BRPI0608794A2

BRPI0608794A2 - processos e composições para a avaliação da função e distúrbios pulmonares

Info

Publication number: BRPI0608794A2
Application number: BRPI0608794-9A
Authority: BR
Inventors: Robert Peter Young
Original assignee: Synergenz Bioscience Ltd
Priority date: 2005-05-10
Filing date: 2006-05-10
Publication date: 2010-01-26
Also published as: RU2007145444A; MX2007013926A; JP2006314315A

Abstract

PROCESSOS E COMPOSIçõES PARA A AVALIAçãO DA FUNçãO E DISTúRBIOS PULMONARES. A presente invenção refere-se a processos para a avaliação do risco de desenvolvimento de doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), enfisema ou tanto COPD quanto enfisema em fumantes e não-fumantes utilizando a análise de polimorfismos genéticos. A presente invenção também se refere ao uso de polimorfismos genéticos na avaliação do risco de um indivíduo de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PROCESSOS E COMPOSIÇÕES PARA A AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO E DISTÚRBIOS PULMONARES".

Campo da Invenção

A presente invenção está direcionada a métodos para a avalia-

ção da função e/ou distúrbios pulmonares e, em particular, para a avaliação do risco do desenvolvimento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e enfisema em fumantes e não-fumantes utilizando a análise de polimorfis-mos genéticos e da expressão gênica alterada. A presente invenção também está direcionada ao uso de polimorfismos genéticos na avaliação do risco de um indivíduo de desenvolver COPD e enfisema. Antecedentes da Invenção

A doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) é a A- causa principal de morte nos países desenvolvidos e uma causa principal para read-missão em hospitais em todo o mundo. É caracterizada pela inflamação insi-diosa e destruição pulmonar progressiva. Se torna clinicamente evidente depois que a falta de ar por esforço é observada por fumantes afetados quando 50% ou mais da função pulmonar foram perdidos irreversivelmente. Esta perda da função pulmonar é detectada clinicamente através de vazões expiratórias reduzidas (especificamente o volume expiratório forçado em um segundo ou FEV1). Mais de 95% da COPD são atribuídos ao fumo de cigarros ainda apenas ou em torno de 20% de fumantes desenvolvem COPD (fumante susceptível). Os estudos mostram de forma surpreendente que a dose de fumo é responsável por apenas aproximadamente 16% da função pulmonar prejudicada. Um número de estudos com famílias que compara a concordância em irmãos (gêmeos ou não-gêmeos) mostra de forma coerente uma forte tendência familiar e a pesquisa de genes de susceptibilidade à doença COPD (ou que modificam a doença) está em andamento.

Apesar dos avanços no tratamento de doença das vias aéreas, as terapias atuais não alteram significativamente o histórico natural da COPD com perda progressiva da função pulmonar causando falência respiratória e morte. Embora tenha sido mostrado que cessar o ato de fumar reduzeste declínio na função pulmonar, se isto não for atingido dentro dos primeiros 20 anos ou aproximadamente de fumo para os fumantes susceptíveis, a perda é considerável e os sintomas de piora de falta de ar não podem ser evitados. Os estudos de cessação do fumo indicam que as técnicas para ajudar os fumantes a pararem possuem sucesso limitado. Análoga à descoberta do colesterol no soro e sua ligação com a doença da artéria coronaria-na, há uma necessidade de melhor entender os fatores que contribuem para a COPD de forma que testes que identifiquem fumantes em risco possam ser desenvolvidos e que novos tratamentos possam ser descobertos para reduzir os efeitos adversos do fumo.

Um número de estudos epidemiológicos mostrou de forma coerente que a doses de exposição de 20 ou mais maços-ano, a distribuição na função pulmonar tende em direção à trimodalidade com uma proporção de fumantes mantendo uma função pulmonar normal (fumantes resistentes) até mesmo após 60+ maços-ano, uma proporção exibindo reduções modestas na função pulmonar que nunca desenvolveu sintomas e uma proporção que exibe uma perda acelerada na função pulmonar que invariavelmente desenvolve a COPD. Isto sugere que entre os fumantes há 3 populações, aquela resistente ao desenvolvimento da COPD, aquela com risco modesto e aquela com alto risco (denominada de fumantes susceptíveis).

A COPD é uma doença heterogênea que abrange, em graus variáveis, enfisema e bronquite crônica que se desenvolvem como parte de um processo de remodelamento após o dano inflamatório proveniente da exposição ao fumo de tabaco crônico e a outros poluentes do ar. É provável que muitos genes estejam envolvidos no desenvolvimento da COPD.

Até hoje, foi identificado um número de biomarcadores úteis no diagnóstico e na avaliação da propensão ao desenvolvimento de vários distúrbios pulmonares. Estes incluem, por exemplo, polimorfismos de um único nucleotídeo que incluem os seguintes: A-82G no promotor do gene que codifica a elastase de macrófagos humanos (MMP12); T->C dentro do códon 10 do gene que codifica o fator beta de crescimento transformante (TGFp); C+760G do gene que codifica a superóxido dismutase 3 (SOD3); T-1296Cdentro do promotor do gene que codifica o inibidor da metaloproteinase 3 (TIMP3); e polimorfismos em desequilíbrio de ligação (LD) com estes poli-morfismos, como descrito no Pedido de Patente Internacional PCT PCT/NZ02/00106 (publicado como WO 02/099134 e incorporado aqui em sua totalidade).

Seria desejável e vantajoso ter biomarcadores adicionais que pudessem ser utilizados para avaliar o risco de um indivíduo de desenvolver distúrbios pulmonares tais como doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e o enfisema ou um risco de desenvolver função pulmonar prejudicada relacionada com COPD/enfisema, particularmente se o indivíduo for >v um fumante.

É primariamente a tais biomarcadores e ao uso dos mesmos nos métodos para avaliar o risco de desenvolvimento de tais distúrbios que a presente invenção está direcionada.

Sumário da Invenção

A presente invenção se baseia primariamente na descoberta de que certos polimorfismos são encontrados mais freqüentemente em indivíduos com COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema que os indivíduos de controle. A análise destes polimorfismos descreve uma associação entre genótipos e o risco do indivíduo de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Assim, de acordo com um aspecto é fornecido um método de determinação do risco de um indivíduo de desenvolver uma ou mais doenças pulmonares obstrutivas que compreende a análise de uma amostra do dito indivíduo em relação à presença ou à ausência de um ou mais polimorfismos selecionados do grupo que consiste em: -765 C/G no promotor do gene que codifica a Ciclooxigenase 2 (COX2); 105 C/A no gene que codifica a Interleucina18 (IL18); -133 G/C no promotor do gene que codifica a IL18;

-675 4G/5G no promotor do gene que codifica o Inibidor do Ativador de Plasminogênio 1 (PAI-1);

874 A/T no gene que codifica o Interferon-y (IFN-y);+489 G/A no gene que codifica o Fator de Necrose de Tumor a (TNFa); C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;

E 469 K A/G no gene que codifica a molécula de Adesão Intracelular 1 (I-CAM1);

Gly 881 Arg G/C no gene que codifica a Caspase (NOD2);

161 G/A no gene que codifica a lectina 2 de ligação à Manose (MBL2); -1903 G/A no gene que codifica a Quimase 1 (CMA1); Arg 197 Gln G/A no gene que codifica a N-Acetil transferase 2 (NAT2); -366 G/A no gene que codifica a 5 Lipo-oxigenase (ALOX5);

HOM T2437C no gene que codifica a Proteína do Choque Térmico 70 (HSP 70);

+13924 T/A no gene que codifica o Canal de Cloreto ativado por Cálcio 1 (CLCA1);

-159 C/T no gene que codifica o antígeno de diferenciação de Monócito CD-15 14(CD-14);

éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina; ou

-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica a Metaloproteinase de Matriz 1 (MMP1), com referência apenas ao alelo 1G;

em que a presença ou a ausência de um ou mais dos ditos polimorfismos é indicativa do risco de um indivíduo de desenvolver uma ou mais doenças . pulmonares obstrutivas tradas do grupo que consiste em doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), enfisema ou ambos COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

O um ou mais polimorfismos podem ser detectados diretamente ou através da detecção de um ou mais polimorfismos que estão em desequilíbrio de ligação com o dito um ou mais polimorfismos.

O desequilíbrio de ligação (LD) é um fenômeno em genética através do qual duas ou mais mutações ou polimorfismos estão em uma proximidade genética tal que são co-herdados. Isto significa que na genotipagem, a detecção de um polimorfismo como presente infere a presença do outro. (Reich DE e outros; Linkage disequilibrium in the human genome, Na-ture 2001, 411: 199-204.)O método pode compreender adicionalmente a análise de uma

amostra do dito indivíduo em relação à presença de um ou mais polimorfismos adicionais selecionados do grupo que consiste em:

16Arg/Gly no gene que codifica o Receptor Adrenérgico (32 (ADBR);

130 Arg/Gln (G/A) no gene que codifica a Interleucinal3 (IL13);

298 Asp/GIu (T/G) no gene que codifica a Oxido Nítrico Sintase 3 (NOS3);

He 105 Vai (A/G) no gene que codifica a Glutationa S Transferase P (GST-P);

Glu 416 Asp (T/G) no gene que codifica a proteína de ligação com a Vitamina D (VDBP);

Lys 420 Thr (A/C) no gene que codifica VDBP;

-1055 C/T no promotor do gene que codifica IL13;

-308 G/A no promotor do gene que codifica TNFoc;

-511 A/G no promotor do gene que codifica a Interleucina 1B (IL1B);

Tyr 113 His T/C no gene que codifica a epóxido hidrolase Microssomal (MEH);

His139 Arg G/A no gene que codifica MEH;

Gln 27 Glu C/G no gene que codifica ADBR;

-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica a Metaloproteinase de Matriz 1 (MMP1) com referência apenas ao alelo 2G;

-1562 C/T no promotor do gene que codifica a Metaloproteinase 9 (MMP9); M1 (GSTM1) nulo no gene que codifica a Glutationa S Transferase 1 (GST-1);

1237 G/A na região a 3' do gene que codifica a a1-antitripsina;

-82 A/G no promotor do gene que codifica MMP12;

T-^C dentro do códon 10 do gene que codifica TGFB; 760 C/G no gene que codifica SOD3;

-1296 T/C dentro do promotor do gene que codifica TIMP3;

ou a mutação S no gene que codifica a a1 -antitripsina.

Novamente, a detecção do um ou mais polimorfismos adicionais pode ser realizada diretamente ou através da detecção dos polimorfismos em desequilíbrio de ligação com o um ou mais polimorfismos adicionais.

A presença de um ou mais polimorfismos selecionados do grupoque consiste em:

genótipo -765 CC ou CG no promotor do gene que codifica COX2;

genótipo 130 Arg/Gln AA no gene que codifica IL13;

genótipo 298 Asp/GIu TT no gene que codifica NOS3;

genótipo Lys 420 Thr AA ou AC no gene que codifica VDBP;

genótipo Glu 416 Asp TT ou TG no gene que codifica VDBP;

genótipo Me 105 Vai AA no gene que codifica GSTP-1;

genótipo MS no-gene-que codifica a a1 -antitripsina;

genótipo +489 GG no gene que codifica TNFoc;

genótipo -308 GG no gene que codifica TNFa;

genótipo C89Y AA ou AG no gene que codifica SMAD3;

genótipo 161 GG no gene que codifica MBL2;

genótipo -1903 AA no gene que codifica CMA1;

genótipo Arg 197 Gln AA no gene que codifica NAT2;

genótipo His 139 Arg GG no gene que codifica MEH;

genótipo -366 AA ou AG no gene que codifica ALOX5;

genótipo HOM T2437C TT no gene que codifica HSP 70;

éxon 1 +49 CT ou o genótipo TT no gene que codifica a Elafina;

genótipo Gln 27 Glu GG no gene que codifica ADBR; ou

genótipo -1607 1G1G ou 1G2G no promotor do gene que codifica MMP1;

pode ser indicativa de um risco reduzido de desenvolver COPD, enfisema outanto COPD quanto enfisema.

A presença de um ou mais polimorfismos selecionados do grupo

que consiste em:

genótipo 105 AA no gene que codifica IL18;

genótipo -133 CC no promotor do gene que codifica IL18;

genótipo -675 5G5G no promotor do gene que codifica PAI-1;

genótipo -1055 TT no promotor do gene que codifica IL13;

genótipo 874 TT no gene que codifica IFN-y;

genótipo +489 AA ou AG no gene que codifica TNFa;

genótipo -308 AA ou AG no gene que codifica TNFa;

genótipo C89Y GG no gene que codifica SMAD3;genótipo E469K GG no gene que codifica ICAM1;

genótipo Gly 881 Arg GC ou CC no gene que codifica NOD2;

genótipo -511 GG no gene que codifica IL1B;

genótipo Tyr 113 His TT no gene que codifica MEH;

genótipo -366 GG no gene que codifica ALOX5;

genótipo HOM T2437C CC ou CT no gene que codifica HSP 70;

genótipo +13924 AA no gene que codifica CLCA1; ou

genótipo-159 CC no gene que codifica CD-14;

pode ser indicativa de um maior risco de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Os métodos da invenção são particularmente úteis em fumantes (tanto atuais como ex fumantes).

Será considerado que os métodos da invenção identificam duas categorias de polimorfismos - a saber aquelas associadas a um risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema (que podem ser denominadas de "polimorfismos protetores") e aquelas associadas a um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema (que podem ser denominadas de "polimorfismos de susceptibilidade").

Portanto, a presente invenção fornece ainda um método de avaliação do risco de um indivíduo de desenvolver doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito método compreendendo:

a determinação da presença ou da ausência de pelo menos um polimorfismo protetor associado com o risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema; e

na ausência de pelo menos um polimorfismo protetor, determinando a presença ou a ausência de pelo menos um polimorfismo de susceptibilidade associado a um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema;

em que a presença de um ou mais dos ditos polimorfismos protetores é indicativa de um risco reduzido de desenvolvimento de COPD, en-fisema ou tanto COPD quanto enfisema e a ausência de pelo menos um po-

limorfismo protetor em combinação com a presença de pelo menos um poli-

morfismo de susceptibilidade é indicativa de um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Preferencialmente, o dito pelo menos um polimorfismo protetor é selecionado do grupo que consiste em:

-765 C no promotor do gene que codifica COX2;

-130 Arg/Gln A no gene que codifica IL13;

298 Asp/GIu T no gene que codifica NOS3;

Lys 420 Thr A no gene que codifica VDBP;

Glu 416 Asp T no gene que codifica VDBP;

lie 105 Vai A no gene que codifica GSTP-1;

a mutação S no gene que codifica a a1-antitripsina;

+489 G no gene que codifica TNFoc;

-308 G no gene que codifica TNFoc;

C89Y A no gene que codifica SMAD3;

161 G no gene que codifica MBL2;

-1903 A no gene que codifica CMA1;

Arg 197 Gln A no gene que codifica NAT2;

His 139 Arg G no gene que codifica MEH;

-366 A no gene que codifica ALOX5;

HOM 2437 T no gene que codifica HSP 70;

éxon 1 +49 T no gene que codifica a Elafina;

Gln 27 Glu G no gene que codifica ADBR; ou

-1607 1G no promotor do gene que codifica MMP1.

Em uma outra modalidade, o dito pelo menos um polimorfismo

protetor é um genótipo selecionado do grupo que consiste no:

genótipo -765 CC ou CG no promotor do gene que codifica COX2;

genótipo 130 Arg/Gln AA no gene que codifica IL13;

genótipo 298 Asp/GIu TT no gene que codifica NOS3;

genótipo Lys 420 Thr AA ou AC no gene que codifica VDBP;

genótipo Glu 416 Asp TT ou TG no gene que codifica VDBP;genótipo Ne 105 Vai AA no gene que codifica GSTP-1;

genótipo MS no gene que codifica a oc1-antitripsina;

genótipo +489 GG no gene que codifica TNFa;

genótipo -308 GG no gene que codifica TNFa;

genótipo C89Y AA ou AG no gene que codifica SMAD3;

genótipo 161 GG no gene que codifica MBL2;

genótipo -1903 AA no gene que codifica CMA1;

-genótipo Arg 197 Gln AA no gene que codifica NAT2;

genótipo His 139 Arg GG no gene que codifica MEH;

genótipo -366 AA ou AG no gene que codifica ALOX5;

genótipo HOM T2437C TT no gene que codifica HSP 70;

éxon 1 +49 CT ou TT genótipo no gene que codifica a Elafina;

o genótipo Gln 27 Glu GG no gene que codifica ADBR; ou

o genótipo -1607 1G1G ou 1G2G no promotor do gene que codifica MMP1.

Opcionalmente, o dito método compreende a etapa adicional dedeterminação da presença ou da ausência de pelo menos um polimorfismoprotetor adicional selecionado do grupo que consiste em:

o genótipo +760GG ou +760CG dentro do gene que codifica SOD3;

o genótipo -1296TT dentro do promotor do gene que codifica TIMP3; ou

o genótipo CC (alelo P homozigoto) dentro do códon 10 do gene que codificaTGFB.

O pelo menos um polimorfismo de susceptibilidade pode ser umgenótipo selecionado do grupo que consiste no:

genótipo 105 AA no gene que codifica IL18;

genótipo -133 CC no promotor do gene que codifica IL18;

genótipo -675 5G5G no promotor do gene que codifica PAI-1;

genótipo -1055 TT no promotor do gene que codifica IL13;

genótipo 874 TT no gene que codifica IFN-y;

genótipo +489 AA ou AG no gene que codifica TNFa;

genótipo -308 AA ou AG no gene que codifica TNFa;

genótipo C89Y GG no gene que codifica SMAD3;

genótipo E469K GG no gene que codifica ICAM1;genótipo Gly 881 Arg GC ou CC no gene que codifica NOD2;

genótipo -511 GG no gene que codifica IL1B;

genótipo Tyr 113 His TT no gene que codifica MEH;

genótipo -366 GG no gene que codifica ALOX5;

genótipo HOM T2437C CC ou CT no gene que codifica HSP 70;

genótipo +13924 AA no gene que codifica CLCA1; ou

genótipo-159 CC no gene que codifica CD-14.

Opcionalmente, o dito método compreende a etapa de determinação da presença ou da ausência de pelo menos um polimorfismo de susceptibilidade adicional triada do grupo que consiste no:

genótipo -82AA dentro do promotor do gene que codifica MMP12;

genótipo -1562CT ou -1562TT dentro do promotor do gene que codifica MMP9;

genótipo 1237AG ou 1237AA (genótipos do alelo Tt ou tt) dentro da região a 3'do gene que codifica a a 1-antitripsina; ou

genótipo 2G2G dentro do promotor do gene que codifica MMP1.

Em uma forma preferida da invenção a presença de dois ou mais polimorfismos protetores é indicativa de um risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Em uma forma adicionalmente preferida da invenção a presença de dois ou mais polimorfismos de susceptibilidade é indicativa de um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Ainda em uma forma adicionalmente preferida da invenção a presença de dois ou mais polimorfismos protetores independente da presença de um ou mais polimorfismos de susceptibilidade é indicativa de risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método de determinação do risco de um indivíduo desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito método compreendendo a obtenção do resultado de um ou mais testes genéticos de uma amostra do dito indivíduo e a análise do resultado em relação à presença ou à ausência de um ou maispolimorfismos selecionados do grupo que consiste em:

-765 C/G no promotor do gene que codifica a Ciclooxigenase 2 (COX2);

105 C/A no gene que codifica a Interleucina18 (IL18);

-133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;

874 A/T no gene que codifica o Interferon-Y(IFN-y);

-+489 G/A no gene que codifica o Fator de Necrose de Tumor a (TNFa);

C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;

Gly 881Arg G/C no gene que codifica a Caspase (NOD2);

161 G/A no gene que codifica a lectina 2 de ligação à Manose (MBL2);

-1903 G/A no gene que codifica a Quimase 1 (CMA1);

Arg 197 Gln G/A no gene que codifica a N-Acetil transferase 2 (NAT2);

-366 G/A no gene que codifica a Lipo-oxigenase 5 (ALOX5);

HOM T2437C no gene que codifica a Proteína do Choque Térmico 70 (HSP 70);

-159 C/T no gene que codifica o antígeno de diferenciação de Monócito CD-14 (CD-14);

éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina;

ou um ou mais polimorfismos que estão em desequilíbrio de ligação com qualquer um ou mais destes polimorfismos;

em que um resultado que indica a presença ou a ausência de um ou mais dos ditos polimorfismos é indicativo do risco de um indivíduo de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Em um aspecto adicional a invenção fornece um método de determinação do risco de um indivíduo desenvolver doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito meto-do compreendendo a determinação da presença ou da ausência do alelo -765 C no promotor do gene que codifica COX2 e/ou do alelo S no gene que codifica a 1-antitripsina, em que a presença de qualquer um ou mais dos ditos alelos é indicativa de um risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Em um aspecto adicional a invenção fornece um método de determinação do risco de um indivíduo desenvolver doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito método compreendendo a determinação da presença ou da ausência do genótipo -765 CC ou CG no promotor do gene que codifica COX2 e/ou do genótipo MS no gene que codifica a 1 -antitripsina, em que a presença de qualquer um ou mais dos ditos genótipos é indicativa de um risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Em uma forma particularmente preferida da invenção é fornecido um método de determinação do risco de um indivíduo desenvolver doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, que compreende a análise de um ou mais polimorfismos selecionados do grupo que consiste em:

-765 C/G no promotor do gene que codifica COX2;

105 C/A no gene que codifica IL18;

-133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;

-675 4G/5G no promotor do gene que codifica PAI-1;

874 A/T no gene que codifica IFN-y, +489 G/A no gene que codifica TNFa;

C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;

E 469 K A/G no gene que codifica ICAM1;

Gly 881 Arg G/C no gene que codifica NOD2;

161 G/A no gene que codifica MBL2;

-1903 G/A no gene que codifica CMA1;

Arg 197 Gln G/A no gene que codifica NAT2;

-366 G/A no gene que codifica ALOX5;

HOM T2437C no gene que codifica HSP 70;+13924 T/A no gene que codifica CLCA1;

-159 C/T no gene que codifica CD-14;

éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina; ou

-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica MMP1 (com referência apenas ao alelo 1G)

em combinação com um ou mais polimorfismos selecionados do grupo que consiste em: 16Arg/Gly no gene que codifica ADBR; 130 Arg/Gln (G/A) no gene que codifica IL13;

298 Asp/GIu (T/G) no gene que codifica NOS3; lie 105 Vai (A/G) no gene que codifica GSTP; Glu 416 Asp (T/G) no gene que codifica VDBP; Lys 420 Thr (A/C) no gene que codifica VDBP; -1055 C/T no promotor do gene que codifica IL13;

a mutação S no gene que codifica a a1 -antitripsina;

-308 G/A no promotor do gene que codifica TNFoc; -511 A/G no promotor do gene que codifica IL1B; Tyr 113 His T/C no gene que codifica MEH; His 139 Arg G/A no gene que codifica MEH; ou

Gln 27 Glu C/G no gene que codifica ADBR.

