BRPI0613145A2 - mÉtodos para aumentar a resistÊncia de plantas a condiÇÕes hipàxicas - Google Patents

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Abstract

MÉTODOS PARA AUMENTAR A RESISTÊNCIA DE PLANTAS A CONDIÇÕES HIPàXICAS. A presente invenção refere-se a métodos para aumentar a resistência de plantas a condições hipóxicas ou anóxicas. Esses métodos podem ser aplicados para aumentar a penetração de raízes de plantas no meio de crescimento ou no solo. Os métodos de acordo com a invenção podem incluir o fornecimento às plantas de um gene de tolerância a estresse. Efeitos similares podem ser obtidos por aplicação de compostos químicos, incluindo compostos neonicotinóides, às plantas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODOS PARA AUMENTAR A RESISTÊNCIA DE PLANTAS A CONDIÇÕES HIPÓ- XICAS".
A presente invenção refere-se a métodos para aumentar a resis- tência de plantas a condições hipóxicas ou anóxicas. Esses métodos podem ser aplicados para aumentar a penetração de raízes de plantas no meio de crescimento ou no solo. Os métodos de acordo com a invenção podem inclu- ir a modificação do genoma das plantas mediante fornecimento a essas plantas de um gene de tolerância a estresse exógeno ou de uma variante tolerante a estresse de um gene endógeno correspondente a esse gene e- xógeno. Os métodos de acordo com a invenção também podem incluir a a- plicação de compostos neonicotinóides, como, mas não limitados a, imida- cloprid, nitenpiram, acetamiprid, tiacloprid, tiametoxam, clotianidin e dinotefu- ran, a plantas ou seus habitais, ou a suas células ou sementes. Compostos neonicotinóides particularmente eficazes são compostos neonicotinóides que compreendam uma cadeia colateral cloropiridina, como imidacloprid, nitenpi- ram, acetamiprid e tiacloprid, particularmente aqueles durante cuja degrada- ção em plantas possa liberar ácido 6-cloronicotínico (6-CNA), como, por e- xemplo, imidacloprid e tiacloprid. As plantas ou seus habitats também podem ser tratados diretamente com 6-CNA.
Antecedentes da Técnica
Plantas manipuladas para serem tolerantes a estresse são co- nhecidas na técnica. A tolerância a estresse em células vegetais e plantas pode, por exemplo, ser conseguida por redução da atividade ou nível das poli-ADP-ribose polimerases (PARP) ou poli(ADP-ribose) glicoidrolases (PARG) endógenas, conforme descrito em WO 00/04173 e WO 04/090140, respectivamente.
O pedido de patente européia ns 04077624.7 descreve que a tolerância ao estresse em plantas e células vegetais é conseguida usando- se seqüências de nucleotídeos que codificam enzimas envolvidas na via de síntese de salvamento de NAD e/ou na via de síntese de novo de NAD, por exemplo, para superexpressão em plantas. Entretanto, nenhum desses documentos apresenta a possibili- dade de uso dos genes de tolerância ao estresse neles para a obtenção de tolerância a condições hipóxicas ou anóxicas em células vegetais e plantas. Também não apresentam o uso dos genes de tolerância ao estresse neles descritos com a finalidade de permitir que o sistema de raízes da planta pe- netre mais profundamente no meio de crescimento ou no solo.
A aplicação de compostos da classe dos neonicotinóides em plantas com finalidades diferentes do controle de insetos também é conheci- da na técnica (WO 01/26468, WO 03/096811).
O WO 01/26468 apresenta um método para melhorar o cresci- mento de plantas, que compreende a aplicação às plantas ou a seu Iocus de pelo menos um composto selecionado da classe dos neonicotinóides.
O WO 03/096811 descreve que o rendimento e/ou vigor de uma planta agronômica pode ser aumentado ou melhorado em localizações em que o nível de infestação de insetos abaixo daquele que indique a necessi- dade de uso de um inseticida para fins de controle de insetos por tratamento de uma semente da planta com um composto neonicotinóide. O método é considerado útil para plantas não transgênicas e para plantas com um gene estranho que codifique a produção de uma proteína delta-endotoxina de Ba- cillus thurigiensis modificada.
Nenhum desses documentos, entretanto, descreve o uso de compostos da classe dos neonicotinóides em plantas com a finalidade de aumentar a tolerância de células vegetais ou plantas a condições hipóxicas ou anóxicas ou de permitir que o sistema de raízes da planta penetre mais profundamente no meio de crescimento ou no solo.
Assim, a técnica é silenciosa quanto a métodos para aumentar a profundidade de penetração de um sistema de raízes ou das raízes de uma planta no meio de crescimento ou no solo, ou para aumentar a tolerância de células vegetais ou plantas a condições de estresse hipóxico ou anóxico u- sando genes de tolerância a estresse ou por aplicação de um composto químico da classe neonicotinóide a plantas, ou suas células, conforme des- crito a seguir nas diferentes modalidades e reivindicações. Sumário da Invenção
Em uma modalidade da invenção, apresenta-se um novo méto- do para aumentar a tolerância de células vegetais ou plantas a condições hipóxicas ou anóxicas, que compreende o fornecimento às células vegetais ou plantas de um transgene de aumento de tolerância a estresse, em que o transgene de aumento de tolerância a estresse é selecionado de:
- um transgene de aumento de tolerância a estresse capaz de reduzir a expressão de genes de PARP endógena de plantas, particularmen- te em que o transgene codifica uma molécula de RNA inibitória de PARP;
- um transgene de aumento de tolerância a estresse capaz de reduzir a expressão de genes de PARG endógena de plantas, particularmen- te em que o transgene codifica uma molécula de RNA inibitória de PARG; ou
- um transgene de aumento de tolerância a estresse que codifi- que uma enzima funcional em plantas da via de síntese de salvamento da nicotinamida adenina dinucleotídeo, selecionada de nicotinamidase, nicotina- to fosforribosiltransferase, ácido nicotínico mononucleotídeo adenil transfe- rase ou nicotinamida adenina dinucleotídeo sintetase.
Em outra modalidade, a invenção se refere ao uso desses trans- genes de aumento de tolerância a estresse para aumentar a penetração das raízes da planta no meio de crescimento, incluindo o solo.
Em ainda outra modalidade da invenção,-apresenta-se um mé- todo para aumentar a tolerância de células vegetais ou plantas a condições hipóxicas ou anóxicas, que compreende a aplicação à célula vegetal, planta ou semente da qual a planta é cultivada, ou a seu habitat, de uma quantida- de eficaz de um composto neonicotinóide.
Em ainda outra modalidade, a invenção se refere ao uso desses compostos para aumentar a penetração das raízes da planta no meio de crescimento, incluindo o solo.
A invenção também se refere a um método para aumentar a to- lerância de células vegetais ou plantas a condições hipóxicas ou anóxicas, que compreende a etapa de fornecimento às células da dita planta de uma quantidade eficaz de ácido 6-cloronicotínico. A invenção também se refere ao uso de 6-CNA para aumentar a penetração das raízes da planta no meio de crescimento. Breve Descrição das figuras
Figura 1: representação esquemática do ensaio para medir a profundidade da raiz de uma planta que cresça em uma solução de ágar. Um recipiente (1) com uma vedação (2) é enchido com um meio de cresci- mento transparente ou translúcido (3), como ágar-água a 0,4% ou ágar-água a 0,7%, ao qual se podem adicionar mais compostos de teste. Uma semente pré-germinada é adicionada ao tubo e deixada crescer durante três sema- nas. Após três semanas de crescimento em posição vertical, a profundidade da raiz (5) da planta (4) é medida do topo do meio até o ponto mais baixo das raízes.
Figura 2: representação em gráfico de barras da profundidade da raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O compreendendo um transgene que codifique uma molécula de dsRNA capaz de reduzir a ex- pressão de genes de PARP2 endógena, em comparação com plantas de Arabidopsis thaliana não transgênicas (Col-0). As seguintes populações foram analisadas:
• Col-0: pontos de dados para linhagem de Arabidopsis de tipo selvagem
• 427-16: pontos de dados para linhagem transgênica de A. tha- liana compreendendo gene anti-PARP2 com uma fraca tolerância a condi- ções de estresse de alta luz
• 427-20: pontos de dados para linhagem transgênica de A. tha- liana compreendendo gene anti-PARP2 com uma fraca tolerância a condi- ções de estresse de alta luz
• 427-20: pontos de dados para linhagem transgênica de A. tha- liana compreendendo gene anti-PARP2 com uma tolerância moderada a condições de estresse de alta luz
O gráfico representa um diagrama de caixa típico (ou planilha) à esquerda de cada um dos grupos de valores, resumindo as seguintes medi- das estatísticas: - mediana
- quartis superior e inferior
- valores de dados máximo e mínimo
Além disso, à direita de cada um dos grupos de valores, indi- cam-se a média e o erro padrão da média para esses valores.
O diagrama de caixas é interpretado da seguinte maneira:
- a própria caixa contém os 50% médios dos dados. A borda su- perior (articulação) da caixa indica o 75° percentil do conjunto de dados, e a articulação inferior indica o 25° percentil. A faixa dos dois quartis médios é conhecida como a faixa interquartil.
- A linha na caixa indica o valor mediano dos dados.
- As extremidades das planilhas indicam valores de dados míni- mo e máximo, a menos que haja valores fora presentes, caso em que as planilhas se estendem até os pontos de valor mais próximo dentro de uma faixa de 1,5 vezes a faixa interquartil.
Figura 3: representação em diagrama de caixas e erro padrão da média para os valores medidos de profundidade de raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col- compreendendo um transgene que codifique uma molécula de dsRNA capaz de reduzir a expressão de genes de PARP endógena.
As seguintes populações foram analisadas:
• Col-0: pontos de dados para linhagem de Arabidopsis de tipo selvagem
• 427-22: pontos de dados para linhagem transgênica de A. tha- liana compreendendo gene anti-PARP2 com uma alta tolerância a condições de estresse de alta luz
• 427-24: pontos de dados para linhagem transgênica de A. tha- liana compreendendo gene anti-PARP2 com uma baixa tolerância a condi- ções de estresse de alta luz
Figura 4: Representação em gráfico de barras e erro padrão da média para os valores medidos de profundidade de raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24- compreendendo um transgene que codifique uma molécula de dsRNA capaz de reduzir a expressão de genes de PARP endógena.
As seguintes populações foram analisadas:
• C24: pontos de dados para linhagem de Arabidopsis de tipo selvagem
• 1599: pontos de dados para linhagem transgênica de A. thalia- na compreendendo gene anti-PARP2 com uma alta tolerância a condições de estresse de alta luz
• 1463: pontos de dados para linhagem transgênica de A. thalia- na compreendendo gene anti-PARP2 com uma tolerância moderada a con- dições de estresse de alta luz
• 1681: pontos de dados para linhagem transgênica de A. thalia- na compreendendo gene anti-PARP1 com uma tolerância moderada a con- dições de estresse de alta luz
• 1690: pontos de dados para linhagem transgênica de A. thalia- na compreendendo gene anti-PARP1 com uma tolerância moderada a con- dições de estresse de alta luz
Figura 5: representação em diagrama de caixas e erro padrão da média para os valores medidos de profundidade de raiz (mm) de plantas de A. thaliana Col-O que segregue o transgene anti-PARP2.
As seguintes populações foram analisadas:
• Azigótica: pontos de dados para plantas de A. thaliana da po- pulação que não contém um gene anti-PARP2.
• Transgênica: pontos de dados para plantas de A. thaliana da população que contém um gene anti-PARP2.
Figura 6: representação em diagrama de caixas e erro padrão da média para os valores medidos de profundidade de raiz (mm) de plantas de A. thaliana cv. C24 tratadas com várias concentrações de imidacloprid em comparação com plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 não tratadas.
As seguintes populações foram analisadas:
• 0: plantas de A. thaliana C24 não tratadas
• 50: plantas de A. thaliana C24 tratadas com 50 mg/L de imida- cloprid
• 100: plantas de A. thaliana C24 tratadas com 100 mg/L de imi- dacloprid
Figura 7: representação em gráfico de barras e erro padrão da média para os valores medidos de profundidade de raiz (mm) de plantas de A. thaliana cv. C24 tratadas com várias concentrações de ácido 6-cloro- nicotínico em comparação com plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 não tratadas.
As seguintes populações foram analisadas:
•0: plantas de A. thaliana C24 não tratadas
• 1: plantas de A. thaliana C24 tratadas com 1 mg/L de ácido 6- cloronicotínico
• 5: plantas de A. thaliana C24 tratadas com 5 mg/L de ácido 6- cloronicotínico
Descrição Detalhada
A presente invenção se baseia na percepção de que plantas compreendendo genes de tolerância a estresse, como os genes quiméricos que codificam dsRNA direcionado para silenciar a expressão dos genes parpl ou parp2 de plantas, desenvolvem um sistema de raízes com raízes que penetram mais profundamente no meio de crescimento do que as raízes de plantas de controle. A penetração mais profunda das raízes permaneceu despercebida nas plantas compreendendo genes de tolerância a estresse descritas na técnica anterior e requereu o desenvolvimento de um ensaio particular, conforme aqui descrito, para analisar estatisticamente a penetra- ção da raiz no meio.
Embora não pretendendo limitar a invenção a um modo de ação particular, acredita-se que genes de tolerância a estresse aumentem a tole- rância de células vegetais, incluindo as células vegetais das raízes a condi- ções hipóxicas ou anóxicas, permitindo, dessa forma, que as raízes compre- endendo esse gene de tolerância a estresse cresçam em condições de oxi- gênio menos favoráveis, como as que podem ser encontradas nas áreas mais profundas de um meio de crescimento ou nas camadas de solo mais profundas, em que a tensão de oxigênio é mais baixa. A penetração aumen- tada do sistema de raízes das plantas em camadas mais profundas do solo proporciona uma explicação parcial para a resistência aumentada a secas em condições de campo observadas para plantas compreendendo os genes de tolerância a estresse aqui descritos, como os genes que codificam dsR- NA que silencia a expressão dos genes parpl e parp2 endógenos.
Um efeito similar sobre a penetração da raiz poderia ser obser- vado no ensaio descrito após a adição de um composto da classe neonicoti- nóide ou ácido 6-cloronicotínico. O efeito da aplicação de neonicotinóides sobre a profundidade de crescimento da raiz é independente da presença de insetos que sejam os alvos dos neonicotinóides acima mencionados. Portan- to, o efeito também está relacionado à melhora bioquímica da tolerância a estresse, particularmente tolerância a estresse relacionada a hipóxia ou a- nóxia, de uma planta ou célula vegetal ou a semente da qual ela é cultivada.
Portanto, em uma primeira modalidade, a invenção se refere ao uso de um transgene de aumento de tolerância a estresse para aumentar a tolerância de uma célula vegetal, planta ou semente a condições hipóxicas ou anóxicas.
Conforme aqui usado, "condições hipóxicas ou anóxicas" se re- ferem a condições às quais células vegetais, plantas ou partes dessas plan- tas estão expostas, em que a disponibilidade-de oxigênio seja baixa a muito baixa. Condições anóxicas se referem a condições em que quase não há oxigênio disponível. Tipicamente, condições em que a concentração de oxi- gênio dissolvido esteja abaixo de cerca de 2 mg/L são indicadas como hipó- xicas (0,1 mg/L a 2 mg/L), condições em que o oxigênio dissolvido esteja abaixo de 0,1 mg/L, particularmente abaixo de 0,05 mg/L, são indicadas co- mo anóxicas. A concentração de oxigênio dissolvido normal na água é de cerca de 8 mg/L. Condições hipóxicas no solo se referem às condições em que a tensão de oxigênio seja baixa, particularmente em que o oxigênio caia abaixo de 5% na atmosfera do solo.
Condições hipóxicas podem ocorrer, por exemplo, com a inun- dação das plantas ou de partes das plantas. Condições hipóxicas também podem ocorrer quando o consumo de oxigênio é elevado, como em cama- das de solo compreendendo uma grande quantidade de detritos orgânicos no processo de metabolização por microorganismos. Além disso, condições hipóxicas ocorrem nas camadas mais profundas de um meio de crescimen- to, em que a difusão do oxigênio ocorra a partir da superfície. Condições hipóxicas também ocorrem nas camadas mais profundas do solo, quando a difusão de oxigênio e, conseqüentemente, a tensão de oxigênio diminui a partir das superfícies. A taxa de diminuição do oxigênio depende da compac- tação do solo (em que, quanto mais compacto o solo, menos atmosfera de solo está presente), da presença de material orgânico em decomposição, do teor de água e outros.
Conforme aqui usado, "um transgene de aumento da tolerância a estresse" se refere a um transgene que, quando introduzido ou expressa- do em uma célula vegetal ou planta, confere à célula ou planta uma melhor tolerância ao estresse que é causado à planta, por exemplo, pela aplicação de compostos químicos (por exemplo, herbicidas, fungicidas, inseticidas, reguladores do crescimento vegetal, adjuvantes, fertilizantes), exposição a estresse abiótico (por exemplo, seca, inundação, submersão, condições de alta luz, alta radiação de UV, níveis aumentados de peróxido de hidrogênio, temperaturas extremas (altas ou baixas), ozônio e outros poluentes atmosfé- ricos, salinidade do solo ou metais pesados, hipóxia, anóxica e outros) ou estresse biótico (por exemplo, infecções por patógenos ou pragas, incluindo infecção por fungos, vírus, bactérias, insetos, nematódios, micoplasmas e organismos do tipo micoplasma e outros).
Esse transgene de aumento da tolerância a estresse pode ser um transgene capaz de reduzir a expressão e/ou atividade do gene de po- li(ADP-ribose) polimerase (PARP) nas células vegetais ou plantas, conforme descrito em WO 00/04173 ou EP 04077984.5 (aqui incorporados por refe- rência).
A poli(ADP-ribose) polimerase (PARP)1 também conhecida como poli(ADP-ribose) transferase (ADPRT) (EC 2.4.2.30), é uma enzima nuclear encontrada na maioria dos eucariotos, incluindo vertebrados, artrópodes, moluscos, fungos aquáticos (slime moulds), dinoflagelados, fungos e outros eucariotos inferiores, com exceção de levedura. A atividade enzimática tam- bém foi demonstrada em inúmeras plantas (Payne et al., 1976; Willmitzer e Wagner, 1982; Chen et al., 1994; 0'Farrell, 1995).
PARP catalisa a transferência de uma fração ADP-ribose deriva- da de NAD+ principalmente para o grupo carboxila de um resíduo ácido glu- tâmico na proteína alvo e a subseqüente polimerização de ADP-ribose. A principal proteína alvo é a própria PARP, mas também histonas, proteínas cromossomais do grupo de alta mobilidade, topoisomerase, endonucleases e DNA polimerases se mostraram sujeitas a essa modificação.
Como uma modalidade particular, o transgene de aumento da tolerância a estresse pode compreender os seguintes fragmentos de DNA operacionalmente ligados:
a) um promotor expressável em plantas;
b) uma região de DNA que, quando transcrita, resulte em uma molécula de RNA capaz de reduzir a expressão dos genes que codificam PARP endógena de uma planta (uma molé- cula de RNA inibitória de PARP); c) uma região de DNA envolvida na terminação da transcrição e poliadenilação.
