Appareil de fractionnement du sang.
La présente invention concerne un appareil pour fractionner le sang en une phase sérum et en un caillot par centrifugation.
On connaît déjà un dispositif pour fractionner le sang, qui contient un agent de fractionnement étanche gélifié thixotrope, par exemple un mélange consistant en huile de silicone, en silice et en un agent gélifiant, au fond d'un tube collecteur de sang (brevet des Etats-Unis d'Amérique
<EMI ID=1.1> le tube de fractionnement du sang, et après repos pendant
<EMI ID=2.1>
trifugation. La force centrifuge provoque l'écoulement de l'agent de fractionnement étanche qui, du fait que sa densité est intermédiaire entre celle du sérum et celle de la fraction formant le caillot, remonte graduellement à partir du fond du tube et occupe finalement du position intermédiaire entre le sérum et le caillot, permettant ainsi de séparer le sérum et le caillot. Ce procédé exige toutefois <EMI ID=3.1> sang. Cette importante force centrifuge provoque des lésions des globules qui sont hémolyses, de sorte qu'il est parfois douteux que des résultats biochimiques corrects puissent être obtenus. la difficulté est particulièrement importante lorsque la matière gélifiée est faite d'une substance dans laquelle le durcissement du gel progresse avec le temps, :par exemple par formation de liaisons hydrogène,
et dont les propriétés d'écoulement sont susceptibles de se détériorer.
Pour éviter cette difficulté, on a mis au point un tube de fractionnement du sang dans lequel l'agent de fractionnement étanche décrit ci-dessus présente une surface oblique, de sorte qu'il peut s'écouler aisément lors du fractionnement centrifuge (brevet des Etats-Unis d'Amérique
<EMI ID=4.1>
Avec un tel tube de fractionnement du sang de type connu, il est cependant nécessaire,pour que l'aptitude à l'écoulement soit satisfaisante, que la face supérieure de l'agent de fractionnement étanche soit oblique avec un très . grand angle. L'inconvénient d'une surface supérieure très oblique est sa fragmentation pendant le transport et la mani-pulation du produit. Un autre inconvénient est que la chaîne de fabrication pour former une telle surface oblique est compliquée et onéreuse parse qu'il faut passer par une opération, par exemple la centrifugation, qui ne peut être exécutée de manière continue et doit: être faite par lots successifs.
L'agent de fractionnement étanche consistant en une huile de silicone, en silice et en un agent gélifiant suscite également des difficultés. Cet agent est produit
<EMI ID=5.1>
compatibles les uns avec les autres et dont l'agent gélifiant favorise la formation de liaisons hydrogène entre les particules de silice (agent d'ajustement de la densité) pour la formation du gel thixotrope. Une- source de difficultés est donc que les liaisons bydrogène gagnent en force avec le temps et conduisent finalement à un état de cohésion qui provoque non seulement une ségrégation des phases, mais aussi une médiocre aptitude à l'écoulement pendant la centrifugation. On a déjà proposé d'incorporer un agent tensio-actif pour empêcher la ségrégation des phases, mais un agent tensio-actif ionique, incorporé en proportions importantes, suscite une hémolyse qui est un autre inconvénient .
De plus, d'autres difficultés associées aux compositions déjà connues sont que, lorsque la composition précitée est stérilisée par exposition aux rayons Y, alors qu'elle est contenue en quantité convenable dans un tube pour la collecte du sang, elle subit une modification marquée des propriétés, par exemple par réticulation, avec dégradation
de sa capacité d'étanchéité, que des substances de bas poids moléculaire de la matière gélifiée s'évaporent et rendent la surface intérieure du tube hydrofuge, ce qui retarde la coagu-lation et fait adhérer le caillot à la surface intérieure,
et que les matières premières sont relativement onéreuses.
Outre les agents de fractionnement étanches ci-dessus, on connaît un agent de fractionnement étanche consistant en une matière . gélifiée à base de polyester.
Cependant, tout comme les agents gélifiés connus décrits ci-dessus, cet agent de fractionnement étanche provoque également des difficultés, par exemple un retard de la coagulation du sang et l'adhérence du caillot en raison du caractère hydrofuge conféré à la surface du verre par
l'agent, de même qu'une odeur désagréable.
La présente invention a dès lors pour but de procurer un appareil nouveau et perfectionné pour fractionner
le sang qui soit exempt des inconvénients énumérés ci-dessus.
L'invention a premièrement pour objet un appareil
de fractionnement du sang dans lequel le fractionnement du sang peut être effectue à l'aide d'un agent de fractionnement étanche gélifié thixotrope sous l'effet d'une
force centrifuge plus_faible que celle entretenue habituellement, ce qui supprime l'inconvénient de l'hémolyse.
L'invention a pour objet un appareil de fractionnement du sang qui comprend un tube fermé à une extrémité
et un agent de fractionnement étanche gélifié thixotrope
d'une densité intermédiaire entre celle du sérum et celle
du caillot et qui comprend l'agent de fractionnement étanche contenu au fond du tube avec une cavité ménagée dans sa face supérieure.
