BG106028A - Имунотерапия на рак чрез експресия на скъсен туморен или тумор-асоцииран антиген - Google Patents
Имунотерапия на рак чрез експресия на скъсен туморен или тумор-асоцииран антиген Download PDFInfo
- Publication number
- BG106028A BG106028A BG106028A BG10602801A BG106028A BG 106028 A BG106028 A BG 106028A BG 106028 A BG106028 A BG 106028A BG 10602801 A BG10602801 A BG 10602801A BG 106028 A BG106028 A BG 106028A
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- cancer
- rna
- viral vector
- dna
- antigen
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 41
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 41
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 33
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 53
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims abstract description 23
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 9
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 48
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 46
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 24
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 22
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 21
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 20
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 12
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 11
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 10
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 7
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000046689 human FOLH1 Human genes 0.000 claims 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract description 11
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 4
- 208000010658 metastatic prostate carcinoma Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 abstract 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 15
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 15
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 15
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 9
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 9
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 8
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 8
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 8
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 7
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 210000005267 prostate cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000011471 prostatectomy Methods 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 4
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 3
- 208000007433 Lymphatic Metastasis Diseases 0.000 description 3
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 3
- 206010027452 Metastases to bone Diseases 0.000 description 3
- 206010027459 Metastases to lymph nodes Diseases 0.000 description 3
- LKJPYSCBVHEWIU-UHFFFAOYSA-N N-[4-cyano-3-(trifluoromethyl)phenyl]-3-[(4-fluorophenyl)sulfonyl]-2-hydroxy-2-methylpropanamide Chemical compound C=1C=C(C#N)C(C(F)(F)F)=CC=1NC(=O)C(O)(C)CS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LKJPYSCBVHEWIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 230000003460 anti-nuclear Effects 0.000 description 3
- 229940097647 casodex Drugs 0.000 description 3
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 238000011474 orchiectomy Methods 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108090000369 Glutamate Carboxypeptidase II Proteins 0.000 description 2
- 102000003958 Glutamate Carboxypeptidase II Human genes 0.000 description 2
- BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N Goserelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](COC(C)(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NNC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 BLCLNMBMMGCOAS-URPVMXJPSA-N 0.000 description 2
- 108010069236 Goserelin Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 2
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- -1 lymphokine Proteins 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000005353 urine analysis Methods 0.000 description 2
- 229940033942 zoladex Drugs 0.000 description 2
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000713838 Avian myeloblastosis virus Species 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101001094545 Homo sapiens Retrotransposon-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010037898 Rash vesicular Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241000906446 Theraps Species 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229940021704 adenovirus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003172 anti-dna Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 238000007469 bone scintigraphy Methods 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000013155 cardiography Methods 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- UWFYSQMTEOIJJG-FDTZYFLXSA-N cyproterone acetate Chemical compound C1=C(Cl)C2=CC(=O)[C@@H]3C[C@@H]3[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 UWFYSQMTEOIJJG-FDTZYFLXSA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 208000008384 ileus Diseases 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 244000000056 intracellular parasite Species 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 230000001402 polyadenylating effect Effects 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 201000005825 prostate adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000064 prostate epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 230000036325 urinary excretion Effects 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
- A61K39/001195—Prostate specific membrane antigen [PSMA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/022—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from an adenovirus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретението се отнася до ДНК конструкти - скъсени форми на специфични ракови или рак-асоциирани антигени, включени в плазмид или вирусен експресионен вектор. Използването на конструкти на скъсена, а не на цяла молекула цели да се отстранят страничните ефекти (токсичност, сигнална трансдукция и т.н.), възникващи при експресията на белтъци и/или вслучаите, когато такива молекули се експресират върху мембраните, секретират се или се освобождаватв извънклетъчната среда, за да се предотврати образуването на антитела срещу тях. Клонирана е извънклетъчната част на човешкия, специфичен за простатни клетки, мембранен антиген (ХС-PSMA). Пациентитесе лекуват или чрез инжектиране на ДНК кодираща ХС-PSMA, включена в експресиращ се в бозайници под контрола на СМV промотор вектор, и/или чрез нереплициращ се аденовирусен вектор - шапка (Ad5), съдържащ експресионна клетка за ХС-PSMA. При третия метод се изолират дендритни клетки от пациент и се култивират в присъствието на плазмида или аденовируса, използвани в предишните две манипулации. След това дендритните клетки се инжектират в пациента. При някои пациенти развитието на метастази на рак на простатата се забавя или спира.
Description
Настоящето изобретение се отнася до конструкти и методи за имунотерапия на пациенти с рак.
ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Всички нормални човешки ядрени клетки експресират върху мембраните си малки, получени чрез de novo белтъчна синтеза фрагменти. Тези т.нар. пептиди се асоциират с молекулите на главния комплекс за тъканна съвместимост (МНС) клас I и формират антигените, разпознаващи се от CD 8+ цитотоксичните Т лимфоцити (CTLs). Това разпознаване е много важно за елиминирането на инфектирани с вирус клетки, туморни клетки или клетки съдържащи вътреклетъчни паразити. За да се осъществи такова активиране на антиген-реактивните Т клетки, необходимо е те да бъдат “предварително обучени”, чрез разпознаване на въпросния антиген, върху мембраната на професионалните антигенпредставящи клетки (дендритни клетки) (APCs, DCs), които освен антигена, осигуряват, ко-стимулиращи сигнали за “съзряване” на Т клетките. В отсъствие на такива сигнали, Т-клетките остават парализирани и толерантни по отношение на въпросните антигени.
Туморните клетки, които не са професионални APCs, не стимулират образуването на CTL и не се отхвърлят от имунната система. За индуцирането на имунен отговор срещу тумор, ми
необходимо е туморният антиген(и) да се експресира(т) от професионалните APCs. Това представяне се осъществява, чрез култивиране на дендритни клетки in vitro, в присъствие на туморни ' лизати, съдържащи предимно туморни антигени; в присъствие на пречистени туморни антигени; или на пептиди, произхождащи от такива антигени.
Друга възможност за постигане на експресия на пептид, с антигенен произход е чрез въвеждането в дендритни клетки на дезоксирибо- (ДНК) или рибонуклеинова киселина (РНК), кодираща съответния антиген. Клетките, трансфектирани с плазмидна ДНК синтезират за кратко белтъка и пептидите получени по време на синтезата, след това се експресират асоциирани с МНС. Например, in vitro култивирани клетки от пациенти, се трансфектират с плазмиди, съдържащи съответната ДНК или РНК, или се инфектират с рекомбинантен вирусен вектор, който съдържа тези ДНК или РНК, и след това се връщат в пациента. Друга възможност е директното имунизиране на пациента с плазмида (имунизация с “гола” ДНК) или с рекомбинантния вирусен вектор.
Главния проблем при тези процедури идва от възможните неблагоприятни ефекти на експресираните продукти, върху здравето на пациента или върху клетъчната жизнеспособност. Тъй като функцията на тези тумор-асоциирани или тъканно-специфични антигени е в голяма степен неизяснена, тяхната in vivo синтеза и секреция от клетките на пациента, може да доведе до сериозни странични ефекти. Освен това, в случаите, в които дендритните клетки се трансфектират in vitro, експресията на функционален белтък може да промени жизнеността на дендритните клетки, техния миграционен модел или тяхната способност за Т клетъчно ко-стимулиране.
ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Настоящето изобретение, разкрива идеята за въвеждане на ' специфични промени в ДНК или РНК, кодираща въпросния антиген, като начин за решаване на този проблем. Тези промени водят до експресията на функционално неактивни продукти, без това да се отрази на ефективността на транскрипцията и транслацията на ДНК, транслацията на РНК, или образуването на антигенни пептиди. Поспециално, настоящото изобретение описва създаването на ДНК, която води до експресия на скъсена форма на човешкия специфичен ® за простатните клетки мембранен антиген (PSMA). По-точно, ние създадохме ДНК конструкт с делеции в мембранните и вътреклетъчните части на човешкия PSMA. Получената ДНК, кодираща извънклетъчната част на PSMA (XC-PSMA) е вкарана във вектори, експресиращи се от клетки на бозайници. PSMA представлява белтък тип II, на който липсва хидрофобната сигнална последователност и затова не се секретира от клетките, които го продуцират. Тъй като в нашия конструкт липсват мембранните и цитоплазмени последователности, получения белтък не се експресира върху мембраната и затова не предава сигнали, и не се освобождава от нея. Клетки трансфектирани с плазмида XC-PSMA, запазват жизнеспособността си и експресират пептиди, произхождащи от PSMA.
Освен това, тъй като синтезираният белтък не се освобождава, но остава в обкръжението на вътреклетъчната среда, продукция на антитела, насочени срещу белтъка липсва и имунният отговор остава стриктно клетъчно медииран. Финото ангажиране на клетъчно-медиирания имунитет срещу специфичен антиген е много важно, особено в случаите когато съответният прицелен антиген се експресира в нормални тъкани, анатомично отделени в имуно4 толерантни места, като окото, мозъка, тестисите и т.н. Тези тъкани са неподатливи на клетъчно-медиирано разрушаване, но лесно се увреждат от антитела. Имунотерапията, на базата на клетъчни * отговори, към антигени (тирозиназа; gplOO; TRP1; TRP2; MARTl/Melan-А; мембранно-асоцииран муцин, MUC-1 муцин) на диференцирани клетки или нормални тъканно-специфични (PSMA, PSA) антигени, са пример, при който продукцията на антитела срещу прицелните клетки не е необходима.
При първия метод за лечение на пациенти с рак на простатата, плазмидът се инжектира интрадермално. При втория метод на лечение, плазмидът се включва в генома на нереплициращ се аденовирус, който се инжектира в пациента интрадермално. При третия метод на лечение, моноцитни клетки CD 14 + от пациент с рак на простатата се изолират, стимулира се тяхната диференциация до дендритни клетки (DC) и се трансфектират или с плазмида, или с аденовируса от първите два метода. След това се стимулира експресията на МНС от DC и те се връщат обратно в пациента, с рак на простатата, където стимулират автоложните Тклетки. Така стимулираните Т-клетки, разрушават както нормалните, така и малигнените простатни клетки.
Ефектът от всички тези лечения е да се преодолее нормалната толерантност към собствени антигени, или толерантността към туморни антигени. Това ще позволи цитолизата на прицелните нормални и малигнени простатни клетки, които обикновенно са имунно неразпознаваеми. Разрушаването на нормалните простатни клетки, чрез този метод не е пагубно за пациента. Малигнени простатни (смесени или нормални и малигнени) клетки, обикновенно се отстраняват хирургично или чрез облъчване според общоприетото, първоначално лечение на това заболяване.
U.S. Патент 5,227,471 описва структурата на специфичен за простатните клетки мембранен антиген. Описан е метод за лечение на рак на простатата, който включва антитяло и свързан към него цитотоксичен агент, насочено срещу специфичния за простатните клетки мембранен антиген. Обаче, тъй като PSMA се експресира върху нормалните мозъчни клетки, недопустимо е използването на антитела, които могат да преминат през кръвно-мозъчната бариера и да увредят тези клетки. Описани са също така методи за доказване на рак на простатата и имуно-анализ за измерване на количеството на специфичния за простатните клетки мембранен антиген.
U.S. Патент 5,788,963 описва използването на човешки дендритни клетки за активирането на Т клетки към имунотерапевтичен отговор срещу първичен и метастазиращ рак на простатата. Човешките дендритни клетки са изолирани и култивирани in vitro, в присъствието на PSMA или произхождащи от него пептиди. Счита се, че PSMA или пептидите се обменят с пептиди, вече свързани с МНС молекулите на дендритните клетки и така те могат да се експресират по имуногенен начин, позволявайки на ЕК? да стимулират килърите (клетките - убийци), които впоследствие да лизират простатните клетки.
U.S. Патенти 5,227,471 и 5,788,963 са включени тук в литературната справка.
Настоящото изобретение се различава от предшестващото ниво на техниката с това, че чрез трансфекция с плазмид или аденовирус, се стимулират DC да представят върху тяхната повърхност антигена, произхождащ от простатни ракови клетки. Може да бъде извършена in vivo трансфекция, чрез инжектиране на плазмид или аденовирус. Съответно трансфекцията може да бъде осъществена in vitro, чрез използване на пречистени прекурсорни DC, изолирани от кръв на пациенти с рак на простатата. Ако трансфекцията се извърши in vitro, трансформираните клетки се инжектират в пациента. Трансфектираните DC клетки превъзхождат in vitro култивираните в присъствие на антиген DC клетки, тъй като те носят антиген-произхождащия пептид и поради тяхната способност да стимулират клетките - килъри с по-голяма ефективност. Също така, in vivo трансфекцията, при която се използва плазмид или аденовирус е по-малко трудоемка и по-евтина в сравнение с in vitro методите. Използването на трансфектирани клетки, избягва необходимостта от идентифициране на пептиди, способни да се свързват с различни HLA фенотипове, както се изисква при методите, които включват добавяне на пептиди към клетките. В заключение, използването на ДНК последователност, която кодира непълна молекула на PSMA, гарантира, че белтъкът не се освобождава от трансфектираните клетки и не се продуцират никакви антитела срещу прицелния белтък, които са потенциално опасни за нормалната мозъчна тъкан. Чрез методите от настоящото изобретение, се преодолява нормалната толерантност към собствените антигени. Това позволява цитолизата на прицелни клетки, които по принцип са имунно неразпознаваеми.
Друго приложение, включва лечение на пациенти с меланома. Антигенът на меланоцитната диференциация MART-1 е общ меланомен антиген, разпознаван от много CTL на пациенти с меланома. Той представлява мембранен белтък от 118 аминокиселини и единичен трансмембранен домен. ДНК кодираща както непълната форма, без трансмембранния домен или целия белтък без водещата секвенция, се включва в плазмид или вирусен експресионен вектор и се използва за имунотерапия, подобна на описаната за пациенти с рак на простатата.
