BRPI0610949A2 - fórmula infantil parcialmente hidrolisada de baixa lactose - Google Patents

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Puski Gabor
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Abstract

A presente invenção refere-se a uma fórmula infantil parcialmente hidrolisada de baixa lactose. O componente de carboidratos da fórmula infantil compreende entre cerca de 0<sym> e 60<sym> de lactose e o componente de proteínas da fórmula infantil compreende proteína do soro do leite e caseína parcialmente hidrolisadas, tendo o componente de proteínas um peso molecular particular.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "FÓRMULAINFANTIL PARCIALMENTE HIDROLISADA DE BAIXA LACTOSE".
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se a fórmulas infantis parcialmentehidrolisadas de baixa lactose.
Antecedentes
A alergia alimentar é uma síndrome clínica imunologicamentemediada que se desenvolve após a ingestão de um produto dietético. A rea-ção adversa que acompanha a alergia alimentar é freqüentemente uma rea-ção imediata mediada pela imunoglobulina (IgE), de outro modo conhecidacomo alergia alimentar à proteína. Host, A., et ai, Dietary Products Used inInfants for Treatment and Prevention of Food Allergy, Arch. Dis. Child 81:80-84 (1999). Os sintomas de alergia alimentar à proteína incluem angioedema,urticária, eczema, asma, rinite, conjuntivite, vômito ou anafilase.
A alergia ao leite de vaca é a alergia alimentar à proteína maiscomum em crianças jovens e ocorre em cerca de 2% a 3% de todos os lac-tentes. Sampson, H.A., Food Allergy. Part 1: Immunopathogenesis and Clini-cai Disorders, J Allergy Clin Immunol. 103:717-728 (1999). Uma possívelexplicação para a prevalência de alergia ao leite de vaca dentre as criançasé que a proteína de leite de vaca intacta, que é encontrada nas fórmulas in-fantis mais convencionais, é o alérgeno mais precoce e mais comum que oslactentes estão expostos. Em adição, os lactentes podem ser especialmentesuscetíveis à alergia ao leite de vaca porque a sua mucosa intestinal temuma maior permeabilidade à macromoléculas incompletamente digeridas doque os adultos. Moran R., Effects of Prolonged Exposure to Partially Hy-drolyzed Milk Protein, J. Pediatr. 121 :S90-S4 (1992).
Embora não haja tratamento conhecido que possa curar comple-tamente a alergia ao leite de vaca, pode ser possível evitar ou diminuir a a-lergia ao leite de vaca e a outras alergias em lactentes através do consumode fórmulas de proteínas hidrolisadas. Foi mostrado que o consumo de fór-mulas infantis tendo proteínas parcial e extensivamente hidrolisadas em lu-gar de fórmulas convencionais tendo apenas proteínas intactas pode reduziro risco de futuras alergias em lactentes. Id. Assim, se um infante tiver umahistória familiar de alergias, o consumo de fórmulas de proteínas hidrolisa-das pode reduzir o risco daquela criança desenvolver uma alergia no futuro.
Fórmulas de proteínas hidrolisadas podem ser caracterizadascomo extensivamente hidrolisadas ou parcialmente hidrolisadas. As fórmulasinfantis contendo proteínas extensivamente hidrolisadas (EHF) são basea-das em leite de vaca, mas as proteínas foram tratadas com enzimas paradecompor a maioria das proteínas que causam os sintomas relacionados àalergia. Um exemplo de uma EHF comercialmente disponível é Enfamil® Nu-tramigen®. Ela é uma fórmula infantil hipoalergênica para lactentes a termoque são sensíveis às proteínas intactas em fórmulas de leite de vaca e desoja. Fórmulas infantis contendo proteínas parcialmente hidrolisáveis (PHF),por' outro lado, foram tratadas com enzimas para decomporem apenas al-gumas das proteínas do leite.
Idealmente, qualquer fórmula infantil, incluindo PHF, deveria si-mular o leite humano tão proximamente quanto possível. No leite humano,há duas proteínas principais, proteína do soro e caseína. A proteína do sorodo leite tipicamente compõe cerca de 60% da proteína no leite humano, en-quanto que a caseína compõe cerca de 40%. Lonnerdal, B., Biochemistryand Physiological Functions of Human Milk Proteins, Am. J. Clin. Nutr.42:1299-1317(1985).
Em adição a simulação da quantidade de proteína no leite hu-mano, um PHF não deveria causar ou exacerbar as dificuldades na absor-ção de carboidratos. O carboidrato principal na fórmula infantil baseada emleite é a lactose. A lactose é um dissacarídeo de glicose e galactose e a en-zima lactase é requerida para o corpo digerir a lactose. Se a lactase, queestá localizada na membrana superficial das células epiteliais intestinais, nãoestiver presente em quantidades suficientes, o corpo pode ser incapaz dedigerir completamente a lactose. Esta condição, que é comumente conheci-da como intolerância à lactose, pode conduzir a sintomas tais como disten-são abdominal, gases, eólicas e diarréia.
