BRPI0612479A2 - método para tratar cáncer em um indivìduo, uso de um anticorpo monoclonal para preparar um medicamento e uso de um agente alquilante para a preparação de um medicamento - Google Patents

Abstract

MéTODO PARA TRATAR CáNCER EM UM INDIVIDUO, USO DE UM ANTICORPO MONOCLONAL PARA PREPARAR UM MEDICAMENTO E USO DE UM AGENTE ALQUILANTE PARA A PREPARAçAO DE UM MEDICAMENTO. é descrito aqui um método para tratar um tumor através da administração a um indivíduo de uma quantidade eficaz de tratamento de um anticorpo terapêutico e um agente alquilante.

Description

"MÉTODO PARA TRATAR CÂNCER EM UM INDIVÍDUO, USO DE UMANTICORPO MONOCLONAL PARA PREPARAR UM MEDICAMENTO E USODE UM AGENTE ALQUILANTE PARA A PREPARAÇÃO DE UMMEDICAMENTO".

Suporte do Governo

Esta invenção foi feita como o suporte do governo sob osnúmeros de concessões MOl-RR 3, NS20023, CA11898,CA70164, CA42324, 1P50CA108786-01, 5P20CA96890 e PDT-414a partir do Programa do Centro de Pesquisa em ClínicaGeral - Recurso para Pesquisas, Instituto Nacional deSaúde e a Sociedade Americana do Câncer. O Governo têmdeterminados direitos nesta invenção.

Campo da invenção

A presente invenção refere-se a uma terapia combinada deanticorpos com quimioterapia para o tratamento decânceres e tumores em um indivíduo.

Histórico da invenção

0 tratamento de câncer humano com anticorpos terapêuticosé uma pesquisa emergente para esta doença problemática.

Nos Estados Unidos, dois anticorpos monoclonais de murineradio-marcados anti-CD20 para o tratamento de linfomaforam aprovados: um sob o nome comercial de Zevalin™;produzido por IDEC Pharmaceuticals (Sand Diego, CA) , e umsob o nome comercial Bexxar, produzido por Corixa Corp.(Seattle, WA) . Existe, no entanto, a necessidade paramétodos adicionais para o tratamento de câncer e,particularmente, métodos que auxiliariam no aumento daespecificidade e diminuição dos efeitos colateraisindesejados dos referidos tratamentos.

Bigner et al, na patente norte-americana U.S. No.5,624,659 descreve métodos para o tratamento de tumoressólidos e císticos com o anticorpo monoclonal 81C6. Vertambém, D. Bigner et al. , "Iodine-131-labeled anti-tenascin Monoclonal Antibody 81C6 - Treatment of Patientswith Recurrent Malignant Gliomas: Phase I trial results",J. Clin. Oncol., 16:2202-2212 (1998). Rizzieri et al.,Pedido de Patente U.S. No. 10/008,062 (US 2002/0187100 Al- publicado em Dezembro 12, 2002), descreve a terapia doanticorpo monoclonal anti-tenascina para o tratamento delinfoma. Ver também, D. Rizzieri et al., "Blood 104, 642-648 (2004)"; G. Akabani et al. , nDosimetry and Dose-response Relationships in Newly Diganosed PatientsTreated with Iodine-131-labeled anti-tenascin MonoclonalAntibody Therapy", Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys.46:947-958 (2000).

Sumário da invenção

Um primeiro aspecto da invenção refere-se a um métodopara tratar câncer, incluindo a administração a umindivíduo de uma quantidade de tratamento eficaz de umanticorpo terapêutico; e também a administração a umindivíduo de uma quantidade de tratamento eficaz de umagente alquilante.

Em uma configuração, o câncer é um câncer baseado em umtumor sólido. Em uma configuração preferida, o câncer élinfoma.

Em uma outra configuração preferida, o câncer é um câncercerebral. Em ainda uma outra configuração, o câncercerebral é glioblastoma.

Em uma configuração, o tumor sólido expressa tenascina.

Em uma configuração, os anticorpos terapêuticos se ligam,especificamente, à tenascina.

Em uma configuração, o anticorpo é um anticorpomonoclonal 81C6 ou um anticorpo que se liga a um epítopoligado pelo anticorpo monoclonal 81C6. Em umaconfiguração preferida, o anticorpo terapêutico é oanticorpo monoclonal 81C6. Ainda em uma outraconfiguração, o anticorpo terapêutico é um anticorpomonoclonal 81C6 quimérico (ch 81C6) camundongo-humano.Ainda, em uma outra configuração, o anticorpo monoclonalé um anticorpo monoclonal 81C6 murine (mu81C6).

Em uma configuração, os anticorpos terapêuticos sãoemparelhados em um radionuclídeo. Em uma outraconfiguração, o radionuclídeo é selecionado a partir dosgrupos consistindo de: 227Ac, 211At, 131Ba, 77Br, 109Cd, 51Cr,67Cu, 165Dyi 155Eu, 153Gd, 198Au, 166Ho, 113mIn, 115mIn, 123I,125I, 131I1 189Ir, 191Ir, 192Ir, 194Ir, 52Fe, 59Fe, 177Lu, 109Pd,32P, 226Ra, 186Re, 188Re, 153Sm, 46Sc, 47Sc, 72Se, 75Se, 105Ag,89Sr, 35S, 177Ta, 117mSn, 121Sn, 166Yb, 169Yb, 90Y, 212Bi, 119Sb,197Hg, 97Ru, 100Pd, lolmRh, 212Pb, 64Cu, 225Ac, 213Bi e 124I.

Em uma configuração preferida, o agente alquilante étemozolomida ou um análogo, um sal f armaceuticamenteaceitável ou um pró-fármaco do mesmo. Ainda, em uma outraconfiguração, o temozolomida é administrado em um ciclode doses diárias entre cerca de 3 a cerca de 7 diasconsecutivos em uma dose diária entre cerca de 50 a cercade 300 mg/m2/dia. Em uma outra configuração, este ciclo érepetido de cada duas a cinco semanas por um períodototal de até cerca de 10 ciclos.

Ainda, em uma outra configuração, os anticorposterapêuticos são administrados por injeção intra-cranialem um sítio do tumor. Em uma outra configuração, osanticorpos terapêuticos são administrados por uma injeçãointra-cranial única ao sítio do tumor.

Em uma configuração preferida, os anticorpos terapêuticossão administrados em uma dose entre cerca de 40 a cercade 50 Gy.

Ainda, em uma outra configuração, o método paratratamento compreende ainda, administrar ao indivíduo umaradioterapia de irradiação externa ao sítio do tumorcerebral. Em uma configuração preferida, a radioterapiade irradiação externa é administrada em uma dose totalentre cerca de 30 a cerca de 60 GY ao sítio do tumorcerebral.

Em uma configuração preferida, o anticorpo terapêutico éo anticorpo monoclonal 81C6, e o agente alquilante étemozolomida ou um análogo, um sal farmaceuticamenteaceitável ou um pró-fármaco do mesmo.

Um aspecto adicional desta invenção refere-se ao uso deum anticorpo monoclonal para a preparação de ummedicamento para realizar o método de tratamento decâncer em um indivíduo necessitando do mesmo,compreendendo, administrar ao indivíduo uma quantidade detratamento eficaz de um anticorpo terapêutico; e tambémadministrar ao indivíduo uma quantidade de tratamentoeficaz de um agente alquilante.

Um aspecto adicional desta invenção refere-se ao uso deum agente alquilante para a preparação de um medicamentopara realizar o método de tratamento de câncer em umindivíduo necessitando do mesmo, compreendendo,administrar ao indivíduo uma quantidade de tratamentoeficaz de um anticorpo terapêutico; e também administrarao indivíduo uma quantidade de tratamento eficaz de umagente alquilante.

Os objetivos precedentes e outros objetivos e aspectos dapresente invenção serão explicados em detalhes norelatório descritivo apresentado a seguir.

Descrição detalhada das configurações da presenteinvenção

Os termos "anticorpo monoclonal 81C6", "anticorpo 81C6",ou termos similares abrangem ambos os anticorposmonoclonal de murine 81C6 (mu81C6), e o anticorpoquimérico 81c6 (ch81C6) c âmundongo-humano, ambos estãodescritos na Patente U.S. No. 6,624,659. Esta e todas asoutras patentes e pedidos de patente norte-americanosaqui mencionados são incorporados aqui por referência. Osreferidos anticorpos monoclonais são produzidos de acordocom as técnicas conhecidas.