Друго приложение включва лечение на пациенти с рак на гърдата, рак на яйчника, рак на матката, и рак на простатата или белодробен рак. Антигенът Her-2/neu е представител на групата рецептори за епидермалния фактор и се предполага, че функционира като рецептор за растежни фактори. Той е трансмембранен белтък и се експресира по време на зародишното развитие и много слабо в нормалните клетки, като единични копия. При много тумори при човека е идентифицирана амплификация на гена, и/или свръхекспресия на асоциирания белтък, например тумори като рак на гърдата, на яйчника, на матката, на стомаха, на простата и на белия дроб. Конструирана е ДНК кодираща скъсена форма на Her-2/neu белтъка, без трансмембранната част и водещата последователност, която е включена в плазмиден или вирусен вектор(и) и е използвана за in vitro или in vivo модификация на DC на пациенти и за имунотерапия.
ПОДРОБНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Настоящото изобретение описва идеята за конструиране на генетично модифицирани форми на полинуклеотиди, кодиращи тъканно-специфични или туморни антигени и за използване на тези конструкти за имунотерапия на първичен или метастазиращ рак. Генетичните модификации на конструктите водят или до експресията на функционално неактивни продукти или възпрепятстват функционално активните молекули или да се секретират или да се експресират върху мембраните на трансфектираните клетки. Такива генетични модификации обаче, не повлияват антигенността на експресирания белтък, неговата първична структура или образуването на пептиди, способни да се свързват с МНС молекулите на клетките. Полинуклеотидът може да бъде или ДНК, или РНК последователност. Когато полинуклеотидът е ДНК, той може също да бъде ДНК последователност, която не се реплицира, но може да се включи в плазмид и плазмидът допълнително да включва репликатор. ДНК може да бъде секвенция конструирана така че, да не се интегрира в генома на клетката гостоприемник. Полинуклеотидните последователности могат да кодират полипептид, който или да се съдържа в клетките или да се секретира от тях, или могат да включват секвенция, която да насочва секрецията на пептида.
ДНК последователността може също да включва промоторна последователност. В един предпочитан вариант, ДНК последователността включва клетъчно-специфичен промотор, който позволява по същество трнскрипция на ДНК само в предварително детерминирани клетки. ДНК може да кодира също полимераза за ДНК транскрипцията, може да съдържа разпознавани от полимеразата места, а препаратите за инжектиране могат да включват първоначално количество от полимеразата.
В много случаи се предпочита транслацията на полинуклеотида да продължи ограничен период от време, така че доставянето на полипептида да става за кратко време. Предимството на полипептида е, че той може да бъде терапевтичен полипетид и може да включва ензим, хормон, лимфокин, рецептор, по специално клетъчно повърхностен рецептор, регулаторен белтък, например като растежен фактор или друг регулаторен представител, или какъвто и да е друг белтък или пептид, който е желателно да бъде доставен до клетките в гръбначните животни и за който съответната ДНК или мРНК може да бъде получена.
В предпочитани варианти, полинуклеотидът се въвежда в мускулната тъкан; в други варианти, полинуклеотидът се въвежда в кожата, мозъка, белия дроб, черния дроб, далака или кръвта. Препаратът се инжектира в гръбначните животни по различни начини, които могат да бъдат - интрадермален, подкожен, интратекален или интравенозен, или може да бъде поставен в телесните кухини. В предпочитан вариант, полинуклеотидът се инжектира вътремускулно. В други варианти, препаратът включващ полинуклеотида се въвежда в кожата. Обсъжда се също така трансдермално въвеждане, както и инхалация.
Един от примерите за този подход е използването на ДНК, кодираща скъсена форма на човешки PSMA, в която липсват мембранната и цитоплазмената част на молекулата. Такава ДНК е включена от нас във вектор, експресиращ се в бозайници: плазмид и неразмножаващ се вирус.
За лечение на пациенти с рак на простатата, дендритни клетки се трансфектират или с плазмид или с рекомбинантен нереплициращ се аденовирус, чиято ДНК включва ДНК кодираща скъсен фрагмент на специфичния за простатните клетки мембранен антиген. Дендритните клетки могат да се трансфектират in vivo чрез инжектиране на плазмид или рекомбинантен нереплициращ се аденовирус в пациента. От друга страна, DC могат да се трансфектират (инфектират) in vitro чрез третиране на изолирани прекурсорни дендритни клетки с плазмид (или рекомбинантен нереплициращ се аденовирус). След това, дендритните клетки се инжектират в пациента.
Без да искат да се придържат към тази теория, изобретателите вярват, че успешната имунотерапия изисква прицелният антиген да бъде представен от дендритните клетки, едновременно до хелперите (помощниците) (CD 4+ Т клетки) и до ефекторите (CD 8+ Т клетки) на имунната система. Разпознаването от CD 4+ Т клетки изисква антигенните пептиди да бъдат експресирани заедно с клас II МНС молекулите върху повърхността на DC. Това може да се постигне чрез in vivo или in vitro трансфекция на DC с плазмид, или
чрез инфектиране на DC с рекомбинантен аденовирус, като и двата вектора носят ДНК за извънклетъчния участък на PSMA.
Експресията на PSMA е ограничена до епителните клетки на простатата (Horoszewicz JS, Kawinski Е and Murphy GP. Monoclonal antibodies to a new antigenic marker in epithelial prostate cells and serum of prostate cancer patients. Anticancer Res. 7:927; 1987) и до мозъчна тъкан при човека (Luthi-Carter R, Barczak АК, Speno Η, Coyle JT. Molecular characterization of human brain N-acetylated alphalinked acidic dipeptidase (NAALADase). J Pharmacol. Exp. Therap. 286:1020; 1998). Антигенът се експресира върху нормални и неопластични клетки на простатата или върху туморни метастазиращи клетки на простатата. Докато други маркерни антигени за карцинома на простатата, като киселата фосфатаза на простатата и специфичен за простатните клетки антиген (PSA) се секретират, PSMA представлява интегрален мембранен гликопротеин.
Клониране на извънклетъчния фрагмент на PSMA кДНК на извънклетъчния PSMA фрагмент (2118 нд) се получава от тотална мРНК, от туморна клетъчна линия на простатата LNCaP.FGC-CRL 1740 (ATCC). За обратната транскрипция на мРНК е използван специфичен за PSMA 3’ праймер и обратна транскриптаза (RT) на птичи миелобластозен вирус (Boehringer). Получената кДНК след това се амплифицира, чрез Високо Ефективна PCR Система (Boehringer), PCR продуктите, с очакваната големина, се пречистват от гела и се клонират в pCR2.1 вектор (Invitrogen). Два клона са избрани и проверени чрез ДНК секвениране. Полученият конструкт носи последователност в която липсва мутация в извънклетъчния PSMA участък, към 5’ края на
N която при PCR амплификацията е добавена Notl-Kozak секвенция, а към 3’ края - Sful последователност.
Приготвяне на експресираш се в клетки от бозайници вектор, за субклониране на извънклетъчната част на PSMA.
