Aminoglucosides amidinés, procédé pour leur
<EMI ID=1.1>
<EMI ID=2.1>
<EMI ID=3.1>
les compositions pharmaceutiques contenant ces dérivés et leur utilisation comme médicaments.
<EMI ID=4.1>
description signifie la substitution par au moins un groupe amidino.
L'invention concerne plus particulièrement les composés de formule 1
<EMI ID=5.1>
dans laquelle
<EMI ID=6.1>
<EMI ID=7.1>
<EMI ID=8.1>
<EMI ID=9.1>
ou IIIa
<EMI ID=10.1>
<EMI ID=11.1>
représenter l'hydrogène,
<EMI ID=12.1>
<EMI ID=13.1>
l'autre, un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy et R et R' signifient l'hydrogène,
<EMI ID=14.1>
<EMI ID=15.1>
<EMI ID=16.1>
<EMI ID=17.1>
<EMI ID=18.1>
R8 représente l'hydrogène ou un groupe amidino,
<EMI ID=19.1>
<EMI ID=20.1> <EMI ID=21.1> <EMI ID=22.1>
<EMI ID=23.1>
<EMI ID=24.1>
<EMI ID=25.1>
X représente un atome d'oxygène ou un groupe imino, et n représente un nombre entier de 2 à 5 inclus,
la molécule contenant au moins 1 et au plus 2 groupes amidino,
ou un sel d'addition d'acidesde ces composés.
La présente invention concerne également
un procédé pour préparer les composés de l'invention, procédé selon lequel on soumet à une amidination un aminoglucoside contenant au moins un groupe amine libre ensemble éventuellement avec. des groupes amino potentiels ou protèges, et, si nécessaire, on transforme dans un composé ainsi obtenu les groupes amino potentiels présents en groupes amino et on élimine les groupes protecteurs des groupes amino protégés présents.
La présente invention concerne plus particulièrement un procédé pour préparer un composé de
<EMI ID=26.1>
lequel on soumet à une amidination un composé correspondant de formule VII
<EMI ID=27.1>
dans laquelle
<EMI ID=28.1>
<EMI ID=29.1>
<EMI ID=30.1> <EMI ID=31.1>
Z représente un groupe amino ou un groupe amino potentiel,
et
<EMI ID=32.1>
déjà données, un ou plusieurs des groupes amino pouvant être protégés par un. groupe protecteur approprié du groupe amino, et,si nécessaire, on transforme dans le produit obtenu les groupes amino potentiels présents en groupes amino et on élimine les groupes protecteurs dans les groupes amino protégés présents.
Il est bien établi que la réactivité des
<EMI ID=33.1>
que par exemple ceux de formule VII, différent largement selon leur position (voir par exemple T. Naito et coll., J. Antibiot. 26, 297 (1973) et J.J. Wright et coll.,
<EMI ID=34.1>
Afin d'obtenir le produit désiré qui sera amidiné sur 1 ou 2 groupes amino particuliers, il sera seulement nécessaire de protéger les groupes amino de plus grande réactivité que celui ou ceux à amidiner.
Les molécules qui contiennent deux groupes amino ayant une réactivité approximativement identique peuvent donc
<EMI ID=35.1>
Lorsqu'on désire effectuer l'amidination sur le groupe amino le plus réactif, il va de soi qu'il n'est pas nécessaire de protéger les autres groupes amino. Cependant, la protection de ces groupes peut, dans certaines circonstances ,diminuer. le risque d'obtenir des produits secondaires indésirables et augmenter ainsi le rendement.
Le procédé peut être effectué selon les
méthodes connues pour l'introduction d'un groupe amidino,
<EMI ID=36.1>
Comme exemples d'agents d'amidination appropriés, on peut citer par exemple les S-alkylisothiourées,
<EMI ID=37.1>
formamide, le chloroforme, ou leurs mélanges. On opère
à une température comprise par exemple entre la tempéra-ture ambiante et une température élevée, par exemple entre 65 et 80[deg.] ..
