BRPI0611414A2 - proteìna ligante de tweak, composição farmacêutica compreendendo a referida proteìna, método para produzir um anticorpo e uso da referida composição - Google Patents

Abstract

PROTEìNA LIGANTE DE TWEAK, COMPOSIçãO FARMACEUTICA COMPREENDENDO A REFERIDA PROTEìNA, MéTODO PARA PRODUZIR UM ANTICORPO E USO DA REFERIDA COMPOSIçãO. A presente invenção refere-se a anticorpos anti-TWEAK.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "proteínaligante de tweak, composição farmacêutica compreen-dendo a referida proteína, método para produzir umanticorpo e uso da referida composição".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS

Este pedido de patente reivindica prioridade para o pedido depatente n- de série US 60/685.149, depositado em 27 de maio de 2005, cujoteor é aqui incorporado como referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

As citocinas relacionadas ao fator de necrose tumoral (TNF)são uma superfamília de proteínas que têm uma série de funções, incluindoaquelas implicadas na regulação imunológica e na regulação apoptótica.TWEAK (indutor fraco de apoptose semelhante a TNF) é um membro destasuperfamília.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Os anticorpos anti-TWEAK podem ser usados para tratar umasérie de condições e distúrbios, como por exemplo, um distúrbio inflamatório,um distúrbio neuronal ou outro distúrbio aqui descrito. Quando usado paratratar um ser humano, o anticorpo é, de preferência, um anticorpo humano,humanizado ou de outra forma efetivamente humano.

Em um aspecto, a invenção refere-se a uma proteína que incluiuma primeira e uma segunda seqüências do domínio variável da imunoglo-bulina, e que se liga a TWEAK, por exemplo, TWEAK humana. A proteínapode se ligar a TWEAK, por exemplo, com uma afinidade correspondente auma Kd menor do que 10"7 M, por exemplo, 10"8, 10"9, 10"10, 10"11 M ou me-lhor. A proteína é aqui referida também como "anticorpo anti-TWEAK".A primeira e a segunda seqüências do domínio variável da imunoglobulinapodem incluir pelo menos uma parte suficiente de um domínio variável daimunoglobulina para formar um sítio de ligação de antígeno que se liga aTWEAK. Tipicamente, a primeira e a segunda seqüências do domínio variá-vel da imunoglobulina correspondem a seqüências do domínio variável daimunoglobulina da cadeia pesada e leve, respectivamente, por exemplo,uma cadeia pesada e leve emparelhada ou compatível de outra forma.

O anticorpo pode se ligar a um epitopo em TWEAK1 que incluipelo menos um, dois, três ou quatro resíduos de aminoácidos de um epitopoem TWEAK reconhecido por P2D10, a um peptídeo de TWEAK que estáligado por P2D10 (por exemplo, um peptídeo com um comprimento menordo que 25, 20, ou 15 aminoácidos) ou a uma região de TWEAK reconhecidapor P2D10. Por exemplo, o anticorpo se liga especificamente a um epitopo,por exemplo, um epitopo linear ou conformacional de TWEAK, particular-mente TWEAK humano, por exemplo, a região solúvel de TWEAK. O anti-corpo pode competir com P2D10 pela ligação a TWEAK, por exemplo, aTWEAK humano. O anticorpo pode inibir competitivamente a ligação deP2D10 a TWEAK, por exemplo, TWEAK humano. Em uma modalidade, oanticorpo pode se ligar a um epitopo que se sobrepõe àquele de P2D10,que, por exemplo, inclui pelo menos um, dois, três ou quatro aminoácidosem comum com o epitopo de P2D10, ou um epitopo que, quando ligado deforma estérica, impede a interação de TWEAK com P2D10.

Por exemplo, o anticorpo anti-TWEAK pode se ligar a TWEAK emodular, por exemplo, inibir, uma interação (por exemplo, uma ligação) entreTWEAK e um receptor de TWEAK, por exemplo, Fn14 (por exemplo, Fn14humano). O anticorpo pode também reduzir a atividade de sinalização de umreceptor de TWEAK. O anticorpo pode visar TWEAK, seqüestrar TWEAK,e/ou modular a estabilidade in vivo de TWEAK.

Em uma modalidade, o anticorpo se liga especificamente a pelomenos uma parte do sítio de interação em TWEAK, que entra em contatocom Fn14 (por exemplo, Fn14 humano). O anticorpo pode competir comFn14 pela ligação a TWEAK, por exemplo, TWEAK humano. O anticorpopode inibir competitivamente a ligação de Fn14 a TWEAK. O anticorpo podeinteragir com um epitopo em TWEAK, o qual, qundo ligado de forma estéri-ca, impede a interação entre TWEAK e Fn14 (por exemplo, entre TWEAKhumano e Fn14 humano).

Em uma modalidade, o anticorpo pode inibir uma ou mais ativi-dades associadas a TWEAK com uma CI5o de cerca de 50 nM a 5 pM, tipi-camente cerca de 100 a 250 pM ou menos. Por exemplo, o anticorpo podeinibir a capacidade de TWEAK para promover a proliferação ou neovascula-rização de células endoteliais. Em uma modalidade, o anticorpo anti-TWEAKreduz pelo menos uma atividade associada a TWEAK, por exemplo, de talmodo que o anticorpo possa modular uma condição antiinflamatória quandoadministrado a um indivíduo.

Em outras modalidades, o anticorpo pode se associar a TWEAKcom uma cinética na faixa entre 103 e 108 M"Y1, tipicamente 104 a 107 M"1s"

Em ainda outra modalidade, o anticorpo tem uma cinética de dissociaçãona faixa entre 10"2 e 10"6 s"1, tipicamente 10"2 a 10"5 s"1. Em uma modalidade,o anticorpo se liga a TWEAK, por exemplo, TWEAK humano, com uma afini-dade e/ou cinética similar (por exemplo, dentro de um fator de cinco ou dez)ao anticorpo monoclonal P2D10, ou formas modificadas dele, por exemplo,formas quiméricas ou formas humanizadas dele (por exemplo, uma formahumanizada aqui descrita). A afinidade e a cinética de ligação do anticorpoanti-TWEAK podem ser testadas, por exemplo, usando a tecnologia de bios-sensores (BIACORE®).

Em uma modalidade, o anticorpo é um fragmento de ligação aantígeno de um anticorpo de comprimento inteiro, por exemplo, um fragmen-to Fab, F(ab')2, Fv ou Fv de cadeia única. Tipicamente, o anticorpo é umanticorpo de comprimento inteiro. O anticorpo pode ser um anticorpo mono-clonal ou um anticorpo monoespecifico. Por exemplo, o anticorpo está emuma composição que inclui menos do que 20 outras espécies de anticorposanti-TWEAK, por exemplo, em uma composição que não inclui outra espéciede anticorpo anti-TWEAK.

O anticorpo pode ser efetivamente humano. Um anticorpo "efeti-vamente humano" é um anticorpo que inclui um número suficiente de posi-ções de aminoácidos humanos, de tal modo que o anticorpo não provoqueuma resposta imunogênica em um ser humano normal. De preferência, aproteína não provoca uma resposta neutralizadora do anticorpo, por exem-plo, a resposta de anticorpo antimurino humano (HAMA). HAMA pode serproblemático em inúmeras circunstâncias, por exemplo, se os anticorpos sãodesejados para serem administrados repetidamente, por exemplo, no trata-mento de uma condição de doença crônica ou recorrente. Uma respostaHAMA pode tornar a administração repetida do anticorpo potencialmenteineficaz por causa de uma depuração aumentada do anticorpo do soro (vide,por exemplo, Saleh et ai, Câncer Immunol. Immunother. 32:180-190 (1990)),e também por causa de reações alérgicas potenciais (vide, por exemplo, Lo-Buglio et a/., Hybridoma, 5:5117-5123 (1986)).

Por exemplo, o anticorpo pode ser um anticorpo humano, hu-manizado, enxertado com CDR, quimérico, mutado, maturado por afinidade,desimunizado, sintético ou gerado in vitro de outra forma, e combinaçõesdeles. Em uma modalidade, o anticorpo anti-TWEAK é um anticorpo huma-nizado.

As cadeias pesada e leve do anticorpo anti-TWEAK podem sersubstancialmente de comprimento inteiro. A proteína pode incluir pelo menosuma, e de preferência duas cadeias pesadas completas, e pelo menos uma,e de preferência duas cadeias leves completas, ou pode incluir um fragmen-to Iigante de antígeno (por exemplo, um fragment Fab, F(ab')2, Fv ou umfragmento Fv de cadeia única). Em ainda outras modalidades, o anticorpotem uma região constante com cadeia pesada escolhida entre, por exemplo,IgGI, lgG2, lgG3, lgG4, IgM1 IgAI, lgA2, IgD, e IgE; escolhida particularmen-te entre, por exemplo, IgGI, lgG2, lgG3, e lgG4,e mais particularmente,IgGI (por exemplo, IgGI humana). Tipicamente, a região constante com ca-deia pesada é humana ou uma forma modificada de uma região constantehumana. Em outra modalidade, o anticorpo tem uma região constante decadeia leve escolhida entre, por exemplo, kapa ou lambda, particularmente,kapa (por exemplo, kapa humana).

Em uma modalidade, a proteína inclui pelo menos uma, duas, ede preferência, três CDRs da região variável da cadeia leve ou pesada deum anticorpo aqui descrito, por exemplo, P2D10. Neste contexto, CDRs refe-rem-se a CDRs como definidas por alças hipervariáveis de Chothia. Por e-xemplo, a proteína inclui, na seqüência do domínio variável da cadeia pesa-da, pelo menos uma, duas ou três das seguintes seqüências dentro de umaregião CDR:

GFTFSRYAMS (CDR1) (SEQ ID NO: 1),EISSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (SEQ ID NO: 2),VLYYDYDGDRIEVMDY (CDR3) (SEQ ID NO: 3), ou uma CDRque tem uma seqüência de aminoácidos que difere em não mais do que 4, 3,2.5, 2, 1,5, 1, ou 0,5 alterações (por exemplo, substituições, inserções oudeleções) para cada 10 aminoácidos (por exemplo, o número de diferençassendo proporcional ao comprimento da CDR) em relação a uma seqüêncialistada acima, por exemplo, pelo menos uma alteração, mas não mais doque duas, três ou quatro por CDR. A seqüência do domínio variável da ca-deia pesada pode incluir essas seqüências de CDRs, particularmente emCDR3, ou em pelo menos duas CDRs, por exemplo, CDR1 e CDR3, CDR2 eCDR3, ou em todas três CDRs.

A proteína pode incluir, na seqüência do domínio variável da ca-deia pesada, pelo menos uma, duas ou três das seguintes seqüências den-tro de uma região CDR (os aminoácidos entre parênteses representam al-ternativas para a posição específica):

(i) G-(YF)-(NT)-F-(STDN)-(RY)-Y-A-(MIL)-(HS); (SEQ ID NO: 4),

ou

(N) Y-Y-(PV)-D-(TS)-V-(TK)-G; (SEQ ID NO: 5) e

(iii) (VL)-(IL)-(YF)-(YF)-D-(YF)-D; (SEQ ID NO: 6) ou (DE)-(RK)-(ILVM)-(EQD)-(VAL)-M-(DE); (SEQ ID NO: 7).

A proteína pode incluir, na seqüência do domínio variável da ca-deia leve, pelo menos uma, duas ou três das seguintes seqüências dentrode uma região CDR:

RSSQSLVSSKGNTYLH; (CDR1) (SEQ ID NO: 8),KVSNRFS; (CDR2) (SEQ ID NO: 9), e

SQSTHFPRT; (CDR3) (SEQ ID NO: 10), ou uma CDR que temuma seqüência de aminoácidos que difere em não mais do que 4, 3, 2,5, 2,1,5, 1, ou 0,5 alterações (por exemplo, substituições, inserções ou deleções)para cada 10 aminoácidos (por exemplo, o número de diferenças sendo pro-porcional ao comprimento da CDR) em relação a uma seqüência listada a-cima, por exemplo, pelo menos uma alteração, mas não mais do que duas,três ou quadro por CDR. A seqüência do domínio variável da cadeia levepode incuir essas seqüências de CDR particularmente em CDR3, ou em pe-lo menos duas CDRs, por exemplo, CDR1 e CDR3, CDR2 e CDR3, ou emtodas três CDRs.

A proteína pode incluir, na seqüência do domínio variável da ca-deia leve, pelo menos uma, duas ou três das seguintes seqüências dentrode uma região CDR (os aminoácidos entre parênteses representam alterna-tivas para a posição específica):

(i) (RK)-S-S-Q-S-(LI)-(KV)-S-S-(KR)-G-N-(TN)-Y-L-(EHDNQY);(SEQ ID NO: 11), ou (RK)-S-S-Q-S-(LI)-V-S-S-(KR)-G-N-(TN)-Y-L-H; (SEQID NO: 12)

(ii) (KE)-(LVI)-S-(NYS)-(RW)-(FAD)-S; (SEQ ID NO: 13), ouK(LVI)-S-(NYS)-R-(FAD)-S; (SEQ ID NO: 14), e

(iii) (SM)-Q-(GSA)-(ST)-(HEQ)-(FWL)-P; (SEQ ID NO: 15) ouS-Q-(GSA)-(SIT)-(HEQ)-F-P; (SEQ ID NO: 16).

Em uma modalidade preferida, a proteína inclui todas seisCDR's de P2D10 ou CDrs intimamente relacionadas, por exemplo, CDRsque são idênticas ou que têm pelo menos uma alteração de aminoácido,mas não mais do que duas, três ou quatro alterações (por exemplo, substitu-ições, deleções, ou inserções), ou outra CDR aqui descrita.

Em ainda outro exemplo, a proteína inclui pelo menos uma, du-as ou três regiões CDR que têm as mesmas estruturas canônicas e as regi-ões CDR Chothia correspondentes de P2D10, por exemplo, as mesmas es-truturas canônicas que pelo menos CDR1 e/ou CDR2 dos domínios variáveisda cadeia pesada e/ou leve de P2D10.

A proteína pode incluir uma das seguintes seqüências:

• DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 17)

• DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 18)

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• DWMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 20)

• DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 21)

• DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQPPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 22)

• DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 23)

• DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 24)

• DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWLQQRPGQPPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 25)

• DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLVSSKGNTYLHWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCSQSTHFPRT (SEQ ID NO: 26)

ou uma seqüência que tem menos do que oito, sete, seis, cinco, quatro, trêsou duas alterações (por exemplo, substituições, inserções ou deleções, porexemplo, substituições conservativas ou uma substituição por um resíduo deaminoácido em uma posição correspondente em P2D10, huP2D10-L1, ouhuP2D10-L2). As substituições exemplificativas são em uma das seguintesposições Kabat: 2, 4, 6, 35, 36, 38, 44, 47, 49, 62, 64-69, 85, 87, 98, 99, 101,e 102. As substituições podem, por exemplo, substituir um ou mais aminoá-cidos de P2D10 em posições correspondentes em uma região do esqueleto,por exemplo, uma região humana do esqueleto, por exemplo, em FR2 (porexemplo, na posição 46 a Phe, de acordo com a numeração consecutiva) eem FR3 (por exemplo, na posição 87 a Phe).

A proteína pode incluir uma das seguintes seqüências do domí-nio variável da cadeia pesada:

• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 27)

• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQRLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 28)

• Q VQLVQSG AEVKKPG AS VKVSCKASG FTFS RYAMS W VRQATGQGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTRNTSISTA YMELSSLRSEDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 29)

• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTTDTSTSTA YMELRSLRSDDTA VYYCARVLYYDYDGDRI E (SEQ ID NO: 30)

• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTEDTSTDTA YMELSSLRSEDTAVYYCATVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 31)

• QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQALEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTITRDRSMSTAYMELSSLRSEDTAMYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 32)

• QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 33)

• QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQARGQRLEWIGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTITRDMSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 34)

• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVAEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 35)

EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPG

KGLEWVSEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAKNSLYLQMNSL

RAEDTALYYCAKDVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 36)

QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWIRQAPGK

GLEWVSEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLR

AEDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 37)

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KTEDTAVYYCTTVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 38)

EVQLVESGGGWRPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPG

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RAEDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 40)

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RAEDTAVYYCAKVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 44)

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EVQLVESGGVWQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVSEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRTEDTALYYCAKDVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 46)

• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVSEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 47)

• EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFSRYAMSWFRQAPGKGLEWVGEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDGSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 48)

• EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEYVSEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNSKNTLYLQMGSLRAEDMAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 49)

ou uma seqüência que tem menos do que oito, sete, seis, cinco quatro, trêsou duas alterações (por exemplo, substituições, inserções ou deleções, porexemplo, substituições conservativas ou uma substituição por um resíduo deaminoácido em uma posição correspondente em P2D10). As substituiçõesexemplificativas são em uma das seguintes posições Kabat: 2, 4, 6, 25, 36,37, 39, 47, 48, 93, 94, 103, 104, 106, e 107. As substituições podem, porexemplo, substituir um ou mais aminoácidos de P2D10 em posições corres-pondentes em uma região do esqueleto, por exemplo, uma região humanado esqueleto.

Em uma modalidade, o esqueleto com cadeia pesada (por e-xemplo, FR1, FR2, FR3, individualmente, ou uma seqüência que englobaFR1, FR2, e FR3, mas excluindo CDRs) inclui uma seqüência de aminoáci-dos, que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ou mais, i-dêntica ao esqueleto da cadeia pesada de uma das seqüências germinativasV: DP-25, DP-1, DP-12, DP-9, DP-7, DP-31, DP-32, DP-33, DP-58, DP-54,outra seqüência germinativa do subgrupo VH I, outra seqüência germinativado subgrupo VH III, ou outro gene V que é compatível com a classe de estru-tura canônica 1-3 (vide, por exemplo, Chothia et al., J. Moi Biol. 227:799-817 (1992); Tomlinson et ai, J. Moi Biol. 227:776-798 (1992)). Outros es-queletos compatíveis com a classe de estrutura canônica 1-3 incluem esque-letos com um ou mais dos seguintes resíduos de acordo com a numeraçãoKabat: Ala, Gly, Thr, or Val na posição 26; Gly na posição 26; Tyr1 Phe1 ouGly na posição 27; Phe1 Val1 lie, ou Leu na posição 29; Met, lie, Leu, Val1Thr, Trp, ou Ile na posição 34; Arg, Thr1 Ala, Lys na posição 94; Gly, Ser,Asn, ou Asp na posição 54; e Arg na posição 71.