За субклонирането се използва модифицирана форма на вектора pcDNA3.1 (Invirtrogen). Векторът носи промотор/енхансерен район, кодиращ човешки цитомегаловирусни (CMV) белтъци, експресиращи се в ранните етапи на инфекцията, който позволява високо ефективна експресия на рекомбинантен белтък, както и 3’ фланкираща област, съдържаща полиаденилиращ сигнал за говежди растежен хормон, който дава възможност за по-ефективна терминация на транскрпцията и за удължаване на полу-живота на мРНК in vivo. Генът за резистентност към неомицин (NRG) се отстранява чрез изрязване с Nael ендонуклеазата, и последващо лигиране на краищата след пречистване на NRG - свободния фрагмент от гела.
Субклониране на извънклетъчния участък на PSMA в експресираш се от клетки на бозайници вектор.
Извънклетъчният фрагмент от PSMA е субклониран в NotlSful ендонуклеазните места в модифицирания, експресиращ се в бозайници вектор - pc DNA 3.1. Местата Notl и Sful, както и Kozak последователността са въведени при RT-PCR етапа на клонирането.
Депозиране на модифициран, експресиращ се в клетки на бозайници вектор pc DNA3.1.
Модифицираният вектор, експресиращ се в клетки на .. бозайници, е депозиран под № 203 168, от 28 Август, 1998 год. в American Type Culture Collection, 10801, University Blvd, Manassas, Virginia, 20110.
Приготвяне на рекомбинантен, нереплицираш се аденовирус Ad5-PSMA.
о
Ad5-PSMA рекомбинантният аденовирус е приготвен чрез използване на кит от Quantum Biotechnology Inc. Пренасящия вектор, се конструира, чрез субклониране на извънклетъчния участък на PSMA, в плазмида pAdBN (Quantum). За тази цел PSMA фрагментът е предварително субклониран в немодифицирана форма pCDNA3.1 вектор (Invitrogen). Участъкът от плазмида, който съдържа CMV промотора - PSMA фрагмента - поли-А сигнала, се изрязва, чрез Bglll и Smal рестрикционни ендонуклеази. Полученият продукт е пречистен от агарозен гел и субклониран в Bglll-EcoRV местата на pAdBN пренасящия вектор (Quantum Biotechnologies Inc., Montreal, Canada).
Линейната форма на Аденовирусната ДНК, е приготвена чрез Clal, и ко-трансфектирана в 293 А клетки. Рекомбинантният аденовирус е пречистен три пъти и клониран и са подбрани позитивните клонове, експресиращи PSMA чрез имуноблотинг. Позитивният клон е амплифициран в 293 клетки и след това пречистен чрез два последователни градиента на CsCl. Накрая, пречистеният вирус, се диализира срещу 5 % захарозен разтвор на PBS.
Нереплициращият се рекомбинантен аденовирус Ad5-PSMA е депозиран в American Type Culture Collection под №_____________ от 28 Август 1998,10801 Unievrsity Blvd., Manassas, Virginia 20110.
IN VITRO ЕКСПЕРИМЕНТИ
Генен трансфер чрез нереплициращ се аденовирус.
От прясно взета кръв от здрави анонимни донори са изолирани мононуклеарни клетки на периферната кръв (РВМС), чрез центрофугиране в плътностен Ficol-Paque градиент при 468 g на 22 0 С за 30 минути. РВМС, 1х106 клетки/ml, се ресуспендират в културална среда RPMI с 5% автоложен серум (пълна среда - СМ) и оставени да адхерират в 175 cm2 полистиренови културални матраци. Матраците се инкубират за на 37°С, и се разклащат всеки 20 минути по време на инкубацията. Неадхериралите клетки се отстраняват след 1 час на 37°С и адхериралите клетки се култивират в 30 ml среда, съдържаща 2 ng/ml гранулоцитен - макрофагов колонно стимулиращ фактор (GM-CSF) получен от Immunex, Seattle, WA и 4 ng/ml интерлевкин-4 (IL-4), получен от Sigma. Клетките са култивирани 5 дена, след което дендритните клетки (DCs) се събират чрез центрофугиране и след контрол под светлинен микроскоп, и flow-цитометрия са използвани в експериментите.
DCs са инфектирани с вируса при мултиплициране на инфекцията (MOI) 100. Експериментите, включващи инфектиране се провеждат в полипропиленови епруветки, за да се избегне клетъчната адхезия. 50 μΐ от вирусната суспензия се инокулират в 50 μΐ клетъчна суспензия (1.5х106 клетки) в пълна RPMI-1640 среда, съдържаща 2% автоложен серум. След инокулирането, клетките се инкубират за 90 минути на 37°С и 5%СО2 в пълна RPMI-1640 среда, съдържаща 2% автоложен серум, след което се промиват трикратно и инкубират в RPMI-1640 среда, съдържаща 10 % автоложен серум за още 24 часа на 37°С и 5% СО2. Експресията на PSMA е изследвана чрез имуноблотинг. Ефективността на аденовирусната .. инфекция на DC в нашите експерименти е 20 %, т.е. 20% от DC са инфектирани с рекомбинантен аденовирус.
В допълнителни експерименти DCs са получени от HLA-A2+ пациенти, инфектирани с аденовирус и култивирани в СМ за 3 дена при 37°С, в присъствието на автоложни Т клетки. В края на инкубацията Т клетките се събират, CD 8+ Т клетките се пречистват на база на негативна селекция чрез анти-CD 4+ антитела и се анализира тяхната цитотоксичност. CD8+ Т клетките стимулирани от автоложните DC, инфектирани с Ad5-PSMA, са цитотоксични към туморната линия на простатата LNCaP.FGC (с HLA А2+ фенотип), но не и към Jurkat (Т левкемия) или U937 (миеломоноцитна клетъчна линия) клетки. За сравнение, прясно изолирани Т клетки не показват цитотоксичност срещу която и да е от трите клетъчни линии.
IN VIVO ЕКСПЕРИМЕНТИ
Лечение на пациенти с плазмид или аденовирус.
Модел на изследването:
Една група от седем пациента са инжектирани трикратно с една и същата доза (100 pg) от ХС PSMA-ДНК ваксина (ХС PSMACD86 плазмид), през интервали от една седмица. Пет пациента (виж табл.1) са получили 10,000 Ш Левкин (Immunex, Saettle, WA) веднага при прилагане на плазмида или 24, или 48 часа след имунизацията.
Допълнително тези седем пациента и група от 2 нови, са инжектирани трикратно два месеца по късно, с ваксина (Ad5-XCPSMA) от рекомбинантен нереплициращ се аденовирус (5x10 PFU за еднократно приложение) през интервали от една седмица.
Плазмидът е инжектиран интрамускулно или интрадермално между първия и втория пръст на десния крак. Вирусната ваксина се прилага интрадермално в пъпната област.
В продължение 2 часа след ваксинирането, се провежда постоянен контрол на клиничното състояние и жизнените показатели. Ако състоянието на пациента е стабилно, на него му се разрешава да напусне болницата. Извършва се кратък контролен преглед на 24 час (или на 48 час, в случаи на GM-CSF инокулация).
Включени критерии:
Всички пациенти подписаха формуляр за съгласие, преди да бъдат включени в изследването. Данните от контролните прегледи са споделяни с пациентите по време на изследването като на пациентите се напомня, че те могат да се откажат от участието си по всяко време.
Само пациенти с напреднала хормонална резистентност към рак или пациенти, неспособни да приемат хормонална терапия са включени в изследването.
