BRPI0613459A2

BRPI0613459A2 - combinação de anticorpo anti-madcam e inibidor de caspase antifibrótica para tratar fibrose hepática

Info

Publication number: BRPI0613459A2
Application number: BRPI0613459-9A
Authority: BR
Inventors: Gary Craig Burgess; Roger Kerry
Original assignee: Pfizer Ltd
Priority date: 2005-07-11
Filing date: 2006-07-03
Publication date: 2011-01-11
Also published as: US20090214527A1; AU2006267976B2; EP1904100A1; KR20080017094A; WO2007007162A1; CN101217980A; JP2007023030A; ZA200800116B; RU2008101383A; IL188397A0; CA2614622A1; AU2006267976A1; MX2008000659A; TW200730190A; AR054828A1

Abstract

COMBINAçãO DE ANTICORPO ANTI-MADCAM E INIBIDOR DE CASPASE ANTIFIBRóTICA PARA TRATAR FIBROSE HEPáTICA. A invenção se refere a uma combinação de um anticorpo anti-MAdCAN com agente antifibrótico, tal como um inibidor de protease, preferivelmente um inibidor de caspase. A invenção também se refere a composições farmacêuticas compreendendo a combinação da invenção, e o uso da combinação para o tratamento de fíbrose hepática.

Description

"COMBINAÇÃO DE ANTICORPO ANTI-MADCAM E INIBIDOR DECASPASE ANTIFIBRÓTICA PARA TRATAR FIBROSE HEPÁTICA"

A invenção refere-se a uma nova combinação de umanticorpo anti-MAdCAM com um agente antifibrótico, tal comoum inibidor de protease, preferivelmente um inibidor de cas-pase. A invenção também se refere às composições farmacêu-ticas compreendendo a combinação da invenção, e o uso dacombinação para o tratamento de fibrose hepática.

A doença do fígado crônica é responsável por maisde 1,4m de mortes anualmente (WHO, Word Healh Report 2004) enos Estados Unidos está entre as dez principais causas rela-cionadas com doença de morte (CDC, National Center for Heal-th Statistics, 2004) . A fibrose hepática, que é um resulta-do de inflamação hepática persistente, se deixada sem cuida-do tem serias conseqüências em longo prazo quanto à mortali-dade e morbidez do paciente.

A fibrose hepática é um dos processos que ocorrequando o fígado é danificado. Tal dano pode ser o resultadode, por exemplo, atividade viral (por exemplo, tipos de he-patite crônica B ou C) ou outras infecções do fígado (porexemplo, parasitas, bactérias); substâncias químicas (porexemplo, farmacêuticos, medicamento recreativo, álcool ex-cessivo, exposição a·poluentes); processos imune (por exem-plo, hepatite autoimune); distúrbios metabólicos (por exem-pio, distúrbios de armazenamento de lipídeo, glicogênio, oumetal); ou desenvolvimento de câncer (câncer de fígado pri-mário ou secundário). A fibrose é tanto um sinal de dano dofígado quanto um contribuinte potencial para insuficiênciahepática através de cirrose progressiva do fígado.

Há uma seria necessidade médica não atendida. Apresente invenção se refere a uma combinação de um anticorpode molécula de adesão de célula de adresina anti-mucosal(MAdCAM) com um agente antifibrótico, preferivelmente um i-nibidor de protease, mais preferivelmente um inibidor decaspase, que é benéfico para o tratamento de fibrose hepática.

A molécula de adesão de célula adresina mucosal(MAdCAM) é um membro da super-família de imunoglobulina dereceptores de adesão de célula. É uma das moléculas de ade-são envolvida na convocação de linfócitos para tecidos quan-do requeridos, por meio de interação com uma molécula de in-tegrina na superfície dos linfócitos.

Foi mostrado que os anticorpos que inibe a ligaçãode MAdCAM a seus pares de ligação de integrina, α4β7, porexemplo, anticorpos anti-MAdCAM (por exemplo MECA-367; US5.403.919, US 5.538.724) ou anticorpos anti-o^ (por exem-plo, Act-I; US 6.551.593), pode inibir a extravasão de Ieu-cócito em intestino inflamado, e pode então ser benéfico notratamento de doença de intestino inflamatórios (IBD).

Aspectos da Invenção

Um aspecto da invenção é uma combinação de um an-ticorpo anti-MAdCAM ou porção de ligação de antígeno destecom um agente anti-fibrótico. Preferivelmente, o agente an-tifibrótico é um inibidor de protease, mais preferivelmenteum inibidor de caspase, ainda mais preferivelmente o inibi-dor de caspase é um composto da fórmula I:O composto da fórmula I

<formula>formula see original document page 4</formula>

Fórmula I

Onde A, B, Rl e R2 são como definido abaixo. Pre-ferivelmente, o composto da fórmula I é selecionado de: áci-do (3S)-3-[Ν-(N1 -(2-Flúor-4-iodofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S) -3- [Ν- (N 1 -(2-Clorofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S) -3- [Ν- (N ' - (2-Bromofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2 1 , 3 ' , 5 ' , 6 1 -Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S) -3- [Ν- (N ' - (2-Fluorfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',β'-Tetraf luorf enóxi ) -4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Trifluormetilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2I,3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S) -3- [Ν- (N 1 - (1-Antril)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5'6'-Tetrafluorfenóxi) -4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Terc-Butilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-

Trifluorometilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(21 , 3 ' , 5 ' , 6 1 -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2,6-

DifIuorfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3,,5,,6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(l-

Napritil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2I,3',5',6I-Tetrafluorprienoxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(4-

Metoxifenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3 S)-3-[Ν-(N1-(2-

Trifluormetilfenil)Oxami1)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-terc-

Butilmetilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-

Benzilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-

Fenilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-0xobutanóico.

Ainda mais pref erivelmente, o composto é ácido(3S)-3-[Ν-(N'-(2-terc-Butilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',51,61-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico.

Em um aspecto da invenção o anticorpo anti-MAdCAMou porção de ligação de antigeno deste na combinação é umanticorpo ou porção de ligação de antigeno deste que especi-ficamente liga MAdCAM. Preferivelmente, anticorpo ou porçãoé um anticorpo monoclonal humano ou porção de ligação de an-tigeno deste. Preferivelmente, a anticorpo ou porção possuipelo menos uma das propriedades seguintes:

(a) se liga às células humanas;

(b) tem uma seletividade para MAdCAM sob VCAM oufibronectina de pelo menos 100 vezes;

(c) se liga da MAdCAM humano com um Kd de 3 χ IO-10M ou menos; ou

(d) inibe a ligação de células de expressão de α4β7ao MAdCAM humano.

(e) inibe a convocação de linfócitos para tecidoIinfóide gastrointestinal.

Preferivelmente, o anticorpo ou porção de ligaçãode antigeno inibe a ligação de MAdCAM humano a α4β7, e tempelo menos uma das seguintes propriedades:

(a) competição cruzada com um anticorpo de refe-rência para ligação a MAdCAM;

(b) competição com um anticorpo de referência paraligação a MAdCAM;

(c) ligação ao mesmo epitopo de MAdCAM como um an-ticorpo de referência;

(d) ligação a MAdCAM com substancialmente o mesmoKd como um anticorpo de referência;

(e) ligação a MAdCAM com substancialmente a mesmataxa como um anticorpo de referência;

onde o anticorpo de referência é selecionado dogrupo consistindo em: anticorpo monoclonal 1.7.2, anticorpomonoclonal 1.8.2, anticorpo monoclonal 6.14.2, anticorpo mo-noclonal 6.22.2, anticorpo monoclonal 6.34.2, anticorpo mo-noclonal 6.67.1, anticorpo monoclonal 6.73.2, anticorpo mo-noclonal 6.77.1, anticorpo monoclonal 7.16.6, anticorpo mo-noclonal 7.20.5, anticorpo monoclonal 7.26.4, anticorpo mo-noclonal 9.8.2, anticorpo monoclonal 6.22.2-mod, anticorpomonoclonal 6.34.2-mod, anticorpo monoclonal 6.67.1-mod, an-ticorpo monoclonal 6.77.1-mod e anticorpo monoclonal 7.26.4-mod.

Em outro aspecto da invenção a região variável decadeia pesada, a região variável de cadeia leve ou ambas doanticorpo anti-MAdCAM são pelo menos 90% idênticas em se-qüência de aminoácido a região ou regiões correspondente deum anticorpo monoclonal selecionados do grupo consistindoem: anticorpo monoclonal 1.7.2, anticorpo monoclonal 1.8.2,anticorpo monoclonal 6.14.2, anticorpo monoclonal 6.22.2,anticorpo monoclonal 6.34.2, anticorpo monoclonal 6.67.1,anticorpo monoclonal 6.73.2, anticorpo monoclonal 6.77.1,anticorpo monoclonal 7.16.6, anticorpo monoclonal 7.20.5,anticorpo monoclonal 7.26.4 anticorpo monoclonal 9.8.2, an-ticorpo monoclonal 6.22.2-mod, anticorpo monoclonal 6.34.2-mod, anticorpo monoclonal 6.67.1-mod, anticorpo monoclonal6.77.1-mod e anticorpo monoclonal 7.26.4-mod.

Preferivelmente o anticorpo é selecionado do grupoconsistindo em:

(a) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentado nas SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 4, semas seqüências de sinal;

(b) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 6 e SEQ ID NO: 8, semas seqüências de sinal,

(c) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 10 e SEQ ID NO: 12,sem as seqüências de sinal,

(d) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 14 e SEQ ID NO: 16,sem as seqüências de sinal,

(e) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 18 e SEQ ID NO: 20,sem as seqüências de sinal,

(f) um anticorpo compreendendo as seqüências ami-noácido apresentados nas SEQ ID NO: 22 e SEQ ID NO: 24, semas seqüências de sinal,

(g) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 26 e SEQ ID NO: 28,sem as seqüências de sinal,

(h) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 30 e SEQ ID NO: 32,sem as seqüências de sinal,

(i) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 34 e SEQ ID NO: 36,sem as seqüências de sinal,

(j) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 38 e SEQ ID NO: 40,sem as seqüências de sinal,

(k) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 42 e SEQ ID NO: 44,sem as seqüências de sinal,

(l) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 46 e SEQ ID NO: 48,sem as seqüências de sinal,

(m) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 52 e SEQ ID NO: 54,sem as seqüências de sinal,

(n) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoác ido apresentados nas SEQ ID NO: 56 e SEQ ID NO: 58,sem as seqüências de sinal,

(o) um anticorpo compreendendo as seqüências deaminoácido apresentados nas SEQ ID NO: 60 e SEQ ID NO: 62,sem as seqüências de sinal,

(p) um anticorpo compreendendo as munições seqüên-cias ácidas apresentados nas SEQ ID NO: 64 e SEQ ID NO: 66,sem as seqüências de sinal, e

(q) um anticorpo compreendendo as munições seqüên-cias ácidas apresentados nas SEQ ID NO: 42 e SEQ ID NO: 68,sem as seqüências de sinal.

Em um aspecto da invenção, a lisina C terminal decadeia pesada podem ser privada do anticorpo anti-MAdCAM dacombinação.

Em outro aspecto da invenção, o anticorpo mònoclo-nal ou porção de ligação de antigeno deste é selecionado dosseguintes anticorpos:

(a) a cadeia pesada compreende as seqüências deaminoácido CDRl, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada de um anticor-po de referência selecionado do grupo consistindo em 1.7.2,1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1,7.16.6 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-nod,6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod,

(b) a cadeia leve compreende as seqüências de ami-noácido CDRl, CDR2 e CDR3 de cadeia leve de um anticorpo dereferência selecionado do grupo consistindo em 1.7.2, 1.8.2,6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6,7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod,6.77.1-mod e 7.26.4-mod,

(c) o anticorpo compreende uma cadeia pesada de(a) e uma cadeia leve de (b), e

(d) o anticorpo de (c) onde as seqüências de ami-noácido CDR de cadeia pesada e cadeia leve são selecionadasdo mesmo anticorpo de referência.

Em outro aspecto da invenção, o anticorpo monoclo-nal ou porção de ligação de antigeno compreende:

(a) uma cadeia pesada compreendendo a seqüência deaminoácido de região variável de cadeia pesada de um anti-corpo selecionado do grupo consistindo em: 1.7.2 (SEQ ID NO:2); 1.8.2 (SEQ ID NO: 6); 6.14.2 (SEQ ID NO: 10); 6.22.2(SEQ ID NO: 14); 6.34.2 (SEQ ID NO: 18); 6.67.1 (SEQ ID NO:22); 6.73.2 (SEQ ID NO: 26); 6.77.1 (SEQ ID NO: 30); 7.16.6(SEQ ID NO: 34); 7.20.5 (SEQ ID NO: 38); 7.26.4 (SEQ ID NO:42); e 9.8.2 (SEQ ID NO: 46); 6.22.2-mod (SEQ ID NO: 52);6.34.2-mod (SEQ ID NO: 56); 6.67.1-mod (SEQ ID NO: 60);6.77.1-mod (SEQ ID NO: 64); e 7.26.4-mod (SEQ ID NO: 42);

(b) uma cadeia leve compreendendo a seqüência deaminoácido de região variável de cadeia leve de um anticorposelecionado do grupo consistindo em: 1.7.2 (SEQ ID NO: 4);1.8.2 (SEQ ID NO: 8); 6.14.2 (SEQ ID NO: 12); 6.22.2 (SEQ IDNO: 16); 6.34.2 (SEQ ID NO: 20); 6.67.1 (SEQ ID NO: 24);6.73.2 (SEQ ID NO: 28); 6.77.1 (SEQ ID NO: 32); 7.16.6 (SEQID NO: 36); 7.20.5 (SEQ ID NO: 40); 7.26.4 (SEQ ID NO: 44);e 9.8.2 (SEQ ID NO: 48); 6.22.2-mod (SEQ ID NO: 54); 6.34.2-mod (SEQ ID NO: 58); 6.67.1-mod (SEQ ID NO: 62); 6.77.1-mod(SEQ ID NO: 66); e 7.2 6.4-mod (SEQ ID NO: 68); ou

(c) a cadeia pesada de (a) e a cadeia leve de (b).

Ainda outro aspecto da invenção é uma combinaçãode um anticorpo de integrina anti-a4p7 ou porção de ligaçãode antigeno deste com um inibidor de caspase como definidoaqui. Preferivelmente, o anticorpo inibe a interação deMAdCAM com c^7integrina. Mais preferivelmente, o anticorpoé Act-I humanizado, também chamado MLN02 (WO 01/078779).

Outro aspecto da invenção é o uso médico de qual-quer combinação descrito aqui, preferivelmente o uso para otratamento de fibrose hepática, incluindo, porém não limita-do a, ao tratamento de dano do fígado induzindo por HepatiteC, doença do fígado alcoólica, esteatoepatite não alcoólica(NASH).

Outro aspecto da invenção é um método de tratamen-to de fibrose hepática incluindo, porém não limitado a, aotratamento de dano do fígado induzindo por Hepatite C, doen-ça do fígado alcoólica, esteatoepatite não alcoólica (NASH),empregando um anticorpo anti-MAdCAM como descrito aqui e umagente anti-fibrótico como descrito aqui.

Outro aspecto da invenção é uma composição farma-cêutica compreendendo qualquer combinação descrita aqui comum excipiente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.

Outro aspecto da invenção é um produto farmacêuti-co compreendendo um anticorpo anti-MAdCAM como descrito aquie um agente antifibrótico como descrito aqui para o uso si-multâneo, separado, ou seqüencial.

Um aspecto adicional da invenção é um kit compre-endendo um anticorpo anti-MAdCAM como descrito aqui e um a-gente antifibrótico como descrito aqui.