Em uma modalidade, o esqueleto de cadeia leve (por exemplo,FR1, FR2, FR3, individualmente, ou uma seqüência que engloba FR1, FR2,e FR3, mas que exclui CDRs) inclui uma seqüência de aminoácidos, que épelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ou mais, idêntica ao es-queleto de cadeia leve de uma seqüência germinativa do subgrupo Vk Il ouuma das seguintes seqüências germinativas com segmentos V: A17, A1,A18, A2, A19/A3, A23, uma seqüência germinativa do subgrupo VkI (porexemplo, uma seqüência de DPK9), ou outro gene V que é compatível coma classe de estrutura canônica 4-1 (vide, por exemplo, Tomlinson et a!., EM-BO J. 14:4628 (1995)). Outros esqueletos compatíveis com a classe de es-trutura canônica 4-1 incluem os esqueletos com um ou mais dos seguintesresíduos de acordo com a numeração Kabat: Val ou Leu ou Ile na posição 2;Serou Pro na posição 25; Ile ou Leu na posição 27b; Gly na posição 29; Pheou Leu na posição 33; e Phe na posição 71. Além disso, de acordo com anumeração Kabat, a posição 48 pode ser Ile ou Vai.

Em outra modalidade, o esqueleto de cadeia leve (por exemplo,FR1, FR2, FR3, individualmente, ou uma seqüência que engloba FR1, FR2,e FR3, mas que exclui CDRs) inclui uma seqüência de aminoácidos, que épelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ou mais, idêntica ao es-queleto de cadeia leve de uma seqüência germinativa do subgrupo Vk I, porexemplo, uma seqüência de DPK9.

Em uma modalidade, o esqueleto variável de cadeia leve ou pe-sada (por exemplo, a região que engloba pelo menos FR1, FR2, FR3, e op-cionalmente FR4) pode ser escolhido entre: (a) um esqueleto variável decadeia leve ou pesada que inclui pelo menos 80%, 90%, 95%, ou de prefe-rência, 100% dos resíduos de aminoácidos de um esqueleto variável de ca-deia leve ou pesada, por exemplo, um resíduo de esqueleto variável de ca-deia leve ou pesada de um anticorpo humano maduro, uma seqüência ger-minativa humana, uma seqüência de consenso humana, ou um anticorpohumano aqui descrito; (b) um esqueleto variável da cadeia pesada, que in-clui entre 20% a 80%, 40% a 60%, 60% a 90%, ou 70% a 95% dos resíduosde aminoácidos de um esqueleto variável da cadeia leve ou pesada, por e-xemplo, um resíduo de esqueleto com cadeia leve ou pesada de um anticor-po humano maduro, uma seqüência germinativa humana, uma seqüência deconsenso humana; (c) um esqueleto não-humano (por exemplo, um esquele-to de roedor); ou (d) um esqueleto não-humano que foi modificado, por e-xemplo, para remover determinantes antigênicos ou citotóxicos, por exem-pio, desimunizado, ou parcialmente humanizado. Em uma modalidade, aseqüência do domínio variável da cadeia pesada inclui resíduos humanos ouresíduos de seqüências de consenso humanas em uma ou mais das seguin-tes posições (de preferência, pelo menos cinco, dez, doze, ou todas): (na FRdo domínio variável da cadeia leve) 4L, 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L,62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L, 68L, 69L, 70L, 71L, 73L, 85L, 87L, 98L, e/ou(na FR do domínio variável da cadeia pesada) 2H, 4H, 24H, 36H, 37H, 39H,43H, 45H, 49H, 58H, 60H, 67H, 68H, 69H, 70H, 73H, 74H, 75H, 78H, 91H,92H, 93H, e/ou 103H (de acordo com a numeração Kabat).

Em uma modalidade, a proteína inclui pelo menos uma CDRnão-humana, por exemplo, uma CDR murina, por exemplo, uma CDR deP2D10, ou uma mutante dela, e pelo meos um esqueleto que difere de umesqueleto de P2D10 em pelo menos um aminoácido, por exemplo, pelo me-nos 5, 8, 10, 12, 15, ou 18 aminoácidos. Por exemplo, as proteínas incluemuma, duas, três, quatro, cinco ou seis dessas CDR's não-humanas e incluipelo menos um diferença de aminoácido em pelo menos três entre HC FR1,HC FR2, HC FR3, LC FR1, LC FR2, e LC FR3.

Em uma modalidade, a seqüência do domínio variável da cadeiapesada ou leve da proteína inclui uma seqüência de aminoácidos, que é pelomenos 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ou mais, idêntica a uma se-quência do domínio variável de um anticorpo aqui descrito, por exemplo,P2D10, huP2D10-1, ou huP2D10-2; ou que difere em pelo menos 1 ou 5resíduos, porém menos do que 40, 30, 20, ou 10 resíduos, de uma sequên-cia do domínio variável de um anticorpo aqui descrito, por exemplo, P2D10,huP2D10-1, ou huP2D10-2.

Em uma modalidade, um ou dois dos domínios variáveis incluemposições de aminoácidos na região do esqueleto, que são derivadas varia-damente de um anticorpo murino (por exemplo, P2D10) e de um anticorpohumanizado (por exemplo, 56-84m e K107) ou seqüência germinativa. Porexemplo, o domínio variável deve incluir inúmeras posições nas quais o ami-noácido é idêntico ao anticorpo murino e também ao anticorpo humano (ouseqüência germinativa) porque os dois são idênticos nessa posição. Dentreas posições remanescentes do esqueleto, nas quais o murino e o humanodiferem, pelo menos 50, 60, 70, 80, ou 90% das posições do domínio variá-vel são de preferência idênticas ao anticorpo humano (ou seqüência germi-nativa) ao invés do murino. Nenhuma, ou pelo menos uma, duas, três ouquatro dessas posições remanescentes do esqueleto podem ser idênticas aoanticorpo murino ao invés do anticorpo humano. Por exemplo, em HC FR1,uma ou duas dessas posições podem ser murinas; em HC FR2, uma ou du-as dessas posições podem ser murinas; em FR3, uma, duas, três ou quatrodessas posições podem ser murinas; em LC FR1, uma, duas três ou quatrodessas posições podem ser murinas; em LC FR2, uma ou duas dessas po-sições podem ser murinas; em LC FR3, uma ou duas dessas posições po-dem ser murinas.

Em uma modalidade, a seqüência do domínio variável da cadeiapesada ou leve da proteína inclui uma seqüência de aminoácidos codificadapor uma seqüência de ácidos nucléicos aqui descrita ou um ácido nucléicoque hibridiza para uma seqüência de ácidos nucléicos aqui descrita (por e-xemplo, uma seqüência de ácidos nuléicos específica ou uma seqüência deácidos nucléicos que codifica uma seqüência de aminoácidos aqui descrita)ou seu complemento, por exemplo, sob condições de baixa severidade, mé-dia severidade, alta severidade ou severidade muito alta.

O anticorpo anti-TWEAK pode ser transformado ou ligado a ou-tra molécula funcional, por exemplo, outro peptídeo, proteína, ou composto.Por exemplo, o anticorpo pode ser ligado funcionalmente (por exemplo, poracoplamento químico, fusão genética, associação não-covalente, ou de ou-tra forma) a uma ou mais outras entidades moleculares, tal como um outroanticorpo (por exemplo, um anticorpo biespecífico ou multiespecífico), toxi-nas, radioisótopos, polímeros, agentes citotóxicos ou citostáticos, dentre outros.

Em outro aspecto, a invenção fornece composições, por exem-plo, composições farmacêuticas, que incluem um veículo farmaceuticamenteaceitável e um anticorpo anti-TWEAK, por exemplo, um anticorpo anti-Tweakaqui descrito.

Em ainda outra modalidade, o anticorpo anti-TWEAK (por e-xemplo, uma sua composição farmacêutica) é administrado a um indivíduoque necessita de terapia com anticorpo anti-TWEAK ou cuja condição seriamelhorada pelo anticorpo. Por exemplo, o anticorpo anti-TWEAK pode seradministrado a um indivíduo que tem ou está em risco de adquirir um distúr-bio inflamatório, distúrbio imunológico, distúrbio auto-imune, distúrbio neuro-nal, um distúrbio neoplástico, ou outro distúrbio aqui descrito. Em uma mo-dalidade, um anticorpo anti-TWEAK aqui descrito é usado para a preparaçãode um medicamento para o tratamento de um distúrbio inflamatório, distúrbioimunológico, distúrbio auto-imune, distúrbio neuronal, um distúrbio neoplásti-co, ou outro distúrbio aqui descrito.

Em outro aspecto, a invenção refere-se a um método para tratarum distúrbio associado a TWEAK, em um indivíduo. O método inclui: admi-nistrar ao indivíduo um anticorpo anti-TWEAK, em uma quantidade suficientepara tratar (por exemplo, melhorar ou prevenir) o distúrbio associado aTWEAK. O anticorpo anti-TWEAK pode ser administrado ao indivíduo, isola-damente ou em combinação com outras modalidades terapêuticas comoaqui descritas. Em uma modalidade, o indivíduo é um mamífero, por exem-plo, um ser humano, por exemplo, um ser humano que tem um distúrbio as-sociado a TWEAK, por exemplo, um distúrbio aqui descrito. O anticorpo po-de ser usado para melhorar um ou mais sintomas desses distúrbios. O termo"tratar" refere-se a administrar uma terapia em uma quantidade, maneirae/ou modo eficaz para melhorar ou prevenir uma condição, sintoma, ou pa-râmetro associado a um distúrbio (por exemplo, um distúrbio aqui descrito)ou para prevenir o início, a progressão ou a exacerbação do distúrbio até umgrau estatisticamente significante ou até um grau detectável para os versa-dos nessas técnicas. Consequentemente, o tratamento pode proporcionarbenefícios terapêuticos e/ou profiláticos. Uma quantidade eficaz, uma manei-ra eficaz ou um modo eficaz pode variar dependendo do indivíduo e podeser individualizado. Em uma modalidade, um anticorpo anti-TWEAK aquidescrito é usado para a preparação de um medicamento para o tratamentode um distúrbio associado a TWEAK.

Em outro aspecto, a invenção fornece um método para modulara interação entre TWEAK e uma proteína receptora de TWEAK. Por exem-plo, um anticorpo anti-TWEAK pode ser usado para reduzir ou inibir a liga-ção between TWEAK e um receptor de TWEAK, tal como Fn 14. O métodocompreende colocar TWEAK ou um complexo que contém TWEAK em con-tato com o anticorpo. O método pode ser usado em células in vitro, por e-xemplo, em cultura, por exemplo in vitro ou ex vivo. Por exemplo, as célulasque expressam o receptor de TWEAK podem ser cultivadas in vitro em meiode cultura, e a etapa de colocação em contato pode ser efetuada adicionan-do um anticorpo anti-TWEAK ao meio de cultura. Alternativamente, o métodopode ser realizado em células presentes em um indivíduo, por exemplo, co-mo parte de um protocolo in vivo (por exemplo, terapêutico ou profilático).Por exemplo, o anticorpo anti-TWEAK pode ser distribuído localmente ou porvia sistêmica. Em uma modalidade, um anticorpo anti-TWEAK aqui descritoé usado para a preparação de um medicamento para modular a interaçãoentre TWEAK e uma proteína receptora de TWEAK.

O método pode incluir colocar TWEAK em contato com o com-plexo receptor de TWEAK, ou uma subunidade dele, sob condições quepermitem que uma interação entre TWEAK e o complex receptor de TWEAK,ou subunidade dele, ocorra, para desta forma formar uma mistura de TWE-AK/receptor de TWEAK. Geralmente, o anticorpo anti-TWEAK é fornecidoem uma quantidade eficaz, por exemplo, de tal modo que o contato da mis-tura de TWEAK/receptor de TWEAK com o anticorpo anti-TWEAK module,por exemplo, interfira com (por exemplo, inhiba, bloqueie ou reduza de outraforma) a interação entre TWEAK e a proteína receptora ou pelo menos inter-fira com uma função de TWEAK, por exemplo, a sinalização mediada por TWEAK.

A invenção fornece também ácidos nucléicos que compreendemseqüências de nucleotídeos, que codificam regiões variáveis de cadeia pe-sada e leve dos anticorpos anti-TWEAK, por exemplo, como aqui descritos.Por exemplo, a invenção fornece uma primeira e uma segunda regiões vari-áveis com cadeia pesada e leve que codificam ácidos nucléicos, respectiva-mente, de P2D10. Em outro aspecto, a invenção fornece células hospedei-ras e vetores que contêm os ácidos nucléicos aqui descritos.

A invenção fornece também o epitopo de TWEAK, por exemplo,TWEAK humano, reconhecido por P2D10, e proteínas capazes de interagircom o epitopo. Por exemplo, as proteínas e peptídeos que incluem o epitopopodem ser usados para gerar ou triar outros compostos Iigantes que intera-gem com o epitopo, por exemplo, proteínas tais como anticorpos ou molécu-las pequenas. Por exemplo, um peptídeo que inclui o epitopo pode ser usa-do como um imunógeno ou como um alvo para triar uma biblioteca de ex-pressão. É também possível avaliar compostos quanto à sua capacidade deinteragir com o peptídeo, ou, por mapeamento ou determinação da estrutura,avaliar compostos quanto à sua capacidade de interagir com o epitopo, porexemplo, no contexto de um TWEAK maduro. Uma avaliação exemplificativainclui determinar se o composto consegue interagir com TWEAK na presen-ça de um anticorpo P2D10 competitivo.

Os métodos para distribuir ou visar um agente, por exemplo, umagente terapêutico (incluindo um agente genético) ou um agente citotóxico,com um anticorpo anti-TWEAK (por exemplo, P2D10 ou outro anticorpo aquidescrito) para uma célula ou estrutura que expressa TWEAK in vivo, tambémsão descritos.

Como aqui utilizado, o termo "anticorpo" refere-se a uma proteí-na que inclui pelo menos uma região variável de imunoglobulina, por exem-plo, uma seqüência de aminoácidos que fornece um domínio variável de i-munoglobulina ou uma seqüência do domínio variável de imunoglobulina.Por exemplo, um anticorpo pode incluir uma região variável da cadeia pesa-da (H) (aqui abreviada como VH), e uma região variável da cadeia leve (L)(aqui abreviada como VL). Em outro exemplo, um anticorpo inclui duas regi-ões variáveis com cadeia pesada (H) e duas regiões variáveis com cadeialeve (L). O termo "anticorpo" engloba fragmentos Iigantes de antígenos deanticorpos (por exemplo, anticorpos com cadeia única, fragmentos Fab,fragmentos F(ab')2, fragmentos Fd, fragmentos Fv, e fragmentos dAb), bemcomo anticorpos de comprimento inteiro, por exemplo, imunoglobuinas decomprimento inteiro dos tipos IgA, IgG (por exemplo, IgGI, lgG2, lgG3,lgG4), IgE, IgD, IgM (bem como seus subtipos). O termo "anticorpo de com-primento inteiro" refere-se a um anticorpo que tem pelo menos 96% do com-primento de um anticorpo natural que é processado para remover quaisquerseqüências de sinais. Um anticorpo de comprimento inteiro pode incluir ocomprimento completo do anticorpo natural, por exemplo, resíduos a partirdo resíduo do terminal amino de um anticorpo natural (por exemplo, a IgGI,lgG2, lgG3, lgG4) até seu resíduo do terminal carboxila.

Uma "seqüência do domínio variável de imunoglobulina" refere-se a uma seqüência de aminoácidos que pode formar a estrutura de um do-mínio variável de imunoglobulina. Por exemplo, a seqüência pode incluir atotalidade ou parte da seqüência de aminoácidos de um domínio variável deocorrência natural. Por exemplo, a seqüência pode ou não incluir um, doisou mais aminoácidos do terminal N ou C, ou pode incluir outras alteraçõesque são compatíveis com a formação da estrutura da proteína.

Uma "composição isolada" refere-se a uma composição da qualse removeu pelo menos 90% de pelo menos um componente de uma amos-tra natural a partir da qual a composição isolada pode ser obtida. As compo-sições produzidas artificialmente ou naturalmente podem ser "composiçõescom pelo menos" um certo grau de pureza se a espécie ou população daespécie de interesse é pelo menos 5, 10, 25, 50, 75, 80, 90, 95, 98, ou 99%pura em base ponderai.

Um "epitopo" refere-se ao sítio em um composto-alvo que estáligado por um anticorpo. No caso em que o composto-alvo é uma proteína,por exemplo, um epitopo pode se referir aos aminoácidos (particularmentecadeias laterais de aminoácidos) que são ligados pelo anticorpo. Epitopossobrepostos incluem pelo menos um resíduo de aminoácido comum , porexemplo, em pelo menos 2, 3, 4 ou 5 resíduos de aminoácidos comuns.

