BRPI0613510A2 - processo de tratamento de pacientes com uma vacina de glicoproteìna mucinosa (muc-1) - Google Patents

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Abstract

PROCESSO DE TRATAMENTO DE PACIENTES COM UMA VACINA DE GLICOPROTEíiNA MUCINOSA (MUCI). A presente invenção refere-se a um processo para tratamento de um indivíduo que é afligido com um câncer, tal como câncer de pulmão de célula não-pequena ou câncer de próstata, através de administração àquele indivíduo de uma formulação baseada em MUC-1. A formulação pode ser uma formulação de vacina lipossómica baseada em MUC-1.

Description

lòsio
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PROCESSODE TRATAMENTO DE PACIENTES COM UMA VACINA DE GLICOPRO-TEÍNA MUCINOSA (MUC-1)".
Referência - Cruzada a Pedidos de Patente Relacionados
Este pedido de patente internacional reivindica prioridade parapedido de patente provisório US número de série 60/694 233, que foi deposi-tado em 28 de junho de 2005, e que é aqui incorporado por referência emsua totalidade.
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se a um processo para identificaçãode indivíduos com câncer que são apropriados para tratamento com formu-lação baseada em glicoproteína mucinosa (MUC-1). Exemplos de tais cân-ceres são câncer de pulmão de célula não-pequena e câncer de próstata.
Em alguns casos, a formulação baseada em MUC-1 é uma vacina BLP25.
Antecedentes da Invenção
Câncer de pulmão é a causa líder de mortalidade relacionada acâncer para ambos os sexos na América do Norte. Em 2004, aproximada-mente 174 000 novos casos de câncer de pulmão (54% em homens, 46%em mulheres) foram diagnosticados nos U.S. Além disso, em 2004 âproxi-madamente 160 000 pessoas morreram desta doença só nos U.S.
Infelizmente, no momento de diagnóstico, somente 25% de pa-cientes de câncer de pulmão são potencialmente curáveis por cirurgia. Alémdisso, quimioterapia somente aperfeiçoou modestamente as chances de so-brevivência em indivíduos afligidos com o câncer.
Câncer de pulmão de célula não-pequena (NSCLC) é o maiscomum de cânceres de pulmão, na medida em que ele totaliza aproximada-mente 75% a 80% de todos os cânceres de pulmão primários. NSCLC é tipi-ficado por carcinoma de célula escamosa, adenocarcinoma, e carcinoma decélula grande. Foi observado que a glicoproteína mucinosa, MUC-1, é alta-mente expressa em tais carcinomas, além de níveis de expressão normalem células epiteliais de indivíduos saudáveis. Também foi observado quemuitas porções de carboidrato que adornam a proteína MUC-1 são menoresque aquelas porções ligadas a proteínas MUC-1 de células normais em vir-tude de ligação à cadeia principal de polipeptídeo de MUC-1. Assim, a ca-deia principal de polipeptídeo de MUC-1 em células de câncer é mais expos-ta que a cadeia principal de polipeptídeo em células normais.
Após câncer de pulmão, câncer de próstata é o segundo câncermais comum diagnosticado em homens nos Estados Unidos. Grosseiramen-te 190 000 homens são diagnosticados com câncer de próstata nos EstadosUnidos e aproximadamente 30 000 homens morrem da doença anualmente.
Insuficiência bioquímica após prostatectomia (PR) para trata-mento de câncer de próstata é freqüentemente um precursor de insuficiênciaclínica, que pode encurtar a expectativa de vida do paciente. E embora exis-ta uma necessidade de adicionais processos não-invasivos de tratamento decâncer de próstata, existe uma necessidade especial de um tratamento dehomens com insuficiência bioquímica pós-prostatectomia.
Há uma necessidade na técnica de identificação de pacientesapropriados para novas terapias de câncer, assim como o desenvolvimentode tais novas terapias de câncer. A presente invenção provê um processopara identificação de indivíduos com câncer que são apropriados para trata-mento com uma formulação baseada em glicoproteína mucinosa (MUC-1).
Sumário da Invenção
A presente invenção refere-se à identificação e tratamento deindivíduos com câncer, onde o câncer é apropriado para tratamento comuma formulação baseada em MUC-1. Exemplos de tais cânceres são NS-CLC e câncer de próstata. A presente invenção também abrange o trata-mento de outros cânceres em adição a NSCLC e câncer de próstata com asformulações baseadas em MUC-1 descritas.
Em uma modalidade da invenção, a formulação baseada emMUC-1 pode ser uma vacina Iipossomal baseada em MUC-1. Por exemplo, avacina Iipossomal pode compreender um peptídeo MUC-1 em sua bicamadade lipídeo ou encapsulado em sua estrutura de vesícula. O peptídeo MUC-1também pode ser Iipidado para facilitar sua associação com a bicamada delipídeo Iipossomal ou membrana. O peptídeo MUC-1 pode compreender aseqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO: 1ou um seu fragmentoimunologicamente ativo ou sua variante (coletivamente referido como uma"variante funcional"), ou SEQ ID NO: 2, ou um seu fragmento imunologica-mente ativo ou sua variante. Particulares características de variantes de re-petição de centro MUC-1 são descritas abaixo.