Пациенти с предишна диагноза, сочеща друга малигнизация или със сериозна активна инфекция, или с други заболявания са изключени от изследването.
Контрол на изследването:
Стандартните лабораторни тестове включват СВС, анализ на урината, чернодробни ензими, анти-ядрени антитела, скорост на еритроцитната седиментация, PSA. На всеки пациент е направен тазово CAT сканиране, гръдна радиография и кардиография в началото и на 20 седмица (10 седмица за двамата пациенти имунизирани само с вирус). Сигурността се определя като липса на неблагоприятни клинични или лабораторни случаи, с особено внимание за локални реакции и реакции на целия организъм, както и за доказателство за анти-ядрено антитяло.
Допълнително беше направен анализ чрез flow цитометрия на клетките CD/HLADR+; CD4+; CD8+; CD3-/CD16+CD56+; CD3+; CD1+; CD25+; CD 19+, както и на съотношението CD4/CD8 преди и след имунотерапията.
Резултати.
Характеристика на участниците:
В изследването са включени девет мъже на възраст между 49 и 69 години с напреднал аденокарцином на простатата. Трима пациенти са с пълна простатектомия, 2 са подготвени за хирургическа интервенция, трима не подлежат на операция и един подлежа на операция, но има други противопоказания за хирургическо лечение. Двама от пациентите умряха поради напреднала форма на рака.
Резултати от контрола за безопасност:
Имунизациите са понесени добре. Не са регистрирани изменения в жизнените показатели след инжектирането или по време на последвалите контролни прегледи.
Пациентите, които са получили интрадермална имунизация с плазмид, показват слаби DTH-подобни реакции, 24 часа след третата имунизация. Пациенти №№ 8 и 9 развиват DTH реакция 24 часа след всяко прилагане на рекомбинантния аденовирус. Пациенти с № от 1 до 7 не показват DTH-подобна реакция 24 часа след първата имунизация с вирусния вектор, но развиват DTH след втората и третата имунизация. Всички DTH-подобни локални реакции протекоха леко и преминаха до 72 часа след имунизацията.
Пациент № 4 показа везикуларен обрив по гърба след ·' последната вирусна имунизация, който премина през следващите два дни без лечение.
Пациент № 7 получи папуларен уртикарио-подобен обрив, с малки кръвоизливи в центъра, който се разви 24 часа след последната плазмидна имунизация и който изчезна след прекъсване на приложената антибиотикова терапия.
Не се наблюдават значителни промени в скоростта на еритроцитната седиментация, СВС, серумния креатинин или други кръвни химични показатели, или при анализ на урината. Стойностите на химичните показатели на чернодробния серум, остават в норма при всички изследвани пациенти.
Не са забелязани значителни промени при анализа на клетките CD/HLADR+; CD4+; CD8+; CD3-/CD16+CD56+; CD3+; CD1+; CD25+; CD19+, както и в съотношението CD4/CD8 преди и след имунотерапията.
При нито един от пациентите не се наблюдават аномални жизнени показатели след инжектирането, нито значително увеличаване в тигъра на анти-ядрените антитела, нито се откриват анти-ДНК антитела.
За PSA стойности, CAT-сканирания, костна сцинтиграфия или метастази в лимфните възли преди и след имунизацията виж таблици 1 и 2.
Таблици 1 и 2 показват, че при някои пациенти развитието на метастази при рак на простатата се забавя или спира.
Таблица 1. Пациентите се имунизират първоначално с PSMA плазмид три пъти, през интервали от една седмица. Два месеца покъсно всички пациенти, с изключение на пациент № 7, получават
V* три допълнителни имунизации през интервали от една седмица, с ’ рекомбинантен аденовирус.
| Пациент # | Етапна заболяването | Тип имунизация | Допълнително лечение | PSA (ng/ml) | СТ сканиране | LN | Костни метастази | Странични ефекти | ||||
| преди | след | преди | след | преди | след | Преди | след | |||||
| 1 | T4NxM2 не подлежи на опериралия | 3 х плазмид интрадермално 3 х AdSPSMA | орхиекгомия Casodex | 6.3 | +++ | +++ | + | ++ | ++ | екзитус | ||
| 2 | T2NoMo подлежи на опериралия* | Зх плазмид интрамускулно + GM-CSF 3xAd5PSMA | орхиекгомия Androcur | 14.38 | 0.28 | +++ | * | не | ||||
| 3 | T4NxMo не подлежи на оперирация | Зх плазмид интрадермално 3xAd5PSMA | орхиекгомия | 33.0 | 0.04 | +++ | ♦ | + | не | |||
| 4 | Т4МХМ2 след ΒΡΗ и TUR не подлежи на оперирация | 3 х плазмид интрадермално + GM-CSF Зх AdSPSMA | орхиектомия (текущо лечение с Flucinome) | 1.11 | 3.8 | ++ | ++ | + | ++ | не | ||
| 5 | T^NoMq в подготовка за операция | 3 х плазмид интрадермално + GM-CSF 3xAd5PSMA | MAB | 3.01 | 0.05 | ++ | * | не | ||||
| 6 | Т3цИхМ, следТЦЯ | 3 х плазмцд интрадермално + GM-CSF 3xAd5PSMA | орхиектомия МАВ | 1.6 | 0.04 | +++ | * | не | ||||
| 7 | T4NxM2 метастази след простатекгомия | 3 х плазмид интрамускулно + GM-CSF | МАВ | 100 | +++ | F+ | ++ | екзитус кожен обрив ««* |
Легенда:
++; +++ увеличаване размерите на простатната жлеза или присъствие на метастазиращ тумор, след пълна простатектомия (пациент № 7)
-;+ липса (-) или присъствие на костни метастази или метастази в лимфните възли * значително намаляване размерите на простатната жлеза ** - Пациент № 7. Липса на уринен екскрет от двата уретера, което се дължи на метастази преди имунотерапията. Поява на диуреза от десния бъбрек един месец след последната имунизация. Смърт, ’ поради механично блокиране от метастази в илеуса, последвани от метастази в ректума и сигмоидеума.
*** - Пациент № 7 имаше лек кожен обрив 24 часа след третото въвеждане на плазмид, който изчезна след преустановяване на съвместната антибиотикова терапия.
* - Пациент № 2 не може да бъде подложен на операция, поради кардиоваскуларни усложнения.
МАВ - максимална андрогенна блокада със Zoladex, Casodex, или Flucinome орхиектомия - във всички случаи билатерална
Таблица 2. Пациенти, имунизирани 3 пъти с рекомбинантен аденовирус през интервали от една седмица.
| ппациент # | - Фазана 'заболяването | Тип имунизация | Допълнително лечение | PSA(ng/ml) Преди след | ст сканиране преди след | LN преди след | Костни метастази | ограничи ефекти | ||||
| 8 | Τ4Ν2Μ поява на метастази след пълна простатектомия | Зх Ad5PSMA | МАВ | 32 | NA | +++ | NA | +++ | NA | NA | не | |
| - 9 > | τ4νμ2 поява на метастази след пълна простатектомия | Зх Ad5PSMA | МАВ | 4.47 | NA | +++ | NA | NA | +++ | NA | не |
++; +++ липса (-) или присъствие на локални туморни метастази, или метастази в лимфните възли
МАВ - максимална андрогенна блокада с Zoladex, Casodex или Flucinome
ΝΑ - няма налични
За специалистите в областта е очевидно, че примерите и вариантите описани тук са илюстративни и не са лимитиращи и, че могат да се използват други примери, които не се различават от духа и обхвата на това изобретение, както е указано в претенциите.