L'invention a en outre pour objet un appareil de fractionnement du sang tel que défini ci-dessus dans lequel cette cavité a des dimensions telles que le diamètre de son embouchure à
<EMI ID=6.1>
<EMI ID=7.1> l'agent de fractionnement étanche (à sa partie la plus épaisse au milieu).
L'invention a deuxièmement pour objet un appareil de fractionnement du sang qui contient un agent de fractionnement étanche qui est stable au vieillissement en raison de l'utilisation d'une huile à haute capacité de dispersion,
qui peut être stérilisé par exposition aux rayons Y, qui n'exerce. pratiquement aucun effet hydrofuge, qui est exempt d'odeurs désagréables, qui est fabriqué à bas prix, qui n'induit pas d'hémolyse et qui, lorsqu'il est logé au préalable dans le tube collecteur de sang, ne retarde pas la coagulation ni ne fait adhérer le caillot à la paroi intérieure.
L'invention a troisièmement pour objet un appareil de fractionnement du sang qui comporte, dans un espace
à l'intérieur du tube de fractionnement au sang, au-dessus
de l'agent de fractionnement étanche contenu au fond de ce tube, un agent favorisant la coagulation porté par un support pour favoriser la .coagulation.
Dans les dessins, Fig. 1 est une vue en coupe donnant un exemple de l'appareil de fractionnement du sang con-
<EMI ID=8.1>
<EMI ID=9.1>
étanche gélifié lorsque l'appareil de fractionnement du sang
<EMI ID=10.1>
est une vue en coupe illustrant la fabrication de l'appareil
<EMI ID=11.1>
sont des vues en coupe de l'appareil pour d'autres exemples
<EMI ID=12.1>
ment en coupe montrant un exemple de l'appareil de fractionnement du sang conforme à l'invention muni' d'un moyen favo'risant la coagulation, et Fig. 9 est une vue en coupe de l'ap-
<EMI ID=13.1> du fractionnement par centrifugation.
<EMI ID=14.1>
tionnement du sang conforme à l'invention dans lequel un tube
de fractionnement 1 (tube de 10 ml) contient, au fond, une matière gélifiée thixotrope 2 (par exemple un mélange huile de silicone/silice, copolymère d'a-oléfine et de dimaléate/charge,
<EMI ID=15.1>
en une épaisseur d'environ 15 mm. Une cavité cylindrique 3
<EMI ID=16.1>
ménagée au milieu de la face supérieure. Comme la cavité cylindrique 3 est ménagée dans la matière thixotrope, il n'y, a aucun risque que la cavité disparaisse par affaissement
dans les conditions normales du transport et des manipulations.
Le tube de fractionnement est semblable par .sa forme
<EMI ID=17.1>
cesse décrit. Le tube comporte une extrémité ouverte soigneusement obturée et est mis sous vide. - La pointe d'une aiguille de prise de sang (non illustrée) est enfoncée à travers le bouchon pour la collecte du sang. Après la collecte du sang, le tube est mis à reposer pour qu'il se forme un caillot,
<EMI ID=18.1>
sorte que la matière gélifiée 2 est fluidifiée par la force centrifuge. Comme le montre la Fig. 2, la cavité 3 se dilate et la matière se déforme au point qu'une fraction s'en élève le long de la paroi intérieure du tube. Ensuite, comme le
<EMI ID=19.1>
la couche de sérum 4- et le caillot 5 et constitue finalement une couche d'agent de fractionnement étanche 2 d'épaisseur
<EMI ID=20.1>
<EMI ID=21.1>
Même dans l'appareil connu de fractionnement du sang qui contient un agent de fractionnement étanche gélifié exempt de cavité 3 contenu dans le tube de fractionnement, la face supérieure plane de l'agent de fractionnement étanche gélifié s'incurve, la déformation se marque et s'accentue et l'écoulement de l'agent de fractionnement étanche progresse et ressemble à ce qui est illustré aux Fig. 1 - 3. Une couche de fractionnement se forme finalement comme indiqué à la Fig. 4.
Toutefois, dans les procédés classiques, une contrainte importante est nécessaire pour la déformation au début de l'opération. Suivant l'invention, par contre, le fractionnement centrifuge est exécuté alors que l'agent de fractionnement étanche gélifié est déformé (c'est-à-dire comporte une cavité) au préalable, de sorte que cet agent est aisément fluidifié par une contrainte plus petite que celle nécessaire antérieurement.
Un moyen quelconque peut être choisi pour former la cavité dans la face supérieure de l'agent de fractionnement étanche contenu au fond du tube de fractionnement, en fonction des propriétés physiques de cet agent et de diverses autres conditions. Comme le montre la Fig. 5, par exemple, la cavité peut être formée aisément par projection d'un fluide tel que l'air ou un liquide sur la surface de l'agent de fractionnement étanche gélifié.
La cavité formée dans la surface de l'agent de fractionnement étanche gélifié peut occuper toute position et avoir une forme quelconque. Par exemple, en plus du cas
<EMI ID=22.1>
lement au milieu du tube, mais ausei en une position plus voisine de la paroi, comme illustré à la Fig. 6. En variante, comme le montre la Fig. 7, la matière gélifiée peut constituer un remplissage asymétrique présentant une face supérieure oblique dans laquelle la cavité 3 est ménagée. Outre qu'elle peut être cylindrique, comme décrit ci-dessus, la cavité peut prendre différentes autres formes, par exemple conique ou prismatique^ Il est essentiel que la contrainte, lors du fractionnement par centrifugation, se concentre dans la cavité pour déformer la matière gélifiée et exercer 'un cisaillement.