Em um outro aspecto da presente invenção, um processo ("Pro-cesso 1") é provido para tratamento de um sujeito com NSCLC ou câncer depróstata. O processo compreende: (A) seleção para tratamento de um sujei-to que tem NSCLC ou câncer de próstata, e (B) administração a este sujeito,por um período de tempo, de uma formulação baseada em MUC-1. Em umamodalidade de processo 1, a formulação baseada em MUC-1 compreendeum lipossoma que contém pelo menos um polipeptídeo tendo a seqüênciade aminoácidos mostrada em SEQ ID NO: 1 ou um seu fragmento ou varian-te imunologicamente ativo, ou SEQ ID NO: 2, ou um seu fragmento ou vari-ante imunologicamente ativo.
Em modalidades específicas, o Processo 1 ainda pode incluiruma etapa (C) compreendendo avaliação de sujeito tratado. Em modalida-des individuais, avaliação de sujeito tratado pode ser realizada através demedição de uma reação imune no sujeito tratado. Em certas modalidades,medição de reação imune no sujeito tratado pode compreender medição deuma proliferação de célula-T. Ainda em outras modalidades, avaliação desujeito tratado pode compreender determinação de pelo menos um ou maisde: (a) tamanho de tumor, (b) localização de tumor, (c) estágio nodal, (d)taxa de crescimento do NSCLC ou câncer de próstata, (e) taxa de sobrevi-vência do sujeito, (f) mudanças nos sintomas de câncer de próstata ou cân-cer de pulmão no sujeito, (g) mudanças na concentração de PSA de sujeito,(h) mudanças na taxa de duplicação de concentração de PSA de sujeito, (i)mudanças na qualidade de vida do sujeito, ou (j) uma sua combinação.
Nestas modalidades, avaliação de sujeito pode ser realizada an-tes, durante, ou após o período de tempo. Avaliação do sujeito também podeser realizada antes e após o período de tempo.
Em ainda uma modalidade, a formulação é uma vacina Iiposso-ma BLP25. "BLP25" é uma repetição de núcleo MUC-1 Iipidada específica,identificada abaixo. A vacina BLP25 pode compreender Iipossomas pré-formados que compreendem uma repetição de núcleo MUC-1, tais comoaquelas mostradas em SEQ ID NOs: 1 e 2. Os Iipossomas pré-formadoscompreendendo uma repetição de núcleo MUC-1 podem ser liofilizados.
Em uma modalidade deste processo, a vacina de IipossomaBLP25 está em um kit e instruções para preparação e uso de vacina sãoincluídos no kit. Portanto, o kit pode compreender um outro líquido, tal comosolução de cloreto de sódio (0,9%, USP) pode ser usada para reconstituiraquele material liofilizado. Alternativamente, a vacina de Iipossoma BLP25pode ser fornecida como um líquido. O kit também pode compreender umadjuvante, ou uma combinação de adjuvantes. Exemplos de adjuvantes in-cluem, mas não são limitados a, lipídeo A, dipeptídeo muramila, alúmen, ouuma citocina. Assim, o kit pode compreender um número de frascos ou va-sos que permitam uma pessoa preparar a vacina BLP25 para administração.
A etapa de administração de formulação ao sujeito pode ser a-través de qualquer processo apropriado, e utilizando qualquer forma de do-sagem farmaceuticamente aceitável. Exemplos de processos de administra-ção incluem, mas não são limitados a, injeção, onde a injeção é uma injeçãointramuscular, um injeção subcutânea, injeção intravenosa, intranodal, intra-tumoral, intraperitoneal, ou uma intradérmica. Alternativamente, a vacina ouo peptídeo de repetição de núcleo MUC-1 ligado Iipossomalmente pode seradministrado por aerossol, administração nasal, oral, vaginal, retal, ocular,local (pós, pomadas ou gotas), bucal, intracisternal, intraperitoneal, ou tópi-ca, e similares. A vacina ou o peptídeo de repetição de núcleo MUC-1 ligadoIipossomalmente também pode ser administrado via uma apropriada formu-lação para liberação transdérmica, tal como via um emplastro transdérmico.
Ainda em um outro aspecto da presente invenção, é descrito umprocesso ("Processo 2") para aperfeiçoamento ou manutenção de qualidadede vida de um indivíduo com câncer, tal como NSCLC ou câncer de próstata.
Este processo pode compreender administração a um sujeito diagnosticadocom um câncer suscetível a tratamento com uma formulação baseada emMUC-1, tal como NSCLC ou câncer de próstata, uma dose de vacina Iipos-soma BLP25 rotineiramente por um período de tempo. Ainda em um aspectode Processo 2, um escore combinado de bem-estar físico de indivíduo, bem-estar funcional, e sintomas de câncer antes, durante, e após um período detempo pode ser calculado.
Em uma modalidade, a dose de vacina de Iipossoma BLP25provê cerca de 1000 μς do lipopeptídeo MUC-1 BLP25, em uma ou múltiplasadministõração, embora outras doses descritas abaixo, possam ser adminis-tradas. Ver, por exemplo, as doses pretendidas sob a subseção de dosa-gens de BLP25 abaixo.