A região de DNA mencionada pode resultar, na transcrição, em uma chamada molécula de RNA anti-sentido, reduzindo, de maneira trans- cricional ou pós-transcricional, a expressão de um gene que codifique PARP na planta ou célula vegetal alvo, compreendendo pelo menos 20 ou 21 nu- cleotídeos consecutivos com pelo menos 95% a 100% de identidade de se- qüência com o complemento da seqüência de nucleotídeos de um gene que codifique PARP presente na célula vegetal ou planta.
A região de DNA mencionada também pode resultar em uma chamada molécula de RNA em sentido, compreendendo a redução, de ma- neira transcricional ou pós-transcricional, da expressão de um gene que co- difique PARP na planta ou célula vegetal alvo, compreendendo pelo menos 20 ou 21 nucleotídeos consecutivos com pelo menos 95% a 100% de identi- dade de seqüência com a seqüência de nucleotídeos de um gene que codi- fique PARP presente na célula vegetal ou planta.
Entretanto, a seqüência de nucleotídeo mínima da região de RNA anti-sentido ou em sentido de cerca de 20 nt da região que codifica PARP pode estar compreendida dentro de uma molécula de RNA maior, va- riando em tamanho de 20 nt a um comprimento igual ao tamanho do gene alvo. As regiões de nucleotídeos anti-sentido ou em sentido mencionadas podem ter, portanto, de cerca de 21 nt a cerca de 5.000 nt de comprimento, como 21 nt, 40 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt, 300 nt, 500 nt, 1.000 nt, 2.000 nt ou mesmo cerca de 5.000 nt ou mais de comprimento. Além disso, não se re- quer, para fins da invenção, que a seqüência de nucleotídeos da molécula de RNA de PARP inibitória usada ou a região codificadora do transgene seja completamente idêntica ou complementar ao gene de PARP endógena, cuja expressão é o alvo a ser reduzido na célula vegetal. Quanto mais longa a seqüência, menos rigorosa é a exigência de uma identidade de seqüência global. Assim, as regiões em sentido ou anti-sentido podem ter uma identi- dade de seqüência global de cerca de 40% ou 50% ou 60% ou 70% ou 80% ou 90% ou 100% com a seqüência de nucleotídeos do gene de PARP endó- gena ou de seu complemento. Entretanto, conforme mencionado, as regiões anti-sentido ou em sentido devem compreender uma seqüência de nucleotí- deos de 20 nucleotídeos consecutivos com cerca de 100% de identidade de seqüência com a seqüência de nucleotídeos do gene de PARP endógena. De preferência, o trecho de cerca de 100% de identidade de seqüência deve ser de cerca de 50, 75 ou 100 nt.
Para fins desta invenção, a "identidade de seqüência" de duas seqüências de nucleotídeos relacionadas, expressa como uma porcenta- gem, se refere ao número de posições nas duas seqüências alinhadas de maneira ótima, que tenham resíduos idênticos (x100) dividido pelo número de posições comparadas. Um vão, isto é, uma posição em um alinhamento em que um resíduo esteja presente em uma seqüência, mas não na outra, é considerado como uma posição com resíduos não idênticos. O alinhamento das duas seqüências é efetuado pelo algoritmo de Needlemann e Wunsch (Needleman e Wunsch1 1970). O alinhamento de seqüência auxiliado por computador pode ser convenientemente efetuado usando-se um programa de software padronizado, como o GAP, que é parte do Wisconsin Package Versão 10.1 (Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin, EUA), usando- se a matriz de contagem default com uma penalidade de criação de vão de 50 e uma penalidade de extensão de vão de 3.
Ficará claro que, sempre que seqüências de nucleotídeos de moléculas de RNA são definidas por referência à seqüência de nucleotídeos de moléculas de DNA correspondentes, a timina (T) na seqüência de nucleo- tídeos deve ser substituída por uracila (U). Sempre que se faz referência a moléculas de RNA ou DNA ficará claro no contexto do pedido.
A eficiência dos transgenes acima mencionados na redução da expressão do gene de PARP endógena podem ser aumentada ainda mais pela inclusão de elementos de DNA que resultem na expressão de moléculas de RNA inibitórias de PARP não poliadeniladas aberrantes. Um desses elementos de DNA adequado para essa finalidade é uma região de DNA que codifique uma ribozima auto-emendável, conforme descrito em WO 00/01133 A1.
A eficiência dos transgenes acima mencionados na redução da expressão do gene de PARP endógena de uma célula vegetal também pode ser aumentada ainda mais pela inclusão em uma célula vegetal simultanea- mente de um transgene conforme aqui descritro, que codifique uma molécu- la de RNA inibitória de PARP anti-sentido, e um transgene conforme aqui descrito, que codifique uma molécula de RNA inibitória de PARP em sentido, em que as ditas moléculas de RNA inibitórias de PARP anti-sentido e em sentido sejam capazes de formar uma região de RNA de fita dupla por pare- amento de bases entre os pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos men- cionados, conforme descrito em WO 99/53050 A1.
Conforme adicionalmente descrito em WO 99/53050 A1, as regi- ões de RNA inibitório de PARP em sentido e anti-sentido, capazes de formar uma região de RNA de fita dupla, podem estar presentes em uma molécula de RNA, de preferência separadas por uma região espaçadora. A região es- paçadora pode compreender uma seqüência de intron. Esse transgene pode ser convenientemente construído por ligação operacional de um fragmento de DNA compreendendo pelo menos 20 nucleotídeos do gene de PARP en- dógena isolado ou identificado, cuja expressão seja o alvo a ser reduzido, em uma repetição invertida, a um promotor expressável em plantas e região de formação de extremidade 3' envolvida na terminação da transcrição e poliadenilação. Para se conseguir essa construção desse transgene, pode- se fazer uso dos vetores descritos em WO 02/059294 A1.
A atual nomenclatura se refere às polimerases contendo dedo de Zn clássicas, como proteínas PARP1 (e genes parpl correspondentes), ao passo que as proteínas PARP estruturalmente não clássicas são atual- mente chamadas de PARP2 (e genes parp2 correspondentes) e "genes co- dificadores de PARP", conforme aqui usado, podem se referir a qualquer tipo.
As seguintes entradas de bases de dados (aqui incorporadas por referência) identificando seqüências de proteínas de poli ADP-ribose polime- rase experimentalmente demonstradas e supostas, suas partes ou seqüên- cias homólogas, poderiam ser usadas de acordo com a presente invenção: BAD53855 (Oryza sativa); BAD52929 (Oryza sativa); XP_477671 (Oryza sativa); BAC84104 (Oryza sativa); AAT25850 (Zea mays); AAT25849 (Zea mays); NP_197639 (Arabidopsis thaliana); NP_850165 (Arabidopsis thalia- na); NP_199107 (Arabidopsis thaliana); NP_850586 (Arabidopsis thaliana); BAB09119 (Arabidopsis thaliana); AAD20677 (Arabidopsis thaliana); Q11207 (Arabidopsis thaliana); C84719 (Arabidopsis thaliana); T51353 (Arabidopsis thaliana); T01311 (Arabidopsis thaliana); AAN12901 (Arabidopsis thaliana); AAM13882 (Arabidopsis thaliana); CAB80732 (Arabidopsis thaliana); CA- A10482 (Arabidopsis thaliana); AAC79704 (Zea mays); AAC19283 (Arabi- dopsis thaliana); CAA10888 (Zea mays); CAA10889 (Zea mays); CAA88288 (Arabidopsis thaliana).
Uma modalidade particular da invenção, o gene redutor da ex- pressão do gene de PARP pode compreender os seguintes fragmentos de DNA opcionalmente ligados:
a) um promotor expressável em plantas; b) uma região de DNA que, quando transcrita, forneça uma molécula de RNA, a molécula de RNA compreendendo:
a. uma seqüência de nucleotídeos anti-sentido compreendendo pelo menos cerca de 20 nucleotídeos consecutivos com cerca de 96% de identidade de seqüência com uma seqüência de nucleotídeos de cerca de 20 nucleotídeos consecutivos selecionada das seqüências de nucleotídeos de SEQ ID 1 (região codificadora parpl de Arabidopsis), SEQ ID 2 (região codificadora parp2 de Arabidopsis), SEQ ID 3 (região codificadora parpl de Zea mays), SEQ ID 4 (outra região codificadora parpl de Zea mays), SEQ ID 5 (região codificadora parp2 de Zea mays) ou SEQ ID 6 (cDNA parcial de parp2 de algodão) ou das seqüências de nucleotídeos que codificam proteí- nas com seqüências de aminoácidos similares ou idênticas às codificadas pelas seqüências de nucleotídeos mencionadas.
b. Uma seqüência de nucleotídeos em sentido compreendendo pelo menos cerca de 20 nucleotídeos que sejam complementares à seqüên- cia de nucleotídeos anti-sentido. A seqüência de nucleotídeos em sentido pode, portanto, compreender uma seqüência de pelo menos cerca de 20 nucleotídeos consecutivos com cerca de 96% de identidade de seqüência com uma seqüência de nucleotídeos de cerca de 20 nucleotídeos consecuti- vos selecionados das seqüências de nucleotídeos de SEQ ID 1 (região codi- ficadora parpl de Arabidopsis), SEQ ID 2 (região codificadora parp2 de Ara- bidopsis), SEQ ID 3 (região codificadora parpl de Zea mays), SEQ ID 4 (ou- tra região codificadora parpl de Zea mays), SEQ ID 5 (região codificadora parp2 de Zea mays) ou SEQ ID 6 (cDNA parcial de parp2 de algodão) ou das seqüências de nucleotídeos que codificam proteínas com seqüências de aminoácidos similares ou idênticas às codificadas pelas seqüências de nu- cleotídeos mencionadas;
em que as seqüências de nucleotídeos em sentido e anti-sentido são capazes de formar uma molécula de RNA de fita dupla (dsRNA);
c) uma região de DNA para terminação da transcrição e poli- adenilação.
Entretanto, ficará claro que outros genes redutores da expressão do gene de PARP conforme descritos em WO 00/04173 ou EP 04077984.5 podem ser usados.
Em outra modalidade da invenção, o transgene de aumento da tolerância a estresse pode ser um transgene capaz de reduzir a expressão e/ou a atividade dos genes codificadores de PARG das plantas ou células vegetais, conforme descrito, por exemplo, em WO 2004/090140 (aqui incor- porado por referência).
PARG (poli (ADP-ribose) glicoidrolase; E.C.3.2.1.143) converte polímeros de poli (ADP-ribose) em ADP-ribose livre por sua atividade de e- xoglicosidase e endoglicosidase (PARG).
Em plantas, uma poli(ADP-ribose) glicoidrolase foi identificada por clonagem baseada em mapa do gene do tipo selvagem inativado em um mutante afetado na transcrição controlada por relógio de genes em Arabi- dopsis e na transição dependente de fotoperíodo de crescimento vegetativo para florescimento (tej). A seqüência de nucleotídeos do gene pode ser obti- da a partir de bases de dados de nucleotídeos sob o número de acesso AF394690 (Panda et al., 2002 Dev. Cell. 3, 51-61; SEQ ID No 7).
Seqüências de nucleotídeos de outros genes codificadores de PARG de plantas em plantas podem ser encontradas em WO 2004/090140 A2, como o gene de PARG de Solanum tuberosum (SEQ ID No 8); Oryza sativa (SEQ ID No 9) ou Zea mays (SEQ ID No 10), assim como métodos para isolar genes codificadores de PARG adicionais e suas variantes de ou- tras plantas.
Assim, em uma modalidade, as plantas ou células vegetais ma- nipuladas para serem resistentes a estresse podem compreender os seguin- tes fragmentos de DNA operacionalmente ligados:
a) um promotor expressável em plantas;
b) uma região de DNA que, quando transcrita, fornece uma molécula de RNA inibitória, a molécula de RNA compreen- dendo:
i. uma região de nucleotídeos anti-sentido compreen- dendo pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos com pelo menos 96% de identidade de seqüência com uma seqüência de nucleotídeos de cerca de 20 nu- cleotídeos selecionada do complemento de uma se- qüência de nucleotídeos que codifique uma proteína
PARG de planta, como as seqüências de nucleotí- deos de SEQ ID 7, SEQ ID 8, SEQ ID 9 ou SEQ ID 10, ou seqüências de nucleotídeos que codifiquem proteínas com seqüências de aminoácidos similares ou idênticas às seqüências de nucleotídeos mencio- nadas; ou
ii. uma região de nucleotídeos em sentido compreen- dendo pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos se- lecionada de uma seqüência de nucleotídeos que co- difique uma proteína PARG de planta, como as se- qüências de nucleotídeos de SEQ ID 7, SEQ ID 8,
SEQ ID 9 ou SEQ ID 10, ou seqüências de nucleotí- deos que codifiquem proteínas com seqüências de aminoácidos similares ou idênticas às seqüências de nucleotídeos mencionadas; ou
iii. seqüências de nucleotídeos anti-sentido e em sentido conforme mencionadas em i) ou ii), em que a seqüên- cia de nucleotídeos anti-sentido e em sentido sejam capazes de formar uma molécula de RNA de fita du- pla;
c) uma região de DNA envolvida na terminação da transcrição e poliadenilação.
Ficará imediatamente claro para aqueles versados na técnica que parâmetros adicionais de comprimento de seqüências de nucleotídeos em sentido e anti-sentido ou moléculas de dsRNA, e de identidade de se- qüência para moléculas de RNA inibitórias de ParG podem ser usados con- forme acima mencionado para as moléculas de RNA inibitórias de PARP.
Em ainda outra modalidade da invenção, o transgene de aumen- to da tolerância a estresse pode ser um transgene que codifique uma enzima funcional em plantas da via de síntese de salvamento de nicotinamida ade- nina dinucleotídeo. Portanto, o gene de aumento da tolerância a estresse pode compreender as seguintes moléculas de DNA operacionalmente Iiga- das:
a) um promotor expressável em plantas;
b) uma região de DNA que codifique uma enzima funcional em plantas da via de síntese de salvamento de nicotinami- da adenina dinucleotídeo selecionada de nicotinamidase, nicotinato fosforribosiltransferase, ácido nicotínico mono- nucleotídeo adenil transferase ou nicotinamida adenina di- nucleotídeo sintetase; e
c) uma região de extremidade 3' envolvida na terminação da transcrição e poliadenilação, conforme descrito em EP 04077624.7 (aqui incorporado por referência).
Conforme aqui usado, "uma enzima funcional em plantas da via de síntese de salvamento de nicotinamida adenina dinucleotídeo" é uma en- zima que, quando introduzida em plantas, ligada a elementos de controle apropriados, como uma região promotora e terminadora expressável em plantas, possa ser transcrita e traduzida para fornecer uma enzima da via de síntese de salvamento de NAD funcional em células vegetais. Estão incluí- das enzimas (e genes codificadores) da síntese de salvamento de NAD, que sejam obtidas de uma fonte vegetal, mas também as enzimas obtidas de levedura (Saccharomyces cereviseae) ou de outras leveduras ou fungos.
Acredita-se que estas últimas proteínas possam ser ainda mais adequadas para os métodos de acordo com a invenção, pois são menos prováveis de estarem sujeitas à regulação de feedback enzimático e outras, às quais en- zimas derivadas de plantas similares possam estar sujeitas.
Enzimas envolvidas na via de síntese de salvamento de NAD compreendem as seguintes:
- nicotinamidase (EC 3.5.1.19), que catalisa a hidrólise do grupo amida de nicotinamida, liberando, dessa forma, nicotinato e NH3. A enzima também é conhecida como nicotinamida desaminase, nicotinamida amidase, YNDase ou nicotinamida amidoidrolase
- nicotinato fosforribosiltransferase (EC 2.4.2.11), também co- nhecida como niacina ribonucleotidase, ácido nicotínico mononucleotídeo glicoidrolase, ácido nicotínico mononucleotídeo pirofosforilase, ácido nicotí- nico fosforribosiltransferase, que catalisa a seguinte reação: nicotinato-D-ribonucleotídeo + difosfato = nicotinato + 1 -difosfato de 5-fosfo- α-D ribose
- nicotinato-nucleotídeo adenililtransferase (EC 2.7.7.18), tam- bém conhecida como desamido-NAD+ pirofosforilase, nicotinato mononucle- otídeo adenililtransferase, desamidonicotinamida adenina dinucleotídeo piro- fosforilase, NaMT-ATase; ácido nicotínico mononucleotídeo adenililtransfe- rase, que catalisa a seguinte reação:
ATP + nicotinato ribonucleotídeo = difosfato + desamido-NAD+
- NAD-sintase (EC 6.3.1.5), também conhecida como NAD sinte- tase, NAD+ sintase, nicotinamida adenina dinucleotídeo sintetase, difosfopi- ridina nucleotídeo sintetase, que catalisa a seguinte reação:
Desamido-NAD+ + ATP + NH3 = AMP + difosfato + NAD+
Em uma modalidade da invenção, as regiões de DNA que codifi- cam uma enzima funcional em plantas da via de salvamento de NAD podem compreender uma seqüência de nucleotídeos de SEQ ID Nos 11, 12, 13, 14 ou 15, ou uma seqüência de nucleotídeos que codifique uma proteína com seqüências de aminoácidos similares ou idênticas às das proteínas codifica- das pelas seqüências de nucleotídeos acima mencionadas.
Conforme descrito por Hunt et al., 2004, homólogos de plantas dessas enzimas foram identificados, e essas seqüências de DNA podem ser usadas com efeito similar (Hunt et al., 2004, New Phytologist 163(1): 31-44).
As seqüências de DNA identificadas têm os seguintes números de acesso: para nicotinamidase: At5g23220 (SEQ ID No 16); At5g23230 (SEQ ID No 17) e At3g16190 (SEQ ID No 18); para nicotinato fosforribosiltransferase: At4g36940 (SEQ ID No 19), At2g23420 (SEQ ID No 20), para ácido nicotíni- co mononucleotídeo adeniltransferase: At5g55810 (SEQ ID No 21) e, para NAD sintetase, At1g55090 (SEQ ID No 22).
Entretanto, ficará claro que as plantas manipuladas para serem resistentes a estresse também podem compreender variantes dessas se- qüências de nucleotídeos, incluindo suas inserções, deleções e substitui- ções. Igualmente, podem ser usados homólogos às seqüências de nucleotí- deos mencionadas de espécies diferentes de Saccharomyces cerevisea. Essas incluem, mas não se limitam a, seqüências de nucleotídeos de plan- tas e seqüências de nucleotídeos que codificam proteínas com as mesmas seqüências de aminoácidos, assim como variantes dessas seqüências de nucleotídeos.
Variantes da seqüência de nucleotídeos descrita terão uma iden- tidade de seqüência que seja, de preferência, de pelo menos cerca de 80%, ou 85% ou 90% ou 95%, com seqüências de nucleotídeos identificadas que codifiquem enzimas da via de salvamento de NAD, como as identificadas na listagem de seqüência. De preferência, essas variantes codificarão proteínas funcionais com a mesma atividade enzimática como as enzimas da via de salvamento de NAD.