La cavité peut également avoir différentes dimen-
<EMI ID=23.1>
dification de la matière gélifiée en agissant comme décrit ci-dessus. En règle générale toutefois, le diamètre de
<EMI ID=24.1>
et plus avantageusement 0,3 à 0,5 fois le diamètre intérieur du tube et la profondeur de la cavité est de préférence de 0,13 à 0,65 fois et plus avantageusement de 0,2 à 0,55 fois l'épaisseur de la matière gélifiée. Lorsque le diamètre de l'embouchure de la cavité est inférieur à 0,15 fois le diamètre intérieur du tube et si la profondeur est inférieure
à 0,13 fois l'épaisseur de la matière gélifiée, 'celle-ci présente une surface presque plane- Si la: profondeur est supérieure à 0,65 fois l'épaisseur de matière gélifiée, la . cavité est difficile à façonner et à maintenir à sa forme.
De même, lorsque le diamètre de l'embouchure de la cavité
est supérieur à 0,7 fois le diamètre intérieur du tube et si la profondeur est inférieure à 0,13 fois l'épaisseur de la matière gélifiée, celle-ci présente une surface presque plane. Si la profondeur est supérieure à 0,65 fois l'épaisseur, il. n'existe plus de site sur lequel la contrainte peut s'exercer.
Un agent de fractionnement étanche préféré utilisé suivant l'invention est un agent consistant, comme constituant principal, en un copolymère d'a-oléfine et de dimaléate,
<EMI ID=25.1>
agent d'ajustement de la viscosité et de la densité a été ajouté.
<EMI ID=26.1>
dimaléate entrant dans la constitution de l'agent de fractionnement étanche de l'invention sont les copolymères d'une viscosité
<EMI ID=27.1>
<EMI ID=28.1>
<EMI ID=29.1>
atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 20 atomes de car-
<EMI ID=30.1>
ou ramifiée de 1 à 15 atomes de carbone ou des radicaux alkyle ramifiés de 16 à 20 atomes de carbone, étant entendu que lorsque
<EMI ID=31.1>
un radical alkyle en chaîne droite ou ramifiée de 12 à 15 atomes de carbone ou un radical alkyle ramifié de 16 à 20 atomes de car-
<EMI ID=32.1>
atomes de carbone, les nombres totaux d'atomes de carbone dans
<EMI ID=33.1>
respectivement, et n représente un nombre entier tombant dans un intervalle tel que la viscosité du copolymère soit de 10 à 120 Pa
<EMI ID=34.1>
Dans la formule ci-dessus, 1 représente de préférence
<EMI ID=35.1>
sentent de préférence chacun un radical méthyle, éthyle, butyle ou 2-éthylhexyle et n représente de préférence un nombre entier tombant dans un intervalle tel que la viscosité du copolymère
<EMI ID=36.1>
par exemple de 8 à 12.
Les copolymères d'a-oléfine et de dimaléate de la for-
<EMI ID=37.1>
tions ci-dessus, ne confèrent pas la viscosité désirée et ne <EMI ID=38.1>
fractionnement étanche de l'invention. Le nombre préféré des atomes de carbone de l'a-oléfine est de 4 à 22 .
Les copolymères d'a-oléfine et de dimaléate d'une a-oléfine de 30 à 60 atomes de carbone avec un dimaléate dont
<EMI ID=39.1>
mères sont cireux et ne conviennent donc pas comme constituant principal de l'agent de fractionnement étanche de l'invention.
Ils conviennent cependant comme additifs empêchant la baisse de thixotropie provoquée par la ségrégation des phases dans l'agent de fractionnement étanche.
Le copolymère d'a-oléfine et de dimaléate ci-dessus est jaune clair, transparent, inodore, inerte à l'égard du sang, c'est-à-dire sans influence sur celui-ci, et stable à long terme et ne dégage guère de substances hydrofuges, de sorte que lorsqu'il est contenu dans un tube collecteur de sang, la surface intérieure de celui-ci peut être maintenue propre. Stérilisé par irradiation, par exemple par exposition aux rayons Y, il ne subit sensiblement aucune altération physique ou chimique.
La densité du copolymère d'a-oléfine et de dimaléate utilisé dans l'agent de fractionnement étanche de l'invention est de 1,000 à 1,038 et de préférence de 1,027 à 1,035.
Les agents d'ajustement de la viscosité et de la densité qui sont utilisés de préférence suivant l'invention sont des dérivés d'amines aliphatiques et de smectite. Des exemples de tels dérivés de la smectite sont ceux formés avec une amine /aliphatique primaire, secondaire, tertiaire ou quaternaire. Ces dérivés d'amines sont des substances connues. Une préférence particulière est attribuée aux dérivés d'amines aliphatiques quaternaires de la smectite. Plus spécifiquement, les dérivés d'amines
<EMI ID=40.1> Bentone 38, la Bentone 27 et la Bentone 128 (sel d'ammonium quaternaire de smectite produit par la Société NL Industry Co) peuvent être utilises.
