BRPI0611093B1

BRPI0611093B1 - Método para a produção de um extrato de ginkgo biloba apresentando um teor reduzido de 4'-o- metil piridoxina e/ou biflavonas

Info

Publication number: BRPI0611093B1
Application number: BRPI0611093-2A
Authority: BR
Inventors: Erdelmeier Clemens; Hauer Hermann; Koch Egon; Lang Friedrich
Original assignee: Dr. Willmar Schwabe Gmbh & Co. Kg
Priority date: 2005-05-03
Filing date: 2006-04-28
Publication date: 2018-01-16
Also published as: EP1868625B1; JP2009173663A; CA2606843A1; ES2310408T3; TWI376230B; PL1868625T3; KR20070112271A; TW200716149A; US20080286391A1; DOP2006000091A; KR100933721B1; RU2367459C2; WO2006117169A1; PT1868625E; EP1868625A1; NZ563818A; DK1868625T3; CN104189025A; CA2606843C; MY143650A

Abstract

um sistema de painel de teto inclui um painel de teto incluindo uma porção de face com quatro áreas de esquina e uma porção de saia que se estende para trás desde a porção de face. a porção de face tem um furo de decoração principal com uma borda periférica da qual uma porção de flange principal se estende para trás. as áreas de esquina da porção de face têm do primeiro ao quarto buracos de decoração subordinados com bordas periféricas das quais da primeira a quarta porções de flange subordinadas se estendem para trás. um objeto de decoração principal é ajustado ao furo de decoração principal de modo a sobressair da porção de face do painel de teto. objetos de decoração subordinados sáo ajustado aos furos de decoração subordinados de modo a sobressair da porção de face do painel de teto. clipes são adaptados para agarrar a porção de flange principal e o objeto de decoração principal e agarrar as porções de flange subordinadas e os objetos de decoração subordinados.

Description

(54) Título: MÉTODO PARA A PRODUÇÃO DE UM EXTRATO DE GINKGO BILOBA

APRESENTANDO UM TEOR REDUZIDO DE 4'-O-METIL PIRIDOXINA E/OU BIFLAVONAS (51) lnt.CI.: A61K 36/00 (30) Prioridade Unionista: 03/05/2005 DE 10 2005 020 685.9, 23/12/2005 DE 10 2005 061948.7 (73) Titular(es): DR. WILLMAR SCHWABE GMBH & CO. KG (72) Inventor(es): CLEMENS ERDELMEIER; HERMANN HAUER; EGON KOCH; FRIEDRICH LANG

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MÉTODO PARA A PRODUÇÃO DE UM EXTRATO DE GINKGO BILOBA APRESENTANDO UM TEOR REDUZIDO DE 4'-O-METIL PIRIDOXINA E/OU BIFLAVONAS.

A presente invenção refere-se a um método aperfeiçoado em múltiplas etapas para a preparação de um extrato de ginkgo biloba com um teor reduzido de 4’-O-metil piridoxina e/ou biflavonas, em que a depleção é realizada por filtração por uma resina adsorvente e/ou um trocador de íons, e as substâncias a serem removidas são retidas na resina. A invenção também refere-se a um extrato de ginkgo biloba com um teor reduzido de 4’-Ometil piridoxina e/ou biflavonas, que é obtido pelo método de acordo com a presente invenção, assim como a seu uso.

Há décadas, extratos das folhas de ginkgo biloba são usados como um medicamento. São atualmente usados para o tratamento de diferentes tipos de demência e seus sintomas, assim como transtornos da circulação sanguínea cerebral e periférica. Os ingredientes aos quais a eficácia está associada são terpeno lactonas (ginkgolidas A, B e C e bilobalida), assim como glicosidas de flavonas (quercetina, kaempferol e isorhamnetina). As folhas de ginkgo biloba também contêm componentes que não contribuem para a eficácia desejada, mas que podem ser responsáveis pelos riscos e efeitos colaterais. Além de ingredientes vegetais não polares, como ácidos ginkgólicos, esses componentes são 4’-O-metil piridoxina e biflavonas. Em um extrato de ginkgo que seja eficaz e, ao mesmo tempo, tão seguro quanto possível e com tão poucos efeitos colaterais quanto possível, esses compostos devem, portanto, estar presentes na menor quantidade possível.