Um outro aspecto da presente invenção é um processo para i-dentificação de sujeitos apropriados para tratamento com uma composiçãobaseada em MUC-1, tal como uma vacina BLP25. Uma modalidade do pro-cesso vincula determinação de se o nível de peptídeo MUC-1 circulante nacorrente sangüínea de sujeito, ou em um sangue, plasma, urina, soro ou ou-tra apropriada amostra biológica, é normal ou anormal. Se o nível de MUC-1circulante é normal, então o sujeito é apropriado para subseqüente tratamen-to com uma composição MUC-1. Ou seja, um sujeito tendo um nível normalde MUC-1 circulante pode receber uma dose de uma vacina MUC-1, tal co-mo BLP25. Em uma modalidade, o limite superior do nível normal de MUCcirculante é cerca de 37,7 U/mL. Da mesma maneira, um sujeito tendo umnível de MUC-1 circulante de 37,7 U/mL ou menos é apropriado para trata-mento com uma composição MUC-1, tal como uma vacina BLP25. Entretan-to, está bem dentro do conhecimento daqueles versados na técnica determi-nar níveis limites de peptídeos MUC-1 circulantes em diferentes grupos deindivíduos. Ou seja, o valor "37,7 U/mL" não é necessariamente um limitedefinitivo para todas as populações ensaiáveis. Uma quantidade "normal" deantígeno circulante pode ser determinada a partir de uma desejada subpopu-lação e usada como um indicador para classificar quantidades de MUC-1como normal ou anormal.
Em uma outra modalidade, o processo vincula detecção de pre-sença de proteína HLA A2 ou ácido nucléico codificante ou um transcritoARN HLA Α2 em corrente sangüínea de sujeito, ou em um sangue, plasma,urina, soro, ou outra amostra biológica apropriada. Detecção da presença deproteína HLA A2 ou ácido nucléico codificante ou um transcrito de ARN deHLA A2 na amostra biológica indica que o sujeito é apropriado para trata-mento com uma composição baseada em MUC-1, tal como uma vacina BLP25.
Em uma modalidade, o sujeito selecionado para adequação paratratamento com uma composição MUC-1 tem câncer de pulmão de célulanão-pequena de estágio IIIB ou estágio IV.
Em um aspecto a presente invenção é um processo para trata-mento de um sujeito com câncer. Este processo compreende (a) seleçãopara tratamento de um sujeito tendo uma célula de câncer que expressaMUC-1, e (b) administração ao sujeito, por um período de tempo, de umaformulação baseada em MUC-1, onde a formulação compreende: (i) Iipos-soma; e (ii) pelo menos um polipeptídeo compreendendo a seqüência deaminoácido selecionada do grupo consistindo na seqüência de aminoácidosde SEQ ID NO: 1, uma variante imunologicamente ativa da seqüência deaminoácidos de SEQ ID NO: 1, a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO:2, e uma variante imunologicamente ativa da seqüência de aminoácidos deSEQ ID NO: 2, e onde o sujeito não tem um alto nível de MUC-1 circulanteno soro de sujeito. Em uma modalidade, o câncer é selecionado do grupoconsistindo em câncer ovariano, câncer de fígado, câncer de cólon, câncerde mama, câncer pancreático, câncer de rim, câncer de cabeça e pescoço, emielomas múltiplos.
Ambas, a descrição genérica anterior e a descrição breve que sesegue dos desenhos são exemplares e explanatórias e são pretendidas paraproverem ainda explanação da invenção como reivindicada. Outros objetos,vantagens, e novas características serão facilmente visíveis para aquelesversados na técnica a partir da seguinte descrição detalhada da invenção.
Breve Descrição dos Desenhos
A Figura 1 é um gráfico mostrando os resultados de um estudo,aqui detalhado, mostrando a sobrevivência total pelo braço de estudo entrepacientes recebendo tratamento com vacina Iipossomal BLP25 ou pacien-tes recebendo somente melhor cuidado suporte (BSC). Ver exemplo 1 a-baixo.
A Figura 2 é um gráfico demonstrando análises de sobrevivênciapara pacientes Iocoregionais estágio IIIB com NSCLC. As análises de sobre-vivência para os dois grupos de pacientes (tratamento e BSC) inclui a funçãode distribuição de sobrevivência de pacientes tratados com vacina Iiposso-mal BLP25 versus pacientes tratados somente com melhores cuidados desuporte. Ver exemplo 1 abaixo.
A Figura 3 é um gráfico mostrando a mudança de porcentagemem tempo de duplicação de antígeno específico de próstata ("PSA") paradiferentes pacientes que receberam uma dose de vacina Iipossomal BLP25.Ver exemplo 3 abaixo.
A Figura 4 é uma tabela de listagem de distribuição de freqüên-cia de valores de CA27.29 por visita, braço (BLP25 ou Controle), e nívelnormal/anormal.
A Figura 5 mostra a curva de sobrevivência para pacientes comníveis normais do antígeno na linha base comparada àqúeles pacientes quetiveram níveis anormais.
A Figura 6 mostra sobrevivência média daqueles pacientes comníveis normais de CA27.29 foi de 24,2 meses enquanto aquela de pacientescom níveis anormais foi de 9,8 meses (Cox p=0,0006).
A Figura 7 mostra dados do braço de controle onde a sobrevi-vência média de pacientes com níveis normais de CA27.29 foi de 15,1 me-ses comparada a 11,3 meses para aqueles com níveis anormais de CA27.29(Cox p=0,0042).
A Figura 8 mostra dados de pacientes com níveis normais pre-existentes de CA27.29 no braço BLP25 tiveram uma sobrevivência média de24,2 meses comparados àqueles pacientes no braço Controle que teve umasobrevivência média de 15,1 meses (Cox p=0,0605).
A Figura 9 mostra que os pacientes com níveis anormais pre-existentes de CA27.29 no braço BLP25tiveram uma sobrevivência média de9,8 meses e aqueles pacientes no braço controle tiveram uma sobrevivênciamédia de 11,3 meses (Cox p=0,5234).
A Figura 10 mostra as curvas de Kaplan-Meier de duração desobrevivência através de proliferação de célula T.