D'autres exemples d'agents d'ajustement de la viscosité et de la densité utilisés aux fins de l'invention sont les poudres inorganiques fines. Par exemple, la fumée de silice et la silice précipitée conviennent. L'agent d'ajustement de la viscosité et
de la densité est utilisé en quantité assurant une gélification
<EMI ID=41.1>
qui dépendent de la densité et de la viscosité du constituant principal.
Un agent gélifiant est utilisé conformément à l'invention pour gélifier l'agent de fractionnement étanche et, de plus, maintenir le gel dans un état stable. En fonction des propriétés physiques du constituant principal et de l'agent d'ajustement de . le viscosité et de la densité conformes à l'invention, l'agent gélifiant est utilisé pour provoquer la gélification. Par exemple, <EMI ID=42.1>
La quantité d'agent gélifiant qui est utilisée dépend
de la combinaison de constituant principal et d'agent d'ajuste- ment de la viscosité et de la densité et doit être telle que la gélification ait lieu sans que de l'agent gélifiant soit exsudé
par les autres constituants.
Conformément à l'invention, en plus du copolymère d'a-oléfine et de dimaléate, de l'agent d'ajustement de la viscosité et de la densité et de l'agent gélifiant, un agent tensioactif non ionique, comme du monolaurate d'huile de ricin hydrogénée polyéthoxylée ou du triisostéarate d'huile de ricin hydrogénée polyéthoxylée, peut être ajouté suivant les besoins.
L'agent tensio-actif est ajouté en petites quanti-
<EMI ID=43.1>
ségrégation des phases, qui est susceptible de se manifester lors d'un long repos. Son caractère non ionique élimine les risques d'hémolyse et d'autres réactions indésirables. Un tel agent est spécialement utile lorsque la siliee est utilisée seule comme agent d'ajustement de la viscosité et de
la densité*
<EMI ID=44.1>
de la composition de l'agent de fractionnement étanche utilisé suivant l'invention. Dans les tableaux, le copolymère (A) d'a-oléfine et de dimaléate est un copolymère de n-a-oléfine et de maléate de dimétbyle comprenant une combi-
<EMI ID=45.1>
25[deg.]C). Le copolymère (B) est un copolymère de n-a-oléfine
<EMI ID=46.1>
fines de 6 et 8 atomes de carbone et ayant un poids moléculaire
<EMI ID=47.1>
diméthyle comprenant une combinaison d'a-oléfines de 16 et
18 atomes de carbone et ayant un poids moléculaire moyen de
<EMI ID=48.1>
viscosité d'environ 10 Pa.s (à 28[deg.]C).
Le copolymère (E) du tableau II est un copolymère
<EMI ID=49.1> Industries Co. Ltd., et ayant un poids moléculaire moyen de 2.000 à 3.000, une densité de 1,00 à 1,03 (à 28[deg.]C) et
<EMI ID=50.1>
<EMI ID=51.1>
de n-a-oléfine et de maléate de dibutyle et un copolymère
<EMI ID=52.1>
Exemples de composition de 11-agent (parties en poids)
<EMI ID=53.1>
<EMI ID=54.1>
<EMI ID=55.1>
** = Silice hydrophile en poudre fine , d'une granulométrie
<EMI ID=56.1>
viron 60 g/litre, de la Société Nippon Aerosil Co. Ltd. *** = Sel d'ammonium quaternaire de smectite, de la Société
<EMI ID=57.1>
<EMI ID=58.1>
<EMI ID=59.1>
<EMI ID=60.1>
<EMI ID=61.1>
<EMI ID=62.1>
de la Société Toray Silicone Co. Ltd., d'une densité de
<EMI ID=63.1>
On trouvera ci-après la description d'un procédé pour préparer l'agent de fractionnement étanche utilisé suivant l'invention.
La préparation des copolymères d'a-oléfine et de dimaléate est décrite en premier lieu. On polymérise de l'éthylène jusqu'à un faible degré de polymérisation pour obtenir des n-a-oléfines qu'on fractionne en celles contenant, par exem-
<EMI ID=64.1>
carbone, respectivement. Suivant la viscosité, la nature de l'agent d'ajustement de la densité et la densité, on peut les utiliser isolément ou en combinaison. Pour l'isolement
<EMI ID=65.1>
bone sont préférées en raison de leur viscosité et de leur densité. Les n-a-oléfines à nombre impair d'atomes de car-
<EMI ID=66.1>
ci-dessus. Ensuite, on exécute une copolymérisation avec un dimaléate pour obtenir le copolymère désiré.
Ensuite, on:ajoute au copolymère d'a-oléfine et de dimaléate de départ ayant une viscosité de 10 à 1,20 Fa. s et
<EMI ID=67.1>
de la viscosité et de la densité, comme un dérivé d'amine aliphatique de smectite ou de la silice en poudre fine et, éventuellement si nécessaire, un agent gélifiant, un agent
<EMI ID=68.1>
dimaléate, par exemple un tel copolymère dont la n-a-oléfine compte 30 à 60 atomes de carbone. On malaxe ensuite le mélange dans une calandre, un broyeur, un; mélangeur planétaire ou un appareil analogue pour exercer une force de cisaillement convenable en vue de la gélification.
