ID=119.1> 

  
té) dans un solvant organique aqueux dans une colonne de la résine échangeuse de chélates et l'on développa ensuite

  
 <EMI ID=120.1> 

  
 <EMI ID=121.1> 

  
ment au bas do la colonne, tandis que les cations de zinc restent fixés à la résine. Le haut-polymère insoluble dans l'eau, qui contient des groupes fonctionnels capables do se combiner avec un métal, comme la chitine et le chitosan par exemple, peut être employé de la même manière que lorsqu'on utilise la résine échangeuse de chélates.

  
(d) On peut, en outre, utiliser une troisième méthode, dans laquelle on place directement dans une colonne de résine cationique, de résine anionique, de résine échangeuse de chélates ou d'un haut-polymère insoluble dans l'eau et contenant des groupes fonctionnels aptes à <EMI ID=122.1> 

  
acylation conduite pour protéger les groupes amino, de sorte que le complexe de zinc N-acylé est adsorbé par la résine ou le haut-polymère. On peut ensuite laver la colonne avec un solvant organique aqueux, si cela est nécessaire, puis développer avec un solvant organique aqueux contenant ou non un acide ou une base, comme dans la méthode (c), et l'on obtient ainsi l'élimination des cations de zinc du complexe N-acylé ainsi que la récupération du dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique.

  
(e) Il existe aussi une quatrième méthode pour ré- <EMI ID=123.1> 

  
cosidique, méthode dans laquelle on traitement immédiatoment avec de l'eau le mélange réactionnel contenant le complexe de zinc N-acylé en l'incorporant à l'eau dans le cas où le dit dérivé désiré lui-môme est insoluble, au moins substantiellement, dans cette dernière. On peut citer comme exemple de dérivé N-acylé insoluble dans l'eau

  
 <EMI ID=124.1> 

  
zyloxycarbonyldibékacino. Dans ce cas, lorsque le mélange de réaction d'acylation contenant le complexe de zinc Nacylé comprent un dérivé N-acylé substantiellement insoluble dans l'eau d'un antibiotique aminoglycosidique est immédiatement incorporé à de l'eau, l'association complexante du zinc dans le complexe N-acylé est détruite pour permettre au dérivé N-acylé insoluble de se précipiter nous la forme d'un solide, tandis que le sel de zinc formé par les cations libérés de ce métal restent en solution, de sorte que le dérivé N-acylé désiré d'antibiotique

  
 <EMI ID=125.1> 

  
de zinc sous la forma d'un produit pratiquement pur.

  
Comme il a été expliqué plus haut, la N-acylation, c'est-à-dire 1& réaction de protection de groupes amino, est conduite avec le complexe de zinc de l'antibiotique

  
 <EMI ID=126.1> 

  
un complexe dans lequel les cations de zinc utilisés sont associés sous la forme d'un complexe à la structure du

  
 <EMI ID=127.1> 

  
blement soluble dans l'eau, une opération simple, qui consiste à incorporer de l'eau au mélange de la réaction d' acylation contenant le complexe de zinc N-acylé provoque la précipitation du dérivé N-acylé insoluble dans l'eau sous la forme d'un solide, tandis que les cations de zinc libérés en sont éliminés par dissolution dans l'eau (com-

  
 <EMI ID=128.1>   <EMI ID=129.1> 

  
partiellement soluble dans l'eau et l'on ne peut donc le recueillir qu'avec un rendement considérablement réduit

  
 <EMI ID=130.1> 

  
poror immédiatement do l'eau au mélange de la réaction d' acylat ion. Pour ces raisons, on obtient de meilleurs ré-

  
 <EMI ID=131.1> 

  
res (b) et (c), dans lesquelles le complexe de zinc Nacylé (c'est-à-dire le complexe de cations do zinc avec le dérivé N-acylé d'antibiotique aminoglycosidique résultant de la réaction d'acylation) est tout d'abord séparé du mélange réactionnel, puis mis à dissoudre dans de l'

  
 <EMI ID=132.1> 

  
lution ainsi obtenue est traitée pour éliminer les cations de zinc qu'elle contient. Une des méthodes simples d'élimination des cations de zinc qui tombent sous le sens pour l'instant est celle dans laquelle de l'hydrogène sulfuré ou un sulfure alcalin est mis à réagir comme agent de précipitation avec les cations de zinc pour précipiter ces derniers sous la forme de sulfure do zinc (forme de mise en oeuvre de la première méthode décrite à l'alinéa (a)). Toutefois, le sulfure do zinc se précipite souvent sous la forme d'un dépôt colloïdal qu'il est difficile de séparer par filtration et l'hydrogène sulfuré ou le sulfure alcalin ont par ailleurs une odeur désagréable et ne conviennent pas à une application du procédé à l'échelle industrielle.

   Les auteurs de l'invention ont donc effectué des recherches poussées en vue de fournir une méthode pratique d'élimination des cations de zinc du complexe sans recourir à l'intervention d'un sulfure et ils sont donc parvenus à mettre au point les méthodes efficales et faciles d'élimination qui consistent à utiliser les résines  <EMI ID=133.1> 

  
cas des procédures (c) et (d)). Ces procédures (c) et (d) sont industriellement très avantageuses et intéressantes, car elles sont d'une mise en oeuvre facile, présentent une grande efficacité du point de vue de la séparation des cations de zinc et fournissent un rendement élevé du dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique.

  
Les diverses méthodes et procédures de traitement du complexe de zinc N-acylé par le réactif' d'élimination qui ont été décrites ci-dessus peuvent être résumées comme suit:
(a) Le complexe de cations do zinc avec le dérivé <EMI ID=134.1> 

  
 <EMI ID=135.1> 

  
 <EMI ID=136.1> 

  
tions do zinc qu'il contient.

  
(b) Le complexe des cations de zinc avec le dérivé <EMI ID=137.1> 

  
est séparé du mélange de la réaction d'acylation par extraction avec un solvant organique, par évaporation du milieu solvant organique contenu dans le mélange réactionnel ou par dilution de ce mélange avec un solvant organi-

  
 <EMI ID=138.1> 

  
d'élimination des cations do zinc.

  
(c) Le complexe des cations de zinc avec le dérivé <EMI ID=139.1> 

  
eat, une fois séparé. mélangé à de l'eau ou à un solvant organique polaire, anhydre ou aqueux, qui sert de réactif d'élimination des cations de zinc. Ce solvant organique polaire est, soit un solvant dans lequel le sel de zinc est soluble mais qui ne dissout pas le dérivé N-acylé d' antibiotique aminoglycosidique, soit un solvant dans lequel le sel de zinc est insoluble, mais qui dissout le dérivé N-acylé d'antibiotique aminoglycosidique.

  
(d) Le complexe de cations de zinc avec le dérivé N'acylé d'antibiotique aminoglycosidique est, une fois séparé, mis de nouveau à dissoudre entièrement dans un solvant inorganique contenant une proportion d'eau et la solution qui en résulte est soumise à un traitement chromatographique en utilisant une résine cationique, une ré-

  
 <EMI ID=140.1> 

  
haut-polymère insoluble dans l'eau contenant des groupes fonctionnels capables de se combiner avec un métal, qui servent de réactit d'élimination des cations de zinc.

  
(e) On fait passer directement le mélange de la réaction d'acylation à travers une colonne d'une résine cationique, d'une résine anionique, d'une résine échangeuse de chélates ou d'un haut-polymère insoluble dans l'eau et contenant des groupes fonctionnels capables de se combiner avec un métal pour obtenir l'adsorption du complexe de cations de zinc avec le dérivé N-acylé d'antibiotique <EMI ID=141.1> 

  
solvant organique aqueux contenant ou non une proportion d'un acide et d'une base, et l'on recueille l'éluat par fractions, opération suivie de la récupération des fractions qui contiennent le dérivé sélectivement N-acylé

  
 <EMI ID=142.1> 

  
nent pas de cations de zinc.

  
(f) Lorsque le dérivé N-acylé désiré d'antibiotique <EMI ID=143.1> 

  
soluble dans l'eau, on incorpore immédiatement le mélange

  
 <EMI ID=144.1> 

  
 <EMI ID=145.1> 

  
tant dissous dans l'eau.

  
(g) On traite immédiatement le mélange de la réaction d'acylation avec de l'hydrogène sulfure, un sulfure de métal alcalin ou alcalino-terreux qui précipite les cations de zinc sous la forme du sulfure de ce "létal, ou avec l'hydroxyde d'ammonium, qui les précipite sous la forme d'hydroxyde de aine.

  
Dans le complexe de zinc formé dans le procédé selon le premier aspect de l'invention, les cations de mine

  
 <EMI ID=146.1>  te que la N-acylation du complexe antibiotique aminoglyco-

  
 <EMI ID=147.1> 

  
cations, produit normalement le dérivé N-acylé dans lequel des groupes amino et/ou alkylamino autres que ceux occupant

  
 <EMI ID=148.1> 

  
Lorsque le dérivé N-acylé d'antibiotique aminoglycoaidique

  
 <EMI ID=149.1> 

  
 <EMI ID=150.1>  exemple, opération suivie de l'élimination des groupes amino-protecteura résiduels du produit N-acylé qui en ré-

  
 <EMI ID=151.1> 

  
synthétique 1-N-acylé, qui est connu comme étant un agent antibactérien utile.

  
 <EMI ID=152.1> 

  
1-N-acyléa est maintenant décrite par référence à l'utilisation (non limitative) de la kanamycine A comme matière de départ. Lorsque, dans le procédé selon le premier aspect de l'invention, on utilise la kanamycine A comme ma-

  
 <EMI ID=153.1> 

  
kanamycine sont initialement bloqués par formation d'un complexe avec les cations de zinc. En conséquence, lorsqu'on acyle le complexe kanamycine A-cations de zinc avec un réactif d'acylation approprié selon l'invention ou avec

  
 <EMI ID=154.1> 

  
de kanamycine A peuvent être protégés par le groupe acyle du réactif d'acylation employé ou par l'autre type d'agent bloquant. Après élimination des cations de zinc complexants du complexe N-acylé de la kanamycine A avec les cations de zinc, le dérivé N-acylé de kanamycine A qui en résulte est mis à réagir avec un agent acylant possédant

  
 <EMI ID=155.1> 

  
kanamycine A. A ce stade, le groupe 1-amino est normale- <EMI ID=156.1> 

  
avec un rendement légèrement supérieur à celui du dérivé 3"-N-acylé de cette infime kanamycine. L'élimination ultérieure des groupes amino-protecteurs du dérivé 1-N-acylé ainsi obtenu donne la kanamycine A 1-N-acylée comme produit final désiré. On comprend donc aisément que lorsqu' on utilise le procédé selon le premier aspect de l'invention, la kanamycine A 1-N-acylée désirée peut être obtenue avec un rendement plus élevé que si l'on fait réagir la kanamycine A non protégée ou la kanamycine A protégée en 6' immédiatement avec un agent acylant pour réaliser

  
la 1-N-acylation de la kanamycine A. Si l'on fait réagir une kanamycine non amino-protégée avec un agent 1-Nacylant, on constate qu'il se forme un mélange de produits N-acyléa qui contient une très faible proportion (habi-

  
 <EMI ID=157.1> 

  
ré.

  
Dans le cas où le procédé selon le premier aspect de l'invention est appliqué à une kanamycine de formule générale (III), une partie ou la totalité des groupes amino autres que les groupes 1- et 3"-amino de cette kanamycine sont protégés pour donner un dérivé de kanamyci-

  
 <EMI ID=158.1>  
 <EMI ID=159.1> 
 <EMI ID=160.1>   <EMI ID=161.1> 

  
bloqués. Néanmoins, si le groupe acyle à introduire comme groupe amino-bloquant a une grandeur stérique relativement importante, par exemple le groupe t-butoxycarbonyle, ou ai la quantité molaire du réactif d'acylation uti-

  
 <EMI ID=162.1> 

  
nécessaire pour acylor tous les groupes amino non complexés do la molécule de kanamycine et ce même si le groupe acyle du réactif d'acylation utilisé a une grandeur ordinaire, ou si la réaction d'acylation est arrêtée à un stade intermédiaire, on obtient un dérivé N-protégé de la kanamycine dans lequel le nombre de groupes amino acylés do la molécule de kanamycine est inférieur à ce qu'il est

  
 <EMI ID=163.1> 

  
est exclusivement acylé, étant donné que ce groupe 6'amino ou 6'-alkylamino est plus réactif que les autres groupes amino de la molécule de kanamycine.