O termo "anticorpo" como usado aqui se refere a todos ostipos de imunoglobulinas, incluindo IgG, IgM, IgA, IgD, eIgE. O termo "imunoglobulina" inclui os subtipos destasimunoglobulinas, tais como IgGi, IgG2, IgG3, IgG4, etc..Destas imunoglobulinas, a IgM e a IgG são preferidas, eIgG é particularmente preferida. Os anticorpos podem serde quaisquer espécies de origem, incluindo (por exemplo),camundongos, ratos, coelhos, cavalos, ou humanos, oupodem ser anticorpos quiméricos. Ver, por exemplo, M.Walker et al., λxMolec. Immunol., 26 - 403-411 (1989)". 0termo "anticorpo" como usado aqui inclui fragmentos deanticorpos, os quais retêm a capacidade de se ligar a umantígeno alvo, por exemplo, Fab, (F(ab')2), e fragmentosFv, e aos fragmentos correspondentes obtidos a partir deoutros anticorpos além da IgG. Os referidos fragmentostambém são produzidos por técnicas conhecidas.

O termo "anticorpo policlonal" como usado aqui se refereàs múltiplas imunoglobulinas no anti-soro produzido paraum antígeno seguido por imunização, e o qual podereconhecer e se ligar a um ou mais epítopos daqueleantígeno. Os anticorpos policlonais usados para realizara presente invenção podem ser produzidos por imunizaçãode um indivíduo adequado com origem em qualquer espécie,incluindo, (por exemplo) camundongos, ratos, coelhos,cabras, ovelhas, galinhas, burro, cavalos ou humanos, comum antígeno para o qual um anticorpo monoclonal se ligaao alvo, coletando o soro imune a partir do animal, eseparando os anticorpos policlonais a partir do soroimune, de acordo com os procedimentos conhecidos.0 termo "cerca de" ou "aproximadamente" como usado aquisignifica dentro de uma faixa de erro aceitável para ovalor particular como determinado por um técnico noassunto, o qual dependerá, em parte, de quanto do valor émedido ou determinado, ou seja, as limitações do sistemade medida. Por exemplo, "cerca de" pode significar dentrode 1 ou mais que 1 desvio padrão, pela prática detécnica. Alternativamente, "cerca de" pode significar umafaixa de até 2 0%, pref erivelmente até 10%, maispref erivelmente até 5% e, mais pref erivelmente ainda, até1% de um valor determinado. Alternativamente,particularmente com relação aos sistemas ou processosbiológicos, o termo pode significar dentro de uma ordemde magnitude, preferivelmente, dentro de 5-vezes e, maispreferivelmente, dentro de 2-vezes, um valor. Porexemplo, no campo da radioterapia, "cerca de 44Gy" podesignificar 44 Gy + 20% (uma faixa de 35,2 a 52,8 Gy),devido as dificuldades inerentes em medir as doses deradiação absorvidas (RADs) apuradamente. Preferivelmente,na prática, "cerca de 44 Gy" significa 44 Gy +_ 10% (umafaixa de 39,6 a 48,4 GY), mas este nível de acurácia podeser difícil de se conseguir.

O termo "farmaceuticamente aceitável" como utilizado aquisignifica compatível biologicamente ou farmacologicamentepara uso in vivo, em animais ou em humanos e,preferivelmente, significa aprovado por uma agênciareguladora do Governo Federal ou do Estadual, ou listadona Farmacopéia dos Estados Unidos ou em outrasfarmacopéias geralmente reconhecidas para uso em animaise, mais particularmente, em humanos.

"Radionuclídeo" como descrito aqui pode ser qualquerradionuclídeo apropriado para liberação de uma dosagemterapêutica de radiação em um tumor ou célulacancerígena, incluindo, mas não se limitando a 227Ac,211At, 131Ba, 77Br, 109Cd, 51Cr, 67Cu, 165Dy, 155Eu, 153Gd, 198Au,166Ho, 113mIn, 115mIn, 123I, 125I, 131I, 189Ir, 191Ir, 192Ir,194Ir, 52Fe, 55Fei59Fe, 177Lu, 109Pd, 32P, 226Ra, 186Re, 188Re,153Sm, 46Sc, 47Sc, 72Se, 75Se, 105Ag, 89Sr, 35S, 177Ta, 117mSn,121Sn, 166Yb, 169Yb, 90Y, 212Bi, 119Sb, 197Hg, 97Ru, 100Pd,lolmRh, 212Pb, 64Cu, 225Ac, 213Bi e 124I.

"Radioterapia de irradiação externa" é realizada pelaliberação de uma irradiação de energia alta de raios-X emum local do tumor do indivíduo. A irradiação é geradafora do indivíduo e é dirigida ao sítio do tumor. Nenhumafonte de radioativo é colocada dentro do corpo doindivíduo.

Uma "quantidade eficaz terapeuticamente" como utilizadoaqui significa a quantidade de um composto que, quandoadministrado para um indivíduo para tratamento de umestado, distúrbio ou condição é suficiente para efetuarum tratamento (como definido abaixo). A "quantidadeeficaz terapeuticamente" irá variar dependendo docomposto, a doença e sua severidade e a idade, peso,condição física e a resposta do indivíduo a ser tratado.

De acordo com a presente invenção, em uma configuração,uma quantidade eficaz terapeuticamente do anticorporadio-marcado é uma quantidade eficaz para tratar várioscânceres. Em uma outra configuração, uma quantidadeeficaz terapeuticamente do anticorpo não-marcado é umaquantidade efetiva para bloquear a ligação do anticorporadio-marcado ao tecido saudável, não-alvo.

"Tratar" como usado aqui se refere a qualquer tipo detratamento ou prevenção que transmite um benefício a umindivíduo afligido com uma doença ou em risco dedesenvolver a doença, incluindo, melhora na condição doindivíduo (por exemplo, em um ou mais sintomas) , impediro progresso da doença, impedir o início dos sintomas ouatrasar o progresso dos sintomas, etc. . Como tal, o termo"tratamento" também inclui tratamento profilático doindivíduo para prevenir o início dos sintomas. Como usadoaqui, "tratamento" e "prevenção" não implicam,necessariamente, na cura ou abolição completa dossintomas.

"Quantidade eficaz no tratamento" como utilizado aquisignifica uma quantidade do anticorpo suficiente paraproduzir um efeito desejado em um indivíduo afligido comcâncer, incluindo, melhora na condição do indivíduo (porexemplo, em um ou mais sintomas), e impedir o progressoda doença, etc..

Um "indivíduo" ou "indivíduo com necessidades" é ummamífero humano ou não-humano necessitando deradioimunoterapia (RIT) , quimioimunoterapia, imunoterapiacitotóxica ou alguns outros métodos terapêuticos deacordo com a presente invenção.

Uma "cavidade amputada criada cirurgicamente" ("SCRC") éuma cavidade no cérebro que é criada cirurgicamentedurante a remoção de um tumor cerebral, tal como umglioblastoma multiformas ("GBM"). Uma "margem" é umaregião de parênquima ou tecido cerebral que envolve oSCRC e pode ser expresso em termos de uma distância apartir do SCRC/interface do parênquima, ou fora daextremidade do SCRC.

Uma "região de interesse" ("ROI") como utilizado aqui éuma região definida do tecido em ou próxima do SCRC. UmROI pode ser uma região que está localizada na margem (oufora da extremidade) do SCRC. "Parênquima" ou "tecidoparenquimal" como usado aqui consiste no tecido compostodas células funcionais. As células do parênquima sãomuito menos tolerantes para um meio degradado, porexemplo, um SCRC, mais do que as células estruturais, oudo tecido mesenquimal. Uma "interface" SCRC como usadoaqui descreve a fronteira entre o SCRC e o tecidosaudável perto.

Um "tempo de residência" como usado aqui é uma medida deaté quando um radionuclídeo é retido no corpo. Uma"taxa de liberação de todo o corpo" é um tempo deresidência total no corpo.

Um "valor-S" como usado aqui é um valor que descreve adose absorvida para uma região alvo-específico a partirda emissão da radiação até uma outra fonte. Os valores-Spodem ser derivados usando os métodos de Monte Cario e avisão MIRD, de acordo com os cálculos conhecidos pelostécnicos no assunto. Os valores-S são dependentes dotamanho da cavidade amputada criada cirurgicamente(SCRC) , a qual pode variar de menos que cerca de 2 cm3(um valor-S de cerca de 9,60E-3 Gy hora mCi-1) , a cercade 60 cm3 (um valor-S de cerca de 2,34E-3 Gy hora mCi-1) ,ou além.

Uma "dose absorvida" como utilizada aqui é a energia deradiação (ou radioatividade) absorvida (ou "depositada")em uma região de interesse ou outro material por unidadede massa do material. Esta é diferente da dose"administrada" ou "terapêutica" ou "radioimunoterapia"(RIT), que é a quantidade total de radioatividadeadministrada a um indivíduo. A dose absorvida refere-seapenas à quantidade de energia de radiação (ouradioatividade) que foi administrada e absorvida (ou"depositada") em um tecido. "dose absorvida" éalternativamente conhecida como "Dose de radiaçãoabsorvida" ou "RAD" . Se a dose absorvida ou dose RIT édeterminada antes do emprego dos métodos dosimétricos, deacordo com esta invenção, para estimar uma dose RIT, adose absorvida ou uma RAD é denominada por "doseabsorvida pré-determinada" ou uma "RAD pré-determinada" .