Les groupes protecteurs appropriés, destinés
<EMI ID=38.1>
ceux connus à cet effet dans l'état de la technique, tels que les groupes benzyloxycarbonyle, tert.-butyloxycarbonyla ou trichloroêthoxycarbonyle. Ces groupes peuvent être introduits et éliminés selon les méthodes connues, par exemple de manière analogue aux méthodes décrites ci-après dans les exemples.
Comme exemples de groupes amino potentiels tels que ceux représentés par Z dans la formule VII,
on peut citer les groupes azido, benzyloxycarbonylaminor
<EMI ID=39.1>
qui peuvent être convertis en groupes amino libres selon les méthodes connues,telles que celles décrites ci-^après dans les exemples.
Les produits de départ de formule VII dans
<EMI ID=40.1>
sont connus en partie et peuvent être préparés par exemple en faisant réagir le composé correspondant
<EMI ID=41.1>
et les groupes amino sont protégés au moyen d'un groupe protecteur appropriée avec un composé de formule
<EMI ID=42.1>
<EMI ID=43.1>
données ci-dessus et Y représente un groupe susceptible d'être éliminé , tel qu'un atome d'halogène, en parti- culier le chlore ou le brome, ou un groupe N-succinimi-
<EMI ID=44.1>
ou imidazolyle.
Cette réaction peut être effectuée selon les méthodes connues, par exemple dans un solvant <EMI ID=45.1>
ou à une température plus élevée, de préférence à la température ambiante.
Les autres produits de départ sont connus
ou peuvent être préparés selon des méthodes connues.
Les composés obtenus peuvent être isolés et purifiés selon les méthodes habituelles.
Les composés de formule 1 peuvent être transformés, selon les méthodes habituelles, en leurs sels d'addition d'acides et vice versa.
<EMI ID=46.1>
par une activité chimiothérapeutique. En particulier, ils exercent une action anti-microbienne comme il ressort des essais in vitro de dilution en séries et des
essais in vivo chez la souris, en :utilisant des souches bactériennes variées telles que par exemple Staph. 'aureus, Staph. epidermis,
<EMI ID=47.1>
Serratia marcescens, Salmonella typhimurium 'et
<EMI ID=48.1>
activité dans les essais in -vitro à-des concen-
<EMI ID=49.1>
<EMI ID=50.1>
<EMI ID=51.1>
être utilisés en thérapeutique ..notaient comme anti-
<EMI ID=52.1>
Pour cette application, la posologie dépendra du compos� particulier employé, du mode d'administration et du traitement désiré. Une dose quotidienne appropriée
<EMI ID=53.1> appropriée sous forme de doses unitaires contenant chacune de 25 à 1500 mg de substance active, deux
à quatre fois par jour, ou sous une forme .retard.
Les composés de formule I peuvent être utilisés sous forme de base libre ou sous forme de sels d'addition
<EMI ID=54.1>
par exemple sous forme de chlorhydrate. De tels sels possèdent le même ordre d'activité que les bases libres correspondantes.
Les composés peuvent être utilisés comme médicaments sous tonna de compositions pharmaceutiques appropriés pour l'administration par la voie orale
ou parentérale, contenant la substance active en associa-
<EMI ID=55.1>
point de vue chimiothérapeutique, et, éventuellement, d'autres excipients, comme par exemple des comprimés,
des capsules ou des préparations injectables. De telles compositions font également partie de la présente invention,
Des exemples de groupes de composés particuliers' sont ceux dans lesquels a) lorsque R = R' = H <EMI ID=56.1>
<EMI ID=57.1>
R6 = NH2, NHCH3
<EMI ID=58.1>
<EMI ID=59.1>
<EMI ID=60.1>
<EMI ID=61.1>
<EMI ID=62.1>
R6 = NH2 NHCH3
<EMI ID=63.1> <EMI ID=64.1>
R3 = OH, NH2
<EMI ID=65.1>
R6 = NH2, NHCH3
<EMI ID=66.1>
<EMI ID=67.1>
93
<EMI ID=68.1>
<EMI ID=69.1>
R2 = H
<EMI ID=70.1>
<EMI ID=71.1>
R3 = OH, NH2
<EMI ID=72.1>
R = amidino
<EMI ID=73.1>
<EMI ID=74.1>
R2 - H
<EMI ID=75.1>
et les sels d'addition d'acides de ces composés.