A Figura 11 ilustra as análises de sobrevivência que foram reali-zadas para os tipos HLA escolhidos entre braços de tratamento.
A Figura 12 mostra a sobrevivência de pacientes com HLA A02em cada um dos braços de estudo.
A Figura 13 demonstra as diferenças em sobrevivência entre osdois braços em pacientes com o alelo DQB 1-05.
A Figura 14 mostra a sobrevivência de pacientes em ambos osbraços que tiveram o haplotipo DRB1-04.
A Figura 15 mostra uma outra curva de sobrevivência para paci-entes em ambos braços que têm o alelo DQB 1 -02.
A Figura 16 ilustra adicionais análises de sobrevivência dentrode braços de tratamento para os mesmos haplotipos listados na Figura 11.
A Figura 17 mostra curvas de sobrevivência de Kaplan-Meierpara pacientes no braço BLP25 somente que tem o alelo CW07 (n=45) ver-sus aqueles pacientes que não têm o alelo (n=43).
A Figura 18 mostra sobrevivência através de braço de tratamen-to de pacientes com efusão pleural maligna estágio IIIB ou doença estágio IVem entrada de estudo.
A Figura 19 mostra sobrevivência em termos de linha baseCA27.29 normal vs. anormal (braço controle).
A Figura 20 mostra linha base de sobrevivência total de CA27.29normal vs. anormal.
A Figura 21 mostra sobrevivência total através de braço de tra-tamento.
A Figura 22 mostra sobrevivência através de braço de tratamen-to de pacientes com doença Iocorregional estágio IIIB em entrada de estudo.
A Figura 23 mostra sobrevivência em termos de linha base deCA27.29 normal vs. anormal (braço BLP).Descrição Detalhada da Invenção
A presente invenção provê formulações baseadas em MUC-1 eprocessos para tratamento de um indivíduo que é afligido com câncer, ondeo câncer é suscetível a tratamento com uma formulação MUC-1. Exemplosde tais cânceres são NSCLC e câncer de próstata. A presente invençãotambém abrange o tratamento de outros cânceres em adição a NSCLC ecâncer de próstata com as formulações baseadas em MUC-1 descritas.
De acordo com a presente invenção, uma formulação podecompreender um núcleo de repetição MUC-1. Um núcleo de repetição MUC-1 pode ser uma seqüência de aminoácidos que ocorre qualquer número devezes em uma proteína MUC-1. Preferivelmente, um peptídeo de repetiçãode núcleo MUC-1 da presente invenção imita a natureza exposta de umaproteína MUC-1 expressa em células de câncer, que tem porções carboidra-to mais curtas ligadas à cadeia principal de proteína MUC-1.
Em uma modalidade, uma repetição de núcleo MUC-1 da pre-sente invenção tem a seqüência de aminoácidos STAPPAHGVTSAPDTTR-PAPGSTAPP (SEQ ID NO: 1).
Uma repetição de núcleo MUC-1 também pode ter a seqüênciade aminoácidos mostrada em qualquer do seguinte:
STAPPAHGVTSAPDTRPAPGGSTAPPK(palmitoil)G(SEQ ID NO: 2)
STAPPAHGVTSAPDTTRPAPG (SEQ ID NO: 3)
Em certas modalidades, esta repetição de núcleo pode ser Iipi-dada. Um tal lipopeptídeo de repetição de núcleo MUC-1 é aqui referido como BLP25. A formulação também pode ser associada com um lipossoma. Es-sa associação pode incluir, mas não está limitada a, incorporação do peptí-deo no lipossoma ou encapsulação do peptídeo pelo lipossoma.
Uma vacina lipossoma que contém um lipopeptídeo BLP25 éaqui referida como "L-BLP25".
As formulações da invenção ainda podem compreender um ad-juvante, ou uma combinação de adjuvantes, como um lipídeo A ou interleu-cina-2 (IL-2). Outros adjuvantes exemplares úteis na invenção são descritosabaixo. A formulação baseada em MUC-1 pode ser formulada como umavacina, e a vacina pode ser uma vacina de repetição de núcleo de MUC-1associada lipossomalmente. Em várias modalidades, a formulação vacinacompreende uma repetição de núcleo MUC-1 associada lipossomalmente eum adjuvante. A repetição de núcleo MUC-1 pode ser lipidada.
A vacina da presente invenção pode compreender: (a) uma re-petição de núcleo MUC-1 compreendendo a seqüência de SEQ ID NO.:1 elipídeos exógenos; ou (b) uma repetição de núcleo MUC-1 compreendendo aseqüência de SEQ ID NO: 1 e um lipossoma; ou (c) uma repetição de núcleoMUC-1 compreendendo a seqüência de SEQ ID NO: 1 e um lipossoma e umadjuvante; ou (d) uma repetição de núcleo MUC-1 compreendendo a se-qüência de SEQ ID NO: 1 e um lipossoma e um adjuvante, onde o adjuvanteé lipídeo A.
Em certas outras modalidades, uma vacina da presente inven-ção pode compreender (a) uma repetição de núcleo MUC-1 compreendendoa seqüência de SEQ ID NO: 2 e lipídeo exógeno; ou (b) uma repetição denúcleo MUC-1 compreendendo a seqüência de SEQ ID NO: 2 e um liposso-ma; ou (c) uma repetição de núcleo MUC-1 compreendendo a seqüência deSEQ ID NO: 2 e um lipossoma e um adjuvante; ou (d) uma repetição de nú-cleo MUC-1 compreendendo a seqüência de SEQ ID NO: 2 e um lipossomae um adjuvante onde o adjuvante é lipídeo A.