Descrição Detalhada da Invenção

O agente antifibrótico em combinação da invenção épreferivelmente um inibidor de protease, mais preferivelmen-te um inibidor de caspase, e ainda mais preferivelmente umcomposto da fórmula I

<formula>formula see original document page 12</formula>

Fórmula I

Onde

A é um aminoácido natural ou não natural da Fórmula IIa-I:

<formula>formula see original document page 12</formula><formula>formula see original document page 13</formula>

B é ura átomo de hidrogênio, um átomo de deutério,alquila, cicloalquila, fenila, fenila substituída, naftila,naftila substituída, 2-benzoxazolila, 2-oxazolila substituí-da, (CH2) n-cicloalquila, (CH2) n-fenila, (CH2) n-(fenila substi-tuída), (CH2) n-(l ou 2-naftila) , (CH2) n" ( 1 ou 2-naftilasubstituída), (CH2) n~ (heteroarila) , (CH2) n-(heteroarila subs-tituída), halometila, CO2R12, CONR13R14, CH2ZR15,CH2OCO (arila) , CH2OCO (heteroarila) , ou CH2OPO(R16)R17, onde Zé um átomo de enxofre ou oxigênio, ou B é um grupo da Fórmu-la IIIa-c:

<formula>formula see original document page 13</formula>

R1 é alquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila,fenila, fenila substituída, fenilalquila, fenilalquila subs-tituída, naftila, naftila substituída, (1 ou 2 nafti-la) alquila, (1 ou 2 naftila)alquila substituída, heteroari-la, heteroarila substituída, (heteroarila)alquila, (heteroa-rila) alquila substituída, Rla(Rlb)N, ou R10O; e

R2 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,(cicloalquila)alquila, fenila, fenila substituída, fenilal-quila, fenilalquila substituída, naftila, naftila . substituí-da, (1 ou 2 naftila) alquila, ou (1 ou 2 naftila) alquilasubstituída;

E onde:

Rla e Rlb são independentemente hidrogênio, alqui-la, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, fenila, fenilasubstituída, fenilalquila, fenilalquila substituída, nafti-la, naftila substituída, (1 ou 2 naftila)alquila, (1 ou 2naftila)alquila substituída, heteroarila, heteroarila subs-tituída, (heteroarila)alquila, ou (heteroarila)alquila subs-tituída, com a condição de que Rla e Rlb não possam ambos serhidrogênio;

Rlc é alquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila,fenila, fenila substituída, fenilalquila, fenilalquila subs-tituída, naftila, naftila substituída, (1 ou 2 nafti-la) alquila, (1 ou 2 naftila)alquila substituída, heteroari-la, heteroarila substituída, (heteroarila)alquila, ou (hete-roarila) alquila substituída;

R3 é Ci_6 alquila, cicloalquila, fenila, fenilasubstituída, (CH2)nNH2, (CH2)NHCOR9, (CH2)nN(C=NH)NH2,(CH2)mCO2R2, (CH2)mOR10, (CH2)mSR11, (CH2) ncicloalquila,(CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída), (CH2)nU ou 2-naftila) ou (CH2)n(heteroarila), onde heteroarila inclui pi-ridila, tienila, furila, tiazolila, imidazolila, pirazolila,isoxazolila, pirazinila, pirimidila, triazinila, tetrazoli-la, e indolila;

R3a é hidrogênio ou metila, ou R3 e R3a consideradojunto são -(CH2) d- onde d é um número inteiro de 2 a 6;

R4 é fenila, fenila substituída, (CH2) rafenila,(CH2)m(fenila substituída), cicloalquila, ou cicloalquila debenzo-fundido;

R5 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, (CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila,(CH2) n(fenila substituída), ou (CH2)n(l ou 2-naftila);

R6 é hidrogênio, flúor, oxo, alquila inferior, ci-cloalquila, fenila, fenila substituída, naftila,(CH2) ncicloalquila, (CH2) „fenila, (CH2) n ( fenila substituída),(CH2) n (1 OU 2-naftila), OR10, SR11, ou NHCOR9;

R7 é hidrogênio, oxo (isto é =0), alquila inferi-or, cicloalquila, fenila, fenila substituída, naftila,(CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída),ou (CH2)nU ou 2-naftila);

R8 é alquila inferior, cicloalquila,(CH2) ncicloalquila, (CH2) „fenila, (CH2) n ( fenila substituída),(CH2)nU ou 2 - naftila), ou COR9;

R9 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, naftila, (CH2) ncicloalquila,(CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída), (CH2)nU ou 2-naftila) , OR12, ou NR13R14;

R10 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, naftila, (CH2) ncicloalquila,(CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída), ou (CH2)nU ou 2-naftila);R11 é alquila inferior, cicloalquila, fenila, feni-Ia substituída, naftila, (CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila,(CH2) η (fenila substituída), ou (CH2)nU ou 2-naftila);

R12 é alquila inferior, cicloalquila,(CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída),ou (CH2) n(l ou 2 - naftila);

R13 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, naftila, naftila substituído,(CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída),ou (CH2)nU ou 2-naftila);

R14 é hidrogênio ou alquila inferior; ou

R13 e R14 considerado junto formam um anel de cincoa sete membros de carbocíclico ou heterocíclico, tal comomorfolina, ou piperazina N-substituída;

R15 é fenila, fenila substituída, naftila, naftilasubstituída, heteroarila, (CH2) nfenila, (CH2) „ (fenila substi-tuída), (CH2)nU ou 2-naftila), ou (CH2) n (heteroarila) ; R16 ouR17 são independentemente alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, naftila, fenilalquila, fenilal-quila substituída, ou (cicloalquila)alquila;

R18 e R19 são independentemente hidrogênio, alqui-la, fenila, fenila substituída, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenilasubstituída), ou R18 e R19 considerado junto são -(CH=CH)2-;

R20 é hidrogênio, alquila, fenila, fenila substitu-ida, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída);

R21, R22 e R23 são independentemente hidrogênio, oualquila;

X é CH2, (CH2)2, (CH2)3, ou S;Y1 é O ou NR23;

Y2 é CH2, 0, ou NR23;

a é 0 ou 1 e b é 1 ou2, desde que quando a for 1então b seja 1; c é 1 ou 2, desde que quando c for 1 entãoa seja Oeb seja 1;

m é 1 ou 2; e

η é 1, 2, 3, ou 4;

ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Como empregado aqui, o termo "alquila" significauma cadeia de carbono Ci a Ci0 reta ou ramificada, tal comometila, etila, terc-butila, iso-propila, n-octila, e os ou-tros. O termo "alquila inferior" significa uma cadeia decarbono C1 a C6 reta ou ramificada, tal como metila, etila,iso-propila, e outros.

O termo "cicloalquila" significa um anel mono-,Nbi-, ou triciclico que é ou completamente saturado ou parci-almente não saturado. Os exemplos de tal um anel incluemciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, ciclo-eptila, adamantila, ciclooctila, eis ou trans de decalina,biciclo[2,2,1]hept-2-eno, cicloex-l-enila, ciclopent-1-enila, 1,4-ciclooctadienila, e outros.

O termo "(cicloalquila)alquila" significa o grupoalquila acima definido substituída com um dos anéis de ci-cloalquila acima. Os exemplos de um tal grupo incluem (ci-cloexil)metila, 3-(ciclopropil)-n-propila, 5-(ciclopentil)hexila, 6-adamantil)hexila, e outros.

O termo "fenila substituída" especifica um grupode fenila substituído com um ou mais substituintes selecio-nado de halogênio, hidróxi, hidróxi protegido, ciano, nitro,trifluorometila, alquila, alcóxi, acila, acilóxi, carbóxi,carbóxi protegido, carboximetila, carboximetila protegida,hidroximetila, hidroximetila protegida, amino, amino prote-gido, amino (mono-substituido), amino (mono-substituido)protegido, amino (di-substituido), carboxamida, carboxamidaprotegida, N-(alquila inferior)carboxamida, N-((alquila in-ferior ) sulfonil ) amino, N-(fenilsulfonil)amino ou por um gru-po de fenila substituído ou não substituído, tal que no ul-timo caso um grupo bifenila ou naftila resulte, ou onde doissubstituintes de alquila adjacente no anel de fenila substi-tuído considerados juntos formam um cicloalquila para produ-zir, por exemplo, tetraidronaftila ou indanila.

Os exemplos do termo "fenila substituída" incluemum grupo mono-, di-, tri-, tetra, ou penta(halo)fenila talcomo 2-, 3-, ou 4-clorofenila, 2,6-diclorofenila, 2,5-diclorofenila, 3,4-diclorofenila, 2,3- ou 4-bromofenila,3,4-dibromofenila, 3-cloro-4-fluorfenila, 2-, 3- ou 4-fluorfenila, 2,4,6-trifluorfenila, 2,3,5,6-tetrefluorfenila,2,3,4,5-tetrafluorfenila, 2,3,4,5,6-pentafluorofenila, e ou-tros; um grupo mono ou di(hidróxi)fenila tal como 2-, 3-, ou4-hidroxifenila, 2,4-diidroxifenila, os derivado de hi-dróxi protegidos destes e outros; um grupo de nitrofeni-Ia tal como 2-, 3-, ou 4-nitrofenila; um grupo de ciano-fenila, por exemplo, 2-, 3-, ou 4-cianof enila; um grupomono ou di(alquila)fenila tal como 2-, 3-, ou 4- etilfe-nila, 2-, 3-, ou 4-(n-propil) fenila e outros; um grupomono ou di(alcóxi)fenila, por exemplo, 2,6-dimetoxifenila, 2-, 3-, ou 4-(iso-propóxi)fenila, 2-, 3-, ou4-(t-butóxi)fenila, 3-etóxi-4-metoxifenila e outros; 2-, 3-,ou 4-(hidroximetila protegida)fenila ou 3,4-di(hidroximetila)fenila; um mono- ou di(aminometila)fenilaou (aminometila protegida) fenila tal como 2-, 3- ou 4-(aminometila)fenila ou 2,4-(aminometila protegida)fenila; ouum mono- ou di(N-(metilsulfonilamino))fenila tal como 2-, 3-ou 4-(N-(metilsulfonilamino))fenila. Também, o termo "fe-nila substituída" representa grupos fenila di-substituídosonde os substituintes são diferentes, por exemplo, 3-metil-4-hidroxifenila, 3-hidróxi-4-nitrofenila, 2-hidróxi-4-clorofenila, e outros.

O termo "fenilalquila" significa um dos grupos fe-nila acima ligados a um dos grupos alquila descrito acima, eo termo "fenilalquila substituída" significa que ou a fenilaou a alquila ou ambos são substituídas com um ou mais dossubstituintes definido acima. Os exemplos de tais gruposincluem 2-fenil-l-cloroetila, 2-(4'-metoxifenil)etila, 4-(2161-dihidróxi fenil)n-hexila, 2-(51ciano-31-metoxifenil)n-pentila, 3-(2'6'-dimetilfenil)n-propila), 4-cloro-3-aminobenzila, 6-(4'-metoxifenil)-3-carbóxi(n-hexil), 5- {4'-aminometilfenil)-3-(aminometil)n-pentila, 5-fenil-3-oxo-n-pent-l-il, (4-hidroxinaft-2-il)metila, e outros.

0 termo "naftila substituída" significa um gruponaftila substituído com um ou mais substituintes identifica-dos acima, e o termo "(1 ou 2 naftila)alquila" significa umanaftila (1 ou 2) ligada a um dos grupos alquila descritosacima.Os termos "halo" e "halogênio" se refere aos gru-pos fluoro, cloro, bromo ou iodo. Estes termos podem tambémser empregados para descrever um ou mais halogênios, que se-jam iguais ou diferentes. Os halogênios preferidos no con-texto desta invenção são cloro e fluoro.

0 termo "arila" se refere a anéis carbociclicocinco e seis de membros aromáticos. Os anéis de seis mem-bros são preferidos.

0 termo "heteroarila" se refere a anéis heterocí-clico de cinco membros ou seis membros aromáticos opcional-mente substituídos que têm 1 a 4 heteroátomos, tal como áto-mos de oxigênio, enxofre e/ou nitrogênio, em particular ni-trogênio, ou só ou em conjunto com átomos de anel de enxofreou oxigênio.

Os seguintes sistemas de anel são exemplos repre-sentativos dos radicais de heterociclico denotados pelo ter-mo "heteroarila" (ou substituído ou não substituído): teini-la, furila, pirrolila, pirrolidinila, imidazolila, isoxazo-lila, triazolila, tiadiazolila, oxadiazolila, tetrazolila,tiatriazolila, oxatriazolila, piridila, pirimidila, pirazi-nila, piridazinila, oxazinila, triazinila, tiadiazinila, te-trazolo, 1,5-[b]piridazinila e purinila, bem como derivadosbenzo-fundidos, por exemplo, benzoxazolila, benzotiazolila,benzimidazolila e indolila.

Os Substituintes para os anéis de heteroarila op-cionalmente substituídos acima são de um a três halo, tria-lometila, amino, amino protegido, sais de amino, amino raono-substituído, amino di-substituído, carbóxi, carbóxi protegi-do, sais de carboxilato, hidróxi, hidróxi protegido, sais deum grupo hidróxi, alcóxi inferior, alquiltio inferior, al-quila inferior, alquila inferior substituída, cicloalquila,cicloalquila substituída, (cicloalquila)alquila, (cicloal-quila)alquila substituída, fenila, fenila substituída, feni-lalquila, e grupos fenilalquila substituída.

Os substituintes para o grupo heteroarila são comodefinido acima, ou como apresentado abaixo. Como empregadoem conjunto com os substituintes acima para anéis de hetero-arila, "trialometila" podem ser trifluorometila, triclorome-tila, tribromometila ou triiodometila"; alcóxi inferior sig-nifica um grupo alcóxi Ci a C4, similarmente, "alquiltio in-ferior" significa um grupo alquiltio Ci a C4. 0 termo "al-quila inferior substituída" significa o grupo alquila infe-rior definido acima substituído de uma a três vezes por umhidróxi, hidróxi protegido, amino, amino protegido, ciano,halo, trifluorometila, amino mono-substituído, amino di-substituído, alcóxi inferior, alquiltio inferior, carbóxi,carbóxi protegido, ou um sal de carbóxi, amino, e/ou hidróxi.

Como empregado em conjunto com os substituintespara os anéis de heteroarila, os termos " (cicloalqui-la) alquila substituída" e "cicloalquila substituída" são co-mo definido acima substituídos com os mesmos grupos comolistado para um grupo "alquila substituída". 0 termo "amino(mono-substituído)" se refere a um grupo amino com um subs-tituinte escolhido do grupo consistindo em grupo fenila, fe-nila substituída, alquila, alquila substituída, acila Ci aC7, alquenila C2 a C7, alquenila C2 a C7 substituída, alqui-nila C2 a C7, alquilarila C7 a Ci6, alquilarila C7 a Ci6 subs-tituída e heteroarila. 0 amino (mono-substituído) pode adi-cionalmente ter um grupo de proteção de amino como abrangidopelo termo "amino (mono-substituído) protegido". 0 termo"amino (di-substituído)" se refere a grupos amino com doissubstituintes escolhido do grupo consistindo em fenila, fe-nila substituída, alquila, alquila substituído, acila Ci aC7, alquenila C2 a C7, alquinila C2 a C7, alquilarila C7 a Ci6substituída e heteroarila. Os dois substituintes podem seriguais ou diferentes. 0 termo "heteroaril(alquil)" signifi-ca um grupo alquila como definido acima, substituído emqualquer posição por um grupo de heteroarila, como acima definido.

Além disso, os anéis heterocíclico de cinco mem-bros ou seis membros substituídos opcionalmente acima, e osanéis de cicloalquila acima, podem opcionalmente se fundidoa um sistema de anel de cinco membros ou seis membros aromá-ticos tal como um sistema de piridina ou um triazol, e pre-ferivelmente a um anel de benzeno.

0 termo "grupo proteção carbóxi" como empregadoaqui se refere a um dos derivado de éster do grupo ácidocarboxílico geralmente empregado para bloquear ou proteger ogrupo ácido carboxílico ao mesmo tempo em que as reações sãorealizadas em outros grupos funcionais no composto. Os e-xemplos de tais grupos de proteção de ácido carboxílico in-cluem t-butila, 4-nitrobenzila, 4-metoxibenzila, 3,4-dimetoxibenzila, 2,4-dimetoxibenzila, 2,4,6-trimetoxibenzila, 2 , 4 , 6-trimetilbenzila, pentametilbenzila,3, 4-metilenedioxibenzila, benzidrila, 4,41dimetoxitritila,4,4',4"-trimetoxitritila, 2-fenilpropila, trimetilsilila, t-butiladimetilsilila, fenacila, 2,2,2-tricloroetila, β-(trimetilsilil)etila, β-(di(n-butil)metilsilil)etila, p-toluenosulfoniletila, 4-nitrobenzilsulfoniletila, alila, ci-namila, 1-(trimetilsililmetil)-propenila e outras frações.As espécies de grupo de proteção carbóxi empregado não écrítica contanto que o ácido carboxilico derivado seja está-vel às condições de reação subseqüente e possa ser removidono ponto adequado sem romper o resto da molécula.

O termo "grupo de proteção hidróxi" se refere agrupos facilmente cliváveis ligados grupos hidroxila, talcomo o tetraidropiranila, 2-metoxiprop-2-il, 1-etoxietil-l-il, metoximetila, β-metoxietoximetila, metiltiometila, t-butila, t-amila, tritila, 4-metoxitritila, 4,4'-dimetoxitritila, 4,44"-trimetoxitritila, benzila, alila,trimetilsilila, (t-butil)dimetilsilila, 2,2,2-tricloroetoxicarbonila, e outros.

