BRPI0611452A2 - dosagem de oligonucleotìdeos - Google Patents

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BRPI0611452A2
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Karl-Hermann Schlingensiepen
Reimar Schlingensiepen
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Antisense Pharma Gmbh
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Abstract

DOSAGEM DE OLIGONUCLEOTìDEOS A presente invenção refere-se ao uso de pelo menos um oligo-nucleotídeo com um comprimento de 8 a 30 blocos de construção de nucleo- tídeo para fabricação de uma preparação farmacêutica para a profilaxia e/ou tratamento de doenças, que são modulados por TGF-beta2, TGF-betal, TGFbeta3, VEGF, interleucina-lO, c-jun, c-fos, e/ou prostaglandina E2 em um mamífero, no qual referido oligonucleotídeo se hibridiza com um RNA mensageiro de um TGF-beta2, TGF-betai, TGF-beta3, VEGF, interleucina- 10, c-jun, c-fos, e/ou gene de prostaglandina E2, e no qual a referida prepa- ração compreende referido oligonucleotídeo em uma concentração de cerca de 1 microM a cerca de 25 microM.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DOSAGEMDE OLIGONUCLEOTÍDEOS".
Campo da invenção
A presente invenção refere-se a preparação de uma composiçãofarmacêutica para a profilaxia e/ou tratamento de doenças que são modula-das por TGF-beta, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, interleucina-10, c-jun, c-fos e/ou gene de prostaglandina E2.
Introdução
Uma característica total de substâncias farmacêuticas é sua efi-ciência aumentada acompanhada por um aumento nas quantidades sendoadministradas. As substâncias particulares usadas em terapia de tumor mos-tram uma forte correlação entre a quantidade total administrada e a inibiçãode crescimento de tumor.
Adicionalmente, o entendimento celular é um fator Iimitante paraa eficiência de administração "in vivo" de oligonucleotídeos, onde conven-cionalmente altas concentrações e altas quantidades de oligonucleotídeossão administradas para inibir a produção da respectiva proteína.
Não obstante, o sucesso clínico destas substâncias é limitado,visto que um aumento na concentração total e na quantidade total destassubstâncias, que podem ser administradas a um mamífero que sofre de me·tástase de tumor, doença nervosa e imunossupressão, está correlacionadocom um forte aumento nos efeitos colaterais severos e toxicidade.
Até agora para a terapia de câncer, metástases, doença do sis-tema nervoso e imunossupressão, não existem resultados de ensaios clíni-cos dando evidência da quantidade de oligonucleotídeos que são bem-sucedidos na terapia de tumor.
Os documentos EP 1008 649 e EP 0695354 ensinam que hibri-dização de oligonucleotídeos com o mRNA de TGF-beta 1 e/ou TGF-beta 2pode ser usada para fabricação de composições farmacêuticas. O documen-to EP 1 089 764 ensina adicionalmente que inibidores de substâncias queafetam negativamente o sistema imune, em combinação com oligonucleotí-deos que hibridizam com o mRNA de TGF-beta, VEGF, interleucina 10, eprostaglandina Ε2, e seus respectivos receptores, podem ser usados parafabricação de uma composição farmacêutica também. Mas estas patentesoferecem uma ampla faixa de concentrações na qual os oligonucleotídeospodem ser administrados.
Os resultados de estudos toxicológicos em mamíferos mostra-ram que é possível administrar altas quantidades de oligonucleotídeos parainibir a produção dos respectivos objetivos sem efeitos colaterais toxicológi-cos (ver Exemplos 1, 2 e 3 de Schlingemsiepen1 R. et al., 2005). Conseqüen-temente, seria óbvio administrar altas concentrações e altas quantidades deoligonucleotídeos para inibir os objetivos envolvidos na terapia de câncer,metástases, doença do sistema nervoso, e imunossupressão.Sumário da Invenção
Surpreendentemente, reconheceu-se durante ensaios clínicosque composições farmacêuticas contendo pelo menos um oligonucleotídeoem concentração mais baixa e/ou administradas com quantidades diáriasmais baixas, inibem o crescimento do tumor mais rápido e com menos sin-tomas durante a progressão da doença do que as concentrações mais altase/ou quantidades diárias mais altas.
Adicionalmente estas concentrações ou quantidades diárias e-ram 10 a 50 vezes mais baixas do que a concentração máxima testada emestudos toxicológicos sem efeitos colaterais severos (ver também figura 4).
Este pelo menos um oligonucleotídeo usado para fabricação deuma preparação farmacêutica desta invenção tem uma concentração decerca de 1 microM a cerca de 25 microM, e um comprimento de cerca de 8 acerca de 30 blocos de construção de nucleotídeo, é administrado para a pro-filaxia e/ou tratamento de doenças que são moduladas por TGF-beta1, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, interleucina-10, c-jun, c-fos, e/ou prostaglandinaE2, e hibridiza com o RNA mensageiro de um TGF-beta1, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, interleucina-10, c-jun, c-fos, e/ou gene de prostaglandina E2.
Um outro aspecto desta invenção é a administração de referidapreparação farmacêutica por infusão em um tecido, uma cavidade de corpo,ou um tumor, a uma taxa de fluxo de cerca de 0,1 microL/minuto a cerca de2 mL/minuto, ou por injeção de bolus.
Ainda outro aspecto desta invenção é a aplicação do pelo menosum oligonucleotídeo a um tecido, a um tumor, a uma cavidade de corpo, emquantidades de cerca de 0,15 nmol a cerca de 3 micromols, quando adminis-trado a um tumor, a um tecido, ou a uma cavidade de corpo selecionados apartir do grupo de cavidade de junta ou espaço ventricular, respectivamente,em quantidades de cerca de 0,005 micromol a cerca de 0,06 mmol, quandoadministrado a uma grande cavidade de corpo, tal como espaço intraperito-neal ou o espaço pleural em quantidades de cerca de 0,005 micromol a cer-ca de 0,05 mmol.
As vantagens adicionais das concretizações de modificaçõesdescritas nesta invenção são eficiência aumentada, afinidade aumentadapara ácido nucléico alvo, entendimento celular aumentado, segurança au-mentada, menos efeitos colaterais, e estabilidade aumentada na presençade nucleases.
Figuras
A figura 1 mostra o número de pacientes de astrocitoma ana-plástico com sintomas devido a progressão da doença após tratamento com10 microM e 80 microM de soluções (0,9% de cloreto de sódio) do oligonu-cleotídeo hibridizado com o mRNA de TGF-beta2, identificado na listagemde seqüência SEQ ID NO 5, administrado intratumoralmente por distribuiçãoaumentada de convecção CED à uma taxa de fluxo de 4 microL/min. Con-forme pode ser visto na figura 1, o número de pacientes de astrocitoma ana-plástico com sintomas devido a progressão de tumor, bem como o grau eseveridade destes efeitos após tratamento com 10 MicroM de solução doreferido oligonucleotídeo, reduziu comparado a pacientes infundidos com 80microM de solução de referido oligonucleotídeo. Ver mais detalhes no E-xemplo 3. Os graus foram definidos de acordo com a Escala de ToxicidadeNCI CTC Versão 2.0. Os SAEs (=eventos adversos sérios) foram definidoscomo qualquer ocorrência médica adversa como um resultado de tal dose,que, por exemplo, resulta em efeitos que ameaçam a vida, requerem hospi-talização do paciente, ou prolongamento da hospitalização existente.A figura 2 mostra a redução de tamanho do tumor em um par demeses em quatro pacientes de astrocitoma anaplástico tratados com 10 mi-croM (figura 2A, 2B, 2C) e 80 microM (figura 2D) de solução (0,9% de cloretode sódio, DAB7) do oligonucleotídeo de anti-sentido contra mRNA de TGF-beta2, identificado na listagem de seqüência com SEQ ID NO 5, administra-do intratumoralmente por distribuição aumentada de convecção. Para maio-res detalhes, ver Exemplo 10. Os três pacientes tratados com 10 microM desolução (figura 2A, 2B, 2C), uma redução de tamanho do tumor em um perí-odo de cerca de 2 a 5 meses foi observada na faixa de cerca de 30% a cer-ca de 66%, pelo que o paciente tratado com 80 microM mostrou uma au-mento no crescimento do tumor (figura 2D). Para maiores detalhes, ver E-xemplo 10.
A figura 3 representa qualitativamente a eficiência e toxicidadede oligonucelotídeos correlacionadas com a concentração. O eixo verticalqualitativamente mostra toxicidade e eficiência, e o eixo horizontal mostra aconcentração do oligonucleotídeo. Pode ser visto na figura que um pico déeficiência é alcançado em uma concentração muito mais baixa do que con-centrações mostrando efeitos tóxicos.
A figura 4 representa a inibição de secreção de TGF-beta2 porcélulas A-172 tratadas com 5 microM, 10 microM e 80 microM do oligonucle-otídeo identificado com SEQ ID NO 5 por 7 dias, mostrada em percentâgemde controle não-tratado (barra 1). A incubação de células A-172 com trêsconcentrações diferentes deste oligonucleotídeo resultou em um meio deinibição por 61,1 % (5 microM, barra 2), 68,1% (10 microM, barra 3), e 56,2%(80 microM, barra 4). Conclusivamente, 10 microM do oligonucleotídeo iden-tificado por SEQ ID NO 5 foi verificado ser o melhor inibidor de expressão deTGF-beta2, comparado a 5 e 80 microM deste oligonucleotídeo. O TGF-beta2 secretado foi quantificado por ELISA. Os resultados são tomados apartir de quatro experimentos independentes. Para maiores detalhes, ver
Exemplo 12.
A figura 5 mostra a razão de pacientes sobrevividos versus tem-po para três grupos de tratamento. Em um grupo, SEQ ID NO 5 foi adminis-trado em uma concentração de 10 microM (linha reta) e 80 microM (linhatracejada). Os pacientes do grupo de controle (linha pontilhada), por outrolado, receberam quimioterapia padrão. Para maiores detalhes, ver exemplo11. Os pacientes que estavam ainda vivos na hora da avaliação, são mos-trados como valores "censurados" com seu respectivo tempo de sobrevivên-cia até avaliação (pontos nas curvas). Este tipo de apresentação é conheci-do como "Curva de Sobrevivência Kaplan-Meier". Os dados mostram que ospacientes tratados com 10 microM de SEQ ID NO 5 têm uma chance muitomelhor de sobrevivência do que aqueles tratados como 80 microM e aquelesdo grupo de controle.
A Listagem de Seqüência representa oligonucleotídeos preferi-dos capazes de hibridizarem com o mRNA de objetivos, tais como TGF-betal (SEQ ID NO 1 a 4), TGF-beta2 (SEQ ID NO 5 a 8), TGF-beta3 (SEQID NO 9 a 38), prostaglandina E2 (SEQ ID NO 30 a 49), VEGF (SEQ ID NO50 a 56), interleucina 10 (SEQ ID NO 57 a 76), c-jun (SEQ ID NO 78 a 83), ec-fos (SEQ ID NO 85 a 93).
Descrição Detalhada da Invenção
A expressão cerca de no contexto desta invenção compreendedesvios a partir do valor absoluto dado no texto a partir de O a 100%, maispreferido de 1 a 80%, ainda mais preferido de 2 a 60%, mais preferido de 3 a40%, mais preferido de 4 a 20%, e ainda mais preferido de 5 a 10% do res-pectivo valor.
O evento adverso no contexto desta invenção é compreendidocomo qualquer ocorrência médica adversa em um paciente ou indivíduo deinvestigação clínica após a administração de uma preparação farmacêuticaque não tem um relacionamento casual com o tratamento da preparaçãofarmacêutica respectiva. Um evento adverso pode, portanto, ser qualquersinal indesejado e não-pretendido (incluindo uma descoberta laboratorialanormal), sintoma, ou doença, por exemplo, devido a progressão da doença.
Outra expressão para evento adverso é sintoma.
Tumor cerebral usado sinonimamente como tumor do cérebro,de acordo com esta invenção, é qualquer tumor do cérebro incluindo metás-tases, metástases derivadas de outras partes do cérebro, ou derivadas dequalquer outro tumor no corpo, e metástases da medula espinhal. O tumorcerebral compreende adicionalmente tumor cerebral primário, astrocitoma,incluindo glioblastoma e oligoastrocitoma, oligodendroglioma e gliosarcoma.
A cavidade no contexto desta invenção implica, por exemplo,cólon, duodeno, íleo, jejuno, cavidade de junta, cavidade pleural, espaçointraperitoneal, lúmen do esôfago, laringe, cavidade maxilar, cavidade nasal,faringe, o reto, o estômago, o trato intestinal, o duto urinário, a bexiga uriná-ria, e o espaço ventricular.
Na presente invenção a expressão doença compreende neo-plasma, metástases, danos neuronais e imunossupressão.
Hibridização, no contexto desta invenção, implica que duas ca-deias de nucleotídeo pelo menos parcialmente formam um filamento duplopor ligação de hidrogênio. O filamento duplo se desenvolve completamentequando as duas cadeias de nucleotídeo têm seqüências de anti-sentido exa-tas. Mas mesmo se qualquer nucleotídeo de um oligonucleotídeo, tambémreferido como bloco de construção de nucleotídeo, é substituído por outronucleotídeo, o respectivo nucleotídeo é modificado, ou mesmo quando umespaçador está no local do respectivo oligonucleotídeo, o oligonucleotídeopode ainda hibridizar com a molécula alvo, geralmente o mRNA de uma pro-teína, e, com isto, inibe a produção de referida proteína.
Metástases no contexto desta invenção significa que pelo menosuma célula se separa ou se dissocia de um tecido tumoral e se move via, porexemplo, o sistema linfático, os vasos sangüíneos, e/ou invadem o tecidocircundante de outra parte do corpo de um mamífero, preferivelmente um serhumano, onde ela assenta e forma novo tecido tumoral.
