BRPI0611390A2 - composições de vacina e uso de composições compreendendo vacina anti-lhrh na preparação de um medicamento para tratar incontinência urinária - Google Patents

Abstract

A invenção atual refere-se ao uso de composições compreendendo uma vacina anti-LHRH para o controle ou tratamento de incontinência urinária. A invenção atual se refere ainda a usos de composições compreendendo vacina anti-LHRH na preparação de um medicamento para tratamento ou controle de incontinência urinária em mamíferos, e especialmente, naqueles que foram cirurgicamente capados, como por exemplo, cadelas castradas.

Description

"COMPOSIÇÕES DE VACINA E MÉTODOS PARA 0 TRATAMENTODE INCONTINÊNCIA URINARIA"

Campo da invenção

A invenção atual refere-se ao uso de composiçõescompostas de uma vacina anti-LHRH para o controle ou o tra-tamento de incontinência urinária. A invenção atual refere-se ainda a métodos para o tratamento ou controle de inconti-nência urinária em mamíferos, e especialmente, naqueles queforam cirurgicamente capados, como por exemplo, cadelas cas-tradas.

Antecedentes da invenção

A incontinência urinária é a perda involuntária oua passagem de urina conseqüente para a bexiga, ou disfunçãodo esfíncter uretral. Durante a estocagem normal de urina,quando a bexiga fica cheia, o esfíncter uretral é firmementefechado para evitar a o vazamento. Então, quando a urina de-ve ser descarregada, o esfíncter uretral relaxa e permiteque a urina passe através da uretra. A incontinência uriná-ria, com freqüência, é o resultado da perda de tônus do es-fíncter uretral, que diminui a habilidade de manter-se fe-chado. Em tais casos, ocorre a incontinência urinária de umaforma não controlada sempre que a pressão dentro da bexigaexcede a pressão requerida para fechar a uretra. Este pro-blema, com freqüência, é mais notado quando o mamífero estárelaxado, como durante o sono profundo ou quando a pressãosobre bexiga momentaneamente é aumentada, como quando o ma-mífero tosse ou espirra.

Aqueles familiarizados com a condição, verificarãoque a incontinência urinária prevalece entre mulheres adul-tas. Por causa do estigma social associado com a incontinên-cia urinária, muitos que sofrem do mal nem mesmo relatam oproblema a um profissional de saúde. Como resultado, esteproblema médico é muito pouco diagnosticado e muito poucorelatado.

A incontinência urinária é também muito comum emcachorros. Usualmente, ela ocorre em cadelas, e muito fre-qüentemente nas cadelas castradas. Os cachorros machos sãotendentes também a esta condição, mas menos comumente do quea contraparte feminina. Anteriormente, foi explicado que omecanismo que causa a incontinência em cachorros capados oucastrados é relacionado com concentrações pós-cirúrgicas deestrogênio ou testosterona após a remoção dos ovários outestículos. No caso de cadelas, acredita-se que o hormônioestrogênio seja responsável para produzir o tônus para omúsculo do esfíncter uretral. Após a castração, o hormônioestrogênio é produzido em quantidades significativamente me-nores do que era antes da remoção dos ovários. Embora asglândulas adrenais produzam pequenas quantidades de hormônioestrogênio, acreditava-se que os níveis produzidos são insu-ficientes para produzir o tônus do esfíncter. Em tais casos,pode ocorrer a incontinência, e algum tipo de tratamento éentão requerido para manter o tônus do esfíncter. Da mesmaforma, os cachorros machos podem desenvolver incontinênciaurinária após serem capados, porque os testículos, a fonteprincipal de testosterona, são removidos.

0 tratamento de incontinência urinária, tradicio-nalmente, tem sido direcionado para melhorar a pressão defechamento uretral. A este respeito, tem sido prescritassubstâncias que aumentam a resistência da uretra ou do colodo útero da bexiga. Especialmente, estes medicamentos inclu-em substâncias alfa-adrenérgicas, tais como a efedrina e oua fenilpropanolamina ("PPA"). 0 tratamento com o acima tipi-camente envolve o uso a longo prazo dos medicamentos e mos-trou causar severos efeitos colaterais eletro-fisiológicoscardíacos em seres humanos. Os efeitos colaterais adversospodem incluir, mas não são limitados a, fibrilação ventricu-Iar e arritmias cardíacas. Tais efeitos colaterais cardíacospotencialmente letais levaram a retirada de várias medica-ções para seres humanos do mercado, incluindo PPA, que re-centemente foi proibido pela "U.S. Food and Drug Administra-tion" ("FDA"). As substâncias alfa-adrenérgicas são tambémcontra-indicadas em casos de glaucoma e neuropatia progres-siva.

Como uma terapia alternativa, formas de terapia desubstituição de estrogêno ou oestradiol, como por exemplo,dietilestilbestrol (ou testosterona no caso de cachorros ma-chos) poderão ser usadas, que melhoram a resposta dos recep-tores de catecolamina da uretra. No entanto, a terapia deestrogênio é largamente considerada menos segura do que ouso de substâncias alfa-adrenérgicas porque ela pode levar asupressão da medula do osso em cachorros machos, o que podeser fatal.