Des exemples de groupes de composés préférés pour les applications mentionnées, comprennent ceux dérivés de la gentamycine ou de la kanamycine, en
<EMI ID=76.1>
kanamycine A. Des composés particulièrement préférés sent ceux dans lesquels un groupe amidino est sur un groupe amino situé
<EMI ID=77.1>
de la chaîne latérale lorsque une telle chaîne est
<EMI ID=78.1>
d'addition d'acides acceptables du point de vue chimiothérapeutique de ces composés.
<EMI ID=79.1>
un sel d'addition d'acide acceptable du point de vue chimiothérapeutique de ces composés, en particulier le chlorhydrate par exemple.
Les exemples suivants illustrent la présente invention. Toutes les températures sont indiquées en degrés Celsius.
Les éluants suivants sont utilisés:
<EMI ID=80.1> <EMI ID=81.1>
<EMI ID=82.1>
X = Chloroforme/méthanol/ammoniaque à 25% 2/1/1
<EMI ID=83.1>
XII = Chloroforme/méthanol/ammoniaque concentrée 17/3/0,4
<EMI ID=84.1>
XIV = Chloroforme/méthanol/ammoniaque à 25% 17/3/0,4 XV = Chloroforme/méthanol 8/2
<EMI ID=85.1>
Exemple 1
<EMI ID=86.1>
<EMI ID=87.1>
de 1- amidino-pyrazole dans 50 ml de pyridine et
on chauffe pendant 15 heures à 75[deg.]. On concentre à siccité la solution résultante dans un évaporateur rotatif et on chromatographie le résidu sur gel de silice (éluant I) . On obtient un produit pur selon la chromatographie en couche mince [RF = 0,37 (éluant I)]. On dissout ce produit dans 5 ml d'acide trifluoroacétique et, après 5 minutes, on le traite par 200 ml d'éther.
Le trifluoroacëtate qui a précipité est transformé en chlorhydrate au moyen d'une résine échangeuse d'ions basique (Amberlite IRA 400, forme Cl ). On obtient un produit pur selon la chromatographie en couche mince (com-
<EMI ID=88.1>
<EMI ID=89.1>
<EMI ID=90.1>
<EMI ID=91.1> <EMI ID=92.1>
butoxy-carbonylgentamycine Cla dans 20 ml de pyridine anhydre, on ajoute la solution ainsi obtenue à 590 mg
<EMI ID=93.1>
chauffe la solution résultante à 75[deg.]. Après 2 heures, on évapore la pyridine sous vide et on chromatographie
<EMI ID=94.1>
On fait réagir le produit ainsi obtenu avec
5 ml d'acide trifluoroacétique et, après 7 minutes,
on dilue avec 20 ml d'éther. On dissout le précipité résultant dans du méthanol et on le transforme en chlorhydrate au moyen d'une résine échangeuse d'ions
<EMI ID=95.1>
(composé n[deg.] .2 ) .
Exemple 3
<EMI ID=96.1>
On dissout 0,7 g de 1, 3, 3"-tri-N-tert. -butoxycarbonylkanarnycine A et 0,26 g de chlorhydrate de
<EMI ID=97.1>
<EMI ID=98.1>
dans un évaporateur rotatif et on chromatographie le résidu sur gel de silice (éluant VII). On obtient un produit amorphe, pur selon la chromatographie en couche mince [RF = 0,48 (éluant IV)].
On dissout ce produit dans 10 ml d'acide trifluoroacétique et, après 7 minutes, on le traite par 100 ml d'éther. On dissout le précipité résultant dans du méthanol et on le transforme en chlorhydrate
<EMI ID=99.1>
<EMI ID=100.1>
' Exemple 4
<EMI ID=101.1>
et on chauffe la solution pendant 3 heures à 75[deg.] ..