O termo oligonucleotídeos da invenção envolve quaisquer saisfarmaceuticamente aceitáveis, ésteres ou qualquer outro composto que apósadministração a um mamífero, é capaz de proporcionar o metabolito biologi-camente ativo ou resíduo deste. Isto é acompanhado por hibridização espe-cífica dos compostos com um ou mais ácidos nucléicos que codificam TGF-betal, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, e interleucina-10 e/ou prostaglandinaΕ2
Os termos ácidos nucléicos e oligonucleotídeos são usados si-nonimamente no contexto desta invenção.
Em algumas concretizações, os ácidos nucléicos não são ácidosnucléicos de anti-sentido, significando que eles não funcionam por ligaçãoparcialmente ou completamente à espécies de DNA ou RNA genômicoscomplementares dentro de uma célula, e, desse modo, inibindo a função dereferidas espécies de DNA ou RNA genômicos.
Em uma concretização, os oligonucleotídeos desta invençãotambém compreendem os oligonucleotídeos conforme descritos nas paten-tes EP 069 53 54 e EP 1008649, bem como aqueles dos pedidos de patenteinternacional publicados sob o N0 WO 01/68 146, WO 98/33904, WO99/63975 e WO 99/63975 aqui incorporados por referência. Os oligonucleo-tídeos que hibridizam com TFG-beta em uma concretização preferida inclu-em pelo menos uma seqüência colocada como SEQ ID Nos: 1 a 93.
Os oligonucleotídeos ou ácidos nucléicos incluem oligonucleotí-deos tendo porções que ocorrem não-naturalmente com função similar. Osnucleotídeos que ocorrem naturalmente, bem como os nucleotídeos que o-correm não-naturalmente, modificações e espaçadores, são também referi-dos como bloco de construção de nucleotídeo. O bloco de construção denucleotídeo mais comum é um nucleotídeo. Os nucleotídeos modificados ousubstituídos, bem como espaçadores, são também compreendidos pela ex-pressão do bloco de construção de nucleotídeo.
Estes oligonucelotídeos modificados ou substituídos são fre-qüentemente preferidos sobre formas nativas devido a propriedades desejá-veis, tais como entendimento celular aumentado, afinidade aumentada paraácido nucléico alvo (por exemplo, proteína), localização intracelular alterada,e estabilidade aumentada na presença de nucleases. As modificações dosoligonucleotídeos aqui usadas compreendem qualquer modificação químicado açúcar, da porção base e/ou da ligação de internucleosídeo.
Em uma concretização, a estrutura de anel do grupo ribose dosnucleotídeos no oligonucleotídeo modificado ou polinucleotídeo tem oxigêniona estrutura de anel substituído com N-H, N-R (com R sendo uma alquila,mais preferida alquila com 1 a 20 átomos de carbono, alquilas muito preferi-das são metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, ou R é um substitu-inte arila), S e/ou metileno.
A preparação farmacêutica no contexto desta invenção compre-ende um oligonucleotídeo desta invenção dentro de um veículo farmaceuti-camente aceitável.
Em uma concretização, os ácidos nucléicos ou oligonucleotídeoscom uma base covalentemente modificada e/ou açúcar, incluem, por exem-pio, ácidos nucléicos tendo açúcares de estrutura principal que são covalen-temente fixados a grupos orgânicos de baixo peso molecular outros do queum grupo hidroxila na posição 3' e/ou 2', ou um grupo fosfato na posição 5'.
Desse modo, ácidos nucléicos modificados podem adicionalmente incluirpelo menos um grupo ribose 2'-0 substituído. Para proposta desta invenção,o termo "2'-substituído" significa substituição do 2'-OH da molécula de ribo-se. O O pode ser substituído com N, S, e o substituinte pode adicionalmentecompreender uma alquila com 1 a 20 átomos de carbono, por exemplo, O-alquila, S-alquila, NH-alquila, N-alquila, O-arila, S-arila, NH-arila, O-aralquila,S-aralquila, NH-aralquila. Concretizações preferidas de grupos 2'-0-alquilasão metóxi-, etóxi-, propilóxi-, isopropilóxi-, metóxi-etóxi. Modificações adi-cionais de blocos de construção de nucleotídeo são também dadas pelaspatentes dos Estados Unidos 6.143.881, 5.591.721, 5.652.355, 5.962.425,5.969.116 e 5.914.396, aqui incorporadas por referência. Outra concretiza-ção preferida é um bloco de construção de nucleotídeo, compreendendo pe-Io menos uma deoxirribose, com um grupo alquila ligado ao 2'-carbono. Aalquila pode ter cerca de 1 a cerca de 30 carbonos, 1 a cerca de 20 carbo-nos, 1 a cerca de 10 carbonos, ou 1 a cerca de 5 carbonos. Grupos alquilapreferidos são grupo etila-, propila-, isopropila-, butila, altamente preferidosendo o grupo metila.
Em ainda outra concretização, os ácidos nucléicos modificadosincluem açúcares tal como arabinose ao invés de ribose. Desse modo, osácidos nucléicos podem ser heterogêneos na composição de estrutura prin-cipal contendo, desse modo, qualquer combinação possível de unidades depolímero ligadas juntas, tais como ácidos peptídeo-nucléicos (que têm estru-tura principal de amino ácido ligado à bases de ácido nucléico). Em algumasconcretizações, os ácidos nucléicos são homogêneos na composição deestrutura principal.
As purinas substituídas e pirimidinas dos ácidos nucléicos inclu-em purinas e pirimidinas padrões, tais como citosina, bem como análogosbases, tais como bases substituídas (Wagner, et al., 1993). As purinas e pi-rimidinas incluem, mas não estão limitadas a, adenina, citosina, guanina,tirnina, inosin, 5-metilcitosina, 2-aminopurina, 2-amino-6-cloropurina, 2,6-diaminopurina, hipoxantina, e outras porções aromáticas substituídas e não-substituídas de nucleobases que ocorrem naturalmente e não-naturalmente.
Os nucleotídeos simples em cada oligonucleotídeo podem con-ter as mesmas modificações, podem conter combinações destas modifica-ções, ou podem combinar estas modificações com ligações de fosfodiéster.Os métodos de tornar oligonucleotídeo nuclease resistente incluem, mas nãoestão limitados a, modificar covalentemente as bases de purina ou pirimidi-na. Por exemplo, as bases podem ser metilatadas, hidroximetilatadas, ou, deoutro modo, substituídas (por exemplo, glicosilatadas), tal que os oligonucle-otídeos ou polinucleotídeos são tornados substancialmente resistentes aácido e nuclease.
Em uma concretização preferida, pelo menos uma extremidadedo oligonucleotídeo é uma biotina, análogo de biotina, avidina, ou análogode avidina.· Estas moléculas têm a capacidade de bloquear a degradação dooligonucleotídeo protegido, e proporcionar meios para alta fixação de afini-dade dos ácidos nucléicos modificados aa estrutura principal sólido. Deriva-dos de avidina e biotina, que podem ser usados para preparar os reagentesdesta invenção, incluem streptavidina, avidina succinilatado, avidina mono-mérico, biocitina (biotina-epsilon-N-lisina), biocitina hidrazida, derivados deamina ou sulfidril de 2-iminobiotina e biotinil-épsilon-aminocapróico hidrazi-da. Derivados de biotina adicionais, tais como biotina-N-hidroxissuccinimidaéster, ácido biotinil-épsilon-aminocapróico de éster de -N-hidroxissuccinimida, 6-(biotina amido)hexanoato de sulfosuccinimidila, N-hidroxissuccnimideiminobiotina, biotinbromoacetilhidrazida, p-diazobenzoilbiocitina e 3-(N-maleimidopropionil)-biocitina, podem também serem usadoscomo grupos de bloqueio terminal nos oligonucleotídeos da presente invenção.
Em ainda outra concretização, as unidades bases são mantidaspara hibridização com um composto alvo de ácido nucléico apropriado. Umtal composto oligomérico,um oligonucleotídeo mimético que foi mostradopara ter excelentes propriedades de hibridização, é referido como um ácidonucléico peptídeo (PNA). Nos compostos de PNA, a estrutura principal deaçúcar de um oligonucleotídeo é substituída com um estrutura principal con-tendo imida, em particular um estrutura principal de aminoetilglicina. Os nu-cleobases são ligados direta ou indiretamente a átomos aza nitrogênio daporção amida da estrutura principal. As Patentes dos Estados Unidos repre-sentativas que ensinam a preparação de compostos de PNA incluem, masnão estão limitadas a, Patente dos Estados Unidos N- 5.539.082, 5.714.331e 5.719.262, cada uma da qual sendo aqui incorporada por referência. Ensi-namento adicional de compostos de PNA pode ser encontrado em Nielsenet. al., 1991.
Outros oligonucleotídeos de estrutura principal modificados in-cluem, por exemplo, fosforotioatos, fosforotioatos quirais, fosforoditioatos,fosforotriésteres, aminoalquil-fosforotriésteres, metila- e outros alquila-fosfonatos, incluindo 3'-alquileno fosfonatos e fosfonatos quirais, fosfinatos,fosforamidatos, incluindo 3'-aminofosforamidato e aminoalquilfosforamidatos,tiono-fosfor-amidatos, tionoalquilfosfonatos, tionoalquilfosfotriéster, e tiono-fosfor-amidatos, tionoalquilfosfonatos, tionoalquilfosfotriéster, e boranofosfa-tos tendo ligações normais 3'-5', análogos ligados 2'-5' destes, e aquelestendo polaridade invertida na qual os pares adjacentes de unidades de nu-cleoside são 3'-5' a 5'-3', ou 2'-5' a 5'-2' ligados. Vários sais, sais misturados,e formas ácidas livres são também incluídos. Uma concretização preferida éo sal de sódio do ácido nucléico.
Em algumas concretizações, pelo menos um nucleotídeo de umoligonucleotídeo é modificado conforme descrito em uma das modificaçõesacima. As modificações podem cobrir o oligonucleotídeo ou contínua ou irre-gularmente.
Em ainda outra concretização, pelo menos duas modificaçõesconforme descritas acima são combinadas dentro de um oligonucleotídeo.
Em outra concretização, 1 a cerca de 12, ou 1 a cerca de 8, ou 1a cerca de 4, ou a cerca de 2 ligações de oligonucleotídeo e/ou nucleotídeono 3' e/ou 5' terminal do oligonucleotídeo são modificadas conforme descritoacima.
Em uma concretização, os oligonucleotídeos desta invenção hi-bridizam com um alvo, por exemplo, TGF-beta ou seus subtipos mais prefe-ridos TGF-beta1, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, IL-10, e PGE2 baixo. Estesalvos são bem-conhecidos a alguém versado na técnica. A estrutura de anti-sentido do mRNA de referidos alvos é também dada noPCT/EP2004/053604, aqui incorporado por referência.
O alongamento de cadeia significa que os oligonucleotídeos dalistagem se seqüência, e outros oligonucleotídeos que têm nucleotídeos adi-cionais da seqüência da respectiva estrutura de anti-sentido do mRNA dereferidos alvos, estão ainda dentro do escopo desta invenção. Os nucleotí-deos adicionais em uma concretização são de acordo com a região de codi-ficação do mRNA; em ainda outra concretização, os nucleotídeos adicionaissão também da parte de não-codificação do mRNA, incluindo introns e e-xons. Os nucleotídeos adicionais compreendem cerca de 1 a cerca de10.000 nucleotídeos, cerca de 1 a cerca de 5.000 nucleotídeos, cerca de acerca de 3.000 nucleotídeos, cerca de a cerca de 1.000 nucleotídeos, cercade 1 a cerca de 500 nucleotídeos, cerca de 1 a cerca de 100 nucleotídeos,cerca de 1 a cerca de 50 nucleotídeos, cerca de 1 a cerca de 25 nucleotí-deos, cerca de 1 a cerca de 10 nucleotídeos, cerca de 1 a cerca de 5 nucleo-tídeos, cerca de 1 a cerca de 2 nucleotídeos, ligados a pelo menos um doterminal 3' e/ou 5'. Em ainda outra concretização, alguns blocos de constru-ção de nucleotídeo destes oligonucleotídeos ou polinucleotídeos podem sermodificados pelo espaçador e/ou modificações conforme aqui descrito.Sais farmaceuticamente aceitáveis se referem a sais fisiológicaou farmaceuticamente aceitáveis dos compostos usados na invenção, quesignifica que os sais retêm as atividades biológicas dos compostos originaissem efeitos toxicológicos indesejados.
Em uma concretização, o oligonucleotídeo, ou seu derivado ati-vo, é um oligonucleotídeo de filamento simples. Em ainda outra concretiza-ção, o oligonucleotídeo é um filamento duplo, que significa que o oligonucle-otídeo é hibridizado completa ou parcialmente com um segundo nucleotídeoque tem cerca de 50% a cerca de 100% da estrutura de anti-sentido exatade referido nucleotídeo. Isto pode resultar em um filamento duplo no qualambos oligonucleotídeos hibridizam com menos resistência de ligação, ouem filamento duplo com extremidades de sobreposição. Os dois oligonucleo-tídeos devem ter o mesmo comprimento; em outras palavras, eles têm amesma quantidade de blocos de construção de nucleotídeo, ou seu compri-mento deve diferir, também resultando em extremidades de sobreposiçãoem uma ou ambas extremidades.
A expressão espaçador no contexto desta invenção compreendequalquer bloco de construção de nucleotídeo que não seja obviamente umderivado ou uma modificação de um nucleotídeo, mas liga dois blocos deconstrução de nucleotídeo em um modo que o oligonucleotídeo resultanteainda hibridiza com seu alvo, por exemplo, mRNA ou TGF-beta1, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, prostaglandina E2, c-fos, c-jun, ou interleucina-10.