4’-O-metil piridoxina pode causar sintomas de envenenamento, como convulsões e inconsciência. Assim, esse composto também é chamado de ginkgotoxina. As biflavonas contidas em ginkgo exibem um potencial imunotóxico e podem provocar alergias de contato. Essas biflavonas contidas em ginkgo são predominantemente os compostos amentoflavona, bilobetina, ginkgetina, isoginkgetina e sciadopitisina.

4’-O-metil piridoxina:

OCH.

HO,

MX

OH

Biflavonas:

Amentoflavona: R = R = R³ = H c d1 _ r>3 _ lj r>2 _

U LJIIVM^LIÍ ία. II — I 1 —11,11 — \_/k^l 13

Ginkgetina: R³ = H, R¹ = R² = OCH3 Isoginkgetina: R¹ = H, R² = R³ = OCH3 Ciadopitisina: R¹ = R² = R³ = OCH₃

Métodos para a depleção de 4’-0-metil piridoxina e simultanea10 mente biflavonas, assim como os extratos obtidos já foram descritos na EP 1 037 646 B1. Nesta, a 4’-O-metil piridoxina é retida usando-se um trocador de cátions ácido, e as biflavonas são adsorvidas em carbono ativado. De preferência, essas etapas de depleção são realizadas depois da etapa f) do método de acordo com EP 1 037 646 B1 (página 3), isto é, depois do tratamen15 to da solução com um composto de chumbo ou uma poliamida insolúvel. O método da EP 1 037 646 B1 se baseia no método originalmente descrito na DE 39 40 091 C2.

Na EP 1 037 646 B1, a depleção das biflavonas e 4’-O-metil piridoxina é realizada em um estágio do método (etapa f)), em que teores relati20 vamente elevados de sais de chumbo e sais de amônio estão presentes, de modo que se tem de empregar uma quantidade aumentada de trocador de íons.

Além disso, as depleções de biflavonas e 4’-O-metil piridoxina são descritas e reivindicadas apenas em combinação. Entretanto, depen25 dendo dos (imites a serem possivelmente estabelecidos no futuro e em vista da exigência de uma modificação tão pequena quanto possível da composição do extrato, pode ser desejáve! remover apenas biflavonas ou 4’-O-metiÍ piridoxina.

Além disso, os teores de menos de 50 ppm de 4’-O-metil piridoxina e menos de 100 ppm de biflavonas que são visados na EP 1 037 646 B1 ainda são comparativamente altos. Como a EP 1 037 646 B1 não descreve um exemplo comparativo, o grau real de depleção conseguido nos Exemplos 2 e 3 também não pode ser visto nessa referência.

Assim, é um objetivo subjacente da presente invenção apresentar um método para a preparação de extratos de ginkgo com um baixo teor de 4’-O-meti! piridoxina e/ou um baixo teor de biflavonas que não tenha as desvantagens indicadas acima e, em particular, . em que se empreguem adsorventes bem recicláveis e/ou muito econômicos;

. que leve a teores de 4’-O-metil piridoxina de menos de 20 ppm, de preferência de menos de 10 ppm e, de maneira particularmente preferida, de menos de 2 ppm e/ou teores de biflavonas de menos de 20 ppm, de preferência de menos de 10 ppm e, de maneira particularmente preferida, de menos de 5 ppm; e . que leve a extratos com teores preferidos de flavonóides de 20 a 30% em peso (de maneira particularmente preferida de 22,0 a 27,0%), de terpeno lactonas de 4,5 a 8,5% em peso (de maneira particularmente preferida de 5,0 a 7,0%, de preferência de 2,8 a 3,4% de ginkgolidas A, B e C e de 2,6 a 3,2% de bilobalida) e de ácidos ginkgólicos (5 ppm no máximo), em que os ditos teores de flavonóides de 22,0 a 27,0%, de terpeno lactonas de 5,0 a 7,0% (2,8 a 3,4% de ginkgolidas A, B e C e de 2,6 a 3,2% de bilobalida) e de ácidos ginkgólicos (5 ppm no máximo) atendem às exigências da Farmacopéia Alemã 2003 (Deutsches Arzneibuch; DAB).

De acordo com a DAB, os flavonóides são determinados na forma de quercetina, kaempferol e isorhamnetina depois da hidrólise ácida e calculados como glicosidas flavonóides.