On élimine le solvant sous vide et on chromatographie le résidu résultant sur gel de silice (éluant VIII). On obtient un produit pur selon la chromatographie en couche mince. RF = 0,28 (éluant V phase inférieure).
On dissout 950 mg de ce produit dans 3 ml d'acide trifluoroacétique. Après 7 minutes, on ajoute
50 ml d'éther et on filtre le précipité résultant.
On dissout ce précipité dans du méthanol et on le filtre sur une colonne contenant une résine échangeuse
<EMI ID=102.1> d'une poudre amorphe blanche. (composé n[deg.] 4) . RF = 0,33 (éluant III).
<EMI ID=103.1>
<EMI ID=104.1>
De manière analogue à l'exemple 4, on fait réagir 1,9 g de 3,2'-6'-tri-N-tert.-butoxy-carbonylgentamycine C2 et 730 g de chlorhydrate de 1-amidino-pyrazole. RF = 0,48 (éluant V - phase inférieure).
De manière analogue à l'exemple 4, on élimine les groupes protecteurs dans le produit protégé résultant et on le transforme en son chlorhydrate. Le composé est
<EMI ID=105.1>
<EMI ID=106.1>
<EMI ID=107.1>
Exemple 6
<EMI ID=108.1>
<EMI ID=109.1>
réagir 1,95 g de 3,2'-6'-tri-N-tert.-butoxy-carbonyl-
<EMI ID=110.1>
dino-pyrazole, ce qui donne par chromatographie un produit pur selon la chromatographie en couche mince.
RF = 0,28 (éluant V - phase inférieure) .
Le produit ainsi obtenu est mis à réagir
comme décrit à l'exemple 4 . Le chlorhydrate ainsi obtenu,
<EMI ID=111.1>
un RF de 0, 43 (éluant III).
<EMI ID=112.1>
<EMI ID=113.1>
dans 60 ml de pyridine anhydre et on fait réagir la solution avec 0,6 g de chlorhydrate de 1- amidinopyrazole. Après avoir chauffé pendant 15 heures à 75[deg.], on élimine la pyridine par distillation et on purifie le résidu par chromatographie sur colonne. On obtient un produit amorphe, pur selon la chromatographie .
en couche mince. RF = 0,39 (éluant IX).
<EMI ID=114.1>
<EMI ID=115.1>
ainsi obtenue et, après 7 minutes, on verse dans 50 ml d'éther: On essore le précipité, on le dissout dans du
<EMI ID=116.1>
<EMI ID=117.1>
<EMI ID=118.1>
tographie en couche mince (composé n[deg.] 7). RF = 0,47
<EMI ID=119.1>
<EMI ID=120.1>
C-13-RMN (Chlorhydrate^) . 158,07 (CO, C=NH) 98,79
<EMI ID=121.1>
<EMI ID=122.1>
21,90, 21,30 (6",3').
<EMI ID=123.1>
<EMI ID=124.1>
Le chlorhydrate du composé du titre peut
<EMI ID=125.1>
forme de substance pure selon la chromatographie
<EMI ID=126.1>
<EMI ID=127.1>
Dans 5 ml de pyridine, on dissout 1 g de <EMI ID=128.1>
<EMI ID=129.1>
chlorhydrate de 1-amidino-pyrazole et on chauffe
<EMI ID=130.1>
dans un évaporateur rotatif et on chromatographie le résidu sur gel de silice (éluant VII). On obtient un produit pur selon la chromatographie en couche mince.
RF = 0, 20 (éluant VII).
On dissout 0, 65 g de ce produit dans 5 ml
<EMI ID=131.1>
de formiate d'ammonium dans un mélange 8/2 de méthanol et d'eau et 100 mg de palladium sur charbon, et on
fait bouillir la solution pendant 5 minutes. On concentre
<EMI ID=132.1>
on dissout le résidu dans 7 ml d'acide trifluoroacétique et, après 7 minutes, on traite par 200 ml d'éther.