Uma forma de evitar os efeitos colaterais indesejáveis da intole-rância à lactose é fornecer uma fórmula infantil de baixa lactose para suple-mentação nutricional ou substituição do leite humano. Uma fórmula infantilde baixa lactose tipicamente tem uma pequena percentagem de carboidratoscontendo lactose. A quantidade de carboidrato restante é derivada de qual-quer fonte, tal como sólidos de xarope de milho.
Várias fórmulas infantis foram descritas, mas nenhuma propor-cionou os benefícios combinados da presente invenção. Por exemplo, a Pa-tente U.S. N9 5.405.637 concedida à
Martinez, et al. refere-se a um hidrolisado parcial de proteína de leite e fór-mula infantil contendo o mesmo. A patente não descreve, no entanto, umafórmula infantil tendo um teor de lactose entre cerca de 0% e 60%. Adicio-nalmente, embora a referência descreva um grau de hidrólise entre cerca de6 è 9%, o hidrolisado de proteína da referência de Martinez não descrevetendo o peso molecular do hidrolisado de proteína empregado na presenteinvenção.
A Patente U.S. N9 6.777.931 concedida a Kratky refere-se a umafórmula infantil tendo um baixo teor de treonina. Embora a referência discutao uso de proteína do soro do leite e caseina, a proteína do soro do leite usa-da é modificada de tal modo que o caseíno-glio-macropeptídeo (cGMP) foiremovido. Adicionalmente, a referência não descreve uma fórmula infantiltendo um hidrolisado parcial com o perfil de peso molecular particular comona presente invenção.
A patente U.S. NQ 6.162.472 concedida a Griffin, et al, refere-sea uma fórmula infantil compreendida por caseina e proteína do soro do leitee tendo um teor de lactose menor do que 20%, mas não descreve uma fór-mula de hidrolisado parcial.
A Patente N9 6.171.621 concedida a Braun, et al., a Patente U.S.6.863.918 concedida a Bindels, et al., e a Patente U.S. 6.194.009 concedidaa Kamarel todas referem-se a várias fórmulas infantis e produtos nutricionaisbaseados em hidrolisados de proteína. Adicionalmente, os hidrolisados par-ciais das várias patentes não descrevem hidrolisados com o peso molecularempregado no presente pedido.Sumário da Invenção
Resumidamente, a presente invenção é dirigida a uma novafórmula infantil compreendendo um componente de carboidratos compostode entre cerca de 0% e 60% de lactose, em que as referidas percentagenssão baseadas no peso total dos carboidratos presentes na fórmula; e umcomponente de proteínas de proteína do soro do leite e caseína parcialmen-te hidrolisadas, em que a relação de proteína do soro do leite para caseínasitua-se entre cerca de 50:50 e 70:30 e em que o hidrolisado de proteína temos peptídeos distribuídos sobre a faixa da distribuição de peso molecular,como uma função da sua massa molar, conforme está mostrado na Tabela 1.
Tabela 1
<table>table see original document page 5</column></row><table>
Dentre as várias vantagens descobertas serem obtidas atravésda presente invenção, o hidrolisado parcial de proteína do leite tem umacomposição de proteínas similar àquela do leite humano, e melhor sabor, emelhores propriedades emulsificantes. Adicionalmente, a presente invençãoinduz um efeito ativador menor para a resposta do anticorpo IgC do que oleite de vaca intacto. Assim, a presente invenção pode ter um reduzido po-tencial imunogênico.
Descrição Detalhada das Modalidades Preferidas
Referência irá agora ser feita em detalhes às modalidades dainvenção, um ou mais exemplos das quais estão apresentados abaixo. Cadaexemplo é fornecido a título de explicação da invenção, não de limitação dainvenção. Na realidade, será evidente apara aqueles versados na técnicaque várias modificações e variações podem ser feitas na presente invençãosem se afastar do escopo e espírito da invenção. Por exemplo, as caracte-rísticas ilustradas ou descritas como parte de uma modalidade podem serusadas em outra modalidade para produzir ainda uma modalidade adicional.
Assim, pretende-se que a presente invenção cubra tais modifi-cações e variações como estando dentro do escopo das reivindicações ane-xas e seus equivalentes. Outros objetos, características e aspectos da pre-sente invenção são descritos ou ficam óbvios pela descrição detalhada aseguir. Deve ser entendido por alguém versado na técnica que a presentediscussão é uma descrição de modalidades exemplares, e não se pretendeque seja limitadora de aspectos mais amplos da presente invenção.
Definições
Conforme usado neste relatório, o termo "baixa lactose" significaum teor de lactose menor do que 100%, incluindo 0% de lactose.
O termo "grau de hidrolise" significa a extensão na qual as liga-ções peptídicas são rompidas por uma reação de hidrolise enzimatica. Amedição mostra que o número de ligações peptídicas específicas rompidasna hidrolise como uma percentagem do número total de ligações peptídicasespecíficas presentes na proteína intacta.
O termo "probiótico" significa um microorganismo que exerceefeitos benéficos sobre a saúde do hospedeiro.