Como aqui utilizado, o termo "hibridiza sob condições de baixaseveridade, média severidade, alta severidade, ou severidade muito alta"descreve as condições para hibridização e lavagem. As orientações pararealizar reações de hibridização podem ser encontradas em "Current Proto-cols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Nes-ta publicação referida estão descritos métodos aquosos e não-aquosos equalquer um deles pode ser usado. As condições específicas de hibridizaçãoaqui referidas são as seguintes: (1) condições de hibridização de baixa seve-ridade em 6X cloreto de sódio/citrato de sódio (SSC) a cerca de 45°C, e emseguida, duas lavagens em 0.2X SSC, 0,1% de SDS a pelo menos 50°C (atemperatura das lavagens pode ser aumentada para 55°C para condiçõesde baixa severidade); (2) condições de hibridização de severidade média em6X SSC a cerca de 45°C, e em seguida, uma ou mais lavagens em 0,2XSSC, 0,1% de SDS a 60°C; (3) condições de hibridização de alta severidadeem 6X SSC a cerca de 45°C, e em seguida, uma ou mais lavagens em 0,2XSSC, 0,1% de SDS a 65°C; e de preferência, (4) condições de hibridizaçãode severidade muito alta são fosfato de sódio 0,5 M1 7% de SDS a 65°C, eem seguida, uma ou mais lavagens em 0,2X SSC, 1 % de SDS a 65°C. Ascondições de alta severidade (3) são as condições preferidas e as que de-vem ser usadas, a menos que diferentemente especificado.

Um "distúrbio associado a TWEAK" é qualquer distúrbio no qualTWEAK contribui para a etiologia ou um distúrbio cuja condição, sintomas,ou risco de início são alterados pelo fornecimento de um agente bloqueadorde TWEAK.

A menos que diferentemente definido, todos os termos técnicose científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que aquele entendidocomumente pelos versados nessas técnicas às quais esta invenção perten-ce. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles aqui des-critos possam ser usados na prática ou nos testes aqui descritos, os méto-dos e materiais apropriados estão descritos abaixo. Além disso, as modali-dades da invenção descritas com relação a CDRs Chothia podem ser im-plementadas também usando CDRs Kabat.

Todas publicações, pedidos de patente, patentes, e outras refe-rências aqui mencionadas são incorporadas como referência em sua totali-dade. No caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo as defini-ções, prevalecerá. Além disso, os materiais, métodos, e exemplos são ilus-trativos e não pretendem ser limitativos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

P2D10 é um anticorpo murino exemplificativo que se liga especi-ficamente a TWEAK humano e inibe a função de TWEAK. Variantes do anti-corpo P2D10 também estão descritas, incluindo variantes humanizadas e-xemplificativas. Estes anticorpos, outros anticorpos anti-TWEAK, e outrosagentes bloqueadores de TWEAK podem ser usados para tratar ou prevenirdistúrbios mediados por TWEAK, por exemplo, distúrbios inflamatórios e ou-tros distúrbios aqui descritos.

Anticorpos Anti-TWEAK

Esta invenção inclui as seqüências de exemplos específicos deanticorpos anti-TWEAK, tais como P2D10, huP2D10-1, e huP2D10-2. Osanticorpos específicos, tais com estes, podem ser fabricados, por exemplo,preparando e expressando genes sintéticos que codificam as seqüências deaminoácidos enunciadas ou mutando genes germinativos humanos, paraproduzir um gene que codifica as seqüências de aminoácidos enunciadas.Além disso, estes anticorpos e outros anticorpos anti-TWEAK podem serproduzidos, por exemplo, usando um ou mais dos métodos que se seguem.

Inúmeros métodos estão disponíveis para obter anticorpos, par-ticularmente anticorpos humanos. Um método exemplificativo inclui triar bi-bliotecas de expressão de proteínas, por exemplo, bibliotecas de apresenta-ção em fagos ou ribossomas. A apresentação de fagos está descrita, porexemplo, na patente n2 US 5.223.409; Smith (1985) Science 228:1315-1317;documentos η- WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/20791; WO 92/15679;WO 93/01288; WO 92/01047; WO 92/09690; e WO 90/02809. A apresenta-ção de Fab's em fagos está descrita, por exemplo, nas patentes n— US5.658.727; 5.667.988; e 5.885.793.

Além do uso de bibliotecas de apresentação, outros métodospodem ser usados para obter um anticorpo Iigante de TWEAK. Por exemplo,a proteína TWEAK ou um peptídeo dela pode ser usada como um antígenoem um animal não-humano, por exemplo, um roedor, por exemplo, um ca-mundongo, hamster, ou rato.

Em uma modalidade, o animal não-humano inclui pelo menosuma parte de um gene de imunoglobulina humano. Por exemplo, é possívelmanipular cepas de camundongo deficientes na produção de anticorpos mu-rinos com fragmentos grandes dos Ioci de Ig humanos. Usando a tecnologiade hibridomas, podem ser produzidos e selecionados anticorpos monoclo-nais esecíficos de antígenos, derivados dos genes com a especificidade de-sejada. Vide, por exemplo, XENOMOUSE®, Green et al. (1994) Nature Ge-netics 7:13-21; US 2003-0070185, WO 96/34096, e WO 96/33735.

Em outra modalidade, um anticorpo monoclonal é obtido a partirdo animal não-humano, e depois modificado, por exemplo, humanizado oudesimunizado. Winter descreve um método exemplificativo para enxertarCDRs1 que pode ser usado para preparar os anticorpos humanizados aquidescritos (patente ne US 5.225.539). A totalidade ou parte das CDRs de umanticorpo humano específico pode ser substituída por pelo menos uma partede um anticorpo não-humano. Pode ser necessário apenas substituir asCDRs necessárias para a ligação ou determinantes da ligação dessas C-DRs, para chegar a um anticorpo humanizado útil que se liga a TWEAK.

Os anticorpos humanizados podem ser gerados substituindo se-qüências da região variável Fv, que não estão envolvidas diretamente naligação de antígenos por seqüências equivalentes de regiões variáveis Fvhumanas. Os métodos genéricos para gerar anticorpos humanizados sãofornecidos por Morrison, S. L. (1985) Science 229:1202-1207; por Oi et al.(1986) BioTechniques 4:214; e por US 5.585.089; US 5.693.761; US5.693.762; US 5.859.205; e US 6.407.213. Estes métodos incluem isolar,manipular, e expressar as seqüências de ácidos nucléicos que codificam atotalidade ou parte das regiões variáveis Fv de imunoglobulina a partir depelo menos uma cadeia pesada ou leve. As fontes desse ácido nucléico sãobem-conhecidas pelos versados nessas técnicas e, por exemplo, podem serobtidas a partir de hibridoma que produz um anticorpo contra um alvo prede-terminado, como descrito acima, a partir de genes de imunoglobulina germi-nativos, ou a partir de construções sintéticas. O DNA recombinante que codi-fica o anticorpo humanizado pode ser então clonado em um vetor de expres-são apropriado.

As seqüências germinativas humanas estão descritas, por e-xemplo, em Tomlinson, I.A. et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798; Cook, G.P. et ai. (1995) lmmunol. Today 16: 237-242; Chothia, D. et al. (1992) J. Mol.Bio. 227:799-817; e Tomlinson et al. (1995) EMBO J 14:4628-4638. O guia"V BASE" fornece orientações abrangentes sobre seqüências da região vari-ável de imunoglobulina humana (compiladas por Tomlinson, I.A. et al. MRCCentre for Protein Engineering, Cambridge, Reino Unido). Estas seqüênciaspodem ser usadas como uma fonte de seqüência humana, por exemplo, pa-ra regiões do esqueleto e CDRs. As regiões humanas de consenso do es-queleto podem ser usadas também, por exemplo, como descrito na patentens US 6.300.064.

Um anticorpo Iigante de TWEAK não-humano pode ser tambémmodificado por deleção específica de epitopos de células T humanas ou"desimunização" pelos métodos descritos em WO 98/52976 e WO 00/34317.Resumidamente, podem ser analisadas as regiões variáveis com cadeia pe-sada e leve de um anticorpo, que se ligam a MHC Classe II; estes peptídeosrepresentam epitopos de células T potenciais (como definido em WO98/52976 e WO 00/34317). Para a detecção de epitopos de células T poten-ciais, uma abordagem de modelagem computadorizada denominada "fila-mentação de peptídeos" pode ser aplicada, e além disso, uma base de da-dos de peptídeos MHC Iigantes humanos pode ser buscada para achar mo-delos presentes nas seqüências Vh e VL, como descrito em WO 98/52976 eWO 00/34317. Estes modelos se ligam a qualquer um dos 18 alotipos princi-pais de MHC classe Il DR1 e assim sendo, constituem epitopos de células Tpotenciais. Os epitopos de células T potenciais detectados podem ser elimi-nados substituindo pequenos números de resíduos de aminoácidos nas re-giões variáveis, ou de preferência, por substituiões de um único aminoácido.Tanto quanto possível, são feitas substituições conservativas. Freqüente-mente, porém não exclusivamente, um aminoácido comum a uma posiçãoem seqüências germinativas do anticorpo humano pode ser usado. Depoisque as mudanças desimunizadoras são identificadas, os ácidos nucléicosque codificam Vh e Vl podem ser construídos por mutagênese ou outros mé-todos sintéticos (por exemplo, síntese de novo, substituição de fita, e assimpor diante). Uma seqüência variável mutagenizada pode ser, opcionalmente,fundida a uma região constante humana, por exemplo, as regiões constantesde IgGI ou kapa humanas.

Em alguns casos, um epitopo de células T potencial deve incluirresíduos bem-conhecidos ou previstos como sendo importantes para a fun-ção do anticorpo. Por exemplo, os epitopos de células T potenciais são usu-almente desviados na direção das CDRs. Além disso, os epitopos de célulasT potenciais podem ocorrer em resíduos do esqueleto importantes para aestrutura e ligação do anticorpo. As mudanças para eliminar estes epitopospotenciais, em alguns casos, exigirão mais apuramento, por exemplo, pro-duzindo e testando cadeias com e sem a mudança. Quando possível, osepitopos de células T potenciais que se sobrepõem às CDRs podem ser eli-minados por substituições fora das CDRs. Em alguns casos, uma alteraçãodentro de uma CDR é a única opção, e assim sendo, as variantes com esem esta substituição podem ser testadas. Em outros casos, a substituiçãonecessária pare remover um epitopo de células T potencial é em uma posi-ção do resíduo dentro do esqueleto, que poderia ser crítica para a ligação doanticorpo. Nestes casos, as variantes com e sem esta substituição são tes-tadas. Assim sendo, em alguns casos, várias regiões variáveis com cadeiapesada e leve da variante desimunizada são desenhadas e várias combina-ções de cadeia peseda/leve são testadas para identificar o anticorpo desi-munizado ideal. A escolha do anticorpo desimunizado final pode ser entãofeita considerando a afinidade de ligação das diferentes variantes em con-junto com a extensão da desimunização, particularmente o número de epito-pos de células T potenciais remanescentes na região variável. A desimuni-zação pode ser usada para modificar qualquer anticorpo, por exemplo, umanticorpo que inclui uma seqüência não-humana, por exemplo, um anticorposintético, um anticorpo murino que não um anticorpo monoclonal não-humano, ou um anticorpo isolado a partir de uma biblioeca de apresentação.

Outros métodos para humanizar anticorpos também podem serusados. Por exemplo, outros métodos podem ser responsáveis pela estrutu-ra tridimensional do anticorpo, posições no esqueleto que estão na proximi-dade tridimensional de determinantes de ligação, e seqüências peptídicasimunogênicas. Vide, por exemplo, WO 90/07861; patentes n- US 5.693.762;5.693.761; 5.585.089; 5.530.101; e 6.407.213; Tempest et al. (1991) Biote-chnology 9:266-271. Ainda outro método é denominado "engenharia de hu-manização" e está descrito, por exemplo, em US 2005-008625.

O anticorpo pode incluir uma região Fc humana, por exemplo,uma região Fc do tipo selvagem ou uma região Fc que inclui uma ou maisalterações. Em uma modalidade, a região constante é alterada, por exemplo,mutada, para modificar as propriedades do anticorpo (por exemplo, paraaumentar ou diminuir uma ou mais entre: ligação do receptor de Fe, glicosi-lação do anticorpo, o número de resíduos de cisteína, função de células efe-toras, ou função de complementos). Por exemplo, a região constante huma-na de IgGI pode ser mutada em um ou mais resíduos, por exemplo, um oumais dos resíduos 234 e 237. Os anticorpos podem ter mutações na regiãoCH2 da cadeia pesada que reduzem ou alteram a função efetora, por exem-plo, a ligação do receptor de Fc e a ativação de complementos. Por exem-plo, os anticorpos podem ter mutações tais como aquelas descritas nas pa-tentes n- US 5.624.821 e 5.648.260. Os anticorpos podem ter também mu-tações que estabilizam a ligação dissulfeto entre as duas cadeias pesadasde uma imunoglobulina, tais como mutações na região de articulação de|gG4, como decrito nessas técnicas (por exemplo, Angal et al. (1993) Moilmmunol. 30:105-08). Vide também, por exemplo, US 2005-0037000.

Maturação da Afinidade

Em uma modalidade, um anticorpo anti-TWEAK é modificado,por exemplo, por mutagênese, para fornecer uma coleção de anticorpos mo-dificados. Os anticorpos modificados são então avaliados para identificar umou mais anticorpos que têm propriedades funcionais alteradas (por exemplo,melhor ligação, melhor estabilidade, antigenicidade reduzida, ou maior esta-bilidade in vivo). Em uma implementação, usa-se a tecnologia de bibliotecade apresentação para selecionar ou triar a coleção de anticorpos modifica-dos. Anticorpos com afinidade mais alta são então identificados a partir dasegunda biblioteca, por exemplo, usando severidade mais alta ou condiçõesde ligação e lavagem mais competitivas. Outras técnicas de triagem tambémpodem ser usadas.

Em algumas implementações, a mutagênese é visada para regi-ões conhecidas ou que possivelmente estão na interface da ligação. Caso,por exemplo, as proteínas Iigantes identificadas sejam anticorpos, então amutagênese pode ser direcionada para as regiões CDR das cadeias pesa-das ou leves, como aqui descrito. Além disso, a mutagênese pode ser dire-cionada para regiões do esqueleto perto ou adjacentes às CDRs, por exem-plo, regiões do esqueleto, particularmente dentro de 10, 5, ou 3 aminoácidosde uma junção de CDRs. No caso de anticorpos, a mutagênese pode sertambém limitada a uma ou algumas das CDRs, por exemplo, para efetuarmelhoras escalonadas.

Em uma modalidade, a mutagênese é usada para tornar um an-ticorpo mais similar a uma ou mais seqüências germinativas. Um métodogerminativo exemplificativo pode incluir: identificar uma ou mais seqüênciasgerminativas que são similares (por exemplo, mais similares em uma basede dados específica) à seqüência do anticorpo isolado. Depois, as mutações(no nível de aminoácidos) podem ser feitas no anticorpo isolado, seja incre-mentalmente, em combinação, ou ambos. Por exemplo, produz-se uma bi-blioteca de ácidos nucléicos que inclui seqüências que codificam algumas outodas mutações germinativas possíveis. Os anticorpos mutados são entãoavaliados, por exemplo, para identificar um anticorpo que tem um ou maisresíduos germnativos adicionais em relação ao anticorpo isolado e que aindaé útil (por exemplo, tem uma atividade funcional). Em uma modalidade, sãointroduzidos resíduos germinativos em um anticorpo isolado em número tãogrande quanto possível.

Em uma modalidade, a mutagênese é usada para substituir ouinserir um ou mais resíduos germinativos em uma região CDR. Por exemplo,o resíduo de CDR germinativo pode ser de uma seqüência germinativa queé similar (por exemplo, mais similar) à região variável que está sendo modifi-cada. Depois da mutagênese, a atividade (por exemplo, a atividade de liga-ção ou outra atividade funcional) do anticorpo pode ser avaliada para deter-minar se o resíduo ou resíduos germinativos são tolerados. Uma mutagêne-se similar pode ser realizada nas regiões do esqueleto.

A seleção de uma seqüência germinativa pode ser realizada dediferentes maneiras. Por exemplo, uma seqüência germinativa pode ser se-lecionada se ela atende a critérios predeterminados quanto à seletividade ousimilaridade, por exemplo, em pelo menos uma certa identidade percentual,por exemplo, pelo menos 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99,ou 99,5% e identidade em relação ao anticorpo não-humano doador. A sele-ção pode ser realizada usando pelo menos 2, 3, 5, ou 10 seqüências germi-nativas. No caso de CDR1 e CDR2, identificar uma seqüência germinativapode incluir selecionar essa seqüência. No caso de CDR3, identificar umaseqüência germinativa similar pode incluir selecionar essa seqüência, maspode incluir usar duas seqüências germinativas que separadamente contri-buem para a parte do terminal amino e da parte do terminal carboxila. Emoutras implementações, são usadas mais do que uma ou duas seqüênciasgerminativas, por exemplo, para formar uma seqüência de consenso.

Em outras modalidades, o anticorpo pode ser modificado parater um padrão de glicosilação alterado (isto é, alterado em relação ao padrãode glicosilação original ou nativo). Como utilizado neste contexto, o termo"alterado" significa ter um ou mais grupamentos carboidrato deletados, e/outer um ou mais sítios de glicosilação adicionados ao anticorpo original. A a-dição de sítios de glicosilação aos anticorpos presentemente descritos podeser realizada alterando a seqüência de aminoácidos para conter seqüênciasde consenso com sítios de glicosilação; tais técnicas são bem-conhecidasnessa técnica. Outro meio para aumentar o número de grupamentos carboi-drato em anticorpos é por acoplamento químico ou enzimático de glicosí-deos aos resíduos de aminoácidos do anticorpo. Estes métodos estão des-critos, por exemplo, em WO 87/05330; e Aplin e Wriston (1981) CRC Crit.Rev. Biochem. 22:259-306. A remoção de quaisquer grupamentos carboidra-to presentes nos anticorpos pode ser realizada quimicamente ou enzimati-camente, como descrito nessas técnicas (Hakimuddin et al. (1987) Arch. Bi-ochem. Biophys. 259:52; Edge et al. (1981) Anal. Biochem. 118:131; e Tho-takura et al. (1987) Meth. Enzymoi 138:350). Vide, por exemplo, patente ngUS 5.869.046 para obter uma modificação que aumenta a meia-vida in vivodisponibilizando um epitopo Iigante de receptor de recuperação.