Claims (32)
1. Методът за иницииране на експресия на антигени в бозайник или негови клетки, които са функционално неактивни, без да повлиява върху ефективността на транскрипцията и транслацията на ДНК, транслацията на РНК или на образуването на антигенни пептиди, характеризиращ се с това, че включва етапа:
въвеждане в бозайник или негови клетки на ефективно количество РНК, плазмидна ДНК, или вирусен вектор, включващ ДНК или РНК, кодиращи променен антиген, който е функционално неактивен и още непроменен по отношение на ефективността на транскрипция и транслация на ДНК, транслацията на РНК, или образуване на антигенни пептиди.
2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че промененият антиген е скъсена форма на антигена.
3. Метод съгласно претенция 2, характеризиращ се с това, че скъсената форма на антигена е извънклетъчния домен на антигена.
4. Метод съгласно претенция 3, характеризиращ се с това, че антигенът е човешки, специфичен за простатните клетки мембранен антиген.
5. РНК или плазмидна ДНК, кодираща променена форма на човешки рак-асоцииран антиген, който е функционално неактивен и още непроменен по отношение на ефективността на транскрипция и транслация на ДНК, транслация на РНК, или образуването на антигенни пептиди.
6. РНК или плазмидна ДНК съгласно претенция 5, характеризираща се с това, че променената форма на човешки рак-асоцииран антиген е извънклетъчната част от човешки специфичен за простатните клетки мембранен антиген.
7. Плазмидна ДНК съгласно претенция 6, с № за Достъп 203168 в АТСС.
8. Нуклеиновата киселина със секвенция SEQ ID NO: 1
9. Извънклетъчната част от човешки специфичен за простатните клетки мембранен антиген, кодиран от нуклеинова киселина SEQ ID NO: 1
10. Плазмидна ДНК съгласно претенция 5, характеризираща се с това че извънклетъчната част на човешкия специфичен за простатните клетки мембранен антиген, е кодиран от секвенцията на нуклеинова киселина SEQ ID NO: 1 φ
11. Вирусен вектор, характеризиращ се с това че включва РНК или ДНК, където споменатият вектор, кодиращ променена форма на човешки рак-асоцииран антиген, който е функционално неактивен и още непроменен, по отношение на ефективността на транскрипция и транслация на ДНК, транслация на РНК, или образуване на антигенни пептиди.
12. Вирусен вектор съгласно претенция 11, характеризиращ се с това, че промененият човешки рак-асоцииран антиген е извънклетъчна част на човешки специфичен за простатните клетки ©мембранен антиген.
13. Вирусен вектор съгласно претенция 12, характеризиращ се с това, че вирусният вектор е рекомбинантен нереплициращ се аденовирус, включващ ДНК кодираща извънклетъчната част на човешкия специфичен за простатните клетки мембранен антиген.
14. Вирусен вектор съгласно претенция 13, имащ номер за Достъп в АТСС_____.
15. Вирусен вектор съгласно претенция 13, характеризиращ се с това че извънклетъчната част на човешкия специфичен за простатните клетки мембранен антиген е кодиран от секвенцията на нуклеинова киселина SEQ ID NO: 1.
16. Метод за лечение на рак, характеризиращ се с това, че включва прилагане на ефективно количество РНК или плазмидна ДНК на нуждаещ се болен от рак пациент, съгласно претенция 5.
17. Метод съгласно претенция 16, характеризиращ се с това че, пациентът е с диагноза рак на простатата и РНК или плазмидната ДНК е тази, съгласно претенция 6.
18. Методът съгласно претенция 17, характеризиращ се с това, че плазмидът е този, съгласно претенция 7.
19. Методът съгласно претенция 17, характеризиращ се с това, че плазмидната ДНК включва тази от SEQ ID NO: 1.
20. Метод за лечение на рак, характеризиращ се с това, че включва прилагането на ефективно количество от вирусен вектор на нуждаещ се и болен от рак пациент, съгласно претенция 11.
21. Методът съгласно претенция 20, характеризиращ се с това че пациентът е с рак на простатата и че вирусният вектор е вирусен вектор, съгласно претенция 13
22. Методът съгласно претенция 21, характеризиращ се с това, че вирусния вектор е този, съгласно претенция 14.
23. Методът съгласно претенция 13 характеризиращ се с това, че ДНК, кодираща извънклетъчната част на човешкия специфичен за простатните клетки мембранен антиген има секвенция SEQ ID NO: 1.
24. Методът за лечение на рак съгласно претенция 16, характеризиращ се по-нататък с това, че включва етапите на изчакване на подходящ интервал след етапа съгласно претенция 16 и прилагане на бустер доза от ефективното количество от вирусния вектор на пациента, съгласно претенция 11.
25. Методът за лечение на рак на простатата съгласно претенция 17, характеризиращ се по-нататък с това, че включва етап на изчакване на подходящ интервал след етапа съгласно претенция 17 и прилагане на бустер доза от ефективно количество от вирусния вектор на пациенти, съгласно претенция 13.
26. Методът за лечение на рак на простатата съгласно претенция 25, характеризиращ се с това че плазмидната ДНК е тази съгласно претенция 7, и че вирусния вектор е този, съгласно претенция 14.
27. Методът за лечение на рак съгласно претенция 20, характеризиращ се по-нататък с това, че включва изчакване на подходящ интервал след етапа съгласно претенция 20 и прилагане на бустер доза от ефективно количество от РНК или плазмидна ДНК на пациента, съгласно претенция 5.
28. Методът за лечение на рак на простатата съгласно претенция 21, характеризиращ се по-нататък с това, че включва етапи на изчакване на подходящ интервал, след етапа съгласно претенция 21 и прилагане на бустер доза от ефективното количество РНК или плазмидна ДНК на пациента, съгласно претенция 6.
29. Методът за лечение на рак на простатата съгласно претенция 21, характеризиращ се по-нататък с това, че включва етап на изчакване на подходящ интервал, след етапа съгласно претенция 21 и прилагане на бустер доза от ефективно количество от РНК или плазмидна ДНК на пациента, съгласно претенция 7.
30. Метод за лечение на рак, характеризиращ се с това, че включва прилагане на ефективно количество автоложни дендритни клетки на нуждаещ се и болен от рак пациент, които са култивирани in vitro в присъствие или на РНК, или на плазмидна ДНК, съгласно претенция 5, или на вирусния вектор, съгласно претенция 11.
31. Методът за лечение на рак съгласно претенция 30, характеризиращ се с това, че пациентът е с рак на простатата и че РНК или плазмидната ДНК е съгласно претенция 6 и че вирусният вектор е този, съгласно претенция 12.