Tendo lido a descrição acima do uso de acordo com a invenção de transgenes de aumento da tolerância a estresse para aumentar a tolerân- cia de células vegetais, plantas ou sementes a condições hipóxicas ou anó- xicas, aqueles versados na técnica perceberão imediatamente que efeitos similares podem ser obtidos usando-se variantes de um gene endógeno cor- respondente a esse transgene de aumento da tolerância a estresse, essa variante resultando em maior tolerância a estresse das células vegetais ou plantas portadoras dessa variante. A título de exemplo, variantes de um ge- ne parp2 endógeno de uma planta, com um baixo nível de expressão e con- ferindo à planta portadora uma tolerância a estresse aumentada, poderiam ser usadas de maneira similar a um transgene que reduza a expressão do gene parp2 endógeno. Esses genes variantes podem ser introduzidos em células vegetais ou plantas por técnicas de cruzamento.
Aqueles versados na técnica estarão cientes de que a expressão dos diferentes genes ou transgenes de aumento da tolerância a estresse pode levar a uma população de diferentes eventos, que exibe uma distribui- ção de efeitos que varia de quase nenhum efeito a um efeito muito pronunci- ado. Entretanto, aqueles versados na técnica poderão claramente distinguir, identificar ou isolar aqueles representativos de uma população que seja mais adequada às necessidades.
Em outra modalidade, a invenção apresenta um método para aumentar a penetração das raízes de uma planta no meio de crescimento ou solo, que compreende o fornecimento à planta de um transgene de aumento da tolerância a estresse, ou de uma variante endógena desse transgene de aumento da tolerância a estresse, conforme aqui descrito em suas diferentes modalidades.
Conforme aqui usado, "protrusão de raízes de plantas" ou "pene- tração das raízes de uma planta no meio de crescimento ou solo" se refere à profundidade de crescimento das raízes no meio de crescimento sólido, in- cluindo o solo, conforme medido a partir da superfície do meio de crescimen- to até o ponto mais baixo das raízes (vide também a figura 1).
Em regra, um "aumento na protrusão ou penetração de raízes de plantas" significa pelo menos um aumento estatisticamente significativo na profundidade do crescimento das raízes no meio de crescimento, conforme medido a partir da superfície do meio até o ponto mais baixo do crescimento da raiz, que pode ser medido como uma diferença em uma comparação da profundidade da raiz de plantas de referência do tipo selvagem versus a pro- fundidade da raiz de plantas manipuladas para serem tolerantes ao estresse, ou como uma diferença em uma comparação da profundidade da raiz de plantas tratadas com compostos químicos particulares versus a profundida- de da raiz de plantas não tratadas.
Para um entedimento correto da invenção, é importante perce- ber que uma penetração mais profunda de um sistema de raízes de uma planta no meio de crescimento ou no solo, conseguida pelos métodos de acordo com a invenção, não deve ser igualada a um aumento do sistema de raízes em volume ou peso seco ou fresco. De fato, o volume de um sistema de raízes pode ser significativamente aumentado, enquanto as raízes todas permanecem muito superficiais abaixo da superfície do meio de crescimento ou do solo. Em contraste, raízes de plantas tratadas de acordo com a inven- ção podem ser de tamanho, volume, peso ou mesmo comprimento igual, todavia penetram muito mais profundamente abaixo da superfície do meio de crescimento ou do solo.
Conforme aqui usado, "meio de crescimento" pretende se referir a qualquer meio adequado para crescimento de plantas, incluindo o solo. Esses meios podem incluir líquidos solidificados ou gelificados, como água- ágar, turfa, torrão, diferentes tipos de solo e outros.
Em outra modalidade, a invenção se refere ao uso de um com- posto da classe neonicotinóide para aumentar a tolerância de uma célula vegetal, planta ou semente a condições hipóxicas ou anóxicas. Assim, apre- senta-se um método para aumentar a tolerância de uma célula vegetal, plan- ta ou semente a condições hipóxicas ou anóxicas, que compreende a etapa de aplicação de uma quantidade eficaz de um composto neonicotinóide de fórmula (I) às células vegetais, plantas ou sementes ou ao habitat das plan- tas, ou ao meio de crescimento.
<formula>formula see original document page 22</formula>
em que:
Het representa um heterociclo que é, em cada caso, opcional- mente mono- ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, esse hetero- ciclo sendo selecionado do seguinte grupo de heterociclos: pirid-3-ila, pirid-5- ila, 3-piridínio, 1-óxido-5-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, tetraidrofuran-3-ila, tia- zol-5-ila,
A representa C1-C6 alquila, -N(R1)(R2) ou S(R2)1 em que
R1 representa hidrogênio, CrC6 alquila, fenil-C1-C4 alquila, C3-C6 cicloalquila, C2-C6 alcenila ou C2-C6 alcinila, e
R2 representa C1-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 alcinila, -C(=0)-CH3 ou benzila,
R representa hidrogênio, C1-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 al- cinila, -C(=0)-CH3 ou benzila ou, juntamente com R21 representa os grupos abaixo:
-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2- NH-CH2-, -CH2-N(CH3)-CH2-, e
X representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2.
Radicais hidrocarbonetos saturados ou insaturados, como alqui- la ou alcenila, podem, em cada caso, ser de cadeia linear ou ramificada, na medida em que isso seja possível, incluindo em combinação com heteroá- tomos, como, por exemplo, em alcóxi.
(vide, por exemplo, EP-A1-192 606, EP-A2-580 533, EP-A2-376 279, EP-A2- 235 725).
neonicotinóides relacionados em "The Pesticide Manual", 13- edição, 2003 (British Crop Protection Council).
Esses compostos são conhecidos por terem atividade inseticida
Compostos de fórmula (I) que podem ser mencionados são os
Um composto é o imidacloprid de fórmula
<formula>formula see original document page 23</formula>
conhecido, por exemplo, no EP A1 O 192 060.
Outro composto é o nitenpiram de fórmula
conhecido, por exemplo, no EP A2 O 302 389.
Outro composto é o acetamiprid de fórmula
conhecido, por exemplo, no WO A1 91/04965. Outro composto é o tiacloprid de fórmula
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conhecido, por exemplo, do EP A2 0 235 725.
Outro composto é o tiametoxam de fórmula
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conhecido, por exemplo, do EP A2 O 580 553.
Outro composto é o clotianidin de fórmula
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conhecido, por exemplo, do EP A2 0 376 279.
Outro composto é o dinotefuran de fórmula
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conhecido, por exemplo, do EP A1 O 649 845.
São particularmente adequados para a presente invenção com- postos de fórmula (1), em que o "Het" substituído representa cloropiridila
<formula>formula see original document page 24</formula>
como imidacloprid, nitenpiram, acetamiprid e tiacloprid.
São compostos particularmente preferidos o imidacloprid e tia- cloprid.
O ácido 6-cloronicotínico pode ser liberado durante a degrada- ção dos neonicotinóides acima mencionados que possuam esse grupo, co- mo imidacloprid, nitenpiram e tiacloprid. Por exemplo, o imidacloprid é de- gradado por etapas no metabólito primário ácido 6-cloronicotínico, que final- mente se degrada em dióxido de carbono. Descobriu-se que esse metabólito também aumenta a tolerância ao estresse e a saúde de uma planta ou célula vegetal ou semente com a qual essa planta seja cultivada e que seja mani- pulada para ser tolerante a estresse e também pode ser usado de acordo com os métodos da presente invenção.
Uma maneira de determinar se 6-CNA é liberado durante a de- gradação dos neonicotinóides acima mencionados em plantas ou em plantas particulares é descrita por Placke e Weber (Pflanzenschutz-Nachrichten Ba- yer 46/1993, 2 109-182).
Assim, em outra modalidade da invenção, descreve-se um mé- todo que é utilizável para aumentar a tolerância de células vegetais ou plan- tas ou suas partes a condições hipóxicas ou anóxicas, que compreende a etapa de fornecer à dita planta, célula vegetal ou semente da qual as ditas plantas sejam cultivadas de uma quantidade eficaz de ácido 6-cloronicotínico (niacina, CAS NO: 5326-23-8) de fórmula (3)
A quantidade eficaz de ácido 6-cloronicotínico pode ser forneci- da à célula vegetal, planta ou semente por aplicação direta do composto de fórmula (3) à célula vegetal, planta, semente e/ou seu habitat. Entretanto, o 6-CNA também pode ser fornecido à planta por fornecimento de um compos- to que possa ser metabolizado pela planta para gerar 6-CNA como um me- tabólito, como os compostos acima mencionados.
Ficará imediatamente claro que os compostos acima descritos também podem ser usados para aumentar a penetração das raízes de uma planta no meio de crescimento ou solo, que compreende a etapa de forne- cimento de uma quantidade eficaz de um composto neonicotínico de fórmula (I), como um composto neonicotínico de fórmula (I) compreendendo uma cadeia colateral cloropiridina, particularmente aqueles neonicotinóides de fórmula I compreendendo uma cadeia colateral cloropiridina que possam ser metabolizados em plantas para gerar 6-CNA, incluindo imidacloprid ou tia- cloprid, ou fornecimento de 6-CNA às células vegetais, plantas ou sementes ou ao habitat das plantas ou ao meio de crescimento.
Uma das vantagens da presente invenção é que as proprieda- des sistêmicas dos compostos de acordo com a invenção e composições compreendendo os ditos compostos significam que o tratamento da semente de plantas com essas composições é suficiente para aumentar a penetração das raízes da planta em germinação e da planta resultante após a emergên- cia.
Em outra modalidade da invenção, descreve-se um método que é utilizável para aumentar a penetração das raízes de uma planta, que com- preende a aplicação à dita planta e/ou a seu habitat, a uma célula vegetal ou a uma semente da qual as ditas plantas sejam cultivadas de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo os compostos de fórmula (I).
Portanto, a invenção também refere-se a composições compre- endendo os compostos de fórmula (I) para uso dessas composições de a- cordo com a invenção.
Os compostos de fórmula (I) também podem ser usados em uma mistura com outros compostos ativos, por exemplo, inseticidas, bactericidas, acaricidas, fungicidas e outros, na forma de suas formulações comercial- mente utilizáveis ou nas formas de aplicação preparadas a partir dessas formulações. Isso pode ser feito para se obterem composições que, além de aumentarem a penetração de raízes de plantas de acordo com a invenção, também combatam pragas que possam estar presentes. Inseticidas que po- dem ser usados são, por exemplo, agentes de organofósforo, agentes de carbamato, substâncias químicas do tipo carboxilato, substâncias químicas do tipo hidrocarboneto clorado, substâncias inseticidas produzidas por mi- cróbios e outros.
Em muitos casos, isso resulta em efeitos sinérgicos, isto é, a atividade da mistura excede a atividade dos componentes individuais. Essas formulações e formas de aplicação são particularmente comercial e ecologi- camente úteis, pois, em geral, quantidades menores dos ingredientes ativos podem ser usadas. Um sinergista, entretanto, não precisa ser necessaria- mente ativo por si mesmo, contanto que aumente a ação do composto ativo.
Uma mistura de outros compostos ativos conhecidos, como her- bicidas, ou com agentes de segurança, fertilizantes e reguladores de cresci- mento também é possível.
O tratamento de acordo com a invenção das plantas e partes de plantas com os compostos ativos é realizado diretamente ou deixando-se que os compostos ajam em seus arredores, ambiente ou espaço de arma- zenamento pelos métodos de tratamento costumeiros, por exemplo, por i- mersão, pulverização, evaporação, enevoamento, espalhamento, pintura e, no caso de material de propagação, em particularmente no caso de semen- tes, também por aplicação de um ou mais revestimentos.
Os compostos ativos podem ser convertidos nas formulações costumeiras, como soluções, emulsões, pós umectáveis, suspensões, pós, poeiras, pastas, pós solúveis, grânulos, concentrações de suspensão- emulsão, materiais naturais e sintéticos impregnados com o composto ativo e microencapsulações em substâncias poliméricas.
O teor dos compostos ativos da presente invenção em uma for- mulação ou forma de aplicação comercialmente utilizável pode ser variado em uma ampla faixa. O teor de composto ativo das formas de uso prepara- das com as formulações comerciais pode variar dentro de amplos limites.
Essas formulações são produzidas de maneira conhecida, por exemplo, por misturação dos compostos ativos com expansores, que são solventes líquidos e/ou veículos sólidos, opcionalmente com o uso de tenso- ativos, isto é, emulsificadores e/ou dispersantes e/ou formadores de espu- ma.
Se o expansor usado for água, também é possível empregar, por exemplo, solventes orgânicos como solventes auxiliares. Essencialmente, solventes líquidos adequados são: aromáticos, como xileno, tolueno ou al- quilnaftalenos, aromáticos clorados ou hidrocarbonetos alifáticos clorados, como clorobenzenos, cloroetilenos ou cloreto de metileno, hidrocarbonetos alifáticos, como cicloexano ou parafinas, por exemplo, frações de petróleo, óleos minerais e vegetais, álcoois, como butanol ou glicol, e também seus éteres e ésteres, cetonas, como acetona, metil etil cetona, metil isobutil ce- tona ou cicloexanona, solventes fortemente polares, como dimetilformamida e dimetil sulfóxido e também água.
Como veículos sólidos, são adequados: por exemplo, sais de amônio e minerais naturais moídos, como caulins, argilas, talco, giz, quartzo, atapulgita, montmorilonita ou terra diatomácea, e minerais sintéticos moídos, como sílica altamente dispersa, alumina e silicatos; como veículos sólidos para grânulos, são adequados: por exemplo, rochas naturais trituradas e fracionadas, como calcita, mármore, púmice, sepiolita e dolomita, e também grânulos sintéticos de farinhas inorgânicas e orgânicas, e grânulos de mate- riais orgânicos, como serragem, cascas de coco, sabugos de milho e caules de tabaco; como emulsificadores e/ou formadores de espuma, são adequa- dos: por exemplo, emulsificadores não iônicos e aniônicos, como ésteres de ácidos polioxietileno graxos, éteres de álcoois polioxietileno graxos, por e- xemplo, éteres alquilaril poliglicólicos, alquilsulfonatos, alquil sulfatos, arilsul- fonatos e também hidrolisados de proteínas; como dispersantes, são ade- quados: por exemplo, licores de refugo de lignina-sulfito e metilcelulose.
Agentes de pegajosidade, como carboximetilcelulose e políme- ros naturais e -sintéticos na forma de pós, grânulos ou látex, como goma- arábica, álcool polivinílico e acetato de polivinila, assim como fosfolipídios naturais, como cefalinas e lecitinas, e fosfolipídios sintéticos, podem ser u- sados nas formulações. Outros aditivos podem ser óleos minerais e vege- tais.
É possível usar corantes, como pigmentos inorgânicos, por e- xemplo, óxido de ferro, óxido de titânio e Azul da Prússia, e corantes orgâni- cos, como corantes de alizarina, corantes azo e corantes de ftalocianinas de metais, e nutrientes residuais, como sais de ferro, manganês, boro, cobre, cobalto, molibdênío e zinco.
As formulações em geral compreendem entre 0,1 e 98% em pe- so de composto ativo, de preferência entre 0,1 e 90% e, de maneira particu- larmente preferida, entre 0,5 e 70% em peso de composto ativo.
O efeito dos compostos neonicotinóides e de 6-CNA sobre a pro- fundidade de crescimento de raízes é pronunciado de maneira particular- mente forte a certas taxas de aplicação. Entretanto, as taxas de aplicação dos compostos ativos podem ser variadas dentro de faixas relativamente largas. Em geral, as taxas de aplicações são de 1 g a 1.600 g do composto ativo por hectare, de preferência de 10 g a 800 g do composto ativo por hec- tare e, de maneira particularmente preferida, de 10 g a 600 g do composto ativo por hectare.
Conforme acima mencionado, a invenção refere-se a métodos que são utilizáveis para aumentar a penetração das raízes de uma planta no meio de crescimento ou para aumentar a tolerância a condições de hipóxia, que compreendem a aplicação ao material de propagação da planta, incluin- do sementes a partir das quais a planta seja cultivada, de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo os compostos de fórmula (I). O material de propagação de planta pode ser tratado antes do plantio, por e- xemplo, a semente pode ser revestida antes de ser semeada. Os compostos de acordo com a invenção também podem ser aplicados a grãos de semen- tes por impregnação dos grãos com uma formulação líquida ou por seu re- vestimento com uma formulação sólida. A composição também pode ser aplicada ao local de plantio quando o material de propagação está sendo plantado, por exemplo, durante a semeadura.
Com relação ao tratamento do material de propagação de plan- ta, como sementes, taxas de aplicação favoráveis são, em geral, de 0,1 a 1.000 g, em particular de 1 g a 800 g, de preferência de 10 a 500 g de um dos compostos neonicotinóides ou 6-CNA por 100 kg do material a ser trata- do.
Todas as plantas e partes de plantas podem ser tratadas de a- cordo com a invenção. Partes de plantas devem ser entendidas como signi- ficando todas as partes e órgãos de plantas acima do solo e abaixo do solo, como rebento, folha, flor e raiz, exemplos que podem ser mencionados sen- do folhas, agulhas, hastes, caules, flores, corpos de frutas, frutas, sementes, raízes, tubérculos e rizomas. As partes de plantas também incluem material colhido e material de propagação vegetativa e generativa, por exemplo, cor- tes, tubérculos, rizomas, bulbos reprodutores e sementes. Também incluem células vegetais, como as que podem ser usadas ou resultar da transforma- ção de uma célula vegetal de acordo com a invenção. Também é possível aplicar os compostos acima mencionados sobre ou dentro do solo, por e- xemplo, antes de plantar ou semear, para se conseguir o efeito descrito, por exemplo, para aumentar a tolerância ao estresse das plantas após o plantio e da planta emergente que cresce a partir de uma semente que tenha sido semeada em solo tratado.
Também ficará imediatamente claro que os métodos da inven- ção, que compreendem o uso de transgenes de aumento da tolerância a estresse ou variantes endógenas de aumento da tolerância a estresse, po- dem ser combinados com os métodos da invenção, que compreendem o uso de um composto neonicotinóide ou 6-CNA, para fornecer efeitos aditivos ou sinérgicos no aumento da tolerância a condições hipóxicas ou anóxicas ou no aumento da profundidade da raiz de uma planta em um meio de cresci- mento ou no solo.