  
Le dérivé de kanamycine N-acylé de formule générale
(V) est un produit intermédiaire important, utile dans la préparation semi-aynthétique de divers types de dérivés de la kanamycine. Le composé de formule (V) a une valeur plus grande comme substance intermédiaire pour la synthèse chimique, par exemple, en particulier lorsqu'il participe à un procédé de préparation d'antibiotiques aminoglycosidiques 1-N-acylés semi-synthétiques, actifs contre les bacilles résistants à la kanamycine, par acylation du

  
 <EMI ID=164.1> 

  
hydroxyl-u- aminoalcanotque, puis élimination des groupes protecteurs des groupes amino et/ou alkylamino bloqués du produit de 1-N-acylation obtenu.

  
Par exemple, lorsque le composé intermédiaire de formule (V) doit être acylé avec un groupe acyle, comme  <EMI ID=165.1> 

  
un a&#65533;ido butyrique substitué en conséquonce ou son dérivé

  
 <EMI ID=166.1> 

  
ester de N-hydroxyauccinimide, l'ester de N-hydroxyphtalimide ou celui de p-nitrophénol, ce qui a pour effet de former le produit de 1-N-acylation. Ensuite, l'élimination du groupe benzylo xycarbonyle et du groupe protecteur
(R ) dans la formule (V) du produit de 1-N-acylation peut être effectuée en appliquant une technique traditionnelle

  
 <EMI ID=167.1> 

  
hydrolyse avec un acide ou une base, soit par réduction au moyen d'un métal réducteur, soit encore par hydrogénolyse catalytique avec de l'hydrogène, soit enfin par réduction de radical avec du sodium dans de l'ammoniac liquide, pour donner un dérivé semi-synthétique de la kanamycino ayant un groupe (S)-4-amino-2-hydroxybutyryle lié au groupe 1-amino de la kanamycine, dérivé qui est actif à l'égard des bacilles résistants et est représenté par la formule générale (VI) ci-dessous:

  

 <EMI ID=168.1> 
 

  
 <EMI ID=169.1> 

  
dans laquelle R , R , R , R ont chacun la môme définition que dans la formule (III). Dans la procédure ci. -dessus, on

  
 <EMI ID=170.1> 

  

 <EMI ID=171.1> 


  
 <EMI ID=172.1> 

  
 <EMI ID=173.1> 

  
kanamycine.

  
L'invention embrasse en outre un procédé de préparation d'un dérivé N-acylé sélectivement protégé d'un antibiotique aminoglycosidique comportant uno fraction 6-0-

  
 <EMI ID=174.1> 

  
atreptamino ayant éventuellement un groupe 4-0-(aminoglycoaylo), dérivé dans lequel tous les groupes amino (y com-

  
 <EMI ID=175.1> 

  
acyles identiques ou différents.

  
Par le procédé selon le premier aspect de l'invention (appelé parfois procédé "du complexe de zinc" dans la suite du présent mémoire), il est possible de préparer un dérivé N-acylé, sélectivement mais partiellement protégé de l'antibiotique aminoglycosidique, dérivé dans lequel tous les groupes amino autres que les deux groupes 1-amino

  
 <EMI ID=176.1> 

  
quivalent réactif pour effectuer la 1-N-acylation décrite plus haut, il est de fait qu'on obtient un mélange de produits d'acylation comportant (a) le produit 1-N-acylé dans lequel seul le groupe 1-amino de la molécule d'aminoglyco-

  
 <EMI ID=177.1> 
(b) le produit 3"-N-acylé, où seul le groupe 3"-amino (ou  <EMI ID=178.1> 

  
n'a été acylé. Pour obtenir lo produit de 1-N-acylation final désiré à partir du mélange ci-dessus, il est donc toujours nécessaire d'effectuer une opération supplémentaire, dans laquelle le produit de 1-N-acylation final est isolé du mélange par chromatographie ou par un autre procédé d'isolation. Comme le groupe 1-amino est heureuse-

  
 <EMI ID=179.1> 

  
amino et 3"-amino (ou 3"-alkylamino) ont une réactivité identique. Néanmoins, même si la réaction de 1-N-acylation est conduite dans des conditions optimales, il est inévitable que des produits N-acylés indésirables se forment aussi et il faut donc toujours une opération supplémentai-

  
 <EMI ID=180.1> 

  
 <EMI ID=181.1> 

  
duit mixte par chromatographie sur colonne.

  
Pour éliminer cet inconvénient, il est manifestement nécessaire de préparer un dérivé N-acylé sélective-

  
 <EMI ID=182.1> 

  
quel tous les groupes amino autres que le groupe 1-amino ont été protégés. Pour que cette condition soit remplie, les auteurs de l'invention ont effectué d'autres recherches en vue de fournir un procédé qui permette de proté-

  
 <EMI ID=183.1> 

  
du dérivé d'antibiotique aminoglycosidique N-acylé et sélectivement, mais partiellement, protégé, qui, lorsqu'il est préparé selon le procédé "du complexe de zinc",

  
 <EMI ID=184.1> 

  
cette protection sans bloquer le groupe 1-amino.

  
Ces recherches ont conduit les auteurs de l'inven-tion à découvrir que lorsque le dérivé N-acylé partielle-

  
 <EMI ID=185.1> 

  
le procède du "complexe de zinc" est mis à réagir avec un agent acylant choisi parmi les esters de l'acide fornique,

  
 <EMI ID=186.1> 

  
peut être acylé préférentiellement aux fins de blocage sans qu'il y ait acylation du groupe 1-amino. Ce procédé de 3"-N-protection sélective peut être combiné au procédé du "complexe de zinc" décrit plus haut (c'est-à-dire au procédé selon le premier aspect de l'invention), ce qui permet de produire d'une manière commode et efficace le dérivé N-acylé sélectivement protégé de l'antibiotique

  
 <EMI ID=187.1> 

  
protégés sélectivement par des groupes acyles identiques ou différents. Cette combinaison du procédé du "complexe de zinc" avec le procédé de 3"-N-protection .élective of-

  
 <EMI ID=188.1> 

  
voire plus. Lorsque le dérivé précité est employé pour la 1-N-acylation de l'antibiotique aminoglycosidique, on bénéficie de l'avantage supplémentaire qu'il ne ne forme pratiquement pas de sous-produits N-acylés indésirables, ce qui facilite considérablement la séparation et la purification du produit de 1-N-acylation désiré"

  
Selon le deuxième aspect de la présente invention, il est donc fourni un procédé de préparation d'un dérivé N-acylé sélectivement protégé d'un antibiotique aminogly-

  
 <EMI ID=189.1>   <EMI ID=190.1> 

  
par des groupes acyles identiques ou différents, procédé qui consiste à faire réagir un ester d'acide alcanotque de formule (VIII):

  

 <EMI ID=191.1> 


  
dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un groupe

  
 <EMI ID=192.1> 

  
 <EMI ID=193.1> 

  
6 atomes de carbone, un groupe aralkyloxy, spécialement le groupe benzyloxy, un groupe aryloxy, spécialement le groupe phényloxy, ou un N-formylimidazole, comme agent acylant, dans un solvant organique inerte, avec un dérivé N-acylé partiellement protégé de l'antibiotique aminogly-

  
 <EMI ID=194.1> 

  
3"-alkylamino) ne sont pas protégés, tous les autres groupes amino étant protégés par un groupe acyle comme groupe amino-protecteur, pour effectuer l'acylation sélective du

  
 <EMI ID=195.1> 

  
acylant et donner ainsi le dérivé désiré, entièrement Nprotégé saut en position 1, de l'antibiotique aminoglycoaidique.

  
 <EMI ID=196.1> 

  
être utilisés dans le procédé selon le deuxième aspect de l'invention sont les mêmes que ceux qui ont été citée eau cours de la description du procédé selon le premier aspect de l'invention.

  
Des formes de mine en oeuvre du procédé selon le deuxième aspect de l'invention sont maintenant décrites de façon plus complète.

  
Le dérivé N-acylé partiellement protégé d'antibio-

  
 <EMI ID=197.1> 

  
 <EMI ID=198.1> 

  
invention et dans lequel tous les groupes amino autres

  
 <EMI ID=199.1>   <EMI ID=200.1> 

  
lon le premier aspect de l'invention. En conséquence, le groupe acyle initialement présent dans le dérivé N-acylé

  
 <EMI ID=201.1> 

  
dérivé N-acylé partiellement protégé d'antibiotique aminoglycosidique employé comme matière de départ peut être aussi un dérivé préparé selon le procédé de Nagabhushan

  
 <EMI ID=202.1> 

  
Dans la mine en oeuvre du procédé selon le deuxième aspect de l'invention, le dérivé N-acylé partiellement protégé d'antibiotique aminoglycosidique dans lequel les

  
 <EMI ID=203.1> 

  
dérivé utilisé. Le solvant organique inerte peut être

  
de préférence un de ceux qui possèdent un pouvoir dissolvant élevé à l'égard de la matière de départ, par exemple

  
 <EMI ID=204.1> 

  
n-butanol et le t-butanol, ainsi que les formes aqueuses  <EMI ID=205.1> 

  
bien qu'ils ne soient pas très appropriés, donnant un moins bon rendement du produit désiré. Avec l'agent acylant de formule (VIII), Ra peut être de préférence un groupe dihaloalkyle ou trihaloalkyle, en particulier le

  
 <EMI ID=206.1> 

  
le, et R peut être de préférence un groupe alkyloxy, comme le groupe méthoxy ou éthoxy. Lorsque R est un groupe aryloxy, il peut être le groupe ph&noxy. On peut citer comme exemples de l'agent acylant de formule (VIII) en particulier le formiate de méthyle, le formiate d'éthyle,

  
 <EMI ID=207.1> 

  
de phényle, le dichloracétate de méthyle, le trichloracétate de méthyle, le trichloracétate de phényle, le trifluor acétate de méthyle, le tritluoracétiate d'éthyle et

  
 <EMI ID=208.1> 

  
rie d'agent acylant, on peut formyler, dichloracétyler, trichloracétyler ou trifluoracétyler préférentiellement

  
 <EMI ID=209.1> 

  
cile à éliminer au cours de la phase ultérieure de Ndéprotection par une méthode classique d'élimination des groupes protecteurs. Si l'on n'utilise pas comme agent acylant un ester d'acide alcanolque et d'alcanol de for-

  
 <EMI ID=210.1> 

  
que ou un ester actif de celui-ci, comme l'ester de Nhydroxyauccinimide (ce qui n'est pas conforme au second aspect de l'invention), on ne peut obtenir l'acylation

  
 <EMI ID=211.1> 

  
nément un produit 1-N-acylé at/ou un produit d'acylation mixte qui contient le produit 1-N-acylé. Il est remarquable qu'on ne peut obtenir l'acylation sélective rocher-

  
 <EMI ID=212.1> 

  
cylant un anhydride ou un ester actif du même acide al-canolquo.

  
Les agents acylants de formule (VIII) qu'on peut

  
 <EMI ID=213.1> 

  
invention ont des réactivités diverses, comprises dans une gamme étendue entre "forte" et "faible"'. Lorsqu'on utiliso un agent acylant ayant une forto réactivité, la réaction d'acylation peut se dérouler sur une courte période on refroidissant. Par contre, lorsqu'on utilise un agent acylant ayant une faiblo réactivité, la réaction d' acylation peut être effectuée soit en chauffant, soit sur une période de temps plus longue. D'une manière générale, toutefois, la température de réaction appropriée peut être comprise entre -30*C et + 120*C et le temps de réaction convenable peut être compris entre 30 minutes et 24 heures, voire 48 heures.