A RAD pré-determinada pode ser uma RAD ótima pré-determinada baseada em um dado experimental. Uma RADótima pré-determinada pode ser determinada por qualquermeio aceito no campo do câncer ou de terapia da doença,incluindo triagem experimental onde a segurança e aeficácia de um agente radioterapêutico particular podeser determinada. Por exemplo, um RAD ótimo pode serdeterminado com base na toxicidade e no resultado clínicoem um grupo observado de indivíduos. Em uma configuração,o RAD ótimo pré-determinado é de cerca de 44 Gy.

Uma "dose radioimunoterápica" ("dose RIT") como usadaaqui é a dose de um agente RIT a ser liberado compropósitos terapêuticos. Uma dose RIT terapêutica écalculada para conseguir uma dose absorvida de radiaçãopré-determinada (RAD).

Uma "porção alvo" como utilizado aqui é qualquer porçãoque é capaz de se ligar a, ou seja, um "companheiro deligação", do agente pretendido da terapia, e liberar umaquantidade de um (agente radioterapêutico) radio-marcado,agente quimioterapêutico, agente citotóxico, ou outroagente terapêutico conhecido da técnica. Por exemplo, umaporção alvo pode ser um ligante receptor nos exemplos,quando o alvo é um receptor celular. Preferivelmente, oagente terapêutico é um anticorpo, por exemplo, oanticorpo monoclonal 81C6. Quando a porção alvo é umanticorpo e o agente terapêutico é um radio-marcado, ocomplexo pode ser denominado de dose radioimunoterápica(RIT).

Uma "dose dosimétrica' como descrito aqui é uma dosepequena ("sub-terapêutica") utilizada para calcular umadose RIT a ser administrada no futuro. Um número de dosesdosimétricas são administradas em quantidadesaumentadas, após o que uma série de análises de respostadas doses são realizadas e a dose RIT desejada édeterminada, com base em uma dose absorvida pré-determinada.

O "constituinte do estroma extracelular" como utilizadoaqui se refere a um composto específico ao espaçoextracelular (como oposto ao celular ou superfíciecelular), incluindo o glicocálice, a matriz extracelular,e a lâmina basal. Exemplos dos constituintes do estromaextracelular incluem, mas não se limitam a, fibrinogênio,fibronectina, colágeno, laminina, proteoglicano,tenascina, entactina, e trombospondina. Se o constituintecelular compreender células de tumor ou de câncer, oconstituinte do estroma extracelular é o constituinte do"tumor". Um anticorpo bloqueador que se liga a tenascinano constituinte do estroma extracelular se ligará àsmoléculas de tenascina no constituinte do estromaextracelular de ambos, o tecido normal e o tecidotumoral.

0 "agente quimioterapêutico" como usado aqui inclui, masnão se limita a metorexato, daunomicina, mitomicina,cisplatina, vincristina, epirubicina, fluorouracila,verapamil, ciclofosfamida, arabinosídeo de citosina,aminopterina, belomicina, mitomicina C, democolcine,etoposídeo, mitramicina, clorambucil, melfalan,daunorubicina, doxorubicina, tamosifen, paclitaxel,vincristin, vinblastina, camptotecina, actinomicina D, ecitarabina.

0 "agente citotóxico" como usado aqui inclui, mas não selimita a ricina (ou mais particularmente, a cadeia A daricina), aclacinomicina, toxina da difeteria, Monensin,Verrucarin A, Abrin, alcalóides da vinca, Tricotecenos, eexotoxina A de Pseudomonas.

A "radioimunoterapia" ou "RIT" como usado aqui se referea terapia usando um anticorpo conjugado com umradionuclídeo (ou radio-marcado).

"Gy" como usado aqui se refere a uma unidade para umadose específica absorvida de radiação igual a 100 Rads.Gy é a abreviação para "Cinza/prateado".

"Quimioimunoterapia" como usado aqui se refere a terapiausando um anticorpo conjugado com um agente citotóxico.Um "anticorpo terapêutico" como usado aqui é um anticorpoque é conjugado com um radionuclídeo (ou "radio-marcado"), um agente quimioterapêutico, ou um agentecitotóxico. Quando o anticorpo terapêutico é conjugadocom um radionuclídeo (ou radio-marcado), ele é conhecidocomo um agente RIT ou um anticorpo RIT.

Um "agente alquilante" como usado aqui é um composto quetem a capacidade de adicionar grupos alquila (gruposalquila são compostos contendo apenas carbono ehidrogênio e tendo a fórmula geral CnH2n+1, por exemplo,um grupo metila (CH3)) para grupos eletronegativos, porexemplo, ácidos nucléicos, sob condições presentes emcélulas. Eles param o crescimento do tumor através dosnucleotídeos de guanina reticulantes nas fitas de DNA dedupla hélice. Isto faz a fita de DNA incapaz dedesenrolar e separar. Como isto é necessário para areplicação do DNA, as células não podem mais se dividir.

Uma vez que as células do câncer geralmente se dividemmais rapidamente do que as células saudáveis, elas sãomais sensíveis aos danos do DNA. Os agentes alquilantessão usados clinicamente para tratar uma variedade detumores. Um exemplo de um agente alquilante é atemozolomida, que pode ser utilizada para tratar umavariedade de cânceres, incluindo os cânceres que sãosubmetidos a métodos de tratamento aqui. A "temozolomida"como ele é utilizada se refere a temozolomida e todos osanálogos, sais farmaceuticamente aceitáveis, e pró-fármacos dos mesmos.

Um "pró-fármaco" como utilizado aqui é um fármacofarmacológico que é administrado em uma forma inativa (ousignificativamente menos ativa). Uma vez administrado, opró-fármaco é metabolizado no corpo in vivo no compostoativo.

1. Indivíduos:Os indivíduos necessitando de tratamento, pelos métodosdescritos aqui, incluem indivíduos afligidos com Iinfoma,bem como indivíduos afligidos com tumores sólidos oucânceres, tais como no pulmão, cólon, seios, cérebro,fígado, próstata, baço, músculo, ovário, pâncreas, pele(incluindo melanoma), etc..

Os indivíduos a serem tratados pelos métodos da presenteinvenção, incluem particularmente os indivíduos afligidoscom um tumor expressando a tenascina, incluindo gliomas,fibrosarcomas, osteosarcomas, melanomas, tumor de Wilms,carcinoma de cólon, carcinomas mamário e de pulmão, ecarcinomas escamosos.

Os indivíduos a serem tratados pela presente invenção,mais particularmente incluem os indivíduos afligidos comtumores cerebrais ou cânceres, tais como glioblastomas,particularmente, glioblastoma multiforme, e astrocitomacístico.

A presente invenção é primariamente relacionada com otratamento de indivíduos humanos, incluindo indivíduosmachos e fêmeas, neonatal, bebês, jovens, adolescentes,adultos, e indivíduos velhos, mas a invenção também podeser conduzida em indivíduos animais, particularmente,indivíduos mamíferos, tais como, camundongos, ratos,cachorros, gatos, animais de fazenda, e cavalos com opropósito veterinário, e para classificação de fármacos ecom o propósito de desenvolver fármacos.

2. Anticorpos:

Os anticorpos que se ligam aos constituintes do estromaextracelular dos cânceres e tumores são conhecidos edescritos em, por exemplo, nas Patentes U.S. Nos.:6.783.760 e 6.749.853.

Os anticorpos empregados na realização da presenteinvenção podem ser àqueles que se ligam a tenascina.

Particularmente preferido os anticorpos monoclonais anti-tenascina são os anticorpos monoclonais 81C6 (MAb 81C6) eos anticorpos que se ligam aos epítopos de ligaçãoatravés do anticorpo monoclonal 81C6 (ou seja, anticorposque têm reação-cruzada com, ou bloqueiam a ligação doanticorpo monoclonal 81C6). Os anticorpos podem serproduzidos por qualquer técnica apropriada, tal como emedemas/aseites de camundongos pelados, em cultura defibra oca, em cultura em suspensão, etc.. 0 anticorpomonoclonal 81C6 está em uma configuração de um anticorpomonoclonal IgG2b murine, destacada de uma fusão dehibridoma seguido por imunização de um camundongo BALB/ccom a proteína acídica fibrilar glial (GFAP)-expressandoa linha U-251 MG do glioma humano permanente, comoconhecida e descrita em M. Bourdon et al. , "Câncer Res. "43, 2796 (1983) (mu81C6).

Particularmente preferido para realização da presenteinvenção é um anticorpo monoclonal quimérico 81C6camundongo-humano (ch81C6), como descrito na Patente U.S.No.: 5,624,659 para Bigner e Zalustsky, ou o anticorpomonoclonal 81C6 murine como descrito em M. Bourdon etal., supra.