Conforme usado neste relatório, o termo "prebiótico" significa umingrediente de alimento não digerível que afeta beneficamente o hospedeiroestimulando seletivamente o crescimento e/ou a atividade de uma ou de umnúmero limitado de bactérias no cólon que pode melhorar a saúde do hos-pedeiro.
O termo "paciente" significa qualquer mamífero, preferencial-mente um ser humano.
Conforme usado neste relatório, o termo "lactente" significa umser humano com menos do que cerca de um ano de idade.
Conforme usado neste relatório, o termo "fórmula infantil" signifi-ca uma composição que satisfaz as necessidades de nutrientes de um lac-tente sendo um substituto do leite humano. Nos Estados Unidos, o conteúdode uma fórmula infantil é ditado pelos regulamentos federais descritos emC.F.R. 21, Seções 100, 106 e 107. Esses regulamentos definem níveis demacronutrientes, vitaminas, minerais, e de outros ingredientes em um esfor-ço para estimular as propriedades nutricionais e outras propriedades do leitedo seio humano.
Invenção
De acordo com a presente invenção, foi descoberta uma novafórmula infantil. A fórmula infantil tem um baixo teor de lactose e compreen-de uma mistura de proteína do soro do leite e caseina parcialmente hidroli-sadas. O hidrolisado parcial de proteína da fórmula infantil tem uma distribui-ção de peso molecular específica e única que resulta em um produto que édistinto da técnica anterior.
A presente invenção fornece uma relação da proteína do soro doleite:caseína que é similar àquela encontrada no leite do seio humano. Emuma modalidade particular, a relação de proteína do soro do leite:caseínasitua-se entre cerca de 50:50 e 70:30. Em uma outra modalidade, a relaçãode proteína do soro do leite.caseína é de cerca de 60:40.
A proteína do soro do leite usada na presente invenção pode serobtida de qualquer fonte conhecida na técnica. Em uma modalidade, a prote-ína do soro do leite pode ser obtida de um soro do leite bruto obtido da fabri-cação de queijo doce, de concentrado de proteína do soro do leite (WPC)que é obtido através de ultrafiltração (soro do leite UF), através de troca iôni-ca e/ou eletroforese (soro do leite ED) ou de isolado de soro do leite que foitratado para reduzir o teor de lactose do soro do leite.
A caseina usada na presente invenção pode ser também obtidade qualquer fonte conhecida na técnica. Por exemplo, a caseina pode sercaseina de ácido ou sólidos de leite sem gordura (NFM).
Ambas a proteína do soro do leite e a caseina podem ser diluí-das ou reconstituídas a soluções contendo entre cerca de 20% e 25% desólidos totais, e entre cerca de 40% e 50% de proteína em uma base seca.
Na presente invenção, o componente de carboidratos compre-ende entre cerca de 0% e 60% de lactose. Em uma outra modalidade dapresente invenção, o componente de carboidratos compreende entre cercade 15% e 55% de lactose. Ainda em uma outra modalidade da presente in-venção, o componente carboidratos compreende entre cerca de 20% e 30%de lactose. Em uma modalidade particular da invenção, o componente ecarboidrato compreende cerca de 1 e 25% de lactose. Nessas modalidades,a fonte restante de carboidratos pode ser qualquer fonte de carboidratos co-nhecida na técnica, tais como lactose, glicose, sólidos de xarope de milho,maltodextrinas, sacarose, amido, sólidos de xarope de arroz, e similares. Emuma modalidade particular, o componente de carboidratos compreende cer-ca de 25% de lactose e cerca de 75% de sólidos de xarope.
A lactose pode ser adicionada à fórmula infantil ou pode estarnaturalmente presente nos componentes da fórmula infantil. Em uma moda-lidade da invenção, está naturalmente presente no hidrolisado seco. Nestamodalidade, entre cerca de 30% e 70% do hidrolisado seco pode ser consti-tuído por carboidratos. Em uma modalidade particular, cerca de 50% do hi-drolisado são constituídos por carboidratos.
Em uma modalidade da invenção, o teor de lactose pode ser0%. Nesta modalidade, o hidrolisado pode ser tratado usando qualquer mé-todo conhecido na técnica para remoção do seu conteúdo de lactose. Alter-nativamente, os ingredientes da proteína do leite que são livres de lactosepodem ser usados para preparar a fórmula infantil.