Uma concretização da invenção é o uso de pelo menos um oli-gonucleotídeo com um comprimento de 8 a 30 blocos de construção de nu-cleotídeo para fabricação de uma preparação farmacêutica para a profilaxiae/ou o tratamento de doenças que são moduladas por TGF-beta1, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, interleucina-10, c-jun, c-fos, e/ou prostaglandinaE2 em um mamífero, no qual referido oligonucleotídeo hibridiza com umRNA mensageiro de um TGF-beta1, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, interleu-cina-10, c-jun, c-fos, e/ou gene de prostaglandina E2, e no qual a referidapreparação compreende referido oligonucleotídeo em uma concentração decerca de 1 microM a cerca de 25 microM.Em outras concretizações, a preparação farmacêutica desta in-venção compreende oligonucleotídeos em uma concentração de cerca de 1microM a cerca de 15 microM, mais preferida de cerca de 2,5 microM a cer-ca de 14 microM, mais preferida de cerca de 4 microM a cerca de 13 mi-croM, mais preferida de cerca de 5 microM a cerca de 12,5 microM, maispreferida a concentração dos oligonucleotídeos é cerca de 20 microM, cercade 10 microM, ou cerca de 5 microM.
Em ainda outra concretização, a preparação farmacêutica destainvenção compreende oligonucleotídeos em uma concentração de cerca de50 microM a cerca de 150 microM, mais preferida em concentração de cercade 60 microM a cerca de 100 microM, ainda mais preferida de cerca de 70microM a cerca de 90 microM, e mais preferida cerca de 80 microM, 60 mi-croM ou 100 microM.
Onde os oligonucleotídeos desta invenção são filamentos sim-pies, em algumas concretizações pelo menos partes do ácido nucléico defilamento simples são filamento duplos. As moléculas de trançadas duplossão mais estáveis in vivo, enquanto as moléculas de trançadas simples têmatividade aumentada.
Em uma concretização, o oligonucleotídeo tem um comprimentoentre cerca de 6 a cerca de 30 nucleotídeos, e é complementar ao mRNAdos alvos TGF-beta-1, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF, interleucina-10, c-jun,c-fos, e prostaglandina E2. Em concretizações mais preferidas, os oligonu-cleotídeos desta invenção têm comprimentos de cerca de 7 a cerca de 25nucleotídeos, de cerca de 8 a cerca de 20 nucleotídeos, ainda mais preferidode cerca de 12 a 18 nucleotídeos. Concretizações preferidas de oligonucleo-tídeos utilizáveis nesta invenção são mostradas na listagem de seqüênciasob SEQ ID NOs 1 a 93; concretizações muito preferidas são SEQ ID NOs 1a 38, mais preferidas são SEQ ID NOs 2 e/ou 5.
Outros oligonucleotídeos utilizáveis nas preparações farmacêuti-cas de acordo com esta invenção são os oligonucleotídeos descritos na lis-tagem de seqüência respectivamente os exemplos de EP 1 089 764, EP 0695 534, PCT/EP98/00497 e PCT/EP2005/002101, aqui incorporados porreferência.
Em outras concretizações, o pelo menos um oligonucleotídeopara a fabricação de uma preparação farmacêutica compreende pelo menosuma ligação de fosforotioato entre dois blocos de construção de nucleotídeo.
A ligação de fosforotioato pode cobrir 0% - 5%, 5% a 10%, 10% a 15%, 15%a 20%, 20% a 25%, 25% a 30%, 30% a 35%, 35% a 40%, 40% a 45%, 45%a 50%, 50% a 55%, 55% a 60%, 60% a 65%, 65% a 70%, 70% a 75%, 75%a 80%, 80% a 85%, 85% a 90%, 90% a 95%, ou 95% a 100% das ligações.
As ligações de fosforotioato podem ser difundidas regular ou irregularmentesobre o oligonucleotídeo. Em algumas concretizações, o fosforotioato é a-cumulado em ou uma ou ambas das extremidades 3' e/ou 5'. Outra concreti-zação preferida é um oligonucleotídeo onde todas as ligações entre os nu-cleotídeo são fosforotioatos.
Em uma concretização, o oligonucleotídeo é um oligonucleotídeode filamento simples. Trança simples significa que todos os blocos de cons-trução de oligonucleotídeo estão em uma linha, e não hibridizam com umsegundo oligonucleotídeo ou oligonucleotídeo de anti-sentido e, de outromodo, não se ligam.
Em ainda outras concretizações, os oligonucleotídeos desta in-venção são usados para a profilaxia e/ou o tratamento de uma doença sele-cionada a partir do grupo de câncer, metástases, doença do sistema nervo-so, e imunissupressão.
Em outras concretizações, as preparações farmacêuticas dosoligonucleotídeos são administradas por infusão em um tecido, em um tu-mor, ou em uma cavidade do corpo. Em concretizações mais preferidas, otecido é selecionado a partir do grupo de duto de bile, bexiga, osso, tutanodo osso, cérebro, seio, cólon, endométrio, epitélio, cabeça, cabeça e pesco-ço, intestino, juntas, rim, laringe, fígado, pulmão, nodo linfático, vasos linfáti-cos, músculo, esôfago, ovário, pâncreas, próstata, reto, duto urinário, pele esuas camadas, baço, estômago, testículos, timo, tireóide, amídala, ou útero,e/ou é administrado ao respectivo tumor deste tecido.
Em uma concretização mais preferida, a preparação farmacêuti-ca é administrada ao tumor no cérebro, preferivelmente o tumor do cérebrosendo selecionado a partir do grupo de astrocitoma, incluindo glioblastoma eoligogastrocitoma.
Em outra concretização, a preparação farmacêutica de oligonu-cleotídeos é administrada em uma cavidade de corpo, selecionada a partirdo grupo de duto de bile, cólon, cavidade de junta, cavidade pleural, espaçointraperitoneal, no reto, no trato intestinal, no duto urinário, na bexiga unirá-ria, e no espaço ventricular.
Em ainda outras concretizações desta invenção, as preparaçõesfarmacêuticas compreendendo pelo menos um oligonucleotídeo desta in-venção são administradas a um tumor ou a um tecido, a uma cavidade dejunta ou a um espaço ventricular com uma taxa de fluxo de cerca de 0,1 mi-croL/min a cerca de 0,1 mL/min. Preferidos adicionais são fluxos de cerca de0,5 microL/min a cerca de 0,05 mL/min, mais preferidas de cerca de 0,8 mi-croL/min a cerca de 0,04 mL/min, mais preferida de cerca de 1 microL/min acerca de 0,02 mL/min, mais preferida de cerca de 1 microL/min a cerca de10 microL/min, mais preferidas são cerca de 4 microL/min. Em uma concreti-zação mais preferida, a preparação farmacêutica é administrada nestas ta-xas de fluxo em um tumor do cérebro, mais preferida em astrocitoma, inclu-indo glioblastoma e oligoastrocitoma.
Em outra concretização, a preparação farmacêutica é adminis-trada nas cavidades de corpo que não são o espaço ventricular ou cavidadede junta, por exemplo, cólon, cavidade pleural, espaço intraperitoneal, o reto,o estômago, o trato intestinal, o duto urinário, ou a bexiga urinária. Nestasconcretizações, a preparação farmacêutica é administrada em taxas de fluxode cerca de 5 microL/min a cerca de 2 mL/min, mais preferivelmente de cer-ca de 0,05 mL/min a cerca de 1 mL/min, ainda mais preferidas de cerca de0,1 mL/min a cerca de 0,5 mL/min, ainda mais preferidas de cerca de 0,3mL/min a cerca de 0,4 mL/min, mais preferidas de cerca de 0,35 mL/min.
Em ainda outras concretizações, os oligonucleotídeos desta in-venção são usados para a profilaxia e/ou tratamento de uma doença sele-cionada a partir do grupo de câncer, metástases, doença do sistema nervo-so, e imunossupressão.
Em concretizações preferidas, câncer, metástases, sistema ner-voso, e/ou imunossupressão são tratados com os respectivos oligonucleotí-deos que hibridizam com mRNA dos alvos de TGF-beta1, TGF-beta2, TGF-beta3, VEGF1 interleucina-10, c-jun, c-fos e/ou prostaglandina E2, aindamais preferidas são seqüências identificadas na listagem de seqüência comSEQ ID Nos 1-93. Seqüências preferidas que hibridizam com o mRNA deTGF-beta1 são identificadas na listagem de seqüência com SEQ ID Nos 1-4,mais preferida é SEQ ID NO 2. Seqüências preferidas que hibridizam com omRNA de TGF-beta2 são identificadas na listagem de seqüência com SEQID Nos 5-8, mais preferida é SEQ ID NO 5. Seqüências preferidas que hibri-dizam com o mRNA de TGF-beta3 são identificadas na listagem de seqüên-cia com SEQ ID Nos 9-38. Seqüências preferidas que hibridizam com omRNA de prostaglandina E2 são identificadas na listagem de seqüência comSEQ ID Nos 39-49. Seqüências preferidas que hibridizam com o mRNA deinterleucina 10 são identificadas na listagem de seqüência com SEQ ID Nos57-76. Seqüências preferidas que hibridizam com o mRNA de c-jun são i-dentificadas na listagem de seqüência com SEQ ID Nos 78-83. Seqüênciaspreferidas que hibridizam com o mRNA de c-jun são identificadas na Iista-gem de seqüência com SEQ ID Nos 85-93.
Outra concretização de uma doença do sistema nervoso é a es-clerose lateral amiotrópíca. Em uma concretização preferida, os danos neu-ronais são tratados com os respectivos oligonucleotídeos que hibridizamcom o mRNA dos alvos c-jun ou j-fos, ainda mais preferidas são seqüênciasc-jun identificadas na listagem de seqüência com SEQ ID Nos 78-83, respec-tivamente seqüências c-fos identificadas na listagem de seqüência com SEQID Nos 85-93.
Em uma concretização, a preparação farmacêutica é administra-da com um sistema de aplicação. Um sistema de aplicação preferido com-preende uma bomba portátil ligada com tubos flexíveis a um sistema de ori-fício. O sistema de orifício é ligado a um cateter de infusão cirurgicamenteimplantado no centro de um tumor, um tecido, ou terminando em uma cavi-dade do corpo. Em outra concretização, vários cateteres de infusão são u-sados para infusão da preparação farmacêutica. Em ainda outras concreti-zações, os cateteres de infusão estão posicionados não no centro do tumorou tecido, mas estão posicionados na margem do tecido e/ou tumor infundi-dos com a preparação farmacêutica. Os sistemas de aplicação utilizáveissão também descritos no pedido de patente internacional PCT/EP2004/004211 aqui incorporado por referência.
O volume total por dia da preparação farmacêutica preferivel-mente infundida em tumores, tecidos ou cavidades do corpo, selecionadas apartir de cavidade de junta ou espaço ventricular, varia de cerca de 0,15mUdia a cerca de 0,15 L/dia, mais preferido de cerca de 0,7 mlVdia a cercade 0,07 L/dia, ainda mais preferido de cerca de 1,2 mL/dia a cerca de 0,06L/dia, ainda mais preferido de cerca de 2 mL/dia a cerca de 0,03 L/dia, aindamais preferido de cerca de 3 mL/dia a cerca de 15 mL/dia, e mais preferidoeles são cerca de 5,6 mL/dia ou cerca de 11 mL/dia.
Em outra concretização, o volume total de preparação farmacêu-tica preferivelmente infundida em cavidades de corpo grandes, tais comoespaço intraperitoneal ou o espaço pleural, são cerca de 5 mL/dia a cerca de3 Udia, mais preferido cerca de 0,05 L/dia a cerca de 1,5 L/dia, ainda maispreferido cerca de 0,15 L/dia a cerca de 1 L/dia, ainda mais preferido cercade 0,4 L/dia a cerca de 0,6 L/dia, mais preferidos são cerca de 0,5 IVdia.
Em outra concretização, a quantidade total de oligonucleotídeoaplicada em tumores, tecidos ou às cavidades do corpo selecionadas a partirde cavidade de junta ou espaço ventricular por meio desta invenção, é cercade 0,15 nmol a cerca de 3 micromols, mais preferida cerca de 1 nmol a cercade 2 micromols, ainda mais preferida cerca de 0,01 micromol a cerca de 1micromol, ainda mais preferida cerca de 0,02 micromol a cerca de 0,1 mi-cromol, e mais preferida cerca de 0,224 micromol, cerca de 0,112 micromol,cerca de 0,056 micromol, ou cerca de 0,028 micromol.
Na concretização mais preferida, estas quantidades são admi-nistradas em um tumor do cérebro, em uma concretização preferida o tumorde cérebro sendo astrocitoma, incluindo glioblastoma, ou é um oligoastroci-toma.
Para o tratamento de tumores de cérebro, oligonucleotídeos quehibridizam com mRNA de TGF-beta são preferidos, mais preferidos são se-qüências identificadas na listagem de seqüência com SEQ ID Nos 1-38.
Mais preferidos são oligonucleotídeos que hibridizam com TGF-beta2, aindamais preferidos são seqüências identificadas na listagem de seqüência comSEQ ID Nos 5-8. Em uma concretização muito preferida, o oligonucleotídeoé identificado no protocolo de seqüência por SEQ ID NO 5. Em uma concre-tização preferida, SEQ ID NO 5 é administrada na forma de seu sal de sódiotendo um peso molecular de 6142,4 g, respectivamente 7115,3 g, como hi-drato, compreendendo cerca de 54 moléculas de água de cristal por gliconu-cleotídeo.
Em ainda outra concretização, a quantidade total de oligonucleo-tídeo aplicada em cavidades de corpo grandes, tais como cavidade intraperi-toneal ou cavidade pleural por uma preparação farmacêutica desta invenção,é cerca de 0,005 micromol a cerca de 0,05 mmol, mais preferida cerca de0,05 micromol a cerca de 0,025 mmol, mais preferida cerca de 0,1 micromola cerca de 0,01 mmol, e mais preferida cerca de 10 micromol, cerca de 5micromols, ou cerca de 2,5 micromols.
Em outra concretização, a quantidade total de oligonucleotídeoaplicada em tumores, tecidos ou às cavidades do corpo selecionadas a partirde cavidade de junta ou espaço ventricular por meio desta invenção, é cercade 7,5 mmols a cerca de 22,5 micromols, mais preferida cerca de 50 mmolsa cerca de 10 micromols, ainda mais preferida cerca de 0,1 micromol a cercade 5 micromols, ainda mais preferida cerca de 0,4 micromol a cerca de 1micromol, e mais preferida cerca de 0,21 micromol, cerca de 0,28 micromol,ou cerca de 0,35 micromol.