  
Le produit sélectivement 3"-N-acylé désiré peut être isolé du mélange réactionnel d'une manière connue, par exemple par évaporation du solvant ou par précipitation avec addition d'eau, si nécessaire, opérations suivies d'une purification du produit.

  
 <EMI ID=214.1> 

  
tion sélective dans le procédé selon ce deuxième aspect de l'invention n'est pas encore complètement expliqué. Une interprétation possible est que l'agent ncylant de formule (VIII) acyle tout d'abord un groupe hydroxyle du produit de départ pour former un ester comme produit intermédiaire et qu'ensuite ce groupe acyle 0-estérifiant est déplacé ou émigré vers un groupe amino (en l'occurren-

  
 <EMI ID=215.1> 

  
est voison de l'hydroxyle estérifié au stade intermédiaire, ce qui entraine l'acylation de ce groupe amino. Si l'on adopte cette hypothèse, il est possible de comprendre pourquoi le groupe 1-amino, qui ne voisine avec aucun groupe hydroxyle, ne peut être acylé dans le procédé selon le deuxième aspect de l'invention. D'ailleurs, il est un fait que cet ester intermédiaire ne peut être obtenu lorsque la trifluoracétylation ou la formylation est con- <EMI ID=216.1> 

  
O-formyle est instable et qu'une quantité do ce groupe 0acyle instable qui n'a pas subi la migration vers le grou-

  
 <EMI ID=217.1> 

  
tion et do la purification du produit de la 3"-N-acylation do façon à restituer le groupe hydroxyle libre. L'inven-

  
 <EMI ID=218.1> 

  
 <EMI ID=219.1> 

  
dans le procédé selon le deuxième aspect do l'invention, ceux qui conviennent le mieux sont ceux qui possèdent un groupe acylo susceptible de donner un ester plus instable lorsqu'il est transformé en groupe 0-acyle par réaction avec le groupe hydroxyle et donne ainsi un produit ester. Il est en attendant très intéressant do noter que lorsque le procédé selon le deuxième aspect de l'invention est mis en oeuvre en utilisant à la place du N-fortnylimidazo-

  
 <EMI ID=220.1> 

  
protégé de l'antibiotique aminoglycosidique n'est pas a-

  
 <EMI ID=221.1> 

  
alcanoyle du N-alcanoylimidazole employé Pour donner un produit intermédiaire d'O-estérification. Lorsque ce pro-

  
 <EMI ID=222.1> 

  
nel contenant ce produit est ensuite traité avec un réactif alcalin, comme l'hydroxyde d'ammonium, à la températu-

  
 <EMI ID=223.1>   <EMI ID=224.1> 

  
N-acylé désiré dans le mélange de la réaction du dérivé N-acylé partiellement protégé de l'antibiotique aminoglyosidique avec un N-alcanoylimidazole, mais on ne peut en

  
 <EMI ID=225.1> 

  
rendu alcalin en le traitant avec un réactif alcalin tel que l'ammoniaque (cf. Exemple 71). 

  
Comme application intéressante des procédés selon le premier et le deuxième aspect de l'invention, il est possible de fournir un procédé d'un rendement élevé pour la préparation de l'antibiotique aminoglycosidique 1-N-

  
 <EMI ID=226.1> 

  
noalcanoyl) aminoglycosidiquo on partant do l'antibiotique aminoglycosidique parent, procédé qui consiste on une combinaison de la préparation, par le procédé selon le premier aspect de l'invention, dit procédé du "complexe de zinc, un dérivé N-acylé partiellement protégé de l'antibiotique aminoglycosidique de départ, dans lequel lea groupes 1-amino et 3"-amino ou 3"-alkylamino ne sont pas protégés et tous les autres groupes amino sont protégés,

  
 <EMI ID=227.1> 

  
tive selon le deuxième aspect de l'invention, du dérivé

  
 <EMI ID=228.1> 

  
du groupe 1-amino, de l'acylation du groupe 1-amino de

  
 <EMI ID=229.1> 

  
(isosérine) ou l'acide 4-amino-2-hydroxybutyrique, et enfin de l'élimination des groupes protecteurs dans le produit de 1-N-acylation ainsi obtenu.

  
 <EMI ID=230.1> 

  
invention fournit un procédé meilleur de préparation d'un

  
 <EMI ID=231.1> 

  
ayant facultativement un groupe 4-0-(aminoglycosyle), le dit procédé consistant à:
(a) faire réagir des cations de zinc avec l'antibiotique aminoglycosidique de départ dans un solvant organiquo inerte pour produire le complexe do ces cations de zinc avec cet antibiotique aminoglycoaidique;
(b) faire réagir un réactif d'acylation possédant un groupe acyle à introduire comme groupe amino-protectour <EMI ID=232.1> 

  
de zinc formé au cours do l'étape précédente (a), in situ dans le solvant organique inerte, pour produire un complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique. dérivé dans lequel

  
 <EMI ID=233.1> 
(c) faire réagir le complexe dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique-cation8 de zinc obtenu au cours de l'étape (b) précédente avec un réactif qui élimine les cations de zinc du complexe de zinc N-acylé, pour obtenir un dérivé N-acylé, partiellement et sélectivement protégé, de l'antibiotique aminoglycosidique, qui est exempt de cations de zinc et dans <EMI ID=234.1> 

  
ne sont pas protégés, tous les autres groupes amino de la molécule d'aminoglycoside étant protégés par le groupe acyle;
(d) faire réagir le dérivé N-acylé, partiellement <EMI ID=235.1> 

  
dique obtenu au cours de l'étape (c) ci-dessus avec un ester d'acide alcanoique de formule (VIII):

  

 <EMI ID=236.1> 


  
dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un groupe dihaloalkyle ou trihaloalkyle contenant de 1 à 6 atomes de carbone et Rb est un groupe alkyloxy contenant do 1 à

  
6 atomea de carbone, un groupe aralkyloxy contenant de 1

  
à 6 atomes de carbone dans sa fraction alkyle, en particulier le groupe benzyloxy, ou un groupe aryloxy, en particulier le groupe phénoxy, ou le N-formylimidazole, comme  <EMI ID=237.1> 

  
et donner ainsi le dérivé de l'antibiotique aminoglycosidique dans lequel tous les groupes amino autres que le groupe 1-amino sont protégés par le groupe acyle,
(e) faire réagir le dérivé entièrement N-protégé sauf en position 1 obtenu au cours de l'étape (d) précé- <EMI ID=238.1> 

  

 <EMI ID=239.1> 


  
dans laquelle m est 1 ou 2, ou un dérivé réactif équivalent, dans lequel le groupe amino est protégé ou non, pour acyler le groupe 1-amino du dérivé d'antibiotique précité, et <EMI ID=240.1>  <EMI ID=241.1> 

  
étape (e) précédente par une méthode d'élimination traditionnelle.

  
Il est décrit maintenant de façon plus complète comment mettre en oeuvre le procédé selon ce troisième aspect de l'invention.

  
 <EMI ID=242.1> 

  
tre utilisés comme antibiotique de départ dans la première étape de ce procédé sont les mêmes que ceux indiqués dans la description du procédé selon le premier aspect de l'invention et la réaction qui produit le complexe des cations

  
 <EMI ID=243.1> 

  
ainsi obtenu en (a) peut n'effectuer, dans la seconde étape (b) du présent procédé de la manière que celle décrite pour le procédé selon le premier aspect de l'invention. L'élimination des cations de zinc du complexe antibiotique

  
 <EMI ID=244.1> 

  
ainsi obtenu peut a'effectuer, au cours de la troisième étape (c) du présent procédé, de diverses manières déjà décrites et permet d'obtenir un dérivé N-acylé, partiellement et sélectivement protégé, de l'antibiotique aminoglycosidique. qui est exempt de cations de zinc et dans lequel les groupes 1-amino et 3"-amino ou 3"-alkylamino ne sont pas protégés, mais tous les autres groupes amino de la molécule d'aminoglycoside sont bloqués par le groupe acyle du réactif d'acylation employé dans l'étape (b) du présent procédé. Ce dérivé N-acylé, partiellement et sé-

  
 <EMI ID=245.1> 

  
est ensuite mis à réagir avec un ester d'acide alcanoïque

  
 <EMI ID=246.1> 

  
étape (d) du présent procédé de la même manière que celle déjà décrite à propos du procédé selon le deuxième aspect de l'invention, pour obtenir la 3"-N-acylation sélective du dérivé partiellement N-protégé de l'antibiotique aminoglycosidique sans acylation du groupe 1-amino qu'il contient.

  
Au cours de la cinquième étape (e) du présent procédé, le dérivé entièrement protégé sauf en position 1 obtenu au cours de l'étape précédente (d) est mis à réagir

  
 <EMI ID=247.1> 

  
droxybutyryle. Cette 1-N-acylation peut être effectuée d' une manière générale comme celle décrite dans le brevet

  
 <EMI ID=248.1> 

  
vant n'importe quelle méthode connue de synthèse des amides, par réaction du dérivé protégé de l'antibiotique a-

  
 <EMI ID=249.1> 

  
2-hydroxybutyrique, soit moue sa forme d'acide libre, soit sous celle de son équivalent réactif, telle qu'un ester

  
 <EMI ID=250.1> 

  
de son anhydride mixte, de son azide, dans un solvant organique inerte, comme le dioxanne, le diméthoxyéthane, le  <EMI ID=251.1> 

  
aqueuses de ces solvants. L'isosérine et l'acide L-4-amino-2-hydroxybutyrique peuvent avoir leur groupe amino bloqué par un groupe amino-protecteur. Le groupe amino-protecteur convenable à cet effet peut être identique ou différent de celui utilisé dans le dérivé entièrement N-

  
 <EMI ID=252.1> 

  
protecteur préféré, car on peut facilement l'éliminer en traitant avec un acide dilué comme l'acide trifluoracétique aqueux, l'acide acétique aqueux et l'acide chlorhydrique dilué. La groupe benzyloxycarbonyle, qu'on élimine par hydrogénolyse catalytique traditionnelle en utilisant de l'oxyde de palladium ou de platine comme catalyseur, ainsi que le groupe phtaloyle, qui eat facilement éliminé par hydrolyse avec l'hydrazine, conviennent parfaitement comme groupe amino-protecteur à cet effet.

  
LA réaction d'acylation dans l'étape de 1-N-acylation (e) du procédé selon le troisième aspect de l'invention peut être conduite de préférence dans un solvant or-

  
 <EMI ID=253.1> 

  
rasser le produit de 1-N-acylation obtenu à l'étape (e) de tous ses groupes amino-protecteurs. Cette élimination peut N'effectuer en appliquant une méthode traditionnelle.

  
 <EMI ID=254.1> 

  
être éliminé par hydrolyse avec une solution aqueuse d'  <EMI ID=255.1> 

  
solution acide diluée, comme l'acide chlorhydrique dilué. Un groupe amino-protecteur résiduel de type aralkyloxycar-

  
 <EMI ID=256.1> 

  
éliminé par hydrogénolyae catalytique traditionnelle. Lorsque tous lea groupes amino-protecteurs résiduels sont é-

  
 <EMI ID=257.1> 

  
minoalcanoyl)-aminoglycoaidique préparé par le procédé selon ce troisième abpect de l'invention sont énuméré. ci-dessous:

  
(1) 1-N-(L-4-amino-2hydroxybutyryl)-kanamycine A

  
 <EMI ID=258.1> 

  
Une autre application des procédés selon le premier et le deuxième aspect de l'invention consiste à pré-

  
 <EMI ID=259.1> 

  
quela le groupe 1-amino n'est pas protégé, et comme exemple de cette application, on peut citer la préparation

  
 <EMI ID=260.1> 

  
rieur.

  
 <EMI ID=261.1> 

  
exemples suivante, qui n'en constituent en aucune façon une limitation.