O termo "grupo de proteção amino" como empregadoaqui se refere a substituintes do grupo amino geralmente em-pregado para bloquear ou proteger a funcionalidade de aminoao mesmo tempo em que reagindo outros grupos funcionais damolécula. O termo "amino (mono-substituído) protegido" sig-nifica que há um grupo de proteção amino no átomo de nitro-gênio de amino mono-substituído. Os exemplos para tais gru-pos de proteção amino são listados em WO 00/01666.

Os termos "aminoácido natural e não natural" sereferem a ambos aminoácidos de ocorrência natural e outrosα-aminoácidos não proteinogênico geralmente utilizados poraqueles nas técnica química de peptídeo quando preparado a-nálogos sintéticos de peptídeos de ocorrência natural, in-cluindo as formas de D e L. Os aminoácidos de ocorrêncianatural são glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina,serina, metionina, teonina, fenilalanina, tirosina, tripto-fano, cisteína, prolina, histidina, ácido aspártico, aspara-gina, ácido glutâmico, glutamina, ácido γ-carboxiglutâmico,arginina, ornitina e lisina. Os exemplos de a-aminoácidonão naturais incluem hidroxizina, citrulina, quinurrenina,(4-aminofenil)alanina, 3-(2'-naftil)alanina, 3- (11 -naftil)alanina, sulfona de metionina, (t-butil)alanina, (t-butil)glicina, 4-hidroxifenil-glicina, aminoalanina, fenil-glicina, vinilalanina, propargil-glicina, 1,2,4-triazolo-3-alanina, tironina, 6-hidroxitriptofano, 5-hidroxitriptofano,3-hidroxiquinurrenina, 3-aminotirosina, trifluorometilalani-na, 2-tienilalanina, (2-(4-piridil)etil)cisteína, 3,4-dimetóxi-fenilalanina, 3-(2'-tiazolil)alanina, ácido ibote-nico, ácido 1-amino-l-ciclopentano-carboxílico, ácido 1-amino-l-cicloexanocarboxílico, ácido quisquálico, 3-(trifluorometilfenil)alanina, (cicloexil)glicina, tioistidi-na, 3-metoxitirosina, norleucina, norvalina, aloisoleucina,homoarginina, tioprolina, deidroprolina, hidroxiprolina, ho-moprolina, ácido indolina-2-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetraidroisoquinolina-3-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetraidroquinolina-2-carboxilico, ácido a-amino-n-butirico,ciclohexilalanina, ácido 2-amino-3-fenilbutirico, fenilala-nina substituída na posição orto, meta, ou para da fração defenila com um ou dois dos seguintes grupos: um alquila (Ci aC4), um alcóxi (Ci a C4), um grupo halogênio ou nitro, ousubstituído uma vez com um grupo metilonidióxi; β-2- e 3-tienilalanina; β-2- e 3-furanilalanina; β-2-, 3- e 4-piridilalanina, β-(benzotienil-2- e 3-il)alanina; β-(1- e 2-naftil)alanina; derivados O-alquilados de serina, treoninaou tirosina; S-cisteína alquilada, homocisteína S-alquilada,os ésteres de O-sulfato, O-fosfato, e O-carboxilato de tiro-sina, 3-(sulfo)tirosina, 3-(carbóxi)tirosina, 3-(fosfo)tirosina, o éster de ácido 4-metano-sulfônico de ti-rosina, éster de ácido 4-metanofosfonico de tirosina, 3,5-diiodotirosina, 3-nitrotirosina, ε-alquilalisina, e ornitinaδ-alquila. Quaisquer destes α-aminoácidos pode ser substi-tuído com um grupo metila na alfa posição, um halogênio emqualquer posição do resíduo aromático na cadeia lateral ex-amino, ou um grupo de proteção apropriado nos átomos de 0,N, ou S dos resíduos de cadeia lateral. Os grupos de prote-ção apropriados são descritos acima.

Dependendo da escolha de solvente e outras condi-ções conhecidas pela pessoa versada, estes compostos podemtambém tomar a forma de cetal ou acetal, e o uso destas for-mas na combinação da invenção é incluído na invenção.

Estes compostos podem ser preparados como descritoem WO 00/01666 ou em US 6.544.951, desse modo incorporadopor referência na sua totalidade.

Os subgrupos preferidos são esses listados em US6.544.951.Um composto preferido da fórmula I é selecionado de:

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-benzilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',31,5',61 -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(l-Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(Benzil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(21 , 3' ,51,6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-fenoxifenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5,,6I-Tetrafluorfenóxi) -4-0.xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(l-Naftilametil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3 - [N-(N'-(4-Cloro-l-Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(21,31,5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N1 -(2-Antril) Oxamil) Valinil ].Amino-5- (2 ' , 3 ' , 5 ' , 6 ' -Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1 - (Fenetil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2' , 3' , 5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1 - (Fenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2 ' , 3' , 5' , 6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Fenilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3 S)-3-[N-(N'-(4-n-Heptilafenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5I,6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(5,6,7,8-Tetraidro-1-Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2' , 3' , 5 ' , 6 ' -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(l-Adamantila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2 1 , 3 ' , 5 ' , 6 ' -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(4-Fluorfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2' , 3 1 , 5 1 , 6 1 -Tetraflurfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N1 -(2-Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(23 ' , 5 6 ' -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-metoxifenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2' , 31 , 51 , 6 1 -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopetanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1 -(N"-N ' "-Difenilamoni)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5*,6T-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N1 -(4-Piridinil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2' , 3' , 5' , 6' -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Pirazinil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6I-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3- [Ν- (Ν ' - (1, 2, 3,4-Tetraidro-INaftila)Oxamil)Valini1]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(3,4,5Trimetoxibenzil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2I,3',5',6I-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'(Benzidril)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(3Fenoxilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(21,3',5',61 -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-tercButilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido' (3S)-3-[Ν-(N'-(2

Piridinil)Oxamil)valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorphenoxy)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(2,3,5,6-Tetrafluoro-4Piridinil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(235',61-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1 -(2iodofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2,6Difluorfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2351,61 -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2,5-Di-tercButilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(5indanil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2 ' ,3 ' , 5 ' ,6' -Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(Metil)Oxamil)Valinil]Amino-5(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi1)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(nHeptila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2356'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(tectOctyil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2' .3' .5' , 6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'(Cicloexila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2,,3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1-(5-fenila-3Pirazolila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2,3,4,5Tetrafluorfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5,,6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2,3,4,6TetrafIuorfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N- CN' -(2, 3, 5, 6Tetraclorofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4- Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2,3,4,5,6Pentafluorfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3,,5,,6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1 -(2Benzimidazolil)Oxamil)Varinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(1Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2 ' , 6 '-Difluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(1Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',4',6'-Trifluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(lNaftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(Difenilfosfinilóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(1Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-(Metilfenilfosfinilóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3RS)-3-[Ν-(N'-(1Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-5-Fluor-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(Fenil)Oxamil)Alaninil]Amino5-(21,3',51,61-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(5,6,7,8-Tetraidro-INaftila)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluòrfenóxi)-4- Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(2Fenilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(21 , 3 ' , 5 ' , 6 ' -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S) -3- [Ν- (Ν 1 - (2·Benzilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2,,3',5',6I-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S) -3- [Ν- (N ' - (1-Naftilametil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2 1 , 3 ' , 5 1 , 6 1 -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S) -3- [Ν- (N 1 - (2·Fenoxifenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2,,3',5',6I-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(3Fenoxilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3*,5',6I-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(4Fenilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1(Benzidril)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1 -(2Fenilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(21-Fluorfenóxi) -A-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N1 -(2-tercButilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2'-Fluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(2Fenilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(Difenilfosfinóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(1Naftila)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(Difenilfosfinilóxi)-A-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'- (1Naftila)Oxamil)Leucinil]Amino-5-(2',4',6'-Trifluorfenóxi)-A-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(I-Naftila)Oxamil)(tercButila)Glicinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-A-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N1 - (I-Naftila)Oxamil) (tercButila)Norleucinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-A-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(I-Naftila)Oxamil)(tercButil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-Naftil)Oxamil)Leucinil]Amino5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

Naftila)Oxamil)Leucinil]Amino-5-(Metilfenilfosfinilóxi)-A-Oxopentanóico;

Naftila)Oxamil)Leucinil]Amino-5-Fluoro-4-Oxopentanóico;

ácido(3S)-3-[Ν-(N'-(1

Naftila)Oxamil)Leucinil]Amino-5-(Difenilfosfinilóxi)-A-Oxopentanóico;

ácido

(3S)-3-[N-(N1 - (2-(lH-Tetrazol-5

il)Fenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido

(3S)-3-[Ν-(Ν*-(1

Adamantila)Fenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxôbutanóico;ácido (3S)-3-[Ν-(Ν'-Fenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N(Benzil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'(Fenetil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Fenoxifenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(l-Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(4-Cloro-l-Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N1 -(5,6,7,8-Tetraidro-l-Naftila)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3 S)-3-[Ν-(N'-(1,2,3,4-Tetraidro-l-Naftila)Oxamil)Valinil]Annino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(l-Naftilametil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(l-Naftila)Oxamil)Leucinil]Amino-4-Oxobutanóico;

Especialmente preferido são compostos selecionadosde:

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Flúor-4-lodofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5,,6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Clorofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',β1-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Bromofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5I,6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N1 -(2-Fluorofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',β'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Trifluormetilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2' , 3' , 5' , 6' -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(I-Antril)Oxamil) Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-tercButilfenil)Oxamil)AlaninilJAmino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N'-(2Trifluormetilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2 ' , 3 ' , 5 ' , 6 ' -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2,6Dif luorof enil) Oxamil) Alaninil] Amino-5- (2'.,3',5',6I-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1 -(1Naftila)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',4', 5', 6*-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(4Metoxifenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6' -Tetrafluorprienoxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Trifluormetilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;

ácido (3S)-3-[Ν-(N1-(2-terc-Butilmetilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-0xobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N1 -(2-Benzilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-0xobutanóico;

ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Fenilfenil)Oxamil)Valinil] Amino-4-Oxobutanóico.

Mais preferivelmente, o composto é ácido (3S)-3-[N-(N1 -(2-Terc-Butilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-0xopentanóico.

O anticorpo anti-MAdCAM ou porção de ligação deantigeno deste é preferivelmente um anticorpo como descritoem W02005/0 67 62 0, desse modo incorporado por referência emsua totalidade. Em particular, todas SEQ ID Nos referidasaqui se refere às seqüências atualmente descrita emW02 005/067 62 0.

Preferivelmente o anticorpo anti-MAdCAM empregadona invenção especificamente liga MAdCAM. Ainda mais prefe-rivelmente, pelo menos as seqüências de CDR do referido an-ticorpo são seqüências de CDR humanas, ou uma porção de li-gação de antigeno de um anticorpo humano. Preferivelmente oanticorpo é um anticorpo humano, mais preferivelmente um an-ticorpo que atua como um antagonista MAdCAM.

Outro aspecto da invenção é o uso na combinação dainvenção da cadeia de leve e/ou pesada do referido anticorpoanti-MAdCAM ou a região variável ou outra porção de ligaçãode antigeno deste, ou moléculas de ácido nucléico codifican-do qualquer dos anteriores e um veículo farmaceuticamenteaceitável. Este aspecto da invenção inclui o uso de frag-mentos de quaisquer dos anticorpos anteriores, incluindo po-rém não limitado aos fragmentos, fragmentos F{ab')2r frag-mentos Fv de cadeia única (scFv).

Preferivelmente, o anticorpo anti-MAdCAM é um an-ticorpo anti-MAdCAM inibidor humano selecionado de 1.7.2,1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1,7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod,6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod como descrito emW02 005/067620. Preferivelmente, o anticorpo anti-MAdCAMcompreende a cadeia leve compreendendo uma seqüência de ami-noácido selecionada da SEQ ID NO: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28,32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 ou 68 como descrito emW02005/067620 (com ou sem a seqüência de sinal) ou a regiãovariável de qualquer uma das referidas seqüências de aminoá-cido, ou um ou mais CDRs destas seqüências de aminoácido. 0anticorpo anti-MAdCAM preferivelmente compreende uma cadeiapesada compreendendo uma seqüência de aminoácido selecionadada SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46,52, 56, 60 ou 64 como descrito em W02005/067620 (com ou sema seqüência de sinal) ou a seqüência de aminoácido da regiãovariável, ou.de um ou mais CDRs das referidas seqüências deaminoácido. 0 anticorpo anti-MAdCAM preferivelmente é umanticorpo anti-MAdCAM humano compreendendo a seqüência deaminoácido inicio do CDRl ao fim do CDR3 de qualquer uma dasseqüências mencionada acima. 0 anticorpo anti-MAdCAM empre-gado na invenção pode também ser um anticorpo anti-MAdCAMcompreendendo uma ou mais regiões de FR de quaisquer das se-qüências mencionada acima.

0 anticorpo anti-MAdCAM empregado na combinação dainvenção pode também incluir um anticorpo anti-MAdCAM com-preendendo uma das seqüências de aminoácido acima mencionadanas quais uma ou mais modificações foram feitas. Por exem-plo, cisteinas no anticorpo, que pode ser quimicamente rea-tiva, são substituídas com outro resíduo, tal como, sem li-mitação, alanina ou serina. A substituição pode esta em umacisteína não canônica ou em uma cisteína canônica. A subs-tituição pode ser feita em uma região estrutura ou CDR de umdomínio variável ou no domínio constante de um anticorpo.

Uma substituição de aminoácido pode também serfeita para eliminar sítios proteolíticos potenciais no anti-corpo. Tais sítios podem ocorre em uma região estrutura ouCDR de um domínio variável ou no domínio constante de um an-ticorpo. A substituição de resíduos de cisteína e remoçãode sítios proteolíticos pode diminuir a heterogeneidade noproduto de anticorpo. Os pares de asparagina-glicina, queformam sítios de desamidação potenciais, podem ser elimina-dos alterando-se um ou ambos os resíduos. Uma substituiçãode aminoácido pode ser feita para adicionar ou remover sí-tios de glicosilação potenciais na região variável de um an-ticorpo empregado na invenção.

A lisina C terminal da cadeia pesada do anticorpoanti-MAdCAM empregado na invenção pode ser clivada. As ca-deias pesadas e leves dos anticorpos anti-MAdCAM podem op-cionalmente incluir uma seqüência de sinal.Doze anticorpos monoclonal anti-MAdCAM humanos i-nibidores preferidos para usar na combinação da invenção sãodescrito em detalhes em W02005/067620: 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2,6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5,7.26.4 e 9.8.2.

Classe e Subclasse de Anticorpos Anti-MAdCAMO anticorpo pode ser uma molécula de IgG, IgM, I-gE, IgA ou IgD. Preferivelmente o anticorpo é uma classe deIgG e é uma subclasse IgGi, IgG2, IgG3 ou IgG4. Mais prefe-rivelmente, o anticorpo anti-MAdCAM é subclasse IgG2 ouIgG4. Mais preferivelmente, o anticorpo anti-MAdCAM é amesma classe e subclasse como anticorpo 1.7.2, 1.8.2,7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod,6.77.1-mod ou 7.26.4-mod que é IgG2, ou 6.14.2, 6.22.2,6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1 ou 9.8.2 que é IgG4 como des-crito em W02005/067620.

A classe e subclasse de anticorpos anti-MAdCAM po-dem ser determinadas por qualquer método conhecido na técni-ca. Em geral, a classe e subclasse de um anticorpo podemser determinadas empregando anticorpos que são especificopara uma classe e subclasse particular de anticorpo. Taisanticorpos estão disponíveis comercialmente. ELISA, macha dooeste bem como outras técnicas podem determinar a classe esubclasse. Alternativamente, a classe e subclasse podem serdeterminadas através de sequenciamento todos ou uma porçãodos domínios constantes das cadeias pesadas e/ou leves dosanticorpos, comparando suas seqüências de aminoácido com àsseqüências de aminoácido conhecidas de várias classes e sub-classe de imunoglobulinas, e determinando a classe e sub-classe dos anticorpos como classe mostrando a identidade deseqüência superior.

Espécies e Seletividade de Molécula

O anticorpo anti-MAdCAM empregado na combinação dainvenção demonstra tanto as espécies quanto a seletividadede molécula. 0 anticorpo anti-MAdCAM pode se ligar ao MAd-CAM humano, cinomolgo ou de cachorro. Outros anticorpos an-ti-MAdCAM empregados na combinação da invenção não se ligama uma espécie de macaco New World como um sagüi. Alguém po-de determinar a seletividade de espécie para o anticorpo an-ti-MAdCAM empregando métodos bem conhecido na técnica. Porexemplo, alguém determinar seletividade de espécies empre-gando macha do oeste, FACS, ELISA ou imunoistoquimica. Emuma modalidade preferida, alguém pode determinar a seletivi-dade de espécie empregando imunoistoquimica.