Mais recentemente, foi feita a hipótese de que oaumento das concentrações de soro do hormônio estimulante defolículo de gonadotropina ("FSH") e o hormônio Luteinising("LH"), em vez de ter baixos níveis de estrogênio por sipróprios, são a causa da incontinência urinária em mulheresadultas e em cadelas castradas. Reichier, I.M. et al., Theeffect of GnRH Analogs on Urinary incontinence after Ablati-on of the Ovaries in Dogs, Theriogenology, 50: pp, 1207 -1216 (2003); a publicação da solicitação de patente america-na de número US 2005/0043342 (coletivamente, daqui por dian-te, referida como "Reichier et al"). Conforme é informado, aglândula pituitária libera LH e FSH no sistema em resposta aprodução do hormônio de liberação Luteinizing ("LHRH" tambémcomumente referido como o hormônio de liberação de gonado-tropina, ou "GnRH" ou fator de liberação de gonadotropina"GnRF"). 0 LHRH é liberado do hipotálamo na corrente sanguí-nea de uma forma pulsativa, em resposta a uma faixa de fato-res, e o seu controle geralmente é considerado complexo. Asua liberação é influenciada positivamente pela atividadeneuronal do hipotálamo e negativamente controlada pelos bai-xos níveis de estrogênio e outros esteróides e hormôniosgonadais, tais como inhibin A e B. 0 LHRH viaja através dosangue para a pituitária. As células receptoras na glândulapituitária anterior, respondem à elevação de LHRH através daliberação de gonadotropinas, FSH e LH. Os níveis relativosde FSH e LH que variam durante o ciclo, por seu lado, esti-mulam a produção de estrogênio pelos ovários. Nas cadelascastradas, após a remoção dos ovários (i.e., a fonte princi-pal de estrogênio), o estrogênio é mensurável somente emconcentrações de soro muito baixas. Outros hormônios que u-sualmente se formam nas gônadas, tais como os inhibins quesão secretados no ovário pelas células granulosas, inibemseletivamente a secreção de FSH da pituitária. Em conseqüên-cia, como não existe mais um mecanismo de resposta, o FSH eo LH são secretados sem obstrução, resultando em concentra-ções aumentadas das duas gonadotropinas. Reichier et al. ar-gumenta que tanto em mulheres após a menopausa como nas ca-delas castradas que sofrem de incontinência urinária, os ní-veis de FSH e de LH são elevados acima dos níveis normais.Assim sendo, Reicher et al propuseram o uso de análogos deLHRH, como agonistas, antagonistas, ou anticorpos em medica-mentos para o controle ou o tratamento de incontinência uri-nária.

Existem, no entanto, desvantagens distintas asso-ciadas com esta abordagem. Especialmente, tipicamente doseselevadas de antagonistas ou agonistas de LHRH são requeridospara se conseguir os efeitos anti-gonadotrópicos desejados.Além disso, embora os efeitos da utilização de tais análogossejam imediatos, eles são de curta duração e portanto, re-querem uma administração freqüente. Além disso, em algunscasos, grandes quantidades destes análogos poderão provocarefeitos colaterais adversos ou indesejáveis. Eles também sãomuito dispendiosos porque o seu uso, e portanto a sua dispo-nibilidade, usualmente é limitada ao tratamento de tumoresdependentes de hormônios. Da mesma forma, os anticorpos deLHRH, além de serem muito dispendiosos, tem a desvantagem deter meias vidas bastante curtas, o que resultam em períodoscurtos do tratamento e o requisito potencial de doses múlti-pias. Assim sendo, a administração necessária freqüente econtinua de anticorpos de LHRH utilizando esta abordagem se-ria tanto dispendiosa como inconveniente para os donos decachorros. Assim sendo, os análogos de LHRH não são de usoprático para aplicações veterinárias como tal.

Assim sendo, apesar dos relatos de alguns trata-mentos de incontinência urinária que são disponíveis atual-mente, com freqüência, respostas completas a estes tratamen-tos não são observadas, apresentam sérios efeitos colate-rais, não apresentam um efeito de longo prazo, ou são muitodispendiosos ou inconvenientes para manutenção. O desenvol-vimento de novos regimes terapêuticos, especialmente aquelescapazes de controle e tratamento de incontinência urinária alongo prazo de uma forma efetiva em custo, ao mesmo temporeduzindo os efeitos colaterais potencialmente letais dasterapêuticas atuais (tais como arritmias cardíacas ou su-pressão da medula do osso) permanecem sendo necessários. Ainvenção atual atende a estas necessidades.

Resumo da invenção

Uma alternativa e/ou uma abordagem adicional paraa terapia de incontinência urinária anteriormente não reco-nhecida é ser direcionada para o sistema imunológico atravésdo uso de composições de vacinas. Um benefício potencial daimuno-terapia ativa é fornecer uma eficácia melhorada atra-vés da melhoria da resposta de imunização do próprio indi-víduo ao controle efetivo e de longa duração da produção eliberação irrestrita de gonadotropinas, FSH e LH.