L'agent de fractionnement étanche ainsi obtenu a
<EMI ID=69.1>
densité de 1,035 à 1,055. L'une quelconque des compositions mentionnées dans les tableaux ci-dessus est de caractère
<EMI ID=70.1>
la force centrifuge et,.dans les conditions normales, forme un gel homogène et stable.
Comme il ressort nettement des tableaux I et II, l'agent de fractionnement étanche ne rend jamais la surface intérieure du tube bydrofuge lorsqu'il est déjà contenu dans le tube, de sorte qu'il ne provoque pas d'adhérence du caillot ni de retard de la coagulation du sang. Il en est ainsi en raison de l'utilisation d'un copolymère d'a-oléfine et de dimaléate, de sorte qu'aucune substance volatile de bas poids moléculaire ne se ferme. Par conséquent, lorsque l'agent de fractionnement étanche conforme à l'invention est utilisé dans un tube collecteur de sang, il permet de former un cloisonnement étanche entre le sérum et le caillot lors de la séparation centrifuge sous l'effet d'une force centrifuge courante (700 à 1.000 G pendant environ 10 minutes).
Le sérum peut donc être isolé aisément par décantation sans contamination par de la fibrine et d'autres substances. Après le fractionnement par centrifugation, l'agent de fractionnement étanche reste à l'état de gel stable entre le sérum et le caillot et ceux-ci, après avoir été séparés, ne se remélangent pas pendant le transport, par exemple de l'hôpital au laboratoire clinique. '
L'invention a par ailleurs pour ob�et un appareil de fractionnement du sang qui contient un support portant un agent favorisant la coagulation dans un espace à l'intérieur du tube. de fractionnement du sang,au-dessus de l'agent de fractionnement * -et anche logé au fond du tube, de manière à favoriser la coagulation.
Le support utilisé dans le tube de fractionnement ci-dessus peut être un support hydrophile ayant une densité supérieure à celle des globules du sang et portant,
<EMI ID=71.1>
tité appropriée d'un agent pulvérulent favorisant la coagulation.
Le support peut être formé d'étoffe, de papierfiltre, d'étoffe non tissée, d'une boule de coton, etc.
Il est essentiel qu'il ait une densité supérieure à celle des globules du sang, qu'il n'induise pas d'hémolyse, qu'il ne gêne pas les épreuves biochimiques, qu'il soit formé d'une substance fixant l'eau, par exemple une substance hydrophile, ou qu'il ait une structure retenant l'eau, par exemple une structure poreuse à pores continus, qu'il soit suffisamment rigide ou élastique pour être retenu au contact de la paroi du tube, mais soit suffisamment souple pour migrer vers le caillot sous la contrainte exercée par le fractionnement centrifuge et qu'il ait une dimension suffisamment petite pour être immergé dans la couche contenant les globules du sang.
L'un quelconque des agents favorisant la coagulation, qui n'induisent pas d'hémolyse sensible et qui se dispersent dans le sang,convient. Par exemple, la silice
<EMI ID=72.1>
<EMI ID=73.1>
<EMI ID=74.1>
Pensylvania Glass Sand Co. et vendue sous la marque déposée MIN-U-SIL, la terre de diatomées, les verres en poudre fine, le kaolin, la bentonite et des substances analogues conviennent.
L'agent favorisant la coagulation retenu dans le support est utilisé en quantité de 0,3 à 10,0 mg pour 10 ml de sang collecté. Un excès de cet agent induit une hémolyse, tandis qu'une quantité plus faible de l'agent n'est pas suffisante pour bien favoriser la coagulation.
La quantité convenable d'agent favorisant la coagulation qui est ajoutée au support peut être ajustée aisément au moyen de la quantité d'une solution de liant, décrite ci-après, à laquelle une quantité appropriée de l'agent favorisant la coagulation est ajoutée.
Il est essentiel que le liant soit soluble dans le
<EMI ID=75.1>
dès la collecte du sang,de manière à disperser rapidement l'agent favorisant la coagulation dans le sang afin de favoriser ainsi la formation du caillot. Il est désirable aussi que le liant soit convenablement poisseux, soit non volatil, soit sérologiquement inerte et soit susceptible d'être stérilisé, par exemple par irradiation aux rayons Y sans altération d'activité. Des exemples de tels liants sont les variétés bydrosolubles de silicone, de polyétbylènegiycol, de polyvinylpyrrolidone, de dextranne et de dérivés cellulo-
<EMI ID=76.1>
et la polyvinyipyrrolidone sont de loin préférables parce qu'ils sont bien solubles et hygroscopiques. Le dextranne est quelque peu inférieur en raison de sa moindre solubilité. Le polyéthylèneglycol n'est pas à préférer s'il est exposé
à l'air libre pendant une longue durée après la préparation parce qu'il est bygroscopique.
La préparation d'un milieu tel qu'une étoffe non tissée contenant une quantité déterminée au préalable de l'agent favorisant la coagulation peut être exécutée aisément par immersion. Des exemples de supports sur lesquels un agent favorisant la coagulation est appliqué par immersion et des exemples de la composition du bain sont donnés au tableau III.