Em uma modalidade, um anticorpo tem seqüências de CDR quediferem apenas insubstancialmente daquelas de P2D10. As diferenças in-substanciais incluem pequenas mudanças de aminoácidos, tais como substi-tuições de 1 ou 2 dentre qualquer um entre tipicamente 5-7 aminoácidos naseqüência de uma CDR, por exemplo, uma CDR Chothia ou Kabat. Tipica-mente, um aminoácido é substituído por um aminoácido afim que tem carac-terísticas de carga, hidrofóbicas ou estereoquímicas similares. Tais substitui-ções seriam do conhecimento dos versados nessas técnicas. Diferentemen-te das CDRs, mudanças mais substanciais em regiões do esqueleto da es-trutura (FRs) podem ser feitas sem afetar adversamente as propriedades deligação de um anticorpo. As mudanças em FRs incluem, porém sem imita-ções, humanizar um esqueleto estrutural derivado de não-humano ou mani-pular certos resíduos do esqueleto que são importantes para contato comantígenos ou para estabilizar o sítio de ligação, por exemplo, mudando aclasse ou subclasse da região constante, mudar resíduos de aminoácidosespecíficos que poderiam alterar uma função efetora, tal como a ligação doreceptor de Fc (Lund et al. (1991) J. Immun. 147:2657-62; Morgan et al.(1995) Immunology 86:319-24), ou mudar a espécie da qual a região cons-tante é derivada.

Os anticorpos anti-TWEAK podem estar na forma de anticorposde comprimento inteiro, ou na forma de fragmentos de anticorpos, porexemplo, os fragmentos Fab, F(ab')2, Fd, dAb, e scFv. As formas adicionaisincluem uma proteína que inclui um único domínio variável, por exemplo, umdomínio de camelo ou camelizado. Vide, por exemplo, US 2005-0079574 eDavies et ai. (1996) Protein Eng. 9(6):531-7.

Produção de Anticorpos

Alguns anticorpos, por exemplo, Fab's, podem ser produzidosem células baterianas, por exemplo, células de E. coli. Os anticorpos podemser produzidos também em células eucarióticas. Em uma modalidade, osanticorpos (por exemplo, scFv's) são expressados em célula de levedura, talcomo Pichia (vide, por exemplo, Powers et ai. (2001) J Immunoi Methods.251:123-35), Hanseuia, or Saccharomyces.

Uma modalidade preferida, anticorpos são produzidos em célu-las de mamíferos. As células hospedeiras de mamíferos exemplificativaspara expressar um anticorpo incluem células do ovário do hamster chinês(células CHO) (incluindo células CHO dhfr~, descritas em Urlaub e Chasin(1980) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 77:4216-4220, usadas com um marcadorDHFR selecionável por exemplo, como descrito em Kaufman e Sharp (1982)Mol. Bioi. 159:601-621), linhagens de células linfociticas, por exemplo, céu-Ias de mieloma NSO e células SP2, células COS, e uma célula de um animaltransgênico, por exemplo, um mamífero transgênico. Por exemplo, a célula éuma célula epitelial de mamífero.

Além da seqüência de ácidos nucléicos que codifica o domíniode imunoglobulina diversificado, os vetores de expressão recombinante po-dem portar seqüências adicionais, tais como seqüências que regulam a re-plicação do vetor em células hospedeiras (por exemplo, origens de replica-ção) e genes marcadores selecionáveis. O gene marcador selecionável faci-lita a seleção de células hospedeiras dentro das quais o vetor foi introduzido(vide, por exemplo, patentes n- US 4.399.216, 4.634.665 e 5.179.017). Porexemplo, tipicamente, o gene marcador selecionável confere resistência afármacos, tais como G418, higromicina, ou metotrexato, em uma célula hos-pedeira dentro da qual o vetor foi introduzido.

Em um sistema exemplificativo para a expressão de anticorpos,um vetor de expressão recombinante que codifica a cadeia pesada do anti-corpo e também a cadeia leve do anticorpo é introduzido dentro de célulasCHO dhfr~ por transfecção mediada com fosfato. Dentro do vetor de expres-são recombinante, os genes das cadeias pesadas e leves do anticorpo es-tão, cada uma, ligadas operacionalmente a elementos reguladores intensifi-cadores/promotores (por exemplo, derivados de SV40, CMV1 adenovírus esimilares, tal como o elemento regulador intensificador de CMV/promoter deAdMLP ou um elemento intensificador de SV40/promoter de AdMLP) paraacionar altos níveis de transcrição dos genes. O vetor de expressão recom-binante porta também um gene de DHFR, que permite a seleção de célulasCHO que foram transfectadas com o vetor usando seleção/ampliação commetotrexato. As células hospedeiras transformantes selecionadas são culti-vadas para permitir a expressão das cadeias pesada e leve do anticorpo, e oanticorpo é recuperado do meio de cultura. Técnicas de biologia molecularusuais são usadas para preparar o vetor de expressão recombinante, trans-fectar as células hospedeiras, selecionar os transformantes, cultivar as célu-las e recuperar o anticorpo do meio de cultura. Por exemplo, alguns anticor-pos podem ser isolados por cromatografia de afinidade com uma matriz aco-plada à Proteína A ou Proteína G.

Para anticorpos que incluem um domínio Fc, o sistema de pro-dução de anticorpos, de preferência, sintetiza anticorpos nos quais a regiãoFc é glicosilada. Por exemplo, o domínio Fc de moléculas de IgG é glicosila-do na asparagina 297 no domínio CH2. Estas asparagina é o sítio para modi-ficação com oligossacarídeos do tipo biantenário ("biantennary"). Demons-trou-se que esta glicosilação é necessária para funções efetoras mediadaspor receptores Fcy e complementam C1q (Burton e Woof (1992) Adv. Immu-nol. 51:1-84; Jefferis et al. (1998) Immunol. Rev. 163:59-76). Em uma moda-lidade, o domínio Fc é produzido em um sistema de expressão mamíferoque glicosila adequadamente o resíduo correspondente à asparagina 297. Odomínio Fc ou outra região do anticorpo pode incluir também outras modifi-cações eucarióticas pós-translacionais.

Os anticorpos podem ser produzidos também por um animaltransgênico. Por exemplo, a patente U.S. n- 5.849.992 descreve um métodopara expressar um anticorpo na glândula mamária de um mamífero transgê-nico. É construído um transgene que inclui um promoter específico do leite eácidos nucléicos que codificam o anticorpo de interesse e uma seqüência desinais para secreção. O leite produzido pelas fêmeas de tais mamíferostransgênicos inclui, secretado dentro dele, o anticorpo de interesse. O anti-corpo pode ser purificado a partir do leite, ou, para algumas aplicações, usa-do diretamente.

Caracterização

As propriedades Iigantes de um anticorpo podem ser medidaspor qualquer método-padrão, por exemplo, um dos seguintes métodos: aná-lise BIACORE®, Ensaio Imunoabsorvente Ligado a Enzima (ELISA), Trans-ferência de Energia por Ressonância de Fluorescência (FRET), cristalografiade raios X, análise de seqüências e mutagênese de varredura. A capacidadede uma proteína inibir uma ou mais atividades de TWEAK pode ser avaliadain vitro ou em um modelo animal de um distúrbio, por exemplo, um distúrbioaqui descrito. De preferência, o anticorpo tem um efeito estatisticamentesignifícante que indica que o anticorpo inibe uma ou mais atividades de TWEAK.

Em uma modalidade, um anticorpo é avaliado quanto à inibição dacapacidade de TWEAK estimular a produção de IL-8, MMP-1, PGE2, IL-6,IP-10 e RANTES em fibroblastos dérmicos. Vide Chicheportiche et al. (2002)Arthritis Res. 4(2): 126-133 para obter as condições apropriados do ensaio.

Em outra modalidade, um anticorpo é avaliado quanto à sua ca-pacidade de inibir TWEAK em estimular a proliferação de uma célula endote-lial. Vide, por exemplo, US 2003-0211993 que descreve um ensaio de proli-feração (bem como outros ensaios úteis) do seguinte modo: HVEC são pla-queadas em placas de microtitulação de 96 cavidades em subconfluência(4.000 células por cavidades) e cultivadas de um dia para o outro em MeioCS-C sem adição de suplementos de crescimento. O meio é substituído pormeio completo ou por meio basal. As células são cultivas em meio basalcom ou sem TWEAK (100 ng/mL), bFGF usando uma diluição 1/500 até1/1.000 de suplemento de crescimento bFGF (CIonetics) ou 1 ng/mL (R&DSystems), VEGF (10 ng/mL) ou combinações destes fatores. Quando indica-do, 10 pg/mL do anticorpo que está sendo testado ou um anticorpo de con-trole também é adicionado. As células são incubadas a 37°C com 5% deCO2 por três dias e a proliferação foi medida por pulsação com 3H-Timidinadurante as últimas 10 horas da cultura. A radioatividade ligada às célulaspode ser medida com um BETAPLATE® (EG&G Wallac, Gaithersburg, MD,EUA). Uma diminuição na proliferação mediada por TWEAK ou a combina-ção de TWEAK e bFGF pode indicar que o anticorpo é eficaz para bloqueara atividade de TWEAK.

Ressonância Plasmônica de Superfície (SPR)

A interação da ligação de uma proteína de interesse e um alvo(por exemplo, TWEAK) pode ser analisada usando SPR. SPR ou Análise deInteração Biomolecular (BIA) detecta interações bioespecíficas em temporeal, sem marcar qualquer um dos interagentes. As mudanças na massa nasuperfície de ligação (indicativas de um evento de ligação) do chip da BIAem alterações do índice de refração da luz perto da superfície (o fenômenoóptico de ressonância plasmônica de superfície (SPR)). As mudanças narefratividade geram um sinal detectável, que é medido como uma indicaçãode reações em tempo real entre moléculas biológicas. Os métodos para usarSPR estão descritos, por exemplo, na patente US η2 5.641.640; Raether(1988), "Surface Plasmons", Springer Verlag; Sjolandere Urbaniczky (1991)Anal. Chem. 63:2338-2345; Szabo et ai (1995) Curr. Opin. Struct. Bioi5:699-705 e recursos on-line fornecidos por BIAcore International AB (Upp-sala, Suécia). As informações da SPR podem ser usadas para fornecer umamedida precisa e quantitativa da constante de dissociação no equilíbrio (Kd)1e parâmetros cinéticos que incluem K0 n e Koff, para a ligação de uma biomo-lécula a um alvo.

Os epitopos podem também ser mapeados diretamente avalian-do a capacidade de diferentes anticorpos competirem entre si pela ligação aTWEAK (por exemplo, TWEAK humano, particularmente TWEAK humanosolúvel), usando técnicas cromatográficas BIAcore (Pharmacia BIAtechno-Iogy Handbook, "Epitope Mapping", Seção 6.3.2, (maio de 1994); vide tam-bém Johne et al. (1993) J. Immunol. Methods, 160:191-198). Orientaçõesgerais adicionais para avaliar anticorpos, por exemplo, em Western blots eensaios de imunoprecipitação, podem ser encontradas em "Antibodies: ALaboratory Manual", editado por Harlow e Lane, Cold Spring Harbor Press (1988)).

Distúrbios Associados a TWEAK

Um anticorpo anti-TWEAK (tal como um anticorpo aqui descrito)pode ser usado para tratar uma série de distúrbios, tal como um distúrbioassociado a TWEAK. Por exemplo, o anticorpo pode ser usado para tratardistúrbios inflamatórios, imunológicos, ou auto-imunes em pacientes, bemcomo distúrbios neoplásicos. Os exemplos de distúrbios inflamatórios asso-ciados a TWEAK incluem artrite reumatóide, artrite psoriática, espondiliteancilosante, doença inflamatória do intestino (incluindo colite ulcerativa edoença de Crohn), psoríase, ou miosite inflamatória. Ainda outros exemplosde distúrbios inflamatórios que podem ser tratados incluem histiocitose decélulas de Langerhans, síndrome da angústia respiratória do adulto/bron-quilite obliterante, granulomatose de Wegener, vasculite, caquexia, estoma-tite, fibrose pulmonar idiopática, dermatomiosite ou polimiosites, escleritenão-infecciosa, sarcoidose crônica com envolvimento pulmonar, síndromesmielodisplásicas/anemia refratária com excesso de blastos, colite ulcerativa,doença pulmonar obstrutiva crônica moderada a grave, e arterite de células gigantes.

Um indivíduo em risco de contrair um desses distúrbios, ou quefoi diagnosticado como estando com esses distúrbios, ou que tem um des-ses dstúrbios.pode receber administração de um anticorpo anti-TWEAK emuma quantidade e por um tempo para proporcionar um efeito terapêuticoglobal. O anticorpo anti-TWEAK pode ser administrado isoladamente ou emcombinação com outros agentes. Por exemplo, o documento n° USSN60/679.518 descreve métodos para administrar um agente bloqueador deTWEAK em combinação com um agente bloqueador de TNF-α. No caso deuma terapia combinada, as quantidades e tempos de administração podemser aqueles que proporcionam, por exemplo, um efeito terapêutico sinérgico.Além disso, a administração do agente bloqueador de TWEAK (com ou semo segundo agente) pode ser usada como um tratamento primário, por exem-plo, de primeira linha, ou como um tratamento secundário, por exemplo, paraindivíduos que têm uma resposta inadequada a uma terapia administradaanteriormente (isto é, uma terapia diferente daquela com um agente bloque-ador de TWEAK).

Artrite Reumatóide (RA)

Um anticorpo anti-TWEAK (tal como um anticorpo aqui descrito)pode ser usado para tratar artrite reumatóide e distúrbios afins. A artritereumatóide ("RA") é uma doença inflamatória crônica que causa dor, incha-ço, rigidez, e perda de função, principalmente nas articulações. A artritereumatóide começa freqüentemente na sinóvia, a membrana que circundauma articulação, criando um saco protetor. Em muitos indivíduos que sofremde artrite reumatóide, os leucócitos se infiltram a partir da circulação paradentro da sinóvia, causando uma inflamação anormal contínua (por exemplo,sinovite). Consequentemente, a sinóvia fica inflamada, causando quentura,vermelhidão, inchaço e dor. O colágeno na cartilagem é destruído gradual-mente, estreitando o espaço articular e eventualmente danificando o osso. Ainflamação causa dano erosivo do osso na área afetada. Durante este pro-cesso, as células da sinóvia crescem e se dividem anormalmente, tornandoespessa a sinóvia normalmente fina, e resultando em uma articulação incha-da e tírgido ao toque.

À medida que a artrite reumatóide progride, as células sinoviaisanormais podem invadir e destruir a cartilagem e o osso dentro da articula-ção. Os músculos, Iigamentos e tendões circundantes que sustentam e es-tabilizam a articulação podem ficar fracos e incapazes de funcionar normal-mente. A artrite reumatóide pode causar também perda óssea mais genera-lizada que pode levar à osteoporose, tornando os ossos frágeis e mais sus-cetíveis a fraturas. Todos esses efeitos causam dor, enfraquecimento e de-formidades associadas com a artrite reumatóide. As regiões que podem serafetadas incluem os pulsos, as articulações metacarpofalangianas, joelhos ea bola do pé. Freqüentemente, muitas articulações podem estar envolvidas,e mesmo a espinha pode ser afetada. Em cerca de 25% das pessoas comartrite reumatóide, a inflamação de pequenos vasos sangüíneos pode causarnódulos reumatóides, ou protuberâncias, sob a pele, que freqüentemente seformam perto das articulações. À medida que a doença progride, fluido tam-bém pode se acumular, particularmente nos tornozelos. Muitos pacientescom artrite reumatóide desenvolvem também anemia, ou um decréscimo nonúmero normal de hemácias.

A artrite reumatóide engloba inúmeros subtipos da doença, taiscomo síndrome de Felty, artrite reumatóide soronegativa, artrite reumatóide"clássica", artrite reumatóide progressiva e/ou artrite reumatóide recorrente,e artrite reumatóide com vasculite. Alguns especialistas classificam a doençaem tipo 1 ou tipo 2. O tipo 1, a forma menos comum, dura poucos meses nomáximo e não deixa incapacitação permanente. O tipo 2 é crônico e duraanos, algumas vezes a vida inteira. A artrite reumatóide pode se manisfestartambém como nódulos reumatóides subcutâneos, nódulos viscerais, vasculi-te causadora de úlceras nas pernas ou mononeurite múltipla, efusões pleu-rais ou pericárdicas, limfadenopatia, síndrome de Felty, síndrome de Sjo-gren, e episclerite. Estes subtipos da doença e também os indivíduos queapresentam um ou mais dos sintomas acima podem ser tratados usando osanticorpos aqui descritos.

A artrite reumatóide pode ser avaliada por uma série de medidasclínicas. Alguns indícios exemplificativos incluem o escore total de Sharp(TSS), escore de erosão de Sharp, e o índice de incapacitação HAQ. Os mé-todos neste caso podem ser usados para conseguir uma melhora de pelosmenos um desses indícios. As propriedades terapêuticas de um anticorpoanti-TWEAK para tratar artrite reumatóide podem ser avaliadas em um mo-delo animal, por exemplo, usando o modelo de artrite induzida por colágenono camundongo (mCIA) (vide, por exemplo, Stuart et ai, J. Clin. Invest.69:673-683(1982).

Esclerose Múltipla

Um anticorpo anti-TWEAK (tal como um anticorpo aqui descrito)pode ser usado para tratar esclerose múltipla (MS) e distúrbios afins. A es-clerose múltipla é uma doença do sistema nervoso central que se caracterizapor inflamação e perda de bainhas de mielina.