Em uma concretização mais preferida, a quantidade respectiva éadministrada em um tumor de cérebro, a concretização mais preferida dotumor de cérebro é astrocitoma, incluindo glioblastoma ou oligoastrocitoma.
Em ainda outra concretização, a quantidade total de oligonucleo-tídeo aplicada em cavidades de corpo grandes, tais como cavidade intraperi-toneal ou cavidade pleural por uma preparação farmacêutica desta invenção,é cerca de 0,25 micromol a cerca de 0,45 mmol, mais preferida cerca de 1micromol a cerca de 0,5 mmol, mais preferida cerca de 0,01 mmol a cercade 0,1 mmol, e mais preferida cerca de 50 micromols, cerca de 40 micro-mois, ou cerca de 30 micromols.
Em uma concretização, a preparação farmacêutica desta inven-ção é administrada em um tumor, em um tecido, ou em uma cavidade decorpo por cerca de 4 horas a cerca de 8 horas, cerca de 8 horas a cerca de16 horas, cerca de 16 horas a cerca de 24 horas, cerca de 24 horas a cercade 36 horas, cerca de 36 horas a 2 dias, cerca de 2 dias a cerca de 3 dias,cerca de 3 dias a cerca de 5 dias, cerca de 5 dias a cerca de 8 dias, cercade 8 dias a cerca de 11 dias, e cerca de 11 dias a cerca de 15 dias. Esteperíodo de tempo é também referido como curso. Em uma concretizaçãopreferida, a preparação farmacêutica é administrada sobre cerca de 3 a cer-ca de 8 dias. O período de 4 dias e 7 dias é preferido para o tratamento detumor de cérebro, onde o mais preferido do tumor de cérebro é astrocitoma,incluindo glioblastoma, ou oligoastrocitoma.
Em outras concretizações, os oligonucleotídeos em uma prepa-ração farmacêutica são administrados em uma pluralidade de vezes, em ou-tras palavras um curso conforme definido acima é repetido em uma plurali-dade de vezes, preferindo-se 2 a 20 vezes. Em concretizações preferidas, oprocedimento é repetido uma a doze vezes, por exemplo, duas vezes a trêsvezes, quatro vezes a cinco vezes, seis vezes a sete vezes, oito vezes anove vezes, dez vezes a onze vezes, doze vezes a treze vezes, quatorzevezes a quinze vezes, dezesseis vezes a dezessete vezes, dezoito vezes adezenove vezes, ou vinte vezes.
Todos os cursos podem ter a mesma duração, ou podem variar.Em algumas concretizações, o tempo entre dois cursos é entre cerca de 1dia a cerca de 2 dias, cerca de 2 dias a cerca de 3 dias, cerca de 4 dias acerca de 5 dias, cerca de 5 dias à cerca de 7 dias, cerca de 8 dias a cercade 10 dias, cerca de 10 dias a cerca de 2 semanas, cerca de 2 semanas acerca de 3 semanas, cerca de 3 semanas a cerca de 4 semanas, cerca de 4semanas a cerca de 6 semanas, e cerca de 6 semanas a cerca de 12 sema-nas. Em uma concretização preferida, o tempo entre dois cursos varia entrecerca de 2 dias e 8 semanas, mais preferido cerca de 4 dias a cerca de 4semanas, ainda mais preferido cerca de 6 dias a cerca de 12 dias.
Em uma concretização preferida, o oligonucleotídeo dissolvidoem uma solução fisiológica (=isotônica) é administrado por 7 dias e, em se-guida, durante os próximos 7 dias nenhum oligonucleotídeo é administrado.Este curso foi repetido várias vezes.
Em ainda outra concretização, a preparação farmacêutica com-preende pelo menos um oligonucleotídeo e, em adição, pelo menos um ad-juvante adicional. Para maiores detalhes sobre adjuvantes, também referidoscomo imunoestimulantes, ver também EP 1 089 764. Em uma concretizaçãopreferida, o adjuvante é um oligonucleotídeo compreendendo um CpG-motiv.Para detalhes adicionais sobre CpG motivos, ver Krieg 2002.
As concretizações preferidas da preparação farmacêutica destainvenção são usadas em mamíferos, onde a concretização preferida de ma-mífero é um ser humano. De outro modo sendo útil no tratamento de um serhumano, a presente invenção é também útil para outros indivíduos, incluindoanimais veterinários, animais exóticos e animais de fazenda, incluindo mamí-feros, roedores e similares. Os mamíferos incluem cavalos, cães, porcos,gatos, ou primatas (por exemplo, um macaco, um chimpanzé, ou uma lêmu-re). Os roedores incluem ratos, camundongos, esquilos, ou porqueinhos-da-índia.
Em uma concretização, a preparação farmacêutica com o oligo-nucleotídeo desta invenção é administrada a um mamífero, primeiro peladissolução do oligonucleotídeo com uma concentração de cerca de 1 a 150microM em um veículo farmaceuticamente aceitável à uma solução, e, emseguida, administração de referida solução à uma taxa de fluxo de cerca de0,1 microL/minuto a cerca de 2 mL/minuto a um tecido, a um tumor, ou auma cavidade de corpo do mamífero. Concentrações preferidas, fluxos eseqüências são dados acima nesta invenção.
Em uma concretização, a preparação farmacêutica com pelomenos um oligonucleotídeo desta invenção para o tratamento de tumorese/ou metástases é administrada a um mamífero em uma quantidade resul-tante em uma concentração deste oligonucleotídeo variando de cerca de 1 acerca de 50 micrograma por 1 cm3 do respectivo tumor.
Em ainda outra concretização, a preparação farmacêutica é ad-ministrada em um modo que a concentração do oligonucleotídeo é cerca de2 a cerca de 20 microgramas por 1 cm3 de tecido de tumor por dia, mais pre-ferida são cerca de 3 a cerca de 10 microgramas por 1 cm3 de tecido de tu-mor por dia.
A preparação farmacêutica da presente invenção pode ser ad-ministrada em um número de modos dependendo se tratamento local ousistêmico é desejado, e da área a ser tratada. A composição farmacêutica dapresente invenção pode ser administrada por infusão diretamente em umtecido, tumor e/ou cavidade de corpo. A administração de preparações far-macêuticas da presente invenção pode ser efetuada por qualquer meio co-nhecido àqueles versados na técnica. Rotas de administração incluem, masnão estão limitadas a, parenteral (por exemplo, intramuscular), intraperitone-al, intraventricular, intracerebral, intratumoral, intracerebroventricular, intrate-cal, intrauterina, infusão e injeção na bexiga, e pleura.
As preparações farmacêuticas incluem preparações farmacêuti-cas contendo o oligonucleotídeo em uma concentração de cerca de 1 mi-croM a cerca de 25 microM. Em outra concretização preferida, a preparaçãofarmacêutica contém o oligonucleotídeo em uma concentração de cerca de50 microM a cerca de 150 microM. Concentrações mais preferidas são da-das acima. Tais preparações podem incluir soluções aquosas estéreis quepodem também conter tampões, diluentes, e outros aditivos adequados, taiscomo, mas não limitados a, intensificador de penetração, veículos ou excipi-entes aceitáveis. O termo preparação farmacêutica implica que os líquidosou substâncias desta composição são puros e/ou combinados com veículosfarmaceuticamente aceitáveis.
O termo veículo farmaceuticamente aceitável significa uma oumais cargas líquidas compatíveis, diluentes, ou substâncias de encapsula-mento que são adequados para administração a um ser humano ou outromamífero. O termo "veículo" denota um ingrediente orgânico ou inorgânico,natural ou sintético, com o qual o ingrediente ativo é combinado para facilitara aplicação. Os componentes das preparações farmacêuticas também sãocapazes de serem combinados com os compostos da presente invenção, eum com o outro, de tal maneira que não existe interação que prejudicariasubstancialmente a eficiência farmacêutica desejada. Tais veículos capaci-tam os oligonucleotídeos da invenção a serem formulados como líquidos,géis, xaropes, suspensões, emulsões.
Conforme descrito acima, as composições farmacêuticas podemtambém incluir microcápsulas, nanocápsulas, micro e nanoesferas, emul-sões e suspensões, oligonucleotídeos revestidos em partículas de ouro mi-croscópicas, ou preparações com liberação de oligonucleotídeos, em cujosexcipientes de preparação e aditivos e/ou auxiliares, tais como desintegran-tes, Iigantes aglutinantes, agentes de revestimento, agentes de intumesci-mento, lubrificantes, ou solubilizadores, são usados costumeiramente.
Para a infusão no estômago, intestino, cólon ou reto, um enemaé útil.
Para uma breve revisão dos presentes métodos de distribuiçãode fármaco, ver Langer (1990), que é aqui incorporado por referência.
Em ainda outra concretização, os oligonucleotídeos estão pre-sentes em veículos farmacêuticos para administração parenteral por infusão.As formulações por infusão podem estar presentes em uma forma de dosa-gem de unidade com um conservante adicionado. As composições farma-cêuticas tomam tais formas como suspensões, soluções ou emulsões emveículos oleosos ou aquosos, e contêm agentes formulatórios, tais comoagentes de suspensão, de estabilização e/ou de dispersão.
Em uma concretização, os veículos farmacêuticos para adminis-tração parenteral incluem soluções aquosas dos oligonucleotídeos na formasolúvel em água. Em uma concretização preferida, o oligonucleotídeo é dis-solvido em uma solução fisiológica (isotônica), mais preferido solução decloreto de sódio 0,9%.Em ainda outra concretização, uma suspensão dos compostos épreparada como infusão oleosa apropriada. Solventes lipofílicos adequadosou veículos incluem óleos graxos, tal como óleo de gergelim, ou ésteres deácido graxos sintéticos, tais como oleato de etila ou triglicerídeos, ou Iipos-somas. Suspensões de infusão aquosas compreendem substâncias queaumentam a viscosidade da suspensão, tais como sódio carboximetil celulo-se, sorbitol ou dextrano. Opcionalmente, as suspensões podem tambémconter estabilizadores adequados, ou agentes que aumentam a solubilidadedos compostos para permitir a preparação de soluções altamente concen-tradas.
Em ainda outra concretização, os oligonucleotídeos podem serna forma de pó para reconstituição com um veículo adequado, por exemplo,água livre de pirogênio estéril, antes do uso. Em outras concretizações, ooligonucleotídeo é reconstituído com uma solução isotônica. A solução iso-tônica é qualquer solução aquosa com uma pressão osmótica tal alta quantoa pressão osmótica do corpo. Comumente usadas são soluções de sais, a-çúcares, e assim por diante. Em concretizações preferidas, a solução isotô-nica é uma solução de cloreto de sódio 0,9%, ou uma solução de Ringer-lactato (por exemplo, DAB7).
Em ainda outra concretização, os compostos ativos podem serna forma de um concentrado para diluição com um veículo adequado, porexemplo, água livre de pirogênio estéril, antes do uso.
Em ainda outra concretização, os compostos são formulados emcomposições retais ou vaginais, tais como supositórios, ou enemas de re-tenção, ou comprimidos, por exemplo, contendo bases de supositório con-vencionais, tais como manteiga de cacau, ou outros glicerídeos.
Em ainda outra concretização, os compostos são formuladoscomo uma preparação de depósito. Em uma concretização, tais preparaçõesde ação longa são formuladas com materiais poliméricos ou hidrofóbicosadequados (por exemplo, como uma emulsão em um óleo aceitável), ou re-sinas de troca de íon, ou como derivados esparsamente solúveis lentos, porexemplo, como um sal esparsamente solúvel lento.Em outras concretizações, sistemas de liberação incluem siste-mas de distribuição de liberação por tempo, de liberação retardada, ou deliberação sustentada. Tais sistemas podem evitar administração repetida doscompostos, aumentando a conveniência ao indivíduo e ao médico. Muitostipos de sistemas de distribuição de liberação são disponíveis e conhecidosàqueles versados na técnica.
Em uma concretização, o sistema de liberação inclui sistemasbaseados em polímero, tais como poli(lactida-glicolida), copolioxalatos, poli-caprolactonas, poliesteramidas, poliortoésteres, ácido polihidroxibutírico, epolianidridos, mais preferidos polianidridos com peso molecular de mais doque 20.000 Da. Em uma concretização preferida, o polianidrido é uma poli-condensação de ácidos dicarbônicos com alto peso molecular. Maiores deta-lhes, ver EP 0260415. Microcápsulas das drogas contendo polímeros prece-dentes são descritas em, por exemplo, Patente dos Estados Unidos Ng5.075.109.
Em outra concretização, aperfeiçoamento de entendimento deoligonucleotídeò foi alcançado com sistemas diferentes de vetorização, inclu-indo Iipossomas (neutro, catiônico, imunolipossoma), micro e nanopartículas,polímeros, ou fixação covalente a um veículo (C. Lefebure et al., 1995). Atransfecção mediada por lipídio foi também usada para distribuir oligonucleo-tídeos (Wang e Martini, 1996). Em outra concretização, os sistemas dé dis-tribuição incluem sistemas de não-polímeros que são, por exemplo, lipídeos,incluindo esteróis, tais como colesterol, colesterol ésteres e ácidos graxos,ou gorduras neutras, tais como mono-, di- e triglicerídeos, sistemas de Iibe-ração de hidrogel, sistemas siláticos, sistemas baseados em peptídeos, esimilares.
Exemplos específicos incluem, mas não estão limitados a: (a)sistemas erosionais nos quais um agente da invenção está contido em umaforma dentro de uma matriz, tal como aquela descrita nas Patentes dos Es-tados Unidos N9S 4.452.775, 4.675.189 e 5.736.152, e (b) sistemas difusio-nais em que um componente ativo permeia a uma taxa controlada de umpolímero, tal como descrito nas Patentes dos Estados Unidos NQs 3.854.480,5.133.974 e 5.407.686.