Um anticorpo anti-MAdCAM empregado na combinaçãoda invenção que especificamente liga MAdCAM tem seletividadepara MAdCAM sobre VCAM, fibronectina ou qualquer outro antí-geno que seja pelo menos 10 vezes, preferivelmente pelo me-nos 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ou 90 vezes, mais preferivel-mente pelo menos 100 vezes. Preferivelmente o anticorpo an-ti-MAdCAM não exibe qualquer ligação apreciável a VCAM, fi-bronectina ou qualquer outro antigeno exceto MAdCAM. Alguémpode determinar a seletividade do anticorpo anti-MAdCAM paraMAdCAM empregando métodos bem conhecido na técnica seguindoos ensinos da especificação. Por exemplo, alguém pode de-terminar a seletividade empregando macha do oeste, FACS,ELISA, ou imunoistoquímica.

Afinidade de Ligação de Anticorpos Anti-MAdCAM aMAdCAM

Os anticorpos anti-MAdCAM empregado na combinaçãoda invenção preferivelmente especificamente se ligam a MAd-CAM com afinidade elevada. Um anticorpo anti-MAdCAM empre-gado na combinação da invenção especificamente se liga aMAdCAM com um Kd de 3 χ IO"8 M ou menos, quando medido porressonância de plásmon superficial, tal como BIAcore. Pre-ferivelmente, o anticorpo especificamente se liga a MAdCAMcom um Kd de 1 χ IO"8 ou menos ou 1 χ IO"9 M ou menos. Maispreferivelmente, o anticorpo especificamente se liga a MAd-CAM com um Kd ou 1 χ IO"10 M ou menos. Um anticorpo emprega-do na combinação especificamente se liga a MAdCAM com um Kdde 2,66 χ IO"10 M ou menos, 2,35 χ IO"11 M ou menos ou 9 χ 10"12 M ou menos. Preferivelmente, o anticorpo especificamentese liga ao MAdCAM com um Kd ou 1 χ IO"11 M ou menos. Prefe-rivelmente, o anticorpo especificamente se liga ao MAdCAMcom substancialmente o mesmo Kd como um anticorpo seleciona-do de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2,6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Um anticorpo com"substancialmente o mesmo Kd" como um anticorpo de referên-cia tem um Kd que é ± 100 pM, preferivelmente ± 50 pM, maispreferivelmente ± 20 pM, ainda mais preferivelmente ± 10 pM,± 5 pM ou ± 2 pM, comparados com o Kd do anticorpo de refe-rência na mesma experiência. Preferivelmente, o anticorpose liga ao MAdCAM com substancialmente o mesmo Kd como umanticorpo que compreende um ou domínios mais variáveis ou umou mais CDRs de um anticorpo selecionado de 1.7.2, 1.8.2,6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6,7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod,6.77.1-mod ou 7.26.4-mod como descrito em W02005/067620.Preferivelmente, o anticorpo se liga a MAdCAM com substanci-almente o mesmo Ku como um anticorpo que compreende uma dasseqüências de aminoácido selecionado da SEQ ID NOS: 2, 4, 6,8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36,38, 40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ou 68 (comou sem a seqüência de sinal) como descrito em W02 005/067620,ou o domínio variável deste. Preferivelmente, o anticorpose liga a MAdCAM com substancialmente o mesmo Kd como um an-ticorpo que compreende um ou mais CDRs de um anticorpo quecompreende uma seqüência de aminoácido selecionado da SEQ IDNOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30,32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64,66 ou 68 como descrito em W02005/067620.

A afinidade de ligação de um anticorpo anti-MAdCAMao MAdCAM pode ser determinada por qualquer método conhecidona técnica. Em uma modalidade, a afinidade de ligação podeser medida por ELISAs, RIAs ou ressonância de plásmon super-ficial competitivos, tal como BIAcore. Em uma modalidademais preferida, a afinidade de ligação é medida por resso-nância de plásmon superficial. Em uma modalidade ainda maispreferida, a afinidade de ligação e taxa de dissociação sãomedidas empregando um BIAcore. Um exemplo de determinar a-finidade de ligação pode ser encontrado em W02 005/067620.Meia-vida dos Anticorpos Anti-MAdCAM

0 anticorpo anti-MAdCAM empregado na combinação dainvenção tem uma meia-vida de pelo menos um dia in vitro ouin vivo. Preferivelmente, o anticorpo ou porção deste temuma meia-vida de pelo menos três dias. Mais preferivelmen-te, o anticorpo ou porção tem uma meia-vida de quatro diasou mais. Ainda mais preferivelmente, o anticorpo ou porçãodeste tem uma meia-vida de oito dias ou mais. 0 anticorpoou porção de ligação de antigeno deste empregado na invençãopode também ser derivado ou modificado tal que tem uma meia-vida mais longa, como descrito abaixo. Em outra modalidadepreferida, o anticorpo pode conter mutação pontual para au-mentar a meia vida do soro, tal como descrito em WO00/09560.

A meia-vida do anticorpo pode ser medida porquaisquer meio conhecidos a alguém tendo experiência ordiná-ria na técnica. Por exemplo, a meia vida do anticorpo podeser medida por macha do oeste, ELISA ou RIA durante um perí-odo apropriado de tempo. A meia-vida do anticorpo pode sermedida em qualquer animal apropriado, tal como um primata,por exemplo, macaco cinomolgo, ou um humano.

Identificação de Epitopos MAdCAM Reconhecidos porAnticorpo Anti-MAdCAM

A invenção também fornecer uma combinação com umagente antifibrótico de um anticorpo anti-MAdCAM humano queliga o mesmo antigeno ou epítopo como um anticorpo anti-MAdCAM humano fornecido aqui. Além disso, a invenção forne-ce a combinação com um agente antifibrótico de um anticorpoanti-MAdCAM humano que compete ou compete cruzado com um an-ticorpo anti-MAdCAM humano. Preferivelmente, o anticorpoanti-MAdCAM humano é 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2,6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2,6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Preferivelmente, o anticorpo anti-MAdCAM humano com-preende um ou mais domínios variáveis ou um ou mais CDRs deum anticorpo selecionado de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2,6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4,9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou7.26.4-mod. Preferivelmente, o anticorpo anti-MAdCAM humanocompreende uma das seqüências de aminoácido selecionado deSEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26,28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58,62, 64, 66 ou 68 (com ou sem a seqüência de sinal) como des-crito em W02005/06762 0, ou um domínio variável deste. Pre-ferivelmente, o anticorpo anti-MAdCAM humano compreende umou mais CDRs de um anticorpo que compreende uma das seqüên-cias de aminoácido selecionado de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8,10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38,40, 42, 44, 46 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ou 68, comodescrito em W02005/067620.

Alguém pode determinar se um anticorpo anti-MAdCAMse liga ao mesmo antígeno como outro anticorpo anti-MAdCAMempregando uma variedade de métodos conhecido na técnica.Por exemplo, alguém pode usar um anticorpo anti-MAdCAM co-nhecido para capturar o antígeno, eluir o antígeno do anti-corpo anti-MAdCAM, e em seguida determina se o anticorpo deteste se ligará ao antigeno de eluido. Alguém pode determi-nar se um anticorpo compete com um anticorpo anti-MAdCAM li-gando-se por anticorpo anti-MAdCAM ao MAdCAM sob condiçõessaturação, e então medindo a capacidade do anticorpo de tes-te de se ligar a MAdCAM. Se o anticorpo de teste é capaz dese ligar ao MAdCAM ao mesmo tempo como o anticorpo anti-MAdCAM, então o anticorpo de teste se liga ao um epitopo di-ferente que o anticorpo anti-MAdCAM. Entretanto, se o anti-corpo de teste não é capaz de se ligar ao MAdCAM ao mesmotempo, então o anticorpo de teste compete com um anticorpoanti-MAdCAM humano. Esta experiência pode ser realizada em-pregando ELISA, ou ressonância de plásmon superficial ou,preferivelmente, BIAcore. Para testar se um anticorpo anti-MAdCAM compete cruzado com outro anticorpo anti-MAdCAM, al-guém pode usar o método de competição, descrito acima em duasdireções, isto é, determinando se o anticorpo conhecido blo-queia' o anticorpo de teste e vice-versa.

Uso de Gene de Cadeia Leve ou Pesada

A invenção também fornecer a combinação com agenteantifibrótico de um anticorpo anti-MAdCAM que compreende umaregião variável de cadeia leve codificada por um gene κ hu-mano. Preferivelmente, a região variável de cadeia leve écodificada por uma família de gene Vk A2, A3, A26, B3, 012ou 018 humano. Preferivelmente, a cadeia leve compreendenão mais que onze, não mais que seis ou não mais que trêssubstituições de aminoácido da seqüência Vk A2, A3, A26, B3,012 ou 018 humana de linha germinativa. Preferivelmente, assubstituições de aminoácido são substituições conservadoras.Preferivelmente, ο VL do anticorpo anti-MAdCAMcontém as mesmas mutações, relativo a seqüência de aminoáci-do da linha germinativa, como qualquer um ou mais do VL deanticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1,6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod,6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. A inven-ção inclui a combinação com agente antifibrótico de um anti-corpo anti-MAdCAM que utiliza o mesmo genes Jk humano e Vkhumano como um anticorpo exemplificado. O anticorpo podecompreende um ou mais das mesmas mutações de linha germina-tiva como um ou mais anticorpos exemplificados, ou o anti-corpo pode compreende substituições diferentes em uma oumais das mesmas posições como um ou mais dos anticorpos e-xemplifiçados. Por exemplo, o VL do anticorpo anti-MAdCAMpode conter uma ou mais substituições de aminoácido que sãoiguais àquela presente no anticorpo 7,16,6, e outra substi-tuição de aminoácido que é igual como anticorpo 7,26,4.

Desta maneira, alguém pode misturar e combinar diferentescaracterísticas de ligação de anticorpo a fim de alterar,por exemplo, a afinidade do anticorpo para MAdCAM ou sua ta-xa de dissociação do antígeno. As mutações podem ser feitasna mesma posição como aquelas encontradas em qualquer um oumais do VL de anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2,6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4,9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou7.26.4-mod, porém as substituições de aminoácido conservado-ras são feitas exceto empregando o mesmo aminoácido. Porexemplo, se a substituição de aminoácido comparada à linhagerminativa em um dos anticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2,6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5,7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod é glutamato, alguém pode substituir con-servadamente aspartato. Similarmente, se a substituição deaminoácido foi serina, alguém pode substituir conservadamen-te treonina.

A cadeia leve do anticorpo anti-MAdCAM pode com-preende uma seqüência de aminoácido que é a mesma como a se-qüência de aminoácido do VL de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2,6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4,9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou7.264-mod. A cadeia leve preferivelmente compreende seqüên-cias de aminoácido que são as mesmas como às regiões de CDRda cadeia leve de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2,6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2,6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. A cadeia leve pode compreende uma seqüência de amino-ácido com pelo menos uma região de CDR da cadeia leve de1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2,6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. A cadeia levepode compreender seqüências de aminoácido com CDRs de cadei-as de leves diferentes que usam os mesmos genes Vk e Jk.

Preferivelmente os CDRs de cadeias leves diferentes são ob-tidos de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1,6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod,6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Preferi-velmente a cadeia leve compreende uma seqüência de aminoáci-do selecionada de SEQ ID NOS: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32,36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 64, 66 ou 68 como descrito emW02005/067620 com ou sem a seqüência de sinal. Preferivel-mente a cadeia leve compreende uma seqüência de aminoácidocodificada por uma seqüência de nucleotideo selecionada deSEQ ID NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47,53, 57, 61, 65 ou 67 (com ou sem a seqüência de sinal) comodescrito em W02005/067620, ou uma seqüência de nucleotideoque codifica uma seqüência de aminoácido que tem 1-11 inser-ções de aminoácido, deleções ou substituições desta. Prefe-rivelmente, as substituições de aminoácido são substituiçõesde aminoácido conservadoras. O anticorpo ou porção destepode compreender uma cadeia leve lambda.

A presente invenção também fornece a combinaçãocom um agente anti-fibrótico de um anticorpo anti-MAdCAM ouporção deste que compreende uma seqüência de gene VH humanaou uma seqüência derivada de um gene VH humano. A seqüênciade aminoácido de cadeia pesada pode ser derivada de uma fa-mília de gene 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 ou 4-4 VHhumano. Preferivelmente, a cadeia pesada compreende nãomais do que quinze, não mais do que seis ou não mais do quetrês alterações de aminoácido da seqüência de. gene 1-18, 3-15, 3-21, 3-23, 3-30, 3-33 ou 4-4 VH humana da linha germi-nativa.

SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38,42 e 46 como descrito em W02005/067620 fornecem as seqüên-cias de aminoácido das cadeias pesadas de tamanho natural dedoze anticorpos anti-MAdCAM que podem ser empregados na com-binação da invenção.

Preferivelmente, o VH do anticorpo anti-MAdCAMcontém as mesmas mutações, relativo à seqüência de aminoáci-do de linha germinativa, como qualquer um ou mais do VH deanticorpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1,6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod,6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod. Similaràquele descrito acima, o anticorpo compreende uma ou maisdas mesmas mutações de linha germinativa como um ou mais an-ticorpos exemplificados. O anticorpo também pode compreen-der substituições diferentes em uma ou mais das mesmas posi-ções como um ou mais dos anticorpos exemplificados. Por e-xemplo, o VH do anticorpo anti-MAdCAM pode conter uma oumais substituições de aminoácido que estão iguais àquelaspresentes no anticorpo 7.16.6, e outra substituição de ami-noácido que é igual ao anticorpo 7.26.4. Desta maneira, al-guém pode misturar e combinar características diferentes deligação de anticorpo para alterar, por exemplo, a afinidadedo anticorpo com MAdCAM ou sua taxa de dissociação do antí-geno. Uma substituição de aminoácido comparada com a linhagerminativa pode ser feita na mesma posição como uma substi-tuição da linha germinativa como encontrado em qualquer umou mais do VH de anticorpo de referência 1.7.2, 1.8.2,6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6,7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod,6.77.1-mod ou 7.26.4 - mod, porém a posição é substituídacom um resíduo diferente, que é uma substituição conservado-ra comparado com o anticorpo de referência.

Preferivelmente a cadeia pesada do anticorpo anti-MAdCAM empregada na combinação da invenção compreende umaseqüência de aminoácido que é igual à seqüência de aminoáci-do do VH de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1,6.73.2, 6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod,6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6,77.1-mod ou 7.26.4-mod. Mais pre-ferivelmente, a cadeia pesada compreende as seqüências deaminoácido que são iguais às regiões de CDR da cadeia pesadade 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2,6.77.1, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1 - mod ou 7.26.4-mod. Preferivelmen-te, a cadeia pesada compreende uma seqüência de aminoácidode pelo menos uma região de CDR da cadeia pesada de 1.7.2,1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1,7.16.6, 7.20.4, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod,6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod, ou a cadeia pesada po-de compreender as seqüências de aminoácido com CDRs de ca-deias pesadas diferentes. Preferivelmente, os CDRs de ca-deias pesadas diferentes são obtidos de 1.7.2, 1.8.2,6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6,7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod,6.7 7.1-raod ou 7.26.4-mod. Preferivelmente, a cadeia pesadacompreende uma seqüência de aminoácido selecionada de SEQ IDNOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56,60 ou 64 como descrito em W02005/067620 com ou sem a seqüên-cia de sinal. A cadeia pesada também pode compreender umaseqüência de aminoácido codificada por uma seqüência de nu-cleotídeo selecionada de SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21,25, 29, 33, 37, 41, 45, 51, 55, 59 ou 63 como descrito emW02005/067620, ou uma seqüência de nucleotideo que codificauma seqüência de aminoácido que tem 1-15 inserções, deleçõesou substituições de aminoácido nela. As substituições sãopreferivelmente substituições de aminoácido conservadoras.

Ácidos Nucléicos, Vetores, Células Hospedeiras eMétodos Recombinantes para a Fabricação de Anticorpos.

Os ácidos nucléicos, vetores, células hospedeirase métodos recombinantes para a fabricação destes anticorpossão descritos em WO 2005/067620.