Esse objetivo pode ser atingido separando-se as biflavonas com resinas adsorventes e/ou separando-se a 4’-O-metil piridoxina mediante trocadores de íons ácidos.

Para produzir os extratos de acordo com a presente invenção, realiza-se, de preferência, o seguinte método, em que as etapas a) a i), assim como a m), são essencialmente conforme já descritas na DE 39 40 091

C2, cuja exposição total, em particular com relação aos detalhes do método, deve ser incorporadas no presente pedido por referência:

a) extração das folhas de ginkgo biloba (fármaco) a uma temperatura de 20 - 100-C, de preferência de 40 - 60-C, usando acetona contendo água com um teor de 20 - 90% em peso, um alcanol contendo água com

1 a 3 átomos de carbono (metanol, etanol, n-propanol e isopropanol) e um teor de 20 - 90% em peso ou metanol anidro, em que a razáo de tármaco:solvente vai de 1:4 a 1:20, de preferência de 1:5 a 1:10;

b) separação do solvente orgânico por evaporação do solvente a um teor de 10% em peso no máximo (de preferência, 5% em peso no máxi15 mo), em que a água pode ser adicionada durante as etapas de destilação finais;

c) diluição da solução aquosa restante com água até um teor de sólidos de 5 a 25% em peso (de preferência, 15 a 20% em peso), resfriamento da solução a uma temperatura abaixo de 25-C (de preferência, de 10 a 12^QC) e repouso da solução aquosa restante até que se forme uma precipitação;

d) tratamento da solução aquosa restante com sulfato de amônio (de preferência, a um teor de até 40% em peso, de maneira particularmente preferida de 25 a 35% em peso) e, subseqüentemente, extração da solução pelo menos uma vez usando metil etil cetona ou uma mistura de metil etil cetona e acetona (de preferência, em uma razão de 9:1 a 4:6, em particular de 6:4);

e) concentração do extrato obtido (de preferência, a um teor de sólidos de 50 a 70% em peso) e diluição do extrato com uma mistura de eta30 nol e água para se obter uma solução contendo 50% em peso de água e 50% em peso de etanol e com um teor de sólidos de 10% em peso;

f) tratamento da solução com um composto de chumbo (de preferência, com acetato de chumbo, hidróxido acetato de chumbo, nitrato de chumbo ou uma suspensão aquosa de hidróxido de chumbo) até ocorrer uma mudança de cor de marrom para marrom avermelhado, ou uma poliamida insolúvel (de preferência, poliamida 6, poliamida 6,6 ou polivinilpirroli5 dona reticulada (polividona));

g) extração da solução filtrada usando um solvente alifático ou cicloalifático com um ponto de ebulição de 60 a 100^eC;

h) concentração da solução aquosa-alcoólica restante, subsequentemente, tratamento da solução com sulfato de amônio e extração da solução com metil etil cetona e etanol (a solução é, de preferência, concentrada sob pressão reduzida a um teor de etanol de cerca de 5% no máximo, acrescentada de sulfato de amônio a um teor de 20% em peso e extraída com o solvente em uma razão de 8:2 a 5:5, de preferência de 6:4);

i) concentração da fase orgânica obtida a um teor de sólidos de

50 a 70% em peso;

k) dissolução do concentrado em um alcanol aquoso com 1 a 3 átomos de carbono e, opcionalmente, filtração do produto;

l) filtração por uma resina adsorvente e/ou um trocador de íons, em que as substâncias a serem removidas são retidas na resina; e

m) secagem do concentrado (de preferência, a uma temperatura máxima de 60 a 80-C) sob pressão reduzida, para obter um extrato seco com um teor de água de menos de 5%.

É uma vantagem do método de acordo com a presente invenção que a etapa de depleção seja realizada ao término do método. Assim, tem de se empregar uma quantidade menor do trocador de íons, e se obtêm teores particularmente baixos de 4’-O-metil piridoxina e/ou biflavonas.

Resinas adsorventes preferidas na etapa I) são resinas à base de estirenos/divinilbenzenos opcionalmente substituídos, como Diaion HP20, HP-21 ou Sepabeads SP-207 e SP-850. Trocadores de íons preferidos são trocadores de íons fortemente ácidos, como Merck I ou Amberlite IR120. A filtração opcionalmente inclui o enxágüe usual usando mais solvente. O alcanol aquoso na etapa k) é metanol, etanol, n-propanoi ou isopropanol aquoso com um teor de 20 - 90% em peso, respectivamente, de preferência etanol aquoso, uma concentração de 40 a 60% em peso sendo particularmente preferida.