Na presente invenção, as proteínas são hidrolisadas usandouma enzima proleolítica, Protease N. Protease N "Amano" é fornecida co-mercialmente por Amano Enzyme U.S.A. Co., Ltd., Elgin, IL. Protease N éuma preparação de enzima proteolítica que é obtida da espécie bacterianaBacillus subtilis. O pó de protease é especificado como "não menos do que150.000 unidades/g" significando que uma unidade de Protease N é a quan-tidade de enzima que produz um aminoácido equivalente a 100 microgramasde tirosina por 60 minutos em um pH de 7,0. Para produzir a fórmula infantilda presente invenção, a Protease N pode ser usada em níveis de cerca de0,5% a cerca de 1,0% em peso da proteína total sendo hidrolisada.A hidrólise da proteína pela Protease N é tipicamente conduzidaem uma temperatura de cerca de 50°C a cerca de 60°C. A hidrólise ocorrepor um período de tempo de tal modo a obter um grau de hidrólise entre cer-ca de 4% e 10%. Em uma modalidade particular, a hidrólise ocorre por umperíodo de tempo de tal modo a obter um grau de hidrólise entre cerca de6% e 9%. Em uma outra modalidade, a hidrólise ocorre por um período detempo de tal modo a obter um grau de hidrólise de cerca de 7,5%. Este nívelde hidrólise pode levar entre cerca de meio hora a cerca de 3 horas.
Um pH constante deveria ser mantido durante a hidrólise. Nométodo da presente invenção, o pH é ajustado e mantido entre cerca de 6,5e 8,0. Em uma modalidade particular, o pH é mantido em cerca de 7,0.
A fim de manter o pH ótimo da superfície de proteína do soro doleite, caseína, água e Protease N, uma solução cáustica de hidróxido de só-dio e/ou hidróxido de potássio pode ser usada para ajustar o pH durante ahidrólise. Se for usado hidróxido de sódio para ajustar o pH, a quantidade dehidróxido de sódio adicionada à solução deveria ser controlada ao nível deque ela compreenda menos do que cerca de 0,3% do sólido total no hidroli-sado de proteína acabado. Uma solução de hidróxido de potássio a 10%pode ser também usada para ajustar o pH da solução ao valor desejado,antes da enzima ser adicionada ou durante o processo de hidrólise a fim demanter o pH ótimo.
A quantidade de solução cáustica adicionada à solução durantea hidrólise da proteína pode ser controlada por um aparelho titulador (pH-stat) ou pela adição de solução cáustica continua e proporcionalmente. Ohidrolisado pode ser produzido através de processos em batelada padrõesou através de processos contínuos.
Para melhor assegurar a consistente qualidade do hidrolisadoparcial de proteína, o hidrolisado é submetido à desativação da proteína pa-ra terminar o processo de hidrólise. A etapa de desativação da enzima podeconsistir em incluir um tratamento térmico em uma temperatura de cerca de82°C por cerca de 10 minutos. Alternativamente, a enzima pode ser desati-vada por aquecimento da solução a uma temperatura de cerca de 92°C porcerca de 5 segundos. Após a desativação da enzima estar completa, o hidro-lisado pode ser estocado em um estado líquido em uma temperatura maisbaixa do que 10°C.
Em uma modalidade da presente invenção, o hidrolisado parcialde proteína líquido feito de acordo com os métodos descritos neste relatóriopode ser usado como está e misturado com outros ingredientes para fazeruma fórmula infantil. Alternativamente, o hidrolisado parcial de proteína podeser produzido na forma de pó através de secagem por atomização do hidro-lisado líquido. O hidrolisado seco por atomização pode então ser incorpora-do em uma fórmula infantil. Em uma outra modalidade, o hidrolisado parciallíquido pode ser concentrado por evaporação e a seguir seco por atomiza-ção. Novamente, o hidrolisado seco por atomização pode ser incorporadoem uma fórmula infantil. Uma fórmula infantil tendo as proteínas parcialmen-te hidrolisadas descritas podem ser formuladas usando qualquer um dosmétodos de formulação de fórmula infantil conhecidos na técnica.
A fórmula infantil da presente invenção pode ser nutricionalmen-te completa e tipicamente contém tipos e quantidades adequadas de lipí-deos, carboidratos, proteínas, vitaminas e minerais. A quantidade de lipídeoou gordura tipicamente pode variar de cerca de 3 a cerca de 7g/1 OKcal. Fon-tes líquidas podem ser conhecidas na técnica, incluindo óleos vegetais taiscomo azeite de dendê, óleo de soja, palmoleína, óleo de coco, óleo de trigli-cerídeos de cadeia média, óleo de girassol de alto de teor de ácido oléico,óleo de açafroa de alto teor de ácido oléico, e similares. A quantidade deproteína tipicamente pode variar de cerca de 1 a cerca de 5 g/100 kcal. Aquantidade de carboidrato tipicamente pode variar de cerca de 8 a cerca de12 g/100 kcal.
A fórmula infantil pode incluir um probiotico. Qualquer probioticoconhecido na técnica será aceitável nesta modalidade. Em uma modalidadeparticular, o probiotico é escolhido do grupo consistindo em Lactobacillusand Bifidobacterium.
Em uma outra modalidade da invenção, a fórmula infantil podeconter um ou mais probióticos. Qualquer probiotico conhecido na técnicaserá aceitável nesta modalidade. Prebióticos da presente invenção podemincluir lactulose, galacto-oligossacarídeo, fruto-oligossacarídeo, isomalto-oligossacarídeo, oligossacarídeos de soja, lactossacarose, xilo-oligossacarídeo, e gentio-oligossacarídeos.