Os pacientes que têm esclerose múltipla podem ser identifica-dos por critérios que estabelecem um diagnóstico de esclerose múltipla clin-camente definitivo, como definido no seminário sobre diagnóstico de escle-rose mútipla (Poser et ai, Ann. Neurol. (1983) 13:227). Resumidamente, umindivíduo com esclerose múltipla clinicamente definitiva teve dois ataques ecomprovação clínica de duas lesões ou comprovação clínica de uma lesão ecomprovação paraclínica de outra lesão separada. A esclerose mútipla defi-nitiva pode ser diagnosticada também por comprovação de dois ataques ebandas oligoclonais de IgG no líquido cerebrospinal ou por combinação deum ataque, comprovação clínica de duas lesões e banda oligoclonal de IgGno líquido cerebrospinal.

O tratamento eficaz de esclerose múltipla pode ser examinadode várias maneiras diferentes. Os parâmetros que se seguem podem seravaliados para calibrar a eficácia do tratamento. Três critérios principais sãousados: EDSS (escala do estado de incapacitação prolongado), aparênciade exarcebações ou MRI (reprodução de imagens por ressonância magnéti-ca). A EDSS é um meio para graduar o enfraquecimento clínico em virtudeda esclerose mútipla (Kurtzke (1983) Neurology 33:1444). Oito sistemas fun-cionais são avaliados quanto ao tipo e gravidade da degradação neurológi-ca. Resumidamente, antes do tratamento, os pacientes são avaliados quantoao enfraquecimento nos seguintes sistemas: piramidal, cerebelar, tronco ce-rebral, sensório, intestino e bexiga, visual, cerebral, e outros. Acompanha-mentos são conduzidos em intervalos definidos. As escalas ficam na faixaentre O (normal) e 10 (morte em virtude de esclerose múltipla). Uma diminui-ção na EDSS indica um tratamento eficaz (Kurtzke (1994) Ann. Neurol. 36:573-79).Um modelo animal exemplificativo para esclerose múltipla é omodelo de encefalite auto-imune experimental no camundongo (EAE), comodescrito, por exemplo, em Tuohy et al. (J. Immunol. (1988) 141: 1126-1130);Sobel et al. (J. Immunol. (1984) 132: 2393-2401); e Traugott (Cell Immunol.(1989) 119: 114-129). Os camundongos podem receber administração deum anticorpo aqui descrito antes da indução da EAE. Os camundongos sãoavaliados quanto a critérios característicos para determinar a eficácia do anticorpo.

Acidente Vascular Cerebral

Um anticorpo anti-TWEAK (tal como um anticorpo aqui descrito)pode ser usado para tratar um indivíduo que experimentou um acidente vas-cular cerebral, por exemplo, um aciente vascular cerebral tromboembólico ouhemorrágico (por exemplo, dentro das últimas 48, 24, 12, 8, ou 2 horas), oupara prevenir um acidente vascular cerebral, por exemplo, em um indivíduoem risco de ter um acidente vascular cerebral. Os métodos exemplificativosestão descritos no documento ns USSN 60/653.811. O acidente vascularcerebral é um termo genérico para lesão aguda do cérebro resultante de do-ença de vasos sangüíneos. O acidente vascular cerebral pode ser classifica-do em pelo menos duas categorias principais: acidente vascular cerebralhemorrágico (resultante de vazamento de sangue fora dos vasos sangüí-neos normais) e acidente vascular cerebral isquêmico (isquemia cerebral emvirtude de falta de suprimento de sangue). Alguns episódios que podem cau-sar acidente vascular cerebral isquêmico incluem trombose, embolia, e hipo-perfusão sistêmica (com isquemia e hipoxia resultantes).

O acidente vascular cerebral causa, geralmente morte e lesãoneuronal no cérebro por privação de oxigênio e episódios secundários. Aárea do cérebro que morre como resultado da falta de suprimento de sangueou outra lesão é denominada um infarto. Em alguns casos, os tratamentosaqui descritos podem ser usados para reduzir ou minimizar o tamanho deum infarto, por exemplo, reduzindo episódios secundários que causam morteou lesão neuronal.

A obstrução de uma artéria cerebral resultante de um tromboque se acumulou sobre a parede de uma artéria do cérebro é denominadageralmente trombose cerebral. Na embolia cerebral, o material oclusivo quebloqueia a artéria cerebral aparece a jusante na circulação (por exemplo, umêmbolo é transportado para a artéria cerebral a partir do coração). Devido aofato de que é difícil discernir se um acidente vascular cerebral é causado portrombose ou embolia, o termo tromboembolia é utilizado para cobrir ambostipos de acidente vascular cerebral. A hipoperfusão sistêmica pode advircomo uma conseqüência de níveis sangüíneos diminuídos, hematócritosreduzidos, baixa pressão sangüínea ou incapacidade do coração bombearsangue adequadamente.

Além disso, um anticorpo anti-TWEAK pode ser administradocomo uma terapia profilática para acidente vascular cerebral, ou como umseu componente, por exemplo, para um indivíduo que experimentou um ata-que isquêmico transiente (TIA) ou está apresentando sintomas de ataqueisquêmico transiente (TIA).

Distúrbios Neuronais

Um anticorpo anti-TWEAK (tal como um anticorpo aqui descrito)pode ser usado para tratar ou prevenir distúrbios neuronais tais como trau-matismos neuronais mecânicos e distúrbios neurodegenerativos. Os exem-plos de tramatismos neuronais mecânicos incluem lesão do cordão espinhal(SCI) e lesão cerebral traumatica (TBI). Os exemplos de distúrbios neurode-generativos incluem esclerose lateral amiotrófica (ALS), paralisia bulbar pro-gressiva (PBP), esclerose lateral primária (PLS), atrofia muscular progressi-va (PMA)1 Doença de Parkinson1 Doença de Huntington (HD), e Doença deAlzheimer. Vide, por exemplo, documento ns USSN 60/653,813. Em umamodalidade,o distúrbio neuronal caracteriza-se principalmente por destruiçãoou morte de células nervosas, por exemplo, de neurônios motores (por exem-plo, esclerose lateral amiotrófica (ALS)), de neurônios do corpo estriado degânglios basais e/ou neurônios corticais (por exemplo, doença de Huntington),de neurônios da substância negra (por exemplo, doença de Parkinson).

Câncer

TWEAK e seus receptores podem estar envolvidos no desenvol-vimento de pelo menos alguns tipos de câncer, por exemplo, um câncerpancreático. Um anticorpo anti-TWEAK (tal como um anticorpo aqui descrito)pode ser usado para tratar ou prevenir cânceres (por exemplo, adenocarci-nomas) e outros distúrbios neoplásicos. Vide, por exemplo, "TREATMENTOF CÂNCER," USSN 60/685,465, depoitado em 27 de maio de 2005.

Composições Farmacêuticas

Um anticorpo anti-TWEAK (tal como um anticorpo aqui descrito)pode ser formulado como uma composição farmacêutica para administraçãoa um indivíduo, por exemplo, para tratar um distúrbio aqui descrito. Tipical-mente, uma composição farmacêutica inclui um carreador farmaceuticamen-te aceitável. Como aqui utilizado, o termo "carreador farmaceuticamente a-ceitável" inclui quaisquer e todos solventes, meios de dispersão, revestimen-tos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e retardantesda absorção, e similares, que são fisiologicamente compatíveis. A composi-ção pode incluir um sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo, um sal deadição de ácido ou um sal de adição de base (vide, por exemplo, Berge,S.M., etal. (1977) J. Pharm. Sei. 66:1-19).

A formulação farmacêutica é uma técnica bem-estabelecida, eestá descrita adicionalmente, por exemplo, em Gennaro (editor), "Reming-ton: The Science and Practice of Pharmacy", 20â edição, Lippincott, Williams& Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472); Ansel et ai, "Pharmaceutical DosageForms and Drug Delivery Systems", 7- Edição, Lippincott Williams & WilkinsPublishers (1999) (ISBN: 0683305727); e Kibbe (editor), "Handbook ofPharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association", 3â edição(2000) (ISBN: 091733096X).

As composições farmacêuticas podem estar em uma série deformas. Elas incluem, por exemplo, formas de dosagem líquidas, semi-sólidas e sólidas, tais como soluções líquidas (por exemplo, soluções injetá-veis e para infusão), dispersões ou suspensões, comprimidos, pílulas, pós,Iipossomas e supositórios. A forma preferida pode depender do modo deadministração pretendido e da aplicação terapêutica. Tipicamente, as com-posições para os agentes aqui descritos estão na forma de soluções injetá-veis ou para infusão.

Em uma modalidade, o anticorpo anti-TWEAK é formulado commateriais excipientes, tais como cloreto de sódio, fosfato dibásico de sódioheptaidratado, fosfato monobásico de sódio, e um estabilizador. Ele pode serfornecido, por exemplo, em uma solução tamponada em uma concentraçãoapropriada e pode ser estocado a 2-8°C.

Tais composições podem ser administradas por um modo pa-renteral (por exemplo, injeção intravenosa, subcutânea, intraperitoneál, ouintramuscular). As expressões "administração parenteral" e "administradopor via parenteral", como aqui utilizadas, significam modos de administraçãodiferentes de administração entérica e tópica, usualmente por injeção, e in-cluem, sem limitações, injeção intravenosa, intramuscular, intra-arterial, in-tratecal, intracapsular, intra-orbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitone-al, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, suba-racnóide, intra-espinhal, epidural e intra-esternal e infusão.

A composição pode ser formulada como uma solução, microe-mulsão, dispersão, lipossoma, ou outra estrutura ordenada apropriada paraestocagem estável em alta concentração. As soluções injetáveis estéreispodem ser preparadas incorporando um agente aqui descrito na quantidadenecessária em um solvente apropriado com um ingrediente ou uma combi-nação de ingredientes enumerados acima, conforme necessário, e em se-guida, filtração em condições estéreis. Geralmente, as dispersões são pre-paradas incorporando um agente aqui descrito em um veículo estéril quecontém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessáriosescolhidos entre aqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para apreparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação prefe-ridos são secagem a vácuo e secagem por congelamento que produzem umpó de um agente aqui descrito mais qualquer ingrediente adicional desejadode uma sua solução previamente filtrada em condições estéreis. A fluidezapropriada de uma solução pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de umrevestimento, tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícularequerido no caso de uma dispersão, e pelo uso de tensoativos. A absorçãoprolongada de composições injetáveis pode ser gerada incluindo na compo-sição um agente que retarda a absorção, por exemplo, sais monoestearato egelatina.

Em certas modalidades, o anticorpo anti-TWEAK pode ser pre-parado com um carreador que protegerá o composto contra liberação rápida,tal como uma formulação com liberação controlada, incluindo implantes, esistemas de distribição microencapsulados. Polímeros biocompatíveis bio-degradáveis podem ser usados, tais como copolímeros de etileno e acetatode vinila, polianidridos, poli(ácido glicólico), colágeno, poli(ortoésteres), epoli(ácido lático). Muitos métodos para a preparação dessas formulaçõessão patenteados ou geralmente conhecidos. Vide, por exemplo, "Sustainedand Controlled Release Drug Delivery Systems", J.R. Robinson, editor, Mar-eei Dekker, Inc., New York (1978).

Um anticorpo anti-TWEAK pode ser modificado, por exemplo,com uma porção que melhora sua estabilização e/ou retenção na circulação,por exemplo, no sangue, soro, ou outros tecidos, por exemplo, em pelo me-nos 1,5, 2, 5, 10, ou 50 vezes. O anticorpo modificado pode ser avaliado pa-ra determinar se ele consegue alcançar os locais da inflamação, por exem-plo, as articulações.

Por exemplo, o anticorpo anti-TWEAK pode ser associado com(por exemplo, conjugado a) um polímero, por exemplo, um polímero subs-tancialmente não-antigênico, tal como um poli(óxido de alquileno) ou um po-li(óxido de etileno). Os polímeros apropriados variarão substancialmente empeso. Os polímeros que têm pesos moleculares numéricos médios na faixaentre cerca de 200 e cerca de 35.000 dáltons (ou cerca de 1.000 a cerca de15.000, e 2.000 a cerca de 12.500) podem ser usados.

Por exemplo, o anticorpo anti-TWEAK pode ser conjugado a umpolímero solúvel em água, por exemplo, um polímero polivinílico hidrofílico,por exemplo, poli(álcool vinílico) ou poli(vinil-pirrolidona). Os exemplos detais polímeros incluem homopolímeros de poli(óxidos de alquilenos), taiscomo polietilenogicol (PEG) ou polipropilenoglicóis, polióis polioxietilenados,seus copolímeros e copolímeros em bloco deles, desde que a solubilidadeem água dos copolímeros em bloco seja mantida. Os polímeros úteis adicio-nais incluem polioxialquilenos tais como polioxietileno, polioxipropileno, ecopolímeros em bloco de polioxietileno e polioxipropileno; polimetacrilatos;carbômeros; e polissacarídeos ramificados ou não-ramificados.

Em algumas implementações, o anticorpo anti-TWEAK pode sertambém acoplado ou associado de outra forma com um marcador ou outroagente, por exemplo, outro agente terapêutico, tal como um agente citotóxi-co ou citostático, embora em muitas modalidades esta configuração sejadesnecessária. Os exemplos de agentes citotóxicos e quimioterápicos inclu-em taxol, citocalasina B, gramicidina D, vinblastina, doxorrubicina, daunorru-bicina, um maitansinóide (por exemplo, maitansinol ou o maitansinóide DM1,um derivado de maitansina que contém sulfidrila), mitoxantrona, mitramicina,actinomicina D, 1-desidrotestosterona, glicocorticóides, procaína, taxano, te-tracaína, lidocaína, propranolol, e puromicina e seus análogos ou homólogos.

Quando o anticorpo anti-TWEAK é usado em combinação comum segundo agente (por exemplo, um anticorpo anti-TNF-α ou outro agen-te), os dois agentes podem ser formulados separadamente ou conjuntamen-te. Os agentes podem ser formulados ou usados de outra forma em umaquantidade sinergicamente eficaz. É possível também usar um ou ambosagentes em quantidades menores do que aquelas que seriam usadas pormonoterapia. Por exemplo, as respectivas composições farmacêuticas po-dem ser misturadas, por exemplo, momentos antes da administração, e ad-ministradas juntas ou podem ser administradas sepadamente, por exemplo,na mesma hora ou em horas diferentes.

É possível também usar outros agentes bloqueadores de TWE-AK, por exemplo, os agentes descritos em USSN 60/679.518. O agente po-de ser qualquer tipo de composto (por exemplo, molécula orgânica ou inor-gânica pequena, ácido nucléico, proteína, ou peptidomimético) que pode seradministrado a um indivíduo. Em uma modalidade, o agente bloqueador éum composto biológico, por exemplo, uma proteína que tem um peso mole-cular entre 5 e 300 kDa. Por exemplo, um agente bloqueador de TWEAKpode inibir a ligação de TWEAK a um receptor de TWEAK. Os agentes blo-queadores de TWEAK exemplificativos, que não os anticorpos que se ligama TWEAK1 incluem anticorpos que se ligam a TWEAK-R e formas solúveisde TWEAK-R (por exemplo, Fn 14) que competem com TWEAK-R da super-fície celular pela ligação a TWEAK. Outros agentes terapêuticos aqui descri-tos também podem ser fornecidos como uma composição farmacêutica, porexemplo, por métodos usuais ou pelo método aqui descrito.

Administração

O anticorpo anti-TWEAK pode ser administrado a um indivíduo,por exemplo, um ser humano, por uma série de métodos. Para muitas apli-cações, a via de administração é uma entre: injeção ou infusão intravenosa(IV), injeção subcutânea (SC), por via intraperitoneal (IP), ou injeção intra-muscular. É possível também usar distribuição intra-articular. Outros modosde administração parenteral também podem ser usados. Os exemplos des-ses modos incluem: injeção intra-arterial, intratecal, intracapsular, intra-orbital, intracardíaca, intradérmica, transtraceal, subcuticular, intra-articular,subcapsular, subaracnóide, intra-espinhal, e epidural e intra-esternal. Emalguns casos, a administração pode ser diretamente a um local de inflama-ção, por exemplo, uma articulação ou outro local inflamado.

A via e/ou modo de administração do anticorpo pode ser tam-bém individualizado para o caso individual, por exemplo, monitorando o indi-víduo, por exemplo, usando reprodução de imagens tomográficas, exameneurológico, e parâmetros usuais asssociados ao distúrbio específico, porexemplo, critérios para avaliar artrite reumatóide.

O anticorpo pode ser administrado como uma dose fixa, ou emuma dose de mg/kg. A dose pode ser também escolhida para reduzir ou evi-tar a produção de anticorpos contra o anticorpo anti-TWEAK. Os esquemasde dosagem são ajustados para proporcionar a resposta desejada, por e-xemplo, uma resposta terapêutica ou um efeito terapêutico combinatório.

Geralmente, as doses do anticorpo anti-TWEAK (e, opcionalmente, de umsegundo agente) podem ser usadas para fornecer para um indivíduo o agen-te em quantidades biodisponíveis. Por exemplo, as doses na faixa entre 0,1-100 mg/kg, 0,5-100 mg/kg, 1 mg/kg -100 mg/kg, 0,5-20 mg/kg, 0,1-10mg/kg, ou 1-10 mg/kg podem ser administradas. Outras doses também po-dem ser usadas.

A forma de dosagem unitária ou "dose fixa", como aqui utilizada,refere-se a unidades fisicamente distintas apropriadas como dosagens unitá-rias para os indivíduos a serem tratados; cada unidade contém uma quanti-dade predeterminada do composto ativo, calculada para produzir o efeitoterapêutico desejado em associação com o carreador farmacêutico requeri-do e opcionalmente em associação com o outro agente. Uma única ou múlti-plas dosagens podem ser dadas. Alternativamente, ou adicionalmente, oanticorpo pode ser administrado por intermédio de infusão contínua.