Os anticorpos para uso na presente invenção se ligam,especificamente, à tenascina com uma afinidade deligação, relativamente alta, com uma constante dedissociação de cerca de IO"4 a IO"13. Em configurações dainvenção, a constante de dissociação do complexoanticorpo-tenascina é de pelo menos IO"4, preferivelmentede pelo menos IO"6 e, mais pref erivelmente, pelo menos10"9.

Os anticorpos bloqueadores que podem ser utilizados emconjunto com a administração dos anticorpos terapêuticosde acordo com a presente invenção são, em geral, nãoemparelhados ou conjugados com qualquer agenteterapêutico, enquanto os anticorpos terapêuticosutilizados para realizar a presente invenção são, emgeral, emparelhados ou conjugados para um agenteterapêutico. Assim, os anticorpos bloqueadores não sãopor si só ativos terapeuticamente no tratamento do câncernos métodos descritos aqui.

Os anticorpos utilizados para a terapia (ou seja, em ummétodo para combater o câncer) podem ser anticorpospoliclonais ou monoclonais, per se, ou anticorposmonoclonais emparelhados com um agente terapêutico. Osreferidos anticorpos são algumas vezes relacionados aquicomo anticorpos terapêuticos.

Qualquer agente terapêutico convencionalmente emparelhadocom um anticorpo monoclonal pode ser empregado, incluindo(mas não limitado a) radionuclideos, agentes citotóxicos,e agentes quimioterapêuticos. Ver, geralmente,"Monoclonal Antibodies and Câncer Therapy" (R. Reisfeld eS. Sell Eds., 1985, Alan R. Liss, Inc., N.Y.). Os agentesterapêuticos tais como radionuclideos, agentescitotóxicos e agentes quimioterapêuticos são conhecidos edescritos nas patentes U.S. Nos.: 6.787,153; 6.783,760;6.676,924; 6.455,026; e 6.274,118.

Os agentes terapêuticos podem ser emparelhados aosanticorpos por meios diretos ou meios indiretos (porexemplo, via um quelante) através de qualquer técnicaapropriada, incluindo, mas não se limitando àquelasdescritas nas Patentes U.S. Nos.: 6.787,153; 6.783,760;6.676,924; 6.455,026; e 6.274,118. Os agentesterapêuticos podem ser emparelhados ou conjugados aosanticorpos através do método Iodogen ou com N-succinimidil-3-(tri-n-butilstanil)benzoato (o "métodoATE"), como será aparente àqueles técnicos no assunto.Ver, por exemplo, M. Zalutsky e A. Narula, "Appl. Radiat.Isot.", 38, 1051 (1987).

Deverá ser apreciado que os anticorpos monoclonais comousado aqui incorporam àquelas porções da região constanteem um anticorpo necessário para incitar a respostaimunológica no indivíduo sendo afetado.

3. Formulações do anticorpo:

Os anticorpos bloqueadores e os anticorpos terapêuticosserão cada um, geralmente, misturados, antes daadministração, com uma não-tóxica, substânciatransportadora farmaceuticamente aceitável (por exemplo,salina normal ou salina fosfato tamponada), e serãoadministrados usando qualquer procedimento médicoadequado, por exemplo, administração parenteral (porexemplo, injeção) tal como por injeção intravenosa ouintra-arterial.

Os compostos dos anticorpos bloqueadores e anticorposterapêuticos descritos acima podem ser formulados paraadministração em um transportador farmacêutico de acordocom técnicas conhecidas. Ver, por exemplo: Remington,"The Science and Practice of Pharmacy" (9th Ed., 1995).

Na fabricação de uma formulação farmacêutica de acordocom a invenção, o composto ativo (incluindo os saisfarmaceuticamente aceitáveis do mesmo) é tipicamentemisturado com, inter alia, um veículo apropriado. 0veículo deve, é claro, ser aceitável no sentido de sercompatível com qualquer outro ingrediente na formulação enão deve ser deletério para o indivíduo. 0 veículo podeser um líquido e é preferivelmente formulado com ocomposto como uma formulação de dose única a qual podeconter de 0,01 ou 0,5% a 95% ou 99% em peso do compostoativo.

Como discutido adicionalmente abaixo, os anticorposterapêuticos podem, opcionalmente, ser administrados emconjunto com outro, diferente, composto ativo útil notratamento dos distúrbios ou condições descritos aqui(por exemplo, quimioterapêuticos). Os outros compostospodem ser administrados ao mesmo tempo. Como utilizadoaqui, a palavra "ao mesmo tempo" significasuficientemente próximo em tempo para produzir um efeitocombinado (ou seja, ao mesmo tempo pode sersimultaneamente, ou pode ser duas ou mais administraçõesocorrendo antes ou após cada uma das outras).

As formulações da presente invenção apropriadas paraadministração parenteral compreender soluções parainjeção aquosa estéril e não-aquosa do composto ativo,ditas preparações são preferivelmente isotônicas com osangue do recipiente pretendido. Estas preparações podemconter anti-oxidantes, tampões, bacteriostáticos esolutos que rendem a formulação isotônica com o sangue dorecipiente pretendido.

Anticorpos bloqueadores e terapêuticos podem ser providosna forma liofilizada em um recipiente asséptico estérilou pode ser provido em uma formulação farmacêutica emcombinação com um veículo farmaceuticamente aceitável,tal como água estéril livre de pirogênio e ou soluçãosalina fisiológica estéril livre de pirogênio.

4. Exemplos de tumores, cânceres e tecidos neoplásicos:

Os exemplos de tumores, cânceres e tecidos neoplásicosque podem ser tratados de acordo com a presente invençãoincluem, mas não se limitam a, distúrbios malignos taiscomo cânceres de seios; osteosarcomas; angiosarcomas;fibrosarcomas e outros sarcomas; leucemias; Iinfomas(linfoma de Hodgkins e Iinfoma Não-Hodgkin), e outroscânceres de sangue; mielodisplasia, distúrbiosmieloproliferativos; tumores dos sinos; ovariano, uretal,bexiga, próstata e outros cânceres genito-urinários;cólon, cânceres de esôfago e de estômago e outroscânceres gastrointestinais; cânceres de pulmão; mielomas;cânceres pancreáticos; cânceres de fígado; cânceres derins; cânceres endócrinos; cânceres de pele; e tumores nocérebro ou do sistema nervoso centro e sistema nervosoperiférico, maligno ou benigno, incluindo gliomas eneuroblastomas.

5. Estudos Dosimétricos:

A quantidade do anticorpo terapêutico administrado é, emalgumas configurações, determinada através de um estudodosimétrico antes da administração de uma dosagemterapêutica. Por exemplo, um método para uma estimativadosimétrica para uma região de interesse em torno de umacavidade dissecada em um indivíduo, pode ser realizadopor: determinação do tamanho de uma cavidade dedissecação; determinação do tempo de residência com baseno tamanho da cavidade dissecada e da radiação detectadaa partir da região de interesse em uma pluralidade deperíodos subseqüentes à administração de uma dosedosimétrica radioimunoterápica ("RIT"); e calcular umadose RIT terapêutica administrada com base no tempo deresidência; o tamanho da cavidade dissecada, e uma dosepré-determinada absorvida (por exemplo, uma dose ótimaabsorvida com base em um dado experimental, em algumasconfigurações de cerca de 44 Gy).

O método dosimétrico pode incluir realizado cintilografiaem todo o corpo para detectar a radiação a partir daregião de interesse (por exemplo, onde a cintilografia érealizada em um primeiro tempo que é substancialmente omesmo tempo da administração da dose RIT dosimétrica, emum segundo período de tempo que é de cerca de 24 horassubseqüentes ao primeiro período de tempo, e em umterceiro período de tempo que é de cerca de 48 horassubseqüentes ao primeiro período de tempo).

O método dosimétrico pode incluir a realização de umaimagem de ressonância magnética para determinar o tamanhoda cavidade dissecada.

Em algumas configurações, a região de interesse é umaregião do parênquima com até cerca de um ou doiscentímetros a partir da margem da cavidade dissecada.A dose RIT terapêutica administrada pode, por exemplo,ser calculada com base na fórmula:

<formula>formula see original document page 18</formula>

onde Dscrs é a dose absorvida pré-determinada,

S(B2_cm<-SCRC) é um valor-S estimado com base no tamanhoda cavidade de dissecação em Gy hora mCi"1, e CScrc é otempo de residência na cavidade de dissecação.

6. Administração do anticorpo:

Os anticorpos bloqueadores e anticorpos terapêuticospodem ser administrados por qualquer procedimento médicoapropriado, por exemplo, administração normal intravenosaou intra-arterial, injeção em fluido cérebro-espinal. Emdeterminados casos, intradérmico, intracavidade,intratecal ou administração direta ao tumor ou em umsuprimento da artéria do tumor é vantajosa.