Em ainda outras concretizações, os oligonucleotídeos são for-mulados com GELFOAM®, um produto comercial consistindo em fibras decolágeno modificadas que se degradam varagosamente.
Em uma concretização, as composições farmacêuticas tambémcompreendem veículos de fase sólida ou gel ou excipientes adequados. Osexemplos de tais veículos ou excipientes incluem, mas não estão limitadosa, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares, amidos, derivadosde celulose, gelatina, e polímeros, tais como polietileno glicóis.
Em uma concretização, os oligonucleotídeos são administradospuros, ou na forma de um sal farmaceuticamente aceitável. Os sais têm queser farmaceuticamente aceitáveis, mas sais não-farmaceuticamente aceitá-veis podem convenientemente serem usados para preparar sais farmaceuti-camente aceitáveis destes. Tais sais incluem, mas não estão limitados a,aqueles preparados a partir dos seguintes ácidos: clorídrico, bromídrico, sul-fúrico, nítrico, fosfórico, malêico, acético, salicílico, p-tolueno, sulfônico, tartá-rico, cítrico, metano sulfônico, fórmico, malônico, succínico, naftaleno-2-sulfônico, e benzeno sulfônico. Também, tais sais podem ser preparadoscomo sais de metal alcalino ou sais de metal alcalino terroso, tais como saisde sódio, potássio ou cálcio do grupo ácido carboxílico.
Em outra concretização, a composição farmacêutica compreen-de adicionalmente pelo menos um tampão e/ou pelo menos um conservante.
Em uma concretização, agentes de tamponamento adequadosincluem, mas não estão limitados a, ácido acético e um sal (1-2% pe-so/volume), ácido cítrico e um sal (1-3% peso/volume), ácido bórico e um sal(0,5-2,5% peso/volume), e ácido fosfórico e um sal (0,8-2% peso/volume).
Preservativos adequados incluem cloreto de benzalcônio (porexemplo, 0,003-0,03% peso/volume), clorobutanol (por exemplo, 0,3-0,9%peso/volume), parabenos (por exemplo, 0,01-0,25% peso/volume), e tiomer-sal (por exemplo, 0,004-0,02% peso/volume).
Em ainda outra concretização, as composições farmacêuticastambém incluem intensificadores de penetração de modo a intensificar a dis-tribuição alimentar. Intensificadores de penetração podem ser classificadoscomo pertencendo a uma de cinco categorias amplas, isto é, ácidos graxos,sais de bile, agentes quelantes, tensoativos, e não-tensoativos (Lee et al.,1991, Muranishi 1990). Um ou mais intensificadores de penetração de umaou mais destas categorias amplas podem ser incluídos.
Vários ácidos graxos e seus derivados que agem como intensifi-cadores de penetração incluem, por exemplo, ácido oléico, ácido láurico,ácido cáprico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido linoléi-co, dicaprato, tricaprato, recinleato, monooleína (1-monooleil-rac-glicerol),dilaurina, ácido caprílico, ácido araquidônico, 1-monocaprato de glicerila, 1-dodecilazacicloheptan-2-ona, acilcarnitinas, acilcolinas, mono- e diglicerí-deos, e sais fisiologicamente aceitáveis destes (isto é, oleato, laurato, capra-to, miristato, palmitato, estearato, Iinoleato., etc) (Lee et. al., Muranishi 1990,Ei-Hariri et al., 1992). Exemplos de alguns ácidos graxos atualmente preferi-dos são sódio caprato e sódio laurato, usados simplesmente, ou em combi-nação em concentrações de 0,5 a 5%.
Os papéis fisiológicos da bile incluem a facilitação de dispersãoe absorção de lipídeos e vitaminas solúveis em gordura (Brunton 1996). Vá-rios sais de bile naturais, e seus derivados sintéticos, agem como intensifi-cadores de penetração. Desse modo, o termo "sal de bile" inclui qualquerdos componentes que ocorrem naturalmente de bile, bem como qualquer deseus derivados sintéticos. Um sal de bile atualmente preferido é ácido que-nodeoxicólico (CDCA) (Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo), geralmen-te usado em concentrações de 0,5 a 2%.
Formulações complexas compreendendo um ou mais intensifi-cadores de penetração podem ser usadas. Por exemplo, sais de bile podemser usados em combinação com ácidos graxos para produzir formulaçõescomplexas. Combinações preferidas incluem CDCA combinado com sódiocaprato ou sódio laurato (geralmente 0,5 a 5%).
Em uma concretização, adicionalmente agentes quelantes sãousados, que incluem, mas não estão limitados a, dissódio etilenodiaminate-tracetato (EDTA), ácido cítrico, salicilatos (por exemplo, salicilato de sódio,5-metoxissalicilato e homovanilato), N-acil derivados de colágeno, laureth-9e N-amino acil derivados de beta-dicetonas (enaminas) (Lee et. ai., 1991,Muranishi 1990, Buur et. al., 1990). Os agentes quelantes têm a vantagemadicional de também servirem como inibidores de DNase.
Em ainda outra concretização, adicionalmente tensoativos sãousados. Os tensoativos incluem, por exemplo, Iauril sulfato de sódio, polioxi-etileno-9-lauril éter e polioxietileno -20-cetil éter (Lee et. al., 1991), e emul-sões perfluorquímicas, tais como FC-43 (Takanashi et al., 1988).
Os não-tensoativos incluem, por exemplo, uréias cíclicas insatu-radas, 1-alquila e 1-alquenilazaciclo-alcanona derivados (Lee et. al., 1991), eagentes antiinflamatórios não-esteroidais, tais como sódio diclofenac, indo-matacin, e fenilbutazona (Yamashita et al., 1987).
Em uma concretização, as composições farmacêuticas da pre-sente invenção contêm adicionalmente outros componentes adjuntos con-vencionalmente encontrados em composições farmacêuticas, em seus ní-veis utilizáveis estabelecidos na técnica. Desse modo, por exemplo, as com-posições podem conter materiais farmaceuticamente ativos compatíveis adi-cionais, tais como, por exemplo, antipruríticos, adstringentes, anestésicoslocais, ou agentes antiinflamatórios, ou podem conter materiais adicionaisúteis na formulação fisicamente de várias formas de dosagem da composi-ção da presente invenção, tais como corantes, agentes flavorizantes, con-servantes, antioxidantes, opacificadores, agentes de espessamento, e esta-bilizadores. Contudo, tais materiais, quando adicionados, não devem interfe-rir indevidamente com as atividades biológicas dos componentes das com-posições da invenção.
A presente invenção pode ser usada para aplicação de fármacodescrita em qualquer tecido do indivíduo onde este método é indicado. Taistecidos incluem, por exemplo, duto de bile, bexiga, osso, tutano do osso,cérebro, tórax, cólon, endométrio, epitélio, bile, bile da bexiga, cabeça, cabe-ça e pescoço, coração, intestino, juntas, rim, laringe, fígado, pulmão, nodolinfático, vasos linfáticos, músculo, esôfago, ovário, pâncreas, próstata, reto,duto urinário, pele e suas camadas, baço, estômago, testículo, timo, tireóide,amídala, ou útero.
O respectivo tumor de um tecido também referido como tumorou neoplasma compreende adamantinoma de ossos longos, adenoma, ame-loblastoma, astrocitoma, carcinoma de duto de bile, carcinoma de bexiga,carcinoma de osso, carcinoma de tutano de osso, tumor de cérebro, câncerde tórax, carcinoma broncogênico, câncer cervical, câncer cervical uterino,condroma, carcinoma de cório, carcinoma de cólon, carcinoma colorretal,carcinoma cistadeno, carcinoma embrional, câncer endometrial, ependimo-ma, câncer esofageal, fibroma, timoma folicular, câncer de bile de bexiga,câncer gástrico, glioblastoma, glioma, câncer de cabeça e pescoço, câncerdo coração, câncer hepatocelular, câncer na cavidade intraperitoneal, câncerdo intestino, carcinoma do rim, câncer de laringe, lipoma, carcinoma de fíga-do, carcinoma de pulmão, câncer do nodo linfático, câncer dos vasos linfáti-cos, glioma maligno, mesentelioma, menigioma, carcinoma medular, mioma,neuroblastoma, carcinoma broncogênico/pulmão de célula não-pequena,câncer de esôfago, osteosarcoma, câncer de ovário, carcinoma de pâncreas,carcinoma papilar, adenocarcinoma papilar, timoma papilar, feocromocitoma,câncer de próstata, câncer retal, câncer renal, carcinoma de célula renal,carcinoma de duto urinário, carcinoma de glândula sebácea, seminoma,câncer de pele, carcinoma de pulmão de célula pequena, câncer de tecidomacio, carcinoma de baço, carcinoma de célula escamosa, carcinoma deestômago, teratoma, carcinoma testicular, carcinoma de testículo, timoma,câncer de tireóide, tumores de glândula tireóide, e câncer do corpo do útero.
A expressão tumor, câncer e neoplasma são usadas sinonima-mente no contexto desta invenção.
Exemplos
Neste pedido de patente, os resultados de estudos de toxicidadelocais em animais, bem como estudos clínicos em pacientes, são reporta-dos. Todos estes estudos foram realizados de acordo com as linhas guias daPrática de Boa Clínica (GPC), e foram aprovados pelas comunidades éticaslocais. Os estudos do paciente, além disso, seguiram a declaração interna-cional atual de Helsink para experimentos humanos.Exemplo 1
Estudos de toxicidade locais após injeção de bolus intratecal em coelhos
A segurança local e tolerabilidade de uma preparação farmacêu-tica compreendendo o oligonucleotídeo de anti-sentido contra mRNA deTGF-beta2 identificado por SEQ ID NO 5, foi demonstrada em estudos detoxicidade locais aplicando referido oligonucleotídeo intratecalmente em coe-lhos como um bolus.
Dois estudos foram efetuados cada um com oito coelhos(2/gênero/grupo de tratamento) administrando 0,1 ml de uma solução de 14microM ou 500 microM de referido oligonucleotídeo em salina normal, res-pectivamente, por injeção de bolus intratecal simples no espaço subaracnoi-dal da região lombar. O grupo de controle recebeu solução de NaCI 0,9% namesma maneira. As reações locais foram inspecionadas macroscopicamen-te 2, 6 e 30 horas após administração. Seis a 30 horas após administração,1 animal/gênero/número foi sacrificado. Amostras do tecido do cérebro (es-pessura aproximadamente de 5 mícrons) foram examinadas histologicamente.
Em nenhum dos coelhos nenhum sinal clínico de toxicidade oumudanças macroscopicamente visíveis foram notadas para ambas as con-centrações. Em ambos os estudos, o exame histopatológico não revelou le-sões histomorfológicas relacionadas à substância no espaço subaracnoidalda região lombar. Nenhuma mudança relacionada à substância foi observa-da na bolus cinzenta e branca da coluna espinhal. O tronco do nervo e célu-las nervosas não mostraram quaisquer anormalidades.
Um coelho de controle (cloreto de sódio 0,9%) mostrou hemor-ragia moderada a marcada no Ieptomeninx e no tronco do nervo, uma malá-cia branda e infiltração de granulócitos neutrofílicos, e depósitos fibrinososmoderados.
Todos os animais, exceto um coelho de controle (cloreto de só-dio 0,9%), revelaram hemorragia branda a moderada na bolus branca, lú-mem do canal central, bolus cinzenta e/ou espaço subaracnoidal. Todas es-tas mudanças são consideradas serem devido ao dano mecânico causadopela injeção intratecal e, conseqüentemente, não são relacionadas à subs-tância.
Conclusivamente, o oligonucleotídeo identificado com a seqüên-cia ID Nq 5 revelou uma excelente tolerabilidade local em coelhos após apli-cação de bolus intratecal até uma concentração de 500 microM da soluçãode oligonucleotídeo.
Exemplo 2
Estudo de toxicidade local após injeção de bolus intratecal em macacos cy-nomolgus
A aplicação de bolus intratecal descrita no exemplo 1 foi repetidaem macacos cynomolgus para investigar a segurança e tolerância local dooligonucleotídeo de anti-sentido com seqüência ID N- 5 em um animal de-senvolvido mais alto. Devido a excelente tolerabilidade local da solução de500 microM do referido oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA deTGF-beta2, somente esta uma concentração foi investigada.
Dois macacos cynomolgus foram tratados com 0,1 mL de umasolução de 500 microM (cloreto de sódio 0,9%) de um oligonucleotídeo quehibridiza com o mRNA de TGF-beta2 identificado no protocolo de seqüênciapor SEQ ID No 5 por injeção de bolus intratecal simples no espaço subarac-nóide da região lombar. As reações locais foram inspecionadas macroscopi-camente 2, 6 e 30 horas após administração e, em seguida, os animais fo-ram sacrificados. Amostras do tecido do cérebro (espessura aproximada-mente de 5 mícrons) foram examinadas histologicamente.
Nenhum sinal clínico de toxicidade, ou mudanças macroscopi-camente visíveis, foram notados nos macacos. O exame histopatológico nãorevelou lesões histomorfológicas relacionadas à substância no espaço suba-racnoidal da região lombar. Nenhuma mudança foi observada na bolus cinzae branca da coluna espinhal. O tronco do nervo e células nervosas não mos-traram quaisquer anormalidades. Ambos os macacos revelaram uma infiltra-ção branda de célula misturada focai do leptomeninx, associada com umamineralização focai branda na região de inflamação. As mudanças não sãoconsideradas como sendo relacionadas à substância, mas devido a danomecânico causado pela injeção intratecal.
Conclusivamente, conforme observado antes nos experimentoscom coelhos descritos no exemplo 1, o referido oligonucleotídeo reveloutambém em macacos uma excelente tolerabilidade local quando aplicadocomo uma solução altamente concentrada de 500 microM. Os efeitos tóxicoslocais não podem ser observados.