Assim sendo, a invenção atual refere-se a vacinasanti-LHRH e ao uso da mesma para o tratamento ou controle deincontinência urinária em mamíferos. Especialmente, a inven-ção atual apresenta um método para o tratamento de inconti-nência urinária em um mamífero necessitando de tal tratamen-to, onde o método é composto da administração ao mamífero deuma quantidade terapeuticamente efetiva de uma vacina anti-LHRH. Em um aspecto da invenção, o mamífero necessitando dotratamento para incontinência urinária é do sexo feminino;de preferência, do sexo feminino, tendo concentrações eleva-das de soro do hormônio luteinizing ou do hormônio de esti-mulação de folículo. Em outro aspecto, o mamífero necessi-tando do tratamento para incontinência urinária é uma cade-la. Em uma realização preferida, o mamífero é aquele que foicirurgicamente capado, como por exemplo, uma cadela castrada.

Em um aspecto da invenção atual, a vacina anti-LHRH é composta de um conjugado imunogênico entre um veículoe LHRH. De preferência, o veículo é composto de uma proteínaescolhida das grande faixas de proteínas de veículo conheci-das, incluindo mas não limitadas a toxoides bacterianos.Mais de preferência, o veículo é composto de toxoide de dif-teria. Em outro aspecto, o veículo poderá ser um peptídeosintético composto de um epitopo auxiliar de célula T. Emoutro aspecto, uma forma efetiva do peptídeo LHRH é unida aoveículo, através de conjugação, ou durante a síntese de umpeptídeo contíguo ao LHRH-auxiliar-T. Em outro aspecto dainvenção, a vacina anti-LHRH é ainda composta de um auxili-ar. De preferência, o auxiliar é composto de um polissacarí-deo iônico; mais de preferência, dietil aminoetil dextrano("DEAE dextrano"). Em uma realização especialmente preferi-da, o auxiliar é um dextrano DEAE em combinação com um com-plexo imuno- estimulante que é composto de uma saponina ecolesterol.

Ainda em outro aspecto, a invenção se refere a ummétodo para o tratamento ou controle de incontinência uriná-ria em um mamífero, composta da administração ao mamífero deuma composição que é composta de uma quantidade terapeutica-mente efetiva de um conjugado imunogênico entre um veículo eLHRH. Para uma vacina baseada em um conjugado de peptídeoLHRH-proteína, a quantidade efetiva está na faixa de cercade 100 a cerca de 300 ug, e para a vacina baseada em peptí-deo LHRH-auxiliar-T está na faixa de cerca de 20 a cerca de200 ng.

Descrição detalhada da invenção

A invenção refere-se a composições e vacinas imu-nogênicas que são adequadas para provocarem uma resposta i-munológica contra o hormônio de liberação de hormônio Lutei- nizing ("LHRH", o hormônio de liberação de gonadotropina, ou"GnRH"). A invenção se refere ainda ao uso de tal vacina an-ti-LHRH ou de composição psico-quimicamente estável em ummétodo de imunização de um mamífero contra LHRH para contro-lar ou tratar a incontinência urinária.

O termo "vacina anti-LHRH" inclui qualquer vacina,composição, ou preparação farmacêutica que seja capaz deprovocar uma resposta imune ao LHRH em um hospedeiro. Maisespecificamente, as vacinas anti-LHRH da invenção atual sãocompostas, pelo menos, de um antigeno ou imunogene de LHRHem um veículo farmaceuticamente aceitável e útil para a in-dução de uma resposta imune do referido hospedeiro. Parafins de exemplo somente, as vacinas anti-LHRH que podem serusadas em conexão com a invenção atual, e os métodos de pro-dução das mesmas, incluem, mas não são limitados, àquelasque são descritas na solicitação internacional de número PCT/AU 99/01167, publicada em 21 de janeiro de 1999 como WO99/02180, solicitação internacional número PCT /AU 98/00532,publicada em 20 de julho de 2000 como WO 99/41.720, e a pa-tente americana de número 6.685.947, que são incorporadasaqui como referência.

O termo "LHRH" deve ser lido como incluindo refe-rência a todas as formas de LHRH e derivados da mesma, in-cluindo, mas não limitado a, todos os peptídeos tendo imuno-genicidade a LHRH. O termo "derivados" inclui fragmentos,partes, porções, equivalentes químicos, mutantes, homólogose análogos de fontes naturais, sintéticas ou recombinantes,incluindo proteínas de fusão. 0 LHRH pode ser obtido dequalquer fonte adequada e os métodos para a produção, isola-mento, e purificação do LHRH nativo e sintético são bem co-nhecidos na arte. Em uma realização preferida, o LHRH é com-posto de um fragmento de terminal C de LHRH com pelo menoscinco aminoácidos.

Como o LHRH, ele próprio, é muito pequeno para serimunogênico, o LHRH usado no contexto da invenção atual deveser colocado em uma forma imunogênica. É bem conhecido poraqueles com conhecimento normal na arte que existem métodosdiferentes de produção de uma forma imunogênica de uma subs-tância que é, ela própria, não imunogênica. Um método ade-quado é unir o LHRH a um veiculo imunogênico. Assim sendo,no contexto da invenção atual, o LHRH pode ser administradoapós a conjugação com um veiculo imunogênico em um mamíferoe um antígeno para induzir a formação de anticorpos hospe-deiros do LHRH. 0 veículo funciona para estimular as célulasauxiliares T que são requeridas para uma resposta efetiva deanticorpos. Assim sendo, o veículo poderá ser composto depequenos peptídeos com pelo menos nove aminoácidos de com-primento que formam um epitopo auxiliar de célula T. taisepitopos de auxiliar T poderão ser derivados de vírus Dis-temper Canine (CDV), que são especialmente adequados para autilização em cachorros, porque a maioria dos cachorros jásão vacinados contra CPV. Os anticorpos induzidos por taisvacinas posteriormente irão agir contra o próprio LHRH docorpo, dessa forma produzindo um efeito anti-gonadotrópico alongo prazo. Em uma realização preferida, o LHRH é adminis-trado através de vacina após a conjugação com um veículo i-munogênico em um mamífero para estimular o sistema imunoló-gico para produzir anticorpos anti-LHRH que reajam com oLHRH para reduzirem efetivamente a sua concentração no cor-po. Os efeitos causados pela presença de LHRH, incluindoconcentrações elevadas de soro de FSH e LH, que acredita-seque provocam a incontinência urinária, são assim reduzidosou eliminados.