Em um aspecto adicional é fornecido um método de determinação do risco de um indivíduo desenvolver doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, que compreende a análise de dois ou mais polimorfismos selecionados do grupo que consiste em:

-765 C/G no promotor do gene que codifica COX2;

105 C/A no gene que codifica IL18;

-133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;

-675 4G/5G no promotor do gene que codifica PAI-1;

874 A/T no gene que codifica IFN-y;

16Arg/Gly no gene que codifica ADBR;

130 Arg/Gln (G/A) no gene que codifica IL13;298 Asp/GIu (T/G) no gene que codifica NOS3;

lie 105 Vai (A/G) no gene que codifica Glutationa S transferase P (GST-P);

Glu 416 Asp (T/G) no gene que codifica VDBP;

Lys 420 Thr (A/C) no gene que codifica VDBP;

-1055 C/T no promotor do gene que codifica IL13;

a mutação S no gene que codifica a a1-antitripsina;

+489 G/A no gene que codifica TNFa;

C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;

E 469 K A/G no gene que codifica ICAM1;

Gly 881 Arg G/C no gene que codifica NOD2;

161 G/A no gene que codifica MBL2;

-1903 G/A no gene que codifica CMA1;

Arg 197 Gln G/A no gene que codifica NAT2;

-366 G/A no gene que codifica ALOX5;

HOM T2437C no gene que codifica HSP 70;

+13924 T/A no gene que codifica CLCA1;

-159 C/T no gene que codifica CD-14;

éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina;

-308 G/A no promotor do gene que codifica TNFa;

-511 A/G no promotor do gene que codifica IL1B;

Tyr 113 His T/C no gene que codifica MEH;

Arg 139 G/A no gene que codifica MEH;

Gln 27 Glu C/G no gene que codifica ADBR; ou

-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica MMP1 (com referência apenas ao alelo 1G).

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posição que se mapeia no códon 298 do gene que codifica NOS3.

A presença de glutamato na dita posição é indicativa de um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto en-fisema.

A presença de asparagina na dita posição é indicativa de riscoreduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posição que se mapeia no códon 420 do gene que codifica proteína de ligação com a Vitamina D.

A presença de treonina na dita posição é indicativa de um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

A presença de lisina na dita posição é indicativa de risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posição que se mapeia no códon 89 do gene que codifica SMAD3.

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posição que se mapeia no códon 469 do gene que codifica ICAM1.

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posição que se mapeia no códon 881 do gene que codifica NOD2.

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posição que se mapeia no códon 197 do gene que codifica NAT2.

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posição que se mapeia no códon 113 do gene que codifica MEH.

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posição que se mapeia no códon 139 do gene que codifica MEH.

Em várias modalidades, qualquer um ou mais dos métodos anteriores compreende a etapa de análise do aminoácido presente em uma posi-ção que se mapeia no códon 27 do gene que codifica ADBR.

Em uma forma preferida da invenção os métodos que são descritos aqui são realizados em associação a uma análise de um ou mais fatores de risco, que incluem um ou mais fatores de risco epidemiológico, associados a um risco de desenvolvimento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e/ou enfisema. Tais fatores de risco epidemiológico incluem, mas não estão limitados ao fumo ou à exposição ao tabaco, à idade, ao sexo e ao histórico familiar de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Em um aspecto adicional, a invenção fornece o uso de pelo menos um polimorfismo na avaliação do risco de um indivíduo de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, em que o dito pelo menos um polimorfismo é selecionado do grupo que consiste em:

-765 C/G no promotor do gene que codifica a Ciclooxigenase 2 (COX2);

105 C/A no gene que codifica Interleucinal 8 (IL18);

-133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;

874 A/T no gene que codifica o Interferon-y (IFN-y);

+489 G/A no gene que codifica o Fator de Necrose de Tumor a (TNFa);

C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;

Gly 881 Arg G/C no gene que codifica a Caspase (NOD2);

161 G/A no gene que codifica a lectina 2 de ligação à Manose (MBL2);

-1903 G/A no gene que codifica a Quimase 1 (CMA1);

Arg 197 Gln G/A no gene que codifica a N-Acetil transferase 2 (NAT2);

-366 G/A no gene que codifica a Lipo-oxigenase 5 (ALOX5);

HOM T2437C no gene que codifica a Proteína do Choque Térmico 70 (HSP 70);

-159 C/T no gene que codifica o antígeno de diferenciação de Monócito CD-14(CD-14);

éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina;

-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica a Metaloproteinase de Matriz 1 (MMP1), com referência apenas ao alelo 1G; ou

um ou mais polimorfismos em desequilíbrio de ligação com qualquer um dos ditos polimorfismos.

Opcionalmente, o dito uso pode ser em associação com o uso de pelo menos um polimorfismo adicional selecionado do grupo que consiste em:

16Arg/Gly no gene que codifica ADBR;

130 Arg/Gln (G/A) no gene que codifica IL13;

298 Asp/GIu (T/G) no gene que codifica NOS3;

Me 105 Vai (A/G) no gene que codifica GSTP;

Glu 416 Asp (T/G) no gene que codifica VDBP;

Lys 420 Thr (A/C) no gene que codifica VDBP;

-1055 C/T no promotor do gene que codifica IL13;

a mutação S no gene que codifica a a1 -antitripsina;

-308 G/A no promotor do gene que codifica TNFa;

-511 A/G no promotor do gene que codifica IL1B;

Tyr 113 His T/C no gene que codifica MEH;

His 139 Arg G/A no gene que codifica MEH;

Gln 27 Glu C/G no gene que codifica ADBR;

-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica MMP1;

-1562 C/T no promotor do gene que codifica MMP9;

M1 (GSTM1) nulo no gene que codifica GST-1;

1237 G/A na região a 3' do gene que codifica a a1-antitripsina;

-82 A/G no promotor do gene que codifica MMP12;

T->C dentro do códon 10 do gene que codifica TGFB;

760 C/G no gene que codifica SOD3;

-1296 T/C dentro do promotor do gene que codifica TIMP3; ou

a mutação S no gene que codifica a ct1 -antitripsina.

Em um outro aspecto a invenção fornece um conjunto de sondase/ou iniciadores de nucleotídeos para uso nos métodos preferidos da invenção descritos aqui. Preferencialmente, as sondas e/ou os iniciadores de nucleotídeos são aqueles que abrangem ou que são capazes de serem utilizados para abrangir, as regiões polimórficas dos genes.

Ainda em um aspecto adicional, a invenção fornece um microar-ranjo de ácidos nucléicos para uso nos métodos da invenção, cujo microar-ranjo compreende um substrato que apresenta seqüências de ácidos nucléicos capazes de se hibridizarem com seqüências de ácidos nucléicos que codificam um ou mais dos polimorfismos de susceptibilidade ou protetoresdescritos aqui ou seqüências complementares aos mesmos.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um microarranjo de anticorpos para uso nos métodos da invenção, cujo microarranjo compreende um substrato que apresenta anticorpos capazes de se ligarem a um produto da expressão de um gene cuja expressão é regulada para mais ou reguiada para menos quando associado a um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor como descrito aqui.

Em um aspecto adicional a presente invenção fornece um método de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema que compreende a etapa de replicação, genotipicamente ou fenotipicamente, da presença . e/ou do efeito funcional de um polimorfismo protetor no dito indivíduo.

Ainda em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um método de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito indivíduo possuindo um polimorfismo de susceptibilidade que pode ser detectado que regula para mais ou regula para menos a expressão de um gene de forma que a concentração fisiologicamente ativa do produto gênico expresso fica fora de uma faixa que é normal para a idade e o sexo do indivíduo, o dito método compreendendo a etapa de restauração da concentração fisiologicamente ativa do dito produto da expressão gênica que estará dentro de uma faixa que é normal para a idade e para o sexo do indivíduo.

Ainda em um aspecto adicional, a presente invenção fornece ummétodo de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual foi determinada a presença do genótipo GG no polimorfismo -765 C/G presente no promotor do gene que codifica COX2, o dito método compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de reduzir a atividade de COX2 no dito indivíduo.

Em uma modalidade, o dito agente é um inibidor de COX2 ou um fármaco antiinflamatório não esteróide (NSAID), preferencialmente o dito inibidor de COX2 é selecionado do grupo que consiste em Celebrex (Celecõxib), Bextra (Valdecoxib) e Vioxx (Rofecoxib).

Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um método de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual foi determinada a presença do genótipo AA no polimorfismo 105 C/A no gene que codifica IL18, o dito método compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de aumentar a atividade de IL18 no dito indivíduo.

Ainda em um aspecto adicional a presente invenção fornece um método de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual foi determinada a presença do genótipo CC no polimorfismo -133 G/C no promotor do gene que codifica IL18, o dito método compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de aumentar a atividade de IL18 no dito indivíduo.

Ainda em um aspecto adicional a presente invenção fornece um método de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual foi determinada a presença do genótipo 5G5G no polimorfismo -675 4G/5G no promotor do gene que codifica PAI-1, o dito método compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de aumentar a atividade de PAI-1 no dito indivíduo.

Ainda em um aspecto adicional a presente invenção fornece ummétodo de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual foi determinada a presença do genótipo AA no polimorfismo 874 A/T no gene que codifica IFN-y, o dito método compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de modular a atividade de IFN-y no dito indivíduo.

Ainda em um aspecto adicional a presente invenção fornece um método de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual foi determinada a presença do genótipo CC no polimorfismo -159 C/T no gene que codifica CD-14, o dito método compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de modular a atividade de CD-14 e/ou de IgE no dito indivíduo.

Ainda em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um método para a triagem de compostos que modulam a expressão e/ou a atividade de um gene, cuja expressão é regulada para mais ou para menos quando associada com um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor, o dito método compreendendo as etapas de:

contato de um composto candidato com uma célula que compreende um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor que foi determina-. do como estando associado à regulação para mais ou a regulação para menos da expressão de um gene; e

medida da expressão do dito gene após o contato com o dito composto candidato,

em que uma alteração no nível de expressão após a etapa de contato quando comparado a antes da etapa de contato é indicativa da capacidade do composto de modular a expressão e/ou a atividade do dito gene.

Preferencialmente, a dita célula é uma célula pulmonar humana que foi pré-triada para confirmar a presença do dito polimorfismo.

Preferencialmente, a dita célula compreende um polimorfismo de susceptibilidade associado à regulação para mais da expressão do dito genee a dita triagem é em relação a compostos candidatos que regulam para menos a expressão do dito gene.

Alternativamente, a dita célula compreende um polimorfismo de susceptibilidade associado à regulação para menos da expressão do dito gene e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que regulam para mais a expressão do dito gene.

Em uma outra modalidade, a dita célula compreende um polimorfismo protetor associado à regulação para mais da expressão do dito gene e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que regulam para mais a expressão do dito gene.

Alternativamente, a dita célula compreende um polimorfismo protetor associado à regulação para menos da expressão do dito gene e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que regulam adicionalmente para menos a expressão do dito gene.

Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um método para a triagem de compostos que modulam a expressão e/ou a atividade de um gene, cuja expressão é regulada para mais ou regulada para menos quando associada a um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor, o dito método compreendendo as etapas de:

contato de um composto candidato com uma célula que compreende um gene, cuja expressão é regulada para mais ou regulada para menos quando associada a um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor, mas que na dita célula sua expressão não é regulada para mais nem regulada para menos; e

medida da expressão do dito gene após o contato com o dito composto candidato, em que uma alteração no nível de expressão após a etapa de contato quando comparado com antes da etapa de contato é indicativa da capacidade do composto de modular a expressão e/ou a atividade do dito gene.

Preferencialmente, a dita célula é uma célula pulmonar humana que foi pré-triada para confirmar a presença e o nível de linha de base de expressão, do dito gene.Preferencialmente, a expressão do gene é regulada para menos quando associada com um polimorfismo de susceptibilidade e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que na dita célula, regulam para mais a expressão do dito gene.

Alternativamente, a expressão do gene é regulada para mais quando associada a um polimorfismo de susceptibilidade e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que, na dita célula, regulam para menos a expressão do dito gene.

Em uma outra modalidade, a expressão do gene é regulada para mais quando associada a um polimorfismo protetor e a dita triagem é em relação a compostos que, na dita célula, regulam para mais a expressão do dito gene.

Alternativamente, a expressão do gene é regulada para menos quando associada a um polimorfismo protetor e a dita triagem é em relação a compostos que, na dita célula, regula para menos a expressão do dito gene.

Ainda em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um método de avaliação da capacidade de resposta provável de um indivíduo em risco de desenvolver ou de sofrer de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema a um tratamento profilático ou terapêutico, cujo tratamento envolve a restauração da concentração fisiologicamente ativa de um produto . da expressão gênica que estará dentro de uma faixa que é normal para a idade e para o sexo do indivíduo, cujo método compreende a detecção no dito indivíduo da presença ou da ausência de um polimorfismo de susceptibilidade que quando presente regula para mais ou regula para menos a expressão do dito gene de forma que a concentração fisiologicamente ativa do produto gênico expresso esteja fora da dita faixa normal, em que a detecção da presença do dito polimorfismo é indicativa da probabilidade do indivíduo de responder ao dito tratamento.

Em um aspecto adicional, a presente invenção fornece um kit para a avaliação do risco de um indivíduo de desenvolver uma ou mais doenças pulmonares obstrutivas tradas de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito kit compreendendo um meio de análise de uma a-mostra do dito indivíduo em relação à presença ou à ausência de um ou mais polimorfismos descritos aqui. Breve Descrição das Figuras

Figura 1: representa um gráfico que mostra a porcentagem de pessoas com COPD representada graficamente contra o número de variantes genéticos protetores.

Figura 2: representa um gráfico que mostra a porcentagem de pessoas com COPD representada graficamente contra o número de variantes genéticos de susceptibilidade.

Descrição das Modalidades Preferidas

Utilizando estudos de controle de casos foram comparadas as freqüências de inúmeros variantes genéticos (polimorfismos) de genes candidatos em fumantes que desenvolveram COPD, fumantes que parecem resistentes à COPD e controles de doadores de sangue. A maior parte destes genes candidatos confirmou (ou provavelmente) os efeitos funcionais sobre a expressão gênica ou a função das proteínas. Especificamente, foram comparadas as freqüências de polimorfismos entre controles de doadores de sangue, fumantes resistentes e aqueles com COPD (subdivididos naqueles com início precoce e aqueles com início normal). A presente invenção demonstra que há tanto polimorfismos protetores quanto de susceptibilidade presentes nos genes candidatos selecionados dos pacientes testados.

Especificamente, 17 polimorfismos genéticos de susceptibilidade e 19 polimorfismos genéticos protetores foram identificados.

<table>table see original document page 24</column></row><table><table>table see original document page 25</column></row><table><table>table see original document page 26</column></row><table>

Um polimorfismo genético de susceptibilidade é um que, quando presente, é indicativo de um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. Em contraste, um polimorfismo genético protetor é um que, quando presente, é indicativo de um risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Como utilizado aqui, a expressão "risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema" significa a probabilidade de que um indivíduo ao qual o risco se aplica em desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e inclui a predisposição a e o início potencial da doença. Conseqüentemente, a expressão "maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema" significa que um indivíduo que possui tal risco maior possui uma inclinação ou tendência hereditária a desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. Isto não significa que tal pessoa irá realmente desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema _ero qualquer momento, apenas que ele ou ela possui uma maior probabilidade de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema comparada com a da população geral de indivíduos que não possui um polimorfismo associado a maior risco de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema ou que possui um poli-morfismo associado a menor risco de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. Os indivíduos com um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema incluem aqueles com uma predisposição a COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, tal como uma tendência o predileção independentemente de sua função pulmonar no momento da avaliação, por exemplo, um indivíduo que é geneticamente inclinado a COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, mas que possui função pulmonar normal, aqueles em risco potencial, incluindo indivíduoscom uma tendência à função pulmonar suavemente reduzida que provavelmente prosseguirão até sofrer de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema se continuarem fumando e indivíduos com início potencial de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, que possuem uma tendência à função pulmonar fraca em espirometria etc, coerente com COPD no momento da avaliação.

Similarmente, a expressão "menor risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema" significa que um indivíduo que possui tal risco diminuído possui uma desinclinação hereditária ou uma tendência reduzida ao desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. Isto não significa que tal pessoa não desenvolverá COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema em qualquer momento, apenas que ele ou ela possui uma menor probabilidade de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema comparada com a da população geral de indivíduos que possui um ou mais polimorfismos associados a maior risco de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema ou não possui um polimorfismo associado com menor risco de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Será entendido que no contexto da presente invenção o termo "polimorfismo" significa a ocorrência junta na mesma população a uma taxa . maior que a que pode ser atribuída à mutação aleatória (geralmente maior que 1 %) de duas ou mais formas alternadas (tais como alelos ou marcadores genéticos) de um lócus cromossômico que difere na seqüência de nucle-otídeos ou que possui números variáveis de unidades de nucleotídeos repetidas. Ver www.ornl.gov/sci/techresources/Human Genome/publicat/97pr/09gloss.html #p. Conseqüentemente, o termo "polimorfismos" que é utilizado aqui considera variações genéticas, incluindo substituições de nucleotídeos isolados, inserções e deleções de nucleotídeos, seqüências repetitivas (tais como microssatélites) e a ausência total ou parcial de genes (por exemplo, mutações nulas). Como utilizado aqui, o termo "polimorfismos" inclui ainda genótipos e haplotipos. Um genótipo é a composição genética em um lócus específico ouum conjunto de loci. Um haplotipo é um conjunto de marcadores genéticos intimamente ligados presentes em um cromossomo que não podem ser facilmente separados por recombinante, tendem a ser herdados juntos e podem estar em desequilíbrio de ligação. Um haplotipo pode ser identificado através de padrões de polimorfismos tais como SNPs. Similarmente, o termo "polimorfismo de um único nucleotídeo" ou "SNP" no contexto da presente invenção inclui substituições de nucleotídeos em base única e polimorfismos curtos de deleção e inserção.

Um risco reduzido ou aumentado de um indivíduo desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema pode ser diagnosticado através da análise de uma amostra do dito indivíduo em relação à presença de um polimorfismo selecionado do grupo que consiste em: -765 C/G no promotor do gene que codifica a Ciclooxigenase 2 (COX2); 105 C/A no gene que codifica a Interleucina18 (IL18);

-133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;

874 A/T no gene que codifica o Interferon-y (IFN-y);

+489 G/A no gene que codifica o Fator de Necrose de Tumor a (TNFa);

C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;

Gly 881 Arg G/C no gene que codifica a Caspase (NOD2);

161 G/A no gene que codifica a lectina 2 de ligação à Manose (MBL2);

-1903 G/A no gene que codifica a Quimase 1 (CMA1);

Arg 197 Gln G/A no gene que codifica a N-Acetil transferase 2 (NAT2);

-366 G/A no gene que codifica a Lipo-oxigenase 5 (ALOX5);

HOM T2437C no gene que codifica a Proteína do Choque Térmico 70 (HSP 70);

+13924 T/A no gene que codifica o Canal de Cloreto ativado por Cálcio 1(CLCA1);

-159 C/T no gene que codifica antígeno de diferenciação de Monócito CD-14 (CD-14);éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina;

-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica MMP1 (com referência apenas ao alelo 1G);

ou um ou mais polimorfismos que estão em desequilíbrio de ligação com qualquer um ou mais do grupo acima.

Estes polimorfismos também podem ser analisados em combinações de dois ou mais ou em combinação com outros polimorfismos indicativos do risco de um indivíduo de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, inclusive dos polimorfismos restantes listados anteriormente.

São expressamente consideradas as combinações dos polimorfismos anteriores com polimorfismos que são descritos no Pedido de Patente Internacional PCT PCT/NZ02/00106, publicado como WO 02/099134.

São preferidos os ensaios que envolvem combinações de polimorfismos, incluindo as tratáveis em alta circulação, tais como aqueles que utilizam microarranjos.

As análises estatísticas, particularmente dos efeitos combinados destes polimorfismos, mostram que as análises genéticas da presente invenção podem ser utilizadas para determinar o risco cociente de qualquer fumante e em particular para identificar fumantes em maior risco de desenvolvimento de COPD. Tais análises combinadas podem ser de combinações de polimorfismos de susceptibilidade apenas, de polimorfismos protetores apenas ou de combinações de ambos. As análises também podem ser em etapas, com a análise da presença ou da ausência de polimorfismos protetores que ocorrem primeiramente e então com a análise de polimorfismos de susceptibilidade ocorrendo apenas onde nenhum polimorfismo protetor está presente.

Assim, através da análise sistemática da freqüência destes polimorfismos em grupos bem definidos de fumantes e não-fumantes, como descrito aqui, é possível implicar certas proteínas no desenvolvimento de COPD e aumentar a capacidade de identificar quais fumantes estão em risco maior de desenvolvimento de função pulmonar prejudicada relacionada com a COPD e COPD com finalidades de previsão.Os presentes resultados mostram pela primeira vez que a minoria de fumantes que desenvolveu COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema o fazem porque possuem um ou mais dos polimorfismos de sus-ceptibilidade e alguns ou nenhum dos polimorfismos protetores definidos aqui. Acredita-se que a presença de um ou mais polimorfismos susceptíveis, junto com os efeitos irritantes e oxidantes prejudiciais do fumo, se combinam para tornar este grupo de fumantes altamente susceptível ao desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. Fatores de risco adicionais, tais como histórico familiar, idade, peso, maços-ano etc, também terão um impacto sobre o perfil de risco de um indivíduo e podem ser avaliados em combinação com as análises genéticas descritas aqui.

O um ou mais polimorfismos podem ser detectados diretamente ou através da detecção de um ou mais polimorfismos que estão em desequilíbrio de ligação com o dito um ou mais polimorfismos. Como discutido anteriormente, o desequilíbrio de ligação é um fenômeno na genética através do qual duas ou mais mutações ou polimorfismos estão em proximidade genética íntima de forma que são co-herdados. Isto significa que na genotipagem, a detecção de um polimorfismo, quando presente, infere a presença do outro. (Reich DE e outros; Linkage disequilibrium in the human genome, Nature 2001,411:199-204.)

Os exemplos de polimorfismos relatados como estando em desequilíbrio de ligação são apresentados aqui e incluem os polimorfismos -133 C/G e 105 A/C da lnterleucina-18 e os polimorfismos Glu 416 Asp e Lys 420 Thr da proteína de ligação com a Vitamina D, como mostrado abaixo.

<table>table see original document page 30</column></row><table>Será evidente que os polimorfismos em desequilíbrio de ligação com um ou mais outros polimorfismos associados a maior ou menor risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema também fornecerão utilidade como biomarcadores para o risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. Os dados a-presentados aqui mostram que a freqüência para os SNPs em desequilíbrio de ligação é muito similar. Conseqüentemente, estes SNPs ligados geneticamente podem ser utilizados em análises combinadas de polimorfismos para derivar um nível de risco comparável ao calculado partindo do SNP original.

Será, portanto, evidente que um ou mais polimorfismos em desequilíbrio de ligação com os polimorfismos especificados aqui podem ser identificados, por exemplo, utilizando bases de dados públicas. Os exemplos de tais polimorfismos relatados como estando em desequilíbrio de ligação com os polimorfismos especificados aqui são apresentados aqui na Tabela 31.