Em outras modalidades da presente invenção, a fórmula infantilpode conter outros componentes tais como ácidos graxos poliinsaturados decadeia longa (LCAPUFA). LCPUFAs adequados incluem, mas não são limi-tados a, ácido oc-linoléico, ácido y-linoléico, ácido linoléico, ácido linolênico,ácido eicosapentaenóico (EPA), ácido araquidônico (ARA) e ácido docosae-xanóico (DHA). Em uma modalidade, a fórmula infantil contém DHA. Emuma outra modalidade, a fórmula infantil contém ARA. Ainda em uma outramodalidade, a fórmula infantil da invenção contém ambos o DHA e o ARA.
Em uma modalidade, ambos o DHA e o ARA são incorporadosna fórmula infantil da presente invenção. Nesta modalidade, a relação empeso de ARA:DHA é tipicamente de cerca de 1:3 a cerca de 9:1. Alternati-vamente, esta relação pode ser de cerca de 1:2 a cerca de 4:1. Ainda emoutra alternativa, a razão pode ser de cerca de 2:3 a cerca de 2:1. Em umamodalidade particular a relação é de cerca de 2:1.
A quantidade efetiva de DHA em uma modalidade da presenteinvenção é tipicamente de cerca de 3 mg por kg de peso corporal por dia acerca de 150 mg por kg de peso corporal por dia. Em uma modalidade dainvenção, a quantidade de DHA é de cerca de 6 mg por kg de peso corporalpor dia a cerca de 100 mg por kg de peso corporal por dia. Em uma outramodalidade, a quantidade é de cerca de 10 mg por kg de peso corporal pordia a cerca de 60 mg de peso corporal por dia. Ainda em uma outra modali-dade, a quantidade é de cerca de 15 mg por kg de peso corporal por dia acerca de 30 mg por kg de peso corporal por dia.
A quantidade de DHA em fórmulas infantis para uso com a pre-sente invenção tipicamente varia de cerca de 5 mg/100 kcal a cerca de 80mg/100 kcal. Em uma modalidade da presente invenção a quantidade deDHA varia de cerca de 10 mg/100 kcal a cerca de 50 mg/100 kcal; e em umaoutra modalidade ela varia de cerca de 15 mg/100 kcal a cerca de 20mg/100 kcal. Em uma modalidade particular da presente invenção, a quanti-dade de DHA é de cerca de 17 mg/100 kcal.
A quantidade efetiva de ARA em uma modalidade da presenteinvenção é tipicamente de cerca de 5 mg por kg de peso corporal por dia acerca de 150 mg por kg de peso corporal por dia. Em uma modalidade dapresente invenção, a quantidade de ARA varia de cerca de 10 mg por kg depeso corporal por dia a cerca de 120 mg por kg de peso corporal por dia. Emuma outra modalidade, a quantidade varia de cerca de 15 mg por kg de pesocorporal por dia a cerca de 90 mg por kg de peso corporal por dia. Ainda emuma outra modalidade, a quantidade varia de cerca de 20 mg por kg de pesocorporal por dia a cerca de 60 mg por kg de peso corporal por dia.
A quantidade de ARA em fórmulas infantis para uso com a pre-sente invenção tipicamente varia de cerca de 10 mg/100 kcal a cerca de 100mg/100 kcal. Em uma modalidade da presente invenção, a quantidade deARA varia de cerca de 15 mg/100 kcal a cerca de 70 mg/100 kcal. Em umaoutra modalidade a quantidade de ARA varia de cerca de 20 mg/100 kcal acerca de 40 mg/100 kcal. Em uma modalidade particular da presente inven-ção, a quantidade de ARA é de cerca de 34 mg/100 kcal.
DHA e ARA podem ser suplementados na presente invençãousando técnicas padrões conhecidas na técnica. Por exemplo, DHA e ARApodem ser adicionados ao suplemento ou fórmula pela substituição de umaquantidade equivalente de um óleo, tal como óleo de girassol de alto teor deácido oléico, normalmente presente na fórmula. Como um outro exemplo, osóleos contendo DHA e ARA podem ser adicionados ao suplemento ou fór-mula pela substituição de uma quantidade equivalente do resto da misturatotal de gorduras normalmente presente na fórmula sem DHA e ARA.
A fonte de DHA e ARA pode ser qualquer fonte conhecida natécnica. Em uma modalidade da presente invenção, fontes de DHA e ARAsão óleos de célula única conforme ensinados nas Patentes U.S. N—5.374.567; 5.550.156 e 5.397.591 cujas descrições são incorporadas nesterelatório na sua totalidade por referencia. Entretanto, a presente invençãonão é limitada a tais óleos apenas. DHA e ARA podem estar na forma natu-ral ou refinada.