O conceito de tratamento de indivíduos tendo um câncer susce-tível a tratamento com uma formulação baseada em MUC-1, tal como umNSCLC ou câncer de próstata, assim como os constituintes da fórmula devacina baseada em MUC-1, são descritos em mais detalhes abaixo.
I. Vacina Lipossoma BLP25
Em uma modalidade, a formulação baseada em MUC-1 compre-ende uma certa quantidade de lipopeptídeo de MUC-1 BLP25 e uma certaquantidade de adjuvante. Uma tal formulação é aqui referida como vacinalipossoma BLP25 ("L-BLP25"), que pode estar em uma formulação IiofiIizadaou líquida. Por exemplo, a formulação ou vacina pode conter, em uma quan-tidade de dosagem simples, cerca de 1000 μg de lipopeptídeo de MUC-1BLP25 e cerca de 500 μς de lipídeo A.
Outras quantidades em microgramas de lipopeptídeo MUC-1 elipídeo A, entretanto são pretendidas nesta invenção. Por exemplo, a quanti-dade de lipopeptídeo BLP25 pode ser suficiente para acomodar doses múlti-pias da vacina. Portanto, a formulação de repetição de núcleo MUC-1 podeconter, por exemplo, cerca de 50 μς, cerca de 100 μρ, cerca de 200 μς, cer-ca de 300 μρ, cerca de 400 μg, cerca de 500 μς, cerca de 600 μg) cerca de700 μς, cerca de 800 μg, cerca de 900 μς, cerca de 1000 μg, cerca de 1010μg, cerca de 1020 μς, cerca de 1030 μς, cerca de 1040 μς, cerca de 1050μg, cerca de 1060 μg, cerca de 1070 μς, cerca de 1080 μς, cerca de 1090μg, cerca de 1100 μg, cerca de 1200 μg, cerca de 1300 μς, cerca de 1400μg, cerca de 1500 μg, cerca de 1600 μς, cerca de 1700 μς, cerca de 1800μg, cerca de 1900 μς, cerca de 2000 μς, cerca de 3000 μς, cerca de 4000μg, cerca de 5000 μς, cerca de 6000 μς, cerca de 700 μg, cerca de 8000 μς,cerca de 9000 μς, cerca de 10000 μg, cerca de 15000 μg, cerca de 25000μg, ou mais de repetição de núcleo MUC-1. Uma particular dosagem de re-petição de núcleo MUC-1 está na faixa de cerca de 500 μς a cerca de 1500μρ, cerca de 500 μ9 a cerca de 1500 μς, e cerca de 1000 μς.
Similarmente, a quantidade de lipídeo A pode ser variada paraajustar a quantidade de peptídeo MUC-1 formulado na vacina. Portanto, aquantidade de lipídeo A pode ser cerca de 50 μς, cerca de 100 μς, cerca de200 μς, cerca de 300 μς, cerca de 400 μς, cerca de 500 μg, cerca de 600μρ, cerca de 700 μg, cerca de 800 μρ, cerca de 900 μς, cerca de 1000 μς,cerca de 1010 μρ, cerca de 1020 μρ, cerca de 1030 μς, cerca de 1040 μρ,cerca de 1050 μς, cerca de 1060 μς, cerca de 1070 μς, cerca de 1080 μς,cerca de 1090 μρ, cerca de 1100 μς, cerca de 1200 μς, cerca de 1300 μg,cerca de 1400 μg, cerca de 1500 μς, cerca de 1600 μς, cerca de 1700 μς,cerca de 1800 μς, cerca de 1900 μg, ou cerca de 2000 μg, ou mais. Em par-ticular podem haver cerca de 500 μρ de lipídeo A.
O lipopeptídeo BLP25 e lipídeo A podem estar associados com abicamada de lipídeo dos Iipossomas que são formados com reidratação dopulverizado seco.A formulação pode ser retida em um frasco, tal como um frascode vidro boro-silicato Tipo I de 5 mL. O frasco, que contém a formulaçãoMUC-1, também pode conter outros ingredientes de vacina. Por exemplo, ofrasco pode compreender adicionais lipídeos lipossomais, tais como dipalmi-toil fosfatidil colina, colesterol, e dimiristoil fosfatidil glicerol. Cada quantidadedaqueles particulares lipídeos pode variar. Por isso, a quantidade de qual-quer um de dipalmitoil fosfatidil colina, colesterol, e dimiristoil fosfatidil glice-rol em um frasco pode ser cerca de 1 mg, cerca de 2 mg, cerca de 3 mg,cerca de 4 mg, cerca de 5 mg, cerca de 6 mg, cerca de 7 mg, cerca de 8 mg,cerca de 9 mg, cerca de 10 mg, cerca de 11 mg, cerca de 12 mg, cerca de13 mg, cerca de 14 mg, cerca de 15 mg, cerca de 16 mg, cerca de 17 mg,cerca de 18 mg, cerca de 19 mg, cerca de 20 mg, cerca de 25 mg, cerca de30 mg, cerca de 35 mg, cerca de 40 mg, cerca de 45 mg, cerca de 50 mg,cerca de 55 mg, cerca de 60 mg, cerca de 65 mg, cerca de 70 mg, cerca de75 mg, cerca de 80 mg, cerca de 85 mg, cerca de 90 mg, cerca de 95 mg, oucerca de 100 mg, ou mais que cerca de 100 mg. Os lipídeos lipossomaispodem estar contidos em um segundo frasco enquanto a formulação deMUC-1 pode estar contida em um primeiro frasco.