Os métodos da invenção estão primariamente direcionados à detecção e à identificação dos polimorfismos anteriores associados à COPD, que são todos os polimorfismos de um único nucleotídeo. Em termos gerais, um polimorfismo de um único nucleotídeo (SNP) é uma alteração de base única ou uma mutação pontual que resulta na variação genética entre os indivíduos. Os SNPs ocorrem no genoma humano aproximadamente uma vez a cada 100 até 300 bases e podem ocorrer em regiões codificadoras ou não-codificadoras. Devido à redundância do código genético, um SNP na região codificadora pode ou não alterar a seqüência de aminoácidos de um produto protéico. Um SNP em uma região não-codificadora pode, por exemplo, alterar a expressão gênica, por exemplo, através da modificação de regiões de controle tais como promotores, sítios de ligação de fatores de transcrição, sítios de processamento, sítios de ligação ribossomal e afetar sítios de processamento, sítios de ligação ribossomal e afetar a transcrição, o processamento e a tradução do gene.

Os SNPs podem facilitar estudos genéticos de associação emgrande escala e tem havido recentemente grande interesse na descoberta e na detecção de SNPs. Os SNPs exibem grande promessa como marcadores para um número de características fenotípicas (incluindo características latentes), tais como, por exemplo, propensão e gravidade de doenças, pro-pensão ao estado saudável e capacidade de resposta a fármacos incluindo, por exemplo, susceptibilidade a reações adversas a fármacos. O conhecimento da associação de um SNP particular com uma característica fenotípi-ca, acoplado ao conhecimento do fato de um indivíduo ter o dito SNP particular, pode possibilitar o direcionamento de aplicações para diagnóstico, preventivas e terapêuticas para permitir melhor controle de doenças, para aumentar o entendimento de estados de doença e para em última análise facilitar a descoberta de tratamentos mais eficientes, tais como regimes de tratamento personalizados.

Na verdade, foi construído um número de bases de dados de SNPs conhecidos e para alguns tais SNPs, o efeito biológico associado a um SNP. Por exemplo, a base de dados de SNP do NCBI "dbSNP" é incorporada no sistema NCBI's Entrez e pode ser pesquisada utilizando a mesma a-bordagem que as outras bases de dados Entrez tais como PubMed e Gen-Bank. Esta base de dados possui registros para mais de 1,5 milhões de SNPs mapeados na seqüência genômica humana. Cada entrada na dbSNP inclui o contexto de seqüência do polimorfismo (isto é, a seqüência circun-dante), a freqüência de ocorrência do polimorfismo (por população ou indivíduo) e o(s) método(s) experimental(is), protocolos e condições utilizadas para analisar a variação e pode incluir informação associada a um SNP com uma característica fenotípica particular.

Pelo menos em parte por causa do impacto potencial sobre a saúde e o bem-estar, foi e continua a ser um grande tarefa de esforço desenvolver métodos que identificam de forma confiável e rápida os SNPs. Esta não é uma tarefa trivial, pelo menos em parte, por causa da complexidade do DNA genômico humano, com um genoma haplóide de 3 x 109 pares de bases e os requerimentos de sensibilidade e discriminatórios associados.

As abordagens de genotipagem para detectar os SNPs são bemconhecidas na técnica e incluem o seqüenciamento do DNA, métodos que requerem hibridização específica a alelos de iniciadores ou sondas, incorporação específica a alelos de nucleotídeos aos iniciadores ligados próximos a ou adjacentes aos polimorfismos (freqüentemente referidos como "extensão de bases isoladas" ou "miniseqüenciamento"), ligação (união) específica ao alelo de oligonucleotídeos (reação em cadeia de ligação ou sondas "pad-lock" de ligação), clivagem específica ao alelo de oligonucleotídeos ou produtos da PCR por enzimas de restrição (análise de polimorfismos de comprimento do fragmento de restrição.ou RFLP) ou agentes químicos ou outros, resolução de diferenças dependentes aos alelos nas mobilidades ele-troforéticas ou cromatográficas, por enzimas específicas às estruturas incluindo enzimas específicas a estruturas invasivas ou espectrometria de massa. A análise da variação de aminoácidos também é possível quando o SNP fica em uma região codificadora e resulta em uma alteração de aminoácido.

O seqüenciamento do DNA permite a determinação direta e a identificação dos SN Ps. Os benefícios na especificidade e na acurácia são geralmente supervalorizados com a finalidade de triagem pelas dificuldades inerentes ao seqüenciamento do genoma inteiro ou até mesmo de subge-noma direcionado.

O miniseqüenciamento envolve permitir que um iniciador se hibridize à seqüência de DNA adjacente ao sítio do SNP na amostra de teste sob investigação. O iniciador é estendido por um nucleotídeo utilizando todos os quatro didesoxinucleotídeos fluorescentes marcados de forma diferencial (A,C,G ou T) e uma DNA polimerase. Apenas um dos quatro nucleotídeos (caso homozigoto) ou dois dos quatro nucleotídeos (caso heterozigo-to) são incorporados. A base que é incorporada é complementar ao nucleotídeo na posição do SNP.

Um número de métodos atualmente utilizados para a detecção de SNPs envolve hibridização específica ao sítio e/ou específica ao alelo.

Estes métodos confiam enormemente na ligação discriminadora de oligonucleotídeos às seqüências alvo que contêm o SNP de interesse. As técnicas da Affymetrix (Santa Clara, Calif.) e da Nanogen Inc. (San Diego, Calif.) sãoparticularmente bem conhecidas e utilizam o fato de que os duplices de DNA que contêm combinações erradas de bases isoladas são muito menos estáveis que os duplices que têm bases perfeitamente pareadas. A presença de um dúplex combinado é detectada por fluorescência.

A maior parte dos métodos para a detecção ou para a identificação dos SNPs por hibridização específica ao sítio requer a amplificação direcionada através de métodos tal como a PCR para aumentar a sensibilidade e a especificidade (ver, por exemplo, a Patente U.S. N- 5.679.524, a publicação PCT WO 98/59066, a publicação PCT WO 95/12607). O Pedido dePatente U.S. 20050059030 (incorporado aqui em sua totalidade) descreve um método para a detecção de um polimorfismo de um único nucleotídeo no DNA humano total sem amplificação prévia ou redução da complexidade para enriquecer seletivamente em relação à seqüência alvo e sem o auxílio de qualquer reação enzimática. O método utiliza uma hibridização em umaúnica etapa que envolve dois eventos de hibridização: hibridização de uma primeira parte da seqüência alvo com uma sonda de captura e hibridização de uma segunda parte da dita seqüência alvo com uma sonda de detecção. Ambos os eventos de hibridização ocorrem na mesma reação e a ordem em que a hibridização ocorre não é crítica.

O Pedido de Patente U.S. 20050042608 (incorporado aqui em sua totalidade) descreve uma modificação do método de detecção eletrome-cânica de hibridização de ácidos nucléicos de Thorp e outros. (Patente U.S. N2 5.871.918). Sucintamente, as sondas de captura são planejadas, cada uma das quais possui uma base de SNP diferente e uma seqüência de bases da sonda em cada lado da base do SNP. As bases da sonda são com-plementares à seqüência alvo correspondente adjacente ao sítio do SNP. Cada sonda de captura é imobilizada sobre um eletrodo diferente que possui uma camada externa não condutora sobre uma superfície de trabalho con-dutora de um substrato. A extensão de hibridização entre cada sonda de captura e o alvo de ácido nucléico é detectada através da detecção da reação de oxidação-redução em cada eletrodo, utilizando um complexo de metal de transição. Estas diferenças nas taxas de oxidação nos eletrodos dife-rentes são utilizadas para determinar se o alvo de ácido nucléico selecionado possui um polimorfismo de um único nucleotídeo no sítio do SNP selecionado.

A técnica da Lynx Therapeutics (Hayward, Calif.) que utiliza a tecnologia MEGATYPE™ pode genotipar números muito grandes de SNPs simultaneamente partindo de conjuntos pequenos ou grandes de material genômico. Esta tecnologia utiliza sondas rotuladas de forma fluorescente e compara os genomas coletados de duas populações, possibilitando a detecção e a recuperação de fragmentos de DNA que abrangem os SNPs que distinguem as duas populações, sem requerer mapeamento ou conhecimento do SNP prévio.

Existe um número de outros métodos para a detecção e a identificação dos SNPs. Estes incluem o uso de espectrometria de massa, por exemplo, para medir as sondas que se hibridizam com o SNP. Esta técnica varia em relação a quão rapidamente pode ser realizada, partindo de algumas amostras por dia até uma alta circulação de 40.000 SNPs por dia, utilizando rótulos de código de massa. Um exemplo preferido é o uso da determinação espectrométrica de massa de uma seqüência de ácido nucléico que compreende os polimorfismos da invenção, por exemplo, que inclui o promoter do gene COX2 ou uma seqüência complementar. Tais métodos espec-. trométricos de massa são conhecidos pelos versados na técnica e os métodos de genotipagem da invenção são tratáveis à adaptação para a detecção espectrométrica de massa dos polimorfismos da invenção, por exemplo, os polimorfismos do promotor COX2 da invenção.

Os SNPs também podem ser determinados através da análise de ligação a partículas. A análise requer dois iniciadores que se hibridizam com um alvo com um espaço de nucleotídeo entre os iniciadores. Cada um dos quatro nucleotídeos é adicionado a uma mistura de reação separada contendo DNA polimerase, ligase, DNA alvo e os iniciadores. A polimerase adiciona um nucleotídeo na extremidade a 3' do primeiro iniciador que é complementar ao SNP e a ligase então liga os dois iniciadores adjacentes. Após o aquecimento da amostra, se tiver ocorrido ligação, o iniciador agoramaior permanecerá hibridizado e um sinal, por exemplo, fluorescência, pode ser detectado. Uma discussão adicional destes métodos pode ser encontrada nas Patentes U.S. N— 5.919.626; 5.945.283; 5.242.794; e 5.952.174.

A Patente U.S. N2 6.821.733 (incorporada aqui em sua totalidade) descreve métodos para a detecção das diferenças na seqüência de duas moléculas de ácidos nucléicos que incluem as etapas de: contato dos dois ácidos nucléicos sob condições que permitem a formação de um complexo de quatro vias e migração de ramificação; contato do complexo de quatro vias com uma molécula traçadora e uma molécula de detecção sob condições em que a molécula de detecção é capaz de se ligar com a molécula traçadora ou o complexo de quatro vias; e determinação da ligação da molécula traçadora com a molécula de detecção antes e depois da exposição ao complexo de quatro vias. A competição do complexo de quatro vias com a molécula traçadora em relação à ligação com a molécula de detecção indica uma diferença entre os dois ácidos nucléicos.

As abordagens com base em proteína e proteômica também são adequadas para a detecção e a análise dos polimorfismos. Os polimorfismos que resultam em ou estão associados à variação nas proteínas expressas podem ser detectados diretamente ou através da análise das ditas proteínas.

Isto requer tipicamente a separação das várias proteínas dentro de uma a-mostra, por exemplo, através de eletroforese em gel ou HPLC e a identificação das ditas proteínas ou peptídeos derivadas das mesmas, por exemplo, por RMN ou seqüenciamento de proteínas tal como o seqüenciamento químico ou de forma mais prevalente espectrometria de massa. As metodologias proteômicas são bem conhecidas na técnica e possuem grande potencial para automação. Por exemplo, sistemas integrados, tal como o sistema Pro-teomlQ™ da Proteome Systems, fornecem plataformas de alta circulação para análise de proteomas que combina a preparação de amostras, a separação de proteínas, a aquisição de imagens e a análise, o processamento da proteína, a espectrometria de massa e as tecnologias de bioinformática.

A maior parte dos métodos de proteômica de identificação de proteínas utiliza espectrometria de massa, incluindo espectrometria de mas-sa com captura iônica, cromatografia líquida (LC) e espectrometria de massa LC/MSn, espectrometria de massa com cromatografia a gás (GC), espec-trômetro de massa de ressonância de ciclotron iônica com transformação de Fourier (FT-MS), espectrometria de massa MALDI-TOF e espectrometria de massa ESI e seus derivados. Os métodos espectrométricos de massa também são úteis na determinação da modificação pós-tradução de proteínas, tal como fosforilação ou glicosilação e assim possuem utilidade na determinação dos polimorfismos que resultam em ou estão associados à variação nas modificações pós-tradução de proteínas.

As tecnologias associadas também são bem conhecidas e incluem, por exemplo, dispositivos para processamento de proteínas tal como "Chemical Inkjet Printer" que compreende a tecnologia de impressão piezoe-létrica que permite a digestão enzimática ou química in situ de amostras de proteínas "eletroblotted" provenientes de géis PAGE 2-D em membranasatravés do jato da enzima ou do reagente químico diretamente sobre os pontos de proteína selecionados. Após a digestão in situe a incubação das proteínas, a membrana pode ser colocada diretamente no espectrômetro de massa para a análise dos peptídeos.

Um grande número de métodos confia na variabilidade conformacional de ácidos nucléicos foi desenvolvido para detectar os SNPs.

Por exemplo, o Polimorfismo Conformacional de Filamento Simples (SSCP, Orita e outros, PNAS 1989 86: 2766-2770) é um método que confia na capacidade de ácidos nucléicos de filamento simples de formar estrutura secundária em solução sob certas condições. A estrutura secundária depende da composição de bases e pode ser alterada através de uma substituição de um único nucleotídeo, causando diferenças na mobilidade eletroforética sob condições não-desnaturantes. Os vários polimorfos são tipicamente detectados por autorradiografia quando marcados de forma radioativa, por coloração com prata das bandas, por hibridização com fragmentos de sonda marcados de forma que podem ser detectados ou pelo uso de iniciadores da PCR fluorescentes que são subseqüentemente detectados, por exemplo, através de um seqüenciador de DNA automatizado.As modificações nos SSCP são bem conhecidas na técnica e incluem o uso de condições de corrida em gel diferentes, tal como, por e-xemplo, diferindo a temperatura ou a adição de aditivos e matrizes de géis diferentes. Outras variações nos SSCP são bem conhecidas pelos versados na técnica, incluindo, RNA-SSCP, SSCP com padrão genético por endonu-cleases de restrição, padrão genético por didesóxi (um híbrido entre o se-qüenciamento de didesóxi e SSCP), padrão genético por didesóxi bidirecio-nal (em que a reação de terminação por didesóxi é realizada simultaneamente com dois iniciadores opostos) e PCR-SSCP Fluorescente (em que os produtos da PCR são marcados internamente com vários corantes fluorescentes, podem ser digeridos com enzimas de restrição, seguidas por SSCP e analisados em um seqüenciador de DNA automatizado capaz de detectar os corantes fluorescentes).

Outros métodos que utilizam a mobilidade variável de estruturas de ácidos nucléicos diferentes incluem a Eletroforese em Gel com Gradiente Desnaturante (DGGE), a Eletroforese em Gel com Gradiente de Temperatura (TGGE) e a Análise de Heterodúplices (HET). Aqui, a variação na dissociação do DNA de filamento duplo (por exemplo, causada por combinações erradas de pares de bases) resulta em uma alteração na mobilidade eletroforética. Estas modificações na mobilidade são utilizadas para detectar variações de nucleotídeos.

A Cromatografia Líquida de Alta Pressão Desnaturante (HPLC) é ainda um método adicional utilizado para detectar os SNPs, utilizando métodos de HPLC bem conhecidos na técnica como uma alternativa aos métodos de separação descritos anteriormente (tal como a eletroforese em gel) para detectar, por exemplo, homodúplices e heterodúplices que são eluídos da coluna de HPLC em taxas diferentes, possibilitando assim a detecção de nucleotídeos com pareamento errado assim dos SNPs.

Ainda métodos adicionais para a detecção dos SNPs se baseiam na susceptibilidade diferente de ácidos nucléicos de filamento simples e de filamento duplo à clivagem por vários agentes, incluindo agentes de cli-vagem química e enzimas nucleolíticas. Por exemplo, a clivagem dos pare-amentos errados dentro de heteroduplices de RNA:DNA pela RNase A, de heteroduplices, por exemplo, pela endonuclease Yll de bacteriófago T4 ou endonuclease I de 17, da extremidade a 5 das alças do "grampo de cabelo" na junção entre o DNA de filamento simples e de filamento duplo pela cleavase I e a modificação dos nucleotídeos com pareamento errado dentro dos heteroduplices por agentes químicos comumente utilizados na química de seqüenciamento de Maxam-Gilbert, são bem conhecidas na técnica.

Exemplos adicionais incluem o Teste de Tradução de Proteínas (PTT), utilizado para resolver códons de término por variações que levam a um término prematuro da tradução e a produtos de proteínas com tamanho reduzido e ao uso de proteínas de ligação com combinação errada. As variações são detectadas através da ligação, por exemplo, da proteína MutS, um componente do sistema de reparo de combinações erradas do DNA de Escherichia coli ou das proteínas hMSH2 e GTBP humanas, a heterodúplices de DNA de filamento duplo contendo bases com pareamento errado. Os dúplices de DNA são então incubados com a proteína de ligação com combinação errada e as variações são detectadas através do ensaio de alteração na mobilidade. Por exemplo, um ensaio simples se baseia no fato de que a ligação da proteína de ligação com combinação errada com o hetero-duplex protege o heteroduplex da degradação por exonucleases.

Os versados na técnica saberão que um SNP particular, particularmente quando ocorre em uma região reguladora de um gene tal como um promotor, pode estar associado com a expressão alterada de um gene. A expressão alterada de um gene também pode resultar quando o SNP estiver localizado na região codificadora de um gene que codifica proteína, por e-xemplo, em que o SNP está associado com códons de uso variado e assim com tRNAs de abundância diferente. Tal expressão alterada pode ser determinada através de métodos bem conhecidos na arte e pode assim ser empregada para detectar tais SNPs. Similarmente, quando um SNP ocorre na região codificadora de um gene e resulta em uma substituição de amino-ácido não sinônima, tal substituição pode resultar em uma alteração na função do produto gênico. Similarmente, em casos em que o produto gênico éum RNA, tais SNPs podem resultar em uma alteração da função no produto gênico de RNA. Qualquer tal alteração na função, por exemplo, quando avaliada em um ensaio de atividade ou de funcionalidade, pode ser empregrada para detectar tais SNPs.

Os métodos anteriores de detecção e de identificação de SNPs são tratáveis ao uso nos métodos da invenção.

Evidentemente, a fim de detectar e identificar os SNPs de acordo com a invenção, é obtida uma amostra contendo o material que será testado do indivíduo. A amostra pode ser qualquer amostra que contenha potencialmente os SNPs alvos (ou polipeptídeos alvos, como pode ser o caso) e obtida partindo de qualquer fluido corporal (sangue, urina, saliva etc) bióp-sias ou outras preparações de tecidos.

O DNA ou o RNA podem ser isolados partindo da amostra de acordo com qualquer um de um número de métodos bem conhecidos naarte. Por exemplo, os métodos de purificação de ácidos nucléicos são descritos em Tijssen; Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Bio-logy: Hybridization with nucleic acid sondas Part 1: Theory and Nucleic acid preparation, Elsevier, Nova York, N.Y. 1993, assim como em Maniatis, T., Fritsch, E. F. e Sambrook, J., Molecular Cloning Manual 1989.

Para auxiliar com a detecção da presença ou da ausência de polimorfismos/SNPs, podem ser fornecidas as sondas e/ou os iniciadores de ácidos nucléicos. Tais sondas possuem seqüências de ácidos nucléicos específicas para alterações cromossômicas que evidenciam a presença ou a ausência do polimorfismo e são preferencialmente marcadas com uma substância que emite um sinal que pode ser detectado quando combinado com o polimorfismo alvo.

As sondas de ácidos nucléicos podem ser de DNA genômico ou de cDNA ou de mRNA ou de qualquer material similar a RNA ou similar a DNA, tais como ácidos nucléicos peptídicos, DNAs ramificados e similares.

As sondas podem ser sondas de polinucleotídeos senso ou anti-senso. Quando os polinucleotídeos alvos são de filamento duplo, as sondas podem ser de filamentos senso ou anti-senso. Quando os polinucleotídeos alvossão de filamento duplo, as sondas são filamentos simples complementares.

As sondas podem ser preparadas através de uma variedade de esquemas sintéticos ou enzimaticos, que são bem conhecidos na técnica. As sondas podem ser sintetizadas, totalmente ou em parte, utilizando métodos químicos bem conhecidos na arte (Caruthers e outros, Nucleic Acids Res., Symp. Ser., 215-233 (1980)). Alternativamente, as sondas podem ser geradas, totalmente ou em parte, de forma enzimática.

Os análogos de nucleotídeos podem ser incorporados nas sondas através de métodos bem conhecidos na arte. O único requerimento é que o análogo de nucleotídeo incorporado tenha que servir para fazer pare-amento de bases com as seqüências de polinucleotídeos alvos. Por exemplo, certos nucleotídeos guanina podem ser substituídos por hipoxantina, que faz pareamento de base com resíduos de citosina. Entretanto, estes pares de bases são menos estáveis que aqueles entre guanina e citosina. Alternativamente, os nucleotídeos adenina podem ser substituídos por 2,6-diaminopurina, que pode formar pares de bases mais fortes que aqueles entre adenina e timidina.

Adicionalmente, as sondas podem incluir nucleotídeos que foram derivatizados quimicamente ou enzimaticamente. As modificações químicas típicas incluem derivatização com grupos acila, alquila, arila ou amino.

As sondas podem ser imobilizadas em um substrato. Os substratos preferidos são qualquer suporte rígido ou semi-rígido adequado incluindo membranas, filtros, chips, lâminas, wafers, fibras, esferas magnéticas ou não magnéticas, géis, tubos, placas, polímeros, micropartículas e capilares. O substrato pode ter uma variedade de formas de superfície, tais como cavidades, fossos, pinos, canais e poros, à qual as sondas de polinucleotídeos são ligadas. Preferencialmente, os substratos são opticamente transparentes.

Além disso, as sondas não têm que ser ligadas diretamente ao substrato, mas ao invés disso podem estar ligadas ao substrato através de um grupo ligante. Os grupos ligantes possuem tipicamente aproximadamente 6 até 50 átomos de comprimento para fornecer exposição à sonda ligada. Os grupos ligantes preferidos incluem oligômeros de etileno glicol, diaminas,diácidos e similares. Os grupos reativos sobre a superfície do substrato reagem com uma das porções terminais do ligante para ligar o ligante ao substrato. A outra porção terminal do ligante é então funcionalizada para a ligação da sonda.

As sondas podem ser ligadas a um substrato através do fornecimento dos reagentes para a síntese da sonda sobre a superfície do substrato ou através do fornecimento de fragmentos de DNA ou de clones pré-formados sobre a superfície do substrato. Os dispositivos de fornecimento típicos incluem uma solução de fornecimento por micropipeta ao substrato com um sistema robótico para controlar a posição da micropipeta em relação ao substrato. Pode haver uma variedade de dispositivos de fornecimento de forma que os reagentes possam ser fornecidos nas regiões de reação simultaneamente.

São preferidos os microarranjos de ácidos nucléicos. Tais micro-arranjos (incluindo chips de ácidos nucléicos) são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, as Patentes U.S. N- 5.578.832; 5.861.242; 6.183.698; 6.287.850; 6.291.183; 6.297.018; 6.306.643; e 6.308.170, cada uma incorporada como referência).