Em uma modalidade, a fonte de DHA e ARA é substancialmentelivre de ácido eicopentaenóico (EPA). Por exemplo, em uma modalidade dapresente invenção a fórmula infantil contém menos do que cerca de 16 mgde EPA/100 kcal; em uma outra modalidade menos do que cerca de 10 mgde EPA/100 kcal; e ainda em uma outra modalidade menos do que cerca de5 mg de EPA/100 kcal. Uma modalidade particular não contém substancial-mente EPA. Uma outra modalidade é livre de EPA pelo fato de mesmo tra-ços de EPA estarem ausentes da fórmula.
A fórmula infantil da presente invenção tem uma distribuição depeso molecular particular. Esta distribuição de peso molecular demonstrouqualidades aceitáveis de emulsificação e sabor quando comparada com asde outros hidrolisados parciais encontrados na técnica anterior. Em adição, adistribuição de peso molecular particular demonstrou induzir a menor efeitode anticorpo IgC no soro do que a proteína de leite intacta.
Em uma modalidade da presente invenção, o hidrolisado parcialfeito de acordo com os métodos descritos neste relatório pode ser incorpo-rado em um suplemento nutricional. O hidrolisado parcial de proteína podeser usado na forma líquida e misturado com outros ingredientes para fazerum suplemento nutricional líquido. Alternativamente, o hidrolisado parcial deproteína pode ser seco por atomização e incorporado em um suplementonutricional em pó. Um suplemento nutricional tendo as proteínas parcialmen-te hidrolisadas pode ser formulado usando qualquer um dos métodos deformulação de suplemento nutricional conhecido na técnica.
Cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) foi usada paradeterminar a distribuição de peso molecular dos peptídeos do hidrolisadocriados pelo processo de hidrólise presentemente descrito. Especificamente,uma quantidade suficiente da fórmula infantil em pó foi pesada para fornecer0,5 grama de proteína em um tubo centrífugo cônico de 50 ml. Água foi adi-cionada para completar o volume do tubo a 45 ml. A mistura foi colocada emum Misturador Sarsted D-5223 e misturada por uma hora. Após a mistura, foicriada uma solução de proteína a 1% pela adição de outros 5 ml de água aotubo. Um padrão estoque foi preparado e misturado também por uma hora.
Separadamente, foram adicionadas 14,91 gramas de cloreto depotássio (KCI) a um béquer de 1000 ml. O KCI foi dissolvido pela adição de700 ml de água ao béquer. 250 ml de acetonitrila e 1,0 ml de ácido trifluora-cético foram então adicionados à solução de KCI (eluente). O pH foi ajustadopara 3,0 usando uma solução 0,2M de K2HP04.
Uma garrafa de reagente HPCL foi enchida e a garrafa foi lavadacom eluente, reservando cerca de 50 ml para diluição de amostras e pa-drões. As linhas do Hitachi L-6200 A Intelligent Pump foram purgadas comeluente e as colunas foram equilibradas com eluente por uma hora.
Após as amostras terem sido misturadas por uma hora, 5,0 mlde cada amostra foram pipetados para tubos de vidro com tampa rosqueada.5,0 ml de diclorometano foram também pipetados para cada tubo. Os tubosforam tampados e misturados por inversão quarto vezes. As amostras foramentão centrifugadas por cinco minutos a 200 x g.
Enquanto as amostras estavam na centrífuga, os padrões esto-que 1-5 foram diluídos com eluente (800 \i\ + 3200 \x\). Aproximadamente 1ml de cada padrão foi pipetado para cada um de dois frascos auto-amostradores e tampados.
A camada superior (aquosa) das amostras centrifugadas 1-10foram diluídas com eluente (100 jul + 900 uJ). Os frascos foram carregadosna bandeja do auto-amostrador como a seguir: branco, padrão, amostras esegundo padrão. A esteira foi colocada no auto-amostrador Hitachi. O núme-ro total de frascos a serem entrados no programa do auto-amostrador usan-do as teclas na frente do auto-amostrador e as amostras foram testadas. Osresultados indicaram o perfil de peso molecular da proteína.
Em uma modalidade, o hidrolisado parcial da invenção tem umpeso molecular médio de 2.000 com a faixa de distribuição de peso molecu-lar mostrado na Tabela 1, acima.
Em uma outra modalidade, o hidrolisado parcial da invenção tema distribuição de peso molecular mostrado na Tabela 2.Tabela 2
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Os exemplos a seguir descrevem várias modalidades da presen-te invenção. Outras modalidades dentro do escopo das reivindicações nesterelatório serão evidentes para alguém versado na técnica pela consideraçãodo relatório ou prática da invenção conforme descrito neste relatório. É pre-tendido que o relatório, juntamente com os exemplos, sejam consideradosexemplares apenas, com o escopo e espírito da invenção sendo indicadopelas reivindicações a seguir aos exemplos. Nos exemplos, todas as percen-tagens são dadas em uma base em peso a menos que indicado em contrário.