Anticorpos Rotulados e Derivados

Um anticorpo ou porção de anticorpo para a combi-nação da invenção pode ser derivado ou ligado à outra molé-cuia (por exemplo, outro peptideo ou proteína). Em geral,os anticorpos ou porções destes são derivados tal que a li-gação de MAdCAM não seja adversamente afetada pela derivaçãoou rotulação. Conseqüentemente, os anticorpos e porção deanticorpo para a combinação da invenção são pretendidos in-cluir tanto as formas intactas quanto as modificadas dos an-ticorpos anti-MAdCAM humanos descritos aqui. Por exemplo,um anticorpo ou porção de anticorpo empregado na invençãopode ser funcionalmente ligado (através de acoplamento quí-mico, fusão genética, associação não covalente ou de outromodo) a uma ou mais outras entidades moleculares, tal comooutro anticorpo (por exemplo, a anticorpo bi-específico ouum diacorpo), um agente de detecção, um agente citotóxico,um agente farmacêutico, e/ou uma proteína ou peptideo quepossa mediar a associação do anticorpo ou porção de anticor-po com outra molécula (tal como região núcleo de estreptavi-dina ou um rótulo de poliistidina).

Um tipo de anticorpo derivado é produzido por re-ticulação de dois ou mais anticorpos (do mesmo tipo ou detipos diferentes, por exemplo, para criar anticorpos biespe-cificos). Os reticuladores adequados incluem esses que sãoheterobifuncionais, tendo dois grupos distintamente reativosseparados por um espaçador apropriado (por exemplo, éster dem-maleimidobenzoil-N-hidroxissucinimida) ou homobifuncional(por exemplo, suberato de dissucinimidila). Tais ligadoresestão disponíveis de Pierce Chemical Company, Rockford, III.

Outro tipo de anticorpo derivado é um anticorporotulado. Os agentes de detecção úteis com os quais um an-ticorpo ou porção de anticorpo da invenção pode ser derivadoincluem compostos fluorescentes, incluindo fluoresceina, i-sotiocianato de fluoresceina, rodamina, cloreto de 5-dimetilamina-1-naftalenossulfoniIa, ficoeritrina, fósforosde lantanida e outros. Um anticorpo também pode ser rotula-do com enzimas que são úteis para detecção, tal como rábanopicante peroxidase, β-galactosidase, luciferase, alcalinafosfatase, glicose oxidase e outros. Quando um anticorpo érotulado com uma enzima detectável, ele é detectado adicio-nando-se os reagentes adicionais que a enzima usa para pro-duzir um produto de reação que pode ser discernido. Por e-xemplo, quando o agente de peroxidase rábano picante estiverpresente, a adição de peróxido de hidrogênio e diaminobenzi-dina conduz a um produto de reação colorido, que é detectá-vel. Um anticorpo também pode ser rotulado com biotina, edetectado por medição indireta de avidina ou ligação de es-treptavidina. Um anticorpo pode ser rotulado com agentemagnético, como gadolinio. Um anticorpo também pode ser ro-tulado com um epitopo de polipeptideo predeterminado reco-nhecido por um repórter secundário (por exemplo, seqüênciasde par de ziperes da leucina, sítios de ligação para anti-corpos secundários, domínios de ligação de metal rótulos doepitopo). Em algumas modalidades, os rótulos São fixos porbraços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o im-pedimento estérico potencial.

Um anticorpo anti-MAdCAM também pode ser rotuladocom um aminoácido radiorrotulado. O radiorrótulo pode serempregado para propósitos diagnósticos e terapêuticos. Porexemplo, o radiorrótulo pode ser empregado para descobrirtecidos expressando MAdCAM por radiografia ou outras técni-cas diagnosticas. Além disso, o radiorrótulo pode ser em-pregado terapeuticamente como uma toxina para tecido doenteou tumores expressando MAdCAM. Os exemplos de rótulos parapolipeptídeos incluem, porém não estão limitados aos seguin-tes radioisótopos ou radionuclides -3H, 14C, 15N, 35S, 90Y,"Tc, 111In, 125I, 131I.

Um anticorpo anti-MAdCAM também pode ser derivadocom um grupo químico tal como polietileno glicol (PEG), umgrupo metila ou etila, ou um grupo carboidrato. Estes gru-pos podem ser úteis para melhorar as características bioló-gicas do anticorpo, por exemplo, para aumentar a meia vidado soro ou aumentar a ligação de tecido. Esta metodologiatambém se aplicaria a qualquer fragmento de ligação de antí-geno ou versões de anticorpos anti-MAdCAM.

Kits e Composições Farmacêuticas

Em um aspecto adicional, a invenção fornece compo-sições que compreendem um anticorpo anti-MAdCAM inibidor hu-mano e métodos para tratar indivíduos com tais composições.Em algumas modalidades, o indivíduo do tratamento é humano.Em outras modalidades, o indivíduo é um indivíduo veteriná-rio. Em algumas modalidades, o indivíduo veterinário é umcachorro ou um primata não humano.

O tratamento pode envolver a administração de umou mais anticorpos monoclonais inibidores anti-MAdCAM, oufragmentos de ligação de antígeno destes, sozinho ou com umveículo farmaceuticamente aceitável. Os anticorpos anti-MAdCAM inibidores e composições que os compreende, podem seradministrados em combinação com um ou mais outros agentesterapêuticos, diagnósticos ou profiláticos. Como empregadoaqui, "veículo farmaceuticamente aceitável" quer dizer qual-quer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimen-tos, agentes antibacteriano e antifúngicos, agentes de re-tardamento e realce de absorção e isotônico, e outros quesão fisiologicamente compatíveis. Alguns exemplos de veícu-los farmaceuticamente aceitáveis são água, salina, salinatamponada de fosfato, tampão de acetato com cloreto de só-dio, dextrose, glicerol, polietileno glicol, etanol e ou-tros, como também combinações destes. Em muitos casos, serápreferível incluir os agentes isotônicos, por exemplo, açú-cares, poliálcoois, tal como manitol, sorbitol, ou cloretode sódio na composição. Os exemplos adicionais de substân-cias farmaceuticamente aceitáveis são tensoativos, agentesumectantes ou quantidades menores de substâncias auxiliarestal como agentes umectantes ou emulsificantes, preservativosou tampões que realçam a vida de prateleira ou efetividadedo anticorpo.

As composições empregadas nesta invenção podem es-tar em uma variedade de formas, por exemplo, formas de dosa-gem líquidas, semi-sólidas e sólidas, tal como soluções lí-quidas (por exemplo, soluções injetáveis e infusíveis), dis-persões ou suspensões, comprimidos, pílulas, massa liofili-zada, pó seco, lipossomas e supositórios. A forma preferidadepende do modo pretendido de administração e aplicação te-rapêutica. As composições preferidas típicas estão na formade soluções injetáveis ou infusíveis, tal como composiçõessimilares àquelas empregadas para imunização passiva de hu-manos. O modo preferido de administração é parenteral (porexemplo, intravenoso, subcutâneo, intraperitoneal, intramus-cular, intradérmico). Em uma modalidade preferida, o anti-corpo é administrado por infusão ou injeção intravenosa. Emoutra modalidade preferida, o anticorpo é administrado porinjeção intramuscular, intradérmica ou subcutânea. Se dese-jado, o anticorpo pode ser administrado empregando uma bom-ba, enema, supositório, ou reservatório de demora ou similares.

As composições terapêuticas devem ser tipicamenteestéreis e estáveis sob condições de fabricação e armazena-mento. A composição pode ser formulada como uma solução,massa liofilizada, pó seco, microemulsão, dispersão, lipos-soma, ou outra estrutura ordenada adequada para alta concen-tração de droga. As soluções injetáveis estéreis podem serpreparadas incorporando o anticorpo anti-MAdCAM na quantida-de exigida em um solvente apropriado com um ou uma combina-ção de ingredientes enumerados acima, como requerido, segui-do por esterilização. No caso de pós-estéreis para a prepa-ração de soluções injetáveis estéreis, os métodos preferidosde preparação são secagem à vácuo e liofilização que produzum pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente deseja-do adicional de uma solução previamente estéril. Geralmen-te, as dispersões são preparadas incorporando-se o compostoativo em um veiculo estéril que contém um meio de dispersãobásico e os outros ingredientes exigidos daqueles enumeradosacima. AS características desejadas de uma solução podemser mantidas, por exemplo, pelo uso de tensoativos e o tama-nho de partícula exigido no caso de dispersão pelo uso detensoativos, fosfolipídeos e polímeros. A absorção prolon-gada de composições injetáveis pode ser provocada incluindo-se na composição um agente que retarde a absorção, por exem-plo, sais de monoestearato, materiais poliméricos, óleos egelatina.

Os anticorpos da combinação da presente invençãopodem ser administrados por uma variedade de métodos conhe-cidos na técnica, embora para muitas aplicações terapêuticasa rotina/modo preferida de administração seja subcutânea,intramuscular, intradérmica ou infusão intravenosa. Comoserá apreciado pelo técnico versado, o modo e/ou rotina deadministração variará dependendo dos resultados desejados.

Em certas modalidades, as composições de anticorpo podem serpreparadas com um veiculo que protegerá o anticorpo contraliberação rápida, tal como uma formulação de liberação con-trolada, incluindo implantes, emplastros transdérmicos, esistemas de liberação microencapsulados. Os polímeros bio-compatíveis, biodegradáveis podem ser empregados, tal comoacetato de vinila de etileno, polianidretos, ácido poligli-cólico, colágeno, poliortoésteres, e ácido polilático. Mui-tos métodos para a preparação de tais formulações são paten-teados ou geralmente conhecidos por aqueles versados na téc-nica. Veja, por exemplo, Sustained and Controlled ReleaseDrug Delivery Systems (J. R. Robinson, ed., Mareei Dekker,Inc., Nova Iorque (1978)).

Em certas modalidades, um anticorpo anti-MAdCAM dacombinação da invenção pode ser oralmente administrado, porexemplo, com um diluente inerte ou um veículo comestível as-similável. 0 composto (e outros ingredientes, se desejado)também pode ser incluído em uma cápsula de gelatina de cascadura ou macia, prensados em comprimidos, ou incorporados di-retamente na dieta do indivíduo. Para administração tera-pêutica oral, os anticorpos anti-MAdCAM podem ser incorpora-dos com excipientes e empregados na forma de comprimidos in-geríveis, comprimidos bucais, pastilhas, cápsulas, elixires,suspensões, xaropes, bolachas, e outros. Para administrarum composto da invenção por outras que não seja a adminis-tração parenteral, pode ser necessário cobrir o compostocom, ou co-administra o composto com, um material para pre-venir sua inativação.

As composições da invenção podem incluir uma"quantidade terapeuticamente efetiva" ou uma "quantidadeprofilaticamente efetiva" de um anticorpo ou porção de Iiga-ção de antigeno da invenção. Uma "quantidade terapeutica-mente efetiva" se refere a uma quantidade efetiva, em dosa-gens e durante períodos de tempo necessários, para alcançaro resultado terapêutico desejado. Uma quantidade terapeuti-camente efetiva do anticorpo ou porção de anticorpo pode va-riar de acordo com fatores tal como o estado de doença, ida-de, sexo, e peso do indivíduo, e a capacidade do anticorpoou porção de anticorpo de extrair uma resposta desejada noindivíduo. Uma quantidade terapeuticamente efetiva também éuma na qual qualquer efeito tóxico ou prejudicial do anti-corpo ou porção de anticorpo é mais importante que os efei-tos terapeuticamente benéficos. Uma "quantidade profilati-camente efetiva" se refere a uma quantidade efetiva, em do-sagens e durante períodos de tempo necessários, para alcan-çar o resultado profilático desejado. Tipicamente, uma vezque uma dose profilática é empregada em indivíduos antes deou em um estágio precoce da doença, a quantidade profilati-camente efetiva pode ser menor do que a quantidade terapeu-ticamente efetiva.

Os regimes de dosagem podem ser ajustados parafornecer a resposta desejada ideal (por exemplo, uma respos-ta terapêutica ou profilática). Por exemplo, um bolo únicopode ser administrado, várias doses divididas podem ser ad-ministradas com o passar do tempo ou a dose pode ser propor-cionalmente reduzida ou aumentada como indicado pelas exi-gências da situação terapêutica. É especialmente vantajosoformular composições parenterais na forma de unidade de do-sagem para facilidade de administração e uniformidade de do-sagem. A forma de unidade de dosagem como empregado aqui serefere a unidades fisicamente discretas adequadas como dosa-gens unitárias para os indivíduos mamíferos a serem trata-dos; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada decomposto ativo calculada para produzir o efeito terapêuticodesejado em associação com o veículo farmacêutico exigido.

A especificação para as formas de unidade de dosagem da in-venção é ditada por e diretamente dependentes (a) das carac-terísticas únicas do anticorpo anti-MAdCAM ou porção deste edo efeito terapêutico ou profiláctico particular a ser al-cançado, e (b) das limitações inerentes na técnica de comporum tal anticorpo para o tratamento de sensibilidade em indi-víduos.

Uma faixa não limitante exemplar para uma quanti-dade terapeuticamente ou profilaticamente efetiva de um an-ticorpo ou porção de anticorpo da invenção é 0,025 a 50mg/kg, mais preferivelmente 0,1 a 50 mg/kg, mais preferivel-mente 0,1-25, 0,1 a 10 ou 0,1 a 3 mg/kg. Em algumas modali-dades, uma formulação contém 5 mg/mL de anticorpo em um tam-pão de 20 mM de acetato de sódio, pH 5,5, 140 mM de NaCl, e0,2 mg/mL de polissorbato 80. Em outras modalidades, umaformulação contém 10 mg/ml de anticorpo em 2,73 mg/ml detriidrato de acetato de sódio, 45 mg/ml de manitol, 0,02mg/ml de diidrato de EDTA de dissódio, 0,2 mg/ml de polis-sorbato 80, ajustados para pH 5,5 com ácido acético glacial,por exemplo, para uso intravenoso. Em outras modalidades,uma formulação contém 50 mg/ml de anticorpo, 2,73 mg/ml detriidrato de acetato de sódio, 45 mg/ml de manitol, 0,02mg/ml de diidrato de EDTA dissódio, 0,4 mg/ml de polissorba-to 80, ajustados para pH 5,5 com ácido acético glacial, porexemplo, para uso subcutâneo ou intradérmico. Será observa-do que os valores de dosagem podem variar com o tipo e gra-vidade da condição a ser aliviada. Deve ser também entendi-do que para qualquer indivíduo particular, regimes de dosa-gem específicos deveriam ser ajustados com o passar do tempode acordo com a necessidade individual e o julgamento pro-fissional da pessoa que administra ou supervisiona a admi-nistração das composições, e que as faixas de dosagem apre-sentadas aqui são exemplares somente e não é pretendido li-mitarem o escopo ou prática da composição reivindicada.

Outro aspecto da presente invenção fornece kitsque compreendem um anticorpo anti-MAdCAM ou porção de anti-corpo da invenção ou uma composição que compreende um talanticorpo com um agente anti-fibrótico como descrito aqui.Um kit pode incluir, além do anticorpo ou composição e doagente anti-fibrótico, outros agentes terapêuticos ou diag-nósticos. Um kit também pode incluir instruções para uso emum método diagnóstico ou terapêutico.

Terapia de Gene

Os anticorpos empregados na combinação da invençãopodem ser administrados a um paciente em necessidade destespor terapia de gene. A terapia ode ser ou in vivo ou ex vi-νο. Em uma modalidade preferida, as moléculas de ácido nu-cléico que codificam tanto uma cadeia pesada quanto uma ca-deia leve são administradas a um paciente. Em uma modalidademais preferida, as moléculas de ácido nucléico são adminis-tradas tal que elas sejam estavelmente integradas em cromos-somos de células B porque estas células são especializadaspara produzir anticorpos. Em uma modalidade preferida, ascélulas B precursoras são transfectadas ou infectadas ex vi-vo e re-transplantadas em um paciente em necessidade deste.

Em outra modalidade, as células precursoras B ou outras cé-lulas são infetadas in vivo empregando um virus recombinanteconhecido por infectar o tipo de célula de interesse. Osvetores tipicos empregados para terapia de gene incluem Ii-possomas, plasmideos e vetores viróticos. Os vetores viró-ticos exemplares são retrovirus, adenovirus e virus adenoas-sociados. Após a infecção ou in vivo ou ex vivo, os níveisde expressão de anticorpo podem ser monitorados tomando-seuma amostra do paciente tratado e empregado qualquer imuno-ensaio conhecido na técnica ou descrito aqui.

Em uma modalidade preferida, o método de terapiade gene compreende as etapas de administrar uma molécula deácido nucléico isolada codificando a cadeia pesada ou umaporção de ligação de antígeno desta de um anticorpo anti-MAdCAM e expressando a molécula de ácido nucléico. Em outramodalidade, o método de terapia de gene compreende as etapasde administrar uma molécula de ácido nucléico isolada codi-ficando a cadeia leve ou uma porção de ligação de antígenodesta de um anticorpo anti-MAdCAM e expressando a moléculade ácido nucléico. Em um método mais preferido, o método deterapia de gene compreende as etapas de administração de umamolécula de ácido nucléico isolada que codifica a cadeia pe-sada ou uma porção ligação de antigeno desta e uma moléculade ácido nucléico isolada codificando a cadeia leve ou aporção ligação de antigeno desta de um anticorpo anti-MAdCAMda invenção e expressando as moléculas de ácido nucléico. Ométodo de terapia de gene também pode compreender a etapa deadministrar outro antiinflamatório ou agente imunomodulador.