Exemplo 3
Estudo de toxicidade local após infusão intracerebral contínua em coelhosBaseado na excelente tolerabilidade local da solução de 500microM do oligonucleotídeo identificado pela SEQ ID NO 5 após aplicaçãode bolus intratecal em coelhos e macacos descritos no exemplo 1 e 2, umainfusão intracerebral contínua de longo prazo de uma solução de 500microM de referido oligonucleotídeo por sete dias foi investigada em coelhoscom relação à toxicidade local.
Oito coelhos (2/gênero/grupo de tratamento) foram tratados comuma solução de 500 microM (cloreto de sódio 0,9%) de um oligonucleotídeode anti-sentido contra o mRNA de TGF-bata2 identificado na listagem deseqüência por SEQ ID NO 5 por infusão contínua no parênquima cerebral docérebro, ou com solução de cloreto de sódio como controle, respectivamen-te. A infusão foi realizada à uma taxa de fluxo de 1 microL/h por um períodode 7 dias empregando uma bomba osmótica subcutaneamente implantada.Os sinais clínicos e mortalidade foram verificados e registrados diariamente.6 e 30 horas após o final de infusão, 1 animal/gênero/grupo foi sacrificado.Amostras do tecido do cérebro (espessura aproximadamente de 5 mícrons)foram examinadas histologicamente.
Em ambos os grupos, tratado com substância e grupo de contro-le, degeneração focai e necrose do tecido nervoso com proliferação das cé-lulas gliais, e a ocorrência de um material amarelo-verde homogêneo, e neu-rônios escuros, bem como hemorragia branda a moderada, foram notados.Estas lesões são consideradas estarem relacionadas ao processo de infusãocontínua e à fixação por imersão e, portanto, não são relacionadas à subs-tância. Não houve diferença entre o sacrifício de 6 e 30 horas após o final daaplicação.
Conclusivamente, uma solução de 500 microM de referido oligo-nucleotídeo quando aplicado intracerebralmente com um fluxo de 1 microL/h,foi bem-tolerada em coelhos.
Exemplo 4
Efeito de concentração de oligonucleotídeo no tratamento de pacientes comglioma maligno
A avaliação aqui foi realizada para comparar a dosagem de 40microM e 80 microM de oligonucleotídeo específico de TGF-beta2 em paci-entes de glioma maligno refratário a ou recorrente após terapia padrão (ci-rurgia, radioterapia, e terapias diferentes com substâncias antineoplásticas).
O oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2identificado por SEQ ID NO 5 foi administrado por um cateter intratumoral-mente no centro da lesão tumoral alvejada. Os pacientes foram tratados comuma solução de 40 microM (4 pacientes) e 80 microM (13 pacientes) de refe-rido oligonucleotídeo (cloreto de sódio 0,9%) à uma taxa de fluxo de 4 mi-croL/min. e 8 micro/L min., respectivamente.
A Tabela Ns 1 mostra a comparação entre a sobrevivência médiados pacientes e o número de pacientes com remissão completa após trata-mento com a solução de 40 microM e 80 microM do oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2 identificado no protocolo de seqüênciapela SEQ ID NO 5.
Tabela N-1:
<table>table see original document page 33</column></row><table>
Os pacientes tratados com a solução de 40 microM mostraramuma média de cerca de 9,6 semanas de sobrevivência após início do trata-mento com referido oligonucleotídeo, pelo qual os pacientes tratados com asolução de 80 microM mostraram uma média de cerca de 35,9 semanas desobrevivência após início do tratamento com referido oligonucleotídeo. Con-tudo, somente no grupo tratado com a solução de 80 microM pacientes comremissão completa foram observados.
As concentrações escolhidas das soluções de oligonucleotídeo,bem como as taxas de fluxo, foram muito mais baixas comparadas às condi-ções usadas nos experimentos de animal descritos no exemplo 3 onde atéuma solução de oligonucleotídeo com 500 microM e uma taxa de fluxo de 1microL/h, nenhum efeito tóxico local foi observado.
Exemplo 5
Efeito de soluções de oligonucleotídeo concentradas baixas no tratamentode pacientes com glioma maligno
A avaliação aqui foi realizada para comparar a dosagem concen-trada baixa de 2,5 microM e 10 microM de oligonucleotídeo específico deTGF-beta2 em pacientes de glioma maligno refratários a ou recorrentes apósterapia padrão (cirurgia, radioterapia, e terapias diferentes com substânciasantineoplásticas).
O oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2identificado pela SEQ ID NO 5 foi administrado por um cateter intratumoral-mente no centro da lesão tumoral alvejada. Os pacientes foram tratados comuma solução de 2,5 microM (3 pacientes) e 10 microM de referido oligonu-cleotídeo (cloreto de sódio 0,9%) à uma taxa de fluxo de 4 microL/min.
A Tabela Ne 2 mostra a comparação entre a sobrevivência médiados pacientes e o número de pacientes com remissão completa após trata-mento com a solução de 2,5 microM e 10 microM do oligonucleotídeo quehibridiza com o mRNA de TGF-beta2 identificado no protocolo de seqüênciapela SEQ ID NO 5.
Tabela Ns 2:
<table>table see original document page 34</column></row><table>
Surpreendentemente, as soluções concentradas baixas de refe-rido oligonucleotídeo mostraram uma alta sobrevivência média dos pacientestratados quando a solução na taxa de fluxo de 4 microUrnin foi administrada.Os pacientes tratados com a solução de 2,5 microM mostraram uma médiade cerca de 52 semanas de sobrevivência após início do tratamento comreferido oligonucleotídeo. Os pacientes tratados com a solução de 10 mi-croM mostraram uma média de cerca de 44 semanas de sobrevivência apósinício do tratamento com referido oligonucleotídeo. Contudo, somente nogrupo tratado com solução de 10 microM, os pacientes com remissão com-pleta foram observados.
Exemplo 6
Efeito de concentração de oligonucleotídeo no tratamento de pacientes comastrocitoma anaplástico
A avaliação aqui foi realizada para comparar as dosagens de 2,5microM, 10 microM e 80 microM de oligonucleotídeo específico de TGF-beta2 em pacientes com astrocitoma anaplástico refratários a ou recorrentesapós terapia padrão (cirurgia, radioterapia, e terapias diferentes com subs-tâncias antineoplásticas).
O oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2identificado no protocolo de seqüência pela SEQ ID NO 5 foi administradopor um cateter intratumoralmente no centro da lesão tumoral alvejada. Ospacientes foram tratados com uma solução de 2,5 microM, 10 microM e 80microM de referido oligonucleotídeo (cloreto de sódio 0,9%) à uma taxa defluxo de 4 microL/min. e 8 microUmin., respectivamente. O oligonucleotídeotem um peso molecular de 6142,4 g/M como sal de sódio, e 7115,3 g/M co-mo hidrato de sal de sódio. Portanto, a quantidade total do oligonucleotídeoaplicada foi 344 microg/d (sal de sódio), respectivamente 398 microg/d (salde sódio compreendendo água de cristal).
O paciente N9 1 diagnosticado com astrocitoma anaplástico foitratado com uma solução de 2,5 microM (cloreto de sódio 0,9%) do oligonu-cleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2 com a SEQ ID N9 5aplicado com um fluxo contínuo de 4 microL/min por 4 dias (2 ciclos) direta-mente no tumor por um cateter. O paciente N91 mostrou uma sobrevivênciade cerca de 146 semanas após tratamento, que foi surpreendentemente altacomparado à terapia padrão com temozolomida resultando em uma sobrevi-vência média de cerca de 42 semanas (Theodosopoulos et. al., 2001).
O paciente Ne 4 diagnosticado com astrocitoma anaplástico (4lesões tumorais/metástases, incluindo dois no lado contralateral) foi tratadocom uma solução de 10 microM (cloreto de sódio 0,9%) do oligonucleotídeode anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2 com a SEQ ID Nq 5 que foiaplicado a uma taxa de fluxo contínuo de 4 mícroL/min por 4 dias diretamen-te no tumor maior por um cateter. O paciente N- 7 diagnosticado com astro-citoma anaplástico foi tratado com uma solução de 80 microM (cloreto desódio 0,9%) do oligonucleotídeo que hibridiza com o mRNA de TGF-beta2identificado no protocolo de seqüência pela SEQ ID Nq 5 à uma taxa de fluxode 8 microUmin.
Tabela N- 3:
<table>table see original document page 36</column></row><table>
* linha de base é o ponto de partida quando o tratamento com a preparaçãofarmacêutica compreendendo o oligonucleotídeo identificado na listagem deseqüência com SEQ ID NO 5 foi iniciado.
O paciente Ns 4, tratado com uma preparação farmacêuticacompreendendo 10 microM do oligonucleotídeo identificado no protocolo deseqüência com SEQ ID NO 5, bem como o paciente Nq 17, tratado com amesma preparação farmacêutica com 80 microM de referido oligonucleotí-deo, mostraram quase o mesmo volume de tumor na linha de base. O paci-ente N9 4 alcançou o máximo de tamanho de tumor de cerca de 58 cm3 após2,5 meses, pelo que no paciente Ns 17, o crescimento do tumor a um máxi-mo de 66 cm3 pode ser observado até cerca de 9,7 meses.
Cerca de 17 meses de observação, o volume do tumor do paci-ente Nq 4 foi reduzido para cerca de 12 cm3, pelo que o tumor do paciente Nq17 ainda tinha o dobro do volume (27 cm3).Adicionalmente, comparado ao paciente (N9 4) dosado com 10microM já mostrando regressão do tumor somente após um ciclo de aplica-ção, o paciente (NQ 17) dosado com 80 microM necessitou de 17 ciclos paraalcançar regressão do tumor.
Exemplo 7
Efeito de concentração de oligonucleotídeo no tratamento de pacientes comglioma maligno pela aplicação com um fluxo de 4 microL/minuto
A avaliação aqui foi realizada para comparar as dosagens de 10microM e 80 microM de um oligonucleotídeo específico de TGF-beta2 apli-cado à uma taxa de fluxo de 4 microL/min em pacientes com glioma malignorefratários a ou recorrentes após terapia padrão (cirurgia, radioterapia, e te-rapias diferentes com substâncias antineoplásticas).
O oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2identificado por SEQ ID NO 5 foi administrado como uma micro-perfusão defluxo alto intratumoral contínuo. Os pacientes foram tratados com uma solu-ção de oligonucleotídeo (cloreto de sódio 0,9%) de 10 microM (9 pacientes)e 80 microM (10 pacientes) com um fluxo de 4 microL/min por sete dias, se-guido por um intervalo livre de fármaco de sete dias (= um ciclo). Os pacien-tes foram tratados com até 12 ciclos.
Tabela N5 4
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A Tabela N9 4 representa uma comparação da redução do ta-manho do tumor entre a linha de base e última visita, o número de pacientescom doença progressiva, e com uma redução no tamanho do tumor entrepacientes de glioma maligno tratados com uma solução de 10 microM e 80microM do oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2identificado por SEQ ID NO 5 aplicado à uma taxa de fluxo de 4 microL/min.A partir do grupo de pacientes tratados com a solução de 10 mi-croM de referido oligonucleotídeo administrado à uma taxa de fluxo de 4 mi-croL/min, somente 33,3% dos pacientes mostraram uma doença progressivacomparada a 50% dos pacientes tratados com a solução de 80 microM dereferido oligonucleotídeo na mesma taxa de fluxo. Cinco de nove pacientesmostraram uma redução no tamanho do tumor no grupo de 10 microM com-parado a somente 2 de 10 pacientes no grupo de 80 microM. A diferença notamanho do tumor entre a linha de base e última visita foi reduzida para -264mm3 (médio) no grupo de 10 microM. Em contraste, o grupo que recebe asolução de 80 microM mostrou um aumento no tamanho do tumor para19940 mm3 (médio).
Exemplo 8
Efeito da concentração de oligonucleotídeo no tratamento de pacientes comastrocitoma anaplástico
A avaliação aqui foi realizada para comparar as dosagens de 10microM e 80 microM de oligonucleotídeo específico de TGF-beta2 em paci-entes com astrocitoma anaplástico refratários a ou recorrentes após terapiapadrão (cirurgia, radioterapia, e terapias diferentes com substâncias antine-oplásticas). Os pacientes foram selecionados conforme descrito no exemplo 2.
O oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2identificado por SEQ ID NO 5 foi administrado por uma microperfusão defluxo alto intratumoral contínuo. Os pacientes foram tratados com uma solu-ção (cloreto de sódio 0,9%) de 10 microM (11 pacientes) e 80 microM (11pacientes) de referido oligonucleotídeo à uma taxa de fluxo de 4 microL/minpor 7 dias, seguido por um intervalo livre de fármaco de sete dias (= um ci-clo). Os pacientes foram tratados com até 12 ciclos.
O número de pacientes com astrocitoma anaplástico com sinto-mas devido a progressão da doença (Grau Aes 1 a 4 e SAE) no grupo depacientes tratados com a solução de 10 microM de referido oligonucleotídeo,foi surpreendentemente baixo comparado aos pacientes infundidos com asolução de 80 microM, conforme mostrado na figura 1. Somente um pacientefora dos onze do grupo de 10 microM foi afetado comparado a nove fora deonze pacientes do grupo de 80 microM. No grupo de 10 microM, somentesintomas de grau 3 foram observados. No grupo de 80 microM, 6 dos 9 sin-tomas foram classificados/julgados como SAEs (eventos adversos sérios).
Exemplo 9
Compatibilidade da taxa de fluxo no tratamento de pacientes com gliomamaligno
O oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2identificado na listagem de seqüência por SEQ ID NO 5 foi administrado co-mo uma microperfusão de fluxo alto intratumoral contínuo. Os pacientes fo-ram tratados com uma solução de 10 microM de referido oligonucleotídeo àuma taxa dè fluxo de 4 microL/min e 40 microL/min aplicando-se 5,75 mL e57 mL em 24 horas, respectivamente. Cada taxa de fluxo foi bem-toleradademonstrando a segurança de aplicação de uma solução de 10 microM aci-ma de 40 microL/min nos pacientes.