Exemplo 1
Este exemplo ilustra um método de produção de um hidrolisadoparcial de proteína, Inicialmente, 60,3 kg de sólidos não leite (leite em pó) e37,4 kg de concentrado de soro do leite (60%) foram intermisturados em umtanque contendo água a 54°C. A suspensão tinha um teor de sólidos entre20% e 23%. O pH da suspensão foi então medido. Hidróxidos de sódio epotássio foram adicionados à suspensão para ajustar o pH da suspensão a7,0. Após ajustar o pH, 0,5 kg de enzima Amano N foi adicionado à suspen-são. A seguir à adição de Amano N à suspensão, o pH foi continuamenteajustado a um pH de 7,0 usando hidróxido de sódio e hidróxido de potássio.
A quantidade total de hidróxido de sódio adicionado à amostra foi de 0,3 kg.
A quantidade total de hidróxido de potássio adicionado à suspensão foi de1,5 kg.
A hidrólise foi permitida ocorrer por 90 minutos, o tempo inici-ando com a adição de enzima Amano N à suspensão. Após o fim dos 90minutos, a suspensão foi tratada termicamente para inativar a enzima. Otratamento térmico consistiu em elevar a temperatura da suspensão a 82°Cpor 10 minutos. O grau de hidrólise obtido neste exemplo foi entre 6% e 9%.A suspensão foi então resfriada e seca por atomização para obter um hidro-lisado em pó.
Exemplo 2
Este exemplo ilustra uma modalidade de ingredientes que po-dem ser usados para preparar a fórmula infantil da presente invenção.
Tabela 3: Receita de uma Modalidade do Hidrolisado
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Vitaminas podem ser adicionadas aos ingredientes da Tabela 3.
Exemplos de vitaminas que podem ser adicionadas à fórmula incluem vita-mina A, vitamina D3, vitamina tiamina, riboflavina, cloridrato de vitaminaB6, vitamina B12, niacinamida, ácido fólico pantotenato de cálcio, biotina eácido ascórbico.
Minerais podem ser também adicionados aos ingredientes daTabela 3. Exemplos de minerais que podem ser adicionados à fórmula inclu-em fosfato de cálcio, glicerofosfato de cálcio, gluconato de cálcio, citrato desódio, cloreto de potássio, citrato de potássio.fosfato de potássio, fosfato demagnésio, sulfato ferroso, sulfato de zinco e sulfato cúprico.
Exemplo 3
Este exemplo ilustra o efeito ativador para a resposta do anticor-po igG do hidrolisado parcial de proteína obtido no Exemplo 1. Trezentos evinte e três lactentes foram estudados em sete práticas pediátricas localiza-das por todo os Estados Unidos. Os pacientes eram lactentes a termo sau-dáveis envolvidos logo após o nascimento.Os lactentes cujas mães indicaram a sua intenção de alimentarpelo seio foram designados para o grupo A. Aqueles lactentes cujas mãeselegeram não alimentar pelo seio foram aleatoriamente designados de ummodo duplo-cego ao grupo B ou C, Os lactentes do grupo B receberam umafórmula infantil compreendendo o hidrolisado parcial de proteína obtido noExemplo 1. Os lactentes do grupo C receberam uma fórmula baseada emleite dominante em proteína do soro comercialmente disponível (Enfamil,fornecida por Mead Johnson Co,. Evansville, IN). Ambas as fórmulas conti-nham as mesmas quantidades de proteína, carboidrato e gordura.
Os lactentes foram avaliados em intervalos mensais de até 4meses de idade em todos os locais, e em 6 e 8 meses de idade para detec-ção em três dos sete locais. Sangue foi colhido na admissão e em 3, 6 e 8meses de idade para detecção de anticorpos no soro ao leite. Anticorpos deproteína antileite IgE foram quantificados por um ensaio imunoabsorventeligado a enzima de biotina-avidina; anticorpos de proteína antileite IgG foramdeterminados pelo uso de um ensaio imunoabsorvente ligado a enzima des-crito em Burks, et al, Burks, A,W,. ei al,. Antibody Response to Milk Proteinin Patients with Milk Protein Intolerance Documented by Challenge, J, AllergyClin, Immunol, 85:921-927 (1990). Sangue adicional foi colhido para deter-minar os níveis séricos de ferritina e hemoglobina e determinar hematócritonos lactentes que foram examinados aos 8 meses de idade.
A concentração média de anticorpos IgG ao leite no soro foicomparável em todos os grupos na hora de admissão ao estudo. Entretanto,os aumentos de anticorpos IgG ao leite no soro foram significativa maioresno grupo de lactentes alimentados com a fórmula C do que aqueles alimen-tados com leite do seio (grupo A) ou fórmula B. Esta concentração mais bai-xa de anticorpos IgG ao leite no grupo B indica um maior efeito ativador daproteína do leite de vaca intacta para as respostas do anticorpo IgG (grupoC). Assim, pode haver um potencial imunogenico reduzido das proteínasparcialmente hidrolisadas do leite do grupo B.
Na hora do alistamento, não foram encontradas diferenças signi-ficativas dentre os três grupos nas concentrações médias de anticorpos IgEao leite no soro. Além disso, não houveram diferenças significativas nos ní-veis de IgE dentre os regimes de alimentação por todo o estudo. Os valoresmédios de ferritina, hematócrito e hemoglobina estavam dentro da faixanormal de 8 meses de idade, e não foram encontradas diferenças significati-vas dentre os três grupos.