TABLEAU III
<EMI ID=77.1>
.Une forme de réalisation de l'invention dans laquelle l'appareil de fractionnement du sang contient un support portant <EMI ID=78.1>
du tube de fractionnement du sang, au-dessus de l'agent de fractionnement étanche contenu au fond du tube, pour favoriser cette coagulation, est illustrée ci-après.
Comme le montre la Fig. 8, on introduit environ 1,7 ml de chacun des agents de fractionnement étanches liquides 2 des compositions 1 à 12 au fond de tubes collecteurs de sang 1 d'une capacité de 10 ml. On ménage une cavité 3 dans la face supérieure de l'agent de fractionnement étanche et on agence un morceau d'étoffe non tissée en polyester 7 portant 0,3 à 10,0 mg de silice (par exemple du sable de Cape Flatteiy vendu sous la marque déposée WG-200 de la
<EMI ID=79.1>
entre le fond et l'extrémité ouverte du tube. On obture ensuite le tube avec un bouchon en caoutchouc butyle 8, puis on fait le vide dans le tube. Ultérieurement, on introduit du sang dans le tube collecteur de sang en dépression par ponction à la veine, après quoi on laisse le tube reposer pendant 7 à 8 minutes. L'introduction du sang fait se disperser dans le sang la terre de diatomées qui favorise, en coopération avec l'étoffe non tissée 7, la coagulation du sang dans une mesure suffisante en peu de temps.
On soumet chaque tube de fractionnement alors au fractionnement par centrifugation en entretenant une force centrifuge de 700 à
1.000 G pendant 10 minutes qui amène l'agent de fractionnement étanche en position statique à l'interface entre le sérum et le caillot. par conséquent, comme le montre la Fig. 9, l'agent de fractionnement étanche, qui est thixotrope et a une densité intermédiaire entre celle du sérum 4 et du caillot ?, se retrouve à l'interface entre le sérum 4 et le caillot 5 pour y constituer une cloison gélifiée. Du fait que la terre de diatomées et l'étoffé non tissée 7 ont une densité supérieure à celle du sérum, elles ne restent pas <EMI ID=80.1>
de fibrine. Il est facile de prélever le sérum du tube collecteur de sang par décantation ou par aspiration avec une pipette fine.
Comme décrit en détail ci-dessus, l'appareil de fractionnement du sang conforme à l'invention contient, au fond,une matière gélifiée thixotrope qui permet de fractionner le sang et qui comprend, comme constituant principal,
<EMI ID=81.1>
une cavité a été ménagée. Pendant le fractionnement par centrifugation, la contrainte se concentre à l'endroit de la cavité et la force de cisaillement induit de manière aisée et rapide la fluidification de la matière gélifiée. Celle-ci est alors transférée vers l'interface par l'entretien d'une force centrifuge très faible. Par conséquent, lors d'un fractionnement du sang, les globules sont beaucoup moins susceptibles d'être endommagés et le fractionnement centrifuge est plus rapide. De plus, l'appareil de fractionnement du sang conforme à l'invention offre l'avantage de mettre en jeu la transformation du seul agent de fractionnement étanche gélifié qui est facile à préparer, outre celui-de ne
pas exiger d'appareillage spécial augmentant les frais de fabrication pour obtenir cet agent de fractionnement étanche
<EMI ID=82.1>
cavité vaut 0,15 à 0,7 fois le diamètre intérieur du tube et que la profondeur de la cavité vaut 0,13 à 0,65 fois l'épaisseur de la matière gélifiée, celle-ci peut être fluidifiée de manière satisfaisante par une force centrifuge normale (1.000 G), même si une petite quantité de sang est collectée ou si le tube collecteur de sang est de petit diamètre. Il n'existe pas de risque d'hémolyse ni d'induction d'autres réactions défavorables. En outre, lorsque le diamètre de l'orifice vaut 0,3 à 0,5 fois le diamètre intérieur
<EMI ID=83.1> l'épaisseur de la matière gélifiée, la fluidité de la substance gélifiée peut être atteinte au moyen d'une force centrifuge de l'ordre de grandeur ci-dessus, même si le sang provient d'un patient anémique contenant un plus petit nombre de globules rouges et ayant une densité plus faible.
Par comparaison avec la contrainte exercée sur la matière gélifiée lorsque la face supérieure de celle-ci est simplement oblique, la matière gélifiée dans laquelle une cavité est ménagée subit une contrainte plus importante qui assure sa fluidification.
Lorsqu'une cavité est ménagée en dehors du milieu du tube, l'écoulement de la matière gélifiée peut être orienté vers l'autre côté du tube que celui atteint lorsque la cavité est centrale, ce qui permet de réduire jusqu'au
<EMI ID=84.1>
et à la paroi du tube. De même, l'hémolyse qui est due,
<EMI ID=85.1>
globules rouges, peut être atténuée et les globules rouges restant flotter dans la partie supérieure de la matière gélifiée après le fractionnement par centrifugation peuvent être moins nombreux.