Exemplo 10
Efeito da concentração de oligonucleotídeo no tratamento de pacientes comglioma maligno
A avaliação aqui foi designada para testar a dosagem de 10 mi-croM de um oligonucleotídeo específico de TGF-beta2 em pacientes comastrocitoma anaplástico refratários a ou recorrentes após terapia padrão (ci-rurgia, radioterapia, e terapias diferentes com substâncias antineoplásticas).
O oligonucleotídeo de anti-sentido contra o mRNA de TGF-beta2identificado por SEQ ID NO 5 foi administrado como uma micro-perfusão defluxo alto intratumoral contínuo. Os pacientes foram tratados com uma solu-ção de oligonucleotídeo (cloreto de sódio 0,9%) de 10 microM com um fluxode 4 microL/min por sete dias, seguido por um intervalo livre de fármaço desete dias (= um ciclo). Os pacientes foram tratados com até 12 ciclos.
A figura 2 mostra a diminuição no tamanho do tumor em trêspacientes com astrocitoma anaplástico tratado com uma solução de 10 mi-croM de referido oligonucleotídeo aplicado com uma taxa de fluxo de 4 mi-croM/min. O paciente Nq 409 (figura 2A) mostrou uma redução de tamanhode tumor de cerca de 19 cm3 após cinco meses de tratamento. O tumor dopaciente Ns 412 (figura 2B) encolheu cerca de 39 cm3 a cerca de 26 cm3 a-pós apenas dois meses de tratamento com a solução de 10 microM de refe-rido oligonucleotídeo. O tamanho do tumor do paciente N9 413 (figura 2C)reduziu de cerca de 19 cm3 a cerca de 11 cm3 após tratamento com soluçãode 10 microM de referido oligonucleotídeo.
Em contraste, o paciente Nq 17 (figura 2D), tratado com umaconcentração de 80 microM de referido oligonucleotídeo, e à uma taxa defluxo de 8 microL/min, mostrou um crescimento de tumor aumentado duranteos primeiros 5 meses de cerca de 8 cm3 a cerca de 18 cm3.
Exemplo 11
Dados de sobrevivência de pacientes com astrocitoma anaplástico
Um estudo clínico de fase Il de controle ativo aleatório multina-cional foi realizado. Os pacientes eleitos tinham AA, WHO grau Ill refratáriosa ou recorrentes após terapia padrão (cirurgia, rádio e quimioterapia), e nãoeram adequados para outra resseção de tumor. Os pacientes não tinhamrecebido terapias antitumor por 10 dias antes de se estudar a entrada (mé-dia: 42 dias, faixa de 10 a 295 dias antes de se iniciar o tratamento com ooligonucleotídeo). O estado de performance de Karnofsky (KPS) foi pelomenos 70%. Pacientes com infecções agudas clinicamente significantes,anormalidades cardiovasculares maiores, ou doenças repentinas pobremen-te controladas, bem como fêmeas grávidas e lactantes, foram excluídos.
Um cateter foi implantado em todo paciente, e a parte perfuradado cateter foi colocada na área de intensificação de contraste, sólida, da Ie-são tumoral. O cateter foi inserido através de um furo de broca padrão nalesão tumoral maior presente.
Um sistema de orifício foi implantado em uma bolsa subcutâneana parede do tórax anterior. O cateter de orifício foi inserido subcutaneamen-te e conectado ao cateter do tumor, e o orifício a uma bomba externa.
O oligonucleotídeo com SEQ ID NO 5 dissolvido em 0,9% desolução de cloreto de sódio foi infundido, via a bomba, através do orifício notumor com um fluxo contínuo. Durante o intervalo de sete dias entre doisciclos de tratamento com oligonucleotídeo, salina isotônica foi infundida em 1microL/min. Durante o curso do estudo, muitos dos pacientes receberamantibióticos profiláticos pré-operativamente, mas nenhum esteróide profiláti-co. O oligonucleotídeo foi administrado intratumoralmente como uma micro-perfusão de fluxo alto contínuo usando dispositivos de bomba externos, PE-GASUS® Vario (PEGASUS GmbH, Kiel). O cateter e o sistema de aplicaçãoforam removidos no final do período de infusão total. Para avaliação de se-gurança, a vigília do paciente foi realizada por 28 dias. Os investigadorescontinuaram a coletar os dados de sobrevivência.
Os dados de sobrevivência de 38 pacientes foram avaliados, dosquais 12 pacientes tratados com solução de oligonucleotídeo de 10 microM,14 pacientes foram tratados com 80 microM, e 12 pacientes no grupo decontrole receberam uma quimioterapia padrão com temozolomida ou PCV(um regime quimioterapêutico, consistindo em procarbazina* CCNU, e vin-cristina, ver abaixo para maiores detalhes).
No grupo de 10 microM, 83,3% dos pacientes estavam abaixoda idade de 55, no grupo de 80 microM 85,7%, e no grupo de controle,91,7%. A medida que â idade é conhecida para ser um fator de prognósticoque influencia um resultado do paciente, o grupo de controle com mais de90% de pacientes mais jovens tinha uma chance melhor de sobrevivênciacomparado aos grupos tratados com o oligonucleotídeo, especialmente ogrupo com a concentração de 10 microM de oligonucleotídeo. Apesar destapior situação de linha de base, o grupo com o oligonucleotídeo com SEQ IDNO 5 tinha uma chance de sobrevivência muito maior do que no grupo decontrole, ou o grupo com concentração de 80 microM de oligonucleotídeo.Ajustada de acordo com a idade (análise de co-variância), esta diferençatornou-se ainda mais significante.
Também o Estado de Performance de Karnofsky (KPS) é co-nhecido como fator de prognóstico. No grupo de controle, muito mais pacien-tes foram incluídos com um KPS:KPS> 80 mais alto (= melhor) no grupoAP10, 66,6%, no grupo AP80, 71,4%, e no grupo de controle, 83,3%. A dis-tribuição de gênero foi também diferente. O grupo com oligonucleotídeo de10 microM tinha 50% de machos, o grupo de 80 microM tinha 92,9% de ma-chos, e o grupo de controle tinha 50% de machos. O gênero não parece terum efeito na chance de sobrevivência, portanto, nenhum ajuste para esteparâmetro foi necessário.
Os resultados do estudo são conforme representados na TabelaN9 5 e na figura 5.
Um ciclo PCV padrão típico consiste em um período de trata-mento de 29 dias, seguido por um período livre de tratamento de 4 semanas.Durante o período de tratamento de 29 dias, CCNU, Vincristina e Procarba-zina são administradas de acordo com o esquema abaixo (Levin et al. 1990).Dia 1 -110 mg/m2 de CCNU oralmente
Dias 8 e 29 - 1,4 mg/2 (2mg/m2máximo) por dia de Vincristina intravenosa-mente
Dias 8 a 21 - 60 mg/m2 por dia de Procarbazina oralmente
Tabela N9 5.
<table>table see original document page 42</column></row><table>
*Razão de risco com a "idade" como covariate
A razão de risco (HR) compara a chance de sobrevivência entredois grupos em qualquer ponto do tempo. Desde que o resultado (sobrevi-vência) é significantemente influenciado pela diferença de idade no começo,esta diferença tem que ser considerada pela aplicação de uma análise daco-variância que ajusta os resultados para esta diferença no começo. UmaRazão de Risco ajustada de idade (HR(idade)) de 1,8 para 10 microM versuscontrole significa que a chance de sobrevivência para qualquer pacientesimples é 1,8 vezes mais alta quando ele recebe SEQ ID NO 5 em uma con-centração de 10 microM sobre recebimento de quimioterapia padrão (isto é.,temozolomida ou PCV = um regime quimioterapêutico, consistindo em pro-carbazina, CCNU e vincristina). E a chance de sobrevivência é 8 vezes maisalta para pacientes que recebem SEQ ID NO 5 em uma concentração de 10microM sobre pacientes que recebem este oligonucleotídeo em uma concen-tração de 80 microM.
Exemplo 12
Comparação de concentrações de oligonucleotídeo diferentes na secreçãode TGFbeta2 em uma linha de célula A-172
Cultura de Célula: A Iinhade célula de glioblastoma humano A-172 (Acesso n9 CRL-1620) foi estabelecida de um homem de 53 anos deidade com um glioblastoma.
As células tumorais A-172 foram cultivadas em meio-DMEM com4,5 g/L de glucose e 10% (v/v) de FCS a 37°C, 5% de CO2, e 95% de umi-dade relativa de acordo com as instruções do Serviço de Linha de Célula.Para investigar a supressão de TGF-beta2, 40.000 células Α-172/furo foramsemeadas em 12 placas de cultura de tecido com 12 furos. Seis horas apóssemeadura, os sobrenadantes foram removidos e substituídos por uma solu-ção de tratamento consistindo em meio de cultura de célula contendo 5 mi-croM, 10 microM, ou 80 microM de oligonucleotídeo de anti-sentido identifi-cado por SEQ ID NO 5. A média do controle negativo (= células não-tratadas) foi carregada sem adição de SEQ ID NO 5. A troca foi repetida a-pós 2 e 4 dias. No dia, 7 sobrenadantes foram coletados e analisados paraTGF-beta2 secretado usando Ensaio Imunosorvente Ligado por Enzima (E-LISA).
Métodos: TGF-beta2 foi quantificado por um Kit TGF-beta2-ELISA padrão de acordo com as instruções do fabricante. Os sobrenadantesforam limpos de componentes celulares por centrifugação (850 g, 5 min). Aanálise de TGF-beta2 foi realizada com a leitora de placa Multiskan AscentTipo 354200240V usando uma logística de parâmetro 4.
Resultados: A linha de célula de glioblastoma humano foi testa-da em um conjunto de experimentos de secreção de TGF-beta2 para avaliaro efeito de concentrações diferentes do oligonucleotídeo de anti-sentido i-dentificado por SEQ ID NO 5. As células A-172 produzem TGF-beta2 sobcondições de cultura de célula. A duração do tratamento celular (7 dias),bem como as três concentrações diferentes (5 microM, 10 microM, 80 mi-croM) de SEQ ID NO 5, foram escolhidas.
10 microM de oligonucleotídeo identificado por SEQ ID NO 5 foiverificado ser o melhor inibidor de expressão de TGF-beta2 comparado a 5 e80 microM deste oligonucleotídeo.
LISTAGEM DE REFERÊNCIAS
Buuretal., J. Control Rel., 1990, 14,43-51Brunton, Capítulo 38 em: Goodman & GiIman1S The Pharmacoloaical Basisof Therapeutics. 9ê Ed., Hardman et. ai., Eds., McGraw-Hill, New York, 1996,pp. 934-935
El-Hariri, L. M. et ai., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, pp. 651-654Krieg, A. M, et al., Annu. Rev. Immunol.. 2002, 20, pp. 709-760Langer et ai., 1990, 249, pp. 1527-1533
Lee et al., Criticai Reviews in Therapeutic Drug Carrier Svstems. 1991, pp.92ff
Lefebure, C. et al., Cvtokine Netw, 1995, 6, pp. 7-19Lewis, D. H., et al., Druq and Pharmaceutieal Sciences, 1990Muranishi, Criticai Reviews in Therapeutic Druq Carrier Svstems, 1990, 7,pp. 1-33
Nielsen Ρ. E. et al.. Sciences. 1991, 254 (5037), pp. 1497-1500Schlingensiepen, R, et al., The Oliqonucleotide. 2005, 15(2), pp. 94-104Takahasi, H, et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, pp. 252-257Theodosopoulos et al., Proc. Am. Soe. Clin. Oncol., 2001, 20, pp. 2059 ffYamashita, S, et al., J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, pp. 621-626Wagner, et al., Science, 1993, 260, pp. 1510-1513Wâng and Martini, Clin. Invest., 1996/97, pp. 448-454LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA
1 gtagtacacgatgg2 ctgatgtgttgaagaaca3 ctctgafgtgttgaag4 cgatagtcttgcag5 cggcatgtctattttgta6 gctttcaccaaattggaagc7 ctggcttttgggtt8 cagcacacagtagt9 tcgagcttccccca10 ccccgagcccaagg11 cccgacgagccgg12 acgcaccaaggcga13 cgggttgtcgagccc14 cggcagtgccccg15 cgcaattctgctcg16 ttcgttgtgctccc17 attccgactcggtg18 acgtgcgtcatcaccgt19 ccaagaagcc20 cctaatgccttcca21 tcagcagggccagg22 gcaaagttcagcagggc23 ggcaaagttcagcagg24 gtggcaaagttcagcagg25 gtggcaaagttcag26 gaccgtggcaaagttcag27 agagaggctgaccgt28 gagagagagaggctgac29 acagagagaggctga30 gtggacagagagagg31 caactggacagagagagg32 tcttcttgatgtggcc33 ccctcttcttcttgatg34 caccctcttcttct35 atggatttctttggcat36 ggatttctttggc37 aagttggactctcttctc38 taagttggactctcttct39 taggagtggttgaggc40 gtgta ggagtggttgag41 ctgtgtaggagtgg42 cccacatgcctgtg43 cgatgaacaacgag44 ctggcgatgaacaacg45 cgctggcgatgaac46 gagctagtcccgtfg47 gcgaagagctagtcc48 ccagttatgcgaagagc49 ccccagttatgcgaag50 cggctcaccgcctcggc51 catttgttgtgctgtagg52 ggtctgcattcacatttg53 catctgcaagtacgttcg54 cacatctgcaagtacgtt55 gtcacatctgcaagtacg56 gcttgaagatgtacctcg57 gtaaaactggatcatctc58 cttcttttgcaagtctgt59 tgagctgtgcatgccttc60 agtcaggaggaccag61 tgggtgccctggcct62 catgttaggcaggtt63 aggcatctcggagatct64 aaagtcttcactctgc65 aacaagttgtccagctg66 catcacctcctccag67 gggtcttcaggttctccc68 cacggccttgctcttgtt69 ttattaaaggcattcttc70 aagatgtcaaactcactc71 gtagttgatgaagatgtc72 gattttggagacctct73 tcagctatcccagagc74 ggctgggtcagctat75 aaatcgttcacagagaag76 tctttctaaatcgttcac78 cagttcggactatact79 gcccaagttcaaca80 catagaaggtcgtttc81 aggtttgcgtagac82 gttcctcatgcgcttc83 gtttgcaactgctg85 gtccgtgcagaagtcctg86 ggaagaaactatgagagt87 cttagggaagaaactatg88 agaacaaagaagagcc89 cagcaagagaacaaag90 cgacattcagtaaaagtg91 cttctggagataactaga92 cata ag acacagtcttac93 gaaagcataagacacagt<110> Antisense Phrama GmbH<120> Dosage of Oligonucleotides
<130> 061135wo<160> 91
<170> PatentIn version 3.1
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18
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18

Claims (16)

1. Uso de pelo menos um oligonucleotídeo com um comprimentode 8 a 30 blocos de construção de nucleotídeo para fabricação de uma pre-paração farmacêutica para a profilaxia e/ou tratamento de doenças, que sãomodulados por TGF-beta2, TGF-beta1, TGFbeta3, VEGF, interleucina-10, c-jun, c-fos, e/ou prostaglandina E2 em um mamífero, no qual referido oligonu-cleotídeo se hibridiza com um RNA mensageiro de um TGF-beta2, TGF-betal, TGF-beta3, VEGF, interleucina-10, c-jun, c-fos, e/ou gene de prosta-glandina E2, e no qual a referida preparação compreende referido oligonu-cleotídeo em uma concentração de cerca de 1 microM a cerca de 25 mi-croM.