Um objeto da presente invenção são extratos, em particular ex5 tratos secos, que sejam obtidos pelo método de acordo com a presente invenção e que exibam os seguintes teores:

. menos de 20 ppm, de preferência menos de 10 ppm e, em particular, menos de 2 ppm de 4’-O-metil piridoxina; e/ou . menos de 20 ppm, de prelerência menos de 10 ppm e, em par10 ticular, menos de 5 ppm de biflavonas.

Além disso, um objeto da presente invenção são extratos, em particular extratos secos, que sejam obtidos pelo método de acordo com a presente invenção e que exibam os seguintes teores adicionais:

. 20 a 30% em peso, de preferência 22,0 a 27,0% em peso de flavonóides;

. 4,5 a 8,5% em peso, de preferência 5,0 a 7,0% em peso de terpeno lactonas; e . menos de 10 ppm, de preferência no máximo 5 ppm de ácido ginkgólicos.

Um objeto adicional da presente invenção são extratos, em particular extratos secos, que sejam obtidos pelo método de acordo com a presente invenção e que exibam os seguintes teores:

. 20 a 30% em peso, de preferência 22,0 a 27,0% em peso de flavonóides;

. 2,5 a 4,5% em peso de ginkgolidas A, B e C no total, de preferência 2,8 a 3,4% em peso de ginkgolidas A, B e C no total;

. 2,0 a 4,0% em peso, de preferência 2,6 a 3,2% em peso de bilobalida;

. menos de 10 ppm, de preferência no máximo 5 ppm de ácido ginkgólicos; e . menos de 20 ppm, de preferência menos de 10 ppm, de maneira particularmente preferida, menos de 2 ppm de 4’-O-metil piridoxina; e/ou . menos de 20 ppm, de preferência menos de 10 ppm. de maneira particularmente preferida, menos de 5 ppm de biflavonas.

De acordo com a Farmacopéia Européia, extratos secos em geral têm um resíduo seco de pelo menos 95% em peso.

Os extratos de acordo com a presente invenção podem ser administrados na forma de pós, grânulos, comprimidos, drágeas (comprimidos revestidos) ou cápsulas, de preferência por via oral. Para preparar comprimidos, o extrato é misturado com adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis adequados, como lactose, celulose, dióxido de silício, croscarmelose e este10 arato de magnésio, e são prensados em comprimidos, que opcionalmente recebem um revestimento adequado feito de, por exemplo, hidroximetilcelulose, polietilenoglicol, pigmentos (como dióxido de titânio, óxido de ferro) e talco. O extrato de acordo com a presente invenção também pode ser enchido em cápsulas, opcionalmente com a adição de adjuvantes, como estabili15 zadores, cargas e similares. A dose é suficiente para que 1 a 2.000 mg, de preferência 50 a 1.000 mg e, de maneira particularmente preferida, 100 a 500 mg do extrato sejam administrados por dia.

Um objeto adicional da presente invenção são medicamentos, produtos alimentares e outras preparações que contenham esses extratos, opcionalmente em combinação com outras substâncias, como ingredientes ativos e/ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. O termo produto alimentar, conforme aqui usado, refere-se particularmente a produtos alimentares dietéticos, produtos de suplemento dietético, assim como suplementos alimentares e dietéticos médicos.

Exemplos

Preparação da solução de extrato usada nos Exemplos 1 e 2, assim como nos Exemplos Comparativos 1 e 2

Folhas secas de ginkgo biloba (fármaco) foram extraídas a uma temperatura de cerca de 50^sC usando sete vezes seu peso (p/p) (isto é, a razão de fármaco-solvente é de 1:7) de acetona/água a 60/40 (p/p) (etapa a)).

O solvente orgânico foi grandemente separado do extrato (etapa

b)), e a solução aquosa concentrada restante foi diluída com água a um teor de sólidos de cerca de 10% em peso. A solução foi resfriada a uma temperatura de cerca de 12⁹C sob agitação, e o precipitado resultante foi removido (etapa c)).