Alternativamente, podem ser produzidos microarranjos de anti-corpos. A produção de tais microarranjos é essencialmente como descrito em Schweitzer & Kingsmore, "Measuring proteins on microarrays", CurrOpin Biotechnol 2002; 13(1): 14-9; Avseekno e outros, "Immobilization of proteins in immunochemical microarranjos fabricated by electrospray deposition", A-nal Chem 2001 15; 73(24): 6047-52; Huang, "Detection of multiple proteins in an antibody-based protein microarray system, Immunol Methods 2001 1; 255 (1-2): 1-13.

A presente invenção também considera a preparação de kits para uso de acordo com a presente invenção. Os kits adequados incluem vários reagentes para uso de acordo com a presente invenção em recipientes e materiais para embalagem adequados, incluindo tubos, frascos e embalagens "shrink-wrapped" e moldadas por insuflação.

Os materiais adequados para inclusão em um exemplo de kit deacordo com a presente invenção compreendem um ou mais dos seguintes: pares de iniciadores para PCR específicos ao gene (oligonucleotídeos) que se anelam aos domínios de seqüências de DNA ou de cDNA que flanqueiam os polimorfismos genéticos de interesse, reagentes capazes de amplificar um domínio de seqüência específica no DNA genômico ou no cDNA sem o requerimento de realizar a PCR; reagentes necessários para discriminar entre os vários alelos possíveis nos domínios de seqüência amplificados pela PCR ou pela amplificação sem ser pela PCR (por exemplo, endonucleases de restrição, oligonucleotídeo que se anela preferencialmente a um alelo do polimorfismo, incluindo o modificado para conter enzimas ou grupos químicos fluorescentes que amplificam o sinal partindo do oligonucleotídeo e tornam a discriminação dos alelos mais forte); reagentes necessários para separar fisicamente os produtos derivados de vários alelos (por exemplo, aga-rose ou poliacrilamida e um tampão que será utilizado na eletroforese, colunas de HPLC, géis SSCP, géis de formamida ou um suporte de matriz para MALDI-TOF).

Será considerado que os métodos da invenção podem ser realizados em associação a uma análise de outros fatores de risco conhecidos por estarem associados a COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

Tais fatores de risco incluem fatores de risco epidemiológicos associados a . um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. Tais fatores de risco incluem, mas não estão limitados ao fumo e/ou à exposição ao fumo do tabaco, à idade, ao sexo e ao histórico familiar. Estes fatores de risco podem ser utilizados para aumentar uma análise de um ou mais polimorfismos que são descritos aqui quando se avalia o risco de um indivíduo de desenvolvimento de doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e/ou enfisema.

Os métodos de previsão da invenção permitem um número de intervenções terapêuticas e/ou de regimes de tratamento que serão avaliados em relação à adequabilidade e implementados para um certo indivíduo. O mais simples destes pode ser o fornecimento ao indivíduo de motivação para implementar uma alteração no estilo de vida, por exemplo, quando oindivíduo for um fumante atual, os métodos da invenção podem fornecer motivação para parar de fumar.

A maneira da intervenção terapêutica ou do tratamento será prevista pela natureza do(s) polimorfismo(s) e pelo efeito biológico do(s) dito(s) polimorfismo(s). Por exemplo, quando um polimorfismo de susceptibilidade estiver associado a uma alteração na expressão de um gene, a intervensão ou o tratamento é preferencialmente direcionado à restauração da expressão normal do dito gene, por exemplo, através da administração de um agente capaz de modular a expressão do dito gene. Quando um alelo ou um genótipo de SNP estiver associado à expressão diminuída de um gene, a terapia pode envolver a administração de um agente capaz de aumentar a expressão do dito gene e de forma inversa, quando um alelo ou um genótipo de SNP estiver associado à maior expressão de um gene, a terapia pode envolver a administração de um agente capaz de diminuir a expressão do dito gene. Os métodos úteis para a modulação da expressão gênica são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, em situações em que um alelo ou um genótipo de SNP estiver associado com à expressão regulada para mais de um gene, a terapia utilizando, por exemplo, RNAi ou metodologias anti-sentido pode ser implementada para diminuir a abundância do mRNA e assim diminuir a expressão do dito gene. Alternativamente, a terapia pode envolver métodos direcionados, por exemplo, à modulação da atividade do produto do dito gene, compensando assim a expressão anormal do dito gene.

Quando um alelo ou um genótipo de SNP de susceptibilidade estiver associado a uma menor função do produto gênico ou níveis diminuídos da expressão de um produto gênico, a intervenção terapêutica ou o tratamento pode envolver o aumento ou a substituição da dita função ou a su-plementação da quantidade do produto gênico dentro do indivíduo, por ne-xemplo, através da administração do dito produto gênico ou de um análogo funcional do mesmo. Por exemplo, quando um alelo ou genótipo de SNP estiver associado a uma menor função enzimática, a terapia pode envolver a administração da enzima ativa ou de um análogo da enzima ao indivíduo. Similarmente, quando um alelo ou um genótipo de SNP estiver associadocom uma função aumentada do produto gênico, a intervenção terapêutica ou o tratamento pode envolver a redução da dita função, por exemplo, através da administração de um inibidor do dito produto gênico ou de um agente capaz de diminuir o nível do dito produto gênico no indivíduo. Por exemplo, quando um alelo ou um genótipo de SNP estiver associado com uma maior função enzimática, a terapia pode envolver a administração de um inibidor da enzima ao indivíduo.

Similarmente, quando um SNP benéfico (protetor) estiver associado à regulação para mais de um gene particular ou a expressão de uma enzima ou outra proteína, as terapias podem ser direcionadas para imitar tal regulação para mais ou expressão em um indivíduo que não possui o genótipo de resistência e/ou para o fornecimento de tal enzima ou outra proteína a tal indivíduo. Ainda, quando um SNP protetor estiver associado à regulação para menos de um gene particular ou com a expressão diminuída ou eliminada de uma enzima ou outra proteína, as terapias desejáveis podem ser direcionadas para imitar tais condições em um indivíduo que não possui o genótipo protetor.

A relação entre os vários polimorfismos identificados anteriormente e a susceptibilidade (ou diferentemente) de um indivíduo a COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema também possui aplicação no pla-. nejamento e/ou na triagem de agentes terapêuticos candidatos. Este é particularmente o caso quando a associação entre um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor é manifestada por uma regulação para mais ou uma regulação para menos da expressão de um gene. Em tais casos, o efeito de um agente terapêutico candidato sobre tal regulação para mais ou regulação para menos é facilmente detectável.

Por exemplo, em uma modalidade culturas de órgãos ou de células pulmonares humanas existentes são verificadas em relação aos genó-tipos de SNP como apresentado anteriormente. (Para informação sobre as culturas de órgãos e células pulmonares humanas, ver, por exemplo: Bo-hinski e outros (1996) Molecular and Cellular Biology\4: 5671-5681; Collett-solberg e outros (1996) Pediatric Research 39: 504; Hermanns e outros(2004) Laboratory Investigation 84: 736-752; Hume e outros (1996) In Vitro Cellular& Developmental Biology-Animal 32: 24-29; Leonardi e outros (1995) 38: 352-355; Notingher e outros (2003) Biopolymers (Biospectroscopy) 72: 230-240; Ohga e outros (1996) Biochemical and Biophysical Research Communications 228: 391-396; dos quais cada um é incorporado aqui como referência em sua totalidade.) As culturas que representam os grupos de genótipos susceptíveis e protetores são tradas, junto com culturas que são supostamente "normais" em termos da expressão de um gene que é regulada para mais ou regulada para menos quando um polimorfismo protetor estiver presente.

As amostras de tais culturas são expostas a uma biblioteca de compostos terapêuticos candidatos e verificadas para qualquer um ou todos de: (a) regulação para menos de genes de susceptibilidade que são normalmente regulados para mais em genótipos susceptíveis; (b) regulação para mais de genes de susceptibilidade que são normalmente regulados para menos em genótipos susceptíveis; (c) regulação para menos de genes protetores que são normalmente regulados para menos ou não expressos (ou formas nulas são expressas) em genótipos protetores; e (d) regulação para mais de genes protetores que são normalmente regulados para mais em genótipos protetores. Os compostos são selecionados em relação a sua capacidade de alterar a regulação e/ou a ação dos genes de susceptibilidade e/ou genes protetores em uma cultura que possui um genótipo susceptível.

Similarmente, quando o polimorfismo for um que quando presente resulta em uma concentração fisiologicamente ativa de um produto gênico expresso fora da faixa normal para um indivíduo (ajustada para a idade e para o sexo) e quando houver uma abordagem profilática ou terapêutica disponível para restaurar os níveis de tal produto gênico expresso para dentro da faixa normal, os pacientes individuais podem ser selecionados para determinar a probabilidade de seu beneficiamento partindo de tal abordagem restauradora. Tal triagem envolve a detecção da presença ou da ausência do polimorfismo no indivíduo através de qualquer um dos métodos descritosaqui, com tais indivíduos em que o polimorfismo está presente sendo identificados como indivíduos prováveis de serem beneficiados pelo tratamento.

Exemplos

A invenção será agora descrita em maiores detalhes, com referência a exemplos não-limitantes.

Exemplo 1. Estudo de Associação de Casos Recrutamento dos Indivíduos

Foram recrutados indivíduos descendentes de europeus que fumaram um mínimo de quinze maços-ano e diagnosticados por um médico com doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD). Os indivíduos satisfaziam os critérios a seguir: eram mais velhos que 50 anos de idade e tinham desenvolvido sintomas de falta de ar após os 40 anos de idade, tinham um volume expiratório Forçado em um segundo (FEV1) na forma de uma porcentagem prevista <70% e uma razão de FEV1/FVC (volume exporatório Forçado em um segundo/capacidade vital Forçada) de < 79% (medida utilizando os critérios da American Thoracic Society). Duzentos e noventa e quatro indivíduos foram recrutados, destes 58% eram mulheres, a média de FEV1/FVC (± 95% de limites de confiança) era de 51% (49-53), a média de FEV1 na forma de uma porcentagem de previsão era de 43 (41-45). A idademédia, cigarros por dia e histórico de maço-ano eram de 65 anos (64-66), 24 , cigarros/dia (22-25) e 50 maços-ano (41-55), respectivamente. Duzentos e dezessete indivíduos europeus que fumaram um mínimo de vinte maços-ano e que nunca sofreram falta de ar e não foram diagnosticados com uma doença pulmonar obstrutiva no passado, em particular, asma na infância ou doença pulmonar obstrutiva crônica, também foram estudados. Este grupo de controle foi recrutado através de clubes para a velhice e consistia em 63% de homens, a média de FEV1/FVC (95% de Cl) era de 82% (81-83), a média de FEV1 como uma porcentagem de previsão era de 96 (95-97). A idade média, os cigarros por dia e o histórico de maço-ano eram de 59 anos (57-61), 24 cigarros/dia (22-26) e 42 maços-ano (39-45), respectivamente. Utilizando um método baseado na PCR (Sandford e outros, 1999), todos os indivíduos foram genotipados em relação às mutações na a1-antitripsina(alelos S e Z) e aqueles com o alelo ZZ foram excluídos. Os grupos com COPD e de fumantes resistentes foram combinados para os indivíduos com o genótipo MZ (5% em cada grupo). 190 doadores de sangue europeus (condição de fumo desconhecida) foram recrutados consecutivamente através de serviços de doação de sangue locais. Sessenta e três por cento eram homens e sua idade média era de 50 anos. Na análise de regressão, foi observado que a diferença na idade e a diferença de maços-ano observadas entre os que sofriam de COPD e os fumantes resistentes não determinava FEVouCOPD.

Este estudo mostra que os polimorfismos encontrados em maior freqüência em pacientes com COPD comparados com os de controle (e/ou fumantes resistentes) podem refletir uma maior susceptibilidade ao desenvolvimento de função pulmonar prejudicada e COPD. Similarmente, os polimorfismos observados em maior freqüência em fumantes resistentes compa-rados com os fumantes susceptíveis (pacientes com COPD e/ou controles) podem refletir uma função protetora.

Sumário das características para os doadores de sangue com COPD, fumantes resistentes e saudáveis

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Métodos de Genotipaqem

Genotioagem do polimorfismo do promotor -765 G/C da Ciclo-oxigenase 2 (COX2) e da a1-antitripsina

O DNA genômico foi extraído de amostras de sangue total (Ma-niatis, T., Fritsch, E. F. e Sambrook, J., Molecular Cloning Manual. 1989). O polimorfismo 2-765 da Ciclo-oxigenase 2 foi determinado através de modificações mínimas de um método previamente publicado (Papafili A, e outros, 2002, incorporado aqui em sua totalidade como referência)). A reação da PCR foi realizada em um volume total de 25 uL e continha 20 ng de DNA genômico, 500 pmols de iniciadores para frente e para trás, 0,2 mM de dNTPs, 10 mM de Tris-HCI (pH 8,4), 150 mM de KCI, 1,0 mM de MgCI2 e 1 unidade de polimerase (Life Technologies). Os tempos de ciclagem eram incubações durante 3 min a 95°C seguidas por 33 ciclos de 50 s a 94°C, 60 s a 66°C e 60 s a 72°C. Um alongamento final de 10 min a 72°C foi então realizado. 4 uL dos produtos da PCR foram visualizados por transiluminação em ultravioleta de um gel de agarose a 3% corado com brometo de etídio. Uma alíquota de 3 uL do produto da amplificação foi digerida durante 1 h com 4 unidades de Acft (Roche Diagnostics, Nova Zelândia) a 37°C. Os produtos digeridos foram separados em uma corrida em gel de agarose a 2,5% durante 2 horas a 80 mV com tampão TBE. Os produtos foram visualizados contra um padrão em escada de 123 pb utilizando transiluminação em ultravioleta após a coloração com brometo de etídio. Utilizando um método baseado na PCR referido anteriormente (Sandford e outros, 1999), todos os indivíduos com COPD e fumantes resistentes foram genotipados em relação , aos alelos S e Z da cc1-antitripsina.

Polimorfismo +49C/T da Elafina

O DNA genômico foi extraído de amostras de sangue total (Ma-niatis, T., Fritsch, E. F. e Sambrook, J., Molecular Cloning Manual. 1989). O polimorfismo +49 da Elafina foi determinado através de modificações mínimas de um método previamente publicado ([Kuijpers ALA, e outros. Clinicai Genetics 1998; 54: 96-101.] incorporado aqui em sua totalidade como referência)). A reação da PCR foi realizada em um volume total de 25 uL e continha 20 ng de DNA genômico, 500 pmols de iniciadores para frente e para trás, 0,2 mM de dNTPs, 10 mM de Tris-HCI (pH 8,4), 150 mM de KCI, 1,0 mM de MgCI2 e 1 unidade de Taq polimerase] (Life Technologies). Os tempos de ciclagem eram incubações durante 3 min a 95°C seguidas por 33ciclos de 50 s a 94°C, 60 s a 66°C e 60 s a 72°C. Um alongamento final de 10 min a 72°C foi então realizado. 4 uL dos produtos da PCR foram visualizados por transiluminação em ultravioleta de um gel de agarose a 3% cora-do com brometo de etídio. Uma alíquota de 3 uL do produto da amplificação foi digerida durante 1 h com 4 unidades de Fok 1 (Roche Diagnostics, Nova Zelândia) a 37°C. Os produtos digeridos foram separados em uma corrida em gel de agarose a 2,5% durante 2 horas a 80 mV com tampão TBE. Os produtos foram visualizados contra um padrão em escada de 123 pb utilizando transiluminação em ultravioleta após a coloração com brometo de etídio.

Genotipaaem do polimorfismo -1607 1G2G do gene da Metaloproteinase de Matriz 1

O DNA genômico foi extraído utilizando métodos padronizados de fenol e clorofórmio. Os grupos de pacientes e os controles foram configurados no formato de PCR de 96 cavidades contendo controles negativos estratégicos. Os detalhes dos iniciadores do ensaio, das condições da PCR e dos ensaios de RFLP foram descritos previamente [DunleaveyL e outros]. A genotipagem foi feita utilizando modificações mínimas do protocolo anterior otimizado para as condições de laboratório dos presentes inventores. As reações da PCR foram amplificadas em termocicladores MJ Research em um volume total de 25 uL e continham 80 ng de DNA genômico, 100 ng de iniciadores para frente e para trás, 200 mM de dNTPs, 20 mM de Tris-HCI (pH 8,4), 50 mM de KCI, 1,5 mM de MgCI2 e 1,0 unidade de Taq polimerase (Qiagen). As seqüências iniciadoras para frente e para trás eram 3' TCG TGA GAA TGT CTT CCC ATT-3' [SEQ ID Ne: 1] e 5TCT TGG ATT GAT TTG AGA TAA GTG AAA TC-3' [SEQ ID N2: 2]. As condições de ciclagem consistiam em 94C 60 s, 55C 30 s, 72C 30 s durante 35 ciclos com uma extensão final estendida de 3 min. As alíquotas do produto da amplificação foram digeridas durante 4 h com 6 Unidades da enzima de restrição Xmnl (Roche Diagnostics, Nova Zelândia) nas condições de temperatura planejadas. Os produtos digeridos foram separados em gel de poliacrilamida a 6%. Os produtos foram visualizados por transiluminação em ultravioleta após corar com brometo de etídio e a migração foi comparada contra um padrãoem escada 1 Kb plus (Invitrogen). Os genótipos foram registrados em tabelas de informação de dados e foi realizada a análise estatística. Outra aenotipaaem de polimorfismo

O DNA genômico foi extraído partindo de amostras de sangue total (Maniatis, T., Fritsch, E. F. e Sambrook, J., Molecular Cloning Manual. 1989). O DNA genômico purificado foi aliquotado (concentração de 10 ng/uL) em placas de 96 cavidades e genotipado em um sistema Sequenom™ (Se-quenom™ Autoflex Mass Spectrometer e Samsung 24 pin nanodispenser) utilizando as seqüências, as condições de amplificação e os métodos a seguir.

As condições a seguir foram utilizadas para a reação de PCR multiplex: as concentrações finais eram em relação ao Tampão 10X 15 mM de MgCI2 1,25x, 25 mM de MgCI2 1,625 mM, dNTP mix 25 mM 500 uM, ini-ciadores 4 uM 100nM, Taq polimerase (Qiagen hot start) 0,1511/reação, DNA genômico 10 ng/uL. Os tempos de ciclagem eram 95°C durante 15 min, (5°C durante 15 s, 56°C 30 s, 72°C 30 s durante 45 ciclos com um tempo de extensão prolongado de 3 min para terminar. O tratamento com a fosfatase alcalina de camarão (SAP) foi utilizado (2 uL até 5 uL por reação da PCR) incubado a 35°C durante 30 min e a reação de extensão (adicionar 2 uL até 7 uL após o tratamento com SAP) com os volumes a seguir por reação de: . água, 0,76 uL; hME tampão de terminação 10x, 0,2 uL; iniciador hME (10 uM), 1 uL; enzima MassEXTEND, 0,04 uL<table>table see original document page 52</column></row><table><table>table see original document page 53</column></row><table><table>table see original document page 54</column></row><table><table>table see original document page 55</column></row><table><table>table see original document page 56</column></row><table><table>table see original document page 57</column></row><table><table>table see original document page 58</column></row><table><table>table see original document page 59</column></row><table><table>table see original document page 60</column></row><table>1. Genótipo. GG vs AG/AA para COPD vs controles, razão de possibilidades(OR) = 1,83, 95% de limites de confiança 1,2-2,8, %2 (Yates corrigido) =8,1, p=0,004,

GG = susceptível à COPD (dependendo da presença de outros snps)

2. Genótipo. GG vs AG/AA para resistente vs controles, razão de possibi-lidades (OR) = 1,98, 95% de limites de confiança 1,3-3,1, %2 (Yates cor-rigido) = 9,43, p=0,002

GG = protetor para COPD (dependendo da presença de outros snps)Tabela 3a. Freqüência do alelo e do genótipo do polimorfismo 105 A/C daInterleucina 18 nos pacientes com COPD, fumantes resistentes e controles.

<table>table see original document page 61</column></row><table>

1. Genótipo. AA vs AC/CC para COPD vs controles, razão de possibilida-des (OR) = 1,50, 95% de limites de confiança 1,0-2,3, x2 (Yates não-^corrigido) = 4,26, p=0,04,

AA = susceptível à COPD

2. Alelo. A vs C para COPD vs controle, razão de possibilidades (OR) =1,46, 95% de limites de confiança 1,1-2,0, %2 (Yates corrigido) = 5,76,p=0,02

3. 8Genótipo. AA vs AC/CC para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 1,35, 95% de limites de confiança 0,9-2,0, x2 (Yates não-corrigido) = 2,39, p=0,12 (tendência)AA = susceptível à COPDTabela 3b. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo -133 C/G daInterleucina nos pacientes com COPD, fumantes resistentes e controles.

<table>table see original document page 62</column></row><table>

1. Genótipo. CC vs CG/GG para COPD vs controles, razão de possibilida-des (OR) = 1,44, 95% de limites de confiança 1,0-2,2, %2 (Yates corrigi-do) = 3,4, p=0,06,

CC = susceptível à COPD

2. Alelo. C vs G para COPD vs controle, razão de possibilidades (OR) =1,36, 95% de limites de confiança 1,0-1,9, %2 (Yates corrigido) = 53,7,

p=0,05

C = susceptível à COPD

Tabela 4. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo -675 4G/5Gdo Inibidor do Ativador de Plasminogênio 1 nos pacientes com COPD, fu-mantes resistentes e controles.

<table>table see original document page 62</column></row><table>

1. Genótipo. 5G5G vs restante para COPD vs resistente, razão de possibi-lidades (OR) = 1,55, 95% de limites de confiança 0,9-2,6, %2 (Yatesnão-corrigido) = 3,12, p=0,08,5G5G = susceptível à COPD

2. Genótipo. 5G5G vs restante para COPD vs controle, razão de possibili-dades (OR) = 1,48, 95% de limites de confiança 0,9-2,5, %2 (Yates não-corrigido) = 2,43, p=0,12

5G5G = susceptível à COPD

3. Alelo. 5G vs 4G para COPD vs resistente, razão de possibilidades (OR)= 1,33, 95% de limites de confiança 1,0-1,8, %2 (Yates corrigido) = 4,02,p=0,05

5G = susceptível à COPD

Tabela 5. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo Asp 298 Glu(T/G) da Oxido Nítrico Sintase 3 nos pacientes com COPD, fumantes resis-

tentes e controles.

<table>table see original document page 63</column></row><table>

1. Genótipo. TT vs TG/GG para resistente vs controles, razão de possibili-dades (OR) = 2,2, 95% de limites de confiança 1,0-4,7, x2 (Yates corri-gido) = 4,49, p=0,03,Genótipo TT = protetor para COPD

Tabela 6a. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo Lys 420 Thr(A/C) da proteína de ligação com a Vitamina D nos pacientes com COPD,fumantes resistentes e controles.