O método da presente invenção pode ser adequado para qual- quer planta, tanto plantas dicotiledóneas, quanto monocotiledôneas, incluin- do, mas não limitadas a, algodão, legumes Brassica, colza, trigo,cereais Ou milho, cevada, girassol, arroz, aveia, cana-de-açúcar, soja, legumes (incluin- do chicória, alface, tomate), tabaco, batata, beterraba, mamão, abacaxi, manga, Arabidopsis thaliana, mas também plantas usadas em horticultura, floricultura ou reflorestamento, plantas de cereais, incluindo trigo, aveia, ce- vada, centeio, arroz, turfa, sorgo, painço ou cana-de-açúcar. Os métodos da invenção também podem ser aplicados a qualquer planta, incluindo, mas não limitadas a, algodão, tabaco, canola, colza, soja, legumes, batatas, Lemna spp., Nicotiana spp., batatas doces, Arabidopsis, alfafa, cevada, fei- jão, milho, algodão, linho, ervilha, uva, arroz, centeio, açafrão, sorgo, soja, girassol, tabaco, trigo, aspargo, beterraba, brócolis, repolho, cenoura, couve- flor, aipo, pepino, berinjela, alface, cebola, colza, pimenta, batata, abóbora, rabanete, espinafre, abóbora, tomate, abobrinha, amêndoa, maçã, damasco, banana, amora preta, mirtilo, cacau, cereja, coco, vacínio, tâmaras, uva, to- ronja, goiaba, kiwi, limão, lima, manga, melão, nectarina, laranja, mamão, maracujá, pêssego, amendoim, pêra, abacaxi, pistachio, ameixa, framboesa, morango, tangerina, noz e melancia.
Conforme aqui usado, "compreendendo" deve ser interpretado como especificando a presença das características, inteiros, etapas ou com- ponentes declarados conforme citados, mas não exclui a presença ou adição de uma ou mais características, inteiros, etapas ou componentes, ou seus grupos. Assim, por exemplo, um ácido nucléico ou proteína compreendendo uma seqüência de nucleotídeos ou de aminoácidos pode compreender mais nucleotídeos ou aminoácidos do que os realmente citados, isto é, estar inclu- ída em um ácido nucléico ou proteína maior. Um transgene compreendendo uma região de DNA que seja funcional ou estruturalmente definida pode compreender regiões de DNA adicionais e outras.
A menos que declarado de outra forma nos exemplos, todas as técnicas de DNA recombinante são realizadas de acordo com protocolos padronizados, conforme descritos em Sambrook et al. (1989) Molecular Clo- ning: A Laboratory Manual, Segunda Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, e nos Volumes 1 e 2 de Ausubel et al. (1994) Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols, USA-. Materiais e métodos padroniza- dos para trabalho molecular com plantas são descritos em Plant Molecular Biology Labfax (1993) de R. D. D. Croy, publicado em conjunto pela BIOS Scientific Publications Ltd (UK) e Blackwell Scientific Publications, UK. Ou- tras referências para técnicas padronizadas de biologia molecular incluem Sambrook e Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Tercei- ra Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, Volumes I e Il de Brown (1998) Molecular Biology LabFax, Segunda Edição, Aeademic Press (UK). Materiais e métodos padronizados para reações em cadeia de polime- rase podem ser encontrados em Dieffenbach e Dveksler (1995) PCR Primer: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, e em McPher- son et al. (2000) PCR-Basics: From Background to Bench, Primeira Edição, Springer Verlag1 Alemanha.
Em toda a descrição e nos exemplos, faz-se referência às se- guintes seqüências:
SEQ ID No. 1: região codificadora parpl de Arabidopsis thaliana. SEQ ID No. 2: região codificadora parp2 de Arabidopsis thaliana. SEQ ID No. 3: região codificadora parpl 1 de Zea mays. SEQ ID No. 4: região codificadora parpl 2 de Zea mays. SEQ ID No. 5: região codificadora parp2 de Zea mays. SEQ ID No. 6: região codificadora parcial parp2 de algodão. SEQ ID No. 7: região codificadora parG de Arabidopsis thaliana. SEQ ID No. 8: região codificadora parG de Solanum tuberosum. SEQ ID No. 9: região codificadora parG de Oryza sativa. SEQ ID No. 10: região codificadora parG de Zea mays. SEQ ID No. 11: seqüência de nucleotídeos da nicotinamidase de Saccha- romyces cereviseae (PNC1).
SEQ ID No. 12: seqüência de nucleotídeos da nicotinato fosforribosiltransfe- rase de Saccharomyces cereviseae (NPT1) (complemento). SEQ ID No. 13: seqüência de nucleotídeos da ácido nicotínico mononucleo- tídeo adenil transferase 1 (NMA1) de Saccharomyces cereviseae. SEQ ID No. 14: seqüência de nucleotídeos da ácido nicotínico mononucleo- tídeo adenil transferase 2 (NMA2) de Saccharomyces cereviseae. SEQ ID No. 15: seqüência de nucleotídeos da NAD sintetase (QNS1) de Saccharomyces cereviseae.
SEQ ID No. 16: seqüência de nucleotídeos da nicotinamidase de Arabidop- sis thaliana (isoforma 1).
SEQ ID No. 17: seqüência de nucleotídeos da nicotinamidase de Arabidop- sis thaliana (isoforma 2).
SEQ ID No. 18: seqüência de nucleotídeos da nicotinamidase de Arabidop- sis thaliana (isoforma 3).
SEQ ID No. 19: seqüência de nucleotídeos da nicotinato fosforribosiltransfe- rase de Arabidopsis thaliana (isoforma 1).
SEQ ID No. 20: seqüência de nucleotídeos da nicotinato fosforribosiltransfe- rase de Arabidopsis thaliana (isoforma 2).
SEQ ID No. 21: seqüência de nucleotídeos da ácido nicotínico mononucleo- tídeo adenil transferase de Arabidopsis thaliana.
SEQ ID No. 22: seqüência de nucleotídeos da NAD sintetase de Arabidopsis thaliana.
EXEMPLOS
Exemplo 1: Protocolo para medição da profundidade do crescimento da raiz de Arabidopsis em meio de crescimento Meios
Meio de germinação: sais de Murashige e Skoog concentrados à metade; vitaminas B5; sacarose a 1,5%; pH 5,8; ágar Difco a 0,4%.
Plantas de Arabidopsis
Esterilização de sementes de Arabidopsis: 2 min em etanol a 70%; 10 min de alvejamento (cloreto ativo a 6%) + 1 gota de Tween 20 para 20 mL de solução; lavar 5 vezes com água de toneira estéril; a esterilização é feita em tubos de Eppendorf de 2 mL. As sementes de Arabidopsis mergu- lham até o fundo do tubo, permitindo a remoção dos líquidos por meio de uma pipeta de 1 mL.
Pré-germinação das sementes: em placas de petri Optilux de 9 cm (FaIcon) contendo 10 mL de água de torneira estéril. Luz baixa durante uma noite até 24 horas.
Crescimento de plantas de Arabidopsis: as sementes são seme- adas em tubos de vidro de 25 χ 150 mm (Sigma C5916) com tampa colorida natural (transparente) (Sigma C5791) contendo ± 34 mL de meio de germi- nação: 1 semente/tubo. Os tubos são colocados nas duas fileiras externas de suportes de tubos para 40 tubos (VWR nalg5970-0025) enrolados em folha de alumínio, de modo que as raízes possam crescer no escuro. As plantas são cultivadas a 23°C. 30-50 μΕinstein s-1 m-2. 12 horas de luz-12 horas de escuridão (vide figura 1).
Medição da profundidade da raiz
Após três semanas, a profundidade da raiz é medida a partir da superfície do meio até o ponto mais baixo de crescimento da raiz (vide figura 1)·
Exemplo 2: Análise da profundidade do crescimento da raiz de plantas de Arabidopsis compreendendo um transqene que aumente a tolerância a es- tresse
Plantas de Arabidopsis thaliana compreendendo um transgene que codifique uma molécula de dsRNA que seja capaz de reduzir a expres- são dos genes de PARP1 e PARP2 endógenas, conforme descrito em WO 00/04173 A1 (por exemplo, em seu exemplo 8) foram cultivadas conforme descrito no exemplo 1.
Após três semanas, a profundidade da raiz das plantas transgê- nicas foi medida e comparada com a profundidade das raízes de plantas de controle não transgênicas ou de plantas isogênicas não transgênicas culti- vadas de maneira similar.
Em um primeiro experimento, várias populações de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O compreendendo um transgene que codifica uma molécula de dsRNA que é capaz de reduzir a expressão de genes de PARP2 endógena (com as linhagens 427-16 e 427-20 mostrando uma fraca tolerância ao estresse de alta luz, e a linhagem 427-19 mostrando uma tole- rância moderada ao estresse de alta luz) foram comparadas com uma popu- lação de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O não transgênicas.
Os resultados das medições foram submetidos a análises esta- tísticas, resumidas na tabela 1, que também representam a média, desvio padrão e intervalos de confiança.
As raízes de plantas de Arabidopsis thaliana transgênicas com a maior tolerância às condições de estresse de alta luz (linhagem 427-19) pe- netraram mais profundamente, de maneira estatisticamente significativa (a um nível de confiança de 99%), no meio de crescimento do que as plantas de plantas de controle de Arabidopsis thaliana cv. Col-O não transgênicas (vide figura 2 e tabela 1).
Tabela 1: Profundidade da raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O compreendendo um transgene que codifique uma molécu- la de dsRNA que seja capaz de reduzir a expressão de genes de PARP2 endógena, em comparação com plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O não transgênicas
<table>table see original document page 35</column></row><table>
*p < 0,01
Em um experimento adicional, uma população de plantas de A- rabidopsis thaliana cv. Col-O transgênica compreendendo um transgene que codifica uma molécula de dsRNA que é capaz de reduzir a expressão de genes de PARP2 endógena e que são tolerantes a estresse de alta luz (li- nhagem 427-22) foi comparada a uma linhagem transgênica contendo um transgene similar, mas que era sensível ao estresse de alta luz (linhagem 427-24), assim como a plantas de controle de Arabidopsis thaliana cv. Col-O não transgênicas.
Os resultados das medições foram submetidos a análise estatís- tica, resumidas na tabela 2, que também representam a média, desvio pa- drão e intervalos de confiança.
As raízes de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O transgêni- cas da linhagem transgênica tolerante a estresse (linhagem 427-22) pene- trou mais profundamente no meio de crescimento (compreendendo ágar Dif- co a 0,7%, em vez de 0,4%) do que raízes de plantas de controle de Arabi- dopsis thaliana cv. Col-O e do que raízes de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O transgênicas sensíveis a estresse (linhagem 427-24) (vide figura 3 e tabela 2). Tabela 2: Profundidade da raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O compreendendo um transgene que codifique uma molécu- la de dsRNA que seja capaz de reduzir a expressão de genes de PARP2 endógena, em comparação com plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O não transgênicas
<table>table see original document page 36</column></row><table>
Em outro experimento, as seguintes populações foram analisa- das:
C24: linhagem de Arabidopsis de tipo selvagem; 1599: linhagem transgência de A. thalina compreendendo transgene anti-PARP2 com uma alta tolerância a condições de estresse de alta luz; linhagem 1463: linhagem transgênica de A. thaliana compreendendo um transgene anti-PARP2 com uma tolerância moderada a condições de estresse de alta luz; linhagem 1681: linhagem transgênica de A. thaliana compreendendo um gene anti- PARP1 com uma tolerância moderada a condições de estresse de alta luz; e linhagem 1690: linhagem transgênica de A. thaliana compreendendo um ge- ne anti-PARP1 com uma tolerância moderada a condições de estresse de alta luz. A tolerância a estresse da linhagem 1599 é muito alta, e a tolerância a estresse das linhagens 1463, 1681 e 1690 varia de moderada a alta.
Os resultados das medições foram submetidos a análise estatís- tica, resumida na tabela 3, que representa a média, desvio padrão e interva- los de confiança.
As raízes de plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 transgêni- cas compreendendo um transgene que codifica uma molécula de dsRNA que é capaz de reduzir a expressão de genes de PARP1 endógena (linha- gens 1681 e 1690) ou genes de PARP2 (linhagens 1599 e 1463) penetraram mais profundamente no meio de crescimento do que as de plantas de con- trole de Arabidopsis thaliana cv. C24 não transgênicas (vide figura 4 e tabela 3).
Tabela 3: Profundidade da raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 compreendendo um transgene que codifique uma molécula de dsRNA que seja capaz de reduzir a expressão de genes de PARP1 ou PARP2 endógena, em comparação com plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 não transgênicas
<table>table see original document page 37</column></row><table>
*p < 0,01
Em um experimento adicional, uma população de segregação a 1:1 de linhagem de Arabidopsis thaliana cv. Col-O transgênica compreen- dendo um transgene que codifica uma molécula de dsRNA que é capaz de reduzir a expressão de genes de PARP2 endógena e com alta tolerância a estresse de alta luz foi analisada. A presença do transgene foi verificada por análise de PCR.
Plantas compreendendo o transgene tinham raízes que penetra- vam mais profundamente no meio de crescimento do que plantas de Arabi- dopsis thaliana cv. Col-O azigótica derivadas da linhagem 427-19 (vide figura 5 e tabela 4).
Tabela 4: Profundidade da raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O compreendendo um transgene que codifique uma molécu- Ia de dsRNA que seja capaz de reduzir a expressão de genes de PARP2 endógena, em comparação com plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O azigóticas
<table>table see original document page 37</column></row><table>
*p < 0,01
Exemplo 3: Análise da profundidade do crescimento da raiz de plantas de Arabidopsis após aplicação de imidacloprid
Plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 foram cultivadas con- forme descrito no exemplo 1 em meio de germinação (com ágar Difco a 0,7%, em vez de 0,4%), compreendendo várias concentrações de imidaclo- prid (O, 50 e 100 mg/L). Após três semanas, a profundidade das raízes das plantas tratadas com 50 e 100 mg/L de imidacloprid foi medida e comparada com a profundidade das raízes de plantas não tratadas cultivadas de manei- ra similar.
As raízes das plantas de Arabidopsis tratadas penetraram mais profundamente no meio de crescimento do que as raízes de plantas de Ara- bidopsis não tratadas (vide figura 6 e tabela 5)
Tabela 5: Profundidade da raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 tratadas com 50 e 100 mg/L de imidacloprid em compara- ção com plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 não tratadas com imidaclo- prid
<table>table see original document page 38</column></row><table>
Exemplo 4: Análise da profundidade do crescimento da raiz de plantas de Arabidopsis após aplicação de ácido 6-cloronicotínico (6-CNA)
Plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 foram cultivadas con- forme descrito no exemplo 1 em meio de germinação compreendendo várias concentrações de 6-CNA (0, 1 e 5 mg/L). Após três semanas, a profundida- de das raízes das plantas tratadas com 1 e 5 mg/L de 6-CNA foi medida e comparada com a profundidade das raízes de plantas não tratadas com 6- CNA cultivadas de maneira similar.