Os veículos imunogênicos usados na preparação dosconjugados LHRH descritos acima, incluem quaisquer substân-cias que sejam capazes de aumentarem a imunogenicidade deLHRH. Os veículos imunogênicos usados nos conjugados da in-venção atual podem ser naturais ou sintéticos. Em um aspec-to, o veículo imunogênico é uma proteína. Qualquer uma deuma variedade de proteínas de veículo imunogênico que sãobem conhecidas por aqueles com conhecimento normal na artepoderá ser utilizada na vacina de conjugado da invenção atu-al. As classes adequadas de proteínas incluem pílulas, pro-teínas de membrana externa e toxinas excretadas de bactériaspatogênicas, formas não tóxicas ou " toxoides" de tais toxi-nas excretadas, proteínas não tóxicas anti-genicamente seme-lhantes a toxinas bacterianas e outras proteínas. Exemplosnão limitantes de toxoides bacterianos considerados para usona invenção atual incluem toxina/toxoide de tétano, toxi-na/toxoide de difteria, toxina A P aeruginosa detoxifiçada,toxina/toxoide de cólera, toxina/toxoide partusais e toxi-nas/toxoide de clostridium perfringens. As formas toxoidesdestas toxinas bacterianas são preferidas. Mais de preferên-cia, o veículo imunogênico usado nos conjugados LHRH da in-venção atual são toxoides de difteria. A referência a toxoi-de de difteria deve ser entendido como incluindo todas asformas de toxoide de difteria e derivados das mesmas. O ter-mo "derivados" tem o mesmo significado definido aqui anteri-ormente. Os derivados poderão incluir, por exemplo, molécu-las compostas do toxoide T de difteria e epitopos de célulasT ou epitopos de células T em isolamento.

Em outro aspecto da invenção atual, o veículo po-derá ser um peptídeo sintético composto pelo menos de um e-pitopo auxiliar de célula T. Os epitopos poderão ser isola-dos ou serem ligados em conjunto para formar um só polipep-tídeo. Ficará entendido que onde os epitopos são ligados emconjunto em um só polipeptideo, os epitopos poderão ser con-tiguos ou separados através de aminoácidos adicionais quenão são, eles próprios, parte dos epitopos de célula auxili-ar T. Em uma realização, o epitopo auxiliar de célula T estácontido dentro de uma seqüência de peptídeos que são esco-lhidos entre aqueles descritos na patente americana de núme-ro 6.685.947, que é incorporada aqui como referência. Em umarealização preferida, a vacina de peptideos sintéticos é a-inda composta pelo menos de um epitopo de células B e/ou pe-lo menos um epitopo CTL. Em uma realização mais preferida,a vacina de peptideo sintético é composta de cerca de 3 acerca de 10 epitopos auxiliares de célula T, cada um delesem seqüência linear com 4-10 formas de LHRH, com o teortotal de peptideos sendo em torno de 120 μg de peptideo/doseem combinação com cerca de 80 μg de um auxiliar. De prefe-rência, o auxiliar é composto de um complexo imuno-estimulante.

Métodos adequados de união de LHRH a um veículoimunogênico são bem conhecidos por aqueles com conhecimentonormal na arte. Sem pretendemos limitar a invenção a qual-quer método, o LHRH poderá, por exemplo, ser ligado a um ve-iculo da forma descrita em Ladd et ai., American J. Repro-ductive immunology 22:55 - 63 (1990) ou em Bonneau et al.,J. Animal Science 72:14 - 20 (1994). 0 conjugado resultantepode ser processado para remover qualquer peptideo remanes-cente não ligado ou outros subprodutos de conjugação. Talprocessamento poderá ser obtido através de diálise conven-cional ou através de ultrafiltração.

As vacinas da invenção atual poderão ser combina-das ou poderão ainda incluir um auxiliar. Os auxiliares sãoincluídos ou adicionados nas vacinas e outras formulaçõesimunogênicas para aumentar e em alguns casos direcionar aresposta imunológica. Aqueles com conhecimento normal na ar-te verificarão que qualquer auxiliar standard bem conhecidopoderá ser utilizado na invenção atual. Auxiliares adequadospara uso nas vacinas da invenção atual incluem, mas não sãolimitados a, sais insolúveis de alumínio, especialmente asformas de hidróxido e fosfato (coletivamente, "alumem"), mu-rabutide, auxiliar incompleto de Freund, auxiliar completode Freund, polissacarídeos iônicos, tais como um grupo die-til-aminoetil ("DEAE"), saponinos, complexos imunoestimulan-tes, e combinações dos mesmos. Em uma realização preferida,são utilizados auxiliares que não provocam ou provocam so-mente reações colaterais suaves. Outros auxiliares adequadosque podem ser usados com relação a invenção atual incluem,mas não são limitados, àqueles que são descritos na solici-tação internacional de número PCT/AU99/01167, publicada em21 de janeiro de 1999 como WO 99/02180, e a solicitação in-ternacional de número PCT/AU 98/00532, publicada em 20 dejulho de 2000, como WO 99/41.720, que são incorporadas aquicomo referência.