A dosagem do anticorpo bloqueando dependerá, dentreoutras coisas, da condição do indivíduo, da categoriaparticular ou do tipo de câncer a ser tratado, da rota deadministração, da natureza do agente terapêuticoempregado, e da sensitividade do tumor ao agenteterapêutico particular. Por exemplo, a dosagem serátipicamente de cerca de 1 a 10 micro-gramas porqui logramas do peso do corpo do indivíduo. A dosagemespecífica do anticorpo não é crítica, enquanto ele éefetivo para resultar em alguns efeitos benéficos emalguns indivíduos dentro de uma população afetada. Emgeral, a dosagem pode ser tão inferior quanto cerca de0,05; 0,1; 0,5; 1; 5; 10; 2 0 ou 50 microgramas porquilograma do peso do corpo do indivíduo, ou menor, emaior que cerca de 5; 10; 20; 50; 75 ou 100 microgramaspor qui logramas do peso do corpo indivíduo, ou aindamaior.

A dosagem do anticorpo terapêutico dependerá igualmente,dentre outras coisas, da condição do indivíduo, dacategoria ou do tipo particular de câncer sendo tratado,a rota da administração, a natureza do agente terapêuticoempregado, e a sensibilidade do tumor a um agenteterapêutico particular. Por exemplo, a dosagem dependeráde cerca de 1 a 10 microgramas por quilograma de peso doindivíduo. A dosagem específica do anticorpo não écrítica, enquanto ele é efetivo para resultar em algunsefeitos benéficos em alguns indivíduos dentro de umapopulação afetada. Em geral, a dosagem pode ser tãoinferior quanto cerca de 0,05; 0,1; 0,5; 1; 5; 10; 20 ou50 microgramas por quilograma do peso do corpo doindivíduo, ou menor, e maior que cerca de 5; 10; 2 0; 50;75 ou 100 microgramas por qui logramas do peso do corpoindivíduo, ou ainda maior.

Em um outro exemplo, quando o agente terapêutico é 131I, adosagem para o indivíduo será tipicamente de 10 mCi a100, 300 ou mesmo 500 mCi. Como de outro modo afirmado,quando o agente terapêutico for 131I, a dosagem para oindivíduo será tipicamente de 5,000 Rads (50 Gy) a100,000 Rads (1000 Gy) preferivelmente, pelo menos 13,000Rads (130 Gy), ou mesmo pelo menos 50,000 Rads (500 Gy).

As doses para outros radionuclídeos são tipicamenteselecionadas de modo que a dose tumoricida seráequivalente às faixas precedentes de 131I, mesmo que aquantidade de radiação possa ser diferente. Por exemplo,apenas uns poucos milicurie de 211At pode ser requeridapara liberar uma dose de radiação aos tumores equivalenteàquela liberada por 100 milicurie de 131I.

O anticorpo terapêutico pode ser administrado porqualquer meio apropriado incluindo injeção intravenosa einjeção dentro do tumor. Quando o tumor ou uma porção domesmo for cirurgicamente removido, previamente, oanticorpo pode ser administrado dentro do sítio do tumor(e particularmente dentro de uma cavidade fechada ou"cavidade dissecada" no sítio do tumor) por injeçãodireta ou através de um reservatório pré-implantado.

Em uma configuração preferida, os anticorpos terapêuticossão administrados em uma dose de 30 a 60 Gy, maispreferivelmente, de 40 a 50 Gy, ainda, maispreferivelmente de 40 a 48 Gy e, mais preferivelmente de44 Gy, com a dose preferivelmente determinada por meio deum estudo dosimétrico como descrito acima.

7. Agente alquilante:

Os agentes alquilantes úteis para realizar a presenteinvenção incluem, mas não se limitam a, l,3-jbis(2-cloroetil)-1-nitrosurea (BCNU) e derivados de tetrazina,particularmente, derivados de [3H]imidazol-[5,1-d]1,2,3,5-tetrazin-4-ona tais como, temozolomida eanálogos dos mesmos, incluindo, sais farmaceuticamenteaceitáveis dos mesmos e pró-fármacos dos mesmos. Osreferidos compostos são conhecidos. Ver, por exemplo, aPatente U.S. Nos.: 6.096,724; 6.844,434; e 5.260,291.

Exemplos de agentes alquilantes úteis para realizar apresente invenção incluem, os agentes alquilantes de [3h]- imidazo[5,1-d]-1,2,3,5-tetrazin-4-onas, particularmenteàqueles da fórmula geral:

<formula>formula see original document page 21</formula>

onde R1 representa um átomo de hidrogênio, ou um alquilade cadeia ramificada ou linear, alquenila ou um grupoalquinila contendo até 6 átomos de carbono, cada um dosreferidos grupos sendo substituído ou não-substituído apartir de um a três substituintes selecionados dohalogênio (ou seja, átomos de bromina, iodina ou,preferivelmente, clorina ou fluorina), alcoxi de cadeialinear ou ramificada (por exemplo, metoxi), gruposalquiltio, alquilsuliinil, ou alquilsulfonil contendo até4 átomos de carbono e, opcionalmente, grupos fenilasubstituídos. Alternativamente, R1 representa um grupocicloalquila, e R2 representa um grupo carbamoil que podecarregar no átomo de nitrogênio um ou dois gruposselecionados dos grupos alquila ou alquenila de cadeiaramificada ou linear, cada um dos grupos contendo até 4átomos de carbono, e grupos cicloalquila, por exemplo, umgrupo metilcarbamoiIa ou dimetilcarbamoiIa. Quando osímbolo R1 representa um grupo alquila, alquenila oualquinila substituído por dois ou três átomos dehalogênio, os átomos de halogênio acima mencionados podemser os mesmos ou diferentes. Quando o símbolo R1representa um grupo alquila, alquenila ou um grupoalquinila substituído por um, dois ou três grupos fenilasubstituídos opcionais, os substituintes opcionais noradical(ais) fenila podem ser selecionados dos, porexemplo, grupos alcoxi e alquila contendo até 4 átomos decarbono (por exemplo, metoxi e/ou grupo(s) metila e ogrupo nitro; o símbolo R1 pode representar, por exemplo,um grupo benzila ou p-metoxibenzila. Os gruposcicloalquila dentro das definições dos símbolos R1 e R2contém de 3 a 8, preferivelmente, 6 átomos de carbono. Oscompostos podem ser providos como sais ou pró-fármacos,particularmente sais de metal álcali onde R1 é H. Ver,por exemplo, a Patente U.S. No.: 5,260,291.

Temozolomida, em uma forma dosagem oral de 5 mg, 2 0 mg,100 mg, e 250mg na forma de cápsula, está comercialmentedisponível como TMODAR® da Schering Corporation,Kenilworth N.J. 07033 E.U.A.

Em uma configuração preferida, o agente alquilante éadministrado em um ciclo de doses diárias de 3, 4, 5, 6dias ou 7 dias consecutivos. Uma dose diária apropriadapode ser de 50, 100 ou 150 mg/m2/dose, até 200, 250 ou300 mg/m2/dose. Este ciclo pode ser repetido, porexemplo, a cada duas, três, quatro ou cinco semanas, porum tempo de até 6, 8 ou 10 ciclos. A primeira dose noprimeiro ciclo do agente alquilante pode ser administradaem qualquer ponto adequado de tempo. Em algumasconfigurações, a primeira dose de agente alquilante éadministrada por até duas ou quatro semanas antes daadministração do anticorpo terapêutico; em algumasconfigurações a primeira dose do agente alquilante éadministrada em, pelo menos, duas, quatro ou seis semanasseguido pela administração do anticorpo terapêutico. Emuma outra configuração, o agente pode ser administradoconcomitantemente com a terapia do anticorpo.

Adicionalmente, a determinação da administração pode serincluída quando, tratamentos terapêuticos adicionais,tais como radioterapia de irradiação externa também foraplicada ao indivíduo.

8. Radioterapia de irradiação externa:

Opcionalmente, mas em algumas configurações preferidas, oindivíduo também recebe radioterapia de irradiaçãoexterna. Por exemplo, a radioterapia de irradiaçãoexterna é, particularmente preferida para os tumorescerebrais tais como, glioblastoma. A radioterapia deirradiação externa é conhecida e pode ser realizada deacordo com técnicas conhecidas. A irradiação pode serproduzida por qualquer meio apropriado, incluindoaceleradores médicos lineares e unidades e irradiaçãoexterna de Cobalto 60. A fonte de radiação pode sermontada em uma argola que gira ao redor do indivíduo demodo que uma área alvo dentro do indivíduo seja irradiadaa partir de diferentes direções. Antes da irradiação otratamento é tipicamente planejado em um computadorusando algoritmos que simulam a emissão da radiação epermite ao pessoal médico construir a terapia deirradiação. Numerosas variações da terapia de irradiaçãoexterna que podem ser utilizadas para conduzir a presenteinvenção serão facilmente aparentes, aos técnicos noassunto. Ver, por exemplo, as patentes norte-americanasNos.: US 6.882.702; 6.879.659; 6.865.253; 6.863.704;6.826.254; 6.792.074; 6.714.620 e 5.528.650.