Inibição de adesão dependente de Oi4P7-MAdCAM poranticorpo anti-MAdCAM:

A invenção também fornece a combinação com um a-gente anti-fibrótico de um anticorpo anti-MAdCAM que ligaMAdCAM e inibe a ligação e adesão de a4p7-integrina trans-portando células para MAdCAM ou outros ligandos cognatos,tal como L-selectina, para MAdCAM. Em uma modalidade prefe-rida, o MAdCAM é humano e está ou em uma forma solúvel, ouexpresso na superfície de uma célula. Em outra modalidadepreferida, o anticorpo anti-MAdCAM é um anticorpo humano.

Em outra modalidade, o anticorpo ou porção deste inibe a li-gação entre disso α4β7 e MAdCAM com um valor de IC50 de nãomais do que 50 NM. Em uma modalidade preferida, o valor deIC50 é não mais do que 5 NM. Em uma modalidade mais prefe-rida, o valor de IC50 é menos do que 5 NM. Em uma modalida-de mais preferida, o valor de IC50 é menos do que 0,05yg/mL, 0,04 ug/mL ou 0,03 ug/mL. Em outra modalidade prefe-rida o valor de IC50 é menor do que 0,5 pg/mL, 0,4 μg/mL ou0,3 μg/mL. O valor de IC5o pode ser medido por qualquer mé-todo conhecido na técnica. Tipicamente, um valor de IC5opode ser medido por ELISA ou ensaio de adesão. Em uma moda-lidade preferida, o valor de IC50 é medido por ensaio de a-desão que usa ou células ou tecido que nativamente expressamMAdCAM ou células ou tecidos que foram construído para ex-pressar MAdCAM.

A menos que de outro modo definido aqui, os termostécnicos e científicos empregados com relação à presente in-venção terão os significados que são geralmente compreendi-dos por aqueles de experiência ordinária na técnica. Alémdisso, a menos que de outro modo exigido pelo contexto, ostermos singulares deverão inclui pluralidades e termos plu-rais deverão incluir o singular. Geralmente, as nomenclatu-ras empregadas com relação à, e técnicas de, cultura de cé-lula e tecido, biologia molecular, imunologia, microbiologi-a, genéticas, proteína e química de ácido nucléico e hibri-dização descritas aqui são aquelas bem conhecidas e geral-mente empregadas na técnica. Os métodos e técnicas da pre-sente invenção são geralmente realizados de acordo com osmétodos convencionais conhecidos na técnica e como descritoem várias referências gerais e mais específicas que são ci-tadas e descritas ao longo da especificação presente a menosque de outro modo indicado. Veja, por exemplo, Sambrook eoutros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2- edição,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,N.Y. (1989) e Ausubel e outros, Current Protocols in Molecu-lar Biology, Greene Publishing Associates (1992), e Harlow eLane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990), que estãoaqui incorporados por referência. As técnicas de purifica-ção e reações enzimáticas são realizadas de acordo com asespecificações de fabricante, como geralmente realizado naarte ou como descrito aqui. As técnicas padrões são empre-gadas para sínteses químicas, análises químicas, preparaçãofarmacêutica, formulação, e liberação, e tratamento de paci-entes.

O termo "polipeptídeo" abrange proteínas nativasou artificiais, fragmentos de proteína e análogos de poli-peptídeo de uma seqüência de proteína. Um polipeptídeo podeser monomérico ou polimérico.

0 termo "proteína isolada" ou "polipeptídeo isola-do" é uma proteína ou polipeptídeo que em virtude de sua o-rigem ou fonte de derivação (1) não é associado com compo-nentes naturalmente associados que os acompanham em seu es-tado nativo, (2) está livre de outras proteínas das mesmasespécies (3) é expresso por uma célula de uma espécie dife-rente, ou (4) não é de ocorrência natural. Desse modo, umpolipeptídeo que é quimicamente sintetizado ou sintetizadoem um sistema celular diferente da célula da qual ele natu-ralmente origina será "isolado" de seus componentes natural-mente associados. Uma proteína também pode ser tornadasubstancialmente livre de componentes naturalmente associa-dos através de isolamento, empregando técnicas de purifica-ção de proteína bem conhecidas na técnica.

Uma proteína ou polipeptídeo é "substancialmentepura", "substancialmente homogênea" ou "substancialmente pu-rificado" quando pelo menos cerca de 60 a 75% de uma amostraexibe uma única espécie de polipeptideo. O polipeptideo ouproteína pode ser monomérico ou multimérico. Um polipepti-deo ou proteína substancialmente pura incluirá tipicamentecerca de 50%, 60%, 70%, 80% ou 90% e peso/peso de uma amos-tra de proteína, mais geralmente cerca de 95%, e preferivel-mente será mais de 99% puro. A pureza ou homogeneidade deproteína pode ser indicada por vários meios bem conhecidosna técnica, tal como eletroforese de gel de poliacrilamidade uma amostra de proteína, seguido por visualização de umaúnica banda de polipeptideo ao manchar o gel com uma manchaconhecida na técnica. Para certos propósitos, a resoluçãomais elevada pode ser fornecida empregando-se HPLC ou outrosmeios bem conhecidos na técnica para purificação.

O termo "fragmento de polipeptideo" como empregadoaqui se refere a um polipeptideo que tem uma deleção amino-terminal e/ou carbóxi-terminal, porém onde a seqüência deaminoácido restante é idêntica às posições correspondentesna seqüência de ocorrência natural. Em algumas modalidades,os fragmentos são pelo menos 5, 6, 8 ou 10 aminoácidos lon-gos. Em outras modalidades, os fragmentos são pelo menos 14aminoácidos longos, mais preferivelmente pelo menos 20 ami-noácidos longos, normalmente pelo menos 50 aminoácidos lon-gos, ainda mais preferivelmente pelo menos 70, 80, 90, 100,150 ou 200 aminoácidos longos.

O termo "análogo de polipeptideo" como empregadoaqui se refere a um polipeptideo que compreende um segmentode pelo menos 25 aminoácidos que tem identidade substanciala uma porção de uma seqüência de aminoácido e que tem pelomenos uma das seguintes propriedades: (1) ligação especificaa MAdCAM sob condições de ligação adequadas, (2) capacidadede inibir a ligação de α4β7 integrina e/ou L-selectina aMAdCAM, ou (3) capacidade de reduzir a expressão de superfí-cie de célula de MAdCAM in vitro ou in vivo. Tipicamente,os análogos de polipeptídeo compreendem uma substituição deaminoácido conservadora (ou inserção ou deleção) com respei-to à seqüência de ocorrência natural. Os análogos tipica-mente são pelo menos 20 aminoácidos longos, preferivelmentepelo menos 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 ou 200 aminoácidoslongos ou mais longos, e podem freqüentemente ser tão longoquanto um polipeptídeo de ocorrência natural de tamanho na-tural. Uma "imunoglobulina" é uma molécula tetramérica. Emuma imunoglobulina de ocorrência natural, cada tetrâmero écomposto de dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo,cada par tendo uma cadeia "leve" (cerca de 25 kDa) e uma ca-deia "pesada" (cerca de 50-70 kDa). A porção amino-terminalde cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a110 ou mais aminoácidos principalmente responsável pelo re-conhecimento de antígeno. A porção carboxi-terminal de cadacadeia define uma região constante principalmente responsá-vel pela função efetora. As cadeias leves humanas são clas-sificadas como cadeias leves κ e λ. As cadeias pesadas sãoclassificadas como μ, δ, γ, α, ou ε, e define o isótipo doanticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA, e IgE, respectivamente.Dentro das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis econstantes são unidas por uma região "J" de cerca de 12 oumais aminoácidos, com a cadeia pesada também incluindo umaregião "D" de cerca de 10 ou mais aminoácidos. Geralmenteveja, Fundamental Immunology, Capitulo 7 (Paul, W., ed., 2-edição, Raven Press, N. Y. (1989)) (incorporado por referên-cia em sua totalidade para todos os propósitos). As regiõesvariáveis de cada cadeia leve/pesada formam o sitio de liga-ção de anticorpo tal que uma imunoglobulina intacta tenhadois sítios de ligação.

As cadeias de imunoglobulina exibem a mesma estru-tura geral de regiões de estrutura relativamente conservadas(FR) unidas por três regiões hipervariáveis, também chamadasregiões ou CDRs de determinação de complementaridade. OsCDRs das duas cadeias de cada par são alinhados pelas regi-ões de estrutura para formar um sítio de ligação específicode epítopo. Da terminação N a terminação C, ambas cadeiasleves e pesadas incluem os domínios FRl, CDRl, FR2, CDR2,FR3, CDR3 e FR4. 0 desígnio dos aminoácidos para cada domí-nio é de acordo com as definições Kabat, Sequences of Prote-ins of Immunological Interest (National Institutes of Heal-th, Bethesda, Md. (1987 e 1991)), ou Chothia & Lesk, J. MoI.Biol., 196:901-917 (1987); Chothia e outros, Nature, 342:878-883(1989), cada dos quais está aqui incorporado por refe-rência em sua totalidade.

Um "anticorpo" se refere a uma imunoglobulina in-tacta ou a uma porção ligação de antígeno desta que competecom o anticorpo intacto para ligação específica. Em algumasmodalidades, um anticorpo é uma porção de ligação de antíge-no deste. As porções de ligação de antígeno podem ser pro-duzidas por técnicas de DNA recombinantes ou por clivagemenzimática ou quimica de anticorpos intactos. As porções deligação de antigeno incluem, entre outras, Fab, Fab',F (ab' ) 2, Fv, dAb, e fragmentos de região de determinação decomplementaridade (CDR), anticorpos de cadeia única (scFv),anticorpos quiméricos, diacorpos e polipeptideos que contêmpelo menos uma porção de uma imunoglobulina que é suficientepara conceder ligação de antigeno especifico ao polipeptí-deo. Um fragmento de Fab é um fragmento monovalente queconsiste nos domínios xVL, VH, CL e CHI; um fragmento deF(ab)2 é um fragmento bivalente que compreende dois fragmen-tos Fab unidos por uma ponte de dissulfeto na região de do-bradiça; um fragmento Fd consiste nos domínios de VH e CHI;um fragmento de Fv consiste nos domínios de VL e VH de umúnico braço de um anticorpo; e um fragmento de dAb (Ward eoutros, Naturer 341:544-546(1989)) consiste em um domínio deVH.

Como empregado aqui, um anticorpo que é referidocomo, por exemplo, 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.34.2, 6.67.1,6.77.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 ou 9.8.2, é um anticorpo mo-noclonal que é produzido pelo hibridoma do mesmo nome. Porexemplo, o anticorpo 1.7.2 é produzido pelo hibridoma 1.7.2.Um anticorpo que é referido como 6.22.2-mod, 6.34.2-mod,6.67.1-mod, 6.77.1-mod ou 7.26.4-mod é um anticorpo monoclo-nal cuja seqüência foi modificada de sua origem correspon-dente por mutagênese direcionada ao sítio.

Um anticorpo de cadeia única (scFv) é um anticorpono qual as regiões de VL e VH são emparelhadas para formaruma molécula monovalente por um ligador sintético que aspossibilitam serem feitas como uma única cadeia de proteína(Bird e outros, Science, 242:423-426 (1988) e Huston e ou-tros, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 85:5879-5883 (1988)). Osdiacorpos são anticorpos bivalentes, biespecíficos nos quaisos domínios de VH e VL são expressos em uma única cadeia depolipeptídeo, porém empregando um ligador que é muito curtopara permitir emparelhar entre os dois domínios na mesma ca-deia, desse modo forçando os domínios a emparelhar com domí-nios complementares de outra cadeia e criando dois sítios deligação de antígeno (veja, por exemplo, Holliger, P., e ou-tros, Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A., 90: 6444-6448 (1993) ePoljak, R. J., e outros, Structuref 2:1121-1123 (1994)). Umou mais CDRs de um anticorpo da invenção podem ser incorpo-rados em uma molécula covalentemente ou não covalentementepara torná-las uma imunoadesina que especificamente se ligaa MAdCAM. Uma imunoadesina pode incorporar o CDR(s) comoparte de uma cadeia de polipeptídeo maior, possa covalente-mente ligar o CDR(s) a outra cadeia de polipeptídeo, ou podeincorporar o CDR(s) não covalentemente. Os CDRs permitemque a imunoadesina especificamente se ligue a um antígenoparticular de interesse.

Um anticorpo pode ter um ou mais sítios de liga-ção. Se houver mais do que um sítio de ligação, os sítiosde ligação podem ser idênticos, um ao outro ou podem ser di-ferentes. Por exemplo, uma imunoglobulina de ocorrência na-tural tem dois sítios de ligação idênticos, um anticorpo decadeia única ou fragmento de Fab tem um sítio de ligação, aomesmo tempo em que um anticorpo "biespecifico" ou "bifuncio-nal" (diacorpo) tem dois sítios de ligação diferentes.

Um "anticorpo isolado" é um anticorpo que (1) nãoé associado com componentes naturalmente-associados, inclu-indo outros anticorpos naturalmente associados, que os acom-panham em seu estado nativo, (2) é livre de outras proteínasdas mesmas espécies, (3) é expresso por uma célula de umaespécie diferente, ou (4) não ocorre in nature. Os exemplosde anticorpos isolados incluem um anticorpo anti-MAdCAM quefoi purificado por afinidade empregando MAdCAM, um anticorpoanti-MAdCAM que foi produzido por uma hibridoma ou outra li-nhagem de célula in vitro, e um anticorpo anti-MAdCAM humanoderivado de um mamífero ou planta transgênica.

Como empregado aqui, o termo "anticorpo humano"significa um anticorpo no qual as seqüências de região vari-ável e constante são seqüências humanas. 0 termo abrangeanticorpos com seqüências derivadas de genes humanos, porémque foram alterados, por exemplo, para diminuir possível i-munogenicidade, aumentar a afinidade, eliminar as cisteínasou sítios de glicosilação que podem causar duplicação inde-sejável, etc. 0 termo abrange tais anticorpos recombinante-mente produzidos em células não humanas que poderiam conce-der glicosilação não típica de células humanas. 0 termotambém abrange anticorpos que foram elevados em um camundon-go transgênico que compreende algum ou todo loco de cadeiapesada e leve de imunoglobulina humana.

Em um aspecto, a invenção fornece um anticorpo hu-manizado. Em algumas modalidades, o anticorpo humanizado éum anticorpo que é derivado de uma espécie não humana nasquais certos aminoácidos na estrutura e domínios constantesdas cadeias pesadas e leves foram mutados para evitar ou ab-rogar uma resposta imune em humanos. Em algumas modalida-des, um anticorpo humanizado pode ser produzido fundindo-seos domínios constantes de um anticorpo humano com os domí-nios variáveis de uma espécie não humana. Os exemplos decomo fazer anticorpos humanizados pode ser encontrado nasPatentes dos Estados Unidos Nos. 6.054.297, 5.886.152 e5.877.2 93. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-MAdCAMhumanizado da invenção inclui a seqüência de aminoácido deuma ou mais regiões de estrutura de um ou mais anticorposanti-MAdCAM humanos da invenção.

Em outro aspecto, a invenção inclui o uso de um"anticorpo quimérico". Em algumas modalidades o anticorpoquimérico se refere a um anticorpo que contém uma ou maisregiões de um anticorpo e uma ou mais regiões de um ou maisoutros anticorpos. Em uma modalidade preferida, um ou maisdo CDRs são derivados de um anticorpo anti-MAdCAM humano dainvenção. Em uma modalidade mais preferida, todos CDRs sãoderivados de um anticorpo anti-MAdCAM humano da invenção.

Em outra modalidade preferida, os CDRs de mais de um anti-corpo anti-MAdCAM humano da invenção são misturados e empa-relhados em um anticorpo quimérico. Por exemplo, um anti-corpo quimérico pode compreender um CDRl da cadeia leve deum primeiro anticorpo anti-MAdCAM humano que pode ser combi-nado com CDR2 e CDR3 da cadeia leve de um segundo anticorpoanti-MAdCAM humano, e o CDRs da cadeia pesada podem ser de-rivados de um terceiro anticorpo anti-MAdCAM. Além disso,as regiões de estrutura podem ser derivadas de um dos mesmosanticorpos anti-MAdCAM, de um ou mais anticorpos diferentes,tal como um anticorpo humano, ou de um anticorpo humanizado.