Em uma realização preferida, o auxiliar é um dex-trano DEAE. Em uma realização mais preferida, o auxiliar éum dextrano DEAE em combinação com um complexo imunoestimu-lante composto de uma saponina e colesterol.

Sem limitarmos a invenção atual a qualquer teoriaou modo de ação, a administração de uma quantidade efetivade uma vacina anti-LHRH da invenção atual induz uma respostaimunológica ao LHRH, e portanto evita a liberação dos hormô-nios LH e FSH da glândula pituitária anterior. De preferên-cia, a quantidade da referida vacina anti-LHRH é efetiva pa-ra melhorar os efeitos colaterais associados com a ovarecto-mia ou sintomas associados com aenescence reprodutivo, espe-cialmente, incontinência urinária, através da redução daconcentração de soro do FSH e/ou LH circulante em um mamífe-ro fêmea, a qual a vacina foi administrada. Deve ser enten-dido que a eficácia é uma medida funcional e não é definidapor referência a um anticorpo do anti -LHRH sozinho porque apresença do anticorpo circulante sozinho não necessariamenteé indicativa da capacidade do referido anticorpo circulantecontrolar a incontinência urinária. Assim sendo, assim comocom todas as composições imunogênicas para provocarem anti-corpos, as quantidades imunologicamente efetivas de vacinasda invenção atual devem ser determinadas empiricamente. Osfatores a serem considerados incluem a escolha de um auxili-ar, a molécula imunogênica na qual é ligado o LHRH, a rotade administração e a quantidade de doses a serem administra-das. Tais fatores são conhecidos na arte de vacina, e umapessoa com conhecimento normal na arte seria capaz de fazertais determinações sem experiências indevidas.

Assim sendo, através dos métodos da invenção atu-al, os efeitos colaterais ds ovaroctomia ou sintomas associ-ados com a senescence reprodutiva, especialmente da inconti-nência urinária, em mamíferos femininos, tais como cadelascastradas, podem ser tratados ou controlados. Em uma reali-zação preferida, a invenção atual refere-se a um método parao tratamento ou controle da incontinência urinária em ummamífero, o referido método sendo composto da administraçãoao referido mamífero de uma quantidade efetiva de uma vacinaanti-LHRH. De preferência, a vacina anti-LHRH está na formade um conjugado de veículo imunogênico LHRH. Em uma realiza-ção mais preferida, o conjugado é composto de um conjugadotoxoide de difteria-LHRH. Em uma realização alternativa, avacina anti-LHRH está na forma de um peptídeo sintético queé composto de um epitopo auxiliar de célula T. De preferên-cia, a vacina de peptídeo sintético é composta de cerca de 3a cerca de 10 epitopos auxiliares de célula T, cada um delesem seqüência linear com 4-10 formas de LHRH, com o teortotal de peptídeos sendo em torno de 120 μg de peptí-dios/dose em combinação com cerca de 80 μg de um complexoimunoestimulante. O mamífero preferido a ser tratado de a-cordo com a vacina da invenção atual é do sexo feminino;mais de preferência, uma fêmea tendo níveis elevados de so-ro de PSH ou LH ou ambos. Em uma realização mais preferida,o mamífero é uma cadela, e especialmente, uma cadela que foicirurgicamente capada ou castrada. Em outra realização, ainvenção apresenta um método para evitar o início da incon-tinência urinária em um cachorro castrado, através da admi-nistração ao cachorro de uma quantidade efetiva de uma vaci-na anti -LHRH após as castração.

As vacinas da invenção atual poderão ser adminis-tradas por qualquer método adequado conhecido na arte, in-cluindo, mas não limitados a, administração oral ou por in-jeção. As formas farmacêuticas adequadas para uso injetávelincluem soluções aquosas estéreis (solúveis em água) ou dis-persões de pós estéreis para uma preparação extemporânea desoluções ou dispersões injetáveis estéreis. Elas poderão serestáveis, tanto fisicamente como quimicamente, nas condiçõesde produção e estocagem e devem ser conservadas contra a a-ção de contaminação de microorganismos, tais como bactériase fungos. 0 veículo pode ser um solvente ou um meio de dis-persão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por e-xemplo, glicerol, propileno glicol e propileno glicol liqui-do, e semelhantes), misturas adequadas dos mesmos, e óleosvegetais. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exem-plo, através do uso de um revestimento como lecitina, atra-vés da manutenção do tamanho requerido de partícula, no casode dispersão, e através do uso de tensoativos. A prevençãoda ação de microorganismos pode ser avaliada por vários a-gentes anti-bacterianos e anti- fungos, como por exemplo,parabéns, cloro butanol, fenol, ácido sórbico, timerosal esemelhantes; em vários casos, será preferível incluir-se a-gentes isotônicos, como por exemplo, açúcares ou cloreto desódio. A absorção prolongada ou a liberação retardada dascomposições injetáveis pode ser avaliada pelo uso das compo-sições de agentes de retardo de absorção, como por exemplo,mono-estearato de alumínio e gelatina.As soluções injetáveis estéreis são preparadas in-corporando- se os compostos ativos na quantidade requeridado solvente apropriado com vários dos outros ingredientesenumerados acima, conforme requerido, seguido pela esterili-zação por filtração. Geralmente, as dispersões são prepara-das incorporando-se os vários ingredientes ativos esterili-zados em um veiculo estéril que contém o meio de dispersãobásico e os outros ingredientes requeridos daqueles enumera-dos acima. No caso de pós estéreis para a preparação de so-luções injetáveis estéreis, os métodos preferidos de prepa-ração são secagem a vácuo, a técnica de secagem por congela-mento e a técnica de secagem por aspersão, que produz um póde ingredientes ativos, mais qualquer ingrediente adicionala partir de solução previamente filtrada e estéril do mesmo.