<EMI ID=86.1>
qui est le constituant principal décrit ci-dessus, est à peu près le tiers du prix d'une silicone fluide. De plus, comme le copolymère est stable, il ne risque pas de dégager des substances bydrofuges qui formeraient sur la paroi du tube une couche hydrofuge ralentissant la coagulation du sang. Comme le tube de fractionnement est en verre, sa surface intérieure favorise la coagulation par contact avec le sang et doit être maintenue propre. Par conséquent, le temps nécessaire pour la collecte du sérum est plus court qu'en présence des agents de fractionnement étanches déjà connus qui ont l'inconvénient de former, dans le tube de fractionnement, une couche hydrofuge. Cet effet est plus remarquable lorsque de la terre de diatomées sur une étoffe non tissée ou un autre moyen semblable favorisant la coagulation du genre décrit ci-dessus est utilisé conjointement.
La réduction du temps de coagulation du sang peut atteindre environ 30 minutes lors d'une telle utilisation conjointe.
En outre, la matière gélifiée, qui est avantageusement stérilisée si elle a été introduite au préalable dans le tube de fractionnement, ne subit pas de modifications chimiques ou physiques ayant un effet défavorable sur les épreuves cliniques lorsqu'elle est stérilisée par exposition aux rayons Y (par exemple en une dose de 2,5 mégarads).
<EMI ID=87.1>
comptant 4 à 22 atomes de carbone dans l'a-oléfine qui comprennent un ester maléique qui est un ester méthylique, éthyliques butyli-
<EMI ID=88.1>
sont stables, spécialement au vieillissement, et conviennent comme constituant principal pour préparer, conjointement avec des ' agents auxiliaires tels qu'un agent d'ajustement de la viscosité et de la densité, de tels agents de fractionnement étanches qui sont facilement gélifiés, facilement amenés à
une densité intermédiaire entre celle du sérum et celle du caillot et qui n'accusent pratiquement pas de ségrégation
des phases ni de réduction de la fluidité.
Comme le montrent les exemples ci-dessus de la composition (exemple 1), un dérivé d'amine aliphatique en
<EMI ID=89.1>
de la silice hydrophobe en poudre fine, est utilisé comme agent d'ajustement de la viscosité et de la densité pour former un agent de fractionnement étanche thixotrope stable ne manifestant guère de ségrégation des phases ni d'altéra--tion de fluidité. Parmi les agents de fractionnement étan-
<EMI ID=90.1>
de smectite se prêtent bien à une vérification de qualité parce qu'ils ne transmettent pas la lumière et permettent ainsi un examen aisé de leur état de dispersion au microscope ou au moyen d'un instrument analogue. Comme le montre le tableau I des exemples de composition, un dérivé d'amine
<EMI ID=91.1>
<EMI ID=92.1>
de fractionnement étanche thixotrope stable sans apport d'un agent gélifiant.
Les copolymères d'a-oléfine et de dimaléate (A),
(B), (C) et (E) mentionnés dans les exemples de composition des tableaux 1 et II sont des copolymères de n-a-oléfine <EMI ID=93.1>
constituant principal donne aisément des agents de fraction-
<EMI ID=94.1>
du sérum et celle du coagulum et une viscosité favorable.
Par conséquent, une quantité relativement faible de l'agent d'ajustement de la viscosité et de la densité suffit et, de
<EMI ID=95.1>
tion des phases et de baisse-de la fluidité sont minimes.
De plus, l'utilisation de la cire ci-dessus est spécialement efficace pour empêcher la baisse de thixotropie induite par la ségrégation des phases dans l'agent de fractionnement étanche.
EXEMPLE D'EPREUVE 1.-
On.dépose au fond d'un tube de fractionnement cylindrique d'une capacité de 10 ml, ayant un diamètre intérieur de 12 mm, environ 1,7 ml d'un agent de fractionnement étanche gélifié thixotrope (d'une densité de 1,045 et d'une viscosité
<EMI ID=96.1> et en ur, agent gélifiant inorganique. On insère dans l'em-
<EMI ID=97.1>
diamètre intérieur de 3 mm,au moyen duquel on projette de l'air sur la surface de l'agent de fractionnement étanche sous une pression d'environ 4 bars. On forme ainsi une cavité presque cylindrique (diamètre de l'embouchure environ 7 mm, profondeur environ 8 mm).
On verse ensuite dans le tube de fractionnement
8 ml d'une solution de sulfate de cuivre (d'une densité de
<EMI ID=98.1>
par minute (environ 200 G). Après 10 minutes, l'agent de fractionnement étanche est complètement rassemblé au-dessus de la solution de sulfate de cuivre en une couche d'épaisseur uniforme.
Four la comparaison, on exécute une opération exactement comme dans l'exemple d'épreuve 1 ci-dessus, sauf qu'on exécute le fractionnement centrifuge en ayant maintenu la surface supérieure de l'agent de fractionnement étanche plane et exempte de cavité. l'agent de fractionnement étanche gélifié se déplace à peine et se maintient au fond du tube. On constate aussi que la fluidification de l'agent de fractionnement étanche gélifié dans le tube de fractionnement, afin qu'il s'élève jusqu'à la surface du sulfate de cuivre, exige une force centrifuge d'au moins 500 G.