Outras modalidades, é claro, existem para os propósitos destainvenção. Portanto, a quantidades acima de lipopeptídeo MUC-1 BLP25,adjuvante, e lipídeos lipossomais em L-BLP25 são dadas somente comoexemplos. Determinação de apropriada quantidade de cada constituinte, in-cluindo quantidades de lipopeptídeo MUC-1, pode ser facilmente realizada.
Em algumas modalidades, a quantidade de lipopeptídeo MUC-1 será maiorou menor que cerca de 300 μg. A vacina não precisa ser suprida em umfrasco de vidro boro-silicato Tipo I de 5 mL, mas pode ser suprida em qual-quer maneira conhecida na técnica.
Em uma modalidade, o lipopeptídeo BLP25 é um peptídeo de 27resíduos linear que contém um derivado aminoácido Iipidado perto de seuterminus-C. Especificamente, BLP25 compreende um lipídeo palmitoíla so-bre um resíduo Iisina na posição 26 do polipeptídeo. A seqüência do lipopep-tídeo BLP25 é mostrada em SEQ ID NO: 2, mostrada abaixo:SEQ ID Ν0.2:
STAPPAHGVTSAPDTTRPAPGSTAPPK(palmitoil)G
Em outras modalidades possuindo uma seqüência de núcleoMUC-1, um aminoácido, tal como treonina, serina, lisina, arginina, ou cisteí-na, que pode ocorrer dentro da seqüência natural do peptídeo, pode ser umsítio conveniente ao qual um lipídeo pode ser ligado. Em adição, o lipídeopode ser ligado a um aminoácido sintético ou um aminoácido não encontra-do naturalmente na seqüência de núcleo MUC-1. Além disso, um ou mais deaminoácidos naturais ou sintéticos podem ser adicionados a qualquer extre-midade ou dentro de seqüência de núcleo MUC-1 para facilitar a ligação deum lipídeo.
O número de aminoácidos que pode ser adicionado à seqüêncianúcleo MUC-1 não é pretendido ser limitante, na medida em que qualquernúmero de aminoácidos pode ser adicionado tanto quanto o peptídeo aindafuncione nos processos da invenção. Como demonstrado acima, dois adi-cionais aminoácidos foram adicionados ao polipeptídeo BLP25. Ou seja, oterminus-C da seqüência núcleo MUC-1 termina com uma prolina e é,por isso, de 25 resíduos de comprimento. No caso do polipeptídeo BLP25,entretanto, uma lisina e uma glicina foram adicionadas a esta prolina de ter-minal-C para facilitar a ligação de palmitoíla. Portanto, o comprimento dopolipeptídeo BLP25 é de 25 aminoácidos. Convencionais processos de sín-tese de peptídeo podem ser usados para adicionar um ou mais de tais adi-cionais aminoácidos a uma seqüência de peptídeos. Alternativamente, umpeptídeo de seqüência de núcleo MUC-1 ou BLP25 pode ser feito recombi-nantemente.
Em uma modalidade particular, uma vacina Iipossoma BLP25("L-BLP25") pode compreender lipopeptídeo BLP25, lipídeo A, colesterol,DMPG, e DPPC. Olipopeptídeo BLP25 pode compreender a seqüência deSEQ ID NO: 2, um fragmento imunologicamene ativo, ou uma sua varianteimunologicamente ativa. Uma dose de uma tal vacina de Iipossoma BLP25pode compreender cerca de 1000 μg de lipopeptídeo BLP25, cerca de 500μg de lipídeo A, cerca de 17,3 mg de colesterol, cerca de 3,6 mg de DMPG,e cerca de 29,1 mg de DPPC.
Esta particular composição e dosagem de vacina também podeser descrita em quantidades "per frasco". Portanto, um frasco pode compre-ender cerca de 300 μg de lipopeptídeo BLP25, cerca de 150 μ de lipídeo A,cerca de 5,2 mg de colesterol, cerca de 1,1 mg de DMPG, e cerca de 8,7 mgde DPPC.
Esta vacina pode ser Iiofilizada e então reconstituída antes deadministração, tal como em solução de cloreto de sódio. As quantidades devacina Iipossoma BLP25 descritas acima podem ser reconstituídas, por e-xemplo, em 0,6 mL de líquido, embora qualquer volume de líquido, depen-dendo da dosagem desejada, possa ser usado, tal como cerca de 0,1 mL,0,2 mL, 0,3 mL, 0,4 mL, 0,5 mL, 0,6 mL, 0,7 mL, 0,8 mL, 0,9 mL, 10 mL, 11mL, 12 mL, 13 mL, 14 mL, 15 mL, 16 mL, 17 mL, 18 mL, 19 mL, ou 20 mL,ou mais que 20 mL. O volume de líquido no qual uma vacina MUC-1 Iiofiliza-da é reconstituída não é necessariamente o volume que é administrado a umindivíduo.
A. Variantes de repetição de núcleo MUC-1
Como uma alternativa para a seqüência de repetição de núcleoMUC-1 mostrada em SEQ ID NOs: 1 e 2, a formulação da invenção podeincorporar homólogos imunologicamente ativos ou variantes daquelas repe-tições de núcleo MUC-1. Da mesma maneira, a presente invenção abrange
0 uso de um peptídeo de repetição de núcleo MUC-1 tendo uma seqüênciaque é similar a, mas não idêntica, à seqüência de aminoácidos mostrada emSEQ ID NO: 1 ou 2. Assim, a presente invenção contempla o uso de umarepetição de núcleo MUC-1 que tem uma identidade de seqüência de 99%,98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%,85%, 84%, 83%, 82%, 81%, ou 80% comparado à seqüência de SEQ ID NO:1 ou 2, e que é imunologicamente ativa.