Quando os ingredientes ativos são adequadamenteprotegidos eles poderão ser administrados oralmente, por e-xemplo, com um diluente inerte ou com um veiculo comestívelassimilável, ou eles poderão estar enclausurados em uma cáp-sula de gelatina de casca dura ou macia, ou comprimidos emtabletes, ou incorporados diretamente no alimento da dieta.

Para a administração oral, o composto ativo poderá ser in-corporado com excipientes e usado na forma de tabletes dige-ríveis, tabletes bucais, pastilhas, cápsulas, elixires, sus-pensões, xaropes, bolachas, e semelhantes. Tais composiçõesde preparações, devem conter pelo menos 1% em peso do com-posto ativo. A percentagem das composições e preparações po-derá, é claro, ser variada, e poderá convenientemente serentre cerca de 5 a cerca de 80% do peso da unidade. A quan-tidade de composto ativo em tais composições úteis é tal queserá obtida uma dosagem adequada. As composições ou prepara-ções preferidas de acordo com a invenção atual são prepara-das de forma que uma forma de unidade de dosagem oral conte-nha entre cerca de 0,5 μge 2000 pg de composto ativo.

Os tabletes, pastilhas, pílulas, cápsulas e seme-lhantes, poderão também conter os componentes conforme lis-tado aqui posteriormente: um aglutinante como uma goma, acá-cia, amido ou gelatina de milho; excipientes, tais comofosfato di-cálcico; um agente desintegrante como amido demilho, amido de batata, ácido algínico e semelhantes; e umlubrificante, como estearato de magnésio. Quando a forma daunidade de dosagem é uma cápsula, ela poderá conter, alémdos materiais do tipo acima, um veículo líquido. Vários ou-tros materiais poderão estar presentes como revestimentos oupara modificarem de outra forma forma física da unidade dedosagem. Um xarope ou elixir poderá conter o composto ativo,metil e propil parabéns como conservante, e um corante. Éclaro, qualquer material utilizado na preparação de qualquerforma de unidade de dosagem deve ser veterinariamente puro esubstancialmente não tóxico nas quantidades utilizadas. Alémdisso, o composto ativo poderá ser incorporado nas prepara-ções e formulações de liberação prolongada.

Veículos farmaceuticamente aceitáveis e/ou diluen-tes incluem qualquer e todos os solventes, meios de disper-são, revestimentos, agentes anti-bacterianos e anti-fungos,agentes isotônicos e de retardo de absorção e semelhantes. 0uso de tais meios e agentes para substâncias veterinaria-mente ativas é bem conhecido na arte. Na medida em que qual-quer meio ou agente convencional é incompatível com o ingre-diente ativo, é considerado o uso do mesmo nas composiçõesterapêuticas. Os ingredientes ativos suplementares tambémpodem ser incorporados nas composições.

É especialmente vantajoso formular-se composiçõesparenterais na forma de unidades de dosagem para a adminis-tração fácil e para a uniformidade da dosagem. Para a admi-nistração em criação de animais, é especialmente vantajosoutilizar-se um recipiente de doses múltiplas ligado a umapistola de vacinação de repetição. A forma unitária de dosa-gem, conforme usado aqui, refere-se a unidades fisicamentedistintas adequadas como dosagens unitárias para os indiví-duos a serem tratados; cada unidade contendo uma quantidadepredeterminada de material ativo é calculada para produzir oefeito terapêutico desejado em associação com o veículo far-macêutico requerido. A especificação para as formas novas deunidades de dosagem da invenção é ditada e é dependente di-retamente (a) das características únicas do material ativo edo efeito terapêutico específico a ser obtido, e (b) das li-mitações inerentes na arte de composição de tal material a-tivo para o tratamento de doença em indivíduos vivos tendouma condição de doença na qual a saúde do corpo é prejudica-da, conforme apresentado aqui em detalhes.

0 ingrediente ativo principal é composto, para aadministração conveniente e efetiva, de quantidades efetivascom um veículo adequado farmaceuticamente aceitável na formade unidade de dosagem conforme apresentado aqui anteriormen-te. Uma forma de dosagem unitária pode, por exemplo, contero composto ativo principal em quantidades variando de cercade 0,5 μς até 2000 μg. Expresso em proporções, o compostoativo geralmente está presente em torno de 0,5 μg a cerca de2000 μg/ml de veiculo. As quantidades relativas do ingredi-ente ativo, do veiculo farmaceuticamente aceitável, e quais-quer ingredientes adicionais em uma composição farmacêuticada invenção variará, dependendo da identidade, tamanho, econdição do indivíduo tratado e dependendo ainda da rota pe-la qual a composição deve ser administrada.