As raízes das plantas de Arabidopsis tratadas penetraram mais profundamente no meio de crescimento do que as raízes de plantas de Ara- bidopsis não tratadas (vide figura 7 e tabela 6) Tabela 6: Profundidade da raiz (mm) de plantas de Arabidopsis thaliana cv. C24 tratadas com 1 e 5 mg/L de 6-CNA em comparação com plantas de Arabidopsis thaliana cv. Col-O não tratadas com 6-CNA
<table>table see original document page 39</column></row><table> LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA
<110> Bayer BioScience N.V. METZLAFF, Michael DE BLOCK1 Marc
<120> Método para aumentar a resistência de plantas a condições hipóxicas
<130> BCS 05-2015
<150> EP 05076392.9 <151> 2005-06-15
<150> US 60/691,103 <151> 2005-06-16
<160> 22
<170> PatentIn versão 3.3
<210> 1
<211> 3187
<212> DNA
<213> Artificial
<22 0>
<223> parpl codificando região de Arabidopsis thaliana <220>
<221> característiea_misc
<222> (11).. (2962)
<223> abrir quadro de leitura
<400> 1
taccggagaa atggcaagcc cacataagcc gtggagggcg gagtatgcaa agtcgtcgag 60
gtcttcatgt aaaacttgca agtccgtcat taacaaggag aactttcgtc ttggaaagtt 120
ggttcaatct actcacttcg atggcatcat gcccatgtgg aaccatgctt cttgtatact 180
gaagaagacg aagcagataa aatcagttga tgatgttgaa ggcatagaat cacttegttg 240
ggaagatcag caaaagatta gaaaatatgt cgaatctgga gcagggagta acacaagcac 300
aagcacaggc acaagcacga gcagtaccgc taataatgcc aaactagaat atgggattga 360
agtgtcacaa acttcccgtg ccggttgcag aaagtgtagc gaaaagatct tgaaaggaga 420
ggtacgtata ttctccaagc ctgaaggccc gggtaacaaa ggtttgatgt ggcatcacgc 48Ό
taaatgtttc cttgaaatgt cttcctctac tgaactggaa agtttgtctg gatggagaag 540
tataccagac tcagaccaag aagctcttct tcccttagtg aagaaagctc tgccggcagc 600
caaaactgag acagcagaag cacgtcaaac aaattcaaga gcaggcacaa aacgaaaaaa 660
tgattctgtt gataacgaga agtcgaaact ágcaaaaagt agttttgaca tgtctacaag 720
tggtgcttta caaccttgta gcaaagaaaa ggaaatggag gcccaaacta aggaattgtg 780
ggacctgaag gatgatctga aaaaatatgt aacatcagct gagttgcggg aaatgcttga 840
agtaaatgaa caaagtacaa gaggatctga acttgatctg cgtgataaat gtgctgatgg 900
catgatgttt ggcccactcg ctctctgccc aatgtgctct gggcatcttt ctttctccgg 960 aggactttac cgatgccatg gatacatctc agaatggagc aaatgttctc attccacttt 1020
ggatccagac cgcatcaaag ggaagtggaa aatccctgac gaaacagaaa atcaattcct 1080
tctgaagtgg aataagtctc aaaagagtgt gaagccaaaa cgtattctgc gtcctgtatt 1140
gtctggcgag acatctcagg gtcaaggttc taaagatgca actgactcct caaggagtga 1200
aaggctagca gatcttaaag tttcaattgc tggaaatact aaggaaaggc aaccatggaa 1260
gaagagaatt gaggaagctg gtgcagagtt tcatgctaat gttaaaaaag gtacaagctg 1320
tttggttgtt tgtggactga cagatatcag agacgctgaa atgagaaagg caaggaggat 1380
gaaagtggca atcgtgagag aggattattt ggttgattgt tttaaaaaac agaggaaact 1440
tccatttgac aagtacaaaa ttgaagacac tagtgagagc cttgtcactg ttaaagtaaa 1500
aggacgaagc gctgtgcatg aagcgtctgg cctccaagag cactgtcaca ttcttgaaga 1560
tgggaacagt atctataaca caactctgag catgtctgat ctctctaccg gtatcaatag 1620
ttattacata ctccagataa tccaagaaga taaaggttca gattgttacg tatttcgtaa 1680
atggggccga gttggaaatg aaaagattgg tggtaacaaa gtggaggaaa tgtcaaagtc 1740
tgatgcggtt cacgaattca aacgtctatt tcttgaaaaa accggaaaca catgggaatc 1800
ttgggaacaa aaaacgaatt tccagaaaca acctggaaaa tttctcccgt tggacattga 1860
ttatggagtt aataagcaag tagccaaaaa agagccattt cagaccagta gcaaccttgc 1920
tccatcatta atagaattga tgaagatgct ttttgatgtg gaaacttaca gatctgcaat 1980
gatggagttc gagataaata tgtcagagat gccacttggg aagctcagca aacataatat 2040
acagaagggt tttgaggcat tgacggagat acagaggcta ttgactgaaa gcgaccccca 2100
gcctactatg aaagaaagct tgcttgttga tgctagtaac agatttttta ccatgatccc 2160
ttctattcat cctcatatta tccgagatga agatgacttt aagtcaaagg tgaaaatgct 2220
cgaggctctg caggatatcg aaatagcttc aagaatagtt ggctttgatg ttgatagcac 2280
cgaatctctt gatgataagt ataagaagct gcattgcgat atctcaccac ttcctcatga 2340
tagcgaagat tatcgattaa tcgagaagta tcttaacaca actcatgccc caacgcatac 2400
agagtggagt cttgagctag aggaagtttt tgctcttgaa agagaaggag agtttgataa 2460
atatgctccc cacagagaaa aacttggcaa taagatgctc ctatggcatg gttctcgatt 2520
aacgaatttt gttggaatat tgaaccaagg actgagaatt gcacctccag aagctcctgc 2580
tactggttac atgtttggaa aagggatata ctttgctgac cttgtcagta aaagtgctca 2640
gtactgctac acttgtaaga aaaatccggt gggtctaatg cttctgagtg aagttgcatt 2700
gggagaaata catgagctaa caaaagctaa gtatatggat aaacctccga gagggaaaca 2760
ctcgaccaaa gggctcggca agaaagtgcc tcaagattcc gagtttgcca agtggagagg 2820
tgatgtgact gttccctgtg gaaaacctgt ttcatcaaag gtcaaggctt ctgagcttat 2880
gtacaatgag tatatcgtct acgatacagc ccaggtgaag ttgcagttct tgttgaaagt 2940 aaggtttaag cacaagagat gagcctgaac caaacaagaa gacgtcactt ctgttaacta 3000
aatgtttttt tgggaaatcg aatccaacac gaagacttaa cttttgtaac taaattgctt 3060
ttgataaatt gaattcaaca tgtagtcaca gatttaactc tctggcgttg tagatgtttc 3120
tggttttaaa agagcgtact ctacattttg ttatgctttt tctcagtaat gacacttctt 3180
aagactt 3187
<210> 2
<211> 2147
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> parp2 codificando região de Arabidopsis thaliana
<22 0>
<221> caracteristica_misc
<222> (129)..(2042)
<223> abrir quadro de leitura
<400> 2
attgatgaag aagaaaacga agaagaagac tcttcaaatg ctcgcgcgaa ctcacttctg 60
acgaaaacca tacttcctca gtctcattcc ctttccgacg aactattctc ctgaagaaga 120
agacgaaaat ggcgaacaag ctcaaagtcg acgaactccg tttaaaactc gccgagcgtg 180
gactcagtac tactggagtc aaagccgttc tggtggagag gcttgaagag gctatcgcag 240
aagacactaa gaaggaagaa tcaaagagca agaggaaaag aaattcttct aatgatactt 300
atgaatcgaa caaattgatt gcaattggcg aatttcgtgg gatgattgtg aaggaattgc 360
gtgaggaagc tattaagaga ggcttagata caacaggaac caaaaaggat cttcttgaga 420
ggctttgcaa tgatgctaat aacgtttcca atgcaccagt caaatccagt aatgggacag 480
atgaagctga. agatgacaac aatggctttg aagaagaaaa gaaagaagag aaaatcgtaa 540
ccgcgacaaa gaagggtgca gcggtgctag atcagtggat tcctgatgag ataaagagtc 600
agtaccatgt tctacaaagg ggtgatgatg tttatgatgc tatcttaaat cagacaaatg 660
tcagggataa taataacaag ttctttgtcc tacaagtcct agagtcggat agtaaaaaga 720
catacatggt ttacactaga tggggaagag ttggtgtgaa aggacaaagt aagctagatg 780
ggccttatga ctcatgggat cgtgcgatag agatatttac caataagttc aatgacaaga 840
caaagaatta ttggtctgac agaaaggagt ttatcccaca tcccaagtcc tatacatggc 900
tcgaaatgga ttacggaaaa gaggaaaatg attcaccggt caataatgat attccgagtt 960
catcttccga agttaaacct gaacaatcaa aactagatac tcgggttgcc aagttcatct 1020
ctcttatatg taatgtcagc atgatggcac agcatatgat ggaaatagga tataacgcta 1080
acaaattgcc actcggcaag ataagcaagt ccacaatttc aaagggttat gaagtgctga 1140
agagaatatc ggaggtgatt gaccggtatg atagaacgag gcttgaggaa ctgagtggag 1200
agttctacac agtgatacct catgattttg gttttaagaa aatgagtcag tttgttatag 1260 acactcctca aaagttgaaa cagaaaattg aaatggttga agcattaggt gaaattgaac 1320
tcgcaacaaa gttgttgtcc gtcgacccgg gattgcagga tgatccttta tattatcact 1380
accagcaact taattgtggt ttgacgccag taggaaatga ttcagaggag ttctctatgg 1440
ttgctaatta catggagaac actcatgcaa agacgcattc gggatatacg gttgagattg 1500
cccaactatt tagagcttcg agagctgttg aagctgatcg attccaacag ttttcaagtt 1560
cgaagaacag gatgctactc tggcacggtt cacgtctcac taactgggct ggtattttat 1620
ctcaaggtct gcgaatagct cctcctgaag cgcctgtaac tggttacatg tttggaaaag 1680
gggtttactt tgcggatatg ttctccaaga gtgcgaacta ttgctatgcc aacactggcg 1740
ctaatgatgg cgttctgctc ctctgcgagg ttgctttggg agacatgaat gaacttctgt 1800
attcagatta taacgcggat aatctacccc cgggaaagct aagcacaaaa ggtgtgggga 1860
aaacagcacc aaacccatca gaggctcaaa cactagaaga cggtgttgtt gttccacttg 1920
gcaaaccagt ggaacgttca tgctccaagg ggatgttgtt gtacaacgaa tatatagtct 1980
acaatgtgga acaaatcaag atgcgttatg tgatccaagt caaattcaac tacaagcact 2040
aaaacttatg tatattagct tttgaacatc aactaattat ccaaaaatca gcgttttatt 2100
gtatttcttt caaactcctt catctctgat tttgcacggt tcactcg 2147
<210> 3 <211> 3211 <212> DNA <213> Artificial
<220>
<223> parpl codificando região 1 de Zea mays <220>
<221> caracteristicanuse
<222> (113)..(3022)
<223> abrir quadro de leitura
<400> 3
acctacctga atacgtcatc cctaagtgtt ccgcttcctc tgtcgtccgg cctccaactc 60
catcgaaggg gctagggaga ggagggaacc cgaaccacag caggccggcg caatggcggc 120
gccgccaaag gcgtggaagg cggagtatgc caagtctggg cgggcctcgt gcaagtcatg 180
ccggtcccct atcgccaagg accagctccg tcttggcaag atggttcagg cgtcacagtt 240
cgacggcttc atgccgatgt ggaaccatgc cagcgttgac gatgttgaag ggatagatgc 300
acttagatgg gatgatcaag agaagatacg aaactacgtt gggagtgcct cagctggtac 360
aagttctaca gctgctcctc ctgagaaatg tacaattgag attgctccat ctgcccgtac 420
ttcatgtaga cgatgcagtg aaaagattac aaaaggatcg gtccgtcttt cagctaagct 480
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cccgtctgca actgttgaga agttctcagg ctgggatact ttgtccgatg aggataagag 600 aaccatgctc gatcttgtta aaaaagatgt tggcaacaat gaacaaaata agggttccaa 660
gcgcaagaaa agtgaaaatg atattgatag ctacaaatcc gccaggttag atgaaagtac 720
atctgaaggt acagtgcgaa acaaagggca acttgtagac ccacgtggtt ccaatactag 780
ttcagctgat atccaactaa agcttaagga gcaaagtgac acactttgga agttaaagga 840
tggacttaag actcatgtat cggctgctga attaagggat atgcttgagg ctaatgggca 900
ggatacatca ggaccagaaa ggcacctatt ggatcgctgt gcggatggaa tgatatttgg 960
agcgctgggt ccttgcccag tctgtgctaa tggcatgtac tattataatg gtcagtacca 1020
atgcagtggt aatgtgtcag agtggtccaa gtgtacatac tctgccacag aacctgtccg 1080
cgttaagaag aagtggcaaa ttccacatgg aacaaagaat gattacctta tgaagtggtt 1140
caaatctcaa aaggttaaga aaccagagag ggttcttcca ccaatgtcac ctgagaaatc 1200
tggaagtaaa gcaactcaga gaacatcatt gctgtcttct aaagggttgg ataaattaag 1260
gttttctgtt gtaggacaat caaaagaagc agcaaatgag tggattgaga agctcaaact 1320
tgctggtgcc aacttctatg ccagggttgt caaagatatt gattgtttaa ttgcatgtgg 1380
tgagctcgac aatgaaaatg ctgaagtcag gaaagcaagg aggctgaaga taccaattgt 1440
aagggagggt tacattggag aatgtgttaa aaagaacaaa atgctgccat ttgatttgta 1500
taaactagag aatgccttag agtcctcaaa aggcagtact gtcactgtta aagttaaggg 1560
ccgaagtgct gttcatgagt cctctggttt gcaagatact gctcacattc ttgaagatgg 1620
gaaaagcata tacaatgcaa ccttaaacat gtctgacctg gcactaggtg tgaacagcta 1680
ctatgtactc cagatcattg aacaggatga tgggtctgag tgctacgtat ttcgtaagtg 1740
gggacgggtt gggagtgaga aaattggagg gcaaaaactg gaggagatgt caaaaactga 1800
ggcaatcaag gaattcaaaa gattatttct tgagaagact ggaaactcat gggaagcttg 1860
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tggtgttaag aaagcaccaa aacggaaaga tatcagtgaa atgaaaagtt ctcttgctcc 1980
tcaattgcta gaactcatga agatgctttt caatgtggag acatatagag ctgctatgat 2040
ggaatttgaa attaatatgt cagaaatgcc tcttgggaag ctaagcaagg aaaatattga 2100
gaaaggattt gaagcattaa ctgagataca gaatttattg aaggacaccg ctgatcaagc 2160
actggctgtt agagaaagct taattgttgc tgcgagcaat cgctttttca ctcttatccc 2220
ttctattcat cctcatatta tacgggatga ggatgatttg atgatcaaag cgaaaatgct 2280
tgaagctctg caggatattg aaattgcttc aaagatagtt ggcttcgata gcgacagtga 2340
tgaatctctt gatgataaat atatgaaact tcactgtgac atcaccccgc tggctcacga 2400
tagtgaagat tacaagttaa ttgagcagta tctcctcaac acacatgctc ctactcacaa 2460
ggactggtcg ctggaactgg aggaagtttt ttcacttgat cgagatggag aacttaataa 2520
gtactcaaga tataaaaata atctgcataa caagatgcta ttatggcacg gttcaaggtt 2580
gacgaatttt gtgggaattc ttagtcaagg gctaagaatt gcacctcctg aggcacctgt 2640 tactggctat atgttcggca aaggcctcta ctttgcagat ctagtaagca agagcgcaca 2700
atactgttat gtggatagga ataatcctgt aggtttgatg cttctttctg aggttgcttt 2760
aggagacatg tatgaactaa agaaagccac gtccatggac aaacctccaa gagggaagca 2820
ttcgaccaag ggattaggca aaaccgtgcc actggagtca gagtttgtga agtggaggga 2880
tgatgtcgta gttccctgcg gcaagccggt gccatcatca attaggagct ctgaactcat 2940
gtacaatgag tacatcgtct acaacacatc ccaggtgaag atgcagttct tgctgaaggt 3000
gcgtttccat cacaagaggt agctgggaga ctaggcaagt agagttggaa ggtagagaag 3060
cagagttagg cgatgcctct tttggtatta ttagtaagcc tggcatgtat ttatgggtgc 3120
tcgcgcttga tccattttgg taagtgttgc ttgggcatca gcgcgaatag caccaatcac 3180
acacttttac ctaatgacgt tttactgtat a 3211
<210> 4 <211> 3212 <212> DNA <213> Artificial
<220>
<223> parpl codificando região 2 de Zea mays <220>
<221> característica_misc
<222> (81)..(3020)
<223> abrir quadro de leitura
<400> 4
gcttcctctg tcgtccggcc tccaactcca tcgaaggggc tagggagagg agggaacccg 60
aaccacagca ggccggcgca atggcggcgc cgccaaaggc gtggaaggcg gagtatgcca 120
agtctgggcg ggcctcgtgc aagtcatgcc ggtcccctat cgccaaggac cagctccgtc 180
ttggcaagat ggttcaggcg tcacagttcg acggcttcat gccgatgtgg aaccatgcca 240
ggtgcatctt cagcaagaag aaccagataa aatccgttga cgatgttgaa gggatagatg 300
cacttagatg ggatgatcaa gagaagatac gaaactacgt tgggagtgcc tcagctggta 360
caagttctac agctgctcct cctgagaaat gtacaattga gattgctcca tctgcccgta 420
cttcatgtag acgatgcagt gaaaagatta caaaaggatc ggtccgtctt tcagctaagc 480
ttgagagtga aggtcccaag ggtataccat ggtatcatgc caactgtttc tttgaggtat 540
ccccgtctgc aactgttgag aagttctcag gctgggatac tttgtccgat gaggataaga 600
gaaccatgct cgatcttgtt aaaaaagatg ttggcaacaa tgaacaaaat aagggttcca 660
agcgcaagaa aagtgaaaat gatattgata gctacaaatc cgccaggtta gatgaaagta 720
catctgaagg tacagtgcga aacaaagggc aacttgtaga cccacgtggt tccaatacta 780
gttcagctga tatccaacta aagcttaagg agcaaagtga cacactttgg aagttaaagg 840
atggacttaa gactcatgta tcggctgctg aattaaggga tatgcttgag gctaatgggc 900 aggatacatc aggaccagaa aggcacctat tggatcgctg tgcggatgga atgatatttg 960 gagcgctggg tccttgccca gtctgtgcta atggcatgta ctattataat ggtcagtacc 1020 aatgcagtgg taatgtgtca gagtggtcca agtgtacata ctctgccaca gaacctgtcc 1080 gcgttaagaa gaagtggcaa attccacatg gaacaaagaa tgattacctt atgaagtggt 1140 tcaaatctca aaaggttaag aaaccagaga gggttcttcc accaatgtca cctgagaaat 1200 ctggaagtaa agcaactcag agaacatcat tgctgtcttc taaagggttg gataaattaa 1260 ggttttctgt tgtaggacaa tcaaaagaag cagcaaatga gtggattgag aagctcaaac 1320 ttgctggtgc caacttctat gccagggttg tcaaagatat tgattgttta attgcatgtg 1380 gtgagctcga caatgaaaat gctgaagtca ggaaagcaag gaggctgaag ataccaattg 1440 taagggaggg ttacattgga gaatgtgtta aaaagaacaa aatgctgcca tttgatttgt 1500 ataaactaga gaatgcctta gagtcctcaa aaggcagtac tgtcactgtt aaagttaagg 1560 gccgaagtgc tgttcatgag tcctctggtt tgcaagatac tgctcacatt cttgaagatg 1620 ggaaaagcat atacaatgca accttaaaca tgtctgacct ggcactaggt gtgaacagct 1680 actatgtact ccagatcatt gaacaggatg atgggtctga gtgctacgta tttcgtaagt 1740 ggggacgggt tgggagtgag aaaattggag ggcaaaaact ggaggagatg tcaaaaactg 1800 aggcaatcaa ggaattcaaa agattatttc ttgagaagac tggaaactca tgggaagctt 1860 gggaatgtaa aaccaatttt cggaagcagc ctgggagatt ttacccactt gatgttgatt 1920 atggtgttaa gaaagcacca aaacggaaag atatcagtga aatgaaaagt tctcttgctc 1980 ctcaattgct agaactcatg aagatgcttt tcaatgtgga gacatataga gctgctatga 2040 tggaatttga aattaatatg tcagaaatgc ctcttgggaa gctaagcaag gaaaatattg 2100 agaaaggatt tgaagcatta actgagatac agaatttatt gaaggacacc gctigatcaag 2160 cactggctgt tagagaaagc ttaattgttg ctgcgagcaa tcgctttttc actcttatcc 2220 cttctattca tcctcatatt atacgggatg aggatgattt gatgatcaaa gcgaaaatgc 2280 ttgaagctct gcaggatatt gaaattgctt caaagatagt tggcttcgat agcgacagtg 2340 atgaatctct tgatgataaa tatatgaaac ttcactgtga catcaccccg ctggctcacg 2400 atagtgaaga ttacaagtta attgagcagt atctcctcaa cacacatgct cctactcaca 2460 aggactggtc gctggaactg gaggaagttt tttcacttga tcgagatgga gaacttaata 2520 agtactcaag atataaaaat aatctgcata acaagatgct attatggcac ggttcaaggt 2580 tgacgaattt tgtgggaatt cttagtcaag ggctaagaat tgcacctcct gaggcacctg 2640 ttactggcta tatgttcggc aaaggcctct actttgcaga tctagtaagc aagagcgcac 2700 aatactgtta tgtggatagg aataatcctg taggtttgat gcttctttct gaggttgctt 2760 taggagacat gtatgaacta aagaaagcca cgtccatgga caaacctcca agagggaagc 2820 attcgaccaa gggattaggc aaaaccgtgc cactggagtc agagtttgtg aagtggaggg 2880 atgatgtcgt agttccctgc ggcaagccgg tgccatcatc aattaggagc tctgaactca 2940 tgtacaatga gtacatcgtc tacaacacat cccaggtgaa gatgcagttc ttgctgaagg 3000