<table>table see original document page 63</column></row><table>* número de cromossomos (2n)

1. Genótipo. AA/AC vs CC para resistente vs COPD, razão de possibilida-des (OR) = 1,39, 95% de limites de confiança 0,9-2,1, %2 (Yates não-corrigido) = 2,59, p=0,10,

AA/AC genótipo = protetor para COPD

2. Alelo. A vs C para resistente vs COPD, razão de possibilidades (OR) =1,34, 95% de limites de confiança 1,0-1,8, %2 (Yates corrigido) = 3,94,p=0,05

Alelo A = protetor para COPD

Tabela 6b. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo Glu 416 Asp(T/G) da proteína de ligação com a Vitamina D nos pacientes com COPD,fumantes resistentes e controles.

<table>table see original document page 64</column></row><table>

1. Genótipo. TT/TG vs GG para resistente vs controles, razão de possibili-dades (OR) = 1,53, 95% de limites de confiança 1,0-2,5, %2 (Yates não-corrigido) = 3,52, p=0,06,

Genótipo TT/TG = protetor para COPD

2. Alelo. T vs G para resistente vs controle, razão de possibilidades (OR)= 1,27, 95% de limites de confiança 1,0-1,7, %2 (Yates corrigido) = 2,69,p=0,1

Alelo T = protetor para COPD

Tabela 7. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo lie 105 Vai(A/G) da Glutationa S Transferase P1 nos pacientes com COPD, fumantesresistentes e controles.<table>table see original document page 65</column></row><table>

1. Genótipo. AA vs AG/GG para resistente vs controles, razão de possibi-lidades (OR) = 1,45, 95% de limites de confiança 0,9-2,2, %z (Yatesnão-corrigido)= 3,19, p=0,07,

Genótipo AA = protetor para COPD

2. Alelo. A vs G para resistente vs controle, razão de possibilidades (OR)=1,34, 95% de limites de confiança 1,0-1,8, x2 (Yates não-corrigido) =3,71,p=0,05

Alelo A .= protetor para COPD

Tabela 8. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo 874 A/T do

Interferon-gama nos pacientes com COPD, fumantes resistentes e controles.

<table>table see original document page 65</column></row><table>

1. Genótipo. AA vs AT/TT para COPD vs controles, razão de possibili-dades (OR) = 1,51, 95% de limites de confiança 0,9-2,5, x2 (Yates não-corrigido) = 3,07, p=0,08,

Genótipo AA = susceptível à COPDTabela 9a. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo Arg 130 Gln(G/A) da lnterleucina-13 nos pacientes com COPD, fumantes resistentes econtroles.

<table>table see original document page 66</column></row><table>

1. Genótipo. AA vs AG/GG para resistente vs controles, razão de possi-bilidades (OR) = 2,94, 95% de limites de confiança 0,7-14,0, x* (Yates não-corrigido)= 2,78, p=0,09,Genótipo AA = protetor para COPD

Tabela 9b. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo do promotor -1055 C/T da lnterleucina-13 nos pacientes com COPD, fumantes resistentese controles.

<table>table see original document page 66</column></row><table>

1. Genótipo. TT vs TC/CC para COPD vs resistente, razão de possibilida-des (OR) = 6,03, 95% de limites de confiança 1,1-42, %2 (Yates corrigi-do)= 4,9, p=0,03,

TT = susceptível à COPDTabela 10. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo S do cc1-anti-tripsina nos pacientes com COPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 67</column></row><table>

1. Genótipo. MS/SS vs MM para resistente vs COPD, razão de possibili-dades (OR) = 2,42, 95% de limites de confiança 1,2-5,1, %2 (Yates corrigido)= 5,7,p=0,01,S = protetor para COPD

Tabela 11a. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo +489 G/Ado Fator de Necrose de Tumor a nos pacientes com COPD e fumantes re-sistentes.

<table>table see original document page 67</column></row><table>

1. Genótipo. AA/AG vs GG para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 1,57, 95% de limites de confiança 0,9-2,7, %2 (Yates cor-rigido) = 2,52, p=0,11,

AA/AG =susceptível (GG=protetor)

2. Alelo. A vs G para COPD vs resistente, razão de possibilidades (OR) =1,61, 95% de limites de confiança 1,0-2,7, %2 (Yates corrigido)= 3,38,p=0,07,

A = susceptívelTabela 11 b. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo -308 G/A doFator de Necrose de Tumor a nos pacientes com COPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 68</column></row><table>

1. Genótipo. GG vs AG/AA para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 0,77, 95% de limites de confiança 0,5-1,2, %2 (Yates não-corrigido) = 1,62, p=0,20,GG = protetor (AA/AG = susceptível) tendência

2. Alelo. A vs G para COPD vs resistente, razão de possibilidades (OR) =1,3, 95% de limites de confiança 0,9-1,9, %2 (Yates não-corrigido)= 1,7,p=0,20,

A = tendência susceptívelTabela 12. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo C89Y deSMAD3 nos pacientes com COPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 68</column></row><table>

1. Genótipo. AA/AG vs GG para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 0,26, 95% de limites de confiança 0,04-1,4, %2 (Yatesnão-corrigido) = 3,19, p=0,07,AA/AG = protetor (GG susceptível)Tabela 13. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo A/G E469K(rs5498) da molécula de Adesão Intracelular 1 (ICAM1) em pacientes comCOPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 69</column></row><table>

1. Genótipo. GG vs AG/GG para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 1,60, 95% de limites de confiança 0,9-2,7, %2 (Yates cor-rigido) = 3,37, p=0,07,GG = susceptibilidade

2. Alelo. G vs A para COPD vs resistente, razão de possibilidades (OR) =1,3, 95% de limites de confiança 1,0-1,7, %2 (Yates corrigido) = 2,90,

p=0,09

Tabela 14. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo Gly881Argda Caspase (NOD2) nos pacientes com COPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 69</column></row><table>

1. Genótipo. CC/CG vs GG para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 3,2, 95% de limites de confiança 0,6-22, %2 (Yates não-corrigido) = 2,41, p=0,11 (1 extremidade),GC/CC = susceptibilidade (tendência)

Tabela 15. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo +161 G/A dalectina 2 de ligação à Manose (MBL2) nos pacientes com COPD e fumantesresistentes.<table>table see original document page 70</column></row><table>

1. Genotipo. GG vs restante para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 0,53, 95% de limites de confiança 0,4-0,80, x2 (Yatesnão-corrigido) = 8,55, p=0,003,

GG = protetor

Tabela 16. Freqüências do alelo e do genotipo do polimorfismo do promotor -1903 G/A da Quimase 1 (CMA1) nos pacientes com COPD e fumantes resis-tentes.

<table>table see original document page 70</column></row><table>

Genotipo. AA vs AG/GG para COPD vs resistente, razão de possibilirdades (OR) = 0,73, 95% de limites de confiança 0,5-1,1, x2 (Yates cor-rigido) = 1,91, p=0,17,

Genotipo AA = tendência à proteção

Tabela 17. Freqüências do alelo e do genotipo do polimorfismo Arg 197 GlnG/A da N-Acetiltransferase 2 em COPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 70</column></row><table>1. Genótipo. AA vs AG/GG para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 0,50, 95% de limites de confiança 0,2-1,0, %2 (Yates não-corrigido) = 3,82, p=0,05,Genótipo AA = protetor

Tabela 18". Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo -511 A/G da

Interleucina 1B (IL-1 b) em COPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 71</column></row><table>

1. Genótipo. GG vs AA/AG para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 1,3, 95% de limites de confiança 0,9-2,0, %2 (Yates corri-gido) = 1,86, p=0,17,

Genótipo GG = tendência a susceptível

Tabela 19a. Freqüência do alelo e do genótipo do polimorfismo Tyr 113 HisT/C (éxon 3) da Epóxido hidrolase microssomal (MEH) em COPD e fuman-tes resistentes. • .-

<table>table see original document page 71</column></row><table>

1. Genótipo. TT vs CT/CC para COPD vs resistente, razão de possibilida-des (OR) = 1,5, 95% de limites de confiança 1,0-2,2, %2 (Yates corrigi-do) = 3,51, p=0,06,Genótipo TT = susceptívelTabela 19b. Freqüência do alelo e do genótipo do polimorfismo His 139 ArgA/G (éxon 4) da epóxido hidrolase Microssomal (MEH) em COPD e fuman-tes resistentes.

<table>table see original document page 72</column></row><table>

1. Genótipo. GG vs AA/AG para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 0,64, 95% de limites de confiança 0,3-1,4, %2 (Yates não-corrigido) = 1,43, p=0,23,Genótipo GG = protetor (tendência)

Tabela 20. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo -366 G/A daLipo-oxigenase nos pacientes com COPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 72</column></row><table>

1. Genótipo. AA/AG vs GG para COPP^vs resistente, razão de possibili-,dades (OR) = 0,60, 95% de limites de confiança 0,3-1,1, (Yates cor-rigido^ 2,34, p=0,12,

Genótipo AA/AG = tendência à proteção (GG susceptível)

Tabela 21. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo HOM T2437Cda Proteína do Choque Térmico 70 (HSP 70) nos pacientes com COPD efumantes resistentes.

<table>table see original document page 72</column></row><table>

1. Genótipo. CC/CT vs TT para COPD vs resistente, razão de possibilidades(OR) = 2,0, 95% de limites de confiança 1,3-3,1, %2 (Yates não-corrigido) = 9,52, p=0,002,Genotipo CC/CT - susceptível (TT = protetor)

Tabela 22. Freqüências do alelo e do genotipo do polimorfismo +13924 T/Ado Canal de Cloreto ativado por Cálcio 1 (CLCA1) nos pacientes com COPDe fumantes resistentes.

<table>table see original document page 73</column></row><table>

1. Genotipo. AA vs AT/TT para COPD vs resistente, razão de possibilidades(OR) = 1,7, 95% de limites de confiança 1,0-2,7, %2 (Yates corrigido) =4,51,p=0,03,

AA = susceptível

Tabela 23. Freqüências do alelo e do genotipo do polimorfismo do promotor -159 do antígeno de diferenciação de Monócito CD-14 nos pacientes comCOPD e fumantes resistentes.

<table>table see original document page 73</column></row><table>

1. Genotipo. CC vs CT/TT para COPD vs Resistente, razão de possibili-dades (OR) = 1,4, 95% de limites de confiança 0,9-2,2, %2 (Yates não-corrigido) = 2,12, p=0,15,CC = susceptível (tendência)

Tabela 24. Freqüências do alelo e do genotipo do polimorfismo +49 C/T daElafina nos pacientes com COPD, fumantes resistentes e controles.<table>table see original document page 74</column></row><table>

1. Genotipo. CT/TT vs CC para COPD vs resistente, razão de possibilida-des (OR) = 0,70, 95% de limites de confiança = 0,4-1,3, x2 (Yates não-corrigido) = 1,36, p=0,24,

Genotipo CT/TT = protetor (tendência apenas)

2. Alelo: T vs C para COPD vs resistente, razão de possibilidades (OR) =0,69, 95% de limites de confiança = 0,4-1,2, %2 (Yates não-corrigido) =1,91,p=0,17,

Genotipo T = protetor (tendência apenas)

Tabela 25. Freqüências do alelo e do genotipo do.polimorfismo Gln 27 Gludo Beta2-adrenorreceptor nos pacientes com COPD, fumantes resistentes econtroles.

<table>table see original document page 74</column></row><table>

1. Genotipo. GG vs CG/CC para COPD vs resistente, razão de possibili-dades (OR) = 0,74, 95% de limites de confiança = 0,4-1,2, %2 (Yatesnão-corrigido) = 1,47, p=0,23,GG = protetor (tendência)

2. Genotipo. GG vs CG/CC para COPD vs controles, razão de possibilida-des (OR) = 0,69, 95% de limites de confiança = 0,4-1,2, %2 (Yates não- corrigido) = 2,16, p=0,14,GG = protetor (tendência)

Tabela 26. Freqüências do alelo e do genótipo do polimorfismo -1607 1G/2Gda metaloproteinase de Matriz 1 (MMP1) em pacientes com COPD, fuman-tes resistentes e controles.

<table>table see original document page 75</column></row><table>

1. Genótipo. 1G1G vs restante para COPD vs controles, razão de possibi-lidades (OR) = 0,43, 95% de limites de confiança 0,3-0,7, x2 (Yates não-corrigido) = 13,3, p=0,0003Genótipo 1G1G = protetor

2. Alelo. 1G vs 2G para COPD vs controles, razão de possibilidades (OR)= 0,45, 95% de limites de confiança 0,3-0,6, %2 (Yates corrigido) = 28,8,p<0,0001,1G = protetor

3. Genótipo. 1G1G/1G2G vs restante para COPD vs fumantes resistentes,razão de possibilidades (OR) = 0,55, 95% de limites de confiança 0,4-0,9, x2 (Yates não-corrigido) = 6,83, p=0,009Genótipos 1G1 G/162G = protetor

4. Alelo. 1G vs 2G para COPD vs fumantes resistentes, razão de possibi-lidades (OR) = 0,73, 95% de limites de confiança 0,6-1,0, %2 (Yates cor-rígido) = 4,61, p=0,03,

1G = protetor

5. Genótipo. 2G2G vs 1G1G/1G2G para COPD vs controles, razão depossibilidades (OR) = 3,17, 95% de limites de confiança 1,9-5,3, %2(Yates não-corrigido) = 21,4, p<0,0001

Genótipo 2G2G = susceptível6. Alelo. 2G vs 1G para COPD vs controles, razão de possibilidades (OR)= 2,2, 95% de limites de confiança 1,6-3,0, %2 (Yates corrigido)= 28,8,p<0,00001,2G = susceptível

7. Genótipo. 2G2G vs 1G1G/1G2G para COPD vs resistente, razão depossibilidades (OR) = 1,81, 95% de limites de confiança 1,2-2,9, %2(Yates não-corrigido) = 6,83, p=0,009Genótipo 2G2G = susceptível

8. Alelo. 2G vs 1G para COPD vs resistente, razão de possibilidades (OR)= 1,4, 95% de limites de confiança 1,0-1,8, %2 (Yates corrigido) = 4,61,p=0,0,03,2G = susceptível

Tabela 27. Tabela de sumário dos polimorfismos protetores e de susceptibi-

<table>table see original document page 76</column></row><table><table>table see original document page 77</column></row><table>

Tabela 28. Freqüências combinadas da presença ou da ausência de genóti-pos protetores selecionados (COX2 (-765) CC/CG, B2 adreno-receptor AA,lnterleucina-13 AA, Oxido Nítico Sintase 3 TT e proteína de ligação com aVitamina D AA) em indivíduos fumantes (indivíduos com COPD e fumantesresistentes).<table>table see original document page 78</column></row><table>

Tabela 29. Freqüências combinadas da presença ou da ausência de genóti-pos de susceptibilidade selecionados (genótipos lnterleucina-18 105 AA,PAI-1 -675 5G5G, lnterleucina-13 -1055 TT e Interferon-y-874 TT) nos indi-víduos fumantes (indivíduos com COPD e fumantes resistentes).

<table>table see original document page 78</column></row><table>Tabela 30. Freqüências combinadas da presença ou da ausência de genóti-pos protetores selecionados (COX2 (-765) CC/CG, lnterleucina-13 AA, OxidoNítico Sintase 3 TT, proteína de ligação com a Vitamina D AA/AC, GSTP1AA e a1 -antitripsina MS/SS) nos indivíduos fumantes (indivíduos com COPDe fumantes resistentes).

<table>table see original document page 79</column></row><table>

Discussão

Os resultados anteriores mostram que vários polimorfismos es-tavam associados a susceptibilidade e/ou resistance à doença pulmonarobstrutiva naqueles expostos a ambientes de fumo. É improvável que as as-sociações de polimorfismos individuais por si só, embora tenham valor dis-criminatório, ofereçam uma previsão aceitável de doença. Entretanto, emcombinação estes polimorfismos distinguem fumantes susceptíveis (comCOPD) daqueles que são resistentes. Os polimorfismos representam tantopolimorfismos de promotores, que se acredita que modifiquem a expressãogênica e conseqüentemente a síntese de proteínas quanto polimorfismos deéxons conhecidos por alterarem a seqüência de aminoácidos (e provavel-mente a expressão e/ou a função) em processos conhecidos como sendobásicos à remodelagem pulmonar. Os polimorfismos identificados aqui sãoobservados em genes que codificam proteínas centrais a estes processosque incluem inflamação, remodelagem de matriz e estresse oxidativo.

Na comparação de fumantes com COPD e fumantes combina-dos com função pulmonar quase normal, foram identificados vários polimor-fismos como sendo observados em uma freqüência significativamente maiorou menor que nos grupos de comparação (incluindo o grupo de doadores desangue).

• Na análise dos polimorfismos no promotor -765 C/G do gene da cicloo-xigenase 2, foi observado que o alelo C e o genótipo CC/CG são signifi-cativamente maiores no grupo de fumantes resistentes comparado como grupo com COPD (OR=1,92, P<0,001 e OR=1,98, P=0,003) coerente

com uma função protetora. A maior freqüência comparada com a dogrupo de doadores de sangue também sugere que o alelo C (genótipoCC) está super representado no grupo resistente (ver a Tabela 1).

• Na análise do polimorfismo Arg16Gly do gene do receptor adrenérgico(32, foi observado que o genótipo GG era significativamente maior nogrupo com COPD comparado aos controles (OR=1,83, P=0,004) suge-rindo uma susceptibilidade possível ao fumo associada com este genó-tipo. Embora o genótipo GG também esteja super representado no gru-po resistente seus efeitos podem ser ofuscados por polimorfismos prote-tores (ver a Tabela 2).

• Na análise do polimorfismo 105 C/A do gene IL18, foi observado que oalelo A e o genótipo AA eram significativamente maiores no grupo comCOPD comparado aos controles (OR=1,46, P=0,02 e OR=1,50, P=0,04,respectivamente) coerente com uma função de susceptibilidade. O ge-nótipo AA também era maior no grupo com COPD comparado aos fu-mantes resistentes (OR 1,4, P=0,12) uma tendência coerente com umafunção de susceptibilidade (ver a Tabela 3a).

• Na análise do polimorfismo do promotor -133 G/C do gene IL18, foi ob-servado que o alelo C e o genótipo CC eram significativamente maioresno grupo com COPD comparado aos controles (OR=1,36, P=0,05 e

OR=1,44, P=0,06, respectivamente) coerente com uma função de sus-ceptibilidade. O genótipo CC também era maior no grupo com COPDcomparado com os fumantes resistentes a tendência coerente com umafunção de susceptibilidade (ver a Tabela 3b).

Na análise do polimorfismo do promotor -675 4G/5G do gene do Inibidordo Ativador de Plasminogênio, foi observado que o alelo 5G e o genóti-po 5G5G eram significativamente maiores no grupo com COPD compa-rado ao grupo de fumantes resistentes (OR=1,33, P=0,05 e OR=1,55,P=0,08) coerente com uma função de susceptibilidade. A maior fre-qüência do 5G5G em COPD comparada com a do grupo de doadoresde sangue também sugere que o genótipo 5G5G está associado com asusceptibilidade (ver a Tabela 4).

Na análise do polimorfismo 298 Asp/GIu (T/G) do gene da Oxido NítricoSintase (NOS3), foi observado que o genótipo TT era significativamentemaior no grupo de fumantes resistentes comparado com o grupo de do-adores de sangue (OR=2,2, P=0,03) coerente com uma função proteto-ra, (ver a Tabela 5).

Na análise do polimorfismo Lys 420 Thr (A/C) do gene da proteína deligação com a Vitamina D, foi observado que o alelo A e o genótipo A-A/AC eram maiores que no grupo de fumentes resistentes comparadoscom o grupo com COPD (OR=1,34, P=0,05 e OR=1,39, P=0,10, respec-tivamente) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 6a).Na análise do polimorfismo Glu 416 Asp (T/G) do gene da proteína deligação com a Vitamina D, foi observado que o alelo T e o genótipoTT/TG eram maiores no grupo de fumantes resistentes comparado como grupo de doadores de sangue (OR=1,27, P=0,10 e OR=1,53, P=0,06,respectivamente) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 6b).Na análise do polimorfismo lie 105 Vai (A/G) do gene da Glutationa Stransferase P, foi observado que o alelo A e o genótipo AA eram maio-res no grupo de fumantes resistentes comparado com o grupo de doa-dores de sangue (OR=1,34, P=0,05 e OR=1,45, P=0,07, respectivamen-te) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 7).Na análise do polimorfismo 874 A/T do gene do interferon-y, foi obser-vado que o genótipo AA era significativamente maior no grupo comCOPD comparado aos controles (OR-1,5, P=0,08) coerente com umafunção de susceptibilidade. (ver â Tabela 8).

• Na análise do polimorfismo Arg 130 Gln (G/A) do gene da Interleucina13, foi observado que o genótipo AA era maior no grupo de fumantesresistentes comparado com o grupo de doadores de sangue (OR=2,94,

P=0,09) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 9a).

• Na análise do polimorfismo -1055 (C/T) do gene da Interleucina 13, foiobservado que o genótipo TT era maior no grupo com COPD compara-do com o grupo resistente (OR=6,03, P=0,03) coerente com uma funçãode susceptibilidade. (ver a Tabela 9b).

• Na análise do polimorfismo S da oc1-antitripsina, foi observado que oalelo S e o genótipo MS/SS eram maiores nos fumantes resistentescomparados com o grupo com COPD (OR=2,42, P=0,01) coerente comuma função protetora (Tabela 10).

• Na análise do polimorfismo +489 G/A do gene do Fator de Necrose deTumor a, foi observado que o alelo A e os genótipos AA e AG erammaiores no grupo com COPD comparado aos controles (OR=1,57,P=0,11) coerente com uma função de susceptibilidade (ver a Tabela11a). De maneira inversa, foi observado que o genótipo GG era maiorno grupo de fumantes resistentes, coerente com uma função protetora(ver a Tabela 11a).

• Na análise do polimorfismo -308 G/A do gene do Fator de Necrose deTumor a, foi observado que o genótipo GG era maior no grupo de fu-mantes resistentes comparado com o grupo com COPD (OR=0,77,P=0,20) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 11b). Demaneira inversa, foi observado que o alelo A e os genótipos AA e AGeram maiores no grupo com COPD (OR=1,3, P=0,20), coerente comuma função de susceptibilidade (ver a Tabela 11b).

• Na análise do polimorfismo C89Y A/G do gene de SMAD3, foi observa-do que os genótipos AA e AG eram maiores no grupo de fumantes resis-tentes comparado com o grupo com COPD (OR=0,26, P=0,07) coerentecom uma função protetora, (ver a Tabela 12). De maneira inversa, foiobservado que o genótipo GG era maior no grupo com COPD, coerente com uma função de susceptibilidade (ver a Tabela 12).

• Na análise do polimorfismo E469K A/G do gene da molécula de AdesãoIntracelular 1, foi observado que o alelo G e o genótipo GG eram maiores no grupo com COPD comparado aos controles (OR=1,3, P=0,09 e

OR=1,6, P=0,07, respectivamente) coerente com uma função de susceptibilidade (ver a Tabela 13).

• Na análise do polimorfismo Gly 881 Arg G/C do gene da Caspase(NOD2), foi observado que os genótipos CC e CG eram maiores no grupo com COPD comparado aos controles (OR=3,2, P=0,11) coerentecom uma função de susceptibilidade (ver a Tabela 14).

• Na análise do polimorfismo 161 G/A do gene da lectina 2 de ligação àManose, foi observado que o genótipo GG era maior no grupo de fumantes resistentes comparado com o grupo com COPD (OR=0,53,P=0,003) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 15).