32. Методът за лечение на рак на простатата съгласно претенция 31, характеризиращ се с това, че РНК или плазмидната ДНК е тази, съгласно претенция 7 и че вирусният вектор е този, съгласно претенция 14.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/164,034 US6387888B1 (en) | 1998-09-30 | 1998-09-30 | Immunotherapy of cancer through expression of truncated tumor or tumor-associated antigen |
| PCT/US1999/020508 WO2000018933A1 (en) | 1998-09-30 | 1999-09-09 | Immunotherapy of cancer through expression of truncated tumor or tumor-associated antigen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG106028A true BG106028A (bg) | 2002-12-29 |
Family
ID=22592693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG106028A BG106028A (bg) | 1998-09-30 | 2001-10-18 | Имунотерапия на рак чрез експресия на скъсен туморен или тумор-асоцииран антиген |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6387888B1 (bg) |
| AU (1) | AU5911999A (bg) |
| BG (1) | BG106028A (bg) |
| CA (1) | CA2368856A1 (bg) |
| IL (1) | IL145800A0 (bg) |
| WO (1) | WO2000018933A1 (bg) |
| ZA (1) | ZA200108175B (bg) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030185830A1 (en) * | 1997-02-25 | 2003-10-02 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| US7517952B1 (en) * | 1997-02-25 | 2009-04-14 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| US20060024301A1 (en) * | 1997-02-25 | 2006-02-02 | Corixa Corporation | Prostate-specific polypeptides and fusion polypeptides thereof |
| US6897062B1 (en) * | 1999-04-09 | 2005-05-24 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | DNA encoding the prostate-specific membrane antigen-like gene and uses thereof |
| GB0020953D0 (en) * | 2000-08-24 | 2000-10-11 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| AU2001294181A1 (en) * | 2000-10-05 | 2002-04-15 | Takeda Chemical Industries Ltd. | Novel protein, process for producing the same and use thereof |
| EP1383802A4 (en) * | 2001-03-30 | 2005-08-03 | Univ California | ANTI-MUC-1 SINGLE CHAIN ANTIBODY FOR TARGETING TUMORS |
| US7183388B2 (en) * | 2001-03-30 | 2007-02-27 | The Regents Of The University Of California | Anti-MUC-1 single chain antibodies for tumor targeting |
| WO2003008537A2 (en) * | 2001-04-06 | 2003-01-30 | Mannkind Corporation | Epitope sequences |
| US7731648B2 (en) * | 2001-07-25 | 2010-06-08 | Aduro Biotech | Magnetic nanoscale particle compositions, and therapeutic methods related thereto |
| US7951061B2 (en) * | 2001-07-25 | 2011-05-31 | Allan Foreman | Devices for targeted delivery of thermotherapy, and methods related thereto |
| US7074175B2 (en) | 2001-07-25 | 2006-07-11 | Erik Schroeder Handy | Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles |
| US6997863B2 (en) * | 2001-07-25 | 2006-02-14 | Triton Biosystems, Inc. | Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles |
| AU2002326961A1 (en) * | 2001-10-10 | 2003-04-22 | Centocor, Inc. | Nucleic acid vaccines using tumor antigen encoding nucleic acids with cytokine adjuvant encoding nucleic acid |
| US20050215472A1 (en) * | 2001-10-23 | 2005-09-29 | Psma Development Company, Llc | PSMA formulations and uses thereof |
| WO2003034903A2 (en) * | 2001-10-23 | 2003-05-01 | Psma Development Company, L.L.C. | Psma antibodies and protein multimers |
| AU2003219983A1 (en) * | 2002-03-01 | 2003-09-16 | Applied Immune Technologies | Immunotherapy for prostate cancer using recombinant bacille calmette-guerin expressing prostate specific antigens |
| ITMN20020013A1 (it) | 2002-04-04 | 2003-10-06 | Amfag Spa | Doccia estraibile da cucina |
| US20040156846A1 (en) * | 2003-02-06 | 2004-08-12 | Triton Biosystems, Inc. | Therapy via targeted delivery of nanoscale particles using L6 antibodies |
| WO2004096238A1 (en) * | 2003-04-01 | 2004-11-11 | Centocor, Inc. | Nucleic acid compositions and methods for use |
| WO2005000889A1 (en) * | 2003-06-05 | 2005-01-06 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Immunogenic peptides for the treatment of prostate and breast cancer |
| AU2004249254B2 (en) * | 2003-06-17 | 2010-07-08 | Mannkind Corporation | Combinations of tumor-associated antigens for the treatment of various types of cancers |
| EP3072522B1 (en) | 2005-01-06 | 2019-04-24 | Novo Nordisk A/S | Anti-kir combination treatments and methods |
| EP2567976B1 (en) | 2005-03-23 | 2017-07-19 | Genmab A/S | Antibodies against CD38 for treatment of multiple myeloma |
| JP2007202490A (ja) * | 2006-02-02 | 2007-08-16 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 動物細胞用新規発現ベクター |
| KR100896483B1 (ko) | 2007-07-13 | 2009-05-08 | 연세대학교 산학협력단 | Ｉｌ-12 및 4-1ｂｂｌ을 발현하는 종양 선택적 살상 재조합아데노바이러스 및 수지상 세포를 유효성분으로 포함하는항종양용 약제학적 조성물 |
| WO2009046739A1 (en) * | 2007-10-09 | 2009-04-16 | Curevac Gmbh | Composition for treating prostate cancer (pca) |
| UA109633C2 (uk) | 2008-12-09 | 2015-09-25 | Антитіло людини проти тканинного фактора | |
| US8565892B2 (en) * | 2009-10-31 | 2013-10-22 | Qteris, Inc. | Nanoparticle-sized magnetic absorption enhancers having three-dimensional geometries adapted for improved diagnostics and hyperthermic treatment |
| DK2580243T3 (da) | 2010-06-09 | 2020-01-13 | Genmab As | Antibodies against human cd38 |
| JP6055404B2 (ja) | 2010-06-15 | 2016-12-27 | ゲンマブ エー／エス | 組織因子に対するヒト抗体薬物結合体 |
| JP5504510B2 (ja) * | 2012-02-20 | 2014-05-28 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 動物細胞用新規発現ベクター |
| US10800856B2 (en) | 2012-06-07 | 2020-10-13 | Ambrx, Inc. | Prostate-specific membrane antigen antibody drug conjugates |
| JP2015521602A (ja) | 2012-06-14 | 2015-07-30 | アンブルックス, インコーポレイテッドAmbrx, Inc. | 核受容体リガンドポリペプチドに対して複合化されている抗ｐｓｍａ抗体 |
| WO2017087763A1 (en) * | 2015-11-18 | 2017-05-26 | Orbis Health Solutions Llc | T7 alpha viral vector system |
| JP7695885B2 (ja) | 2019-02-12 | 2025-06-19 | アンブルックス，インコーポレイテッド | 抗体－ｔｌｒアゴニストコンジュゲートを含有する組成物、その方法、及び使用 |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4861589A (en) | 1987-03-23 | 1989-08-29 | Trustees Of Boston University | Method for therapeutically treating abnormal cells expressing a major histocompatibility complex class II antigen using cytolytic inducer T4 cells |
| US5013645A (en) | 1987-04-14 | 1991-05-07 | Abbott Laboratories | Immunological methods and materials for detection of tumor associated antigens |
| US5660834A (en) | 1988-03-11 | 1997-08-26 | The Biomembrane Institute | Monoclonal antibodies and vaccine development directed to human cancer-associated antigens by immunization with carbohydrate-carrier conjugates |