On dissout le précipité résultant dans du méthanol
<EMI ID=133.1>
10 ml et on le traite par 200 ml d'éther. Le produit
(composé n[deg.] .9) est obtenu sous forme de poudre amorphe, pme selon la chromatographie en couche mince. RF or 34 (éluant IV).
Exemple 10 .
<EMI ID=134.1>
<EMI ID=135.1>
rateur rotatif , on chromatographie le résidu sur gel
<EMI ID=136.1>
On dissout 0,83 g de ce produit dans 10 ml d'acide
<EMI ID=137.1>
à l'exemple 9, ce qui donne un produit pur selon la chromatographie en couche mince (composé n[deg.] 10).
<EMI ID=138.1>
<EMI ID=139.1>
<EMI ID=140.1>
dinopyrazole dans 50 ml de pyridine. Après avoir chauffé pendant 50 heures à 7b[deg.],, on élimine le solvant par distillation et on chromatographie le résidu sur
<EMI ID=141.1>
amorphe, pur selon la chromatographie en couche mince. RF = 0,47 (éluant IV).
<EMI ID=142.1>
<EMI ID=143.1>
10 ml d'acide acétique aqueux à 10% et on hydrogène
sur noir de palladium à 20[deg.] et :sous 3 atmosphères. Après avoir filtré le catalyseur � on élimine le solvant par distillation, on dissout le résidu dans de l'acide chlorhydrique méthanolique (pH = 3) et on filtre sur une colonne échangeuse d'ions (Amberl ite IRA 401 S, forme CI-).
<EMI ID=144.1>
précipiter le produit par addition d'éther. Le produit est pur selon la chromatographie en couche mince
<EMI ID=145.1>
NH
<EMI ID=146.1>
6'-N-amidinogentamycine Cla
<EMI ID=147.1>
<EMI ID=148.1>
de chloroforme et 30 ml de pyridine. On chauffe cette <EMI ID=149.1>
On chromatographie ce précipité sur gel de silice
<EMI ID=150.1>
<EMI ID=151.1>
la chromatographie en couche mince, et qui peut être transformé en son chlorhydrate comme décrit à cet exemple.
Exemple 13
<EMI ID=152.1>
<EMI ID=153.1>
de chloroforme et 5 ml de pyridine et on chauffe la solution au reflux pendant 40 heures. Après refroidissement, on filtre le précipité et on le chromatographie sur gel de silice avec de l'acide acétique aqueux
à 5%. On obtient un produit identique à celui de l'exemple 1, pur selon la chromatographie en couche mince, et qui peut être transformé en son chlorhydrate comme décrit à cet exemple.
Les produits de départ utilisés peuvent
être préparés par exemple comme décrit ci-après : <EMI ID=154.1>
(utiliséeà l'exemple 1)
<EMI ID=155.1>
<EMI ID=156.1>
<EMI ID=157.1>
CF3CSC2H5
dans 20 ml de méthanol. Après 3 heures, on ajoute goutte à goutte une solution de. 17, 3 g de dicarbonate de di-tert.-butyledans 20 ml de méthanol. Après 35 .. heures à 20[deg.], on ajoute un volume égal d'ammoniaque à 3,3% et, après. 15 heures, on évapore la solution à siccité dans un évaporateur rotatif. La chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant XI) <EMI ID=158.1>
<EMI ID=159.1>
de méthanol et on refroidit à -10[deg.]. A cette solution, on ajoute lentement goutte à goutte 3,1g de N-benzylcarbonyl-5-norbomêne-2,3-di-carboximide dans 50 ml de méthanol et 10 ml de chloroforme. Après une demi-heure, on élimine le
<EMI ID=160.1>
CI La
On dissout 2,3 g de 6'-N-benzyloxycarbonylgenta-
<EMI ID=161.1>
<EMI ID=162.1>
de méthanol. La réaction, qui est contrôlée par chromatographie en couche mince, est terminée
<EMI ID=163.1>
On traite ensuite la solution par 50 ml d'une solution à 20% de formiate d'ammonium et on ajoute
500 mg de palladium sur charbon actif (à 10%). On
fait bouillir le mélange réactionnel
pendant 3 minutes, on le filtre, on élimine le solvant sous vide et on dissout le résidu dans de l'eau.