A terapia de irradiação externa é preferivelmenteadministrada em uma série de seções de acordo comtécnicas conhecidas, com as seções começando,preferivelmente, de duas a quatro semanas após aadministração do anticorpo terapêutico. Por exemplo, aradioterapia por irradiação externa pode ser administradade 3, 4, 5, 6 o 7 dias por semana, durante um período dequatro, cinco, seis ou sete semanas, em uma dose diáriade 0,5 ou 1 Gy, até 2 ou 3 Gy, até a dose total desejada(por exemplo, de 30 ou 40 Gy, até 5 0 ou 60 Gy) seradministrado.

A dose liberada pode ser em uma área incluindo a margemde um tecido normal (por exemplo, uma margem de 1, 2 ou 3cm em todas as direções) em torno do tumor, ou - onde otumor ou uma porção do mesmo foi pref erivelmenteremovida, cirurgicamente - em torno do sítio do tumor.

Quando a radioterapia de irradiação externa é empregada,o indivíduo pode receber uma programação adicional daadministração do agente alquilante, diferente daqueladescrita acima, em uma dose um pouco menor, durante ocurso da radioterapia. Por exemplo, o indivíduo podereceber doses diárias do agente alquilante em umaquantidade de 25 ou 50 mg/m2/dose até 100 ou 125mg/m2/dose diária durante o curso da terapia deirradiação externa.

EXEMPLOS

A presente invenção será melhor entendida através dasreferências aos exemplos a seguir, que são providos comouma forma exemplif icativa da invenção, e não como umaforma de limitação da mesma.

Exemplo 1

Produção de 81C6

A produção do anticorpo monoclonal 81C6 murine éconhecida. Ver por exemplo, M. Bourdon et al. , "CâncerRes.", 43, 2796 (1983). 0 anticorpo monoclonal 81C6 podeser produzido por qualquer técnica adequada, tal como umaascites de camundongo pelado, cultura de fibra oca,cultura em suspensão, etc..

Em uma configuração, o camundongo sem pêlos produziu umfluido de ascites contendo imunoglobulina éultracentrifugado em 125000 χ g durante 45 minutos. 0sobrenadante é esterilizado através de um filtro de 0,22Millistak (Millipore) . A imunoglobulina é purificada apartir da ascites através da passagem em uma coluna deSepharose de proteína-A a qual é esterilizada através deuma coluna inundada com 10 volumes de 4 M guanidina-HCl.Após a lavagem da coluna com 10 volumes de coluna de umtampão Tris-NaCl (10 mM Tris em 0,9% de NaCl, pH 8.0),ascites é passada através da coluna de proteína-A. Acoluna é lavada com um tampão de Tris-Nacl com pH 8.0, eligada a imunoglobulina eluída com pH 3.0 do tampão deglicina HCl (0,55 M glicina, 0,85% de NaCl e 10 mM HCl).As frações são colhidas e imediatamente neutralizada com0,5 mililitros de um tampão Tris 1 Μ, pH 8.0. Aabsorbância é lida a 2 80 nm em um fluxo através doespectrofotômetro e as frações contendo imunoglobulinasão fundidas. A pureza da imunoglobulina fundida échecada por filtragem em gel em uma coluna e HPLC TSK-3000 e então dialisada durante a noite contra 2 0 volumesdo tampão de 7mM Tris-acetato (pH 6.0) em um pesomolecular de 50,000, cortada em um tubo de diálise. Umapolietilenoimina com um tamanho de 40 micron (PEI) foiobtida da JT Baker Company em um volume e um tamanho decoluna apropriado é embalado em uma quantidade deimunoglobulina a ser ligada. Um grama de PEI ou ABx secose ligará a 200 mg de imunoglobulina sob condiçõesideais. Colunas de aço limpas são aquecidas a 210°Cdurante quatro horas antes do enchimento para removerqualquer endotoxina. As colunas PEI são esterilizadas portransbordamento com 10 volumes de coluna de 4 M deguanidina. As colunas são então equilibradas através dotransbordamento de 2 0 a 30 colunas de volume de água e 7 5mM do tampão Tris acetato (pH 6.0). A imunoglobulinadialisada é injetada na coluna PEI. A coluna é lavada comtampão de equilíbrio até que 2 80 nanômetros (nm) deabsorbância em linha de base retornem a zero. A eluiçãodo anticorpo ligado da coluna PEI é acompanhada por umacorrida por 60 minutos em um gradiente linear de 0%-100%de um tampão 2M de No acetato (pH 6.8) e 1 fração emmililitros foi coletada. A absorbância do eluente émonitorada a 2 80 nm. Os tubos contendo imunoglobulina sãofundidos e dialisados exaustivamente contra um tampão defosfato 115 mM; pH 7.4. A endotoxina foi removida atravésda passagem do anticorpo sobre uma coluna ActiClean Etox(Sterogene; Carlsbad, CA) e então dialisada contra umtampão fosfato 115'mM, pH 7,4. Após a diálise, aconcentração da proteína é determinada e ajustada de 15 a16 mg/ml em uma dose da ampola de Rx e 5 mg/ml/ampola porestudo de quantificação da dose. As alíquotas são feitasem garrafas estéreis e livres de pirogênio através dainjeção da solução diretamente dentro das garrafasatravés de um filtro de Millipore de 0,22 microns. Aconcentração da proteína é determinada após a filtragempara ter certeza de nenhuma proteína foi perdida durantea filtragem. Os controles de qualidade eu são corridos nogrupo são esterilidade, ensaios do lisado de LimulusAmebócito (LAL) para endotoxinas, filtragem em gel porHPLC em uma coluna Super TSK 2000 tanto para 131I-marcadoquanto para mu81C6 não-marcado, e PAGE (eletroforese emgel de poliacrilamida) . A fração imunoreativa de 131I-marcado mu81C6 é checada através do método de Lindmo, deacordo com Lindmo et al. , nDetermination of theImmunoreative Fraction of Radiolabeled Monoclonalantibodies by Linear Extrapolation to Binding at InfiniteAntigen Excess", J. Immunol. Methods, 72: 77-89 (1994).

EXEMPLO 2

Produção do 131I-Itiarcado 81C6

O iodeto de sódio 131I, em uma solução de 0, IN dehidróxido de sódio em uma concentração específica deaproximadamente 1000 mCi/ml é adquirido da Perkin ElmerLife Sciences (Boston, MA) . 0 anticorpo 81C6 é preparadocomo descrito acima. Todos os procedimentos sãoacompanhados em uma tampa de fluxo laminar vertical Bakercom 100% de expressão através dos filtros de carvãovegetal para fora. A técnica de assepsia é empregadadurante. Todas as medidas de radioatividade são feitascom um calibrador de dose Capintec (Ramsey, Nj) . Umaalíquota de duas mg do anticorpo é incubada durante 10minutos em múltiplas garrafas de vidro de 1 ml, tendo,cada uma 10 microgramas de iodogênio (um reagente deligação) seco na superfície interna. Cada garrafa tambémcontém 0,05 M de salina de fosfato tamponada, pH 7,2 -7,4(PBS) , e 25 mCi de 131I (aproximadamente 2 5 μL de umasolução de 131I) em um volume total de 0,250 ml em um pHde 7,2 -7,4. 0 conteúdo das garrafas foi então fundido eas garrafas foram lavadas duas vezes com 0,15 ml do PBS eforam então fundidas em um tubo plástico de culturaestéril de 15 ml. A purificação é feita em uma coluna deSephadex G-25 (sigma, St. Louis, MO) pré-tratada com0,1000 ml de soro de albumina humana a 5%, USP, parasaturar uma proteína não-específica ligadas aos sítios naresina, e eluída com PBS. Vinte frações de 0,5 ml sãocoletadas a partir da coluna em tubos plásticos decultura de 3 ml estéreis. 0 conteúdo dos tubos de fraçãocontendo a maior quantidade de 1311 associado com o picocorrespondente da fração contendo o anticorpo 81C6 éextraída em uma seringa plástica estéril descartável decc com uma agulha de 3,5 polegadas ligada e são unidosem um outro tubo plástico de cultura de 15 ml. Cada umdos tubos de fração é então lavado duas vezes com umasolução de 1% do soro de albumina humana, USP, em PBS, pH7,2-7,4. Após a segunda lavagem, a solução de soro dealbumina humana é misturada com as frações unidas e todasas frações são extraídas em seringas descartáveis de 10cc - o volume final é tipicamente de 3 - 5 ml. Aesterilização é acompanhada por reposição da agulhavertical com um filtro de membrana Milipore estéril de0,22 microns (Millex GV; Millipore) ligada a uma agulhagraduada 2 0 e injeção da solução em uma garrafa deevacuação de 10 ml estéril (a garrafa final). Aquantidade da proteína 81C6 do anticorpo na garrafa éestimada através de uma primeira estimativa de AtividadeEspecífica (AS), assumindo uma recuperação de 100% daproteína adicionada à reação nas frações ativas ligadas.