Uma proteína de repetição de núcleo MUC-1 da presente inven-ção pode ser modificada para conter variações conservativas ou pode sermodificada de modo a alterar resíduos não-críticos ou resíduos em regiõesnão-críticas. Aminoácidos que não são críticos podem ser identificados atra-vés de processos conhecidos na técnica, como mutagênese direcionada asítio, cristalização, ressonância nuclear magnética, marcação de fotoafinida-de, ou mutagênese de exploração de alanina (Cunningham et al., Science,244:1081-1085 (1989); Smith et al., J. Moi Biol., 224:899-904 (1992); de Voset al., Science, 255:306-312 (1992)). Proteínas modificadas podem ser fá-cilmente testadas para atividade ou habilidade para induzir uma respostaimune via processos tais como ligação de protease a substrato, clivagem,atividade in vitro, ou atividade in vivo.
Especificamente, uma variante de repetição de núcleo MUC-1pode incorporar 1, 2, 3, 4, ou 5 substituições de aminoácidos que aperfeiço-am estabilidade de repetição de núcleo MUC-1 ou com um diferente amino-ácido hidrofóbico que aperfeiçoa estabilidade de repetição de núcleo MUC-1contra oxidação, ou com um diferente aminoácido que aperfeiçoa estabilida-de de repetição de núcleo MUC-1 contra protease. Assim, uma "variante" depolipeptídeo de repetição de núcleo MUC-1 da invenção pode diferir em se-qüência de aminoácidos da seqüência representada em SEQ ID NOs: 1 ou 2através de uma ou mais substituições, supressões, inserções, inversões,truncações, ou uma sua combinação. Uma tal variante pode ser feita paraconter substituições de aminoácidos que substituem um dado aminoácidocom um outro aminoácido de características similares. Substituições conser-vativas incluem, entre os aminoácidos alifáticos intercâmbio de alanina, vali-na, leucina, e isoleucina; intercâmbio dos resíduos hidroxila serina e treoni-na, troca dos resíduos ácidos aspartato e glutamato, substituição entre osresíduos amida asparagina e glutamina, troca dos resíduos básicos Iisina earginina, e substituições entre os resíduos aromáticos fenil alanina e tirosina.Ver Bowie et al., Science, 247:1306-1310 (1990).
B. Proteínas de fusão de repetição de núcleo MUC-1
Peptídeo de repetição de núcleo MUC-1 tendo a seqüência deinteiro comprimento de SEQ ID NOs. 1 ou 2, ou uma sua variante, tambémpode ser ligado a um outro polipeptídeo com o qual não está normalmenteassociado. Assim, um peptídeo de repetição de núcleo MUC-1 pode ser ope-rativamente ligado, tanto em seu terminus-N como terminus-C, a um polipep-tídeo heterólogo tendo uma seqüência de aminoácidos não substancialmen-te homóloga à repetição de núcleo de MUC-1. "Operativamente ligado" indi-ca que o peptídeo de repetição de núcleo MUC-1 e o polipeptídeo heterólogoestão ambos em-estrutura.
Uma proteína de fusão pode, ou não, afetar a habilidade da re-petição de núcleo MUC-1, ou uma sua variante funcional, para induzir umareação imunológica a partir de um sistema hospedeiro. Por exemplo, a prote-ína de fusão pode ser uma glutationa S-transferase (GST) - proteína de fu-são onde repetição de núcleo MUC-1 é fundida ao terminus-C da seqüênciaGST ou um marcador HA influenza. Outros tipos de proteínas de fusão in-cluem, mas não são limitados a, proteínas de fusão enzimática, por exemplo,fusões beta-galactosidase, fusão GAL dois-híbridos de levedura, fusões poli-His e fusões Ig. Tais proteínas de fusão, particularmente fusões poli-His, po-dem facilitar a purificação de repetição de núcleo MUC-1 produzida recombi-nantemente para uso na invenção. Em certas células hospedeiras, expres-são e/ou secreção de uma proteína pode ser aumentada através do uso deuma seqüência sinal heteróloga fundida a uma protease que transporta opeptídeo de repetição de núcleo MUC-Ipara uma matriz extracelular ou loca-liza a proteína de repetição de núcleo MUC-1 na membrana de célula.
Outras proteínas de fusão podem afetar a habilidade de umarepetição de núcleo MUC-1 para induzir uma reação imunológica. Por exem-plo, uma sub-região de uma repetição de núcleo MUC-1 pode ser substituí-da, por exemplo, com o correspondendo domínio ou sub-região de uma ou-tra região de uma proteína MUC-1. Da mesma maneira, repetições de nú-cleo MUC-1 quiméricas podem ser produzidas. Da mesma maneira, a afini-dade para substrato pode ser alterada ou mesmo proteólise do substratoprevenida. Da mesma maneira, pode-se usar uma proteína tendo uma se-qüência de, por exemplo, SEQ ID NO: 1 ou, ou suas variantes, como uminibidor competitivo de um outro peptídeo de repetição de núcleo MUC-1.