On extrait cette solution à 3 reprises avec de l'acétate d'éthyle, on sèche les extraits réunis
sur sulfate de sodium et on élimine le solvant
sous vide. On obtient un produit pur selon la chromatographie en couche mince. RF = 0,25 (éluant XIII).
<EMI ID=164.1>
<EMI ID=165.1>
<EMI ID=166.1>
heures, période durant laquelle il se forme un précipite ayant l'aspect d'une gelée blanche.
Après dilution avec.:de l'eau, on filtre le précipité pur selon la chromatographie en couche mince.
RF = 0,42 (éluant XV).
<EMI ID=167.1>
<EMI ID=168.1>
comme décrit sous a) et on hydrogène à 20[deg.] et
sous 3 -atmosphères avec du palladium sur charbon.
Apres filtration et évaporation, on obtient un produit pur selon la chromatographie en couche mince.
RF = 0,77 (éluant III).
<EMI ID=169.1>
A une solution de 1,74 g de 2-azidoëthanol dans
100 ml de chloroforme exempt d'éthanol et 10 ml
de pyridine, on ajoute 5,41 g de N- (chlorocarbonyloxy)-phtalimide. On agite la solution pendant la nuit, on l'extrait ensuite avec une solution
de bicarbonate de sodium, on la sëche sur sulfate de sodium et on élimine le solvant
par distillation. On obtient un résidu cristallin qui peut être utilisé directement pour l'étape suivante.
<EMI ID=170.1>
Le produit est obtenu de manière analogue à celle décrite à l'exemple E/a) (quantité/volume)
F = 215-217[deg.] . RF = 0,31 (éluant XIV).
<EMI ID=171.1>
de chloroforme exempt d'éthanol, on ajoute
<EMI ID=172.1>
<EMI ID=173.1>
oxy)-phtalimide dans 50 ml de chloroforme.
Apres 7 heures, on extrait la solution avec une solution de bicarbonate de sodium, on évapore la solution dans un évaporateur rotatif et on purifie le résidu amorphe par chromatographie sur colonne. On obtient un produit pur selon la chromatographie en couche mince. RF = 0,35 (éluant XV).
<EMI ID=174.1> on ajoute goutte à goutte, à la température ambiante, 1,85 g de dicarbonate de di-tert.butyle dissous dans 20.ml de méthanol. Lorsque la réaction est terminée (RF = 0,45 dans un
<EMI ID=175.1>
on ajoute 200 mg de palladium sur charbon actif
<EMI ID=176.1>
ture ambiante . L'hydrogénation terminée, on filtre le catalyseur, on évapore la solution dans un évaporateur rotatif et on purifie le résidu par chromatographie sur une colonne de gel de silice. On obtient un produit pur selon la chromatographie en couche mince. RF = 0,2
<EMI ID=177.1>
<EMI ID=178.1>
l'exemple 8) <EMI ID=179.1>
Après une heure, on ajoute 392 g de dicarbonate de di-tert.-butyle dissous dans de l'isopropanol et on chauffe le mélange réactionnel pendant 20
<EMI ID=180.1>
un évaporateur rotatif et on reprend le résidu dans 10 litres d'ammoniaque 2N. La phase aqueuse est extraite à 6 reprises avec chaque fois 1,5 litre d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées avec une solution saturée
de bicarbonate de sodium, avec une solution
<EMI ID=181.1>
l'eau,et séchées sur sulfate de sodium. Après évaporation du solvant, le résidu est mis à digérer avec de l'acétonitrile, ce qui donne
un produit cristallin (F = 254-256[deg.]). Le produit est pur selon la chromatographie en couche mince.
RF = 0,34 (éluant XIV). On peut obtenir des quantités supplémentaires de produit en chromatographiant les liqueurs mères sur gel de silice (êluant XIII) .