Exemple 1

  
 <EMI ID=262.1>   <EMI ID=263.1> 

  
on agite ensuite à température ambinnto jusqu'à co que le mélange réactionnel forme une solution homogène. Il faut onviron 4-5 heures pour qu'un complexe do zinc do kanamy-

  
 <EMI ID=264.1> 

  
solution réactionnollc est maintenue à température ambiante pendant 4 heures, pendant lesquelles le complexe de zinc de kanamycine A subit une bonzyloxycarbonylation.
(l'acylation conformément au premier aspoct do l'invention) .

  
Un échantillon prélevé do la solution réactionnello ainsi obtenue est soumis à une chromatographie

  
on couche mince sur gel do silice en utilisant, comme solvant de développement la phase liquide inférieure d'un

  
 <EMI ID=265.1> 

  
aux sous-produits à dos points supérieurs.

  
(ii) La solution réactionnelle ci-dessus est versée dans
500 ml d'éther éthylique et l'huile séparée est lavée à plusieurs reprises avec d'autres quantités d'éther éthylique pour donner 8,8 g d'une matière sirupeuse épaisse.
(iii) On effectue l'élimination du cation zinc du matériau sirupeux (comprenant essentiellement le complexe de zinc) selon l'un ou l'autre des procédés suivants .

  
 <EMI ID=266.1>   <EMI ID=267.1> 

  
la ninhydrine, est d'abord éliminée do la colonne par élution et l'acétate de zinc, sensible à la coloration par le diphénylcarbnzide, est ensuite éliminé par élution. Los fractions contenant le produit désiré sont combinées et concentrées à siccité. Lo résidu est lavé à l'éther

  
 <EMI ID=268.1> 

  
B - Procédés utilisant une résine échangeuse de cations faible portant un groupe carboxylate comme groupe fonctionnel (vendu sous le nom d'"Amberlito CG 50" (forme

  
 <EMI ID=269.1> 

  
on fait passer la solution dans une colonne do 60 ml do résine Amberlito CG 50 (forme NH4+) ; on la soumet à une élution par gradients linéaires avec de l'oau-dioxanne
(1:1) avec des concentrations en ammoniaque allant de 0

  
 <EMI ID=270.1>  

  
 <EMI ID=271.1> 

  
 <EMI ID=272.1> 

  
C - Procédé utilisant une résine échangeuse de cations

  
 <EMI ID=273.1> 

  
puis on fait une élution par gradients linéaires avec de l'eau-dioxanne(2:1) avec des concentrations en ammoniaque allant de 0 à IN. Les fractions de l'éluat contenant la

  
 <EMI ID=274.1> 

  
d'un solide blanc identique à celui obtenu dans l'exemple 1 (iii) (B).

  
D - Autre procédé utilisant le Dowex 50W X 2.

  
On fait passer dans une colonne de 30 ml de Dowex

  
 <EMI ID=275.1> 

  
obtenue dans l'exemple I (ii) dans 20 ml d'eau-méthanol
(3:1). La colonne est bien lavée avec del'eau-méthanol
(3:1) puis on fait une élution par gradients avec de l'eau-méthanol avec des concentration* en C1H de 0 à 6 N. Les fractions actives contenant la 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A désirée sont rassemblées et mélangées à une résine échangeuse d'anions fortement basique
(forme OH) en quantité suffisante pour rendre le mélange légèrement acide.

  
Le mélange est filtré, et le filtrat concentré

  
 <EMI ID=276.1>  E - Procédé utilisant uno résine échangeuse d'anions portant un groupe fonctionnel ammor.ium quaternaire fortement basique (vendu nous lo nom de "DOWEX 1 X 2" par Dow Chemical).

  
 <EMI ID=277.1> 

  
cée dans une colonne do 30 ml de résine Dowex 1 X 2
(forme OH) préalablement imprégnée avec de l'eau-dioxanne
(1:1) puis la colonne est développée à vitesse relativement élevée avec de l'eau-dioxanne(1:1). Les fractions de l'éluat contenant le produit désiré sont rassemblées

  
 <EMI ID=278.1> 

  
solide incolore identique à celui de l'exemple 1 (iii) B. F - Procédé utilisant une résine échangeuse d'anions portant un groupe fonctionnel faiblement basique (vendu sous le nom de "Dowex WGR" par Dow Chemical C*).

  
1 g de la matière sirupeuse obtenue dans l'exemple 1 (ii) est dissous dans 20 ml d'eau-dioxane (2:1) et on fait passer la solution dans une colonne de 50 ml de Dowex WGR (forme base) préalablement saturée à l'eau dioxanne(2:1) puis on élue à l'eau-dioxanne(2:1). La 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A est éliminée par élution en quelques fractions, avec entraînement d'une trace de zinc. Ces fractions sont combinées et concentrées à siccité pour donner 450 mg d'un solide incolore. Le solide peut être directement utilisé comme matériau

  
de départ pour la production de la l-N((S)-4-amino-2-hydroxybutyryl)kanamycine A selon la méthode d'acylation 1-N de l'exemple 31 ci-après, dans laquelle les traces

  
de cation zinc restant dans le solide do départ n'exercent pas d'influence adverse sur la réaction d'acylation

  
 <EMI ID=279.1> 

  
G - Procédé utilisant une résine d'échange-chélate portant un groupe fonctionnel faiblement acide (vendu sous le nom

  
 <EMI ID=280.1> 

  
On introduit une solution de 1 g de la matière sirupeuse, obtenu dans l'exemple 1 (il), dans l'eau- <EMI ID=281.1> 

  
ées que dans une phase postérieure comme effluent de la colonne sont combinée* et concentrées à siccité pour donner 272 mg (74 %) du produit désiré sous forme de solide blanc.

  
H - Procédé utilisant le Chitosan (polymère insoluble dans l'eau contenant des groupes fonctionnels suscepti-

  
 <EMI ID=282.1> 

  
On imprègne soigneusement 100 ml de Chitosan avec de l'eau-méthanol (3:1) et on en garnit une colonne dans laquelle on fait passer une solution de 1 g de la

  
 <EMI ID=283.1> 

  
fraction* sensible* à la réaction à la ninhydrine sont

  
 <EMI ID=284.1> 

  
 <EMI ID=285.1> 

  
l'exemple 1 (111) (B).

  
1 - Procédé utilisant un polymère élevé portant des trou-

  
 <EMI ID=286.1>   <EMI ID=287.1> 

  
l'exemple 1 (iii) (B).

  
J - Procédé utilisant l'hydrogène sulfuré pour précipiter le zinc.

  
On dissout 1 g de la matière sirupeuse obtenue dans l'exemple 1 (ii) dans 20 ml d'eau-méthanol (1:1),

  
on y ajoute de l'ammoniaque aqueux, puis l'on introduit une quantité suffisante d'hydrogène sulfuré. Le mélange réactionnel contenant le précipité de sulfure de zinc est filtré sur filtre de verre rempli de l'adjuvant de filtration "Celite" et le filtrat est concentré nous pression réduite pour donner une matière sirupeuse qui est bien

  
 <EMI ID=288.1> 

  
 <EMI ID=289.1> 

  
et la solution est chromatographiée sur une colonne de
30 ml d'Amberlite IRA 900 (forma OH, résine fortement ba-

  
 <EMI ID=290.1> 

  
lui de l'exemple 1 (iii) (B).

Exemple 2

  
 <EMI ID=291.1>   <EMI ID=292.1> 

  
840 mg (6,18 m moles) d'acétate de sodium trihydrate. Après agitation du mélange à température ambiante pendant 4 heures, on ajoute lentement en environ une heure au mélange contenant le complexe de kanamycine A-zinc formé, une solution de 675 mg (2,27 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxyphtalimide

  

 <EMI ID=293.1> 


  
de diméthylaulfoxyde. Le Mélange obtenu est laissé reposer à température ambiante pendant 4 heures.

  
On traite ensuite le mélange réactionnel de la ma-

  
 <EMI ID=294.1> 

  
cine A nous forme de solide incolore.

Exemple 3

  
 <EMI ID=295.1>  on ajoute 1 g (4,55 m mole*) d'acétate de zinc dihydrate, opération suivie d'une agitation continue pendant 5 heures supplémentaires. On ajoute en 30 minutes au mélange

  
 <EMI ID=296.1> 

  
hydroturanne (1:1). Après avoir agité toute une nuit à température ambiante le mélange obtenu, on y ajoute de

  
 <EMI ID=297.1> 

  
tylé nous forme de précipité. Le précipité est alors traité selon le processus décrit dans l'exemple 1 (iii) (H) pour

  
 <EMI ID=298.1> 

  
question.

Exemple 4 

  
 <EMI ID=299.1> 

  
reposer toute une nuit à température ambiante, on ajoute au mélange une grande quantité d'éther éthylique, ce qui

  
 <EMI ID=300.1> 

  
que l'on lave plusieurs fois à l'éther éthylique pour obtenir une couche sirupeuse épaisse.

  
(ii) La matière sirupeuse ainsi obtenue est dissoute dans

  
 <EMI ID=301.1> 

  
une colonne de 200 ml de Chitosan. La colonne est éluée

  
à l'eau-méthanol (3:1) et l'éluat rassemblé en fractions. Les fractions positives à la ninhydrine sont combinées

  
 <EMI ID=302.1> 

  
 <EMI ID=303.1> 

  
incolore identique à celui obtenu dans l'exemple 1 (iii)(B).

Exemple 5

  
 <EMI ID=304.1> 

  
 <EMI ID=305.1> 

  
la solution réactionnelle obtenue nous pression réduite.

  
 <EMI ID=306.1>  mentionne.

Exemple 6

  
 <EMI ID=307.1> 

  
(base libre) dans 15 ml d'un mélange oau-méthanol (1:7) auquel on ajoute ensuite 1,5 g (6,8 m moles) d'acétate

  
 <EMI ID=308.1> 

  
oxycarbonyloxyauccinimide dans 7 ml de tétrahydrofuranne. On laisse le mélange roposor à température ambiante toute une nuit et on concentre sous pression réduite la solution

  
 <EMI ID=309.1> 

  
une colonne de 200 ml de Chitosan et on traite ensuite l'effluent sortant de la colonne comme dans l'exemple 4

  
 <EMI ID=310.1> 

  
composé mentionné,

Exemple 7

  
Préparation de la 3,6'-di-N- benzyloxycarbonylkanamycine A

  
On met en suspension 500 mg (1,03 m mole) de ka-

  
 <EMI ID=311.1> 

  
et on ajoute à la suspension 272 mg (1,24 m mole) d'acétate de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante pendant 10 heures pour former une solution pratiquement transparente à laquelle on ajoute ensuite, en petites parties, pendant environ 2 heures, 540 mg (2,27 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxyauccinimide. Après avoir laissé le mélange obtenu reposer à température ambiante toute une nuit, on ajoute une grande quantité d'éther éthylique, on enlève le matériau huileux séparé et on le lave plusieurs fois à l'éther éthylique pour obtenir une matière sirupeuse épaisse.

  
Une chromatogaphie en couche mince sur gel de silice d'un échantillon prélevé dans la matière sirupeuse, en utilisant, comme solvant de développement, le chloro-

  
 <EMI ID=312.1>  benzyloxycarbonylkanamycine A ( qui se colore par pulvérisation avec de l'acide sulfurique suivie do chauffage} ; 
- tache faible à Rf 0,28 ;  <EMI ID=313.1>  bonylkanamycine A ; et <EMI ID=314.1> 

  
A n'ayant pas réagi.

  
On n'observe pratiquement aucune tache correspondant à la tri-N-benzyloxycarbonylkanamycino A, tache

  
 <EMI ID=315.1> 

  
tion dans une colonne do 100 ml de résine CM Sophadox C-25 (forme NH4+) préalablement mouillée avoc de l'eau dioxanne (1:1). On soumet ensuite la colonne au processus

  
 <EMI ID=316.1> 

  
lequel on enlève le cation zinc et le produit désiré se sépare des autres pour donner 412 mg (51 %) du composé mentionné, sous forme de solide incolore.