tgcgtttcca tcacaagagg tagctgggag actaggcaag tagagttgga aggtagagaa 3060
gcagagttag gcgatgcctc ttttggtatt attagtaagc ctggcatgta tttatgggtg 3120
ctcgcgcttg atccattttg gtaagtgttg cttgggcatc agcgcgaata gcaccaatca 3180
cacactttta cctaatgacg ttttactgta ta 3212
<210> 5 <211> 2295 <212> DNA <213> Artificial
<220>
<223> parp2 codificando região Zea mays <220>
<221> característica_misc
<222> (107) .. (2068)
<223> abrir quadro de leitura
<400> 5
tgacctgttc catcccgcca gcccttccgc tcccacgacc caaccccact gcccggagcc 60
cccgagcctt ctcgaatctt gcgagaaccc caggggcgag gagcagatgt cggcgaggct 120
acgggtggcg gacgtccgcg cggagcttca gcgccgcggc ctcgatgtat ccggcaccaa 180
gcctgctctc gtgcggaggc tggacgccgc aatttgcgag gcggagaagg ccgtggtggc 240
tgctgcgcca accagtgtgg caaatgggta tgacgtagcc gtagatggca aaaggaactg 3 00
cgggaataat aagaggaaaa ggtccgggga tgggggtgaa gagggaaacg gcgatacgtg 360
tacagatgtg acaaaactag agggcatgag ctatcgtgag ctgcagggat tggccaaggc 420
acgtggagtt gcggcaaatg ggggcaagaa agatgttatc cagaggttgc tctcggcgac 480
tgctggtcct gctgcagttg cagatggtgg tcctctgggc gccaaggaag tcataaaagg 540
tggtgatgag gaggttgagg tgaaaaagga gaagatggtt actgccacga agaagggagc 600
tgcagtgctg gatcagcaca ttcccgatca cataaaagtg aactatcatg tcttgcaagt 660
gggcgatgaa atctatgatg ccaccttgaa ccagactaat gttggagaca acaacaataa 720
gttctatatc attcaagttt tagaatctga tgctggtgga agctttatgg tttacaatag 780
atggggaaga gttggggtac gaggtcaaga taaactacat ggtccctccc caacacgaga 840
ccaagcaata tatgaatttg aggggaagtt ccacaacaaa accaataatc attggtctga 900
tcgcaagaac ttcaaatgtt atgcaaagaa atacacttgg cttgaaatgg attatggtga 960
aactgagaaa gaaatagaga aaggttccat tactgatcag ataaaagaga caaaacttga 1020
aactagaatt gcgcagttca tatccctgat ctgcaatatt agcatgatga agcaaagaat 1080
ggtggaaata ggttataatg ctgaaaagct tccccttgga aagctaagga aagctacaat 1140
acttaagggt tatcatgttt tgaaaaggat atccgatgtt atttcaaagg cggacaggag 1200 acatcttgag caattgactg gggaattcta caccgtgatt cctcatgact ttggtttcag 1260
aaagatgcgt gaatttatta tcgatactcc tcagaaacta aaagctaagc tggagatggt 1320
tgaagccctt ggtgagattg aaattgcaac taaacttttg gaggatgatt caagtgacca 13 80
ggatgatccg ttgtatgctc gatacaagca acttcattgt gatttcacac ctcttgaagc 1440
tgattcagat gagtactcta tgataaaatc atatttgaga aatacacatg gaaaaacaca 1500
ctctggttat acggtggaca tagtgcaaat atttaaggtt tcaaggcatg gtgaaacaga 1560
gcgatttcaa aaatttgcta gtacaagaaa taggatgctt ttgtggcatg gttctcggtt 1620
gagcaactgg gctgggatcc tttctcaggg tctgcgaatc gctcctcctg aagcacctgt 1680
tactggttac atgtttggca agggtgttta ctttgctgac atgttttcaa agagtgcaaa 1740
ctattgctac gcctctgaag catgtagatc tggagtactg cttttatgtg aggttgcatt 1800
gggcgatatg aatgagctac tgaatgcaga ttacgatgct aataacctgc ccaaaggaaa 1860
attaagatcc aagggagttg gtcaaacagc acctaacatg gtcgagtcta aggtcgctga 1920
cgatggtgtt gttgttcccc ttggcgaacc caaacaggaa ccttccaaaa ggggtggctt 1980
gctttataat gagtacatag tgtacaacgt agaccagata agaatgcggt atgtcttaca 2040
tgttaacttc aatttcaaga gacggtagat gttgcaaaga gctgaaactg ttgctgagat 2100
cttagcagaa catatgtgga cttatagcac caggtgccct cagcctcatt ttctgagcaa 2160
atttggtagc ctttgcattt cgattttggt ttcagcttct agccccattg atgattgata 2220
ctgagtgtat atatgaacca ttgatatcca ccttccatgt acttaagttt ttttaacatg 2280
tcccatgcat aataa 2295
<210> 6 <211> 1384 <212> DNA <213> Artificial
<220>
<223> parp2 codificando parcialmente a região de cotton <220>
<221> característica_misc
<222> (3) . . (460)
<223> Abrir quadro de leitura
<400> 6
gagaagatbg ttacagcgac gaggaagggg tggctgttct ggatcaaggg atcccagatg 60
acataaaggc tcattatcat gttctacaaa agggtgatga tatctatgat gccatgttaa 120
atcagacgaa tgttgggcaa aacaataaca aattctttgt gatccagctt ctagaatctg 180
atgactcgaa gacatacatg gttcataaca gatggggtag agttggtgtg aagggtcaaa 240
ttaagttaca tggccccttt acttcacgac aagccgcaat tgatgagttt caaaccaaat 300
tctttaacaa gaccaaaaac tattggtaca acagaaaaga ctttgtttgt cacccaaagt 360
gctacacctt gctggagatg gactatgatg aaaaagaaaa ggaatctgat gtcaaaagaa 420 aggctaactc ttccattggt gctcaattgc agtttatctc tattatatgc aatatcagca acaatgctga caagttgcct cttggtaagc atgtcttaaa gaaaattgct gatgtgattg taagttcgga attttacacc gtgattccac ttgtcatcga cacacctcag aagttgaaaa aaatagaggt cgcatcaaaa ttattaatgg attatcggta ccaacagctt cactgtgaac tcgctttgat tgtaaagtat attcagaata ttgatgttgt tcaaatattc aaggtgacaa tttctggaac aaaaaataga atgctgttgt gcattctgtc ccaaggtttg cgcattgctc ttgggaaggg ggtttacttt gctgatatgt attctgcctt cacaacaggg gtgttgcttc agcttctaca agctaaaagc gatgctgata gtgttggtgc aactgcaccg gatccttctg ttcc
<210> 7 <211> 1647 <212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana <400> 7
atggagaatc gcgaagatct taactcaatt tcgtcgctgt attggccgcc gcgtgtggtg tctcacagcc aagttgactc aggagaggtt tccttatctt .tctctactct cgagccatct gaattgattg atgagaaaga atcaaagaga agcttacttc tacagtttcc atctctgtta gttagtggaa tcaaaaccgg tcttcgtttg ctcagccagg agttgattgg agctcttctt gataatagag gtgcaaaaca ccttccagtc tatataagtt atagtcaaag tcaagaaagc aggttttgct cctgcgtgcc tattggtatt cctgatgctg atttctggag caagtctgac tttgggttaa ttgaagatca acctgacaat
gggagacaaa gcttgaacaa cgtgttgcta 480
tgatgaagca acaaatgatg gaaataggat 540
taagcaaatc cacaatttta aaggggtatg 600
accagtcaaa caggagcaag cttgagcaat 660
atgattttgg atttagaaaa atgcgtgatt 72 0
agaagttgga aatggttgaa gccctgggag 780
atgacattac gatggaggaa gatcctttat 840
tgtttcctct tgacaatgat actgaggagt 900
ctcatgctca gacacattca aattatacag 960
gagacggtga aagtgaacgc tttaaaaagt 1020
ggcatggttc tcggcttact aactggactg 1080
cacctgaagc gcctgccacg ggttatatgt 1140
tctccaaaag tgcaaattat tgctatacta 1200
tatgtgaggt tgccctgggt gacatggctg 1260
agctgccgga tgggaagttg agcacaaaag 1320
aagcccagtc acttgatgat ggtgttgttg 1380
1384
cttccgtacc ttccacttgt aattcgttcg 60
gaggcgttaa aggcaatgtc tgaaggacca 120
ctacggcaag ctattttcga tatgagacga 180
gcttctaatg gctacgcatt tctctttgac 240
tggttcgatg agattatccc agcattggcg 300
gaagtgcatt tccaaaatgc tgataatatt 360
ttaaattccc aacaagctgg cattgttttc 420
gcatgctctt tcttttgttt gtttccggat 480
atcaactttg atcatttgtt tgcaagcctt 540
aagataagat gtattatgca ttactttgaa 600
gtttcatttg aacgcaagat taccgctgct 660
gtttctcttt gtgcatttaa ggttcactct 720
gctctcgaag tggactttgc aaacaagtat 780 ctcggaggtg gttccctaag tagagggtgc cctgaattaa tcgctggcat gcttttcttg atagttggtg cggaaagatt ttcatgttac ggtgagtaca ttgacaaaaa ggcaatggat gcaattgatg cattatgtac accgaagatg gaaattaata aggcactatg tggcttttta atattcatgg atgaaggaga taatgaaatt cttctgcgta cagaaactac tgcgtcacac agagaaaagc ctgctaacaa tcttatcaga gatcatgaag atgatggtgt cgcgacaggg ccagagctaa aggctacgat acaatggctt tcatattaca cctttggagt agaggcactc ctttcccata aatggactgt tggagatctg aggctctaca agcaaaccag tgttggcttc accaacaaag ctatccagcc gccttga
<210> 8 <211> 598 <212> DNA
<213> Solanum tuberosum <400> 8
gcaatggaga atagagaaga cgtgaagtca tcatcttctc ttttctggcc gccgctagtt cctcattaca gcaatgttaa ctccggccaa aattcccttt cactacctga ttcttcaatt ttatttgatg atttaattcc tagggatgaa aaaatggcgg atttgctatt gcggttgcct gatggtggaa ttgttaaagg agtcaacact ggcattgttt tcctcagtca ggaattagtc tattccctac caatgataga ggtatctgta attgaagtgc attcttcact attttgagag
<210> 9
<211> 1530
<212> DNA
<213> Oryza sativa
gtgcaggaag agatacgctt catgattaac 840
cctcggatgg atgacaatga agctatagaa 900
acagggtatg catcttcgtt tcggtttgct 960
cctttcaaaa ggcgaagaac cagaattgtt 1020
agacacttta aagatatatg tcttttaagg 1080
aattgtagca aggcttggga gcaccagaat 1140
cagcttgtcc gaaacggcag agattctggt 1200
cgaactccac taaatgatgt tgagatgaat 1260
gatttttatg tggaaggagt tgataacgag 1320
aattggggat gtggtgtttt tggaggagac 1380
gctgcttccc agactcgaag accatttata 1440
cgaaacctag atcaggtgac gaagtggatt 1500
tggaacatga tgttagaata ttctgctcaa 1560
ttttcttggc tacttccatc tctagctacc 1620
1647
atccttccct ttttgccggt gtgtctccga 60
gttgaagcac tgaaagccct ctctgaaggc 120
gtcctcttcc tcgcaatctc cgacattcgg 180
tcctcttctg cttcagacgg attttctctc 240
gctgttaaat ggttcaaaga agtggtgccg 300
tccttattgg aggctcacta tgagaaggct 3 60
ggtcttcgct tattggaatc acaacagcct 420
ggtgctcttc ttgcatgttc cttcttttgc 480
tgatcagtat gacgagaaat ttgaaaataa 540
gattggctca ttgatacctg cgggctac 598
<400> 9
atggaggcgc gcggcgacct gcgctcgatc ctgccctacc tccccgtcgt gctccgcggc
60 ggcgcgctct tctggccgcc ggcggcgcag gaggcgctca aggcgctggc gctgggcccc 120 gacgtgagcc gcgtctcctc cggcgacgtc ctcgccgacg ccctcaccga cctccgcctc 180
gcgctcaacc tcgacccact cccgcgccgc gccgccgagg gcttcgcgct cttcttcgac 240
gacctcctgt cgcgggcgca ggcgcgggac tggttcgacc acgtcgcccc ctccctcgcc 300 cgcctcctcc tccgcctccc cacgctgctc gagggccact accgcgccgc cggcgacgag 360 gctcgcgggc tccgcatcct gagctcgcag gatgccgggc tcgtgctcct cagccaggag 420
ctcgccgccg cgctgctcgc ctgcgcgctc ttctgcctgt tccccaccgc cgatagggcc 480
gaggcgtgcc tcccggcgat caatttcgat agcctatttg cggcactgtg ttataattcg 540
aggcaaagcc aggagcagaa ggtgaggtgc cttgttcact attttgacag ggtgaccgct 600
tctacaccta ctggttccgt ttcgtttgag cgtaaggttc ttcctcgccg tcctgaatct 660
gatggcatta cgtaccctga catggatact tggatgaaat ctggtgttcc cctttgcaca 720
ttccgggtat tttcctcagg cttgatagaa gatgaggaac aagaagccct tgaagttgac 780
tttgcaaata gatatttggg aggtggcgca ctttccagag gctgcgtgca ggaagaaatc 840
cggttcatga taaacccaga attgatcgtg ggcatgctct tcatggtttc aatggaagat 900
aatgaagcta tagaaattgt tggtgcagaa aggttctcac agtacatggg gtatggttcc 960
tcattccgtt ttactggtga ctacttagat agcaaaccct ttgatgcgat gggtagacgg 1020
aaaactagga tagtggcaat tgatgctttg gactgtccaa ctaggttaca gtttgaatct 1080
agtggtcttc taagggaagt gaacaaggct ttttgtggat ttttggatca atcaaatcat 1140
cagctctgtg caaagcttgt ccaggattta aatacaaagg ataactgtcc aagtgtcatt 12 00
cctgatgaat gcataggagt ttcaactgga aactggggtt gcggggcttt tggtggaaac 1260
cctgaaatca agagcatgat tcaatggatt gctgcatcac aggcactccg atcttttatt 1320
aactactaca ct-tttgagtc cgaatcactg aaaagattag aagaggtgac ccagtggata 1380
ttgcgccata ggtggacggt tggcgagttg tgggacatgc ttgtggagta ttcatcccag 1440
aggctaagag gagacaccaa tgagggcttt ttaacatggc tacttcccaa ggacatcccc 1500
aatggtgatg.tagattacat gtgtgaatag 1530
<210> 10 <211> 603 <212> DNA <213> Zea mays
<400> 10
tagggctgtg tgcaggagga aatccgcttc atgataaacc ccgaattgat tgtgggtatg 60
ctattcttgt cttgtatgga agataacgag gctatagaaa tctttggtgc agaacggttc 120
tcacagtata tgggttatgg ttcctccttt cgctttgttg gtgactattt agataccaaa 180
ccctttgatt cgatgggcag acggagaact aggattgtgg ctatcgatgc tttggactgt 240
ccagctaggt tacactatga atctggctgt ctcctaaggg aagtgaacaa ggcattttgt 300 ggatttttcg atcaatcgaa acaccatctc tatgcgaagc ttttccagga tttgcacaac 360
aaggatgact tttcaagcat caattccagt gagtacgtag gagtttcaac aggaaactgg 420
ggttgtggtg cttttggtgg aaaccctgaa atcaagagca tgattcagtg gattgctgca 480
tcacaggctc ttcgcccttt tgttaattac tacacttttg agaacgtgtc tctgcaaaga 540
ttagaggagg tgatccagtg gatacggctt catggctgga ctgtcggcga gctgtggaac 600
ata 603
<210> 11 <211> 651 <212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae <400> 11
atgaagactt taattgttgt tgatatgcaa aatgatttta tttcaccttt aggttccttg 60
actgttccaa aaggtgagga attaatcaat cctatctcgg atttgatgca agatgctgat 120
agagactggc acaggattgt ggtcaccaga gattggcacc cttccagaca tatttcgttc 180
gcaaagaacc ataaagataa agaaccctat tcaacataca cctaccactc tccaaggcca 240
ggcgatgatt ccacgcaaga gggtattttg tggcccgtac actgtgtgaa aaacacctgg 3 00
ggtagtcaat tggttgacca aataatggac caagtggtca ctaagcatat taagattgtc 360
gacaagggtt tcttgactga ccgtgaatac tactccgcct tccacgacat ctggaacttc 420
cataagaccg acatgaacaa gtacttagaa aagcatcata cagacgaggt ttacattgtc 480
ggtgtagctt tggagtattg tgtcaaagcc accgccattt ccgctgcaga actaggttat 540
aagaccactg tcctgctgga ttacacaaga cccatcagcg atgatcccga agtcatcaat 600
aaggttaagg aagagttgaa ggcccacaac atcaatgtcg tggataaata a 651
<210> 12. <211> 1290 <212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae <400> 12
ttaggtccat ctgtgcgctt cgttatcacc actccaactt cgttcagtat atcccaattc 60
ctctttcact ctcttcacag tggcaggatc tcccatattt ttacctaagt tatcagaaat 120
tttgatagcg tgattaccat ttacttctaa tagtttgata acgatgttta acggctcact 180
tttaacctgg ggttctgact tcttacgaaa atcattagta aagtttgtgc caataccgaa 240
tgtggctagc attccattct ctttagctgc atgggagtaa gttattgcct tttcgacgtt 300
caaagaatcg gaataacaga taatcttcga gaatttaggc aatttcaaca cgtcatggta 3 60
atggtgggaa atctttttgg tatactcaac tgggtctcca gaatcttgtc taacaccgac 420
gtaagcatca gaatatggtg gacggaatga ttttaaaaag tcatcagttc caaaagtatc 480
cgttaatgct aaaccagcat tttttgcacc aaaagtattg atccaacaat ccattgcatt 540
tttattggca tgcaaataat cttca.ctaat agaagcgact cccataaccc actcgtgagc 600 cacagtaccg attggcttga ctccatattt taatagcgat ttgtttctgt ctgggttacc tagatcttga gccttcagag atctacgacg attatcaaac aaagtttccg ccttcttctc gtcgatgtca acaaatttaa aatacgcttc aaggatagta tccttccaac taccactgac gccctcgatt tcttctgaag tgaaggaaat actgctaata tacttaatat atgccgatgg aatttcctct tctgtgaacc tcaaatttcc aatggcttcc ttattgaagg tcaattggga aacatctgga aaattagtga agacagcagc caaaagagac tttatcactg gttctgacat
<210> 13 <211> 1206 <212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae <400> 13
atggatccca caagagctcc ggatttcaaa ccacccgacc cggaatctaa aattcccaaa gatgcgaatt cctctataga tgcacctttt catcatcatc accatcatca cagtcgtaaa ccattgaacc aagacgactt tcaaccactt gcggatttta gatccaagga gagatacggt ggtgttcaga aatatcagat tgctgattta gcaagaacct tggaagacta cgaattcccc ccaaataaac ,tgccgttagt aatagtagca catctaagaa tgtttgaaat ggctttagat ataggtggat attactcccc tgttagtgat taccatagag tacgtatgtg tgaattggcc gatgcatggg agtcattgca accttcatac aatcacgaaa tcaatattaa gagaggtggt gtgaaaataa tgttgctggc tggtggtgac tgggcggacg ccgatttaca tcacattctc actggttctg atgtaaggtc ttttttgtta •aatattctta tcatcaagca actcatctat
cttggcaaat aaaatatttg atgtgcctaa 660
gttcacagct ttcatgattc cttgcataat 720
tcttgtacca aattcactga atctaatacc 780
agcttgttct aattggtttt cgtagtccca 840
tgatattagg gacagtaagg ggatctcata 900
taaaattttc aatttgtagt gggtgggctt 960
ctgctcttca gggtgtagtt tgtaattaga 1020
caaatatggg atttcctgtt ttaagtattc 1080
caaatacgaa aattgctctt tcaaccaatt 1140
cgacctgttg gtatatttat aagtaactgt 1200
atgcatcgta atcttgtaca tgtctgtgtc 1260
1290
ccgccatctg cagacgagga attgattcct 60
tctattccaa ttattccata cgtcttagcc 120
aatattaaga ggaagaaaaa gcatcctaag 180
gaaggcaatg ataaaaaaca tcagcatatt 240
tccgcagaag tgtcttccga agatgatgac 3 00
tcagattcaa ccacagaatc agaaactaga 360
gaagaagttc cacatggaat cgttcgtcaa 420
tcacacagat tatcgaaaaa attactggat 480
tgtgggtctt tttcaccaat cacctacttg 540
gcaatctctg aacaaacaag gtttgaagtc 600
aactatcaaa agcaaggctt ggccccatcc 660
tgcgaaagaa cctcatcttg gttgatggtg 720
acaagaactg ccaaggtctt ggatcatttc 780
gtagctactg ttactggaga aaaaattggt 840
ctaatagagt caatgggtga accaaacgtt 900
ggtaattacg gttgtttgat tgtcgaacgt 960
tcccatgata ttatgtatga acatagaagg 1020
aatgatattt cttccacgaa agttcgtcta 1080 tttatcagac gcgccatgtc tgtacaatat ttgttaccta attcggtcat caggtatatc 1140
caagaacata gactatatgt ggaccaaacc gaacctgtta agcaagttct tggaaacaaa 1200
gaatga 1206
<210> 14 <211> 1188 <212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae <400> 14
atggatccca ccaaagcacc cgattttaaa ccgccacagc caaatgaaga actacaaeca 60
ccgccagatc caacacatac gataccaaaa tctggaccca tagttccata tgttttagct 120
gattataatt cttcgatcga tgctcctttc aatctcgaca tttacaaaac cctgtcgtca 180