<EMI ID=182.1>
On dissout 38,2 g de 3,2',6'-tri-N-tert.-butoxycarbonylgentamycine C2 dans 300 ml de chloroforme
<EMI ID=183.1> . on ajoute lentement goutte à goutte, à 0[deg.], 7,5 g de chlorure de 2-azido-éthoxycarbony le dissous dans 100 ml de chloroforme. Après 15 heures à 20[deg.], on évapore la solution sous vide. On obtient une <EMI ID=184.1>
être utilisée directement pour l'étape suivante.
<EMI ID=185.1> Dans 100 ml de chloroforme, on dissout le produit
<EMI ID=186.1>
méthanol- Après addition d'une résine échangeuse
<EMI ID=187.1>
on fait réagir la solution avec 13 g de dicarbonate
de di-tert.-butyle et on agite la suspension pendant
15 heures. Après filtration, on évapore le solvant
ce qui donne une mousse incolore [RF = 0,9 (éluant XV)], qui peut être utilisée directement pour l'étape suivante.
<EMI ID=188.1>
On dissout, dans 100 ml d'une solution de 200 g de formiate d'ammonium dans 200 ml d'eau et 800 ml de méthanol, 3 g du produit obtenu comme décrit sous c), on mélange avec 300 mg de palladium sur
<EMI ID=189.1>
<EMI ID=190.1>
le solvant par évaporation et on chromatographie
le résidu sur gel de silice (éluant XVI). On obtient une mousse,pure selon la chromatographie en couche
<EMI ID=191.1>
<EMI ID=192.1>
Analogue à l'exemple E/a), produit amorphe,pur selon la chromatographie en couche mince.
RF = 0,3 (éluant XIV).
<EMI ID=193.1>
<EMI ID=194.1>
<EMI ID=195.1>
dans 200 ml de chloroforme et on mélange lentement
<EMI ID=196.1> <EMI ID=197.1>
on lave à plusieurs reprises le mélange avec une solution de bicarbonate de sodium. Le produit obtenu par évaporation dans un évaporateur rotatif peut être purifié par chromatographie sur
<EMI ID=198.1>
acétique et, après 10 minutes, on mélange avec
un litre d'êther. On essore le précipité résultant, on le dissout dans de l'eau et on chromatographie
<EMI ID=199.1>
<EMI ID=200.1>
fractions réagissant positivement à la ninhydrine
<EMI ID=201.1>
pure selon la chromatographie en couche mince.
RF = 0,73 (éluant V).
<EMI ID=202.1>
<EMI ID=203.1>
<EMI ID=204.1>
15 ml de méthanol. On maintient la solution
<EMI ID=205.1>
réaction étant suivi par chromatographie en couche mince. Le produit de la réaction possède un RF de 0,57, (êluant VII). La solution résultante peut être utilisée directement pour l'étape suivante.
<EMI ID=206.1>
<EMI ID=207.1> <EMI ID=208.1>
butyle et on agite pendant 4 heures. On dilue
<EMI ID=209.1>
et on agite pendant 20 heures à 20[deg.]. On dilue ensuite le mélange réactionnel avec de l'eau, on élimine le méthanol sous vide et on extrait à plusieurs reprises la phase aqueuse avec de l'acétate d'éthyle. Après lavage avec une solution saturée de bicarbonate de sodium et de l'acide
<EMI ID=210.1>
un évaporateur rotatif et on chromatographie le
<EMI ID=211.1>
est pur selon la chromatographie en couche mince.
RF = 0, 40 (éluant XIV).
<EMI ID=212.1>
<EMI ID=213.1>
on mélange avec 20 ml d'une solution à 20% de formiate d'ammonium dans un mélange 8/2 de méthanol et d'eau et 200 mg de palladium sur charbon et on chauffe à l'ébullition pendant 5 minutes.
Après filtration, on évapore la solution
dans un évaporateur rotatif, on reprend le résidu dans l'eau et on neutralise à pH 9 avec de l'ammoniaque.
L'extraction avec de l'acétate d'éthyle fournit
un produit pur selon la chromatographie en couche mince. RF = 0,23 (éluant XIV) .