Uma dose do anticorpo anti-TWEAK pode ser administrada, porexemplo, em um intervalo periódico durante um período de tempo (um cursode tratamento) suficiente para englobar pelo menos 2 doses, 3 doses, 5 do-ses, 10 doses, ou mais, por exemplo, uma ou duas vezes ao dia, ou cercade uma a quarto vezes por semana, ou de preferência semanalmente, quin-zenalmente, mensalmente, por exemplo, durante entre cerca de 1 e 12 se-manas, de preferência entre 2 e 8 semanas, mais preferivelmente entre cer-ca de 3 e 7 semanas, e ainda mais preferivelmente entre cerca de 4, 5, ou 6semanas. Os fatores que podem influenciar a dosagem e o cronograma ne-cessários para tratar eficazmente um indivíduo incluem, por exemplo, a gra-vidade da doença ou distúrbio, formulação, via de administração, tratamen-tos anteriores, saúde geral e/ou idade do indivíduo, e outras doenças pre-sentes. Além disso, o tratamento de um indivíduo com uma quantidade tera-peuticamente eficaz de um composto pode incluir um único tratamento ou,de preferência, pode incluir uma série de tratamentos. Os modelos animaistambém podem ser usados para determinar uma dose útil, por exemplo, umadose ou esquema inicial.

Caso um indivíduo esteja em risco de desenvolver um distúrbioinflamatório ou outro distúrbio aqui descrito, o anticorpo pode ser administra-do antes do início pleno do distúrbio, por exemplo, como uma medida pre-ventiva. A duração desse tratamento preventivo pode ser uma única dosa-gem do anticorpo ou o tratamento pode continuar (por exemplo, múltiplasdosagens). Por exemplo, um indivíduo em risco de contrair o distúrbio ouque tem uma predisposição para o distúrbio pode ser tratado com o anticor-po por dias, semanas, meses, ou mesmo por anos, de modo a prevenir queo distúrbio ocorra ou fulmine.

Uma composição farmacêutica pode incluir uma "quantidade te-rapeuticamente eficaz" de um agente aqui descrito. Tais quantidades efica-zes podem ser determinadas levando em conta o efeito do agente adminis-trado, ou o efeito combinatório de agentes, caso mais do que um agente sejausado. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente pode tam-bém variar de acordo com fatores, tais como o estado da doença, idade, se-xe, e peso do indivíduo, e a capacidade do composto eliciar uma respostadesejada no indivíduo, por exemplo, uma melhora de pelo menos um parâ-metro do distúrbio, ou uma melhora de pelo menos um sintoma do distúrbio.Uma quantidade terapeuticamente eficaz é também uma na qual quaisquerefeitos tóxicos ou prejudiciais da composição são contrabalançados pelosefeitos terapeuticamente benéficos.

Dispositivos e Kits para Terapia

As composições farmacêuticas que incluem o anticorpo anti-TWEAK podem ser administradas com um dispositivo médico. O dispositivopode ser projetado com características tais como portabilidade, estocagem àtemperatura ambiente, e facilidade de uso, de tal modo que ele possa serusado em situações emergenciais, por exemplo, por um indivíduo destreina-do ou pelo pessoal de atendimento emergencial no campo, removido de ins-talações médicas e de outros equipamentos médicos. O dispositivo podeincluir, por exemplo, um ou mais alojamentos para armazenar as prepara-ções farmacêuticas que incluem o anticorpo anti-TWEAK, e podem ser con-figurados para distribuir uma ou mais doses unitárias do anticorpo. O dispo-sitivo pode ser ainda configurado para administrar um segudo agente, porexemplo, um anticorpo anti-TNF-α, seja como uma única composição farma-cêutica que inclui também o anticorpo anti-TWEAK ou como duas composi-ções farmacêuticas separadas.

Por exemplo, a composição farmacêutica pode ser administradacom um dispositivo para injeção hipodérmica sem agulha, tais como os dis-positivos descritos em US 5.399.163; 5.383.851; 5.312.335; 5.064.413;4.941.880; 4.790.824; ou 4.596.556. Os exemplos de implantes e módulosbem-conhecidos incluem: US 4.487.603, que descreve uma bomba de mi-croinfusão implantável para distribuir uma medicação em uma taxa controla-da; US 4.486.194, que descreve um dispositivo terapêutico para administrarmedicamentos através da pele; US 4.447.233, que descreve uma bombapara infusão de medicações para distribuir uma medicação em uma taxa deinfusão precisa; US 4.447.224, que descreve um aparelho implantável parainfusão com vazão variável, para distribição contínua de fármacos; US4.439.196, que descreve um sistema de distribuição osmótica de fármacos,tendo uma câmara multicompartimentada; e US 4.475.196, que descreve umsistema de distribuição osmótica de fármacos. Muitos outros dispositivos,implantes, sistemas de distribuição, e módulos também são conhecidos.

Um anticorpo anti-TWEAK pode ser fornecido em um kit. Emuma modalidade, o kit inclui (a) um recipiente que contém uma composiçãoque inclui o anticorpo anti-TWEAK, e opcionalmente, (b) material instrutivo.

O material instrutivo pode ser um material descritivo, informativo, promocio-nal, ou outro material que refere-se aos métodos aqui descritos e/ou ao usodos agentes para benefício terapêutico.

Em uma modalidade, o kit inclui também um segundo agentepara tratar um distúrbio inllamatório, por exemplo, um anticorpo anti- TNF-a.

Por exemplo, o kit inclui um primeiro recipiente que contém uma composiçãoque inclui o anticorpo anti-TWEAK, e um segundo recipiente que inclui o se-gundo agente.

O material informativo dos kits não está limitado em sua forma.Em uma modalidade, o material informativo pode incluir informações sobre aprodução do composto, peso molecular do composto, concentração, data devalidade, lote, informações sobre o local de fabricação, e assim por diante.

Em uma modalidade, o material informativo refere-se a métodos para admi-nistrar o anticorpo anti-TWEAK, por exemplo, em uma dose, forma de dosa-gem ou modo de administração apropriado (por exemplo, uma dose, formade dosagem, ou modo de administração aqui descrito), para tratar um indiví-duo que teve ou que está em risco de contrair um distúrbio inflamatório, ououtro distúrbio aqui descrito. As informações podem ser fornecidas em umasérie de formatos, incluindo um texto impresso, material legível por compu-tador, gravação de vídeo, ou gravação de áudio, ou informações que forne-cem um link ou endereço para obter material substantivo, por exemplo, na internet.

Além do anticorpo, a composição no kit pode incluir outros in-gredientes, tais como um solvente ou tampão, um estabilizador, ou um con-servante. O anticorpo pode ser fornecido em qualquer forma, por exemplo,na forma líquida, seca ou liofilizada, de preferência substancialmente puroe/ou estéril. Quando os agentes são fornecidos em uma solução líquida, asolução líquida é, de preferência, uma solução aquosa. Quando os agentessão fornecidos em uma forma seca, a reconstituição é geralmente pela adi-ção de um solvente apropriado. O solvente, por exemplo, água esterilizadaou tampão, pode ser opcionalmente fornecido no kit.

O kit pode incluir um ou mais recipientes para a composição oucomposições que contêm os agentes. Em algumas modalidades, o kit con-tém recipientes, divisões ou compartimentos separados para a composição epara o material informativo. Por exemplo, a composição pode ficar contidaem um vidro, frasco ou seringa, e o material informativo pode ficar contidoem um envelope ou caixa de plástico. Em outras modalidades, os elementosseparados do kit ficam contidos dentro de um único recipiente não dividido.Por exemplo, a composição fica contida em um vidro, frasco ou seringa quetem afixado a ele o material informativo na forma de um rótulo. Em algumasmodalidades, o kit inclui uma pluralidade (por exemplo, um pacote) de reci-pientes individuais, cada um contendo uma ou mais formas de dosagem uni-tárias (por exemplo, uma forma de dosagem aqui descrita) dos agentes. Osrecipientes podem incluir uma combinação de dosagem unitária, por exem-plo, uma unidade que inclui o anticorpo anti-TWEAK e o segundo agente,por exemplo, em uma proporção desejada. Por exemplo, o kit inclui uma plu-ralidade de seringas, ampolas, cadelas de folha de alumínio, embalagem deblister, ou dispositivos médicos, por exemplo, cada um contendo uma únicadose unitária da combinação. Os recipientes dos kits podem ser herméticos,à prova d'água (por exemplo, impermeáveis a mudanças de umidade ou e-vaporação), e/ou impenetrável à luz.

O kit inclui opcionalmente um dispositivo apropriado para admi-nistração da composição, por exemplo, uma seringa ou outro dispositivo dedistribuição apropriado. O dispositivo pode ser fornecido pré-carregado comum ou ambos agentes ou pode estar vazio, porém apropriado para ser carregado.

Assesto de Células que Expressam TWEAK

Os anticorpos anti-TWEAK aqui descritos podem ser usados pa-ra assestar uma carga útil contra uma célula que expressa TWEAK ou contraum tecido ou outra estrutura associada com TWEAK. Por exemplo, os anti-corpos podem ser afixados a um vírus ou partícula semelhante a vírus quepode distribuir um gene exógeno (por exemplo, para terapia gênica) ou paraum lipossoma, por exemplo, um Iipossoma que encapsula um agente tera-pêutico ou gene exógeno. Um método exemplificativo para usar um anticor-po para assestar um vírus está descrito em Roux et al. (1989) Proc. Natl.Acad. Sei. USA (1989) 86:9079-9083. Vide também, por exemplo, Curr. Ge-ne Ther. (2005) 5:63-70; e Hum. Gene Ther. (2004) 15:1034-1044.

O Abs anti-TWEAK desta invenção pode ser anexado a Iipos-somas que contêm um agente terapêutico, tal como agentes quimioterápi-cos. A anexação de anticorpos a Iipossomas pode ser realizada por qualqueragente reticulante conhecido, tais como agentes reticulantes heterobifuncio-nais que foram amplamente utilizados para acoplar toxinas ou agentes qui-mioterápicos a anticorpos para distribuição direcionada. Por exemplo, a con-jugação a Iipossomas pode ser realizada usando o reagente reticulante dire-cionado a carboidratos, hidrazida do ácido 4-(4-maleimidofenil)-butírico(MPBH) (Duzgunes et al. (1992) J. CeH Biochem. Abst. Suplemento 16E77). Os Iipossomas que contêm anticorpos podem ser preparados tambémpor métodos bem-conhecidos (Vide, por exemplo DE 3.218.121; Epstein etal. (1985) Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 82:3688-92 ; Hwang et ai (1980) Proc.Natl. Acad. Sei. USA, 77:4030-34; US 4.485.045 e 4.544.545).

Usos Diagnósticos

Os anticorpos anti-TWEAK podem ser usados em um métododiagnóstico para detectar a presença de um TWEAK, in vitro (por exemplo,uma amostra biológica, tal como um tecido, biópsia) ou in vivo (por exemplo,reprodução de imagens in vivo em um indivíduo). Por exemplo, os anticorposanti-TWEAK humanos ou efetivamente humanos podem ser administrados aum indivíduo para detectar TWEAK dentro do indivíduo. Por exemplo, o anti-corpo pode ser marcado, por exemplo, com um marcador detectável por MRIou um marcador radioativo. O indivíduo pode ser avaliado usando um meiopara detectar o marcador detectável. Por exemplo, o indivíduo pode ser es-caneado para avaliar a localização do anticorpo dentro do indivíduo. Por e-xemplo, o indivíduo é submetido a um exame de reprodução de imagens,por exemplo, por RMN ou outro meio tomográfico.

Os exemplos de marcadores úteis para reprodução de imagensdiagnosticas incluem marcadores radioativos tais como 131I1 111In, 123I, 99mTc,32P, 33P, 1251,3H, 14C, e 188Rh, marcadores fluorescentes tais como fluoresce-ína e rodamina, marcadores ativos para ressonância magnética nuclear, iso-topos emissores de pósitrons detectáveis por um escaneador de tomografiade emissão de pósitrons ("PET"), quimioluminescentes tais como luciferina,e marcadores enzimáticos tais como peroxidase ou fosfatase. Os emissoresde radiação de curto alcance, tais como isotopos detectáveis por sondasdetectoras de curto alcance, também podem ser empregados. O Iigante deproteína pode ser marcado com esses reagentes usando técnicas conheci-das. Por exemplo, vide Wensel e Meares (1983) "Radioimmunoimaging andRadioimmunotherapy", Elsevier, New York para obter técnicas referentes àmarcação radioativa de anticorpos, e Colcher et ai. (1986) Meth. Enzymoi.121:802-816.

O indivíduo pode passar pelo exame de reprodução de imagensin vivo usando técnicas conhecidas tais como escaneamento ("scanning")radionuclear, usando, por exemplo, uma câmera gama ou tomografia de e-missão. Vide, por exemplo, A.R. Bradwell et ai., "Developments in Antibodylmaging", Monoclonal Antibodies for Câncer Detection and Therapy, R.W.Baldwin et ai, (editores), páginas 65-85 (Academic Press 1985). Alternati-vamente, pode ser usado um escaneador de tomografia transaxial de emis-são de pósitrons, tal como aquele designado Pet VI, disponível no Brookha-ven National Laboratory, onde o marcador radiativo emite pósitrons (por e-xemplo, 11C1 18F, 15O, e 13N).

Agentes de Contraste para MRI

A Reprodução de Imagens por Ressonância Magnética (MRI)usa RMN para visualizar as características internas de indivíduos vivos, e éútil para prognóstico, diagnose, tratamento, e cirurgia. A MRI pode ser usadasem compostos rastreadores radioativos com benefícios óbvios. Algumastécnicas de MRI estão resumidas em EPO 502 814 A. Geralmente, as dife-renças relacionadas às constantes tempo de relaxamento T1 e T2 de pró-tons de água em diferentes ambientes, são usadas para gerar uma imagem.Entretanto, estas diferenças podem ser insuficientes para fornecer imagensnítidas de alta resolução.

As diferenças nessas constantes de tempo de relaxamento po-dem ser intensificadas por agentes de contraste. Os exemplos desses agen-tes de contraste incluem inúmeros agentes magnéticos, agentes paramagné-ticos (que alteram principalmente T1) e agentes ferromagnéticos ou superpa-ramagnéticos (que alteram principalmente a resposta T2). Os quelantes (porexemplo, os quelantes EDTA, DTPA e NTA) podem ser usados para anexar(e reduzir a toxicidade) de algumas substâncias paramagnéticas (por exem-plo, Fe3+, Mn2+, Gd3+). Outros agentes podem estar na forma de partículas,por exemplo, com um diâmetro menor do que 10 μιτι a cerca de 10 nm). Aspartículas podem ter propriedades ferromagnéticas, antiferromagnéticas ousuperparamagnéticas. As partículas podem incluir, por exemplo, magnetita(FeaO4), y-Fe203, ferritas, e outros compostos minerais magnéticos de ele-mentos de transição. As partículas magnéticas podem incluir um ou maiscristais magnéticos com e sem material não-magnético. O material não-magnético pode incluir polímeros sintéticos ou naturais (tais como sefarose,dextrano, dextrina, amido, e similares).Os anticorpos anti-TWEAK podem ser marcados também comum grupo indicador que contém o átomo de 19F ativo em RMN1 ou uma plu-ralidade desses átomos, desde que (i) substancialmente a totalidade dosátomos de flúor abundantes na natureza sejam o isótopo 19F e assim sendosubstanciamente todos compostos que contêm flúor sejam ativos em RMN;(ii) muitos compostos polifluorados quimicamente ativos, tais como anidridotrifluoracético, estejam disponíveis comercialmente a um custo relativamentebaixo, e (iii) muitos compostos fluorados tenham se demonstrado medica-mente aceitáveis para uso em humanos, tais como os poliéteres perfluora-dos utilizados para transportar oxigênio como substitutos de hemoglobina.

Depois de permitir algum tempo para incubação, uma MRI de corpo inteiro éconduzida usando um aparelho tal como aqueles descritos por Pykett (1982)Scientific American, 246:78-88, para localizar e reproduzir a imagem da dis-tribuição de TWEAK.

Em outro aspecto, a invenção descreve um método para detec-tar a presença de TWEAK em uma amostra in vitro (por exemplo, uma a-mostra bilógica, tal como soro, plasma, tecido, biópsia). O método em ques-tão pode ser usado para diagnosticar um distúrbio, por exemplo, um distúr-bio associado a células imunes. O método inclui: (i) contactar a amostra ouuma amostra de controle em contato com o anticorpo anti-TWEAK; e (ii) ava-liar a amostra quanto à presença de TWEAK, por exemplo, detectando aformação de um complexo entre o anticorpo anti-TWEAK e TWEAK, ou de-tectando a presence do anticorpo ou TWEAK. Por exemplo, o anticorpo podeser imobilizado, por exemplo, sobre um suporte, e a retenção do antígenosobre o suporte é detectada, e/ou vice-versa. Uma amostra de controle podeser incluída. Uma mudança estatisticamente significante na formação docomplexo na amostra em relação à amostra de controle pode ser indicativada presença de TWEAK na amostra. Geralmente, um anticorpo anti-TWEAKpode ser usado em aplicações que incluem polarização por fluorescência,microscopia, ELISA, centrifugação, cromatografia, e seleção de células (porexemplo, seleção de células ativada por fluorescência).

Exemplo 1A seqüência do domínio variável da cadeia pesada de P2D10murino, com CDRs sublinhadas, é:

1 EVQLVESGGG LVRPGGSLKL FCAASGFTFS RYAMSWVRQS PEKRLEWVAE51 ISSGGSYPYY PDTVTGRFTI SRDNAKNTLY LEMSSLKSED TAMYYCARVL101 YYDYDGDRIE VMDYWGQGTA VIVSS (SEQ ID NO: 50)

Este é um domínio variável da cadeia pesada murino subgrupo 3D.