aggaaaaaaa acgccaactc aagcaaccga atggaccata ttccattaaa tactagtgac 240
ttccagccac tatctcggga tgtatcatcg gaggaggaaa gtgaagggca atcgaatgga 300
attgacgcta ctctacagga tgttacgatg actgggaatt tgggggtact gaagagccaa 360
attgctgatt tggaagaagt tcctcacaca attgtaagac aagccagaac tattgaagat 420
tacgaatttc ctgtacacag attgacgaaa aagttacaag atcctgaaaa actgcctctg 480
atcatcgttg cttgtggatc attttctccc ataacatacc tacatttgag aatgtttgaa 540
atggctttag atgatatcaa tgagcaaacg cgttttgaag tggttggtgg ttatttttct 600
ccagtaagtg ataactatca aaagcgaggg ttagccccag cttatcatcg tgtccgcatg 660
tgcgaattag catgcgagcg gacatcatct tggttaatgg ttgatgcctg ggaatcttta 720
caatcaagtt atacaaggac agcaaaagtc ttggaccatt tcaatcatga aataaatatc 780
aagagaggtg gaatcatgac tgtagatggt gaaaaaatgg gcgtaaaaat catgttattg 840
gcaggcggtg atcttatcga atccatgggc gagcctcatg tgtgggctga ttcagacctg 900
caccatattt tgggtaatta tggatgtttg atcgtggaaa ggactggttc tgatgttagg 960
tccttcttgc tttcccatga tatcatgtat gaacacagaa gaaatatcct tattatcaaa 1020
caacttattt acaatgatat ttcctctacg aaagtgcggc ttttcatcag acgtggaatg 1080
tcagttcaat atcttcttcc aaactctgtc atccgttaca tccaagagta taatctatac 1140
attaatcaaa gtgaaccggt caagcaggtc ttggatagca aagagtga 1188
<210> 15 <211> 2145 <212> DNA
<213> Saccharomyces cerevisiae <400> 15
atgtcacatc ttatcacttt agctacatgc aacttgaatc aatgggccct agattttgaa 60
ggtaatagag accgtatcct acagtccatt aagattgcca aagagagggg tgccaggtta 120
cgtgtcggcc cagaactgga aataactggc tacggatgtt tagatcattt tttagaaaat 180 gacgtttgcc ttcattcatg ggaaatgtat gctcaaatca ttaagaataa agaaacccat 240
ggattaatac ttgacattgg tatgcccgtt ctacacaaga atgttcgtta taattgtcgt 300
ttgttatcct tggatggtga gatattgttc ataagaccta agatttggtt agctaatgat 360
ggtaactata gggaaatgag atttttcaca ccttggatga aacctggcgt ggtggaggac 420
tttatccttc cacctgagat tcagaaagtt accggccaga gacttgtgcc atttggggac 480
gctgtgataa attcattgga tacatgcatt ggtacagaaa cttgtgaaga attgtttaca 540
cctcaatccc cccacatcgc catgtcttta gatggtgtgg aaatcatgac aaactcatct 600
ggttctcatc atgaactgcg taagttaaat aaaaggttag acctaatttt aaatgccact 660
aaacgttgtg gtggtgttta cttgtatgca aatcaaagag gttgtgatgg tgacagatta 720
tattatgatg gctgtgcact aattgccatc aatggtacaa ttgtagccca aggttcacaa 780
ttttcgctag atgatgtgga agtagttact gctactgtgg acctagaaga ggtgaggagt 840
tatcgtgcag ctgtcatgtc tcgtggccta caagcctcct tggcagaaat aaagttcaag 900
cgtattgata ttcctgtaga attggcttta atgacctcca gatttgatcc tacagtgtgt 960
ccaacaaaag tccgcgagcc tttctatcac tctcctgagg aagaaattgc actgggacct 1020
gcttgctgga tgtgggatta tttaagacgt tgtaacggaa cagggttttt ccttccctta 1080
tctgggggca ttgactcttg tgcaactgca atgattgtcc actctatgtg ccgtttagtg 1140
accgacgctg ctcaaaatgg aaatgagcaa gttatcaaag acgttcgtaa gataãcacgt 1200
agcggcgatg attggattcc agacagtcca caggatctag cctcaaaaat atttcactcc 1260
tgtttcatgg gtacggaaaa ttcatccaag gagacaagaa acagagcaaa ggacctttcc 1320
aatgcaattg gatcttacca cgtggattta aagatggact cattggtatc cagtgtggtg 1380
tccttattcg aagtagccac tggcaaaaaa ccaatataca aaatatttgg gggatctcaa 1440
atcgagaact tggctttaca aaacatccag gcgcgtctaa gaatggttct ttcttatctt 1500
tttgcgcaac tgttgccgtg ggttcgtggt atcccaaact cgggtggatt gttagtactt 1560
ggtagcgcaa atgttgatga gtgcttacgt gggtatctaa caaaatatga ctgctcctcc 1620
gcagatatca .accctattgg gggtatttca aaaactgact tgaaaagatt cattgcctac 1680
gcatcaaaac aatataacat gccaatcttg aatgactttt taaacgctac accaactgca 1740
gaattagaac ctatgactaa agattacgtt caatcggatg agatagatat ggggatgacg 1800
tatgaagaat tgggcgtgtt tggttaccta agaaaggttg aaaaatgtgg tccttattct 1860
atgttcttaa aacttcttca tcaatggtcc ccaaagttaa cacctcgtca aatatctgaa 1920
aaggtgaaaa gatttttctt cttctatgcc atcaacagac acaagcaaac tgttttaact 1980
cctagttatc atgctgaaca gtattcacca gaagacaaca gatttgactt acgtcctttc 2040
ttaatcaacc caagatttcc atgggcttca agaaaaattg atgaagttgt cgagcagtgt 2100
gaagcacata aaggctcaac gcttgacatt atgtctattg attag 2145 <210> 16 <211> 597 <212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 16
atggcttcct catcaacgag aaagtacgag acacgaaagc gagatccaaa ctctaaaatc 60
gcagctcttc tcgttatcga catgcagaat cacttctcct ccatggccaa acccatcctc 120
aacaacgttc tcaccaccat cgacatctgc cgacgcgcct cagtccccgt attctttacg 180
cgtcacaacc acaaatcccc gaccgaccac ggcatgctcg gcgagtggtg taacggcgat 240
gtaatccttg acggaaccac cgattctgaa atcatccagg agatacaagg ccaagtaacc 300
ggaccagacg agatggtgga gaagaacacg tacagtgcgt ttaacaaaac ccgcctccag 3 60
gaaaacctgg aaaagatcgg agtaaaggag gtgatcgtga tcggagtgat gacgaacttg 420
tgctgtgaga caacggcgcg tgaagcgttt attaagggtt ttagggtttt tttctcgacg 480
gacgcgactg cgacgtttaa tgaggagctt cacgaggcta cgctaatgaa tctcgctttt 540
ggcttcgctt atctcgtcga ttgcgataaa ctccggcgaa gtctactcgg taactaa 597
<210> 17 <211> 597 <212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana <400> 17
atggcttctt catcatcgag aacgtacgag acacgaaagc gagagccaaa tcctaaaatc 60
gcagctcttc tcgtcatcga tatgcagaat cacttctact ctatggctga accaatcctc 120
caaaacgctc tcaccaccat cgacatctgc cgacgcgctt caatccccgt attcttcacg 180
cgccacaacc acaaatcccc aaccgaccac ggcatgctcg gagagtggtg gaacggcgat 240
ctaatcctcg acggaaccac tgattccgaa atcatcccgg aaatcaatcg ccaggtcacc 300
ggaccagacg aaatcgtgga gaagagcacg tacagtgcgt ttaacaacac gcaccttcag 360
gagaagctgg acaagatcgg agtgaaggag gtgatcgtta tcggagtgat gacgaaccta 420
tgctgtgaga cgacggcgcg tgaagcgttt gtaaaggggt ttagggtttt tttctcgacg 480
gacgcgactg cgacggttaa tgaagagctt cacgaggcta ctctaatgaa tctcgcgtat 540
ggctttgctt atctcgtcga ttgcgataga ctccggcgag gtctactcag tagttaa 597
<210> 18 <211> 591 <212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana <400> 18
atggccgaga gatggaggaa cacggctcta ctcgtcatcg acatgcagaa cgatttcata 60
gaggaaggtg ctgtgacgca agtgaaagga ggaaaatcta tagttcctaa tgttatcaga 120 gtcgtcgaac tcgcgaggca gcgtggtatt ctcgtaattt gggttgttcg agaacatgat 180 cgtcaaggaa gagatgttga attattcagg cgcciataact acagttc.tga gaaagtcggg 240 ccagttatta aaggcaccgt aggagcagaa ttggttgatg gattgatgat caacgaagaa 3 00
gatgactata agattgtgaa aactcgtttc agtgctttct ttagtaccaa tcttcattcc 360
ttcttgcaaa cttcaggggt taccaagtta gtgattgctg gtgtgcaaac gccgaactgt 420
atccggcaaa cggtgtttga tgcagtggcg ctggattatc ccaatgtgac tgttattaca 480
gatgccacag ctgctgcaac accagagatc catactgcga atattcttga catgaagaat 540
attggagtca agactcctac attacacgag tggtccgaag aacttgcttg a 591
<210> 19
<211> 1680
<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
<400> 19
atggagaaga aagaaaatgg tctcgatgga aagcaatcgg gtcgggtcat taacggaccc 60 actaacccga tggtcacacc tctgctcaac gatctttacc aattcaccat ggcttatgct 120 tattggaaag ctggcaaaca atctgagcga tctgtgtttg atctgtattt tcgtaagaat 180 ccttttggtg gagaatacac tatctttgct ggtttagaag aatgcatcaa atttctcgct 240 aatttcaatt tgactgatga agagatcgat ttcgttcgtg attcgttacc tggatgtgag 300 gaagctttct gtgattatct tcgagggctt gattgttctg acattgaagt gtatgccatt 360 tcggaaggat cagttgtttt tcctaaagtt cctttactca gaatcgaagg tcctgttgct 420 gtggtgcaat tgttggaaac tccattcctc aatctcatca attacgcatc tttggttgct 480 acaaatgcag caagacatcg gtttgttgca ggaaaatcta agcttctgct tgagtttggt 540 gctagaagag ctcagggacc cgatggtgca ataagcgcat caaagtattg ctaccttgga 600 ggttttgatg caacaagtaa tgttgcagcg ggaaaactgt ttgggatacc cctccgtggt 660 actcattccc atgcttttgt tagctcattc atgagccttg atgaaattgt tgacaaagtg 720 cttcgaagtt ctgatgggaa aagcacttgt aaggatttta tatgtttggt ccaaacttgc 780 ctaacaaaga ttcagaattc atcttcatta caaggaattt tttccgagac aaatcaaagc 840 gagcttgcag ,cgttcatttc atatgcactg gcattcccaa actcctttct cgctcttgta 900 gacacttatg atgtgatgaa gagtggtatt ccaaacttct gtgctgttgc tctagcactt 960 aatgaattgg gatacaaagc agtaggcatt agactggatt caggtgactt agcctatctt 1020 tctactgagg tcaggaaatt cttttgtgcc atagagagag acctcaaagt tcctgatttc 1080 gggaagatga tcgtcactgc tagtaacgat ctaaacgaag agacagtcga tgctctaaat 1140 aaacagggtc atgaagtaga tgcatttgga attggaacca acttagtgac ttgctatgcg 1200 caagctgcgt taggttgtgt tttcaaactt gtggaaataa acaatcagcc tcggatcaaa 1260 ctttctgaag atgttactaa ggtatcgatt ccatgtaaaa agcgtactta cagattgttc 1320 ggaaaagagg gttaccctct tgttgatata atgactggag agaacgaacc acctccaaag 1380 gtcggtgaaa ggttactttg ccgtcatcca ttcaatgaat caaaaagggc ttatgtggtt 1440 ccacaacgcg ttgaagagct tctgaaatgt tattggcgtg gcaatgcaga tgaagctagg 1500
gaagagctag agccattgaa agagctaaga aatcgttgca tcaaacagct cgaaaatatg 1560
cgacccgatc atatgagaag attaaaccct actccttata aggttagtgt cagcgccaag 1620
ttgtatgact tcatccactt cctctggctc aacgaagctc ctgtcggtga actgcattga 1680
<210> 20 <211> 1674 <212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana <400> 20
atggagccga aagagaacgg ctcagaattg ggtcagaaga tcattgacgg accaacgaat 60
ccaatggtca cacctttact caatgatctt tatcaattca ccatggctta tgcttattgg 120
aaagctggca aacacaacga acgatccgtt ttcgatctgt attttcgtaa gaacccattt 180
ggtggtgagt acactgtgtt tgctggatta gaagagtgtg ttaagttctt agccaatttc 240
aaattgactg atgaagaaat cgatttcgtt caagagtgtt tgcctggatc tgaggaagct 300
ttttgtgatt atcttagagg gcttgattgt tctgatgttg aagtttatgc aattccggaa 360
ggatcagttg tttttcctaa agtacctctc atgagagttg aaggacctgt tggtgttgtt 420
caattgttgg aaactccatt cctcaatctt gtcaattttg catctttggt agctactaac 480
gcagctaggc atcgctttgt tgccggaaaa tctaagagtc tactcgagtt tggtgctcga 540
agggctcagg gtccggatgg tgcaataagc gcatcaaaat attgctacct tggaggtttt 600
gatgcaacaa gtaatgtagc agctggaaaa ctttttggga ttcctcttcg tggaacacac 660
tctcatgctt atgttagctc attcatgagt actgatgaga ttgttgacaa agtacttcgt 720
agtgctgatg ggaaaaccac gtgcgaggat tttgttagtc atgttcagac atggttaaaa 780
aagattcagt attcaccatc tctaagtggc attttctctg agacaaatca aagcgagcta 840
gcagctttca cctcatatgc actggcattc cccaaaactt ttcttgccct cgtagataca 900
tacgatgtga tgaagagtgg aatccctaac ttctgtgcag ttgctttagc actcaatgac 960
tttggatata aagcattagg tattagactg gattcaggtg atttagctta tctatctaga 1020
gaggccagaa atttcttctg caçggtagag agagaactaa aagtgcctgg ttttgggaag 1080
atggtcgtca ctgctagtaa tgatctaaat gaagagacga ttgacgcttt aaataaacag 1140
ggacatgagg tggatgcttt tggcatcggg acctacttgg tcacttgcta ttcacaagcg 1200
gccttaggtt gcgttttcaa acttgtggag ataaacaatc agcctcggat taaactttct 1260
gaagatgtta caaaggtatc aataccgtgt aaaaagcgaa gttacagatt atacggcaaa 1320
gaaggttacc ctctggtaga tataatgact ggagagaacg aaccacctcc aaaggttggt 13 80
gagcgtttac tttgtcgtca cccattcaac gaatccaaaa gagcatatgt agtgccacaa 1440
cgtgtcgaag agctcctcaa atgttattgg cgtggaagtg cagatgaagc aagagaagta 1500
ttaccgcctt tgaaagagat aagagaccgt tgcatcaaac agctcgaaaa catgcgacct 1560 gatcatatga ggagattaaa cccaactcct tataaggtta gtgtaagcgc aaagctgtac 1620
gatttcatcc acttcttatg gctaaacgaa gcacctgttg gtgaattgca gtga 1674
<210> 21 <211> 717 <212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana <400> 21
atggatgtcc cgttaccagt cgagaaatta tcttatggat caaacactga ggacaaaact 60
tgtgtagtgc ttgtggcaac tgggagtttc aatcctccta ctttcatgca tttacgcatg 120
tttgagctgg cgagagatga attacgctca aaaggatttc atgttcttgg aggatatatg 180
tctcctgtta atgatgcata taagaagaag ggccttttat ctgcagaaca tcgtttagag 240
atgtgtaatg tatcatgtca aagctctgac tttgtaatgg ttgatccgtg ggaggcatct 300
caaagcaact accaacgaac tttgacggtt ttatcaaggg tcaagacttt cttaacaaca 3 60
aatcgacatg tacccgagga atctctcaaa gtcatgctac tatgtggctc ggatttactg 420
ctatctttct gcactcccgg tgtttggatc cctgaacagt taagaactat ttgcaaagat 480
tatggcattg tgtgcatccg tagagaagga caagatgttg aaaatatgat ctctggtgac 540
gaaatcttaa acgaaaactg tgctaacgtc aaaatcgttg acaatactgt tcctaatcaa 600
atcagttcga gtagattaag gcaatgcatt tcgcgagggt tatcggttaa atacttgact 660
gaagatggag taatagatta tatcagacaa catcaactat acactgagct cacatga 717
<210> 22 <211> 2178 <212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana <400> 22
atgaggctgt tgaaggttgc tacgtgtaac ttgaaccaat gggccatgga tttcgagagc 60
aacatgaaga acatcaaggc ttcgatcgct gaggcaaagg ctgctggtgc tgttatcagg 120
cttggacccg agctcgaggt cactggctat ggttgcgagg atcacttctt ggaactcgac 180
actgtcactc atgcgtggga gtgtttgaag gaattgctgc ttggtgattg gacggatgat 240
attttgtgca gcataggaat gcctgtgatt aaaggagcag agcgttataa ctgccaggtt 300
ctctgtatga acagaagaat catcatgatt cgaccgaaaa tgtggctcgc aaacgatgga 3 60
aactataggg agctacggtg gttcacagct tggaagcaga gagaagagct agaggaattt 420
cagctcccca ttgaaatttc agaggctttg gagcagaaat cagtcccttt tggttatggt 480
tacatccagt ttatcgacac ggctgttgca gctgaagtct gtgaggaact gtttagtcca 540
cttcctcctc atgccgagct cgcattgaat ggtgttgaag tatttatgaa tgcaagtggg 600
agtcatcacc aacttaggaa actagatatt cgtctgaatg cttttatggg ggctactcat 660
gctcgtggtg gggtgtatat gtacagtaat caacaaggat gcgatggtag ccgcttatac 720 tacgatggat gtgcatgtat tgttgtaaac tcgttgagag acgttgaggt catcatttca cgtggatcta taagtagctt tcaggaacaa gctgtgccct gtagacttac acagtccttc aagatcattt accactctcc acaagaagaa gactatttga gaagaagtgg cgcttcagga agctcctccg tggcagctat tgttggctgc aagggagatg agcaagtaaa agctgatgcg tttcctactg atagcaaaga gtttgccaaa gaaaacagtt ctgaggagac aaaaaggcgt tggcatcttg atgtttgcat agatggtgtt gttacaggca agcgaccaag gtataaggtt ttgcagaaca ttcaagcccg gatgagaatg ccttgggttc atagcaaacc aggcttttac ggacttcgtg gttacctgac aaagtatgat agtatcagta aaatggattt gaggttgttc ccatccttgg cagagataga agctgctcca gactattctc agctcgatga agtcgacatg ggaaggatga ggaagatatt ccgttgtgga aagtggggaa caaagctaag cccagcagaa tattattcga tcaatcgaca caaaatgact tactccccag aggacaacag attcgatctg taccagttta agaagattga cgagattgtt ccggaagaag aagcaaactc caacaaagaa ccaagtgcgg gtctctga
gggaatgttg ttgctcaagg ctcacaattc 780
caagtggatc ttgatgcggt tgctagcctt 840
gcaagctgca aggttaaagt atcttcagta 900
aacctgaaaa tgacactaag cagtccgaag 960
atagcctttg gtcccgcttg ctggatgtgg 1020
tttttgcttc ctctttctgg cggagcagac 1080
atgtgccaac ttgttgttaa agagattgca 1140
aaccgaattg ggaattatgc taatgggcag 1200
cgaatatttt acactgtctt tatgggttct 1260
tcaaagcagc tggcagacga gattggtgct 1320
gtctctgcag ttttatcatt atttcaaaca 1380
gatggaggat caaatgctga gaaccttggg 1440
gtgttagcat ttatgttagc gtctctcttg 1500
cttgttctag gcagctccaa cgttgatgaa 1560
tgcagctcag cagacataaa tcctatagga 1620
ttaaaatggg ctgcaacgaa tctcggatat 1680
ccaacagctg agcttgagcc cattcgttct 1740
ggaatgacat atgaagagct ttcagtctat 1800
ccagtatcta tgttcaagaa tctatgttac 1860
gtagctgaga aagtgaagta tttcttcaaa 1920
gtcctcacac cgtcttatca cgctgagagt 1980
aggcagtttc tgtacaacag caagtggcca 2040
gacagcttaa atggtgactc agttgctttc 2100
attggagttg tagcagcaaa ctccggagac 2160
2178

Claims (32)

1. Método de aumento da tolerância de uma célula vegetal ou planta a condições hipóxicas ou anóxicas, compreendendo a etapa de: a) fornecimento de um transgene de aumento da tolerância a estresse à dita célula vegetal ou a células da dita planta; em que o dito transgene de aumento da tolerância a estresse é selecionado de: i. um transgene de aumento da tolerância a estresse ca- paz de reduzir a expressão de genes de PARP endó- gena da planta, particularmente em que o transgene codifica uma molécula de RNA inibitória de PARP; ii. um transgene de aumento da tolerância a estresse ca- paz de reduzir a expressão de genes de PARG endó- gena da planta, particularmente em que o transgene codifica uma molécula de RNA inibitória de PARG; ou iii. um transgene de aumento da tolerância a estresse que codifica uma enzima funcional na planta da via de sín- tese de salvamento de nicotinamida adenina dinucleotí- deo selecionada de nicotinamidase, nicotinato fosforri- bosiltransferase, ácido nicotínico mononucleotídeo a- denil transferase ou nicotinamida adenina dinucleotídeo sintetase.