  
A titre de comparaison, on répète le procédé mentionné ci-dessus mais en remplaçant l'acétate de zinc dihydrate par 308 mg (1,24 m mole) d'acétate de nickel (II) tétrahydrate, avec comme résultat l'obtention de la 3,6'-

  
 <EMI ID=317.1> 

  
kanamycine A

  
On met en suspension 500 mg (1,03 m moles) de ka-

  
 <EMI ID=318.1> 

  
on ajoute à la suspension 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène à laquelle on ajoute alors pendant environ 30 minutes une solution de

  
 <EMI ID=319.1>   <EMI ID=320.1> 

  
au repos toute une nuit à température ambiante puis traitée de la même façon que dans l'exemple 1 (il) et (iii)
(B) pour donner 722 mg (83 %) du composé mentionné, sous <EMI ID=321.1> 

  
thylformamide 1:2) 

  
Analyse élémentaire

  
 <EMI ID=322.1> 

  
 <EMI ID=323.1> 

  
mais en remplaçant l'ester de p-méthoxycarbobenzoxy-pnitrophényl par 220 mg (1,54 m mole) do t-butoxycarbonylazide, on obtient le composé ci-dessus sous forme de so-

  
 <EMI ID=324.1> 

  
1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate sont ajou-

  
 <EMI ID=325.1> 

  
ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène à laquelle on ajoute alors une solution de 1,2 g (5,1 m moles) de l'ester p-nitrophénol de l'acide trifluoracétique dissous dans 10 ml de diméthylaulfoxyde. Le mélange obtenu est maintenu toute une nuit à température ambiante puis traité avec l'éther éthylique comme mentionné dans l'exemple 1 (ii). La matière sirupeuse insoluble dans l'éther est ensuite traitée comme dans l'exemple 1 (iii) (A) pour

  
 <EMI ID=326.1> 

  
de 1:2). ICI)   <EMI ID=327.1> 

  
(15 ml) et de tétrahydrofurane (5 ml) et on ajoute à la suspension 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate,

  
 <EMI ID=328.1> 

  
dans 3 ml de tétrahydrofuranne. La solution réactionnelles est portée en une heure à température ambiante puis maintenue à cette température pendant 3 heures. On traite ensuite le mélange réactionnel à l'éther éthylique comme dans l'exemple 1 (ii) et on traite ensuite la matière sirupeuse insoluble dans l'éther par le procédé de l'exem-

  
 <EMI ID=329.1> 

  
C 50,11 ; H 6,31 ; N 6,49 %

  
 <EMI ID=330.1> 

Exemple 12

  
 <EMI ID=331.1> 

  
Le mélange réactionnel obtenu par le procédé de l'exemple 8 mais en utilisant 260 mg (2,6 m moles) d'anhy-

  
 <EMI ID=332.1> 

  
p-nitro-phényl est traité comme décrit dans l'exemple 1
(iii) (A). On prépare ainsi 525 mg (72 %) du composé men-

  
 <EMI ID=333.1> 

  
 <EMI ID=334.1>  

  
 <EMI ID=335.1> 

  
trouvé C 44,20 ; H 7,07 ; N 7,85 %

Exemple 13

  
 <EMI ID=336.1> 

  
 <EMI ID=337.1> 

  
 <EMI ID=338.1> 

  
 <EMI ID=339.1> 

  
 <EMI ID=340.1> 

  
 <EMI ID=341.1> 

  
té comme dans l'exemple 1 (il!) (H). Les :tractions posi-

  
 <EMI ID=342.1> 

  
bioxyde de carbone gazeux puis on concentre à siccité. On

  
 <EMI ID=343.1>   <EMI ID=344.1> 

  
trouvé C 46,31 ; H 5,98 ; N 6,31 ; S 6,55 %

  
Si l'on répète le processus réactionnel ci-dessus mais en omettant l'acétate de zinc, on ne récupère pratiquement pas de solide incolore.

Exemple 15

  
 <EMI ID=345.1> 

  
méthylkanamycine A (base libre) dans 12 ml de diméthylaultoxyde et 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate eat ajouté à la suspension. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène à laquelle on ajoute alors, en 30 minutes, une solution

  
 <EMI ID=346.1> 

  
(1:1). Le mélange obtenu est maintenu toute une nuit à température ambiante puis traité comme dans l'exemple 1

  
 <EMI ID=347.1> 

  
(c 1, eau -diméthylformamide, 1:2). 

  
Le traitement subséquent du composé mentionné selon un procédé similaire à celui décrit dans l'exemple

  
 <EMI ID=348.1>   <EMI ID=349.1> 

  
C 52,16 ; H 6,68 ; N 6,40 &#65533;

  
trouvé C 51,99 ; H 6,75 ; N 6,20 %

  
Le traitement subséquent du composé mentionné se-

  
 <EMI ID=350.1> 

  
 <EMI ID=351.1> 

  
(80 %) en répétant le processus de l'exemple 15, mais en

  
 <EMI ID=352.1> 

  
Le traitement subséquent du composé mentionne selon un procédé similaire à celui indiqué dama l'exemple

  
 <EMI ID=353.1> 

  
né est obtenu sous forme d'un solide incolore, avec un

  
 <EMI ID=354.1>   <EMI ID=355.1> 

  
.

  
hnalyae élémentaire

  
 <EMI ID=356.1> 

  
à la suspension 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à

  
 <EMI ID=357.1> 

  
ajoute lentement, en une heure, à la solution refroidie,

  
 <EMI ID=358.1> 

  
Le traitement subséquent du composé mentionne selon un processus similaire à celui décrit dans l'exemple

  
 <EMI ID=359.1>   <EMI ID=360.1> 

  
la suspension. Le mélange est agité à température ambiante pendant une heure pour former une solution homogène à laquelle on ajoute alors pendant environ une heure une solu-

  
 <EMI ID=361.1> 

  
 <EMI ID=362.1> 

  
rature ambiante, la solution réactionnelle obtenue est traitée avec un grand volume d'éther éthylique comme mentionné dans l'exemple 1 (ii) pour donner une matière sirupeuse épaisse.

  
La matière sirupeuse est ensuite traitée de la même façon que dans l'exemple 1 (iii) (A) mais en utilisant de

  
 <EMI ID=363.1> 

  
C 54,81 ; H 6,50; N 6,95 %

  
trouvé C 54.77 ; H 6,71; N 6,88 %

  
Le traitement subséquent du composé mentionné selon un procédé similaire à celui décrit dans l'exemple 31 donne

  
 <EMI ID=364.1> 

  
En partant de 480 mg (1,03 m mole) de 4'-déaoxykanamycine B, base libre, (Cf "Bulletin of the Chemical

  
 <EMI ID=365.1>  tient ce composé nous forme de solide incolore avec un

  
 <EMI ID=366.1> 

  
fait suivre par uno autre agitation. On ajoute lentement, en environ une heure, à la solution résultante, une solution do 1,1 g (4,4 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxy-

  
 <EMI ID=367.1> 

  
le mélange reposer toute une nuit à température ambiante. On mélange alors à la solution réactionnelle un volume important d'éther éthylique, afin de séparer un dépôt hui-

  
 <EMI ID=368.1> 

  
donner une matière sirupeuse épaisse.

  
Cotte matière sirupeuse est lavée plusieurs fois à l'eau, le complexe de zinc N-acétylé étant détruit par l'eau et le cation de zinc libéré éliminé en même temps que l'excès d'acétate de zinc existant initialement. On

  
 <EMI ID=369.1> 

  
contenant la dibékacine N-acétylée. Le solide est soumis à une chromatographie en couche mince sur gel de silice en utilisant comme solvant de développement le chloroformeéthanol-ammoniaque aqueux 18 % (1:1:1, phase inférieure)

  
 <EMI ID=370.1> 

  
Le traitement subséquent du composé mentionné selon le procédé similaire à celui décrit dans l'exemple  <EMI ID=371.1> 

  
méthyldibékacine

  
On dissout 500 mg (1,07 m moles) do 6'-N-méthyldibékacine (base libre) et 1,2 g (5,45 m moles) d'acétate

  
 <EMI ID=372.1> 

  
la solution réactionnelle reposer une nuit à température ambiante et on la traite ensuite comme indiqué dans l'exemple 23, obtonant ainsi 910 mg du composé mentionné pratiquement pur.

  
Le traitement subséquent du composé mentionné selon un processus similaire à celui décrit dans l'exemple

  
 <EMI ID=373.1> 

  
dibékacine.

Exemple 25

  
 <EMI ID=374.1> 

  
On obtient ce composé, sous forme d'un solide coloré, avec un rendement de 730 mg (79 %) en suivant lea processus décrits dans l'exemple 1 (i), (ii) et (iii) A,

  
 <EMI ID=375.1> 

  
 <EMI ID=376.1> 

  
Le traitement subséquent du composé selon un

  
 <EMI ID=377.1> 

  
500 mg (1,03 m mole) de kanamycine A (base libre) sont mis en suspension dans 20 ml de diméthylsulfoxyde et 0,5 g (2,3 m moles) d'acétate de zinc dihydrato sont

  
 <EMI ID=378.1> 

  
ture ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène à laquelle on ajoute alors 283 mg (1,13 m mole) de N-

  
 <EMI ID=379.1> 

  
mélange obtenu une nuit à température ambianto et on le traite ensuite comme dans l'exemple 1 (ii) et (iii) (I) pour obtenir 556 mg du composé mentionné sous forme de

  
 <EMI ID=380.1> 

  
libre (Cf "Bulletin of the Chemical Society of Japan", vol. 50, p. 1580-1583 (1977", on a joute à la solution

  
 <EMI ID=381.1> 

  
N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide. Après avoir laissé le mélange reposer une nuit à température ambiante, on traite la solution réactionnelle obtenue avec un grand volume d'éther éthylique, comme mentionné dans l'exemple 1 (ii) pour obtenir une matière sirupeuse épaisse.

  
La matière sirupeuse est ensuite traitée comme dans l'exemple 1 (iii) (B) mais en utilisant l'eau-dioxanne

  
 <EMI ID=382.1>  

Exemple 29

  
 <EMI ID=383.1> 

  
Le composé mentionné, nous forme de solide incolore, est obtenu avec un rendement de 780 mg en suivant le processus de l'exemple 28 mais en partant de 500 mg (1,12 m

  
 <EMI ID=384.1> 

  
etc...)

  
 <EMI ID=385.1> 

  
hydroxy-butyrique. On laisse le mélange reposer à température ambiante pendant 10 heures. Le solution réactionnelle obtenue est concentrée à faible volume, et le concentrât est repris dans 4 ml d'eau-dioxanne (1:1). On ajoute à la solution une petite quantité d'acide acétique pour la rendre faiblement acide,puis on la soumet à une

  
 <EMI ID=386.1> 

  
sous pression atmosphérique pendant une heure en présence de noir de palladium (pour éliminer le groupe benzyloxycarbonyl). La solution réactionnelle obtenue est filtrée et concentrée et on fait penser le concentrât dans une

  
 <EMI ID=387.1> 

  
à une élution par gradients avec des concentrations en am- <EMI ID=388.1> 

  
tenant la produit désiré sont combinées et concentrées à siccité pour donner 24 mg (rendement 60 %) du composé mentionné, nous forme de monocarbonate dont les propriétés physique" et l'activité antibactérienne sont identiques à celle d'un échantillon authentique.

  
Exemple 32 (Référence)

  
 <EMI ID=389.1> 

  
nyl-dibékacine préparés comme dans l'exemple 23, sont dis-

  
 <EMI ID=390.1> 

  
ajoute 13 mg (0,12 m mole) de N-hydroxyauccinimide ester

  
 <EMI ID=391.1> 

  
reposer à température ambiante et on le traite ensuite com-

  
 <EMI ID=392.1> 

  
 <EMI ID=393.1> 

  
les propriétés physiques et l'activité antibactérienne sont identiques à celles d'un échantillon authentique.