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| US5693622A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-02 | Vical Incorporated | Expression of exogenous polynucleotide sequences cardiac muscle of a mammal |
| US5045320A (en) | 1989-03-23 | 1991-09-03 | Medical Biology Institute | Large multivalent immunogen |
| US5773215A (en) | 1989-10-24 | 1998-06-30 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Tumor marker protein for cancer risk assessment |
| CA2405246A1 (en) | 1990-12-03 | 1992-06-11 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins with alterred binding properties |
| US5227471A (en) | 1992-01-30 | 1993-07-13 | Eastern Virginia Medical School Of The Medical College Of Hampton Roads | Monoclonal antibody PD41 that binds to a prostate mucin antigen that is expressed in human prostatic carcinoma |
| WO1993020185A1 (en) | 1992-04-01 | 1993-10-14 | Steinman Ralph M | Method for in vitro proliferation of dendritic cell precursors and their use to produce immunogens |
| ES2276390T3 (es) | 1992-11-05 | 2007-06-16 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Antigeno de membrana especifico de la prostata. |
| AU6816194A (en) | 1993-04-20 | 1994-11-08 | Robinson, William S. | Methods and materials for treatment of individuals infected with intracellular infectious agents |
| IT1264516B1 (it) | 1993-05-31 | 1996-09-24 | Biotop Sas Di Rita Cassarin | Cellule dendritiche immortalizzate |
| ATE303160T1 (de) | 1993-08-11 | 2005-09-15 | Jenner Technologies | Impfstoff gegen prostatakrebs |
| US5849719A (en) | 1993-08-26 | 1998-12-15 | The Regents Of The University Of California | Method for treating allergic lung disease |
| US5804566A (en) | 1993-08-26 | 1998-09-08 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host through administration of naked polynucleotides with encode allergenic peptides |
| US5985847A (en) | 1993-08-26 | 1999-11-16 | The Regents Of The University Of California | Devices for administration of naked polynucleotides which encode biologically active peptides |
| US5679647A (en) | 1993-08-26 | 1997-10-21 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host against tumor-associated antigens through administration of naked polynucleotides which encode tumor-associated antigenic peptides |
| US5830877A (en) | 1993-08-26 | 1998-11-03 | The Regents Of The University Of California | Method, compositions and devices for administration of naked polynucleotides which encode antigens and immunostimulatory |
| US5935818A (en) | 1995-02-24 | 1999-08-10 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecule encoding alternatively spliced prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
| US5807978A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-15 | Kokolus; William J. | Immunogenic peptides of prostate specific antigen |
| US5788963A (en) | 1995-07-31 | 1998-08-04 | Pacific Northwest Cancer Foundation | Isolation and/or preservation of dendritic cells for prostate cancer immunotherapy |
| US5854206A (en) | 1995-08-25 | 1998-12-29 | Corixa Corporation | Compounds and methods for treatment and diagnosis of prostate cancer |
| US6224870B1 (en) * | 1997-01-24 | 2001-05-01 | Genitrix, Ltd. | Vaccine compositions and methods of modulating immune responses |
| NZ331866A (en) | 1996-03-15 | 2000-05-26 | Corixa Corp | Compounds for immunotherapy and immunodiagnosis of prostate cancer |
-
1998
- 1998-09-30 US US09/164,034 patent/US6387888B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-09-09 CA CA002368856A patent/CA2368856A1/en not_active Abandoned
- 1999-09-09 AU AU59119/99A patent/AU5911999A/en not_active Abandoned
- 1999-09-09 IL IL14580099A patent/IL145800A0/xx unknown
- 1999-09-09 WO PCT/US1999/020508 patent/WO2000018933A1/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-10-04 ZA ZA200108175A patent/ZA200108175B/en unknown
- 2001-10-18 BG BG106028A patent/BG106028A/bg unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU5911999A (en) | 2000-04-17 |
| ZA200108175B (en) | 2003-01-06 |
| CA2368856A1 (en) | 2000-04-06 |
| IL145800A0 (en) | 2002-07-25 |
| US6387888B1 (en) | 2002-05-14 |
| WO2000018933A1 (en) | 2000-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BG106028A (bg) | Имунотерапия на рак чрез експресия на скъсен туморен или тумор-асоцииран антиген | |
| CA2263503C (en) | Melanoma cell lines expressing shared immunodominant melanoma antigens and methods of using same | |
| EP0915708B1 (en) | Immunogenic composition comprising tumor associated antigen and human cytokine | |
| JPH06508025A (ja) | 癌胎児性抗原を発現する組換えウイルスとその使用方法 | |
| Kaufman et al. | Strategies for cancer therapy using carcinoembryonic antigen vaccines | |
| JP2019522984A (ja) | Ｈｅｒｖ−ｅ反応性ｔ細胞受容体および使用方法 | |
| Okada et al. | Dendritic cells transduced with gp100 gene by RGD fiber-mutant adenovirus vectors are highly efficacious in generating anti-B16BL6 melanoma immunity in mice | |
| Van Tendeloo et al. | Gene-based cancer vaccines: an ex vivo approach | |
| US7101543B2 (en) | Genetically modified cells expressing a TGFβ inhibitor, the cells being lung cancer cells | |
| JP2008501360A (ja) | ＣＥＡ−特異的な細胞毒性Ｔ細胞を生成する組み換えアデノウイルスＡｄＶＣＥＡで形質導入された樹枝状細胞、及びこれを含むワクチン並びに薬剤学的組成物 | |
| Blaszczyk-Thurin et al. | A DNA vaccine expressing tyrosinase-related protein-2 induces T-cell-mediated protection against mouse glioblastoma | |
| Okada et al. | AV. TK-mediated killing of subcutaneous tumors in situ results in effective immunization against established secondary intracranial tumor deposits | |
| Scholl et al. | Gene therapy applications to cancer treatment | |
| Tseng et al. | Gene therapy for pancreatic cancer | |
| Schadendorf | Gene-based therapy of malignant melanoma | |
| JP2012176994A (ja) | ＴＧＦβ阻害剤を発現する遺伝的に改変された細胞であって、肺癌細胞である細胞 | |
| JP2020524997A (ja) | 免疫応答を増強するための物質および方法 | |
| Havranek et al. | Advances in prostate cancer immunotherapy | |
| EP0825873B1 (en) | Anticancer vaccine comprising il6/il6 receptor transfected cells | |
| US20080075705A1 (en) | Method for increasing tumor cell immunogenicity using heat shock protein | |
| AU2004237854B2 (en) | Melanoma cell lines expressing shared melanoma antigens and methods of using same | |
| Çiftçi et al. | Current approaches in the treatment of melanoma-II: Immuno-and gene therapy | |
| Demiroğlu | Is prevention of cancer possible with tumor-specific vaccines? | |
| Lundberg | On immunotherapy against prostate cancer | |
| BENGA et al. | Workshop Q Tumor Immunology |