2. Método para aumentar a penetração de raízes de uma planta em um meio de crescimento, compreendendo a etapa de: a) fornecimento de um transgene de aumento da tolerância a estresse à dita célula vegetal ou a células da dita planta; em que o dito transgene de aumento da tolerância a estresse é selecionado de: i. um transgene de aumento da tolerância a estresse ca- paz de reduzir a expressão de genes de PARP endó- gena da planta, particularmente em que o transgene codifica uma molécula de RNA inibitória de PARP; ii. um transgene de aumento da tolerância a estresse ca- paz de reduzir a expressão de genes de PARG endó- gena da planta, particularmente em que o transgene codifica uma molécula de RNA inibitória de PARG; ou iii. um transgene de aumento da tolerância a estresse que codifica uma enzima funcional na planta da via de sín- tese de salvamento de nicotinamida adenina dinucleotí- deo selecionada de nicotinamidase, nicotinato fosforri- bosiltransferase, ácido nicotínico mononucleotídeo a- denil transferase ou nicotinamida adenina dinucíeotídeo sintetase.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o dito transgene de aumento da tolerância a estresse codifica uma molécula de RNA inibitória de PARP.
4. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que o transgene compreende os seguintes fragmentos de DNA operacionalmente ligados: a) um promotor expressável em plantas; b) uma região de DNA que codifique uma molécula de RNA inibitória de PARP compreendendo pelo menos 19 de 20 nu- cleotídeos consecutivos selecionados da seqüência de nu- cleotídeos de SEQ ID No 1, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 2, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 3, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 4, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 5 ou a seqüência de nucleo- tídeos de SEQ ID No 6; e c) uma região de DNA de terminação de transcrição e poliade- nilação.
5. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que o transgene compreende os seguintes fragmentos de DNA operacionalmente ligados: a) um promotor expressável em plantas; b) uma região de DNA que codifique uma molécula de RNA inibitória de PARP compreendendo pelo menos 19 de 20 nu- cleotídeos consecutivos selecionados do complemento da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 1, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 2, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 3, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 4, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 5 ou da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 6; e c) uma região de DNA de terminação de transcrição e poliade- nilação.
6. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que o transgene compreende os seguintes fragmentos de DNA operacionalmente ligados: a) um promotor expressável em plantas; b) uma região de DNA que codifique uma molécula de RNA inibitória de PARP, a dita molécula de DNA compreendendo: i. uma seqüência de nucleotídeos em sentido compreen- dendo pelo menos 19 de 20 nucleotídeos consecutivos selecionados da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 1, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 2, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 3, a seqüên- cia de nucleotídeos de SEQ ID No 4, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 5 ou a seqüência de nucle- otídeos de SEQ ID No 6; e ii. uma seqüência de nucleotídeos anti-sentido compreendendo uma seqüência de nucleotídeos complementar aos ditos pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos na dita seqüência de nucleotídeos em sentido, em que as ditas seqüências de nucleotídeos em sentido e anti- sentido são capazes de formar uma região de RNA de fita dupla; e c) uma região de DNA de terminação de transcrição e po- liadenilação.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, em que a dita se- qüência de nucleotídeos anti-sentido tem cerca de 95% de identidade de seqüência ou é idêntica à dita seqüência de nucleotídeos em sentido.
8. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o dito transgene codifica uma molécula de RNA inibitória de PARG.
9. Método, de acordo com a reivindicação 8, em que o dito transgene compreende os seguintes fragmentos de DNA operacionalmente ligados: a) um promotor expressável em plantas; b) uma região de DNA que codifique uma molécula de RNA inibitória de PARG compreendendo pelo menos 19 de 20 nu- cleotídeos consecutivos selecionados da seqüência de nu- cleotídeos de SEQ ID No 7, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 8, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 9 ou a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 10; e c) uma região de DNA de terminação de transcrição e poliade- nilação.
10. Método, de acordo com a reivindicação 8, em que o transge- ne compreende os seguintes fragmentos de DNA operacionalmente ligados: a) um promotor expressável em plantas; b) uma região de DNA que codifique uma molécula de RNA inibitória de PARG compreendendo pelo menos 19 de 20 nu- cleotídeos consecutivos selecionados do complemento da se- qüência de nucleotídeos de SEQ ID No 7, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 8, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 9 ou da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 10; e c) uma região de DNA de terminação de transcrição e poliade- nilação.
11. Método, de acordo com a reivindicação 8, em que o transge- ne compreende os seguintes fragmentos de DNA operacionalmente ligados: a) um promotor expressável em plantas; b) uma região de DNA que codifique uma molécula de RNA inibitória de PARG, a dita molécula de DNA compreendendo: i. uma seqüência de nucleotídeos em sentido compreen- dendo pelo menos 19 de 20 nucleotídeos consecutivos selecionados da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 7, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 8, a seqüência de nucleotídeos de SEQ ID No 9 ou a se- qüência de nucleotídeos de SEQ ID No 10; e ii. uma seqüência de nucleotídeos anti-sentido compreen- dendo uma seqüência de nucleotídeos complementar aos ditos pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos na dita seqüência de nucleotídeos em sentido, em que as ditas seqüências de nucleotídeos em sentido e anti-sentido são capazes de formar uma região de RNA de fita dupla; e c) uma região de DNA de terminação de transcrição e poliade- nilação.
12. Método, de acordo com a reivindicação 11, em que a dita seqüência de nucleotídeos anti-sentido tem cerca de 95% de identidade de seqüência ou é idêntica à dita seqüência de nucleotídeos em sentido.
13. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o dito transgene codifica uma enzima funcional em plantas da via de síntese de salvamento da nicotinamida adenina dinucleotídeo, selecionada de nicoti- namidase, nicotinato fosforribosiltransferase, ácido nicotínico mononucleotí- deo adenil transferase ou nicotinamida adenina dinucleotídeo sintetase.
14. Método, de acordo com a reivindicação 13, em que o dito transgene compreende uma seqüência de nucleotídeos selecionada da se- qüência de nucleotídeos de SEQ ID 11, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 12, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 13, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 14, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 15, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 16, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 17, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 18, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 19, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 20, da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 21 ou da seqüência de nucleotídeos de SEQ ID 22.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de -1 a 14, compreendendo a etapa adicional de aplicação de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) <formula>formula see original document page 66</formula> em que: Het representa um heterociclo que é, em cada caso, opcional- mente mono- ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, esse hetero- ciclo sendo selecionado do seguinte grupo de heterociclos: pirid-3-ila, pirid-5- ila, 3-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, tetraidrofuran-3-ila, tia- zol-5-ila, A representa C1-C6 alquila, -N(R1)(R2) ou S(R2)1 em que R1 representa hidrogênio, C1-C6 alquila, fenil-C1-C4 alquila, C3-C6 cicloalquila, C2-C6 alcenila ou C2-C6 alcinila, e R2 representa C1-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 alcinila, -C(=0)-CH3 ou benzila, R representa hidrogênio, CrC6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 al- cinila, -C(=0)-CH3 ou benzila ou, juntamente com R2, representa os grupos abaixo: -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2- NH-CH2-, -CH2-N(CH3)-CH2-, e X representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2; a dita planta ou a seu Iocusi ou a sementes da dita planta.
16. Método, de acordo com a reivindicação 15, em que o dito heterociclo representado por Het do dito composto de fórmula (I) representa um heterociclo pirid-3-ila substituído por cloro.
17. Método, de acordo com a reivindicação 16, em que o dito composto de fórmula (I) é imidacloprid ou tiacloprid.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações de -1 a 14, compreendendo a etapa adicional de fornecer às células da dita plan- ta uma quantidade eficaz de ácido 6-cloronicotínico.
19. Método para aumentar a tolerância de uma célula vegetal ou planta a condições hipóxicas ou anóxicas, compreendendo a etapa de: a) aplicação de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) <formula>formula see original document page 67</formula> em que: Het representa um heterociclo que é, em cada caso, opcional- mente mono- ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, esse hetero- ciclo sendo selecionado do seguinte grupo de heterociclos: pirid-3-iia, pirid-5- ila, 3-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, tetraidrofuran-3-ila, tia- zol-5-ila, A representa C1-C6 alquila, -N(R1)(Ra) ou S(R2)1 em que R1 representa hidrogênio, C1-C6 alquila, fenil-C1-C4 alquila, C3-C6 cicloalquila, C2-C6 alcenila ou C2-C6 alcinila, e R2 representa Ci-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 alcinila, -C(=0)-CH3 ou benzila, R representa hidrogênio, CrC6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 al- cinila, -C(=0)-CH3 ou benzila ou, juntamente com R2, representa os grupos abaixo: -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-N(CH3)-CH2-, e X representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2; a dita planta ou a seu locus, ou a sementes da dita planta.
20. Método para aumentar a penetração de raízes de uma planta em um meio de crescimento, compreendendo a etapa de: a) aplicação de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) <formula>formula see original document page 67</formula> em que: Het representa um heterociclo que é, em cada caso, opcional- mente mono- ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, esse hetero- ciclo sendo selecionado do seguinte grupo de heterociclos: pirid-3-ila, pirid-5- ila, 3-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, tetraidrofuran-3-ila, tia- zol-5-ila, A representa C1-C6 alquila, -N(R1)(Rs) ou S(R2)1 em que R1 representa hidrogênio, C1-C6 alquila, fenil-C1-C4 alquila, C3-C6 cicloalquila, C2-C6 alcenila ou C2-C6 alcinila, e R2 representa C1-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 alcinila, -C(=0)-CH3 ou benzila, R representa hidrogênio, C1-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 al- cinila, -C(=0)-CH3 ou benzila ou, juntamente com R2, representa os grupos abaixo: -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-N(CH3)-CH2-, e X representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2; a dita planta ou a seu locus, ou a sementes da dita planta.
21. Método, de acordo com a reivindicação 19 ou 20, em que o dito composto de fórmula (I) é um composto neonicotinóide.
22. Método, de acordo com a reivindicação 19 ou 20, em que o dito heterociclo representado por Het do dito composto de fórmula (I) repre- senta um heterociclo pirid-3-ila substituído por cloro.
23. Método, de acordo com a reivindicação 22, em que o dito composto de fórmula (I) é imidacloprid ou tiacloprid.
24. Método para aumentar a tolerância de uma célula vegetal ou planta a condições hipóxicas ou anóxicas, compreendendo a etapa de forne- cer à dita célula vegetal ou planta uma quantidade eficaz de ácido 6- cloronicotínico.
25. Método para aumentar a penetração de raízes de uma planta em um meio de crescimento, compreendendo a etapa de fornecimento às células da dita planta de uma quantidade eficaz de ácido 6-cloronicotínico.
26. Método, de acordo com a reivindicação 24 ou 25, em que o dito ácido 6-cloronicotínico é fornecido à dita célula vegetal ou planta por aplicação de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) <formula>formula see original document page 69</formula> em que: Het representa um heterociclo que é, em cada caso, opcional- mente mono- ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, esse hetero- ciclo sendo selecionado do seguinte grupo de heterociclos: pirid-3-Íla ou pi- rid-5-ila, A representa C1-C6 alquila, -N(R1)(R2) ou S(R2)1 em que R1 representa hidrogênio, CrC6 alquila, fenil-C1-C4 alquila, C3-C6 cicloalquila, C2-C6 alcenila ou C2-C6 alcinila, e R2 representa CrC6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 alcinila, -C(=0)-CH3 ou benzila, R representa hidrogênio, C1-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 al- cinila, -C(=0)-CH3 ou benzila ou, juntamente com R2, representa os grupos abaixo: -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-N(CH3)-CH2-, e X representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2; a dita planta ou a seu locus, ou a sementes da dita planta.
27. Método, de acordo com a reivindicação 26, em que o dito ácido 6-clóronicotínico é liberado durante a degradação de neonicotinóides compreendendo uma cadeia colateral cloropiridina em plantas.
28. Método, de acordo com a reivindicação 27, em que o dito neonicotinóide é imidacloprid ou tiacloprid.
29. Método, de acordo com a reivindicação 24 ou 25, em que o dito ácido 6-cloronicotínico é aplicado diretamente à dita planta ou ao dito habitat do mesmo, à dita célula vegetal ou à dita semente.
30. Uso de: a) um DNA estranho compreendendo um transgene de aumento da tolerância a estresse ou uma variante de um gene endógeno correspon- dente a esse transgene de aumento da tolerância a estresse e/ou b) ácido 6-cloronicotínico ou um composto de fórmula (I) <formula>formula see original document page 70</formula> em que: Het representa um heterociclo que é, em cada caso, opcional- mente mono- ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, esse hetero- ciclo sendo selecionado do seguinte grupo de heterociclos: pirid-3-ila, pirid-5- ila, 3-piridínio, 1-óxido-5-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, tetraidrofuran-3-ila, tia- zol-5-ila, A representa C1-C6 alquila, -N(R1)(R2) ou S(R2)1 em que R1 representa hidrogênio, C1-C6 alquila, fenil-C1-C4 alquila, C3-C6 cicloalquila, C2-C6 alcenila ou C2-C6 alcinila, e R2 representa CrC6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 alcinila, -C(=0)-CH3 ou benzila, R representa hidrogênio, CrC6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 al- cinila, -C(=0)-CH3 ou benzila ou, juntamente com R2, representa os grupos abaixo: -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-N(CH3)-CH2-, e X representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2; para aumentar a penetração de raízes de uma planta em um meio de crescimento.
31. Uso de: a) um DNA estranho compreendendo um transgene de au- mento da tolerância a estresse ou uma variante de um gene endógeno cor- respondente a esse transgene de aumento da tolerância a estresse e/ou b) ácido 6-cloronicotínico ou um composto de fórmula (I) <formula>formula see original document page 71</formula> em que: Het representa um heterociclo que é, em cada caso, opcional- mente mono- ou polissubstituído por flúor, cloro, metila ou etila, esse hetero- ciclo sendo selecionado do seguinte grupo de heterociclos: pirid-3-ila, pirid-5- ila, 3-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, 1 -óxido-5-piridínio, tetraidrofuran-3-ila, tia- zol-5-ila, A representa CrC6 alquila, -N(R1)(R2) ou S(R2)1 em que R1 representa hidrogênio, C1-C6 alquila, fenil-C1-C4 alquila, C3-C6 cicloalquila, C2-C6 alcenila ou C2-C6 alcinila, e R2 representa C1-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 alcinila, -C(=0)-CH3 ou benzila, R representa hidrogênio, C1-C6 alquila, C2-C6 alcenila, C2-C6 al- cinila, -C(=0)-CH3 ou benzila ou, juntamente com R2, representa os grupos abaixo: -CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-O-CH2-, -CH2-S-CH2-, -CH2-NH-CH2-, -CH2-N(CH3)-CH2-, e X representa N-NO2, N-CN ou CH-NO2; para aumentar a tolerância de uma planta a condições hipóxicas ou anóxicas.
32. Uso, de acordo com a reivindicação 31, em que as ditas condições hipóxicas ou anóxicas são causadas à planta por exposição a i- nundação, submersão ou alagamento.
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