Sulfato de amônio a cerca de 30% em peso foi adicionado à solução aquosa restante, e a solução formada foi extraída usando-se uma mistura de metil etil cetona e acetona a uma razão de 6:4 (etapa d)).

O extrato obtido foi grandemente concentrado, e o concentrado assim obtido foi diluído com água e etanol, de modo que fosse obtida uma solução contendo 50% em peso de água e 50% em peso de etanol a um teor de sólidos de cerca de 10% em peso (etapa e)). A solução foi filtrada, e se adicionou ao filtrado uma solução aquosa de hidróxido acetato de chumbo (etapa f)).

Depois de uma filtração adicional, a solução alcoólica aquosa restante foi extraída com heptano (etapa g)).

Subseqüentemente, a solução alcoólica aquosa restante foi concentrada sob pressão reduzida a um teor de etanol de cerca de 5%, e se adicionou sulfato de amônio a cerca de 5%, de modo que se atingisse um teor de cerca de 20% em peso com base no teor de água.

A solução obtida foi extraída usando-se uma mistura de metil etil cetona e etanol a uma razão de 6:4 (etapa h)).

A fase orgânica resultante foi grandemente concentrada (teor de sólidos de cerca de 55% em peso) (etapa i)). Então, o produto foi diluído com etanol e água, de modo que se obtivesse uma solução com um teor de etanol de cerca de 75% e um teor de sólidos de cerca de 15% (etapa k)). Exemplo 1: Extrato de qinkgo com um teor reduzido de 4’-O-metil piridoxina

1.249 g da solução de extrato obtido de acordo com o método de preparação acima descrito foram ajustados com água a um teor de etanol de cerca de 40% (p/p) e aplicados a 50 mL (correspondendo a 0,28 ml_/g do extrato seco) de Amberlite IR-120 (trocador de íons fortemente ácido) (coluna: cerca de 2 x 16,5 cm; fluxo: cerca de 8 mL/min) (etapa I)), seguido por enxágüe com 200 mL de etanol a 50% (p/p). A solução resultante foi concentrada em um evaporador rotativo e secada a vácuo a 50^sC (etapa m)): 179,4 g.

Conforme se pode observar na tabela a seguir, foi conseguido um teor de 4’-0-metil piridoxina sem modificar essencialmente os teores de ingredientes que eram relevantes com relação à eficácia.

Exemplo Comparativo 1: Extrato de ginkqo sem depleção de acordo com a etapa I) da presente invenção

98,4 g da solução de extrato empregada no Exemplo 1 foram concentrados por evaporação e secados a vácuo a 50^gC: 14,7 g.

Exemplo 2a) Extrato de qinkgo com um teor reduzido de biflavonas

500 g da solução de extrato obtida de acordo com o método de preparação acima descrito foram ajustados com água a um teor de etanol de cerca de 40% (p/p) e aplicados a 400 mL (correspondendo a 5,7 mL/g do extrato seco) de Sepabeads SP-850 (resina adsorvente) (coluna: cerca de 4 x 32 cm; fluxo: cerca de 8 mUmin) (etapa l)), seguido por enxágüe com cer15 ca de 2 L de etanol a 40% (p/p) no total. 10% da solução resultante (259,3 g) foram concentrados em um evaporador rotativo e liofilizados (etapa m)): 6,92 g. Os 90% restantes da solução foram empregados no Exemplo 2b).

Conforme se pode observar na tabela a seguir, foram conseguidos teores de biflavona de menos de 1 ppm, respectivamente, sem modificar essencialmente os teores de ingredientes que eram relevantes com relação à eficácia.

Exemplo 2b): Extrato de qinkgo com um teor reduzido de 4’-O-metil piridoxina e biflavonas

90% da solução obtida o Exemplo 2a) (2.334,1 g) foram aplica25 dos a 25 mL (correspondendo a 0,40 mL/g do extrato seco) de Amberlite IR120 (trocador de íons fortemente ácido) (coluna: cerca de 1,5 x 11 cm; fluxo: cerca de 10 mL/min) (etapa I)), seguido por enxágüe com 100 mL de etanol a 40% (p/p). A solução resultante foi concentrada em um evaporador rotativo e liofilizada (etapa m)): 61,67 g.

Conforme se pode observar na tabela a seguir, foram conseguidos um teor de 4’-O-metil piridoxina de 0,4 ppm e teores de biflavona de menos de 1 ppm, respectivamente, sem modificar essencialmente os teores de ingredientes que eram relevantes com relaçao à eficácia.