Exemple 33

  
 <EMI ID=394.1> 

  
 <EMI ID=395.1> 

  
ture ambiante. Après addition au mélange réactionnel d'un

  
 <EMI ID=396.1> 

  
tion réactionnaire dans un grand volume d'éther éthylique et la matière huileuse déposée obtenue est bien lavée

  
 <EMI ID=397.1> 

  
Cette matière est bien séchée pour donner 640 mg du compo-

  
 <EMI ID=398.1>  

  
 <EMI ID=399.1> 

  
avec 6 mg de phényl trifluoracétate et on laisse le mé-

  
 <EMI ID=400.1> 

  
On traite ensuite le mélange réactionnel comme dans l'exemple 33 ce qui donne 24,8 mg du composé mentionné qui s'est

  
 <EMI ID=401.1> 

Exemple 35

  
 <EMI ID=402.1> 

  
kanamycine A dans 0,3 ml de triamide hexaméthylphoephorique est mélangée à 7 mg de trifluoracétate d'éthyl et on laisse le mélange obtenu reposer toute une nuit à température ambiante. La solution réactionnelle est mélangée

  
 <EMI ID=403.1> 

  
dans un grand volume d'éther éthylique. La matière huileuse déposée est bien lavée à l'éther éthylique et la substance solide séchée pour donner 11,7 mg (rendement

  
 <EMI ID=404.1> 

  
racétate, solide.

  
 <EMI ID=405.1> 

  
 <EMI ID=406.1> 

  
cétyl-kanamycine A

  
On mélange à 7 mg de trifluoracétate d'éthyl une sus-

  
 <EMI ID=407.1> 

  
 <EMI ID=408.1> 

  
lange obtenu reposer toute une nuit à température ambiante. La solution réactionnelle homogène ainsi obtenue

  
 <EMI ID=409.1> 

  
puis versée dans un grand volume d'éther éthylique. La ma-

  
 <EMI ID=410.1> 

  
 <EMI ID=411.1> 

  
 <EMI ID=412.1>   <EMI ID=413.1> 

  
cétylkanamycine A

  
 <EMI ID=414.1> 

  
A dans 0,35 ml de sulfolane et on agite le mélange toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite le mé-

  
 <EMI ID=415.1> 

  
cine A dans 0,8 ml de tétrahydrofuranne et on agite le mélange pendant 2 jours. La solution réactionnelle homogène obtenue est mélangée à 15 mg de trifluoracétate d'éthyl et 8 mg de carbonate anhydre de sodium, agitée toute une nuit puis laissée reposer pendant 2 jours. La solution réactionnelle obtenue est concentrée et le concentrât lavé

  
 <EMI ID=416.1> 

  
lide est mis en suspension dans un petit volume de tétrahydrofuranne en même temps qu'une petite quantité d'acide trifluoracétique. Le mélange ainsi obtenu est agité, puis on ajoute de l'éther éthylique. Le solide.qui précipite

  
 <EMI ID=417.1> 

  
 <EMI ID=418.1> 

  
 <EMI ID=419.1>  d'éthyl dans 0,1 mg do tôtrnhydrofuranno ; la mélange obtenu est maintenu à température ambiante pondant un jour.

  
 <EMI ID=420.1> 

  
0,1 ml de tétrahydrofuranne, et on laisse le mélange à température ambiante pendant un jour. La solution réaction-

  
 <EMI ID=421.1> 

  
donne 2,3 mg (rendement 18 %) du produit mentionné sous

  
 <EMI ID=422.1> 

  
ajoute à la suspension obtenue 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène n laquelle on ajoute alors 370 mg (2,59 m moles) de t-butoxycarbonylazide. On laisse le mélange obtenu toute une nuit à température ambiante puis on le traite comme décrit dans l'exemple 1 (ii) et (iii) (B) pour obtenir 590 mg
(80 %)du composé mentionné nous forme de solide incolore.

  
 <EMI ID=423.1>  

  
 <EMI ID=424.1> 

  
température ambiante.

  
La solution réactionnelle est ensuite traitée comme décrit dans l'exemple 33 ce qui donne 76,8 mg (Rendement

  
 <EMI ID=425.1> 

  
0,4 ml de diméthylaulfoxyde est mélangée à 18 mg de trifluoracétate d'éthyl et le mélange maintenu toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 33, ce qui donne

  
 <EMI ID=426.1> 

  
 <EMI ID=427.1> 

  
 <EMI ID=428.1> 

  
 <EMI ID=429.1> 

  
exemple 10) et 12 mg de triéthylamine sont mélangés à

  
0,6 ml de diméthyl sulfoxyde puis avec 35 mg de trifluora-

  
 <EMI ID=430.1>  

  
 <EMI ID=431.1> 

  
tionnelle est alors traitée comme dans l'exemple 33, ce qui donne 94,2 mg (rendement 96 %) du compose mentionné,

  
 <EMI ID=432.1> 

  
diméthylformamido, 1:2).

  
Analyse élémentaire

  
 <EMI ID=433.1> 

  
trouvé C 35,09 ; H 3,99 ; N 6,07 %

Exemple 44

  
Production de 3 ,6' -di-N-phénoxycarbonyl-3"-N-t.rifluoracétylkenamycine A

  
 <EMI ID=434.1> 

  
langée à 23 mg do trifluoracétato do méthyl ot lo mélange est ensuite traité comme dans l'exemple 33 ce qui donne

  
 <EMI ID=435.1> 

  
 <EMI ID=436.1> 

  
de diméthyl suif oxyde est chauffé à 100'C pendant 12 heures en tube scellé pour effectuer la 3"-N-formylation. La solution réactionnelle est mélangée avec une faible quantité d'acide formique puis versée dans un grand volume d'éther éthylique et traitée comme dans l'exemple 33, ce

  
 <EMI ID=437.1> 

  
forme de solide à réaction positive à la ninhydrine.

  
 <EMI ID=438.1> 

  
Analyse élémentaire  <EMI ID=439.1> 

  
N-méthylkanamycine A (cf exemple 15) et de triéthylamine ( 11 mg), 30 mg de trifluoracétate d'éthyl et 0,7 ml de diméthylsulfoxyde est traité comme dans l'exemple 33, ce

  
 <EMI ID=440.1> 

  
mine (11 mg) dans 0,4 ml do diméthylaulfoxyde est mélangée à 21 mg de trifluoracétate d'éthyl et le mélange maintenu toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 33, ce qui donne 64, 8 mg (rendement 97 %) du composé mentionné, sous

  
 <EMI ID=441.1> 

  
1:2).

  
Analyse élémentaire

  
 <EMI ID=442.1>  

  
 <EMI ID=443.1> 

  
(c 1, eau-diméthylformamide 1:2).

Exemple 49

  
 <EMI ID=444.1> 

  
 <EMI ID=445.1> 

  
mélange est maintenu une nuit à température ambiante. La

  
 <EMI ID=446.1> 

  
d'acide dichloracétique puis traitée comme dans l'exemple

  
 <EMI ID=447.1> 

  
thylformamide 1:2). D

  
Analyse élémentaire

  
 <EMI ID=448.1> 

  
trouvé C 46,58 ; H 5,33 ; N 5,62 ; Cl 14,28 %

Exemple 50

  
 <EMI ID=449.1> 

  
nelle est mélangée à un petit volume d'acide trichloracétique puis traitée comme dans l'exemple 33, ce qui donne

  
 <EMI ID=450.1>  

Exemple 51

  
 <EMI ID=451.1> 

  
 <EMI ID=452.1> 

  
thyl et le mélange est maintenu toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite la solution réaction-

  
 <EMI ID=453.1> 

  
(12 mg) et 30 mg de trifluoracétate d'éthyl dana 1 ml de diméthylaulfoxyde est traitée comme dans l'exemple 33,

  
 <EMI ID=454.1> 

  
eau-diméthylformamide, 1:2). 

Exemple 53

  
 <EMI ID=455.1> 

  
 <EMI ID=456.1>  

  
 <EMI ID=457.1> 

  
1:2).

Exemple 55

  
 <EMI ID=458.1> 

  
et le mélange est maintenu toute une nuit à température ambiante. La solution réactionnelle est mélangée à une petite quantité d'acide dichloracétique puis traitée com-

  
 <EMI ID=459.1> 

  
du mono-dichloracétate du composé mentionné, sous forme

  
 <EMI ID=460.1> 

  
 <EMI ID=461.1> 

  
 <EMI ID=462.1> 

  
1:2).

Exemple 57

  
 <EMI ID=463.1> 

  
bonyl-tobramycine (cf exemple 20) et de triéthylemine  <EMI ID=464.1> 

  
 <EMI ID=465.1> 

  
comme dans l'exemple 48 : on obtient 86 mg (rendement

  
 <EMI ID=466.1> 

  
 <EMI ID=467.1> 

  
C 55,98 ; H 6,09 ; N 7,42 % trouvé C 55,50 H 6,22 ; N 7,28 %

Exemple 58

  
 <EMI ID=468.1> 

  
triéthylamine (12 mg) dans 1,2 ml de diméthylaulfoxyde est mélangée à 30 mg de trifluoracétate d'éthyl et le mélange est traité comme dans l'exemple 33 i on obtient

  
 <EMI ID=469.1> 

  
 <EMI ID=470.1> 

  
diméthylformamide, 1:2).

Exemple 59

  
 <EMI ID=471.1> 

  
 <EMI ID=472.1> 

  
et le mélange est traité comme dans l'exemple 33 ; on obtient 100 mg (rendement 98 %) du composé mentionné, sous

  
 <EMI ID=473.1> 

  
1:2).

  
Analyse élémentaire

  
 <EMI ID=474.1>   <EMI ID=475.1> 

L 

  
diméthylformamide, 1:2).

Exemple 62

  
 <EMI ID=476.1> 

  
chloracétyl-dibékacine

  
On fait régair une solution de 84 mg de 3,2',6'-tri-N-

  
 <EMI ID=477.1> 

  
 <EMI ID=478.1> 

  
mono-dichloracétate du composé désiré, sous forme solide.

  
 <EMI ID=479.1> 

  
bonyl-6'-N-méthyl dibékacine (cf exemple 24) dans 1 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à 30 mg de trifluoracétate d'éthyl et le mélange est traité comme dans l'exemple 33 ;

  
 <EMI ID=480.1>   <EMI ID=481.1> 

  
thylsulfoxydo est mélangée à 30 mg do trifluoracétato d'éthyl et le mélange est traite comme dans l'exemple 33 

  
 <EMI ID=482.1> 

  
(c 1, eau-diméthylformamide, 1:2).

Exemple 66

  
 <EMI ID=483.1> 

  
thylformamide, 1:2).

Exemple 67

  
 <EMI ID=484.1>   <EMI ID=485.1> 

  
mamido, 1:2).

Exemple 68

  
 <EMI ID=486.1> 

  
dimcthylformamido, 1:2).

Exemple 69

  
 <EMI ID=487.1> 

  
thylsulfoxyde est maintenu une nuit a température ambiante. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans

  
 <EMI ID=488.1> 

  
 <EMI ID=489.1> 

  
mélangée à 13 mg de N-formylimidazole et le mélange est maintenu à température ambiante toute une nuit. La solution réactionnelle est mélangée à une petite quantité d'acido formique puis traitée à l'éther éthylique comme dans

  
 <EMI ID=490.1> 

  
formiate du composé mentionné sous forme solide. 