A seqüência do domínio variável da cadeia leve de P2D10 muri-no, com CDRs sublinhadas,é:

1 DWMTQSPLS LSVSLGDQAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPK51 FLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVAAEDLGV YFCSQSTHFP101 RTFGGGTTLE IK (SEQ ID NO: 51)

Esta é uma cadeia leve murina do subgrupo 2 kapa.

Os seguintes esqueletos de aceptores humanos foram escolhidospara huP2D10: domínio variável da cadeia pesada humana de 56-84m sub-grupo 3 (número de acesso da base de dados NCBI Gl:33318898, Scamurraet al., submisão direta). A seqüência com CDRs sublinhadas é a seguinte:

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYWMSWV RQA PGKGLEWVAN51 IKQDGSEKYY VDSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAE D TAVYYCARDP101 MTTWKPSLA TNDYWGQGTL VTVSS (SEQ ID NO: 52)

A seqüência do domínio variável da cadeia leve de K107 huma-no subgrupo 2 (número de acesso da base de dados NCBI Gl: 21669075,Akahori et al., submissão direta), com CDRs sublinhadas é:

1 DWMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLL HSNGYNYLDW YLQKPGQSPQ51 LLIYLGSNRA SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCMQALQTP101 LTFGGGTKVE IK (SEQ ID NO: 53)

Nas seqüências do aceptor humano ilustradas, as CDRs (queestãó sublinhadas) são do mesmo comprimento e classes canônicas queaquelas nos domínios variáveis de muP2D10.

Abaixo está ilustrado o alinhamento do murino P2D10 (topo) eaceptor humano 56-84 m (embaixo) domínio variável de cadeia pesada(68,8% idêntico):1 EVQLVESGGGLVRPGGSLKLFCAASGFTFSRYAMSWVRQSPEKRLEWVAE 50

I Ill Il 111111-11111:1 MIIMIM I IIMII-I I Illll

1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVAN 5051 ISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAKNTLYLEMSSLKSEDTAMYYCARVL 100

I Il Il M Il Il I Il I Il Il -1 Il: I - Il :· 11 Il · 11 Il I

51 IKODGSEKYWDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDP 100101 YYDYDGDRIEVMDYWGOGTAVIVSS 125 (SEQ ID NO: 54)

: lllllll I Ill

101 MTTWKPSLATNDYWGQGTLVTVSS 125 (SEQ ID NO: 55)

Abaixo está ilustrado o alinhamento do P2D10 murino (topo) edos domínios variáveis com cadeia leve (embaixo) do aceptor humano K107(75,9% idêntica):

1 DWMTOSPLSLSVSLGDQASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPK 50

MIIMMIM I- I: MMMMMI- Il Il Il Ill Il Ill-

1 DWMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQ 5051 FLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVAAEDLGVYFCSQSTHFP 100

Ill Ill Il I Il 11 Il Il Il Il Il 11 Il Il III-MhI I- I

51 LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP 100101 RTFGGGTTLEIK 112 (SEQ ID NO: 56)

Illlll -III

101 LTFGGGTKVEIK 112 (SEQ ID NO: 57)

Há duas versões da cadeia leve de huP2D10 (L1 e L2). O anti-corpo huP2D10-1 refere-se a um anticorpo que inclui huP2D10 H1 ehuP2D10 L1. O anticorpo huP2D10-2 refere-se a um anticorpo que incluihuP2D10 H1 e huP2D10 L2.

Abaixo está ilustrado o alinhamento do aceptor humano de 56-84m (topo) e o domínio variável da cadeia pesada de huP2D10 H1 (embaixo):1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVAN 50

llllllllllllllllllllllllllllll I IIIIIIIIMII Illl

1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVROAPGKGLEWVAE 5051 IKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLOMNSLRAEDTAVYYCARDP 100

I Il IIM I Il Ill Illll Il Illll I Ill IIIIIIM III

51 ISSGGSYPYYPDTWGRFTISRDNAKNSLYLOMNSLRAEDTAVYYCARVL 100101 MTTWKPSLATNDYWGOGTLVTVSS 125 (SEQ ID NO: 58)

: 1111111111 Il I

101 YYDYDGDRIEVMDYWGQGTLVTVSS 125 (SEQ ID NO: 59)

As CDRs estão sublinhadas. A cadeia pesada de huP2D10 é umenxerto de CDR linear (ito é, não há retromutações no esqueleto).

Abaixo está indicado o alinhamento do aceptor kappa humanoK107 (topo) e o domínio variável da cadeia leve de huP2D10 L1 (embaixo):

1 DWMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLOKPGQSPO 50

lllllllllllllllllllllllllllll. I I Il lllllllllll

1 DWMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLOKPGOSPO 5051 LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP 100

Ill Ill IlllllllllllMllMlllMIIMIIIhI I- I

51 fLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYfCSQSTHFP 100101 LTFGGGTKVEIK 112 (SEQ ID NO: 60)

MIIIMMM

101 RTFGGGTKVEIK 112 (SEQ ID NO: 61)

As CDRs estão sublinhadas. A cadeia leve de huP2D10 L1 temduas retromutações que estão indicadas em letras minúsculas no esqueletoindicado acima: L46F em FR2 e Y87F em FR3.Abaixo está ilustrado o alinhamento do aceptor humano K107(topo) e o domínio variável da cadeia leve de huP2D10 L2 (embaixo):

1 DWMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLOKPGOSPQ 50

IIIIMIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII. I I Il 1111111 Il Il

1 DWMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLOKPGOSPO 5051 LLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTPFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTP 100

Illl Ill Illlllllllllllllllllllllllllillll I-I

51 L LIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTD FTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHFP 100

101 LTFGGGTKVEIK 112 (SEQ ID NO: 62)lllllllllll101 RTFGGGTKVEIK 112 (SEQ ID NO: 63)

As CDRs estão sublinhadas. A cadeia leve de huP2D10 L2 é umenxerto de CDR linear (sem retromutações no esqueleto).

Esta é uma seqüência de aminoácidos exemplificativos da ca-deia pesada de IgGI do huP2D10 H1 maduro:

1 EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYAMSWVRQA PGKGLEWVAE51 ISSGGSYPYY PDTVTGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARVL101 YYDYDGDRIE VMDYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL151 GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSWTVPSSS201 LGTQTYICNV NHKPSNTKVD KKVEPKSCDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL251 FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV WDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR301 EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ351 PREPQVYTLP PSRDELTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK401 TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS451 SPG (SEQ ID NO: 64)

A numeração Kabat para o segmento Vh do domínio variável dacadeia pesada (SED ID NO:65) está indicada abaixo:

Kabat N0 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890hP2DlO EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS RYAMSWVRQA PGKGLEWVAEKabat N0 12a3456789 0123456789 0123456789 012abc3456 78901234hP2Dl0 ISSGGSYPYY PDTVTGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR

Esta é uma seqüência de aminoácidos exemplificativa da cadeialeve de huP2D10 L1 maduro:

1 DWMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQ51 FLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YFCSQSTHFP101 RTFGGGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASWCL LNNFYPREAK151 VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE201 VTHQGLSSPV TKSFNRGEC (SEQ ID NO: 66)

A numeração Kabat para este segmento Vl está indicada abaixo(SEQ ID NO: 67):

Kabat N0 1234567890 1234567890 1234567abc de89012345 6789012345hP2Dl0 DWMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQ

Kabat N0 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345hP2DlO FLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YFCSQSTHFP

Esta é uma seqüência de aminoácidos exemplificativa da cadeialeve de huP2D10 L2 maduro:

1 DWMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQ51 LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCSQSTHFP101 RTFGGGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASWCL LNNFYPREAK151 VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE201 VTHQGLSSPV TKSFNRGEC (SEQ ID NO: 68)

A numeração Kabat para este segmento Vl está indicada abaixo(SEQ ID NO: 69):

Kabat N0 1234567890 1234567890 1234567abc de89012345 6789012345hP2DlO DWMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQSLV SSKGNTYLHW YLQKPGQSPQKabat N0 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345 6789012345hP2Dl0 LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YFCSQSTHFP

Exemplo 2

O anticorpo monoclonal bloqueador para TWEAK1 mP2D10, re-duziu significativamente a gravidade clínica em modelos de esclerose múlti-pia, acidente vascular cerebral, e artrite reumatóide. As farmacocinéticas(PK) do anticorpo monoclonal anti-TWEAK, mP2D10, após administraçãointravenosa (IV) foram modeladas.

mP2D10 foi administrado a camundongos a 1, 10 ou 100 mg/kgpor intermédio de injeção IV. As concentrações séricas de mP2D10 foramdeterminadas usando ELISA. O perfil de concentração versus tempo de PKfoi analisado usando um modelo de dois compartimentos com eliminação deprimeira ordem ou eliminação Michaelis-Menten a partir do compartimentocentral com um volume de V1. As constantes das taxas entre os dois com-partimentos foram K12 (compartimento de saída 1 até 2) e K21 (comparti-mento de saída 2 até 1). Para o modelos de eliminação de primeira ordem, aconstante da taxa de eliminação foi K10. Para o modelo de eliminação Mi-chaelis-Menten, o fármaco foi depurado na taxa de Vm*C1/(Km+C1), onde,C1 era mP2D10 na concentração no compartimento central, Vm e Km foramconstantes. Os dados foram adapatados ao software ADAPT Il software(D1Argenio, D.Z. e A. Schumitzky, "ADAPT Il User's Guide: Pharmacokine-tic/Pharmacodynamic Systems Analysis Software", Biomedical SimulationsResource, Los Angeles, 1997), usando o procedimento de estimativa depossibilidade máxima ("Maximum Likelihood").

No caso do modelo de eliminação linear com dois compartimen-tos, V1 foi 23,2 mL/kg, K10 foi 0,0096 h-1, K12 foi 2,501 e K21 foi 1,053. Ovalor da área sob a curva (AUC) foi 298 e o valor de Schwarz foi 304,2. Nocaso da eliminação linear com dois compartimentos, V1 foi 0,0235. Vm foi9,22 mg/kg/hr, Km foi 484,2 pg/mL. K12 foi 2,348 h-1, e K21 foi 0,966 h-1. Ovalor da AUC foi 269 e o valor de Schwarz foi 276. PK de mP2D10 foi maisbem previsto por um modelo não-linear do que um modelo linear.

Os perfis de concentração versus tempo de mP2D10 foram maisbem previstos por um modelo com dois compartimentos com eliminação Mi-chaelis-Menten do que com eliminação de primeira ordem.

Os versados nessas técnicas devem avaliar, ou devem ser ca-pazes de determinar, usando experimentação não mais do que rotineira,muitos equivalentes às modalidades específicas aqui descritas.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> Biogen Idec MA Inc. <120> ANTICORPOS LIGANTES DE TWEAK <130> 10274-116W01 <140> PCT/US2006/019706 <141> 2006-05-25 <150> US 60/685,149 <151> 2005-05-27 <160> 69 <170> FastSEQ para Windows Version <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ala Met Se

1 5 10

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<21B> Mus musculus

<400> 2

Glu lie Ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Thr

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> B

Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu Val Met Asp Tyr

1 5 10 15<210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <220> <221> VARIANTE <222> 2 <22 3> Xaa = Tyr ou Phe <220> <221> VARIANTE <222> 3 <223> Xaa = Asn ou Thr <220> <221> VARIANTE <222> 5 <223> xaa = Ser, Thr, Asp ou Asn <220> <221> VARIANTE <222> 6 <223> Xaa = Arg ou Tyr <220> <221> VARIANTE <222> 9 <22 3> xaa = Met, Ile ou Leu <220> <221> VARIANTE <222> 10 <223> Xaa = His ou ser <400> 4

Gly Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Tyr Ala Xaa xaa1 5 10

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<220>

<221> VARIANTE

<222> 3

<223> Xaa = Pro ou Val<220>

<221> VARIANTE

<222> 5

<223> Xaa = Thr ou Ser<220>

<221> VARIANTE

<222> 7

<223> Xaa = Thr ou Lys

<400> 5

Tyr Tyr Xaa Asp Xaa vai Xaa Gly

1 5

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<220>

<221> VARIANTE

<222> 1

<223> Xaa = Val ou Leu<220> <221> VARIANTE <222> 2 <223> xaa = lie ou Leu <220> <221> VARIANTE <222> 3, 4, 6 <223> xaa = Tyr ou Phe <400> 6 Xaa xaa xaa xaa Asp xaa Asp 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <220> <221> VARIANTE <222> 1 <223> xaa = Asp ou Glu <220> <221> VARIANTE <222> 2 <223> Xaa = Arg ou Lys <220> <221> VARIANTE <222> 3 <223> xaa = Ile1 Leu, Val ou Met <220> <221> VARIANTE <222> 4<223> Xaa = Glu, Gln ou Asp<220>

<221> VARIANTE

<222> 5

<223> Vai, Ala ou Leu<220>

<221> VARIANTE

<222> 7

<223> Xaa = Asp ou Glu

<400> 7

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Met Xaa

1 5

<210> 8

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 8

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His1 5 10 15

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 9

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 10

Ser Gln Ser Thr His Phe Pro Arg Thr1 5 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <220> <221> VARIANTE <222> 1 <22Β> Xaa = Arg ou Lys <220> <221> VARIANTE <222> 6 <223> Xaa = Leu ou Ile <220> <221> VARIANTE <222> 7 <223> Xaa = Lys ou vai <220> <221> VARIANTE <222> 10 <223> Xaa = Lys ou Arg <220> <221> VARIANTE <222> 13 <223> Xaa = Thr ou Asn <220> <221> VARIANTE <222> 16 <223> Xaa = Glu, His, Asp1 Asn1 Gln ou <400> 11Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa Ser Ser Xaa Gly Asn Xaa Tyr Leu Xaa

<210> 12 <211> 16 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <220> <221> VARIANTE <222> 1 <223> Xaa = Arg ou Lys <220> <221> VARIANTE <222> 6 <223> Xaa = Leu ou Ile <220> <221> VARIANTE <222> 10 <223> Xaa = Lys ou Arg <220> <221> VARIANTE <222> 13 <223> Xaa = Thr ou Asn <400> 12 Xaa Ser Ser Gln Ser Xaa vai ser Ser Xaa Gly 1 5 10 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220><223> Peptideo gerado sinteticamente<220>

<221> VARIANTE

<222> 1

<223> Xaa = Lys ou Glu<220>

<221> VARIANTE

<222> 2

<223> Xaa = Leu, Val ou Ile<220>

<221> VARIANTE

<222> 4

<223> Xaa = Asn, Tyr ou Ser<220>

<221> VARIANTE

<222> 5

<223> Xaa = Arg ou Trp<220>

<221> VARIANTE

<222> 6

<223> Xaa = Phe, Ala ou Asp

<400> 13

Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Ser

1 5

<210> 14

<211> 7

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<220>

<221> VARIANTE<222> 2 <22 3> Xaa = Leu, vai ou Ile <220> <221> VARIANTE <222> 4 <223> Xaa = Asn, Tyr ou ser <220> <221> VARIANTE <222> 6 <22 3> Xaa = Phe, Ala ou Asp <400> 14 Lys Xaa ser xaa Arg Xaa Ser 1 5 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <22Β> Peptideo gerado sinteticamente <220> <221> VARIANTE <222> 1 <223> xaa = ser ou Met <220> <221> VARIANTE <222> 3 <22 3> Xaa = Gly, Ser ou Ala <220> <221> VARIANTE <222> 4 <22 3> Xaa = Ser ou Thr <220><221> VARIANTE

<222> 5

<223> Xaa = His, Glu ou Gln<220>

<221> VARIANTE

<222> 6

<223> Xaa = Phe, Trp ou Leu

<400> 15

Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro

1 5

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<220>

<221> VARIANTE

<222> 3

<223> Xaa = Gly, Ser ou Ala<220>

<221> VARIANTE

<222> 4

<223> Xaa = Ser, Ile ou Thr<220>

<221> VARIANTE

<222> 5

<223> Xaa = His, Glu ou Gln

<400> 16

ser Gln Xaa Xaa Xaa Phe Pro

1 5

<210> 1710 20 25 30

45

20

<211> 102 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <400> 17 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu1 5 10 GlU Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg ser Ser Gln 20 25 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln 35 40 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys vai ser Asn Arg50 55 Asp Arg Phe ser Gly ser Gly Ser Gly Thr Asp65 70 75Ser Arg vai Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr 85 90 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 18 <211> 102 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <400> 18 Asp Ile vai Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu1 5 10 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg ser ser Gln 20 25 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln

15

60

80

95

15

3035 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly vai Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr100

<210> 19<211> 102<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 19

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro vai Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile ser Cys Arg ser ser Gln Ser Leu Val Ser ser20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr100

<210> 20<211> 102<212> PRT

<21Β> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 20

Asp Val Val Met Thr Gln ser Pro Leu ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser ser Gln ser Leu Val Ser ser20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys vai ser Asn Arg Phe ser Gly vai Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp vai Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr100

<210> 21<211> 102<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 21

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln ser35 40 45Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly vai Pro

50 55 60

Asp Arg Phe ser Gly ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg vai Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr100

<210> 22<211> 102<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 22

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu ser vai Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln ser Leu Val Ser Ser20 25 30

20 Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg vai Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr100

<210> 23<211> 102<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 23

Asp Ile Val Met Thr Gln ser Pro Leu ser Leu Pro Val Thr Pro Gly1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile ser Cys Arg ser Ser Gln ser Leu Val Ser Ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln ser35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg vai Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr100

<210> 24 <211> 102 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <400> 24

Asp Ile vai Met Thr Gln ser Pro Leu Ser Leu Pro vai Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser ser Gln Ser Leu Val Ser Ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp vai Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr100

<210> 25<211> 102<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 25

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu vai Ser ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys vai ser Asn Arg Phe Ser Gly vai Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr100

<210> 26<211> 102<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 26

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val ser Ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Ser Arg Phe ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80 Ser ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Arg Thr 100 <210> 27 <211> 110 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <400> 27 Gln Val Gln Leu vai Gln ser Gly Ala Glu vai Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 ser Val Lys Val ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile ser Ser Gly Gly ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60Thr Gly Arg vai Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 28<211> 110<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 28