A invenção é adicionalmente descrita em detalhespor referência aos seguintes exemplos de experiências. Estesexemplos são apresentados somente para fins de ilustração, enão se destinam a ser limitantes, a não ser que seja especi-ficado de outra forma. Assim sendo, a invenção, de forma al-guma, deve ser considerada como sendo limitada aos exemplosseguintes, mas ao contrário, deve ser considerada como en-globando qualquer e todas as variações que ficarão evidentescomo resultado dos ensinamentos apresentados aqui.

Embora a invenção tenha sido apresentada com refe-rência a realizações específicas, fica aparente que outrasrealizações e variações desta invenção poderão ser previstaspor outros adestrados na arte, sem se afastarem do espíritoe do escopo verdadeiro da invenção. As reivindicações anexasse destinam a ser consideradas como incluindo todas essasrealizações e variações equivalentes.

Exemplo 1

Escopo do estudo clínicoCadelas que foram capadas ou castradas cirurgica-mente, com freqüência, sofrem de incontinência urinária. Aincidência da doença tem sido relatada como sendo tão eleva-da quanto 20%. Os tratamentos atuais são baseados na admi-nistração diária de fármacos, tais como oestrogenos sintéti-cos, durante períodos prolongados, que são tanto dispendio-sos como inconvenientes. 0 uso de uma vacina de ação prolon-gada seria uma melhoria significativa no tratamento destacondição comum de cadelas castradas.

Considerações

Uma formulação para o tratamento de incontinênciaurinária em cachorros inclui qualquer vacina efetivas anti-LHRK. Várias de tais de vacinas foram descritas na arte an-terior, apesar da maioria destas falharem em produzir umaeficácia e segurança suficientemente elevadas para serem co-mercialmente viáveis. Tem havidos muito pouco exemplos devacinas efetivas descritas na literatura para cachorros. E-xistem vários exemplos de vacinas LHRH atualmente disponí-veis comercialmente, especialmente na Austrália e na NovaZelândia. Estas incluem IMPROVAC® para o controle de manchasem porcos machos, EQUITY® para o controle de comportamentorelacionado com oestrus em éguas e potros, ambos os produtosobteníveis comercialmente da Pfizer Animal Health. Estasformulações são para aplicação em grandes animais, e assimsendo, é esperado que sejam inseguras em animais menores,tais como cachorros, e seria esperado requerer-se uma modi-ficação para o uso seguro e efetivo em cães e outros animaisdomésticos. Uma outra formulação foi registrada condicional-mente na USDA nos USA para tratamento de hiperplasia prostá-tica benigna em cachorros adultos machos intactos. Esta va-cina demonstrou ser tanto segura como efetiva em cachorrosadultos machos e é considerada para uso na invenção atual,para controlar a incontinência urinária canina (CUI), comose segue:

Foi feito um estudo como um estudo duplo cego, comdois grupos recebendo a vacina CUI ou placebo, o placeboconsistindo somente de auxiliares. Nem os donos, nem os ve-terinários clínicos, tinham conhecimento do tratamento queestava sendo administrado.

Animais:

Cadelas (até um número de 35) que são mantidas co-mo animais de estimação domésticos por membros da comunida-de, são escolhidas de um registro clínico sem limitação, co-mo por exemplo, o registro na universidade / clínica vete-rinária de Melbourne. Somente as cadelas castradas com maisde dois anos de idade, tendo uma condição clínica a longoprazo de incontinência urinária, e tendo sido tratadas ante-riormente para esta condição (com outros tratamentos conhe-cidos, como estilbestrol, uma forma sintética de estrogê-nio) , ou com um estimulador alfa-adrenérgico como PPA, sãoescolhidas para o estudo.

Vacinas

Em uma realização, a vacina é composta daquela quefoi licenciada provisoriamente pela USDA para Pfizer AnimalHealth para o tratamento de hiperplasia prostática benigna,que contém 200 μg/dose de conjugado de 2 - 10 formas de pep-tideo LHRH conjugado com toxoide de difteria como veículo,com um sistema auxiliar combinado de 10 mg de dextrano DEAEe 80 mg de um complexo imuno-estimulante, conforme descritona solicitação internacional de número PCT/AU 99/01167, pu-blicada em 21 de janeiro de 1999 como WO 99/02180. Em outrarealização, a vacina é composta de uma vacina de peptídeosintético composto de cerca de 3 a cerca de 10 epitopos au-xiliares de célula T, cada um deles em seqüência linear com4-10 formas de LHRH, o teor total de peptídeos sendo de120 μg de peptídeo/dose em combinação com 80 μg de complexoimuno-estimulante.

A vacina é administrada para cada cachorro no es-tudo em pelo menos duas ocasiões, com um intervalo de 28 dias.