  
 <EMI ID=491.1> 

  
thyl suif oxyde est. agité, sous refroidissement à la glace, pondant 3 heures, puis on lo laisse reposor à température ambiante toute une nuit. La solution réactionnelle est rendue alcaline par mélange avec 0,3 ml d'ammonia-

  
 <EMI ID=492.1> 

  
ambiante. Le mélange réactionnel résultant est traité à l'éther éthylique pour obtenir un sirop insoluble dans l'éthor. Le sirop est repris n l'eau puis on le fait passer dans une colonne de CM-Séphadex C-25 (forme NH. )

  
 <EMI ID=493.1> 

  
colonne de résine est développée à l'ammoniaque 0,05 N. Les fractions contenant le produit désiré éliminé par élution sont combinées et concentrées à siccité. Le concentrât est repris à l'eau, la solution aqueuse neutralisée à l'acide acétique puis à nouveau concentrée à

  
 <EMI ID=494.1> 

  
trouvé C 45,22 ; H 7,20 ; N 8, Il %

Exemple 72

  
 <EMI ID=495.1> 

  
xyde (50 ml) et de tétrahydrofuranne (20 ml) est mélangée

  
 <EMI ID=496.1> 

  
et le mélange obtenu est agité à température ambiante jusqu'à ce que le mélange réactionnel forme une solution homogène.Il faut environ 4-5 heures à la kanamycine A en

  
 <EMI ID=497.1> 

  
namycine A-cation de zinc. La solution obtenue est en-

  
 <EMI ID=498.1> 

  
(9,5 millimoles) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide dans 40 ml d'un solvant mixte tétrahydrofuranne-diméthylsulfoxyde (1:1 en volume). On maintient ensuite la solution réactionnelle pendant 4 heures à température am-

  
 <EMI ID=499.1> 

  
kanamycine A est soumis à une benzyloxycarbonylation. La solution réactionnelle obtenue est soumise à une chromatographie en couche mince sur gel de silice en utilisant, comme solvant de développement, la couche inférieure de chloroforme-méthanol-ammoniaque à 28 % (1:1:1  en volume) ; on observe alors que la plaque de gel de silice montre une tache principale à Rf 0,23 et deux ou trois taches mineures légèrement perceptibles sont disposées au-dessus de la tache principale et sont attribuables à d'autres roua-produite.

  
(ii) La solution réactionnelle contenant

  
 <EMI ID=500.1> 

  
d'éther éthylique ; le précipité huileux est ensuite lavé

  
 <EMI ID=501.1> 

  
d'un produit sirupeux contenant le complexe N-benzyloxycarbonylé.

  
(iii) L'élimination du cation de zinc du produit complexe sirupeux est effectuée de la manière décrite ci-après en utilisant une résine échangeuse de cations faiblement acide contenant des fonctions carbo-

  
 <EMI ID=502.1> 

  
 <EMI ID=503.1> 

  
(forme il+) avec de l'eau-dioxanne (2:1 en volume). On remplit une colonne avec cette résine puis on fait passer  <EMI ID=504.1> 

  
positives à la ninhydrine, passent d'abord,puis on rassemble les fractions contenant l'acétate de zinc, positives à la coloration au diphénylcarbazide. Les premières fractions contenant le produit désiré sont combinées et concentrées à siccité ; le concentrat est lavé à l'éther

  
 <EMI ID=505.1> 

  
Analyse élémentaire

  
 <EMI ID=506.1>  zyloxycarbonyl-3"-N-trifluoracétylkanamycine A

  
Le produit obtenu dans le processus ci-avant (a) est

  
 <EMI ID=507.1> 

  
équivalent 1,5 molaire de triéthylamine ce qui donne le composé mentionné.

  
c) Préparation de la l-N(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)kanamycine A

  
 <EMI ID=508.1> 

  
tenue dans le processus ci-avant (b) dans 1,5 ml d'eautétrahydrofuranne (1:1 en volume) est mélangée à 7 mg de carbonate de sodium anhydre puis on y ajoute 23 mg de Nhydroxysuccinimide ester de l'acide L-4-benzyloxy-carbonylamino-2-hydroxybutyrique, et on maintient le mélange 10

  
 <EMI ID=509.1> 

  
La solution réactionnelle ainsi obtenue est concentrée à faible volume et mélangée à l'eau, donnant un précipité solide. Le précipité est repris dans 3 ml d'ammoniaque 2N-tétrahydrofuranne (5:3 en volume) et on main-tient la solution toute une nuit à température ambiante pour

  
 <EMI ID=510.1> 

  
xanne (1:1) et la solution rendue faiblement acide par addition d'une très faible quantité d'acide acétique et soumise à une hydrogénolyse catalytique avec de l'hydrogène

  
 <EMI ID=511.1> 

  
catalyseur noir de palladium pour effectuer l'élimination des groupes benzyloxycarbonyl. La solution réactionnelle obtenue est filtrée et concentrée, et on fait passer le concentrat dans une colonne de CM-Séphadex C-25 (forme

  
 <EMI ID=512.1> 

  
est alors développée par gradients avec une concentration en ammoniaque allant de 0 à 0,5 N. Les fractions contenant le produit désiré sont combinées et concentrées à siccité pour donner 36 mg (rendement 89 %) du monocarbonate du composé mentionné. Les propriétés physicochimiques et les activités anti-bactériennes de ce produit se sont révélées parfaitement identiques à celles d'un échantillon authentique.

Exemple 73

  
 <EMI ID=513.1> 

  
kanamycine A (base libre) dans 12 ml de diméthylaulfoxyde est mélangée à 1 g (4,55 millimoles) d'acétate de zinc dihydrate, et le mélange obtenu est agité jusqu'à formation d'une solution homogène. On ajoute à cette solution

  
 <EMI ID=514.1> 

  
bonyloxysuccinimide dans 5 ml de diméthylaulfoxyde-tétra.. hydrofuranne (1:1 en volume) et on maintient la solution réactionnelle toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exem-

  
 <EMI ID=515.1>   <EMI ID=516.1> 

  
Le produit obtenu dans l'étape a) est traité comme dans l'exemple 47.

  
c) Préparation de la l-N(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)- <EMI ID=517.1> 

  
mycine A obtenu dans l'étape b) ci-dessus dans 1,5 ml

  
 <EMI ID=518.1> 

  
6 mg de carbonate anhydre de sodiur.i, puis on y ajoute 20 mg de N-hydroxyauccinimide ester de l'acide L-4-benzyloxy..

  
 <EMI ID=519.1> 

  
nu 8 heures à température ambiante. La solution réactionnelle est concentrée à faible volume et mélangée à l'eau, ce qui produit un précipité solide.

  
 <EMI ID=520.1> 

  
hydrofuranne (1:1 en volume) et le mélange est maintenu toute une nuit à température ambiante pour effectuer l'élimination du groupe 3"-N-trifluoracétyl.

  
La solution réactionnelle est concentrée à siccité pour donner un résidu solide, et ce résidu est mélangé à

  
 <EMI ID=521.1> 

  
due faiblement acide par addition d'une petite quantité d'acide acétique et soumise à hydrogénolyse avec de l'hydrogène nous pression atmosphérique pendant une heure sur catalyseur noir de palladium pour effectuer l'élimination des groupes benzyloxycarbonyl. On traite ensuite la so-

  
 <EMI ID=522.1> 

  
72 (c) ce qui donne 30 mg (rendement 87 %) du monocarbonate  <EMI ID=523.1> 

  
lumo et on mélango à l'oau ce qui donne un précipité solido.

  
 <EMI ID=524.1> 

  
mélange à température ambiante pendant toute une nuit. La solution réactionnelle est concentrée à siccité pour donner un résidu solide. Lo résidu est mélangé à 6 ml

  
 <EMI ID=525.1> 

  
acide par addition d'une petite quantité d'acide acétique puis soumise à une hydrogénolyse avec de l'hydrogène à pression atmosphérique pendant 1,5 heure sur catalyseur noir de palladium. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 72 (c) ce qui donne
42 mg (rendement 91 /*) du monocarbonatc du composé men-

  
 <EMI ID=526.1>  tobramycine.

  
 <EMI ID=527.1> 

  
mycine (base libre) dans 12 ml de diméthylsulfoxydo est mélangée à 1 g (4,55 millimolos) d'acétate de zinc dihydrate et le mélange est agité pendant une heure. On ajoute goutte à goutte, en environ une heure, à la solution  <EMI ID=528.1> 

  
le mélange réactionnol reposer uno nuit à température ambiante. La solution réactionnelle obtenue est traitée avec un grnnd volume d'éther éthylique comme dans l'exom-

  
 <EMI ID=529.1> 

  
On traite ensuite le produit complexe sirupeux comme dans l'exemple 72 (a) (iii) mais lo rapport oau-dioxanno (2:1)

  
 <EMI ID=530.1> 

  
c 54,ni ; H 6,50 ; N 6.95 % trouvé C 54.77 ; H 6,71 ; N 6,88 % <EMI ID=531.1> 

  
Le produit obtenu on n) est traité comme dans l'exemple 57 pour donner le produit mentionné.

  
 <EMI ID=532.1> 
12 mg de carbonate do sodium anhydre, puis on y ajoute 40 mg du N-hydroxysuccinimido ester do l'acide (L)-4-bonzyloxycarbonyl-amino-2-hydroxybutyriquo. On maintient le mélange à température ambiante pondant 10 heures. La so-

  
 <EMI ID=533.1> 

  
 <EMI ID=534.1> 

  
précipité solide.

  
Le solide est mis en suspension dans 2 ml d'une so-

  
 <EMI ID=535.1> 

  
pension est vigoureusement agitée à 60*C pendant 3 heures, puis filtrée pour donner un résidu solide contenant le

  
 <EMI ID=536.1> 

  
d'oau-dioxanno (1:3), la solution est rondue faiblement acide par addition d'une très petito quantité d'acide acé-

  
 <EMI ID=537.1> 

  
dium. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 72 (c) et on la fait passer dans la colonne

  
 <EMI ID=538.1> 

  
avec des concentrations d'ammoniaque allant de 0 à 1 N.

  
 <EMI ID=539.1> 

  
Ce produit coïncide bion avec lo produit authentique.

Exemple 76

  
 <EMI ID=540.1> 

  
sont mélangés sous agitation à 15 ml do diméthylsulfoxyde.

  
La solution est mélangée à 1,4 g (6,4 millimoles) d'acétate de zinc dihydrate sous agitation. On ajoute goutte à goutte à la solution, en environ une heure, une solu-

  
 <EMI ID=541.1> 

  
le mélange reposer toute une nuit à température ambiante. La solution réactionnelle est ensuite mélangée à un grand volume d'éther éthylique pour donner un dépôt huileux contenant principalement le composé mentionné, et du diméthyl-

  
 <EMI ID=542.1> 

  
rieure liquide puis lavé ù l'éther éthylique pour donner un produit sirupeux épais.

  
 <EMI ID=543.1> 

  
Grâce à ce traitement, l'oxcès initial d'acétate do zinc est éliminé et le complexe de zinc N-bonzyloxycarbonylé est détruit ; on obtient 1,1 g d'un résidu solide insolu- <EMI ID=544.1> 

  
Si pourtnn&#65533; on lave le produit solide avec uno solu-

  
 <EMI ID=545.1> 

  
On traite le produit obtenu on a) ci-dessus comme dans l'exemple 59 pour obtonir le composé mentionna.

  
 <EMI ID=546.1> 

  
(1:3) est mélangée à 18 mg do carbonate do sodium anhydre, puis on y ajoute 60 mg do N-hydroxysuccinimide ester do

  
 <EMI ID=547.1> 

  
et on maintient le mélange à température ambiante pendant 9 heures. La solution réactionnelle est concentrée à faible volume et mélangée à l'eau pour laisser déposer

  
un précipité solide.

  
Le précipité ost mélangé à 12 ml d'ammoniaque 4 N-tétrahydrofuranno (1:3) et on laisse le mélange reposer toute une nuit à température ambiante. La solution réaction-

  
 <EMI ID=548.1> 

  
sidu solide. Le solide obtenu est dissous dans 12 ml d'eaudioxanne (1:3), la solution rendue faiblement acide par addition d'un très faible quantité d'acide acétique ot soumise à une hydrogénolyse à pression atmosphérique pendant 1,5 heure sur noir de palladium. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 75 (c) ce qui

  
 <EMI ID=549.1>   <EMI ID=550.1> 

  
On peut observer que les propriétés physicochimiques et les activités antibactériennes de ce produit coïncident avec celles d'un échantillon authentique (Journal of Antibiotics, vol 26, p. 412 (1973).