Gln vai Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala1 5 10 15

Ser vai Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

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Thr Gly Arg vai Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr65 70 75 80

Met Glu Leu Ser ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 29<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220><223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 29

Gln vai Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala1 5 10 15

Ser vai Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Ser Ser Gly Gly ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai50 55 60

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Met Glu Leu Ser ser Leu Arg ser Glu Asp Thr Ala vai Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg vai Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu

100 105 110

<210> 30<211> 110<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 30

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu vai Lys Lys Pro Gly Ala1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met35 40 45

Gly Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

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85 90 95

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<210> 31<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 31

Gln vai Gln Leu vai Gln Ser Gly Ala Glu vai Lys Lys Pro Gly Ala1 5 10 15

Ser vai Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

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Met Glu Leu ser Ser Leu Arg ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

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100 105 110

<210> 32<211> 110<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 32

Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Thr Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Met

35 40 45

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10 Thr Gly Arg vai Thr Ile Thr Arg Asp Arg Ser Met Ser Thr Ala Tyr65 70 75 80

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85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

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<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 33

Gln vai Gln Leu Val Gln ser Gly Ala Glu vai Lys Lys Pro Gly Ala1 5 10 15

25 Ser Val Lys Val ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr65 70 75 80Met Glu Leu ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

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<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 34

Gln Met Gln Leu vai Gln ser Gly Pro Glu vai Lys Lys Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Val Lys vai ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe ser Arg Tyr20 25 30

Ala Met Ser Trp vai Arg Gln Arg Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Glu

35 40 45

Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai Thr Gly50 55 60

Arg vai Thr Ile Thr Arg Asp Met ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala vai Tyr Tyr Cys Ala Ala

85 90 95

Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105

<210> 35<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 35Glu Val Gln Leu vai Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr20 25 30

Ala Met ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp vai35 40 45

Ala Glu Ile Ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

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Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg vai Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 36<211> 111<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 36

Glu vai Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu vai Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp vai

35 40 45

Ser Glu Ile ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

30 Thr Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys85 90 95 Ala Lys Asp Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu 100 105 110 <210> 37 <211> 110 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <400> 37 Gln Val Gln Leu vai Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe ser Arg Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp vai 35 40 45 Ser Glu Ile Ser Ser Gly Gly ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai 50 55 60 Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu 100 105 110 <210> 38 <211> 110 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <400> 38 Glu Val Gln Leu vai Glu ser Gly Gly Gly Leu vai Lys Pro Gly Gly1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45

Gly Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai

50 55 60

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85 90 95

Thr Thr Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 39<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

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Glu Val Gln Leu vai Glu ser Gly Gly Gly vai vai Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe ser Arg Tyr20 25 30

Ala Met ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45

Ser Glu Ile Ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai

50 55 60

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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys85 90 95Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 40<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 40

Glu vai Gln Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45

Ser Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

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Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg vai Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 41<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 41

Glu vai Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu vai Gln Pro Gly Gly15 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp vai35 40 45

Ser Glu Ile Ser Ser Gly Gly ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile ser Arg Asp Asn ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala vai Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Lys vai Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 42<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 42

Gln Val Gln Leu vai Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45

Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

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Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala vai Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys vai Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 43<211> 110<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 43

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp vai35 40 45

Ala Glu Ile ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 44<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 44

Gln vai Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe ser Arg Tyr20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Glu Ile Ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Lys Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu

100 105 110

<210> 45<211> 110<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 45

Gln vai Gln Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Val vai Gln Pro Gly Arg1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp vai35 40 45

Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala vai Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110<210> 46<211> 111<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<22Β> Peptideo gerado sinteticamente<400> 46

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val vai Val Gln Pro Gly Gly15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Lys Asp Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu

100 105 110

<210> 47<211> 110<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 47

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr20 25 30Ala Met ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Glu Ile Ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg vai Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 48<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 48

Glu vai Gln Leu vai Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu ser Cys Thr Ala ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu lie Ser ser Gly Gly ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gly ser Lys Ser Ile Ala Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

Thr Arg vai Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu

100 105 110

<210> 49<211> 110<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 49

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ser Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

15 Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu100 105 110

<210> 50<211> 125<212> PRT<213> Mus musculus<400> 50

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Phe Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr20 25 30

30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val35 40 45

Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Glu Met ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu Val Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Ile Val Ser Ser115 120 125

<210> 51<211> 112<212> PRT<213> Mus musculus<400> 51

Asp vai Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ser vai ser Leu Gly1 5 10 15

Asp Gln Ala Ser Ilé Ser Cys Arg Ser ser Gln Ser Leu Val Ser Ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln ser35 40 45

Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Ala Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Thr Leu Glu Ile Lys100 105 110

<210> 52<211> 125<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 52

Glu vai Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Ser ser Tyr20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Pro Met Thr Thr vai Val Lys Pro Ser Leu Ala Thr Asn100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 125

<210> 53<211> 112<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 53

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu ser Leu Pro Val Thr Pro Gly1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro50 55 60

Asp Arg Phe ser Gly Ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly vai Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105 110

<210> 54<211> 125<212> PRT<213> Mus musculus<400> 54

10 Glu Val Gln Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Phe Cys Ala Ala ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met ser Trp vai Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val35 40 45

Ala Glu Ile Ser ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80

Leu Glu Met Ser ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg vai Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg lie Glu vai Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Val Ile Val Ser ser115 120 125

<210> 55<211> 125<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 55

Glu Val Gln Leu Val Glu ser Gly Gly Gly Leu vai Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 BO

Trp Met ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45

Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg Asp Pro Met Thr Thr Val vai Lys Pro Ser Leu Ala Thr Asn

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 125

<210> 56<211> 112<212> PRT<213> Mus musculus<400> 56

20 Asp vai vai Met Thr Gln ser Pro Leu Ser Leu Ser vai Ser Leu Gly1 5 10 15

Asp Gln Ala ser Ile ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln ser35 40 45

Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

ser Arg Val Ala Ala Glu Asp Leu Gly vai Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Thr Leu Glu Ile Lys100 105 110

<210> 57<211> 112<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 57

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly vai Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105 110

<210> 58<211> 125<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 58

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30

Trp Met Ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45

Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg Asp Pro Met Thr Thr vai Val Lys Pro Ser Leu Ala Thr Asn

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu vai Thr Val Ser Ser115 120 125

<210> 59<211> 125<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 59

Glu Val Gln Leu vai Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe ser Arg Tyr20 25 BO

Ala Met Ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp vai

35 40 45

Ala Glu Ile ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu Val Met100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr vai ser Ser115 120 125<210> 60<211> 112<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 60

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly vai Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105 110

<210> 61 <211> 111 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Peptideo gerado sinteticamente <400> 61

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln ser Leu Val Ser Ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser35 40 45Pro Gln Phe Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp vai Gly vai Tyr Cys ser Gln Ser Thr

85 90 95

His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105 110

<210> 62<211> 112<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 62

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly1 5 10 15

Glu Pro Ala ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His ser

20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro50 55 60

Asp Arg Phe ser Gly Ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly vai Tyr Tyr Cys Met Gln Ala85 90 95

Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105 110

<210> 63<211> 112<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220><223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 63

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg ser ser Gln ser Leu Val Ser Ser20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly vai Pro50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln ser85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 64<211> 454<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 64

Glu vai Gln Leu vai Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45

Ala Glu Ile Ser ser Gly Gly ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr vai50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Leu Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Asp Arg Ile Glu Val Met100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser ser Lys Ser Thr Ser130 135 140

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu145 150 155 160

Pro vai Thr Val ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala vai Leu Gln ser Ser Gly Leu Tyr ser Leu Ser Ser180 185 190

vai Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys

195 200 205

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys vai Asp Lys Lys Val Glu210 215 220

Pro Lys ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro225 230 235 240

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val vai260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg vai Val Ser vai Leu Thr vai Leu His Gln Asp305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys vai ser Asn Lys Ala Leu325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Lys Leu Thr vai Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn vai Phe ser

420 425 430

Cys Ser vai Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser435 440 445

Leu Ser Leu ser Pro Gly

450<210> 65<211> 98<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 65

Glu vai Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Ala Met ser Trp vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45

Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Pro Tyr Tyr Pro Asp Thr Val50 55 60Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala vai Tyr Tyr Cys85 90 95

Ala Arg

<210> 66<211> 219<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<22B> Peptideo gerado sinteticamente<400> 66

Asp vai Val Met Thr Gln ser Pro Leu Ser Leu Pro vai Thr Pro Gly15 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile ser Cys Arg ser ser Gln ser Leu Val Ser ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Phe Leu Ile Tyr Lys vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp vai Gly Val Tyr Phe Cys ser Gln Ser85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala ser vai Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys vai Asp Asn Ala Leu Gln145 150 155 160Ser Gly Asn ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu vai Thr His Gln Gly Leu Ser Ser195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 67<211> 100<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 67

Asp vai Val Met Thr Gln ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile ser Cys Arg ser Ser Gln Ser Leu vai Ser ser20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser35 40 45

Pro Gln Phe Leu Ile Tyr Lys vai Ser Asn Arg Phe ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly vai Tyr Phe Cys Ser Gln Ser85 90 95

Thr His Phe Pro100

<210> 68<211> 219<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 68

Asp Val Val Met Thr Gln ser Pro Leu Ser Leu Pro vai Thr Pro Gly15 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg ser ser Gln ser Leu Val Ser ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly vai Pro

50 55 60

Asp Arg Phe ser Gly Ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg vai Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys vai Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr vai Ala Ala Pro ser Val Phe Ile Phe Pro Pro ser Asp Glu115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys vai Gln Trp Lys vai Asp Asn Ala Leu Gln145 150 155 160

Ser Gly Asn ser Gln Glu Ser vai Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys210 215<210> 69<211> 100<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo gerado sinteticamente<400> 69

Asp vai Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly1 5 10 15

Glu Pro Ala ser Ile Ser Cys Arg ser Ser Gln ser Leu vai Ser Ser

20 25 30

Lys Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe ser Gly Val Pro50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly vai Tyr Phe Cys Ser Gln ser85 90 95

Thr His Phe Pro

100

Claims (40)

1. Proteína isolada, caracterizada pelo fato de que compreendeuma seqüência do domínio variável da cadeia pesada e uma seqüência dodomínio variável da cadeia leve que podem formar um sítio de ligação deantígeno que liga ao TWEAK humano, em que a proteína tem um a ou maisdas seguintes propriedades:(a) a proteína compete com P2D10, huP2D10-1, ou huP2D10-2para ligar ao TWEAK humano;(b) a proteína se liga a um epítopo em um TWEAK humano quese sobrepõe ao epítopo ligado por P2D10, huP2D10-1, ou huP2D10-2;(c) a seqüência do domínio variável da cadeia pesada e/ou leveé codificada por um ácido nucléico que hibridiza sob condições altamenteseveras ao complemento de um ácido nucléico que codifica P2D10,huP2D10-1 ou huP2D10-2;(d) a seqüência do domínio variável da cadeia pesada e/ou leveé pelo menos 80% idêntica à seqüência de aminoácido do domínio variávelcorrespondente de P2D10, huP2D10-1, ou huP2D10-2;(e) a seqüência do domínio variável das cadeias pesada e leve épelo menos 95% idêntica nas regiões CDR (coletivamente) às regiões CDRdos domínios variáveis da cadeia pesada e leve de P2D10, huP2D10-1, ouhuP2D10-2; ou (f) pelo menos 95% idêntica nas regiões do esqueleto (cole-tivamente) às regiões do esqueleto dos domínios variáveis das cadeias pe-sada e leve de P2D101 huP2D10-1, ou huP2D10-2.

2. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelofato de que a seqüência do domínio variável da cadeia pesada compreendepelo menos duas das seguintes seqüências dentro de uma região CDR:GFTFSRYAMS (CDR1) (SEQ ID NO: 1),EISSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (SEQ ID NO: 2), eVLYYDYDGDRIEVMDY (CDR3) (SEQ ID NO: 3).

3. Proteína de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizadapelo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia leve compreen-de uma ou mais das seguintes seqüências dentro de uma região CDR:RSSQSLVSSKGNTYLH (CDR1) (SEQ ID NO: 8),KVSNRFS (CDR2) (SEQ ID NO: 9), eSQSTHFPRT (CDR3) (SEQ ID NO: 10).

4. Proteína de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelofato de que a seqüência do domínio variável da cadeia pesada compreendeas seguintes CDR's:GFTFSRYAMS (CDR1) (SEQ ID NO: 1),EISSGGSYPYYPDTVTG (CDR2) (SEQ ID NO: 2), eVLYYDYDGDRIEVMDY (CDR3) (SEQ ID NO: 3);e em que a seqüência do domínio variável da cadeia leve compreende umaou mais das seguintes seqüências dentro de uma região CDR:RSSQSLVSSKGNTYLH (CDR1) (SEQ ID NO: 8),KVSNRFS (CDR2) (SEQ ID NO: 9), eSQSTHFPRT (CDR3) (SEQ ID NO: 10).

5. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelofato de ser uma IgG recombinante de comprimento inteiro.

6. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelofato de que compreende uma região Fc humana.

7. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelofato de que compreende uma região humana Fc com três ou menos substitu-ições de aminoácidos.

8. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelofato de que é uma Fab ou scFv.

9. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelofato de que compreende regiões de esqueleto que são pelo menos 90% i-dênticas às regiões de esqueleto humanas germinativas.

10. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que as regiões de esqueleto da seqüência do domínio variável dacadeia leve são pelo menos 95% idênticas, coletivamente, à seqüência deuma seqüência germinativa do subgrupo Vk1.

11. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que as regiões de esqueleto da seqüência do domínio variável dacadeia pesada são pelo menos 95% idênticas, coletivamente, à seqüênciagerminativa DP54.

12. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que as regiões de esqueleto da seqüência do domínio variável dacadeia leve são pelo menos 95% idênticas, coletivamente, à seqüência daseqüência germinativa DPK9.

13. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que as regiões de esqueleto da seqüência do domínio variável dacadeia pesada são pelo menos 95% idênticas, coletivamente, à seqüênciade uma seqüência germinativa do subgrupo VH I.

14. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que compreende alças hipervariáveis que têm a mesma estruturacanônica que P2D10, huP2D10-1, ou huP2D10-2.

15. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia pesada compre-ende uma seqüência pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 65.

16. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia pesada compre-ende a SEQ ID NO: 65.

17. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia leve compreendeuma seqüência pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 67 ou 69.

18. Proteína de acordo com a reivindicação 1 ou 15, caracteri-zada pelo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia levecompreende a SEQ ID NO: 67 ou 69.

19. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia pesada compre-ende qualquer uma das SEQ ID NO: 27 a 49, ou uma seqüência pelo menos 95% idêntica às mesmas.

20. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia leve compreendequalquer uma das SEQ ID NO: 17 a 26, ou uma seqüência pelo menos 95%idêntica às mesmas.

21. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende uma proteína, como definida em qualquer uma das reivindica-ções 1 a 20, e um veículo farmaceuticamente aceitável.

22. Método para produzir um anticorpo, caracterizado pelo fatode que compreende:fornecer uma célula hospedeira que contém seqüências deácido nucléico recombinante para expressar uma proteína que compreendeuma seqüência do domínio variável da cadeia pesada e uma seqüência dodomínio variável da cadeia leve, proteína esta como definida na reivindicação 1; emanter a célula sob condições nas quais a proteína é expressada.

23. Método de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pe-Io fato de que compreende ainda isolar a proteína e formular a proteína comum veículo farmaceuticamente aceitável.

24. Uso da composição farmacêutica, como definida na reivindi-cação 21, caracterizado pelo fato de ser para preparar um medicamento pa-ra tratar um distúrbio auto-imune.

25. Uso da composição farmacêutica, como definida na reivindi-cação 21, caracterizado pelo fato de ser para preparar um medicamento pa-ra tratar artrite reumatóide.

26. Uso da composição farmacêutica, como definida na reivindi-cação 21, caracterizado pelo fato de ser para preparar um medicamento pa-ra tratar esclerose múltipla.

27. Uso da composição farmacêutica, como definida na reivindi-cação 21, caracterizado pelo fato de ser para preparar um medicamento pa-ra tratar acidente vascular cerebral.

28. Uso da composição farmacêutica, como definida na reivindi-cação 21, caracterizado pelo fato de ser para preparar um medicamento pa-ra tratar câncer.

29. Uso de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelofato de que o câncer é câncer pancreático.

30. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia pesada compre-ende uma seqüência pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 59.

31. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia pesada compre-ende a SEQ ID NO: 59.

32. Proteína de acordo com a reivindicação 1 ou 30, caracteri-zada pelo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia levecompreende uma seqüência pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 61 ou 63.

33. Proteína de acordo com a reivindicação 1 ou 30, caracteri-zada pelo fato de que a seqüência do domínio variável da cadeia levecompreende a SEQ ID NO: 61 ou 63.

34. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência da cadeia pesada compreende uma seqüênciapelo menos 95% idêntica SEQ ID NO: 64.

35. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência da cadeia pesada compreende a SEQ ID NO: 64.

36. Proteína de acordo com a reivindicação 1 ou 34, caracteri-zada pelo fato de que a seqüência da cadeia leve compreende uma seqüên-cia pelo menos 95% idêntica à SEQ ID NO: 66 ou 68.

37. Proteína de acordo com a reivindicação 1 ou 34, caracteri-zada pelo fato de que a seqüência da cadeia leve compreende a SEQ IDNO: 66 ou 68.

38. Proteína de acordo com a reivindicação 37, caracterizadapelo fato de que a seqüência da cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 68.

39. Proteína de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pe-lo fato de que a seqüência da cadeia pesada compreende a SEQ ID NO: 64e a seqüência da cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 66 ou 68.

40. Proteína de acordo com a reivindicação 39, caracterizadapelo fato de que a seqüência da cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 68.