Exemplo 4
Este exemplo ilustra uma modalidade particular de uma fórmulainfantil suplementada com o hidrolisado parcial de proteína preparado deacordo com o processo da presente invenção. Neste exemplo, a lactosecompreende cerca de 23,5% do componente de carboidratos.
Tabela 4: Informação de Nutrientes para a Fórmula Infantil
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Neste exemplo, a lactose encontra-se naturalmente presentenos sólidos de NFM e WPC parcialmente hidrolisadas. Mais especificamen-te, cerca de 50% dos sólidos de NFM e WPC parcialmente hidrolisadas sãoconstituídos por lactose. Assim, a quantidade presente nesses sólidos deNFM e WPC é de aproximadamente 13,433 kg. Existe um adicional de138,017 g de lactose presente na composição, Isto totaliza aproximadamen-te 13,571 g de lactose na fórmula infantil.
Existem 44,256 kg de sólidos de xarope presentes na fórmulainfantil. O teor total de carboidratos total é de 57,827 kg, a lactose compre-endendo apenas 13,571 kg daquele total. Portanto, a lactose compreendeaproximadamente 23,5% do teor total de carboidratos.
Todas as referências citadas neste relatório, incluindo sem limi-tação, todos os ensaios, publicações, patentes, pedidos de patente, apre-sentações, textos, relatórios, manuscritos, brochuras, livros, postagens nainternet, artigos em periódicos, e similares, são por meio deste incorporadospor referência neste relatório nas suas totalidades. A discussão das referên-cias neste relatório é pretendida meramente sumarizar as afirmações feitaspelos seus autores e não é feita admissão de que qualquer referência consti-tua a técnica anterior. Os depositantes reservam o direito de desafiar a pre-cisão e a pertinência das referências citadas.
Embora as modalidades preferidas da invenção tenham sidodescritas usando termos, dispositivos e métodos específicos, tal descrição épara propósitos ilustrados apenas. As palavras usadas são palavras de des-crição em vez de limitação. Deve ser entendido que mudanças e variaçõespodem ser feitas por aqueles versados na técnica sem se afastar do espíritoe escopo da presente invenção, que está descrito nas reivindicações a se-guir. Em adição, deve ser entendido que aspectos das várias modalidadespodem ser intercambiados tanto no todo como em parte. Por exemplo, em-bora métodos para a produção de um a fórmula infantil líquida estéril feitade acordo com os métodos tenham sido exemplificados, outros usos sãocontemplados. Portanto, o espírito e escopo das reivindicações anexas nãodeveriam ser limitados à descrição das versões preferidas lá contidas.

Claims (15)

1. Fórmula infantil, caracterizada pelo fato de que compreende:um componente de carboidratos que é constituído por entre cer-ca de 0% e 60% de lactose, baseado no peso total dos carboidratos presen-tes na fórmula infantil; eum componente de proteínas que é constituído por proteína dosoro do leite e caseína parcialmente hidrolisadas, no qual a relação de prote-ína do soro do leite para caseína situa-se entre 50:50 e 70:30 e no qual ohidrolisado de proteína tem os peptídeos distribuídos sobre a seguinte faixade distribuição de peso molecular como uma função da sua massa molar: <table>table see original document page 21</column></row><table>
2. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-da pelo fato de que o hidrolisado de proteína tem os peptídeos distribuídossobre a seguinte faixa de distribuição de peso molecular como uma funçãoda sua massa molar: <table>table see original document page 21</column></row><table>
3. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-da pelo fato de que a relação de proteína do soro do leite:caseína é de cercade 60:40.
4. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-da pelo fato de que o componente de carboidratos compreende entre cercade 15% e 55% de lactose.
5. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-da pelo fato de que o componente de carboidratos compreende entre cercade 20% e 30% de lactose.
6. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-da pelo fato de que o componente de carboidratos compreende cerca de 25% em peso de lactose e cerca de 75% em peso de sólidos de xarope demilho.
7. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-da pelo fato de que o grau de hidrólise do componente de proteínas situa-seentre cerca de 4% e 10%.
8. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 6, caracteriza-da pelo fato de que o grau de hidrólise do componente de proteínas situa-seentre cerca de 6% e 9%.
9. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-da pelo fato de que a fórmula infantil compreende adicionalmente pelo me-nos um probiótico.
10. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zada pelo fato de que a fórmula infantil compreende adicionalmente pelomenos um prebiótico.
11. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zada pelo fato de que a fórmula infantil compreende adicionalmente um LC-PUFA.
12. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 11, caracteri-zada pelo fato de que o LCPUFA compreende DHA ou ARA.
13. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 10, caracteri-zada pelo fato de que o LCPUFA compreende DHA e ARA.
14. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zada pelo fato de que a fórmula infantil está na forma de pó.
15. Fórmula infantil de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zada pelo fato de que a fórmula infantil está na forma líquida.
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