Exemple 77

  
Synthèse de la 1-N (DL-3-amino-2-hydroxypropionyl)-dibékacine ,c'est à. dire de la 1-N-DL-isoséryldibékacine

  
 <EMI ID=551.1> 

  
de l'exemple 59 dans 5 ml d'eau-tétrahydrofuranne (1:3) est mélangée à 16 mg de carbonate de sodium anhydre, puis on y ajoute 51 mg de N-hydroxy-succinimide ester de l'a-

  
 <EMI ID=552.1> 

  
(ou DL-3-benzyloxycarbonylisosérine). On maintient le mélange à température ambiante pendant 10 heures. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple

  
 <EMI ID=553.1> 

  
eau). 

  
Les propriétés physicochimiques et les activités antibactériennes de ce produit se sont révélées identiquesà celles d'un échantillon authentique.

Exemple 78

  
 <EMI ID=554.1>  xycarbonyldibékacine.

  
On met en suspension 500 mg (11,1 m mole) de dibéka-

  
 <EMI ID=555.1> 

  
agite la suspension pour former une solution à laquelle

  
 <EMI ID=556.1> 

  
de zinc dihydrate. On ajoute goutte à goutte à la solution résultante, en environ 30 minutes, une solution de 1,17 g
(3,86 m moles) d'ester p-méthoxy-carbobenzoxy-p-nitrophényl dissous dans 20 ml de diméthylsulfoxyde et on maintient le mélange toute une nuit à température ambiante. La aolu-tion obtenue est ensuite traitée comme décrit dans l'exem-

  
 <EMI ID=557.1> 

  
 <EMI ID=558.1> 

  
b) Préparation du trifluoracétate de 3,2',6'-triN-p-méthoxybenzyloxycarbonyl-3"-N-trifluoracétyldibékacine.

  
 <EMI ID=559.1> 

  
mamide 1:2).

  
c) Préparation de la l-N(L-4-amino-2-hydroxybutyryl) dibékacine

  
 <EMI ID=560.1> 

  
 <EMI ID=561.1> 

  
 <EMI ID=562.1> 

  
amino-2-hydroxybutyrique, et le mélange est maintenu pendant 8 heures à température ambiante. La solution réactionnelle est concentrée à faible volume et mélangée à l'eau, conduisant au dépôt d'un précipité solide.

  
On ajoute au solide une solution de HC1N dans le méthanol aqueux (1:3, 6ml) et on chauffe le mélange à 60*C pendant 4 heures pour éliminer le groupe p-méthoxybenzyloxy carhonyl. On concentre la solution à faible volume, puis

  
on y ajoute de l'ammoniaque 5 N jusqu'à ce que le pH de la solution soit de 10. On maintient la solution toute une nuit à température ambiante et on la concentre pour obtenir un résidu. Le résidu est dissous dans l'eau, la solution chargée dans une colonne de CM-Séphadex C-25 (forme

  
 <EMI ID=563.1> 

  
par gradients avec des concentrations d'ammoniaque allant  <EMI ID=564.1> 

  
 <EMI ID=565.1> 

  
bonate).

  

 <EMI ID=566.1> 
 

  
 <EMI ID=567.1> 

  
sélectivement acylé, d'un antibiotique aminoglycosidique, ledit antibiotique comportant une fraction désoxystreptamine ayant un groupe 3-aminoglycosyle ou 3-alkylaminoglycoayle lié à son groupe 6-hydroxy et le dérivé N-protégé, sélectivement acylé, ayant certains de ses groupes amino sélectivement protégés par un groupe acyle, caractérise

  
en ce qu'il consiste à
(a) faire réagir un réactif d'acylation ayant un groupe acyle à introduire comme groupe amino-protecteur avec un <EMI ID=568.1> 

  
qui a été formé par réaction de l'antibiotique aminoglycosidique avec un sel de zinc dans un solvant organique inerte, pour produire un complexe de cations de zinc avec

  
le dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique, dérivé dans lequel les groupes amino initialement non complexés sont acylés, et
(b) faire réagir le complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique avec un réactif qui élimine les cations de zinc du dit complexe, pour produire le dérivé N-protégé, sélec- <EMI ID=569.1> 

Claims (1)

1. <EMI ID=570.1>

   3.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'antibiotique aminoglycosidique est la kanamy-

   <EMI ID=571.1> <EMI ID=572.1>

   4.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé on ce que la formation du complexe antibiotique aminoglycosidiquo-cations do zinc est réalisée en faisant réagir de l'acétate ou du chlorure do zinc on une quantité com-

   <EMI ID=573.1>

   nol, le méthanol aqueux, l'éthanol et l'éthanol aqueux, avec ou sans addition d'acétate do sodium.

   5.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le groupe acyle du réactif d'acylation employé est un groupe alcanoyle, un groupe aroylc, un groupe alcoxycarbonyle, un groupe aralkyloxycarbonyle, un groupe aryloxycarbonylc, un groupe alkylsulfonyle, un groupe aralkylaulfonyle ou un groupe arylsulfonyle connu comme groupe amino-protecteur.

   6.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le réactif d'acylation est employé en une quantité molaire égale ou légèrement supérieure au nombre de groupes amino à acylor dans le complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc.

   7.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le complexe de cations de zinc avec le dérivé

   <EMI ID=574.1>

   est d'abord séparé du mélange de la réaction d'acylation avant d'être mis à réagir avec le réactif d'élimination des cations de zinc qu'il contient.

   8.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qui" le complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique est sépare du mélange de la réaction d'acylation par extraction avec un solvant organique, par évaporation du milieu solvant organique contenu dans le milieu réactionnel d'acylation ou par dilution du milieu réactionnel d' acylation avec un solvant organique diluant, avant d'être mis à réagir avec un réactif d'élimination des cations do zinc.

   9.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le complexe de cations do zinc avec le dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidiquo,

   <EMI ID=575.1>

   organique polaire, soit anhydre, soit aqueux, qui sort do réactif d'élimination des cations de zinc.

   10.- Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que le solvant organique polaire est, soit do ceux dans lesquels le sel de zinc ost soluble, mais le dérive

   <EMI ID=576.1>

   soit do ceux dans lesquels le sel de zinc est insoluble, mais le dérivé N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique est soluble.

   11.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le complexe de cations de zinc avec le dérivé N -acylé de l'antibiotique aminoglycosidique, une fois séparé, est mis de nouveau à dissoudre entièrement dans un solvant organique contenant une proportion d'eau, après quoi la nouvelle solution ainsi obtenue est soumise à un traitement chromatographique en utilisant une résine échangeuse do cations, une résine échangeuse d'anions, une résine échangeuse de chélates ou un polymère insoluble dans l'eau ot contenant des groupes fonctionnels capable de se combiner avec un métal, qui sert de réactif d'élimination des cations de zinc.

   12.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait passer le mélange réactionnel d'acylation directement à travers une colonne d'une résine échangeuse de cations, d'une résine échangeuse d'anions, d'une résine échangeuse de chélates ou d'un polymère insoluble dans <EMI ID=577.1>

   métaux pour réaliser l'adsorption du complexe des cationn

   <EMI ID=578.1>

   cosidiquo, puis on développe la. colonne avec un solvant organique aqueux contenant ou non une proportion d'un a-

   <EMI ID=579.1>

   après quoi on récupère les fractions qui contiennent le dérivé sélectivement N-acylé désiré do l'antibiotique aminoglycosidique sans contenir de cations de zinc.

   13.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que lorsque le dérivé N-acylé désiré de l'antibiotique aminoglycosidique est insoluble ou substantiellement insoluble dans l'eau, on incorpore immédiatement le mélange réactionnel d'acylation à de l'oau, do façon que le dit dérivé soit précipité en se séparant du sel do zinc qui reste dissous dans l'eau.

   14.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le mélange réactionnol d'acylation est traite avec de l'hydrogène sulfure, un sulfure de métal alcalin

   <EMI ID=580.1>

   cations de zinc sous la forme de sulfure de zinc, ou avec l'hydroxyde d'ammonium, qui précipite les cations de zinc sous la forme d'hydroxyde de zinc.

   15.- Procédé do préparation d'un dérivé N-acylé, sélectivement protégé, d'un antibiotique aminoglycosidique

   <EMI ID=581.1>

   groupe 1-amino do la fraction désoxystreptaminc n'est pas protégé, mais tous les autres groupes amino de la molécule d'aminoglycoside sont protégés par des groupes acyles identiques ou différents, caractérisé en ce qu'il consiste on uno seule opération qui est

   (a) de faire réagir un ester d'acide alcanoique de formule (VIII):

   <EMI ID=582.1> <EMI ID=583.1>

   alkyle di- ou trihalogéné contenant de 1 à 6 atomes do

   <EMI ID=584.1>

   atomes de carbone, un groupe aralkyloxy, spécialement le groupe bonzyloxy ou un groupe aryloxy, spécialement le groupe phényloxy, ou un N-formylimidazolo, comme agent acylant, dans un solvant organique inerte, avec un dérivé N-acylé, partiellement protégé, de l'antibiotique amino-

   <EMI ID=585.1>

   <EMI ID=586.1>

   tandis que tous les autres groupes amino sont protégés par un groupe acyle comme groupe ami no -protecteur. pour

   <EMI ID=587.1>

   didésoxykanamycine C, de la gentamycine A, de la gentamy-

   <EMI ID=588.1>

   somycine ou de la nétilmycino.

   17.- Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'ester d'acide alcanoique de formule (VIII)

   <EMI ID=589.1>

   thyle, le formiate de butyle, le formiate de benzyle, le <EMI ID=590.1>

   dichloracétate d'éthyle, lo trichloracétate de méthyle, le trichloracétate de phényle, le trifluoracétate de méthyle, le trifluoracétate d'éthyle ou le trifluoracétate de phényle.

   18.- Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que le N-formylimidazole est employé comme agent acylant.

   19.- Procédé selon la revendication 15, caractéri-

   <EMI ID=591.1>

   pérature comprise entre -30*C et +120'C pendant une durée de 30 minutes à 24 heures, voire 48 heures, dans un sol-

   <EMI ID=592.1>

   nitrométhane, le sulfolanne, le diméthylacétamide, le chloroforme, le dichlorométhane, le méthanol, l'éthanol,

   <EMI ID=593.1>

   éther sulfurique, soit anhydre, soit aqueux.

   20.- Procédé perfectionné de préparation d'un dé-

   <EMI ID=594.1>

   caractérise en ce qu'il consiste à;

   (a) faire réagir des cations de zinc avec l'antibiotique <EMI ID=595.1> (b) faire réagir un réactif acylant ayant un groupe acyle à introduire comme groupe amino-protecteur avec le com- <EMI ID=596.1>

   pour produire un complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique. dérivé dans lequel les groupes amino initialement

   <EMI ID=597.1> (c) faire réagir le complexe dérivé sélectivement N-acylc <EMI ID=598.1>

   en (b) avec un réactif qui élimine les cations de zinc du dit complexe pour obtenir un dérivé N-acylé, partiellement et sélectivement protégé de l'antibiotique aminoglycosidique, qui eat exempt de cations de zinc et dans lequel le

   <EMI ID=599.1>

   sont pas protégés, tous les autrea groupes amino de la molécule d'aminoglycoaide étant protégés par le groupe acyle,

   (d) faire réagir le dérivé N-acylé partiellement et sélectivement protégé obtenu en (c) avec un ester d'acide alcanolaue de formule (VIII):

   <EMI ID=600.1>

   dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle di- ou trihalogéné contenant de 1 à 6 atomes de carbone, et R est un groupe alkyloxy contenant de 1 à 6 atomes de carbone, un groupe aralkyloxy contenant de 1 à 6 atomes de carbone ou un groupe aryloxy, ou le N-formylimidazole, comme agent acylant, dans un solvant orga-

   <EMI ID=601.1>

   <EMI ID=602.1>

   dans laquelle m est égal à 1 ou 2, ou un dérivé réactif équivalent de cet acide, dont le groupe amino est protégé ou non, pour acyler le groupe 1-amino du dérive obtenu en

   (d), et (f) éliminer les croupes amino-protecteurs résiduels du produit de 1-N-acylation obtenu en (e) par un procédé traditionnel de "déprotection". <EMI ID=603.1>

   dique, substantiellement tel que décrit précédemment.