• Na análise do polimorfismo -1903 G/A do gene da Quimase 1, foi observado que o genótipo AA era maior no grupo de fumantes resistentescomparado com o grupo com COPD (OR=0,73, P=0,17) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 16).

• Na análise do polimorfismo Arg 197 Gln G/A do gene da N-Acetil transferase 2, foi observado que o genótipo AA era maior no grupo de fuman-tes resistentes comparado com o grupo com COPD (OR=0,50, P=0,05)coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 17).

• Na análise do polimorfismo -511 A/G do gene da Interleucina 1B, foi observado que o genótipo GG era maior no grupo com COPD comparadoaos controles (OR=1,3, P=0,17) coerente com uma função de susceptibilidade (ver a Tabela 18).

• Na análise do polimorfismo Tyr 113 His T/C do gene da epóxido hidrola-se Microssomal, foi observado que o genótipo TT era maior no grupocom COPD comparado aos controles (OR=1,5, P=0,06) coerente comuma função de susceptibilidade (ver a Tabela 19a).

• Na análise do polimorfismo Arg 139 G/A do gene da epóxido hidrolaseMicrossomal, foi observado que o genótipo GG era maior no grupo defumantes resistentes comparado com o grupo com COPD (OR=0,64,P=0,23) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 19b).

• Na análise do polimorfismo -366 G/A do gene da Lipo-oxigenase 5, foiobservado que os genótipos AG e AA eram maiores no grupo de fuman-tes resistentes comparado com o grupo com COPD (OR=0,60, P=0,12)coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 20). De maneira in-versa, foi observado que o genótipo GG era maior no grupo com COPD,coerente com uma função de susceptibilidade (ver a Tabela 20).

Na análise do polimorfismo HOM T2437C do gene da Proteína do Cho-que Térmico 70, foi observado que os genótipos CC e CT eram maioresno grupo com COPD comparado aos controles (OR=2,0, P=0,002) coe-rente com uma função de susceptibilidade (ver a Tabela 21). De manei-ra inversa, foi observado que o genótipo TT era maior no grupo de fu-mantes resistentes, coerente com uma função protetora (ver a Tabela21).

• Na análise do polimorfismo +13924 T/A do gene do Canal de Cloretoativado por Cálcio 1, foi observado que o genótipo AA era maior no gru-po com COPD comparado aos controles (OR=1,7, P=0,03) coerentecom uma função de susceptibilidade (ver a Tabela 22).

• Na análise do polimorfismo -159 C/T do gene do antígeno de diferencia-ção de Monócito CD-14, foi observado que o genótipo CC era maior nogrupo com COPD comparado aos controles (OR=1,4, P=0,15) coerentecom uma função de susceptibilidade (ver a Tabela 23).

• Na análise do polimorfismo Éxon 1 +49 C/T do gene da Elafina, foi ob-servado que o T alelo e os genótipos CT e TT eram maiores no grupode fumantes resistentes comparado com o grupo com COPD (OR=0,69,P= 0,17, OR=0,70, P=0,24, respectivamente) coerente com uma funçãoprotetora, (ver a Tabela 24).

• Na análise do polimorfismo Gln 27 Glu C/G do gene do receptor (32-adrenérgico, foi observado que o genótipo GG era maior no grupo defumantes resistentes e nos controles doadores de sangue comparadoscom o grupo com COPD (OR=0,74, P=0,23, OR=0,69, P=0,14, respecti-vamente) coerente com uma função protetora, (ver a Tabela 25).• Na análise do polimorfismo do promotor -1607 1G/2G do gene deMMP1, foi observado que o alelo 1G e os genótipos 1G1G/1G2G eramsignificativamente maiores no grupo de fumantes resistentes comparadocom o grupo com COPD (OR=0,73, p=0,03 e OR=0,55, p=0,009), coe-rente com uma função protetora. A maior freqüência do 1G1G no gruporesistente comparado com o grupo de doadores de sangue também su-gere que o alelo 1G é protetor (ver a Tabela 26).

É aceito que a disposição a doenças pulmonares obstrutivascrônicas (por exemplo, enfisema e COPD) é o resultado dos efeitos combi-nados da constituição genética individual e sua exposição durante toda avida a vários poluentes aéreos dos quais a fumaça do fumo é a mais co-mum. Similarmente, é aceito que a COPD abranja várias doenças pulmona-res obstrutivas e que seja caracterizada por vazões expiratórias prejudicadas(por exemplo, FEV1). Os dados contidos aqui sugerem que vários genespodem contribuir para o desenvolvimento de COPD. Um número de muta-ções genéticas atuando em combinação promovendo ou protegendo os pul-mões de danos pode estar envolvida na resistance ou na susceptibilidadeelevada.

Partindo das análises dos polimorfismos individuais, foram iden-tificados 19 genótipos protetores e analisados em relação as suas freqüên-cias no grupo de fumantes consistindo em fumantes resistentes e daquelescom COPD. Quando as freqüências de fumantes resistentes e fumantes comCOPD foram comparadas de acordo com a presença de genótipos proteto-res 0, 1 e 2+ (além de COX2 CC/CG, p2 adreno-receptor Arg 16 Gly AA,lnterleucina-13 Arg 130 Gln AA, Oxido Nítrico Sintase 3 298 TT e proteína deligação com a Vitamina D 420 AA/AC) foram observadas diferenças signifi-cativas (total ^2=16,43, P=0,0003) sugerindo que fumantes com genótiposprotetores 2+ tinham uma probabilidade três vezes maior de serem resisten-tes (OR=3,1, P=0,004) enquanto que naqueles sem genótipos protetores eraquase duas vezes mais provável que tivessem COPD (OR=1,74, P=0,006)(ver a Tabela 28). Verificadas de uma outra maneira, as chances de terCOPD diminuíram de 63%, 55% para 32% em fumantes com 0, 1 e 2+ dosgenótipos protetores testados, respectivamente. Na análise de uma triagemde genótipos protetores (além de COX2 CC/CG, NOS3 298 TT, VDBP-420AA/AC, VDBP-416 TT/TG, GSTP1 AA, IL-13-140 AA e a1 -AT MS/SS), foiobservada uma diferença significativa na freqüência de COPD versus resis-tência naqueles com 0 versus 1+ dos genótipos protetores testados(OR=2,82, P=0,0004) (ver a Tabela 30), mostrando um aumento de 2-3 ve-zes em COPD naqueles com 0 dos genótipos protetores.

Partindo das análises dos polimorfismos individuais, foram iden-tificados 17 genótipos de susceptibilidade e analisados em relação as suasfreqüências no grupo de fumantes consistindo de fumantes resistentes e da-queles com COPD. Quando as freqüências de fumantes resistentes e defumantes com COPD eram comparadas de acordo com a presença dos ge-nótipos de susceptibilidade 0, 1 e 2+ (além dos genótipos lnterleucina-18105 AA, PAI-1 -675 5G5G, lnterleucina-13 -1055 TT e Interferon-y-874 TT)foram observadas diferenças significativas (total x2=8,72, P=0,01) sugerindoque os fumantes com 2+ dos genótipos de susceptibilidade testados tinhamuma probabilidade duas vezes maior de ter COPD (OR=1,9, P=0,009) en-quanto que aqueles com nenhum dos genótipos de susceptibilidade testadostinham uma probabilidade de 1,5 vez de ter COPD (OR=1,5, P=0,05) (ver aTabela 29). Verificadas de outra maneira, as chances de ter COPD aumenta-ram de 49%, 55% para 68% em fumantes com 0, 1 e 2+ dos genótipos desusceptibilidade testados, respectivamente.

Estas descobertas indicam que os métodos da presente inven-ção podem prever COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema em umindivíduo bem antes que os sintomas se apresentem.

Estas descobertas, portanto, apresentam ainda oportunidadespara intervenções terapêuticas e/ou regimes de tratamento, como discutidoaqui. Sucintamente, tais intervenções ou regimes podem incluir o forneci-mento ao indivíduo de motivação para implementar uma alteração no estilode vida ou métodos terapêuticos direcionados para a normalização da ex-pressão do gene aberrante ou da função do produto gênico. Por exemplo, oalelo -765 G no promotor do gene que codifica COX2 está associado à maiorexpressão do gene em relação à observada com o alelo C. Como mostradoaqui, o alelo C é protetor em relação à predisposição a ou ao risco potencialde desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema,em que uma terapia adequada nos indivíduos que se sabe que possuem oalelo -765 G pode ser a administração de um agente capaz de reduzir a ex-pressão do gene que codifica COX2. Uma terapia alternativa adequada podeser a administração a tal indivíduo de um inibidor de COX2 tal como aborda-gens terapêuticas adicionais, terapia gênica, RNAi. Em um outro exemplo,como mostrado aqui o alelo -133 C no promotor do gene que codifica IL18está associado à susceptibilidade a COPD, enfisema ou tanto COPD quantoenfisema. O alelo -133 G no promotor do gene que codifica IL18 está asso-ciado à maiores níveis de IL18, em que uma terapia adequada nos indiví-duos que se sabe que possuem o alelo -133 C.pode ser a administração deum agente capaz de aumentar a expressão do gene que codifica IL18. Aindaem um outro exemplo, como mostrado aqui o genótipo -675 5G5G no pro-motor do gene do Inibidor do Ativador de Plasminogênio está associado àsusceptibilidade a COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. O alelo5G está supostamente associado à maior ligação de uma proteína represso-ra e uma menor transcrição do gene. Uma terapia adequada pode ser a ad-ministração de um agente capaz de diminuir o nível de repressor e/ou dereprimir a ligação do repressor, aliviando assim seu efeito de regulação paramenos sobre a transcrição. Uma terapia alternativa pode incluir terapia gêni-ca, por exemplo, a introdução de pelo menos uma cópia adicional do genedo Inibidor do Ativador de Plasminogênio que possui uma afinidade reduzidaem relação à ligação do repressor (por exemplo, uma cópia do gene quepossui um genótipo -675 4G4G).

Os métodos e os agentes adequados para uso em tal terapiasão bem conhecidos na técnica e são discutidos aqui.

A identificação tanto de polimorfismos de susceptibilidade quan-to protetores como descrito aqui também fornece a oportunidade de selecio-nar compostos candidatos para avaliar sua eficiência nos métodos de trata-mento profilático e/ou terapêutico. Tais métodos de triagem envolvem a iden-tificação de qual de uma faixa de compostos candidatos possui a capacidadede reverter ou agir contra um efeito genotípico ou fenotípico de um polimor-fismo de susceptibilidade ou a capacidade de imitar ou reproduzir um efeitogenotípico ou fenotípico de um polimorfismo protetor.

Ainda adicionalmente, são fornecidos métodos para avaliar acapacidade de resposta provável de um indivíduo a uma abordagem profilá-tica ou terapêutica disponível. Tais métodos possuem aplicação particularquando a abordagem de tratamento disponível envolve a restauração daconcentração fisiologicamente ativa de um produto de um gene expressopartindo de um excesso ou de um déficit que estará dentro de uma faixa queé normal para a idade e para o sexo do indivíduo. Em tais casos, o métodocompreende a detecção da presença ou da ausência de um polimorfismo desusceptibilidade que, quando presente, regula para mais ou regula para me-nos a expressão do gene de forma que o estado de tal excesso ou déficit é oresultado, com aqueles indivíduos em que o polimorfismo está presentesendo provavelmente capazes de responder ao tratamento.

A Tabela 31 abaixo apresenta exemplos representativos de po-limorfismos em desequilíbrio de ligação com os polimorfismos especificadosaqui. Os exemplos de tais polimorfismos podem ser localizados utilizandobancos de dados públicos, tal como o disponível em www.hapmap.org. Ospolimorfismos especificados estão indicados nas colunas marcadas comNOME DO SNP. Os identificadores únicos estão indicados nas colunas mar-casdas com NÚMERO RS.Tabela 31. Polimorfismos relatados como estando em desequilíbrio de liga-ção (a não ser que seja citado) com o polimorfismo especificado).

NÚMERO RS NOME DO SNP NÚMERO RS NOME DO SNP NÚMERO RS

rs6684912 rs5277

rs7527769 rs2745559 rs2066823

rs7550380 rs12042763 rs4648263

rs2206594 rs4648250 rs4987012

rs6687495 rs4648251 rs20428

rs6681231 rs2223626 rs20429

rs13376484 rs689462 rs4648264

rs12064238 rs4648253 rs4648265

rs10911911 rs689465 rs4648266

rs12743673 rs12027712 rs4648267

rs10911910 rs689466 rs11567824

rs12743516 rs2745558 rs4648268

rs10911909 rs3918304 rs4648269

rs1.119066 rs20415 rs4648270

rs1119065 rs20416 rs12759220

rs1119064 rs4648254 rs20430

rs10798053 rs11567815 rs4648271

rs12409744 -765G>C rs20417 rs11567825

rs10911908 rs4648256 rs4648273

rs10911907 rs20419 rs16825748

rs7416022 rs2734779 rs4648274

rs2745561 rs20420 rs16825745

rs10911906 rs20422 rs20432

rs2734776 rs20423 rs20433

rs2734777 rs5270 rs3218622

rs12084433 rs20424 rs2066826

rs2734778 rs5271 rs5278

rs2745560 rs4648257 rs4648276

rs2223627 rs11567819 rs20434NOME DO SNP NÚMERO RS

rs2383517

rs4295848

rs4428839

rs4609389

rs4428838

rs12131210

rs2179555

rs2143417

rs2143416

rs11583191

rs2383516

rs2383515

rs10911905

rs10911904

rs4648287

rs5272

rs4648288

rs5273

rs5274

rs3218625

rs4648289

rs4648290

rs1051896

rs5275

ADRB SNRsrs2082382rs2082394rs2082395rs9325119rs9325120rs12189018rs11168066rs11959615rs11958940rs4705270

rs10079142rs9325121rs11746634rs11168067rs9325122rs11957351

NOME DO SNP NÚMERO RS

rs3134591

rs3134592

rs20426

rs4648258

rs11567820

rs2745557

rs11567821

rs4648259

rs4648260

rs4648261

rs4648262

rs11567822

rs11567823

rs2066824

rs20427

rs1042719

rs3729944

rs3730182

rs1042720

rs6879202

rs3777124

rs1803051

rs8192451

rs4987255

rs3177007

rs1126871

rs6885272

rs6889528

rs4521458

rs10463409

rs7702861

IL-18 SNPs

rs187238

rs5744228

rs360718

rs360717

rs5744229

rs 100000353

rs5744231

rs5744232

rs7106524

rs 189667

NOME DO SNP NÚMERO RS

rs3218623

rs3218624

rs5279

rs4648278

rs13306034

rs2853803

rs4648279

rs4648281

rs4648282

rs11567826

rs4648283

rs4648284

rs4648285

rs11567827

rs4648286

rs5744244

rs360722

rs5023207

rs5744246

rs5744247

-133 C/G rs360721

rs4988359

rs12721559

rs5744248

rs5744249

rs5744250

rs5744251

rs100000356

rs1834481

rs17215057

rs5744253

rs5744254

rs5744255

rs5744256

rs5744257

rs360720

rs5744258

rs5744259

rs5744260

rs5744261

105 A/C rs549908

PAI-1 SNPsNOME DO SNP NÚMERO RS

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rs12703107

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rs6946091

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rs10952297

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rs11771443

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rs1800783

rs3918155

rs3918156

rs2566519

rs3918157

rs3918158

rs3918159

rs2566516

rs3918225

rs3918160

rs1800779

rs2243311

rs3918161

rs10952298

rs2070744

rs3918226

rs3918162

rs3918163

NOME DO SNP NÚMERO RS

rs 12290658

rs12271175

rs11606049

rs360716

rs360715

rs360714

rs2043055

rs5744233

rs795467

rs12270240

rs100000354

rs4937113

rs100000355

rs360723

rs5744237

rs5744238

rs5744239

rs7932965

rs11214103

rs5744241

rs5744242

rs5744243

rs9282804Asp298Glu rs1799983VDBP SNPsrs222035rs222036rs16846943rs7668653rs1491720rs16845007rs17830803Glu416Asp rs7041Lys420Thr rs4588

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rs9016

rs1352846

rs222039

rs3775154

rs222040

rs843005

rs222041

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rs705121

rs11723621

rs2298850

rs705120

rs2298851

rs844806

rs1491709

NOME DO SNP NÚMERO RS

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NOS3 SNPsrs2373962rs2373961rs6951150rs13238512rs10247107rs10276930rs10277237

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rs2070741

rs2070742

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rs222048

rs432031

rs432035

rs222049

rs222050

rs12510584

rs17467825

GSTP1 SNPs

rs656652

rs625978

rs6591251

rs12278098

rs612020

rs12284337

rs12574108

rs6591252

rs597717

rs688489

rs597297

rs6591253

rs6591254

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rs3918166 rs222044 rs7949587

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rs3918170 rs222047 rs8191432

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rs8191441 rs9282708 rs6647

rs1079719 rs2069720 rs8350

rs1871041 rs1042274 rs2230075

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rs8191444 rs2069734 Salelo rs17580

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rs762803 rs2069726 rs11846959

rs8191449 rs2069727 rs1802962

rs947894 IL-13 SNPs rs2749521

rs4986948 -1055 C/T rs1800925 rs2753939

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rs749174 rs2069755 rs1802961

rs8191450 rs2069741 rs1050469

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rs1799811 rs2069743 rs1050520

rs11553890 rs2069756 rs12077

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rs1871042 rs1295687 rs 1303

rs11553892 rs3212145 rs1802960

rs4891 rs2069744 rs1243163

rs6413486 rs2069745 rs2073333rs5031031rs947895[lFN-SNPslrs2069707rs3814242rs2069709rs206971Qrs2069711rs2069712874 A/T " rs2430561

rs2069713rs1861494rs2234685rs1861493TS2069714rs2069715rs2069716rs2069717

Arg130Gln

rs2069746

rs2069747

rs2069748

rs1295686

rs20541

rs2069749

rs1295685

rs848

rs2069750

rs847

a1-

antitripsinaSNPs

rs709932rs11558261rs20546rs11558263F1028580rs7145770rs2239652

1237 G/A

rs1243164rs7144409rs7142803rs1243165rs1051052rs1243166rs11628917rs 11832rs9944155rs11568814

rs877081rs877082rs877083rs877084rs875989rs9944117rs1884546rs1884547

+489 G/A

-308 G/A

C89Y

E469K

rs1885065 rs2735442 rs8046608

rs1884548 rs2569693 rs5743264

rs1243167 rs281439 rs5743266

rs17751614 rs281440 rs2076752

rs1884549 rs2569694 rs5743267

rs1243168 rs11575073 rs8061316

rs17090693 rs2569695 rs8061636

rs17824597 rs2075741 rs16948754

rs11575074 rs7206340

rs1799964 rs2569696 rs2076753

rs1800630 rs2735439 rs2067085

rs1799724 rs2569697 rs16948755

rs1800610 rs2075742 rs2111235

rs3093662 rs2569698 rs2111234

rs3093664 rs11669397 rs7190413

rs1800629 (1)____ rs901886 rs7206582

rs885742 rs8045009

C89Y sem rs (2) «inMMBKWBiaHMHaMBnnH rs2569699 rs6500328

rs1056538 rs7500036

rs1799969 rs11549918 rs8057341

rs5493 rs2569700 rs12918060

rs5030381 rs2228615 rs7204911

rs5494 rs2569701 rs7500826

rs3093033 rs2569702 TS4785449

rs5495 rs2735440 rs12922299

rs1801714 rs2569703 rs11649521

rs13306429 rs10418913 rs13339578

rs2071441 rs1056536 rs17221417

rs5496 rs2569704 rs13331327

rs5497 rs11673661 rs11642482

rs13306430 rs2569705 rs11642646

rs5498 rs10402760 rs17312836rs5030400

rs2071440

rs5499

rs3093032

rs1057981

rs5500

rs5501

rs5030383

rs281436

rs923366

rs281437

rs3093030

rs5030384

rs5030385

rs3810159

rs281438

rs3093029

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rs2569706

rs2569707

rs2735441

rs2436545

rs2436546

rs2916060

rs2916059

rs2916058

rs2569708

rs12972990

rs735747

rs885743

NOD2 SNPs

rs4785224

rs5743261

rs5743262

rs5743263

rs11645386

rs7187857

rs8061960

rs5743294

rs2357791

rs7359452

rs7203344

rs5743295

rs5743296

rs3135499

rs5743297

rs5743298

rs5743299

rs3135500

rs5743300

rs8056611

rs2357792

rs12600253

rs 12598306

rs7205423 1

rs718226

MBL2 SNPs

rs7899547

rs10824797

rs11003131

rs930506

rs930505

rs11003130

rs2384044

rs2384045

rs5027257

rs2384046

rs 12263867

rs11003129

rs12221393

rs5743268

rs5743269

rs5743270

rs12925051

rs12929565

rs13380733

rs13380741

rs11647841

rs10451131

rs2066842

rs5743271

rs7498256

rs5743272

rs5743273

rs2076754

rs2066843

rs1078327

rs1031101rs10824795rs10824794rs920725rs7916582rs920724rs16933335rs11003125rs7100749rs11003124rs7084554rs7096206rs11003123rs11575988rs11575989rs7095891rs4647963rs8179079rs5030737G/A rs1800450rs1800451rs12246310rs12255312rs11003122rs1982267rs1982266rs4935047rs4935046rs10824793rs1838066rs1838065rs930509rs930508rs930507CMA1 SNPsrs12920040 rs2165811 rs1956920

rs12920558 rs12782244 rs1956921

rs12919099 rs11003128 -1903 G/A rs1800875

rs12920721 rs17664818 rs1800876

rs2076755 rs7475766 rs3759635

rs5743290 rs10824796 rs1956922

rs5743291 rs16933417 rs1956923

rs11642651 rs2165810 NAT2 SNPs

rs1861756 rs11003127 rs11780272

rs749910 rs3925313 rs2101857

rs4990643 rs7094151 rs13363820

rs1077861 rs7071882 rs6984200

rs5743292 rs12264958 rs13277605

rs9921146 rs11003126 rs9987109

-366

rs7820330 rs7596849 G/A rs9550373

rs7460995 rs4848306 rs11542984

rs2087852 rs3087257 rs4769055

rs2101684 rs7556811 rs17074937

rs7011792 rs7556903 rs9671065

rs1390358 rs6743438 rs9579645

rs923796 rs6743427 rs9579646

rs4546703 rs6761336 rs4075131

rs4634684 rs6761335 rs4075132

rs2410556 rs6743338 rs9315043

rs11996129 rs6761245 rs9315044

rs4621844 rs6761237 rs4597169

rs11785247 rs6743330 rs9578037

rs1115783 rs6743326 rs9578196

rs1115784 rs6743322 rs4293222

rs1961456 rs6761220 rs10507391

rs1112005 rs6761218 rs12429692

rs11782802 rs5021469 rs4769871

rs973874 rs6710598 rs4769872

rs1495744 rs1143623 rs4769873

rs7832071 rs1143624 rs12430051

rs1805158 rs2708920 rs9315045

rs1801279 rs1143625 rs9670278

rs1041983 rs2853545 rs4503649

rs1801280 rs2708921 rs9508832

rs4986996 rs1143626 rs9670460

rs12720065 rs3087258 rs3885907

rs4986997 C-511T rs16944 rs3922435

rs1799929 rs3917346 rs9551957

rs1799930" rs4986962 rs12018461

rs 1208 rs1143627 rs9551958

rs1799931 MEH SNPs rs10467440

rs2552 Tyr113His rs1051740 (2) rs12017304

rs4646247 His139Arg rs2234922 (2) ALOX5AP rs9551959

rs971473 SNPs rs11617473

rs721398 rs4076128 rs11147438lL-ÍB.SNPs. rs9508830 rs10162089

rs10169916 rs4073259 rs9551960

rs13009179 rs4073260 rs9285075

rs4849127 rs11616333 rs12431114

rs4849l26 rs4073261 rs4254165

rs7558108 rs4075474 rs4360791

rs13032029 rs4075473 rs17612031

rs13013349 rs9670115 rs3803277

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rs3087255 rs3809376 rs12429469