EXEMPLE D'EPREUVE 2.-
On utilise le même tube de fractionnement et le même agent de fractionnement étanche gélifié que dans l'exemple d'épreuve 1. Comme le montre la Fig. 7, on dépose l'agent de fractionnement étanche dans le tube de fractionnement de manière que la face supérieure fasse un angle d'environ 30[deg.] avec le plan horizontal. Ensuite, on ménage une cavité ayant à peu près la même forme et la même dimension que dans l'exemple d'épreuve 1 en utilisant un jet d'air,
<EMI ID=99.1>
de sulfate de cuivre que dans l'exemple d'épreuve 1 dans le tube qu'on soumet alors au fractionnement centrifuge à <EMI ID=100.1> l'agent de fractionnement étanche est complètement rassemblé sur la solution de sulfate de cuivre .
A titre de comparaison, ou exécute une opération dans les mêmes conditions que dans l'exemple d'épreuve 2,
<EMI ID=101.1>
fractionnement étanche dont la surface supérieure fait un angle d'environ 30[deg.] avec le plan horizontal, mais ne comprend pas de cavité. Après 9 minutes, le déplacement de l'agent de fractionnement étanche atteint à peu près les trois quarts de celui observé dans l'exemple d'épreuve 2.
EXEMPLE 1.-
On dépose au fond d'un tube de fractionnement
<EMI ID=102.1>
<EMI ID=103.1>
<EMI ID=104.1>
à 25[deg.]C) consistant en silicone, en silice et en un agent gélifiant de façon que l'épaisseur de gel soit de 15 mm.
On insère ensuite dans l'embouchure du tube de fractionnement un tube d'injection, d'un diamètre intérieur d'environ 3 mm, au moyen duquel on projette de l'air sous une pression d'environ 4 bars sur la face supérieure de l'agent de fractionnement étanche- On ménage ainsi une cavité presque cylindrique comme illustré à la Fig. 1 (diamètre de l'embouchure environ 7 mm, profondeur environ 8 mm).
Ensuite, on immerge un morceau d'étoffé non tissée de 80 g par m<2> (type 800, Société Fuji Chemicloth Co. Ltd.)
<EMI ID=105.1> <EMI ID=106.1>
<EMI ID=107.1>
rolidone), puis on sèche l'étoffe et on découpe à l'emporte-
<EMI ID=108.1>
rondelle en poeition intermédiaire entre l'agent de fractionnement étanche et l'embouchure du tube de manière que la rondelle soit inclinée par rapport au plan horizontal.
On scelle ensuite le tube à son embouchure au moyen d'un bouchon en caoutchouc et on fait le vide pour compléter
<EMI ID=109.1>
Au moyen de l'appareil, on collecte du sang qu'on fait coaguler. Au terme de la coagulation, on centrifuge le sang à 2.000 tours par minute (environ 760 G) et l'agent de fractionnement étanche se rassemble entièrement à l'interface entre le sérum et le caillot. On obtient ainsi du sérum limpi de .
EXEMPLE 2.-
On introduit au fond d'un tube de fractionnement cylindrique d'une capacité, de 7 ml et d'un diamètre intérieur de 10,8 mm environ 0,9 ml d'un agent de fractionnement étanche ayant la composition 2 du tableau 1 (copolymère d'a-oléfine et de dimaléate/Aerosil 200/Bentone 38, d'une
<EMI ID=110.1>
manière à atteindre une épaisseur de 13 mm au milieu. On ménage une cavité presque cylindrique d'un diamètre d'environ �- mm à l'embouchure et d'une profondeur d'environ 5 mm en opérant comme dans l'exemple 1 ci-dessus à l'aide d'un tube d'injection d'un diamètre intérieur de 2 mm.
On insère dans le tube une rondelle d'étoffé non tissée portant un agent favorisant la coagulation (d'un diamètre de 11,6 mm) préparée exactement comme dans l'exemple ci-dessus pour obtenir un appareil de fractionnement du sang semblable.
Au moyen de cet appareil, on collecte du sang qu'on fait coaguler- Au terme de la coagulation, on centrifuge le sang à 2.200 tours par minute (environ 920 G). L'agent de fractionnement étanche constitue une cloison entre le sérum et le caillot, ce qui permet d'isoler aisément du sérum exempt de fibrine et de cellules.
REVENDICATIONS
1.- Appareil de fractionnement du sang qui comprend un tube fermé à une extrémité et un agent de fractionnement étanche gélifié thixotrope ayant une densité intermédiaire entre la densité du sérum et la densité du caillot, caractérisé en ce qu'il comprend l'agent de fractionnement étanche contenu au fond du tube avec une cavité ménagée dans sa face supérieure.
2.- Appareil de fractionnement du sang qui comprend un tube fermé à une extrémité et un agent de fractionnement étanche gélifié thixotrope ayant une densité intermédiaire entre la,densité du sérum et la densité du caillot, caractérisé en ce qu'il comprend l'agent de fractionnement étanche contenu au fond du tube avec une cavité ménagée dans sa face supérieure et contient un agent d'ajustement de la viscosité et de la densité amenant la densité à une valeur de 1,03� à 1,055.
3.- Appareil de fractionnement du sang suivant la