Exemplo Comparativo 2: extrato de ginkgo sem depleção de acordo com a etapa I) da presente invenção g da solução de extrato empregada no Exemplo 2a) foram 5 concentrados por evaporação e liofilizados: 7,05 g.

Exemplo Comparativo 3: Extrato de ginkgo com depleção de biflavona e depleção de 4’-Q-metil piridoxina após tratamento com um composto de chumbo (etapa 0) de acordo com EP 1 037 646 B1

Folhas secas de ginkgo biloba (fármaco) foram extraídas a uma temperatura de cerca de 50^sC usando sete vezes seu peso (p/p) (isto é, a razão de fãrmaco-solvente é de 1:7) de acetona/água a 60/40 (p/p) (etapa a)).

O solvente orgânico foi grandemente separado do extrato, e a solução aquosa concentrada restante foi diluída com água a um teor de sólidos de cerca de 10% em peso, resfriada a uma temperatura de cerca de

12⁹C sob agitação, e o precipitado resultante foi removido.

Sulfato de amônio a cerca de 30% em peso foi adicionado à solução aquosa restante, e a solução formada foi extraída usando-se uma mistura de metil etil cetona e acetona a uma razão de 6:4.

O extrato obtido foi grandemente concentrado, e o concentrado 20 assim obtido foi diluído com água e etanol, de modo que fosse obtida uma solução contendo 50% em peso de água e 50% em peso de etanol a um teor de sólidos de cerca de 10% em peso. A solução foi filtrada, e se adicionou ao filtrado uma solução aquosa de hidróxido acetato de chumbo, que foi novamente filtrado (etapa f)).

150 mL da solução assim obtida (parte de extrato seco: 7,1%;

teor de etanol: cerca de 50%) foram agitados com 2,5 g (correspondendo a 0,17 g/g do produto final) de carbono ativo durante 30 minutos à temperatura ambiente. O filtrado foi aplicado a uma coluna com 4,2 mL (correspondendo a 0,28 mL/g do produto final) de trocador de cátions fortemente ácido (Merck

i). A coluna de trocador de íons foi lavada com 4 x 5 mL de EtOH (50%).

Os eluafos combinados foram extraídos por agitação usando-se x 70 mL de n-hexano. A fase de etanol/água foi concentrada em um eva11 porador rotativo e diiuída com água a 100 g. A solução de extrato assim obtida foi extraída com 1 x 40 mL. 2 x 30 mL e 1 x 20 mL de uma mistura de metila etil cetona:etanol a uma razão de 3:2, em que 15 g de sulfato de amônio foram adicionados para se conseguir uma separação de fase.

A fase orgânica foi agitada durante 1 h à temperatura ambiente, após a adição de 25 g de sulfato de amônio. O sulfato de amônio não dissolvido, assim como a fase aquosa formada foram separados. A solução de extrato foi concentrada em um evaporador rotativo a 50-C e secada a vácuo a 60-C: 14,8 g.

Conforme se pode observar na tabela a seguir, conseguem-se um teor de 4'-O-metii piridoxina de 52 ppm e um teor de biflavona de 31,3 ppm e, portanto, teores significativamente mais elevados e resultados de depleção inferiores em comparação com o Exemplo 2b) de acordo com a presente invenção.

A determinação dos teores de flavonóides, terpeno lactonas e ácidos ginkgólicos relacionados na Tabeia 1 foi realizada de acordo com a DAB.

A determinação quantitativa de 4’-O-metil piridoxina foi realizada por meio de HPLC e detecção de fluorescência após enriquecimento medi20 ante cartuchos Sep Pak Pius C18, seguido por enriquecimento mediante cartuchos Bond Elut LRC-SCX, em que se empregaram uma coluna de HPLC Phenomenex Prodigy 5 μ ODS-3 e um gradiente de ácido trifluoroacético (pH 2):metanol = 9:1 (v/v) -> metanol.

A determinação dos teores de biflavonas relacionadas na Tabela

1 foi realizada por meio de HPLC e detecção de UV a 340 nm mediante uma coluna Waters Nova Pak C18 usando-se um gradiente de água:acetonitrila de 9:1 (v/v) + 0,3% em volume de ácido fosfórico (85%) -> acetonitrila + 0,3% em volume de ácido fosfórico.