Então, a atividade medida na garrafa final (em mCi) édividida por AS, e o valor é calculado para a quantidadetotal da proteína na garrafa. A quantidade total daproteína do anticorpo em uma dose individual é prescrita.

Através da divisão da atividade total (mCI) na garrafapela atividade da dose individual (mCi) e entãomultiplicada desta proporção pela mg total da proteínaprescrita, uma estimativa da quantidade total da proteínarequerida na garrafa é calculada. Através da subtração aquantidade da proteína já na garrafa a partir daquantidade total da proteína requerida no rendimento dagarrafa, uma estimativa do anticorpo não-reativo "frio"81C6 necessita ser adicionado à garrafa. 0 produto finaltem uma atividade prescrita de 131I (mCi) e uma proteínado anticorpo 81C6 (mg) em PBS 0,05 M e, aproximadamente0,5% do soro da albumina humana, USP. O teste deesterilidade USP, o teste LEL para endotoxina bacteriana,o teste da pureza do radionuclídeo, o teste da pureza doradioquímico por HPLC e o teste do radio-imunoreatividadesão realizados. Após todo o controle de qualidade (QC)ser completado, uma dose individual é extraída em umaseringa plástica descartável estéril de 10 cc ou de 20cc; a seringa é selada com uma tampa estéril,apropriadamente marcada e visível, protegida com chumbo elevada à Medicina Nuclear para administração aoindivíduo.

EXEMPLO 3

Terapia combinada de 131I-81C6-Temozolomida para otratamento de Glioblastoma multiforme (GBM)

Rota de Administração:

131I-81C6 pode ser administrado em uma cavidade císticacriada por dissecação cirúrgica do glioblastomamultiforme através de um cateter de Rickham colocado nacavidade intracranial aberta cirurgicamente na época dacirurgia do tumor. Deve ser entendido pelos técnicos noassunto que outras rotas de administração podem serpossíveis.

Indivíduos para tratamento:

Os indivíduos adequados para o tratamento serão aquelesindivíduos com um diagnóstico histológico confirmado deum diagnóstico recente e glioblastoma multiforme (GBM)supratentorial não-tratado anteriormente. A reatividadedas células neuplásicas com tenascina pode serdemonstrada através da imuno-histologia tanto com umanticorpo policlonal de coelho quanto com um anticorpomonoclonal de camundongo. Os indivíduos que receberamqualquer outra terapia além da amputação cirúrgica nãosão adequados. Outras terapias, que podem seropcionalmente realizadas em conjunto com a terapiacombinada de 131I-81C6-Temozolomida podem incluir,radioterapia, quimioterapia, imunoterapia, ou qualqueroutra terapia experimental utilizada para tratar a GBM.

0 indivíduo pode ser um candidato para amputaçãocirúrgica. Neste caso, um CT com contraste melhorado ouuma imagem de ressonância magnética (MRI) poderia serobtido em 72 horas após a cirurgia. Um intervalo de pelomenos 2 semanas antes da intervenção cirúrgica e daadministração de 131I-81C6 pode ser necessário.

Os valores sangüíneos da linha de base a seguir podem serdeterminados antes da administração de 131I-81C6; nível dehemoglobina; contagem de neutrófilos absoluto; contagemde plaquetas; nível de creatinina; nível de bilirrubina;e nível do soro de transaminase oxalacética glutâmico.

Determinados valores do sangue da linha de base paraestes constituintes do sangue podem ser estabelecidosantes da administração de 131I-81C6 ser iniciada.

Em adição, um estudo de fluxo de 99mTc-DTPA pode serutilizado para demonstrar a colocação adequada do cateterde rickham no SCRC e perda da comunicação entre o SCRC eo espaço CSF. Também, um estudo dosimétrico pode serrealizado. A dosimetria refere-se à medida apurada dadosagem. Se as doses em questão são doses radioativas, adosimetria refere-se a medida apurada da quantidade deenergia de radiação em um tecido. Isto é especialmentecrítico quando se usa radiação no tratamento de umindivíduo para uma doença ou câncer. Assim, o uso demuita radiação é muito tóxico para o indivíduo, enquantodo uso de muito pouca é ineficaz como terapia. Adosimetria provê uma determinação apurada de uma dose deRIT segura e eficaz (a quantidade de radiaçãoadministrada).

Deve ser entendido pelos técnicos no assunto que osindivíduos com outros cânceres que não GBM, incluindo,inter alia, linfomas, podem ser tratados de acordo com osmétodos aqui descritos.

Método de terapia

Preferivelmente, o tratamento começa com a administraçãode 131I-81C6. Deverá ser entendido pelos técnicos noassunto que o anticorpo 81C6 sendo usado pode ser humano,camundongo, ou qualquer espécie apropriada e, pode ser umanticorpo quimérico. Em adição, outros anticorpos além de81C6 que se ligam a tenascina podem ser utilizados. Deveser ainda entendido pelos técnicos no assunto, que outrosanticorpos além daqueles que reconhecem a tenascina podemser utilizados de acordo com o método desta invenção.Preferivelmente, o anticorpo utilizado deverá ser marcadocom 131I. Entretanto, outros radionuclídeos, incluindo,mas não limitados a, 227Ac, 211At, 131Ba, 77Br, 109Cd, 51Cr,57Cu, 165Dy, 155Eu, 153Gd, 198Au, 166Ho, 113inIn, 115mIn, 123I,125I, 131I, 189Ir, 191Ir, 192Ir, 194Ir, 52Fe, 55Fe, 59Fe, 177Lu,109Pd, 32P, 226Ra, 186Re, 188Re, 153Sm, 46Sc, 47Sc, 72Se, 75Se,105Ag, 89Sr, 35S, 177Ta, 117mSn, 121Sn, 166Yb, 169Yb, 90Y, 212Bi,119Sb, 197Hg, 97Ru, 100Pd, lolmRh, 212Pb, 64Cu, 225Ac, 213Bi e124I podem ser utilizados. Em adição, o anticorpoutilizado pode ser emparelhado com outros agentesterapêuticos apropriados, incluindo, inter alia, agentesquimioterapêuticos. Além disso, o anticorpo utilizadopode ser emparelhado com mais que um agente terapêutico.Administração de radioterapia de irradiação externa(XRT):

Opcionalmente, os indivíduos passarão pela radioterapiade irradiação externa como parte do tratamento.

Preferivelmente, a radioterapia de irradiação externalevará aproximadamente 4 semanas, seguida pelaadministração dos anticorpos 131I-81C6. Entretanto, deveráser entendido pelos técnicos no assunto que o tempo emdiferentes aspectos da terapia, de acordo com a presenteinvenção, pode variar de acordo com o indivíduo e docâncer sendo tratado.

Administração de Temozolomida:

Temozolomida pode ser administrado em um tempoapropriado, como determinado pelo praticante médico.

Preferivelmente, ele é administrado começando, emaproximadamente 4 semanas seguido pela finalização daradioterapia de irradiação externa. Os indivíduos podemcomeçar a administração de temozolomida com um regime dedosagem de cerca de 150 mg/m2/dia durante 5 diasconsecutivos durante 28 dias por até 6-28 dias por ciclo.

Os indivíduos que toleram temozolomida a 150 mg/m2/dosesem qualquer classificação de toxidade 3 ou 4 atribuídapodem aumentar a dose de temozolomida pra 200 mg/m2/dose.

O critério a ser determinado antes do início dotratamento de temozolomida inclui: contagem WBC; contagemANC; contagem de plaquetas; função hepática adequada;incluindo SGOT e medida de bilirrubina; e função renalapropriada, incluindo nível de creatinina e/ou clareza dacreatinina.

Os níveis de dosagem da temozolomida podem variar deacordo com o nível da toxicidade de temozolomida em cadaindivíduo submetido ao tratamento. Por exemplo, a dose detemozolomida pode ser ajustada como representado natabela 1 a seguir:

TABELA 1

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EXEMPLO 4

Resultados de um estudo fase II do anticorpo monoclonal81C6 - 131Iodina-marcada anti-tenascina de murineadministrado a ser liberado em uma dose de radiação alvo-estipulada em 44 Gy para um perímetro de uma cavidadecística criada cirurgicamente no tratamento de pacientescom tumores primários diagnosticados recentemente etumores cerebrais com metástases.