rs3087256 rs12877064 rs17612099

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rs12621220 rs9670503 rs4356336

rs4584668 rs2075800 rs2734714

rs4238137 CLCA1 SNPs rs6661730

rs17612127 rs2791519 rs2753377

rs4147063 rs2791518 rs2753378

rs4147064 rs5744302 rs2145412

rs4147062 rs1321697 rs2180762

rs9315046 rs2753338 rs1005569

rs9506352 rs2791517 rs5744325

rs9670531 rs5744303 rs5744326

rs9671182 rs2734706 rs1985554

rs9315047 rs2753345 rs1985555

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rs9652070 rs2753348 rs100000103

rs17074966 rs2753349 rs1969719

rs4387455 rs5744304 rs2390102

rs4254166 rs5744305 rs5744329

rs4075692 rs1358826 rs1407142

rs17690748 rs2753359 rs2753384

rs9671124 rs5744306 rs2753385

rs9671125 rs2734711 rs5744330

rs9741436 rs5744307 rs5744331

rs9578197 rs2734712 rs926064

rs4769056 rs2753361 rs926065

rs11147439 rs2753364 rs926066

rs12721459 rs 1555389 rs926067

rs4769874 HSR70 H@M#* rs2753365 rs2753386

rs100000100 rs2180764

rs1043618 rs100000101 rs2734689

rs11576009 rs5744310 rs5744332

rs11557922 rs5744311 rs5744333

rs11576010 rs5744312 rs11161837

rs1008438 rs4656114 rs5744335

rs11576011 rs5744313 rs2038485

rs4713489 rs2753367 rs3765989

rs16867582 rs4656115 rs2734690

rs12526722 rs2734713 rs5744336

rs6933097 rs5744314 rs2734691

rs12213612 rs5744315 rs2734692rs481825rs7757853rs7757496rs9469057rs12182397rs16867580rs2075799rs482145rs2227957T2437C rs2227956rs2227955

rs5744345

rs1358825

rs2145410

rs2734695

rs5744346

rs5744347

rs100000105

rs5744349

rs4655913

rs1321696

rs5744352

rs11583355

rs100000106

rs1321695

+13924

T/A ; rs1321694

rs2791514rs2734696rs5744354rs2791513-- rs2753332rs2791512rs2791511rs2734697

rs6877461rs3822356rs6877437rs12153256rs11554680rs12109040rs12517200rs5744430rs5744431rs 100000092rs5744433

rs100000093rs4912717rs100000094rs100000095

rs5744316

rs5744317

rs5744318

rs926063

rs5744319

rs5744320

rs5744321

rs5744322

rs5744323

rs5744324

rs2791516

rs5744443

rs5744444

rs3138074

rs13166911

rs2563310

rs2569193

rs2569192

rs5744446

rs5744447

rs5744448

rs3138076

rs 12519656

rs5744449

rs2915863

rs3138078rs6875483rs2569191rs5744451rs5744452rs100000098rs17118968rs5744455-159 C/T rs2569190rs2569189TS2563303rs3138079rs2228049rs13763rs11556179rs4914Elafin SNPsrs2868237rs4632412rs7347427rs6032032

rs10854230rs7347426rs8183548rs6104047

rs5744337

rs5744338

rs2734694

rs5744339

rs100000104

rs2791515

rs4656116

rs5744342

rs5744343

rs2180761

rs5744344

rs6032038rs6032039rs2267863rs6124692+49 C/T Sem rs

rs17333103rs17333180rs1983649rs16989785rs17424356rs6017500rs6032040rs6017501rs2664581

rs17424474rs17333381rs1053826rs2664533rs1053831rs2664520rs2267864rs13038355rs13043296rs13039213rs6104049rs13043503rs6104050rs17424578rs17424613rs6017502rs6094101rs6130778rs6130779rs6104051rs6104052ADBR2SNPsrs2082382rs2082394rs2082395rs100000096

rs6864930

rs100000097

rs6864583

rs6864580

rs6889418

rs6889416

rs5744440

rs5744441

rs5744442

rs6513967rs13038813rs8118673rs7346463rs7362841rs13042694rs13038342rs7363327rs6073668rs13044826

rs9325119rs9325120rs12189018rs11168066rs11959615rs11958940rs4705270rs10079142rs9325121rs11746634

rs11168067rs9325122rs 11957351rs11948371rs11960649rs1432622rs1432623rs11168068rs17778257rs2400706rs2895795rs2400707rs2053044rs17108803rs12654778rs11168070rs11959427rs1042711rs1801704rs1042713

Gln27Glu rs1042714rs1042717rs1800888rs1042718: SOD3 SNPs

Arg213Gly rs1799895 (2)

rs1529717rs1046909rs2241712rs2241713rs2241714rs11673525rs2873369rs11083617

rs11083616

rs4803458rs11670143rs1982072rs11668109

rs1800468rs4987025rs1800469rs11466314rs12977628rs12977601rs12985978rs11466315rs11551223rs11551226rs11466316rs13306706rs13306707rs13306708rs9282871LeulOPro rs1982073rs1800471rs13447341rs11466318rs12976890rs12978333rs10420084rs10418010rs12983775rs12462166rs2241715rs9749548rs7258445rs11466320rs11466321rs8108052rs6508976rs8108632rs11466324rs2241716

rs2241717

rs2288873rs12973435rs2014015rs1989457

rs542603

rs574939

rs573764

rs7102189

rs575727

rs552306

rs634607

rs12286876

rs12285331

rs519806

rs12283571

rs2839969

rs2000609

rs7125865

rs570662

rs11225427

rs484915

rs470307

rs2408490

rs12279710

rs685265

rs7Í07224

rs1155764

rs534191

rs509332

rs12283759

rs2105581

rs470206

rs533621

-1607 G/GG rs1799750rs470211rs470146rs2075847rs473509rs498186GSTM1 poli-morfismoAlelo nulo

Nulo Sem rs (2)

MMP9 SNPsrs11696804rs6104416-1562 Ç/T

rs13345981 rs10406816 rs3933239

rs11666933 rs8102918 rs3933240

rs11466310 rs4803455 rs6094237

rsl 1466311 MMP1 SNPs rs11697325

rs2317130 rs529381 rs6130988

rs4803457 rs1144396 rs6073983

rs3087453 rs504875 rs6130989

rs1800820 rs526215 rs6130990

rs1054797 rs12280880 rs10211842

rs6073984 rs8125587 TIMP3 SNPs

rs6073985 rs3918253 rs5754289

rs8121146 rs2274755 rs5754290

rs6032620 rs2664538 rs9606994

rs11698788 rs3918254 rs7285034

rs6032621 rs6130993 rs13433582

rs6065912 rs3918255 rs1962223

TS6104417 rs2236416 rs8137129

rs3848720 rs6130994 rs1807471

rs13040272 rs3918256 rs7290885

rs6104418 rs3918281 rs5749511

rs3848721 rs3787268 rs11703366

rs3848722 rs3918257 rs4990774

rs6104419 rs6017725 -1296 T/C rs9619311

rs4810482 rs6032623 rs2234921

rs3761157 rs3918258 rs2234920

rs3761158 rs2250889 rs16991235

rs3761159 rs3918259 rs4638893

rs8113877 rs3918260 rs12169569

rs6065913 rs13969 rs5998639

rs6104420 rs6104427 rs7284166

rs6104421 rs6104428 rs5749512

rs3918240 rs2274756

rs6104422 rs6017726

rs3918278 rs3918261

rs3918241 rs6032624

rs3918242 rs3918262

rs3918243 rs3918263

rs3918279 rs3918264

rs3918280 rs6130995

rs4578914 rs6130996

rs6017724 rs3918265

rs3918244 rs3918266

rs3918245 rs3918267

rs6130992 rs6073987

rs3918247 rs6073988

rs3918248 rs3918282

rs3918249 rs1802909

rs6104423 rs13925

rs6104424 rs20544

rs6104425 rs1056628

rs6104426 rs1802908

rs3918250 rs2664517rs1805089 rs9509rs3918251 rs3918268rs13040572 rs3918269rs13040580 rs3918270rs3918252 MMP12 SNPs

rs8125581 -82 A/G rs2276109(2)

(1 = nenhum outro SNPs relatado como estando em LD, 2 = nenhum outroSNPS relatado como estando em LD)

Aplicação Industrial

A presente invenção se direciona a métodos para a avaliação dorisco de um indivíduo de desenvolvimento de doença pulmonar obstrutivacrônica (COPD), enfisema ou tanto COPD quanto enfisema. Os métodoscompreendem a análise dos polimorfismos contidos aqui mostrados comoestando associados a um maior ou um menor risco de desenvolvimento deCOPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema ou a análise dos resulta-dos obtidos partindo de tal análise. O uso dos polimorfismos contidos aquimostrados como estando associados a um maior ou um menor risco de de-senvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema na ava-liação do risco de um indivíduo também é fornecido, assim como sondas einiciadores de nucleotídeos, kits e microarranjos adequados para tal avalia-ção. São também fornecidos métodos de tratamento dos indivíduos quepossuem os polimorfismos descritos aqui. São também fornecidos métodospara a triagem de compostos capazes de modular a expressão dos genesassociados com os polimorfismos descritos aqui.

Todas as patentes, publicações, artigos científicos e outros do-cumentos e materiais referidos ou mencionados aqui são indicativos dos ní-veis de perícia dos versados na técnica à qual a invenção se refere e cadatal documento e material referidos é incorporado aqui como referência até amesma extensão como se tivesse sido incorporado como referência em suatotalidade individualmente ou apresentado aqui em sua totalidade. Os reque-rentes reservam o direito de incorporar fisicamente neste relatório descritivoqualquer e todos os materiais e informação de quaisquer tais patentes, pu-blicações, artigos científicos, sites da web, informação disponível eletroni-camente e outros materiais ou documentos referidos.

Os métodos e as composições específicos descritos aqui sãorepresentativos de várias modalidades ou de modalidades preferidas e sãoapenas exemplos e não são pretendidos como limitações do âmbito da in-venção. Outros objetivos, aspectos, exemplos e modalidades ocorrerão aosversados na técnica após a consideração deste relatório descritivo e sãoabrangidos dentro do espírito da invenção que é definido pelo âmbito dasreivindicações. Será facilmente evidente para um perito na arte que substitu-ições e modificações variáveis podem ser feitas na invenção divulgada aquisem sair do âmbito e do espírito da invenção. A invenção descrita aqui ade-quadamente de forma ilustrativa pode ser praticada na ausência de qualquerelemento ou elementos ou limitação ou limitações, que não são especifica-mente divulgadas aqui como essenciais. Assim, por exemplo, em cada casocontido aqui, nas modalidades ou nos exemplos da presente invenção, qual-quer um dos termos "compreendendo", "consistindo essencialmente em" e"consistindo em" pode ser substituído por qualquer um dos outros dois ter-mos no relatório descritivo, indicando assim exemplos adicionais, que pos-suem um âmbito diferente, de várias modalidades alternativas da invenção.Ainda, os termos "compreendendo", "incluindo", "contendo" etc. devem serlidos de forma expansiva sem limitação. Os métodos e os processos descri-tos de forma ilustrativa aqui podem adequadamente ser praticados em or-dens diferentes de etapas e que não são necessariamente restritos às or-dens de etapas indicadas aqui ou nas reivindicações. É ainda como utilizadoaqui e nas reivindicações em anexo, que as formas no singular "um", "uma","o" e "a" incluem referência no plural a não ser que o contexto determine cla-ramente outra maneira. Assim, por exemplo, uma referência a "uma célulahospedeira" inclui um grande número (por exemplo, uma cultura ou uma po-pulação) de tais células hospedeiras e assim por diante. Sob nenhuma cir-cunstância a patente pode ser interpretada como sendo limitada aos exem-plos ou às modalidades ou aos métodos específicos descritos especifica-mente aqui. Sob nenhuma circunstância a patente pode ser interpretada co-mo sendo limitada por qualquer citação feita por qualquer Examinador ouqualquer outro oficial ou funcionário do Escritório de Patentes e Marcas Re-gistradas a não ser que tal citação seja especificamente e sem qualificaçãoou reserva expressamente adotada em uma resposta por escrito pelos Re-querentes.

Os termos e as expressões que foram empregadas são utiliza-dos como termos de descrição e não de limitação e não há intenção de utili-zar tais termos e expressões para excluir qualquer equivalente das caracte-rísticas mostradas e descritas ou partes das mesmas, mas é reconhecidoque várias modificações são possíveis dentro do âmbito da invenção que éreivindicada. Assim, será entendido que embora a presente invenção tenhasido especificamente descrita através de modalidades preferidas e caracte-rísticas opcionais, a modificação e a variação dos conceitos descritos aquipodem ser recorridas pelos versados na técnica e que tais modificações evariações são consideradas como estando dentro do âmbito desta invençãocomo definido pelas reivindicações em anexo.

Listagem de Referências

Maniatis.T., Fritsch, E. F. e Sambrook, J., Molecular Cloning Manual. 1989.Kuijpers ALA, Pfundt R, Zeeuwen LJM e outros. SKALP/elafin gene poly-morphisms are not associated with pustular forms of psoriasis. Clin Genetics1998;54:96-101.

Papafili A e outros, 2002. Common promoter variant in cyclooxygenase-2represses gene expression. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20; 1631 -1635.Sandford AJ e outros, 1999. Z and mutations S of the <x1 -antitrypsin geneand the risk of chronic obstructive pulmonary disease. Am J Respir Cell MolBiol. 20; 287-291.

Waltenberg J. 2001. Pathophysiological basis of unstable coronary syndro-me. Herz 26, Sup 1; 2-8.

Claims

1. Processo de determinação do risco de um indivíduo de de-senvolver uma ou mais doenças pulmonares obstrutivas que compreende aanálise de uma amostra do dito indivíduo em relação à presença ou à au-sência de um ou mais polimorfismos selecionados do grupo que consisteem:-765 C/G no promotor do gene que codifica a Ciclooxigenase 2 (COX2);-105 C/A no gene que codifica a Interleucina 18 (IL18);-133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;-675 4G/5G no promotor do gene que codifica o Inibidor do Ativador dePlasminogênio 1 (PAI-1);-874 A/T no gene que codifica Interferon-y (IFN-y);+489 G/A no gene que codifica o Fator de Necrose de Tumor a (TNFa);C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;E 469 K A/G no gene que codifica a molécula de Adesão Intracelular 1 (I-CAM1);Gly 881 Arg G/C no gene que codifica a Caspase (NOD2);-161 G/A no gene que codifica a lectina de ligação à Manose 2 (MBL2);-1903 G/A no gene que codifica a Quimase 1 (CMA1);Arg 197 Gln G/A no gene que codifica a N-Acetil transferase 2 (NAT2);-366 G/A no gene que codifica a 5 Lipo-oxigenase (ALOX5);HOM T2437C no gene que codifica a Proteína de Choque Térmico 70 (HSP70);+13924 T/A no gene que codifica o Canal de Cloreto ativado por Cálcio 1(CLCA1);-159 C/T no gene que codifica o antígeno de diferenciação de MonócitosCD-14(CD-14);éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina;-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica a Metaloproteinase de Matriz-1 (MMP1), com referência apenas ao alelo 1G;ou um ou mais polimorfismos que estão no desequilíbrio de liga-ção com qualquer um ou mais destes polimorfismos;em que a presença ou a ausência de um ou mais dos ditos poli-morfismos é indicativa do risco do indivíduo de desenvolver uma ou maisdoenças pulmonares obstrutivas tradas do grupo que consiste em doençapulmonar obstrutiva crônica (COPD), enfisema ou tanto COPD, enfisema outanto COPD quanto enfisema.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1 em que a pre-sença de um ou mais dos polimorfismos selecionados do grupo que consis-te:no genótipo -765 CC ou CG no promotor do gene que codifica COX2;no genótipo +489 GG no gene que codifica TNFcc;no genótipo C89Y AA ou AG no gene que codifica SMAD3;no genótipo 161 GG no gene que codifica MBL2;no genótipo -1903 AA no gene que codifica CMA1 ;no genótipo Arg 197 Gln AA no gene que codifica NAT2;no genótipo-366 AA ou AG no gene que codifica ALOX5;no genótipo HOM T2437C TT no gene que codifica HSP 70;no éxon 1 +49 CT ou o genótipo TT no gene que codifica a Elafina; ouno genótipo -1607 1G1G ou 1G2G no promotor do gene que codifica MMP1;é indicativa de um risco reduzido de desenvolvimento de COPD,enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

3. Processo de acordo com a reivindicação 1 em que a presençade um ou mais dos polimorfismos selecionados do grupo que consiste:no genótipo 105 AA no gene que codifica IL18;no genótipo -133 CC no promotor do gene que codifica IL18;no genótipo -675 5G5G no promotor do gene que codifica PAI-1;no genótipo 874 TT no gene que codifica IFN-y;no genótipo +489 AA ou AG no gene que codifica TNFcc;no genótipo C89Y GG no gene que codifica SMAD3;no genótipo E469K GG no gene que codifica ICAM1;no genótipo Gly 881 Arg GC ou CC no gene que codifica NOD2;no genótipo -366 GG no gene que codifica ALOX5;no genótipo HOM T2437C CC ou CT no gene que codifica HSP 70;no genótipo +13924 AA no gene que codifica CLCA1; ou no genótipo -159 CC no gene que codifica CD-14;é indicativa de um risco maior de desenvolvimento de COPD, en-fisema ou tanto COPD quanto enfisema.

4. Processo de acordo com a reivindicação 1 em que o processo compreende a análise da dita amostra em relação à presença ou à ausência de um ou mais polimorfismos adicionais selecionados do grupo que consiste em:-16 Arg/Gly no gene que codifica o receptor adrenérgico (32 (ADBR); -130 Arg/Gln (G/A) no gene que codifica a Interleucina 13 (IL13);-298 Asp/GIu (T/G) no gene que codifica a oxido nítrico sintase 3 (NOS3); lie 105 Vai (A/G) no gene que codifica a glutationa S transferase P (GST-P); Glu 416 Asp (T/G) no gene que codifica a proteína de ligação à Vitamina D (VDBP);Lys 420 Thr (A/C) no gene que codifica VDBP;-1055 C/T no promotor do gene que codifica IL13;-308 G/A no promotor do gene que codifica TNFoc;-511 A/G no promotor do gene que codifica a Interleucina 1B (IL1B);Tyr 113 His T/C no gene que codifica a epóxido hidrolase Microssomal (MEH);. Arg 139 G/A no gene que codifica MEH;Gln 27 Glu C/G no gene que codifica ADBR-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica MMP1 (com referência apenas ao alelo 2G); -1562 C/T no promotor do gene que codifica MMP9; M1 nulo no gene que codifica GST-1;-1237 G/A na região a 3' do gene que codifica a a 1 -antitripsina; -82 A/G no promotor do gene que codifica MMP12; T->C dentro do códon 10 do gene que codifica TGFB; -760 C/G no gene que codifica SOD3;-1296 T/C dentro do promotor do gene que codifica TIMP3;a mutação S no gene que codifica a1 -antitripsina; ouum ou mais poiimorfismos que estão no desequilíbrio de ligação com um ou mais destes poiimorfismos.

5. Processo de acordo com a reivindicação 4 em que a presença de um ou mais dos poiimorfismos selecionados do grupo que consiste:do genótipo -765 CC ou CG no promotor do gene que codifica COX2;do genótipo 130 Arg/Gln AA no gene que codifica IL13;do genótipo 298 Asp/GIu TT no gene que codifica NOS3;do genótipo Lys 420 Thr AA ou AC no gene que codifica VDBP;do genótipo Glu 416 Asp TT ou TG no gene que codifica VDBP; do genótipo Ne 105 Vai AA no gene que codifica GSTP-1;do genótipo MS no gene que codifica a1-antitripsina;do genótipo +489 GG no gene que codifica TNFa;do genótipo -308 GG no gene que codifica TNFa;do genótipo C89Y AA ou AG no gene que codifica SMAD3; do genótipo 161 GG no gene que codifica MBL2;do genótipo -1903 AA no gene que codifica CMA1;do genótipo Arg 197 Gln AA no gene que codifica NAT2;do genótipo His 139 Arg GG no gene que codifica MEH;do genótipo -366 AA ou AG no gene que codifica ALOX5; do genótipo HOM T2437C TT no gene que codifica HSP 70;do genótipo do éxon 1 +49 CT ou TT no gene que codifica a Elafina;do genótipo Gln 27 Glu GG no gene que codifica ADBR; oudo genótipo -1607 1G1G ou 1G2G no promotor do gene que codifica MMP1;é indicativa de um risco reduzido de desenvolvimento COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

6. Processo de acordo com a reivindicação 4 ou com a reivindicação 5 em que a presença de um ou mais dos poiimorfismos selecionados do grupo que consiste:no genótipo 105 AA no gene que codifica IL18; no genótipo -133 CC no promotor do gene que codifica IL18;no genótipo -675 5G5G no promotor do gene que codifica PAI-1; no genótipo -1055 TT no promotor do gene que codifica IL13;no genótipo 874 TT no gene que codifica IFN-y, no genótipo +489 AA ou AG no gene que codifica TNFoc; no genótipo -308 AA ou AG no gene que codifica TNFa; no genótipo C89Y GG no gene que codifica SMAD3;no genótipo E469K GG no gene que codifica ICAM1;no genótipo Gly 881 Arg GC ou CC no gene que codifica NOD2;no genótipo -511 GG no gene que codifica IL1B;no genótipo Tyr 113 His TT no gene que codifica MEH;no genótipo -366 GG no gene que codifica ALOX5;no genótipo HOM T2437C CC ou CT no gene que codifica HSP 70;no genótipo +13924 AA no gene que codifica CLCA1; ou no genótipo -159 CC no gene que codifica CD-14;é indicativa de um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

7. Processo de avaliação do risco de um indivíduo de desenvolver uma ou mais doenças pulmonares obstrutivas tradas de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito processo compreendendo as etapas de:(i) determinação da presença ou da ausência de pelo menos um polimorfismo protetor associado com um risco reduzido de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema; e(ii) na ausência de pelo menos um polimorfismo protetor, determinando a presença ou a ausência de pelo menos um polimorfismo de susceptibilidade associado a um risco maior de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema;em que a presença de um ou mais dos ditos polimorfismos protetores é indicativa de um risco reduzido de desenvolvimento COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e a ausência de pelo menos um polimorfismo protetor em combinação com a presença de pelo menos um polimorfismo de susceptibilidade é indicativa de um risco maior de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

8. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que o ditopelo menos um polimorfismo protetor é selecionado do grupo que consiste em:-765 C no promotor do gene que codifica COX2;-130 Arg/Gln A no gene que codifica IL13;-298 Asp/GIu T no gene que codifica NOS3; Lys 420 Thr A no gene que codifica VDBP;Glu 416 Asp T no gene que codifica VDBP;Me 105 Vai A no gene que codifica GSTP-1;a mutação S no gene que codifica cx1-antitripsina;+489 G no gene que codifica TNFcc; -308 G no gene que codifica TNFa;C89Y A no gene que codifica SMAD3;-161 G no gene que codifica MBL2;-1903 A no gene que codifica CMA1;Arg 197 Gln A no gene que codifica NAT2; His 139 Arg G no gene que codifica MEH;-366 A ho gene que codifica ALOX5;HOM 2437 T no gene que codifica HSP 70;éxon 1 +49 T no gene que codifica a Elafina;Gln 27 Glu G no gene que codifica ADBR; ou -1607 1G no promotor do gene que codifica MMP1.

9. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que o ditopelo menos um polimorfismo protetor é um genótipo selecionado do grupoque consiste:no genótipo -765 CC ou CG no promotor do gene que codifica COX2; no genótipo 130 Arg/Gln AA no gene que codifica IL13;no genótipo 298 Asp/GIu TT no gene que codifica NOS3;no genótipo Lys 420 Thr AA ou AC no gene que codifica VDBP;no genótipo Glu 416 Asp TT ou TG no gene que codifica VDBP;no genótipo lie 105 Vai AA no gene que codifica GSTP-1; no genótipo MS no gene que codifica oc1 -antitripsina;no genótipo +489 GG no gene que codifica TNFa;no genótipo -308 GG no gene que codifica TNFa;no genótipo C89Y AA ou AG no gene que codifica SMAD3; no genótipo 161 GG no gene que codifica MBL2; no genótipo -1903 AA no gene que codifica CMA1; no genótipo Arg 197 Gln AA no gene que codifica NAT2;no genótipo His 139 Arg GG no gene que codifica MEH; no genótipo -366 AA ou AG no gene que codifica ALOX5; no genótipo HOM T2437C TT no gene que codifica HSP 70; no genótipo do éxon 1 +49 CT ou TT no gene que codifica a Elafina; no genótipo Gln 27 Glu GG no gene que codifica ADBR; ou no genótipo -1607 1G1G ou 1G2G no promotor do gene que codifica MMP1.

10. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 até 9, em que o dito processo compreende a etapa adicional de determinar a presença ou a ausência de pelo menos um polimorfismo protetor adicional selecionado do grupo que consiste em:+760GG ou+760CG dentro do gene que codifica SOD3;-1296TT dentro do promotor do gene que codifica TIMP3; ouCC (alelo P homozigoto) dentro do códon 10 do gene que codifica TGFS.

11. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 até 10 em que o dito pelo menos um polimorfismo de susceptibilidade tem um genótipo selecionado do grupo que consiste em: -105 AA no gene que codifica Interleucina 18; -133 CC no promotor do gene que codifica Interleucina 18; -675 5G5G no promotor do gene que codifica Inibidor do Ativador de Plasmi-nogênio 1;-1055 TT no promotor do gene que codifica Interleucina 13;-874 AA no gene que codifica interferon-7;+489 AA ou AG no gene que codifica TNFa;-308 AA ou AG no gene que codifica TNFa;C89Y GG no gene que codifica SMAD3; E469K GG no gene que codifica ICAM 1;Gly 881 Arg GC ou CC no gene que codifica NOD2;-511 GG no gene que codifica IL1B;Tyr 113 His TT no gene que codifica MEH; -366 GG no gene que codifica ALOX5; HOM T2437C CC ou CT no gene que codifica HSP 70; +13924 AA no gene que codifica CLCA1; ou -159 CC no gene que codifica CD-14.

12. Processo de acordo com a reivindicação 11 em que o dito processo compreende a etapa de determinar a presença ou a ausência de pelo menos um polimorfismo de susceptibilidade adicional selecionado do grupo que consiste em:-82 AA dentro do promotor do gene que codifica MMP12;-1607 2G2G dentro do promotor do gene que codifica MMP1; -1562CT ou -1562TT dentro do promotor do gene que codifica MMP9; ou 1237AG ou 1237AA (genótipos dos alelos Tt ou tt) dentro da região a 3 do gene que codifica a 1-antitripsina.

13. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 até 12 em que a presença de dois ou mais polimorfismos protetores independente da presença de um ou mais polimorfismos de susceptibilidade é indicativa do risco reduzido de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

14. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 até 12 em que na ausência de um polimorfismo protetor a presença de um ou mais polimorfismos de susceptibilidade é indicativa de um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 até 12 em que a presença de dois ou mais polimorfismos de susceptibilidade é indicativa de um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

16. Processo de determinação do risco de um indivíduo de desenvolver doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) e/ou enfisema, que compreende a análise de uma amostra do dito indivíduo em relação à presença de dois ou mais polimorfismos selecionados do grupo que consiste em:-765 C/G no promotor do gene que codifica COX2; -105 C/A no gene que codifica IL18; -133 G/C no promotor do gene que codifica IL18; -675 4G/5G no promotor do gene que codifica PAI-1; -874 A/T no gene que codifica IFN-y, 16Arg/Gly no gene que codifica ADBR; -130 Arg/Gln (G/A) no gene que codifica IL13; -298 Asp/GIu (T/G) no gene que codifica NOS3;lie 105 Vai (A/G) no gene que codifica glutationa S transferase P (GST-P); Glu416 Asp (T/G) no gene que codifica VDBP;Lys 420 Thr (A/C) no gene que codifica VDBP;-1055 C/T no promotor do gene que codifica IL13;a mutação S no gene que codifica a1-antitripsina;+489 G/A no gene que codifica TNFot; C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;E 469 K A/G no gene que codifica ICAM1;Gly 881 Arg G/C no gene que codifica NOD2;-161 G/A no gene que codifica MBL2;-1903 G/A no gene que codifica CMA1; Arg 197 Gln G/A no gene que codifica NAT2; -366 G/A no gene que codifica ALOX5;HOM T2437C no gene que codifica HSP 70;+13924 T/A no gene que codifica CLCA1;-159 C/T no gene que codifica CD-14;éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina;-308 G/A no promotor do gene que codifica TNFoc;-511 A/G no promotor do gene que codifica IL1B;Tyr 113 His T/C no gene que codifica MEH;Arg 139 G/A no gene que codifica MEH; Gln 27 Glu C/G no gene que codifica ADBR; ou-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica MMP1 (com referência apenas ao alelo 1G).

17. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 até 16 em que o dito processo compreende a análise de um ou mais fatores de risco epidemiológico.

18. Sondas e/ou iniciadores de nucleotídeos para uso no processo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 até 17 em que a uma ou mais sondas e/ou iniciadores de nucleotídeos abrangem ou são capazes de ser utilizados para abrangir, as regiões polimórficas dos genes nas quais se acredita que o polimorfismo esteja presente.

19. Microarranjo de ácido nucléico que compreende um substrato que apresenta seqüências de ácidos nucléicos capazes de se hibridizarem com seqüências de ácidos nucléicos que codificam um ou mais dos po-limorfismos selecionados do grupo como definido na reivindicação 1 ou seqüências complementares aos mesmos.

20. Processo de determinação do risco de um indivíduo de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito processo compreendendo as etapas:(i) de obtenção do resultado de um ou mais testes genéticos de uma amostra do dito indivíduo; e (ii) de análise do resultado em relação à presença ou à ausência de um ou mais polimorfismos selecionados do grupo que consiste em:-765 C/G no promotor do gene que codifica Ciclooxigenase 2 (COX2); -105 C/A no gene que codifica Interleucina18 (IL18); -133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;-675 4G/5G no promotor do gene que codifica Inibidor do Ativador de Plasminogênio 1 (PAI-1);-874 A/T no gene que codifica Interferon-y (IFN-y);+489 G/A no gene que codifica Fator de Necrose de Tumor a (TNFa);C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;E 469 K A/G no gene que codifica molécula de Adesão Intracelular 1 (I-CAM1);Gly 881 Arg G/C no gene que codifica Caspase (NOD2);-161 G/A no gene que codifica lectina de ligação à Manose 2 (MBL2);-1903 G/A no gene que codifica Quimase 1 (CMA1); Arg 197 Gln G/A no gene que codifica N-Acetil transferase 2 (NAT2); -366 G/A no gene que codifica 5 Lipo-oxigenase (ALOX5); HOM T2437C no gene que codifica Proteína de Choque Térmico 70 (HSP 70);+13924 T/A no gene que codifica Canal de Cloreto ativado por Cálcio 1 (CL-CA1);-159 C/T no gene que codifica antígeno de diferenciação de Monócitos CD-14(CD-14);éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina;-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica Metaloproteinase de Matriz 1 (MMP1), com referência apenas ao alelo 1G;ou um ou mais polimorfismos que estão no desequilíbrio de ligação com qualquer um ou mais destes polimorfismos;em que um resultado que indica a presença ou a ausência de umou mais dos ditos polimorfismos é indicativo do risco do indivíduo de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

21. Processo de acordo com a reivindicação 20 em que um resultado que indica a presença de um ou mais dos polimorfismos selecionados do grupo que consiste:do genótipó -765 CC ou CG no promotor do gene que codifica COX2; no genótipo +489 GG no gene que codifica TNFa; no genótipo C89Y AA ou AG no gene que codifica SMAD3; no genótipo 161 GG no gene que codifica MBL2;no genótipo -1903 AA no gene que codifica CMA1;no genótipo Arg 197 Gln AA no gene que codifica NAT2;no genótipo -366 AA ou AG no gene que codifica ALOX5;no genótipo HOM T2437C TT no gene que codifica HSP 70;no genótipo do éxon 1 +49 CT ou TT no gene que codifica a Elafina; ouno genótipo -1607 1G1G ou 1G2G no promotor do gene que codifica MMP1;é indicativo de um risco reduzido de desenvolvimento COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

22. Processo de acordo com a reivindicação 20 em que um resultado que indica a presença de um ou mais dos polimorfismos selecionados do grupo que consiste:no genótipo 105 AA no gene que codifica IL18; no genótipo -133 CC no promotor do gene que codifica IL18; no genótipo -675 5G5G no promotor do gene que codifica PAI-1; no genótipo -874 TT no gene que codifica IFN-y; no genótipo +489 AA ou AG no gene que codifica TNFoc; no genótipo C89Y GG no gene que codifica SMAD3; no genótipo E469K GG no gene que codifica ICAM1; no genótipo Gly 881 Arg GC ou CC no gene que codifica NOD2; no genótipo -366 GG no gene que codifica ALOX5; no genótipo HOM T2437C CC ou CT no gene que codifica HSP 70; no genótipo +13924 AA no gene que codifica CLCA1; ou no genótipo -159 CC no gene que codifica CD-14;é indicativo de um risco maior de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema.

23. Uso de pelo menos um polimorfismo na avaliação do risco de um indivíduo de desenvolver COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, em que o dito pelo menos um polimorfismo é selecionado do grupo que consiste em:-765 C/G no promotor do gene que codifica Ciclooxigenase 2 (COX2); -105 C/A no gene que codifica Interleucina18 (IL18); -133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;-675 4G/5G no promotor do gene que codifica Inibidor do Ativador de Plas-minogênio 1 (PAI-1);-874 A/T no gene que codifica lnterferon-7 (IFN-y); +489 G/A no gene que codifica Fator de Necrose de Tumor a (TNFa); C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;E 469 K A/G no gene que codifica molécula de Adesão Intracelular 1 (I-CAM1);Gly 881 Arg G/C no gene que codifica Caspase (NOD2);-161 G/A no gene que codifica lectina de ligação à Manose 2 (MBL2); -1903 G/A no gene que codifica Quimase 1 (CMA1); Arg 197 Gln G/A no gene que codifica N-Acetil transferase 2 (NAT2); -366 G/A no gene que codifica 5 Lipo-oxigenase (ALOX5); HOM T2437C no gene que codifica Proteína de Choque Térmico 70 (HSP 70);+13924 T/A no gene que codifica Canal de Cloreto ativado por Cálcio 1 (CL-CA1);-159 C/T no gene que codifica antígeno de diferenciação de Monócitos CD-14(CD-14);éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina;-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica Metaloproteinase de Matriz 1(MMP1), com referência apenas ao alelo 1G; ouum ou mais polimorfismos em desequilíbrio de ligação com um dos ditos polimorfismos.

24. Uso de acordo com a reivindicação 23, em que o dito usoocorre em associação com o uso de pelo menos um polimorfismo adicionalselecionado do grupo que consiste em:-16Arg/Gly no gene que codifica ADBR; -130 Arg/Gln (G/A) no gene que codifica IL13; -298 Asp/GIu (T/G) no gene que codifica NOS3;lie 105 Vai (A/G) no gene que codifica GSTP;Glu 416 Asp (T/G) no gene que codifica VDBP;Lys 420 Thr (A/C) no gene que codifica VDBP;-1055 C/T no promotor do gene que codifica IL13;a mutação S no gene que codifica a1 -antitripsina;-308 G/A no promotor do gene que codifica TNFa;-511 A/G no promotor do gene que codifica IL1B;Tyr 113 His T/C no gene que codifica MEH; His 139 Arg G/A no gene que codifica MEH;Gln 27 Glu C/G no gene que codifica ADBR;-1607 1G/2G no promotor do gene que codifica MMP1;-1562 C/T no promotor do gene que codifica MMP9; M1 (GSTM1) nulo no gene que codifica GST-1; -1237 G/A na região a 3' do gene que codifica oc1 -antitripsina; -82 A/G no promotor do gene que codifica MMP12; T-»C dentro do códon 10 do gene que codifica TGFp; -760 C/G no gene que codifica SOD3;-1296 T/C dentro do promotor do gene que codifica TIMP3; ou a mutação S no gene que codifica a1-antitripsina.

25. Processo de tratamento de um indivíduo que possui maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema que compreende a etapa de replicação, genotipicamente ou fenotipi-camente, da presença e/ou do efeito funcional de um polimorfismo protetor selecionado do grupo como definido na reivindicação 8 no dito indivíduo.

26. Processo de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito indivíduo possuindo um polimorfismo de susceptibilidade detectável selecionado do grupo como definido na reivindicação 11 que regula para mais ou regula para menos a expressão de um gene de forma que a concentração fisiologicamente ativa do produto gênico expresso fica fora de uma faixa que é normal para a idade e o sexo do indivíduo, o dito processo compreendendo a etapa de restauração da concentração fisiologicamente ativa do dito produto de expressão gênica para estar dentro de uma faixa que é normal para a idade e o sexo do indivíduo.

27. Processo de tratamento de um indivíduo que possui um risco maior de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual a presença do genótipo GG no polimorfismo -765 C/G presente no promotor do gene que codifica COX2 foi determinada, o dito processo compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de reduzir a atividade de COX2 no dito indivíduo.

28. Processo de acordo com a reivindicação 27 em que o dito agente é um inibidor de COX2 ou um fármaco antiinflamatório não-esteroidal (NSAID).

29. Processo de acordo com a reivindicação 28, em que o dito inibidor de COX2 é selecionado do grupo que consiste em Celebrex (Cele-coxib), Bextra (Valdecoxib) e Vioxx (Rofecoxib).

30. Processo de tratamento de um indivíduo que possui um risco maior de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual a presença do genótipo AA no polimorfismo 105 C/A no gene que codifica a Interleucina 18 foi determinada, o dito processo compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de aumentar a atividade da Interleucina 18 no dito indivíduo.

31. Processo de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual a presença do genótipo CC no polimorfismo -133 G/C no promotor do gene que codifica a Interleucina 18 foi determinada, o dito processo compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de aumentar a atividade da Interleucina 18 no dito indivíduo.

32. Processo de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual a presença do genótipo 5G5G no polimorfismo -675 4G/5G no promotor do gene que codifica o Inibidor do Ativador de Plasmino-gênio 1 foi determinada, o dito processo compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de aumentar a atividade do Inibidor do Ativador de Plasminogênio 1 no dito indivíduo.

33. Processo de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual a presença do genótipo AA no polimorfismo 874 A/T no gene que codifica o interferon-y foi determinada, o dito processo compreendendo a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de modular a atividade do interferon-y no dito indivíduo.

34. Processo de tratamento de um indivíduo que possui um maior risco de desenvolvimento de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema e para o qual a presença do genótipo CC no polimorfismo -159 C/T no gene que codifica CD-14 foi determinada, o dito processo compreenden-do a administração ao dito indivíduo de um agente capaz de modular a atividade de CD-14 e/ou IgE no dito indivíduo.

35. Microarranjo de anticorpos que compreende um substrato que apresenta anticorpos capazes de se ligarem a um produto de expressão de um gene cuja expressão é regulada para mais ou regulada para menos quando associado a um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor selecionado do grupo como definido na reivindicação 1.

36. Processo para triagem de compostos que modulam a expressão e/ou a atividade de um gene, cuja expressão é regulada para mais ou regulada para menos quando associado a um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor selecionado do grupo como definido na reivindicação 2 ou na reivindicação 3, o dito processo compreendendo as etapas de:contato de um composto candidato com uma célula que compreende um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor selecionado do grupo definido na reivindicação 2 ou na reivindicação 3 que foi determinado como estando associado à regulação para mais ou a regulação para menos da expressão de um gene; emedida da expressão do dito gene após o contato com o dito composto candidato,em que uma alteração no nível de expressão após a etapa de contato quando comparado com antes da etapa de contato é indicativo da capacidade do composto de modular a expressão e/ou a atividade do dito gene.

37. Processo de acordo com a reivindicação 36, em que a dita célula é uma célula pulmonar humana que foi pré-triada para confirmar a presença do dito polimorfismo.

38. Processo de acordo com a reivindicação 37, em que a dita célula compreende um polimorfismo de susceptibilidade associado à regulação para menos da expressão do dito gene e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que regulam para mais a expressão do dito gene.

39. Processo de acordo com a reivindicação 37, em que a dita célula compreende um polimorfismo de susceptibilidade associado com aregulação para menos da expressão do dito gene e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que regulam para mais a expressão do dito gene.

40. Processo de acordo com a reivindicação 37, em que a dita célula compreende um polimorfismo protetor associado à regulação para mais da expressão do dito gene e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que regulam adicionalmente para mais a expressão do dito gene.

41. Processo de acordo com a reivindicação 37, em que a dita célula compreende um polimorfismo protetor associado à regulação para menos da expressão do dito gene e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que regulam adicionalmente para menos a expressão do dito gene.

42. Processo para triagem de compostos que modulam a expressão e/ou a atividade de um gene, cuja expressão é regulada para mais ou regulada para menos quando associado a um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor selecionado do grupo definido na reivindicação 2 ou na reivindicação 3, o dito processo compreendendo as etapas de:contato de um composto candidato com uma célula que compreende um gene, cuja expressão é regulada para mais ou regulada para menos quando associado a um polimorfismo de susceptibilidade ou protetor selecionado do grupo como definido na reivindicação 2 ou na reivindicação 3, mas que na dita célula sua expressão não é regulada para mais nem regulada para menos; emedida da expressão do dito gene após o contato com o dito composto candidato, em que uma alteração no nível de expressão após a etapa de contato comparado com antes da etapa de contato é indicativa da capacidade do composto de modular a expressão e/ou a atividade do dito gene.

43. Processo de acordo com a reivindicação 42, em que a dita célula é uma célula pulmonar humana que foi pré-triada para confirmar a presença e ao nível da linha de base de expressão, do dito gene.

44. Processo de acordo com a reivindicação 43, em que a expressão do gene é regulada para menos quando associado a um polimor-fismo de susceptibilidade e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que na dita célula, regulam para mais a expressão do dito gene.

45. Processo de acordo com a reivindicação 43, em que a expressão do gene é regulada para mais quando associado a um polimorfismo de susceptibilidade e a dita triagem é em relação a compostos candidatos que, na dita célula, regulam para menos a expressão do dito gene.

46. Processo de acordo com a reivindicação 43, em que a expressão do gene é regulada para mais quando associado a um polimorfismo protetor e a dita triagem é em relação a compostos que, na dita célula, regulam para mais a expressão do dito gene.

47. Processo de acordo com a reivindicação 43, em que a expressão do gene é regulada para menos quando associado a um polimorfismo protetor e a dita triagem é em relação a compostos que, na dita célula, regulam para menos a expressão do dito gene.

48. Processo de avaliação da capacidade de resposta provável de um indivíduo que possui um risco maior ou que está sofrendo de COPD ou enfisema a um tratamento profilático ou terapêutico, cujo tratamento envolve a restauração da concentração fisiologicamente ativa de um produto da expressão gênica para estar dentro de uma faixa que é normal para aidade e o sexo do indivíduo, cujo processo compreende a detecção no dito indivíduo da presença ou da ausência de um polimorfismo de susceptibilidade selecionado do grupo como definido na reivindicação 3 que quando presente regula para mais ou regula para menos a expressão do dito gene de forma que a concentração fisiológica ativa do produto gênico expresso está fora da dita faixa normal, em que a detecção da presença do dito polimorfismo é indicativa do indivíduo que provavelmente responde ao dito tratamento.

49. Kit para avaliar o risco de um indivíduo de desenvolver uma ou mais doenças pulmonares obstrutivas tradas de COPD, enfisema ou tanto COPD quanto enfisema, o dito kit compreendendo um meio de analisar uma amostra do dito indivíduo em relação à presença ou à ausência de um ou mais polimorfismos tradas do grupo que consiste em: -765 C/G no promotor do gene que codifica Ciclooxigenase 2 (COX2);-105 C/A no gene que codifica Interleucinal8 (IL18); -133 G/C no promotor do gene que codifica IL18;-675 4G/5G no promotor do gene que codifica Inibidor do Ativador de Plas-minogênio 1 (PAI-1); -874 A/T no gene que codifica Interferon-y (IFN-y);+489 G/A no gene que codifica Fator de Necrose de Tumor a (TNFa); C89Y A/G no gene que codifica SMAD3;E 469 K A/G no gene que codifica molécula de Adesão Intracelular 1 (ICAM1 );Gly 881 Arg G/C no gene que codifica Caspase (NOD2); -161 G/A no gene que codifica lectina de ligação à Manose 2 (MBL2);-1903 G/A no gene que codifica Quimase 1 (CMA1);Arg 197 Gln G/A no gene que codifica N-Acetil transferase 2 (NAT2);-366 G/A no gene que codifica 5 Lipo-oxigenase (ALOX5);HOM T2437C no gene que codifica Proteína de Choque Térmico 70 (HSP 70); +13924 T/A no gene que codifica Canal de Cloreto ativado por Cálcio 1 (CL-CA1);-159 C/T no gene que codifica antígeno de diferenciação de Monócitos CD-14(CD-14);éxon 1 +49 C/T no gene que codifica a Elafina; -1607 1G/2G no promotor do gene que codifica Metaloproteinase de Matriz 1 (MMP1), com referência apenas ao alelo 1G;ou um ou mais polimorfismos que estão no desequilíbrio de ligação com qualquer um ou mais destes polimorfismos.