Em cada caso, a calibração foi realizada usando-se substâncias de referência tendo um grau de pureza elevado e definido.

Tabela 1: Composição de extratos de acordo com os exemplos dados acima

Extrato de acordo com	Exemplo 1	Exemplo Comparativo 1	Exemplo 2a)	Exemplo 2b)	Exemplo Comparativo 2	Exemplo Comparativo 3
Flavonoides [%]	24,86	24,51	27,17	25,32	25,89	22,78
Ginkgolidas A, B, C [%]	3,28	2,94	2,97	3,04	2,97	3,40
Bilobalida [%]	3,17	3,03	3,18	3,14	3,07	3,07
Terpeno lactonas [%]	6,45	5,97	6,15	6,18	6,04	6,47
Ácido ginkgólicos [ppm]	< 5	< 5	<5	<5	<5	<5
4'-O-metil piridoxina [ppm]	Λ 4	ΊΠ/1 £ 1 V/T,U	164	0,8	89	52
Amentoflavona [ppm]	68,5	78,7	n. d. (< 1)	n. d. (< 1)	81,6	12,6
Bilobetina [PPm]	123,3	120,4	n. d. (< 1)	n. d.(< 1)	136,4	10,4
Ginkgetina [PPm]	86,3	82,1	n. d.(<1)	n. d. (< 1)	86,1	2,7
Isoginkgetina [ppm]	103,3	104,4	n. d. (< 1)	n. d. (< 1)	111,5	4,8
Ciadopitisina [PPm]	44,0	43,0	n.d. (< 1)	n. d. (< 1)	44,0	0,8
Quantidade total de bifIavonas [ppm]	425,4	428,6	n. d. (< 5)	n. d. (< 5)	459,6	31,3

n. d. = não detectável

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para a produção de um extrato de ginkgo biloba apresentando um teor reduzido de 4'-O-metil piridoxina e/ou biflavonas, caracterizado pelo fato de que apresenta as seguintes etapas:

a) extração das folhas de ginkgo biloba usando acetona contendo água, um alcanol apresentando 1 a 3 átomos de carbono contendo água ou metanol anidro;

b) separação do solvente orgânico através da concentração do solvente a um teor de 10% em peso no máximo, em que a água pode ser adicionada durante as etapas de destilação finais;

c) diluição da solução aquosa restante com água até um teor de sólidos de 5 a 25% em peso, resfriamento a uma temperatura abaixo de 25°C e repouso até formar um precipitado;

d) tratamento da solução aquosa restante com sulfato de amônio e, subseqüentemente, extração pelo menos uma vez usando metil etil cetona ou uma mistura de metil etil cetona e acetona;

e) concentração do extrato obtido e diluição com uma mistura de etanol-água para obter uma solução contendo 50% em peso de água e 50% em peso de etanol a um teor de sólidos de 10% em peso;

f) tratamento da solução com um composto de chumbo ou uma poliamida insolúvel;

g) extração da solução filtrada usando um solvente alifático ou cicloalifático apresentando um ponto de ebulição de 60 a 100°C;

h) concentração da solução aquosa-alcoólica restante, seguido do tratamento com sulfato de amônio e extração da solução com metil etil cetona e etanol;

i) concentração da fase orgânica obtida a um teor de sólidos de 50 a 70% em peso;

j) dissolução do concentrado em um alcanol aquoso apresentando 1 a 3 átomos de carbono e, opcionalmente, filtração;

k) filtração através de uma resina adsorvente para reduzir o teor de biflavonas e/ou um trocador de íons ácido para reduzir o teor de 4'-Ometil piridoxina, em que as substâncias a serem removidas são retidas na resina e/ou no trocador de íons ácido; e

I) secagem do concentrado sob pressão reduzida, para obter um extrato seco apresentando um teor de água de menos de 5%.

5
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o alcanol aquoso na etapa j) é etanol aquoso.
3. Método de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o etanol aquoso é etanol apresentando um teor de 40 a 60% em peso.

10
4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a

3, caracterizado pelo fato de que a resina adsorvente na etapa k) é uma resina à base de estirenos/divinilbenzenos opcionalmente substituídos.
5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o trocador de íons ácido na etapa k) é um

15 trocador de íons fortemente ácido.