Antes da triagem incorporando uma dose "fixada" doanticorpo monoclonal 81C6 - 131I-marcado anti-tenascina(131I-81C6) administrado dentro da cavidade criadacirurgicamente (SCRC) ao paciente tanto com diagnósticorecente quanto com glioma maligno recorrente foiassociado com o encorajamento cirúrgico e toxicidadeaceitável. Em particular, as triagens da fase I e IIrealizadas previamente, incorporando uma dose "fixada" de131I-81C6 administrado na cavidade criada cirurgicamente(SCR) dos pacientes com glioma diagnosticado recentementerelatou de 80 e 79 semanas de sobrevivência média,respectivamente.

A análise dosimétrica dos pacientes tratados nestesestudos previu que a liberação de um 44 Gy "alvo"aumentado para SCRC pelo 131I-81C6 pode estar associado auma menor taxa de toxicidade e, possivelmente, umamelhoria global em comparação com o resultado fixo daposologia. 0 estudo atual foi designado para avaliar aeficácia e a toxicidade da administração de uma dose doanticorpo 131I-81C6 para conseguir um estímulo 44 Gy"alvo" para o perímetro SCRC, nos pacientes com gliomadiagnosticado recentemente.

Materiais e Métodos

0 critério de elegibilidade inclui: adultos comdiagnóstico recente e glioma maligno previamente não-tratado; amputação total espessa; perda de comunicaçãoentre a cavidade de amputação e o espaço CSF; KPS maiordo que 60%; e medula óssea adequada, função renal ehepática. Um estudo dosimétrico de pré-tratamento comaproximadamente 0,5 mCi de 131I-81C6 foi realizado paradeterminar a dose terapêutica de 131I-81C6 requerida parase conseguir um aumento no 44 Gy "alvo" em cada pacienteindividualmente. Seguindo a dose terapêutica de 131I-81C6todos os pacientes passaram por radioterapia deirradiação externa convencional e por quimioterapiasistêmica. Vinte e um pacientes foram tratados,incluindo 15 com GBM e 6 com AA/AO (AA = astrocitomaanaplásico; AO = oligodendroglioma anaplásico). Destes,20 receberam a terapia combinada com temozolomida. Aidade média foi de 49 anos (abrangendo 24-70) e 76% forammachos. A dose média de 131I-81C6 administrada foi de 62mCi (abrangendo, 2 5-150).

ResultadosVinte pacientes alcançaram com sucesso um aumento no 44Gy ( + /- 10%) para o perímetro SCRC. A toxicidade foilimitada a uma graduação 3 na toxicidade hematológicareversível em 15% dos indivíduos. Nenhum episódio degraduação 4 de toxicidade ocorreu e nenhum episódio deneurotoxicidade tardia foi documentado. Com uma média deaté 62,7 semanas, a sobrevivência média para os pacientescom diagnóstico recente de GBM foi de 93,9 semanas. Istorepresenta um aumento de aproximadamente 15% nasobrevivência média relatada previamente em um estudoclínico de fase II envolvendo pacientes com diagnósticorecente de glioma maligno. A sobrevivência média dospacientes AA/AO não foi conseguida. A administração de131I-81c6 para conseguir um aumento no 44 Gy "alvo" foipossível e associado com uma sobrevivência animadora.

A presente invenção não está limitada ao escopo dasconfigurações específicas descrito aqui. Ao contrário,várias modificações da invenção em adição àquelasdescritas aqui tornar-se-ão evidentes aos técnicos noassunto, a partir da descrição precedente e queacompanham as figuras. As referidas modificaçõespretendem ser abrangidas do escopo de proteção dasreivindicações anexas.

Deve ser entendido ainda que todos os valores sãoaproximados, e são providos para a descrição.

As patentes, os pedidos de patente, as publicações, adescrição do produto, e os protocolos que são citadosdurante a presente invenção, as descrições das quaissendo incorporadas aqui por referência em sua íntegrapara todos os propósitos.

Claims (28)

1. Método para tratar câncer em um indivíduo,necessitando de tratamento, dito método caracterizadopelo fato de compreender as etapas de: (a) administrar aoreferido indivíduo uma quantidade eficaz de tratamento deum anticorpo terapêutico; e (b) administrar ao referidoindivíduo uma quantidade eficaz de tratamento de umagente alquilante.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de o câncer ser um câncer baseado em um tumorsólido.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de o câncer ser Iinfoma.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de o câncer ser um câncer cerebral.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizadopelo fato de o câncer cerebral ser glioblastoma.

6. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizadopelo fato de o tumor sólido expressar tenascina.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de o referido anticorpo terapêutico se ligar,especificamente, a tenascina.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de o anticorpo terapêutico ser um anticorpomonoclonal 81C6.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de o anticorpo terapêutico ser um anticorpomonoclonal 81C6 quimérico (ch81C6) camundongo-humano

10. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de o anticorpo terapêutico ser umanticorpo monoclonal 81C6 murine (mu81C6).

11. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de o anticorpo terapêutico seremparelhado a um radionuclídeo.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de o agente alquilante sertemozolomida ou um análogo, um sal farmaceuticamenteaceitável ou um pró-fármaco do mesmo.

13. Método, de acordo com a reivindicação 2,caracterizado pelo fato de pelo menos uma porção doreferido tumor ser cirurgicamente removida antes dareferida etapa de administração (a).

14. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de o referido anticorpoterapêutico ser administrado através de injeção intra-cranial ao sítio do referido tumor.

15. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de o referido anticorpoterapêutico ser administrado através de uma injeçãointra-cranial única ao sítio do referido tumor.

16. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de o anticorpo terapêutico seradministrado em uma dose entre cerca de 40 a cerca de 50Gy.

17. Método, de acordo com a reivindicação 12,caracterizado pelo fato de a referida temozolomida seradministrada oralmente.

18. Método, de acordo com a reivindicação 12,caracterizado pelo fato de a referida temozolomida seradministrada em um ciclo de doses diárias entre cerca de 3 a cerca de 7 dias consecutivos em uma dose diária apartir de cerca de 50 a cerca de 300 mg/m2/dia.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18,caracterizado pelo fato de o referido ciclo ser repetidode cada duas a 5 semanas por um período total de atécerca 10 ciclos.

20. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de compreender, adicionalmente, aetapa de (c) administrar ao referido indivíduoradioterapia de irradiação externa ao sítio do referidotumor cerebral.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de a referida radioterapia deirradiação externa ser administrada em uma dose totalentre cerca de 30 a cerca de 60 Gy ao referido sítio dotumor cerebral.

22. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de o referido anticorpo ser umanticorpo monoclonal 81C6 ou um anticorpo que se liga aoepítopo ligado pelo anticorpo monoclonal 81C6.

23. Método, de acordo com a reivindicação 11,caracterizado pelo fato de o referido radionuclídeo serselecionado do grupo consistindo de 227Ac, 211At7 131Ba,-77Br, 109Cd, 51Cr, 67Cu, 165Dy, 155Eu, 153Gd, 198Au, 166Ho,-113mIn, 115mIn, 123I, 125I, 131If 189Ir, 191Ir, 192Ir, 194Ir, 52Fe,-55Fe, 59Fe, 177Lu, 109Pd, 32P, 226Ra, 186Re, 188Re, 153Sm, 46Sc,-47Sc, 72Se, 75Se, 105Ag, 89Sr, 35S, 177Ta, 117mSn, 121Sn, 166Yb,-169Yb, 90Y, 212Bi, 119Sb, 197Hg, 97Ru, 100Pd, lolmRh, 212Pb, 64Cu,-225Ac, 213Bi e 124I.

24. Método, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de o referido anticorpoterapêutico ser o anticorpo monoclonal 81C6, e sendo queo referido agente alquilante é temozolomida ou umanálogo, um sal farmaceuticamente aceitável ou um pró-fármaco do mesmo.

25. Uso de um anticorpo monoclonal para preparar ummedicamento, para realizar o tratamento de câncer em umindivíduo necessitando do mesmo, dito uso caracterizadopelo fato de compreender as etapas de: (a) administrar aoreferido indivíduo uma quantidade eficaz de tratamento deum anticorpo terapêutico; e (b) administrar ao referidoindivíduo uma quantidade eficaz de tratamento de umagente alquilante.

26. Uso de um anticorpo monoclonal para preparar ummedicamento, para realizar o tratamento de câncer em umindivíduo necessitando do mesmo, caracterizado pelo fatode ser realizado de acordo com o método definido emqualquer uma das reivindicações de 1 a 24.

27. Uso de um anticorpo monoclonal para preparar ummedicamento, para realizar o tratamento de câncer em umindivíduo necessitando do mesmo, caracterizado pelo fatode compreender as etapas de (a) administrar ao referidoindivíduo uma quantidade eficaz de tratamento de umanticorpo terapêutico; e (b) administrar ao referidoindivíduo uma quantidade eficaz de tratamento de umagente alquilante.

28. Uso de um agente alquilante para a preparação de ummedicamento, para realizar o tratamento de câncer em umindivíduo necessitando do mesmo, caracterizado pelo fatode ser realizado de acordo com o método definido emqualquer uma das reivindicações de 1-24.