Os seguintes parâmetros são medidos diretamenteapós cada vacinação: temperatura do corpo, conduta, incluin-do a letargia, dor no local da injeção, e o inchaço no localda injeção. Além disso, foram tomadas amostras do soro paramedir os níveis de LH e de respostas do anticorpo ao LHRH. Aavaliação da incontinência urinária em cada cadela é feitapelos donos individuais, de acordo com um sistema de avalia-ção comum, começando duas semanas antes da primeira vacina-ção. Desta forma, cada cachorro individual tem o seu própriocontrole em relação a alterações após o tratamento.

Claims (33)

1. Método para o tratamento de incontinência uri-nária em um mamífero necessitando de tal tratamento,CARACTERIZADO pelo fato do referido método ser composto daadministração ao referido animal de uma quantidade terapeu-ticamente efetiva de uma vacina anti-LHRH.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato do referido mamífero ser uma fêmea.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato do referido mamífero ser uma fêmeatendo concentrações elevadas de soro e de uma gonadotropina.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3,CARACTERIZADO pelo fato da referida gonadotropina ser esco-lhida do grupo consistindo de hormônio de luteinizing e ohormônio estimulante de folículos.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato do referido mamífero ser castradocirurgicamente.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5,CARACTERIZADO pelo fato do referido mamífero ser uma cadelacastrada.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato da vacina anti-LHRH ser composta deum conjugado imunogênico entre um veículo e LHRH.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7,CARACTERIZADO pelo fato é do referido veículo ser compostode uma proteína.

9. Método, de acordo com a reivindicação 8,CARACTERIZADO pelo fato da referida proteína ser composta deum toxoide bacteriano.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9,CARACTERIZADO pelo fato do toxoide bacteriano ser um toxoidede difteria.

11. Método, de acordo com a reivindicação 7,CARACTERIZADO pelo fato do referido veículo ser composto deum peptídeo sintético composto pelo menos de um epitopo au-xiliar de célula T.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato da referida vacina incluir ainda umauxiliar.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12,CARACTERIZADO pelo fato do referido auxiliar ser composto deum dextrano DEAE.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13,CARACTERIZADO pelo fato do referido auxiliar ser ainda com-posto de um complexo imuno-estimulante, onde o referido com-plexo imunoestimulante é composto de uma saponina e um com-ponente de colesterol.

15. Método, de acordo com a reivindicação 7,CARACTERIZADO pelo fato do conjugado imunogênico ser compos-to de um conjugado toxoide de difteria-LHRH.

16. Método, para o tratamento ou controle de in-continência urinária em um mamífero, CARACTERIZADO pelo fatode ser composto de: administração ao referido mamífero, deuma composição que é composta de uma quantidade terapeutica-mente efetiva de um conjugado imunogênico entre um veículo eLHRH.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16,CARACTERIZADO pelo fato do referido veiculo ser composto deuma proteína.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17,CARACTERIZADO pelo fato do referido veículo ser composto deum toxoide de difteria.

19. Método, de acordo com a reivindicação 16,CARACTERIZADO pelo fato do referido veículo ser composto deum epitopo de célula T.

20. Método, de acordo com a reivindicação 16,CARACTERIZADO pelo fato da referida composição incluir aindaum auxiliar.

21. Vacina para o tratamento ou para controle deincontinência urinária, em um mamífero fêmea, a referida va-cina sendo CARACTERIZADA pelo fato de ser composta de umaquantidade terapeuticamente efetiva de LHRH.

22. Vacina, de acordo com a reivindicação 21,CARACTERIZADA pelo fato de ser ainda composta de um auxiliar.

23. Vacina, de acordo com a reivindicação 21,CARACTERIZADA pelo fato do LHRH ser conjugado com um veículoimunogênico.

24. Vacina, de acordo com a reivindicação 23,CARACTERIZADA pelo fato do referido veículo imunogênico sercomposto dé uma proteína.

25. Vacina, de acordo com a reivindicação 23,CARACTERIZADA pelo fato do referido veículo imunogênico sercomposto de um epitopo auxiliar de célula T.

26. Vacina, de acordo com a reivindicação 24,CARACTERIZADA pelo fato da referida proteína ser composta detoxoide de difteria.

27. Vacina, de acordo com a reivindicação 21,CARACTERIZADA pelo fato do referido mamífero fêmea ser com-posto de um cachorro cirurgicamente capado.

28. Método de aumento da resposta imunológica deum mamífero sofrendo de incontinência urinária devido a pro-dução e liberação irrestrita de gonadotropina, o referidométodo, sendo CARACTERIZADO pelo fato de ser composto da ad-ministração ao referido mamífero de uma quantidade terapeu-ticamente efetiva de LHRH.

29. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato do referido LHRH ser administrado naforma de um antígeno.

30. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato do referido LHRH ser administrado naforma de uma vacina.

31. Método, para o tratamento de incontinência u-rinária em um cachorro capado ou castrado cirurgicamente,CARACTERIZADO pelo fato de ser composto da administração aocachorro de uma quantidade terapeuticamente efetiva de umavacina anti-LHRH.

32. Método, de acordo com a reivindicação 31,CARACTERIZADO pelo fato do cachorro ser uma fêmea.

33. Método de prevenção do início de incontinênciaurinária em uma cadela castrada, o referido método sendoCARACTERIZADO pelo fato de ser composto da administração àreferida cadela castrada de uma quantidade efetiva de umavacina anti-LHRH após a castração.