Um "anticorpo neutralizante", "um anticorpo inibi-dor" ou anticorpo antagonista é um anticorpo que inibe a li-gação de α4β7 ou células expressando α4β7, ou qualquer outroligando cognato ou células expressando ligando cognato, aMAdCAM por pelo menos cerca de 20%. Em uma modalidade pre-ferida, o anticorpo reduz ou inibe a ligação de α4β7 integri-na ou células expressando α4β7 a MAdCAM em pelo menos 40%,mais preferivelmente antes em 60%, ainda mais preferivelmen-te em 80%, 85%, 90%, 95% ou 100%. A redução da ligação podeser medida por qualquer meio conhecido por alguém de experi-ência ordinária na técnica, por exemplo, como medido em umensaio de ligação competitivo in vitro. Um exemplo de medi-ção da redução da ligação de células expressando α4β7 a MAd-CAM é apresentado no Exemplo I.

Os fragmentos ou análogos de anticorpos podem serpreparados facilmente por aqueles de experiência ordináriana técnica seguindo os ensinamentos desta especificação. Asamino ou carbóxi terminações preferidas, de fragmentos ouanálogos ocorrem próximas aos limites dos domínios funcio-nais. Os domínios estruturais e funcionais podem ser iden-tifiçados por comparação dos dados da seqüência de nucleotí-deo e/ou aminoácido com as bases de dados da seqüência doproprietário a pública. Preferivelmente, os métodos de com-paração computadorizados são empregados para identificar osmotifs de seqüência ou domínios de conformação de proteínapreditos que ocorrem em outras proteínas de estrutura e/oufunção conhecida. Os métodos para identificar as seqüênciasde proteína que dobram em uma estrutura tridimensional co-nhecida são conhecidos (Bowie e outros, Science, 253:164(1991)).

O termo "k0ff" se refere a constante do índice dedissociação de um anticorpo do complexo de anticor-po/antígeno.

O termo "Kd" se refere à constante de dissociaçãode uma interação de anticorpo-antígeno particular. Um anti-corpo é dito ligar um antígeno quando a constante de disso-ciação é < 1 μΜ, preferivelmente < 100 nM e mais preferivel-mente < 10 nM. O termo "epítopo" inclui qualquer determi-nante de proteína capaz de ligação específica a uma imuno-globulina ou receptor de célula T ou de outro modo interagircom uma molécula. Os determinantes epitópicos normalmenteconsistem em agrupamentos de superfície quimicamente ativosde moléculas tal como aminoácidos ou cadeias laterais decarboidrato e normalmente têm três características estrutu-rais dimensionais específicas, como também característicasde carga específicas. Um epítopo pode ser "linear" ou "con-formacional". Em um epítopo linear, todos os pontos de in-teração, entre a proteína e a molécula de interação (tal co-mo um anticorpo) ocorrem linearmente ao longo da seqüênciade aminoácido primária da proteína. Em um epítopo conforma-cional, os pontos de interação ocorrem através de resíduosde aminoácido na proteína que é separada de uma outra.Como empregado aqui, os vinte aminoácidos conven-cionais e as suas abreviações seguem uso convencional. VejaImmunology - A Synthesis (2- Edição, E.S. Golub e D. R. Gren,Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)) que estáaqui incorporado por referência. Os estereoisômeros (porexemplo, D-aminoácidos) dos vinte aminoácidos convencionais,aminoácidos não naturais tal como aminoácidos a, a-dissubstituidos, aminoácidos de N-alquila, ácido lático, eoutros aminoácidos convencionais podem também ser componen-tes adequados para polipeptideos da presente invenção. Osexemplos de aminoácidos não convencionais incluem: 4-hidroxiprolina, γ-carboxiglutamato, ε-Ν,N,N-trimetilisina,ε-Ν-acetilisina, 0-fosfoserina, N- acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilistidina, 5-hidroxilisina, s-N-metilarginina, e outros aminoácidos similares e ácidos deimino (por exemplo, 4-hidroxiprolina). Na anotação de poli-peptideo empregada aqui, a direção à esquerda é a direçãoamino terminal e a direção à direita é a direção carboxi-terminal, de acordo com a convenção e uso padrão.

0 termo "polinucleotídeo" como referido aqui sig-nifica uma forma polimérica de nucleotideos de pelo menos 10bases em comprimento, ribonucleotideos ou deoxinucleotideosou uma forma modificada de qualquer tipo de nucleotideo. 0termo inclui formas de filamento único ou duplo de DNA.

0 termo "polinucleotídeo isolado" como empregadoaqui deve significar um polinucleotídeo de origem genômica,cDNA, ou sintética ou algumas combinações destes, que emvirtude de sua origem o "polinucleotídeo isolado" (1) não éassociado com todo ou uma porção de um polinucleotideo noqual o "polinucleotideo isolado" é encontrado in nature, (2)é operavelmente ligado a um polinucleotideo que não está li-gado in nature, ou (3) não ocorre in nature como parte deuma seqüência maior.

O termo "oligonucleotídeo" referido aqui, incluinucleotideos de ocorrência natural e modificados, ligadosjuntos por ocorrência natural, e ligações de oligonucleotí-deos de ocorrência não natural. Os oligonucleotideos são umsubgrupo de polinucleotideo que geralmente compreende umcomprimento de 200 bases ou menos. Preferivelmente os oli-gonucleotideos são 10 a 60 bases em comprimento e preferi-velmente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20 a 40 bases emcomprimento. Os oligonucleotideos são normalmente de fila-mento único, por exemplo, para sondas; embora os oligonucle-otideos possam ser de filamento duplo, por exemplo, para usona construção de um mutante de gene. Os oligonucleotideosda invenção podem ser oligonucleotideos de ou sentido ou an-ti-sentido.

O termo "nucleotideos de ocorrência natural" refe-rido aqui inclui deoxirribonucleotideos e ribonucleotideos.O termo "nucleotideos modificados" referidos aqui inclui nu-cleotideos com grupos de açúcar modificados ou substituídose outros. O termo "ligações de oligonucleotídeo" referidoaqui inclui ligações de oligonucleotideos tal como fosforo-tiotato, fosforoditioato, fosforoselenoato, fosforodiseleno-ato, fosforoanilotioato, fosforaniladato, fosforoamidato, eoutros. Veja, por exemplo, LaPlanche e outros, Nucl. AcidsRes. 14:9081 (1986); Stec e outros, J. Am. Chem. Soe.106:6077(1984); Stein e outros, Nucl. Aeids Res.,16:3209(1988); Zon e outros, Anti-Caneer Drug Design6:539(1991); Zon e outros, Oligonucleotides and Analogues: APraetical Approach, pp. 87-108 (F. Eekstein, Ed., Oxford U-niversity Press, Oxford England(1991)); Stee e outros, Pa-tente U.S. No. 5.151.510; Uhlmann e Peyman, Chemical Revi-ews, 90:543(1990), as descrições das quais desse modo incor-poradas por referência. Um oligonucleotideo pode incluir umrótulo para detecção, se desejado.

Seqüências "operavelmente ligadas" incluem ambasas seqüências de controle de expressão que são contíguas como gene de interesse e seqüências de controle de expressãoque agem em trans ou a uma distância para controlar o genede interesse. 0 termo "seqüência de controle de expressão"como empregado aqui se refere às seqüências de polinucleotí-deo que são necessárias para efetuar a expressão e proces-sando de seqüências de codificação às quais eles estão liga-dos. As seqüências de controle de expressão incluem seqüên-cias de iniciação, terminação, promotoras e realçadoras detranscrição apropriadas; sinais de processamento de RNA efi-ciente tal como sinais de união e poliadenilação; seqüênciasque estabilizam o mRNA citoplásmico; seqüências que realçama eficiência de translação (isto é, seqüência de consensoKozak); seqüências que realçam a estabilidade de proteína; equando desejado, seqüências que realçam a secreção de prote-ína. A natureza de tais seqüências de controle difere de-pendendo do organismo hospedeiro; em procariotas, tais se-qüências de controle geralmente incluem promotor, sítio deligação ribossômica, e seqüência de terminação de transcri-ção; em eucariotas, geralmente, tais seqüências de controleincluem os promotores e seqüência de terminação de transcri-ção. 0 termo "seqüências de controle" é pretendido incluir,a um mínimo, todos os componentes cuja presença é essencialpara expressão e processando, e também pode incluir compo-nentes adicionais cuja presença é vantajosa, por exemplo,seqüências condutoras e seqüências de par de fusão.

O termo "vetor", como empregado aqui, é pretendidoreferir-se a uma molécula de ácido nucléico capaz de trans-portar outro ácido nucléico ao qual ela está ligada. Um ti-po de vetor é um "plasmídeo", que se refere a uma alça deADN de filamento duplo circular na qual os segmentos de DNAadicionais podem ser ligados. Outro tipo de vetor é um ve-tor viral, onde os segmentos de DNA adicionais podem ser li-gados no genoma viral. Certos vetores são capazes de repli-cação autônoma em uma célula hospedeira na qual eles são in-troduzidos (por exemplo, vetores bacterianos tendo uma ori-gem bacteriana de vetores de mamífero epissômicos e de re-plicação). Outros vetores (por exemplo, vetores de mamífe-ros não epissômicos) podem ser integrados no genoma de umacélula hospedeira sob introdução na célula hospedeira, edesse modo são replicados junto com o genoma hospedeiro.

Além disso, certos vetores são capazes de direcionar a ex-pressão de genes aos quais eles estão operativamente liga-dos. Tais vetores são referidos aqui como "vetores de ex-pressão recombinante" (ou simplesmente, "vetores de expres-são"). Em geral, os vetores de expressão de utilidade emtécnicas de DNA recombinante estão freqüentemente na formade plasmideos. Na presente especificação, "plasmídeo" e"vetor" podem ser empregados alternadamente uma vez que oplasmídeo é a forma mais comumente empregada de vetor. En-tretanto, a invenção é pretendida incluir tais outras formasde vetores de expressão, tal como vetores virais (por exem-plo, retrovirus defeituoso de replicação, adenovírus e ade-novírus associado), que exerçam funções equivalentes.

O termo "célula hospedeira recombinante" (ou sim-plesmente "célula hospedeira"), como empregado aqui, é pre-tendido se referir a uma célula na qual um vetor de expres-são recombinante tenha sido introduzido. Deveria ser enten-dido que tais termos são pretendidos referir não somente àcélula objetivo particular, porém à progênie de uma tal cé-lula. Porque certas modificações podem ocorrer em geraçõessucessivas devido à mutação ou influências ambientais, talprogênie não pode, na realidade, ser idêntico à célula deorigem, porém ainda é incluída dentro do escopo do termo"célula hospedeira" como empregado aqui.

O termo "seletivamente hibridizar" referido aquisignifica meios para detectavelmente e especificamente unir.Os polinucleotídeos, oligonucleotídeos e fragmentos destesde acordo com a invenção, hibridizam para filamentos de áci-do nucléico sob condições de lavagem e hibridização que mi-nimizam as quantidades apreciáveis de ligação detectável aosácidos nucléicos não específicos. "Rigorosidade elevada" oucondições "altamente rigorosas" podem ser empregadas paraalcançar as condições de hibridização seletiva como conheci-do na técnica e descrito aqui. Um exemplo de "rigorosidadeelevada" ou condições "altamente rigorosas" é um método paraincubar um polinucleotideo com outro polinucleotído, onde umpolinucleotideo pode ser anexado a uma superfície sólida talcomo uma membrana, em um tampão de hibridização de 6X deSSPE ou SSC, 50% de formamida, 5X de reagente de Denhardt,0,5% de SDS, 100 ug/ml de DNA de esperma de salmão desnatu-rado, fragmentado a uma temperatura de hibridização de 42°Cdurante 12-16 horas, em seguida lavando-se duas vezes a 55°Cempregando um tampão de lavagem de IX de SSC, 0,5% de SDS.Também veja, Sambrook e outros, supra, pp. 9,50-9,55.

O termo "percentual da identidade de seqüência" nocontexto de seqüências de nucleotídeo se refere aos resíduosem duas seqüências que são iguais quando alinhados para cor-respondência máxima. 0 comprimento de comparação de identi-dade de seqüência pode estar acima de uma extensão de pelomenos cerca de nove nucleotídeos, normalmente pelo menoscerca de 18 nucleotídeos, mais normalmente pelo menos cercade 24 nucleotídeos, tipicamente pelo menos cerca de 28 nu-cleotídeos, mais tipicamente pelo menos cerca de 32 nucleo-tídeos, e preferivelmente pelo menos cerca de 36, 48 ou maisnucleotídeos. Há vários algoritmos diferentes conhecidos naarte que podem ser empregados para medir identidade de se-qüência de nucleotídeo. Por exemplo, as seqüências de poli-nucleotideo podem ser comparadas empregando FASTA, Gap ouBestfit que são programas em Wisconsin Package Versão 10.3,Accelrys, San Diego, CA. FASTA, que inclui, por exemplo, osprogramas FASTA2 e FASTA3, fornecem alinhamentos e percentu-al de identidade de seqüência das regiões do melhor sobrepo-sição entre as seqüências de indagação e de pesquisa (Pear-son, Methods Enzymol., 183: 63-98 (1990); Pearson, MethodsMol. Biol., 132: 185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol.,266: 227- 258 (1996); Pearson, J. Mo/. Biol., 276: 71-84(1998); aqui incorporados por referência). A menos que deoutro modo especificado, os parâmetros default para um pro-grama particular ou algoritmo são empregados. Por exemplo,o percentual de identidade de seqüência entre seqüências denucleotideo pode ser determinado empregando FASTA com seusparâmetros default (um tamanho de palavra de 6 e o fatorNOPAM para a matriz de classificação) ou empregando Gap comseus parâmetros default quando fornecido em Wisconsin Packa-ge Versão 10.3, aqui incorporado por referência.

Uma referência para uma seqüência de nucleotideoabrange seu complemento a menos que de outro modo especifi-cado. Desse modo, uma referência para uma molécula de ácidonucléico que tem uma seqüência particular deveria ser enten-dida abranger seu filamento complementar, com sua seqüênciacomplementar.

Na técnica de biologia molecular, os pesquisadoresusam os termos "percentual de identidade de seqüência","percentual de similaridade de seqüência" e "percentual dehomologia de seqüência" alternadamente. Nesta pedido, estestermos devem ter o mesmo significado com respeito às seqüên-cias de nucleotideo somente.

O termo "similaridade substancial" ou "similarida-de de seqüência substancial", quando se referindo a um ácidonucléico ou fragmento deste, indica que, quando otimamentealinhados com inserções ou deleções de nucleotideo apropria-das com outro ácido nucléico (ou seu filamento complemen-tar), há identidade de seqüência de nucleotideo em pelo me-nos cerca de 85%, preferivelmente pelo menos cerca de 90%, emais preferivelmente pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%ou 99% das bases de nucleotideo, quando medido por qualqueralgoritmo bem conhecido de identidade de seqüência, tal comoFASTA, BALST ou Gap, como descrito acima.

Como aplicado aos polipeptideos, o termo "identi-dade substancial" significa que duas seqüências de peptideo,quando idealmente alinhadas, tal como pelos programas GAP ouBESTFIT empregando pesos de abertura default, compartilhampelo menos 75% ou 80% de identidade de seqüência, preferi-velmente pelo menos 90% ou 95% de identidade de seqüência,ainda mais preferivelmente pelo menos 98% ou 99% de identi-dade de seqüência. Preferivelmente, as posições de resíduoque não são idênticas diferem por substituições de aminoáci-do conservadoras. Uma "substituição de aminoácido conserva-dora" é uma na qual um resíduo de aminoácido é substituídopor outro resíduo de aminoácido que tem uma cadeia lateral(grupo R) com propriedades químicas similares (por exemplo,carga ou hidrofobicidade). Em geral, uma substituição deaminoácido conservadora substancialmente não alterará aspropriedades funcionais de uma proteína. Em casos onde duasou mais seqüências de aminoácido diferem uma da outra porsubstituições conservadoras, o percentual de identidade deseqüência ou grau de similaridade pode ser ajustado para ci-ma para corrigir quanto à natureza conservadora da substitu-ição. Os meios de fazer este ajuste são bem conhecidos poraqueles de experiência na técnica. Veja, por exemplo, Pear-son, Methods Mol. Biol., 24: 307-31 (1994), aqui incorporadopor referência. Os exemplos de grupos de aminoácidos quetêm cadeias laterais com propriedades químicas similares in-cluem 1) cadeias laterais alifáticas: glicina, alanina, va-lina, leucina e isoleucina; 2) cadeias laterais de hidroxilaalifática: serina e treonina; 3) cadeias laterais contendoamida: asparagina e glutamina; 4) correntes laterais aromá-ticas: fenilalanina, tirosina, e triptofan; 5) correntes la-terais básicas: lisina, arginina, e histidina; e 6) cadeiaslaterais contendo enxofre são cisteína e metionina; Os gru-pos de substituição de aminoácidos conservadores preferidossão: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, Iisi-na-arginina, alanina-valina, glutamato-aspartato, e aspara-gina-glutamina.