2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, no qual a preparaçãofarmacêutica compreende o oligonucleotídeo em uma concentração de cercade 1 microM a cerca de 15 microM, mais preferido de cerca de 2,5 microM acerca de 14 microM, ainda mais preferivelmente de cerca de 4 microM a cer-ca de 13 microM, ainda mais preferivelmente de cerca de 5 microM a cercade Í2,5 microM, mais preferivelmente de cerca de 20 microM, 10 microM ou-5 microM.
3. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2,no qual pelo menos um bloco de construção de nucleotídeo compreende umnucleotídeo com uma 2'-modificação do ribonucleotídeo; em uma concreti-zação preferida, a 2'-modificação é um grupo metóxi- ou metoxietilóxi.
4. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3,no qual referido oligonucleotídeo é um oligonucleotídeo de filamento simples.
5. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4,no qual pelo menos uma ligação entre dois blocos de construção de nucleo-tídeos consecutivos é um fosforotioato ou um metilfosfonato.
6. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5,no qual o oligonucleotídeo é uma das seqüências identificadas na listagemde seqüência com SEQ ID Nos 1 a 93, mais preferidas são seqüências comSEQ ID Nos 5 e/ou 2.
7. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2,para a profilaxia e/ou tratamento de uma doença selecionada a partir do gru-po de câncer, metástase, doença do sistema nervoso e imunossupressão.
8. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7,no qual a referida preparação é usada para administração em um tecido, emum tumor, ou em uma cavidade do corpo.
9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, no qual o referido teci-do é selecionado a partir do grupo de duto de bile, bexiga, osso, tutano doosso, cérebro, tórax, cólon, endométrio, epitélio, bile, bile da bexiga, cabeça,cabeça e pescoço, coração, intestino, juntas, rim, laringe, fígado, pulmão,nodo linfático, vasos linfáticos, músculo, esôfago, ovário, pâncreas, próstata,reto, duto urinário, pele e suas camadas, baço, estômago, testículo, timo,tireóide, amídala, ou útero; ouo tumor é selecionado a partir do grupo de adamantinoma deossos longos, adenoma, ameloblastoma, astrocitoma, carcinoma de duto debile, carcinoma de bexiga, carcinoma de osso, carcinoma de tutano de osso,tumor de cérebro, câncer de tórax, carcinoma broncogênico, câncer cervical,câncer cervical de útero, condroma, carcinoma de cório, carcinoma de cólon,carcinoma colorretal, carcinoma cistadeno, carcinoma embrional, câncer en-dometrial, ependimoma, câncer esofageal, fibroma, timoma folicular, câncerde bile de bexiga, câncer gástrico, glioblastoma, glioma, câncer de cabeça epescoço, câncer do coração, câncer hepatocelular, câncer na cavidade in-traperitoneal, câncer do intestino, carcinoma do rim, câncer de laringe, Iipo-ma, carcinoma de fígado, carcinoma de pulmão, câncer do nodo linfático,câncer dos vasos linfáticos, glioma maligno, mesentelioma, menigioma, car-cinoma medular, mioma, neuroblastoma, carcinoma broncogênico/pulmão decélula não-pequena, câncer de esôfago, osteosarcoma, câncer de ovário,carcinoma de pâncreas, carcinoma papilar, adenocarcinoma papilar, timomapapilar, feocromocitoma, câncer de próstata, câncer retal, câncer renal, car-cinoma de célula renal, carcinoma de duto urinário, carcinoma de glândulasebácea, seminoma, câncer de pele, carcinoma de pulmão de célula peque-na, câncer de tecido macio, carcinoma de baço, carcinoma de célula esca-mosa, carcinoma de estômago, teratoma, carcinoma testicular, carcinoma detestículo, timoma, câncer de tireóide, tumores de glândula tireóide, e câncerdo corpo do útero; oua cavidade de corpo é cavidade de junta, ou espaço ventricular.
10. Uso, de acordo com a reivindicação 8, no qual a cavidade decorpo é o espaço intraperitoneal ou a cavidade pleural.
11. Uso, de acordo com a reivindicação 9, no qual a preparaçãoé para administração a uma taxa de fluxo de cerca de 0,1 microL/min a cercade 0,1 mL/min, mais preferivelmente cerca de 0,5 microL/min a cerca de 0,05 microUmin, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,8 microL/min acerca de 0,04 mL/min, ainda mais preferida de cerca de 1 microL/min a cer-ca de 0,02 mL/min, ainda mais preferida de cerca de 2 microL/min a cercade 10 microL/min, mais preferida 4 microL/min.
12. Uso, de acordo com a reivindicação 10, no qual a prepara-ção é para administração a uma taxa de fluxo de cerca de 5 microL/min acerca de 2 mL/min, mais preferivelmente cerca de 0,05 mL/min a cerca de 1mUmin, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,1 mL/min a cerca de 0,5mL/min, ainda mais preferida de cerca de 0,3 mL/min a cerca de 0,4 mL/min,mais preferida cerca dé 0,35 mL/min.
13. Uso, de acordo com a reivindicação 11, no qual a referidapreparação é para administração em um tumor de cérebro, mais preferidoem astrocitoma incluindo glioblastoma e oligoastrocitoma.
14. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, no qual a referida preparação é para administração por cerca de 4 dias acerca de 14 dias, mais preferida por cerca de 3 a 8 dias.
15. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 14, no qual a referida preparação é para administração de uma pluralidadede cursos, mais preferido cerca de 2 a 20 vezes, cada um de referidos cur-sos sendo separados por um intervalo de entre um dia e 12 semanas, maispreferido cerca de 2 dias a cerca de 8 semanas, ainda mais preferido 4 dias acerca de 4 semanas, e ainda mais preferido cerca de 6 dias a cerca de 12 dias.
16. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15,para o tratamento de um mamífero, mais preferido um ser humano.
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ZA (2) ZA200709237B (pt)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ562954A (en) 2005-05-05 2009-10-30 Antisense Pharma Gmbh Use of low doses of oligonucleotides antisense to TGF-beta, VEGF, interleukin-10, C-JUN, C-FOS or prostaglandin E2 genes in the treatment of tumors
EP1935428A1 (en) * 2006-12-22 2008-06-25 Antisense Pharma GmbH Oligonucleotide-polymer conjugates
US8822425B2 (en) 2008-11-14 2014-09-02 Antisense Pharma Gmbh Dosage of oligonucleotides suitable for the treatment of tumors
EP2356234B1 (en) * 2008-11-14 2017-08-16 Autotelic LLC Dosage of oligonucleotides suitable for the treatment of tumors
CN102282155B (zh) 2008-12-02 2017-06-09 日本波涛生命科学公司 磷原子修饰的核酸的合成方法
RU2612521C2 (ru) 2009-07-06 2017-03-09 Онтории, Инк. Новые пролекарства нуклеиновых кислот и способы их применения
JP5868324B2 (ja) 2010-09-24 2016-02-24 株式会社Wave Life Sciences Japan 不斉補助基
EP2453017A1 (en) * 2010-11-12 2012-05-16 Antisense Pharma GmbH Oligonucleotides for use in prophylaxis and/or treatment of TGF-beta1 and TGF-beta2, TGF-beta2 and TGF-beta3, TGF-beta1 and TGF-beta3, or TGF-beta1, TGF-beta2, and TGF-beta3 mRNA overexpressing diseases
CN103796657B (zh) 2011-07-19 2017-07-11 波涛生命科学有限公司 合成官能化核酸的方法
PL2872485T3 (pl) 2012-07-13 2021-05-31 Wave Life Sciences Ltd. Asymetryczna grupa pomocnicza
CA2879066C (en) 2012-07-13 2019-08-13 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Chiral nucleic acid adjuvant
KR102213609B1 (ko) 2012-07-13 2021-02-08 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 제어
US11236338B2 (en) * 2013-09-05 2022-02-01 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense-induced exon2 inclusion in acid alpha-glucosidase
JPWO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
US10322173B2 (en) 2014-01-15 2019-06-18 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Chiral nucleic acid adjuvant having anti-allergic activity, and anti-allergic agent
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
BR112016016400A2 (pt) 2014-01-16 2017-10-03 Wave Life Sciences Ltd Composições de oligonucleotídeos quiralmente controlados, seu uso, sua composição farmacêutica, e métodos
US9758786B2 (en) 2016-02-09 2017-09-12 Autotelic, Llc Compositions and methods for treating pancreatic cancer
DE102019000490A1 (de) * 2019-01-23 2020-07-23 HAEMES Verwaltungsgesellschaft mbH Verwendung von Oligonukleotiden für die Behandlung von Tumoren
KR102680316B1 (ko) * 2021-11-01 2024-07-01 오토텔릭바이오 주식회사 안티센스 올리고뉴클레오타이드

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US4675189A (en) 1980-11-18 1987-06-23 Syntex (U.S.A.) Inc. Microencapsulation of water soluble active polypeptides
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
US4757128A (en) 1986-08-01 1988-07-12 Massachusetts Institute Of Technology High molecular weight polyanhydride and preparation thereof
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
ATE151467T1 (de) 1987-11-30 1997-04-15 Univ Iowa Res Found Durch modifikationen an der 3'-terminalen phosphodiesterbindung stabilisierte dna moleküle, ihre verwendung als nukleinsäuresonden sowie als therapeutische mittel zur hemmung der expression spezifischer zielgene
US5133974A (en) 1989-05-05 1992-07-28 Kv Pharmaceutical Company Extended release pharmaceutical formulations
US5914396A (en) 1990-01-11 1999-06-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-modified nucleosides and phosphoramidites
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5407686A (en) 1991-11-27 1995-04-18 Sidmak Laboratories, Inc. Sustained release composition for oral administration of active ingredient
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
TW244371B (pt) 1992-07-23 1995-04-01 Tri Clover Inc
EP0695354B1 (en) 1993-04-30 2002-01-09 BIOGNOSTIK GESELLSCHAFT FÜR BIOMOLEKULARE DIAGNOSTIK mbH Antisense-oligonucleotides for the treatment of immunosuppressive effects of transforming growth factor-beta1 (tgf-beta1)
US6455689B1 (en) * 1993-04-30 2002-09-24 Biognostik Gesellschaft für Biomolekulare Diagnostik mbH Antisense-oligonucleotides for transforming growth factor-β (TGF-β)
ATE177430T1 (de) 1993-05-12 1999-03-15 Novartis Erfind Verwalt Gmbh Nukleoside und oligonukleotide mit 2'- ethergruppen
WO1995002051A2 (en) * 1993-07-10 1995-01-19 Biognostik Gesellschaft für Biomolekulare Diagnostik mbH A pharmaceutical composition comprising antisense-nucleic acid for prevention and/or treatment of neuronal injury, degeneration and cell death and for the treatment of neoplasms
US5641756A (en) * 1993-07-27 1997-06-24 Hybridon, Inc. Modified VEGF oligonucleotides
EP0695534B1 (en) 1994-08-02 2001-11-07 Olympus Optical Co., Ltd. Endoscopic grasping device
US5591721A (en) 1994-10-25 1997-01-07 Hybridon, Inc. Method of down-regulating gene expression
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
EP0856579A1 (en) 1997-01-31 1998-08-05 BIOGNOSTIK GESELLSCHAFT FÜR BIOMOLEKULARE DIAGNOSTIK mbH An antisense oligonucleotide preparation method
WO1999063975A2 (en) 1998-06-10 1999-12-16 Biognostik Gesellschaft für Biomolekulare Diagnostik mbH A method for stimulating the immune system
EP1133988A1 (en) 2000-03-11 2001-09-19 Biognostik Gesellschaft für biomolekulare Diagnostik mbH Mixture comprising an inhibitor or suppressor of a gene and a molecule binding to an expression product of that gene
US7963956B2 (en) * 2003-04-22 2011-06-21 Antisense Pharma Gmbh Portable equipment for administration of fluids into tissues and tumors by convection enhanced delivery technique
WO2005059133A2 (en) * 2003-12-19 2005-06-30 Antisense Pharma Gmbh Combination therapy associating a tgf-breta antagonist with a chemiotherapeutic agent
AU2005218759B2 (en) * 2004-02-27 2009-07-16 Antisense Pharma Gmbh Pharmaceutical composition
NZ562954A (en) 2005-05-05 2009-10-30 Antisense Pharma Gmbh Use of low doses of oligonucleotides antisense to TGF-beta, VEGF, interleukin-10, C-JUN, C-FOS or prostaglandin E2 genes in the treatment of tumors

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