Alternativamente, uma substituição conservadora équalquer alteração que tem um valor positivo na matriz deprobabilidade de Iog PAM250 descrita em Gonnet e outros,Science, 256: 1443-45 (1992), aqui incorporado por referên-cia. Uma substituição "moderadamente conservadora" é qual-quer alteração que tem um valor não negativo na matriz deprobabilidade de Iog PAM250.

A similaridade de seqüência para polipeptídeos étipicamente medida empregando software de análise de seqüên-cia. 0 software de análise de proteína compara seqüênciassimilares empregando medições de similaridade designadas pa-ra várias substituições, deleções e outras modificações, in-cluindo substituições de aminoácido conservadoras. Por e-xemplo, GCG contém programas tal como "Gap" e "Bestfit" quepodem ser empregados com parâmetros default para determinara homologia de seqüência ou identidade de seqüência entre ospolipeptideos intimamente relacionados, tal como polipeptí-deos homólogos de espécies diferentes de organismos ou entreuma proteína tipo silvestre e uma muteína desta. Veja, porexemplo, Wisconsin package Versão 10.3. As seqüências depolipeptídeo também podem ser comparadas empregando FASTAempregando parâmetros default ou recomendados, um programaWisconsin package Versão 10.3. FASTA (por exemplo, FASTA2 eFAST A3) fornece alinhamentos e percentual de identidade deseqüência das regiões de melhor sobreposição entre as se-qüências de indagação e de pesquisa (Pearson (1990); Pearson(2000)). Outro algoritmo preferido quando comparando uma se-qüência da invenção a um banco de dados que contém um númerogrande de seqüências de organismos diferentes é o programade computador BLAST, especialmente blastp ou tblastn, empre-gando os parâmetros default. Veja, por exemplo, Altschul eoutros, J. MoI. Biol. 215: 403-410 (1990); Altschul e ou-tros, Nucleic Acids Res. 25:3389-402 (1997); aqui incorpora-do por referência.

0 comprimento de seqüências de polipeptídeo compa-radas com homologia geralmente será pelo menos cerca de 16resíduos de aminoácido, normalmente pelo menos cerca de 20resíduos, mais normalmente pelo menos cerca de 24 resíduos,tipicamente pelo menos cerca de 28 resíduos, e mais preferi-velmente de cerca de 35 resíduos. Ao procurar um banco dedados que contém seqüências de um número grande de organis-mos diferentes, é preferível comparar seqüências de aminoácido.

Como empregado aqui, os termos "rótulo" ou "rotu-lado" se referem a incorporação de outra molécula no anti-corpo. Em uma modalidade, o rótulo é um marcador detectá-vel, por exemplo, incorporação de um aminoácido radiorrotu-lado ou ligação a um polipeptídeo de frações de biotinilaque podem ser detectadas por avidina marcada (por exemplo,estreptavidina que contém um marcador fluorescente ou ativi-dade enzimática que pode ser detectada através de métodosópticos ou colorimétricos). Em outra modalidade, o rótuloou marcador pode ser terapêutico, por exemplo, uma toxina oudroga conjugada. Os vários métodos de rotulação de polipep-tídeos e glicoproteínas são conhecidos na técnica e podemser empregados. Os exemplos de rótulos para polipeptídeosincluem, porém não estão limitados aos seguintes: radioisó-topos ou radionuclídeos (por exemplo, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y,99Tc, 111In, 125I, 131I), rótulos fluorescentes (por exemplo,FITC, rodamina, fósforos de lantanídeo), rótulos enzimáti-cos (por exemplo, rábano picante peroxidase, β-galactosidase, luciferase, alcalina fosfatase), marcadoresquimioluminescentes, grupos de biotinila, epítopos de poli-peptídeo predeterminado reconhecido por um repórter secundá-rio (por exemplo, seqüências de par de zíper de leucina, sí-tios de ligação para anticorpos secundários, domínios de li-gação de metal, rótulos de epitopo), agentes magnéticos, talcomo quelados de gadolinio, toxinas tal como toxina de co-queluxe, taxol, citocalasina B, gramicidina D, brometo deetidio, emetina, mitomicina, etoposideo, tenoposideo, vin-cristina, vinblastina, colquicina, doxorubicina, daunorubi-cina, diona de antracina de diidróxi, mitoxantrona, mitrami-cina, actinomicina D, 1-deidrotestosterona, glicocorticóide,procaina, tetracaina, lidocaina, propranolol, e puromicina eanálogos ou homólogos destes. Em algumas modalidades, osrótulos são fixos por braços espaçadores de vários compri-mentos para reduzir o impedimento estérico potencial.

Claims

1. Combinação de um anticorpo monoclonal anti-MAdCAM ou porção de ligação de antigeno deste, CARACTERIZADOpelo fato de ser com um agente antifibrótico.

2. Combinação, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADA pelo fato de que o agente antif ibrótico é uminibidor de caspase.

3. Combinação, de acordo com a reivindicação 2,CARACTERIZADA pelo fato de que o inibidor de caspase é umcomposto de fórmula I: <formula>formula see original document page 85</formula> Fórmula IOnde A é um aminoácido natural ou não natural deFórmula Ila-i: <formula>formula see original document page 85</formula>B é um átomo de hidrogênio, um átomo de deutério,alquila, cicloalquila, fenila, fenila substituída, naftila,naftila substituída, 2-benzoxazolila, 2-oxazolila substituí-da, (CH2) n-cicloalquila, (CH2) n-fenila, (CH2) n- (fenila substi-tuída) , (CH2)n-(1 ou 2-naftila) , (CH2) „-( 1 ou 2-naftilasubstituída), (CH2) n-(heteroarila) , (CH2) n-(heteroarila subs-tituída), halometila, CO2R12, CONR13R14, CH2ZR15,CH2OCO (arila) , CH2OCO (heteroarila) , ou CH2OPO(R16)R17, onde Zé um átomo de enxofre ou oxigênio, ou B é um grupo de Fórmu-la IIIa-C:<formula>formula see original document page 86</formula>R1 é alquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila,fenila, fenila substituída, fenilalquila, fenilalquila subs-tituída, naftila, naftila substituída, (1 ou 2 nafti-la) alquila, (1 ou 2 naftila)alquila substituída, heteroari-la, heteroarila substituída, (heteroarila)alquila, (heteroa-rila) alquila substituída, Rla(Rlb)N, ou RlcO; eR2 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,(cicloalquila)alquila, fenila, fenila substituída, fenilal-quila, fenilalquila substituída, naftila, naftila substituí-da, (1 ou 2 naftila) alquila, ou (1 ou 2-naftila) alquilasubstituída;E onde:R1a e R1b são independentemente hidrogênio, alqui-la, cicloalquila, (cicloalquila)alquila, fenila, fenilasubstituída, fenilalquila, fenilalquila substituída, nafti-la, naftila substituída, (1 ou 2-naftila)alquila, (1 ou 2-naftila)alquila substituída, heteroarila, heteroarila subs-tituída, (heteroarila)alquila, ou (heteroarila)alquila subs-tituída, com a condição de que Rla e Rlb não possam ambos serhidrogênio;R1c é alquila, cicloalquila, (cicloalquila)alquila,fenila, fenila substituída, fenilalquila, fenilalquila subs-tituída, naftila, naftila substituída, (1 ou 2-naftila)alquila, (1 ou 2-naftila)alquila substituída, hete-roarila, heteroarila substituída, (heteroarila)alquila, ou(heteroarila)alquila substituída;R3 é C1-6 alquila, cicloalquila, fenila, fenilasubstituída, (CH2)nNH2, (CH2)NHCOR9, (CH2)nN(C=NH)NH2,(CH2)mCO2R2, (CH2)mOR10, (CH2)mSR11, (CH2) ncicloalquila,(CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída), (CH2)nU ou 2-naftila) ou (CH2) n (heteroarila), onde heteroarila inclui pi-ridila, tienila, furila, tiazolila, imidazolila, pirazolila,isoxazolila, pirazinila, pirimidila, triazinila, tetrazoli-la, e i.ndolila;R3a é hidrogênio ou metila, ou R3 e R3a consideradosjuntos são -(CH2)d- onde d é um número inteiro de 2 a 6;R4 é fenila, fenila substituída, (CH2) mfenila,(CH2) m(fenila substituída), cicloalquila, ou cicloalquila debenzo-fundido;R5 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, (CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila,(CH2) η (fenila substituída), ou (CH2)nU ou 2-naftila);R6 é hidrogênio, flúor, oxo, alquila inferior, ci-cloalquila, fenila, fenila substituída, naftila,(CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída),(CH2)n(l ou 2-naftila), OR10, SR11, ou NHCOR9;R7 é hidrogênio, oxo (isto é =0), alquila inferi-or, cicloalquila, fenila, fenila substituída, naftila,(CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída),ou (CH2)nU ou 2-naftila);R8 é alquila inferior, cicloalquila,(CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída),(CH2)nU ou 2 - naftila), ou COR9;R9 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, naftila, (CH2) ncicloalquila,(CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída), (CH2)nU ou 2-naftila) , OR12, ou NR13R14;R10 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, naftila, (CH2) ncicloalquila,(CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída), ou (CH2) η (1 ou 2-naftila);R11 é alquila inferior, cicloalquila, fenila, feni-la substituída, naftila, (CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila,(CH2) n (fenila substituída), ou (CH2)nU ou 2-naftila);R12 é alquila inferior, cicloalquila,(CH2) ncicloalquila, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída),ou (CH2)nU ou 2 - naftila);R13 é hidrogênio, alquila inferior, cicloalquila,fenila, fenila substituída, naftila, naftila substituído,(CH2) nCicloalquila, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída),ou (CH2) n (1 ou 2-naftila);R14 é hidrogênio ou alquila inferior; ouR13 e R14 considerado junto formam um anel de cincoa sete membros de carbocíclico ou heterocíclico, tal comomorfolina, ou piperazina N-substituída;R15 é fenila, fenila substituída, naftila, naftilasubstituída, heteroarila, (CH2) nfenila, (CH2) n(fenila substi-tuída) , (CH2) n (1 OU 2-naftila), ou (CH2) n (heteroarila) ;R16 ou R17 são independentemente alquila inferior,cicloalquila, fenila, fenila substituída, naftila, fenilal-quila, fenilalquila substituída, ou (cicloalquila)alquila;R18 e R19 são independentemente hidrogênio, alqui-la, fenila, fenila substituída, (CH2) nfenila, (CH2)n(fenilasubstituída), ou R18 e R19 considerados juntos são -(CH=CH)2-;R20 é hidrogênio, alquila, fenila, fenila substitu-ída, (CH2) nfenila, (CH2) n (fenila substituída) ;R21, R22 e R23 são independentemente hidrogênio, oualquila;X é CH2, (CH2)2, (CH2)3/ ou S;Y1 é O ou NR23;Y2 é CH2, O, ou NR23;a é 0 ou 1 e b é 1 ou2, desde que quando a for 1então b seja 1;c é 1 ou 2, desde que quando c for 1 então a seja- 0 e b seja 1;m é 1 ou 2; eη é 1, 2, 3, ou 4;ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

4. Combinação, de acordo com a reivindicação 3,CARACTERIZADA pelo fato de que o composto de fórmula I é se-lecionado do seguinte grupo de compostos:ácido (3 S)-3-[N-(N'-(2-Flúor-4-lodofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Clorofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2' , 3' , 5' , 6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[Ν-(N1-(2-Bromofenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2 1 , 3 ' , 5 1 , 6 1 -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Fluorfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Trifluormetilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-5-(2', 3',5', 6' -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[Ν-(N1-(I-Antril)Oxamil) Vali-nil ] Amino-5- ( 2 ' ,3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-terc-Butilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Trifluormetilfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',β'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2, 6-DifIuorfenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2' , 3 ' , 5 ' , 6 1 -Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(l-Naftila)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2',3',5',6'-Tetrafluorfenóxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(4-Metoxifenil)Oxamil)Alaninil]Amino-5-(2 ' , 3 ' , 5 1 , 6' -Tetrafluorfenoxi)-4-Oxopentanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Trifluormetilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-terc-Butilmetilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-0xobutanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Benzilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico;ácido (3S)-3-[N-(N'-(2-Fenilfenil)Oxamil)Valinil]Amino-4-Oxobutanóico.

5. Combinação, de acordo com quaisquer das reivin-dicações anteriores, CARACTERIZADA pelo fato de que o anti-corpo anti-MAdCAM ou porção de ligação de antigeno deste éum anticorpo monoclonal humano ou porção de ligação de anti-geno.

6. Combinação, de acordo com a reivindicação 5,CARACTERIZADA pelo fato de que o anticorpo ou porção possuipelo menos uma das seguintes propriedades:(a) se liga às células humanas;(b) tem uma seletividade para MAdCAM sob VCAM oufibronectina de pelo menos 100 vezes;(c) se liga à MAdCAM humana com um Kd de 3 χ IO"10M ou menos; ou(d) inibe a ligação de células de expressão de α4β7à MAdCAM humana.(e) inibe a convocação de linfócitos para tecidolinfóide gastrointestinal.

7. Combinação, de acordo com quaisquer das reivin-dicações 5 ou 6, CARACTERIZADA pelo fato de que o referidoanticorpo ou porção de ligação de antigeno inibe a ligaçãode MAdCAM humana a α4β7, e onde o anticorpo ou porção de Ii-gação de antigeno destes tem pelo menos uma das propriedadesseguintes:(a) competição cruzada com um anticorpo de refe-rência para ligação à MAdCAM;(b) competição com um anticorpo de referência paraligação à MAdCAM;(c) ligação ao mesmo epítopo de MAdCAM como um an-ticorpo de referência;(d) ligação à MAdCAM com substancialmente o mesmoKd como um anticorpo de referência;(e) ligação à MAdCAM com substancialmente a mesmataxa como um anticorpo de referência;onde o anticorpo de referência é selecionado dogrupo consistindo em: anticorpo monoclonal 1.7.2, anticorpomonoclonal 1.8.2, anticorpo monoclonal 6.14.2, anticorpo mo-noclonal 6.22.2, anticorpo monoclonal 6.34.2, anticorpo mo-noclonal 6.67.1, anticorpo monoclonal 6,73,2, anticorpo mo-noclonal 6.77.1, anticorpo monoclonal 7.16.6, anticorpo mo-noclonal 7.20.5, anticorpo monoclonal 7.26.4, anticorpo mo-noclonal 9.8.2, anticorpo monoclonal 6.22.2-mod, anticorpomonoclonal 6.34.2-mod, anticorpo monoclonal 6.67.1-mod, an-ticorpo monoclonal 6.77.1-mod e anticorpo monoclonal 7.26.4-mod.

8. Combinação, de acordo com quaisquer das rei-vindicações 5 a 7, CARACTERIZADA pelo fato de que o anticor-po monoclonal ou uma porção de ligação de antigeno deste éselecionado dos seguintes anticorpos:(a) a cadeia pesada compreende as seqüências deaminoácido CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada de um anticor-po de referência selecionado do grupo consistindo em 1.7.2,- 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1,- 7.16.6 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod,- 6.67.1-mod, 6.77.1-mod e 7.26.4-mod(b) a cadeia leve compreende as seqüências de ami-noácido CDRl, CDR2 e CDR3 de cadeia leve de um anticorpo dereferência selecionado do grupo consistindo em 1.7.2, 1.8.2,- 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1, 7.16.6,- 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod,- 6.77.1-mod e 7.26.4-mod(c) o anticorpo compreende uma cadeia pesada de(a) e uma cadeia leve de (b), e(d) o anticorpo de (c) onde as seqüências de ami-noácido CDR de cadeia pesada e cadeia leve são selecionadasdo mesmo anticorpo de referência.

9. Combinação, de acordo com quaisquer reivindica-ções 2 a 4, CARACTERIZADA pelo fato de ser de um anticorpode integrina anti-c^7 ou porção de ligação de antigeno des-te com um inibidor de caspase.

10. Uso da combinação, conforme definida em quais-quer das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fatode ser para fabricação de um medicamento para o tratamentode fibrose hepática.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 10,CARACTERIZADO pelo fato de que a fibrose hepática é fibrosehepática associada a Hepatite C, doença do fígado alcoólicaou esteatoepatite não alcoólica.

12. Composição farmacêutica da combinação, confor-me definida em qualquer das reivindicações 1 a 9,CARACTERIZADA pelo fato de ser com excipiente ou veiculofarmaceuticamente aceitável.