C. Modificações de repetição de núcleo MUC-1
Variantes de repetição de núcleo MUC-1 também abrangem de-rivados ou análogos nos quais (i) um aminoácido é substituído com um resí-duo de aminoácido que não é um codificado pelo código genético, (ii) o poli-peptídeo maduro está fundido com um outro compostos tal como polietilenoglicol, ou (iii) adicionais aminoácidos são fundidos ao polipeptídeo MUC-1,tal como uma seqüência líder ou secretora ou uma seqüência para purifica-ção do polipeptídeo.
Modificações típicas incluem, mas não são limitadas a, acetila-ção, acilação, ADP-ribosilação, amidação, ligação covalente de flavina, liga-ção covalente de uma porção heme, ligação covalente de um nucleotídeo ouderivado nucleotídeo, ligação covalente de um lipídeo ou derivado de lipídeo,ligação covalente de fosfatidil inositol, reticulação, ciclização, formação deligação dissulfeto, demetilação, formação de reticulações covalentes, forma-ção de cistina, formação de piroglutamato, formilação, carboxilação gama,glicosilação, formação de âncora GPI, hidroxilação, iodinação, metilação,miristoilação, oxidação, processamento proteolítico, fosforilação, prenila-ção, racemização, selenoilação, sulfatação, adição mediada por transfe-rência de RNA de aminoácidos para proteínas tais como arginilação, e ubi-quitinação.
Modificações de peptídeo particularmente comuns que podemser aplicadas a repetição de núcleo MUC-1 incluem glicosilação, ligação delipídeo, sulfatação, carboxilação gama de resíduos de ácido glutâmico, hi-droxilação, e ADP-ribosilação. Ver T.E. Creighton, Proteins-Structure andMolecular Properties, 2nd Ed. (W.H. Freeman and Company, New York(1993)); Wold, F., Posttranslational Covalent Modification of Proteins, B.C.Johnson, Ed. (Academic Press, New York 1-12 (1983)); Seifter et al., Meth.Enzymol., 182:626-646 (1990); e Rattan et al., Ann. N.Y.Acad. Sci., 663:48-62(1992).
Modificações podem ser feitas em qualquer lugar em um poli-peptídeo de repetição de núcleo MUC-1, incluindo a cadeia principal de pep-tídeo, as cadeias laterais de aminoácidos, e os termini amino ou carboxila.Bloqueio do grupo amino ou carboxila em um polipeptídeo, ou ambos, poruma modificação covalente, é comum em polipeptídeos sintéticos e ocorren-do naturalmente.II. Dosaaens BLP25
Quando uma formulação baseada em MUC-1, incluindo um pep-tídeo de núcleo MUC-1, polipeptídeo BLP25, ou vacina Iipossomal de BLP25está sendo dada a um sujeito, aqueles versados na técnica entendem que adosagem pode depender de vários fatores, incluindo, mas não limitado a,peso do sujeito, tamanho de tumor, ou progressão de tumor. Geralmente,como aqui usado, um sujeito que recebe a formulação baseada em MUC-1 éum organismo simples. Em certas modalidades, um sujeito será um mamífe-ro. Especificamente, um sujeito pode ser um humano, incluindo sendo ummacho ou uma fêmea. Em muitas modalidades, o sujeito será um paciente,ou um indivíduo aguardando ou sob cuidados e tratamentos médicos.
Um sujeito pode receber uma dose de cerca de 50 μg, cerca de100 μg, cerca de 200 μg, cerca de 300 μg, cerca de 400 μg, cerca de 500μg, cerca de 600 μg, cerca de 700 μg, cerca de 800 μg, cerca de 900 μg,cerca de 1000 μg, cerca de 1010 μg, cerca de 1020 μg, cerca de 1030cerca de 1040 μg, cerca de 1050 μg, cerca de 1060 μg( cerca de 1070μg,cerca de 1080 μg, cerca de 1090 μg, cerca de 1100 μg, 1200 μg, 1300 μg,1400 μg, 1500 μg, 1600 ^g, 1700 ng, 1800 jig, 1900 μg, ou cerca de 2000μg de polipeptídeo MUC-1 BLP25que está na vacina de Iipossoma BLP25,em aplicações simples ou cumulativas. Em modalidades específicas, a dosedada para o sujeito é cerca de 1000 μg da formulação baseada em MUC-1por semana.
Um sujeito pode receber uma dose da formulação baseada emMUC-1, por exemplo, múltiplas vezes diárias, todo dia, cada outro dia,, umavez por semana, ou qualquer outro regime de dosagem apropriado. Em umamodalidade, administração rotineira abrange administração de uma dose devacina Iipossoma BLP25 uma vez por semana por um período de tempo. Éclaro, o regime de dosagem pode compreender outras permutações de libe-ração de peptídeo MUC-1. Ou seja, a vacina pode ser administrada umavez, duas vezes, três vezes, quatro vezes, cinco vezes, seis vezes, ou maisvezes por semana. Em algumas modalidades, sujeitos receberão mais oumenos que 5 doses. Assim, um sujeito pode receber uma dose de cerca de1000 μ9 do polipeptídeo Iipidado MUC-1 toda semana. Alternativamente, osujeito pode receber duas doses de 500 μς, duas vezes por semana, ouuma dose diária de 100 μ9 em cinco dias.
Estes exemplos de dosagem não são Iimitantes e somente usa-dos para exemplificar particulares regimes de dosagem para administraçãode cerca de 1000 μg do polipeptídeo Iipidado MUC-1. Por exemplo, se a do-se apropriada para uma dada situação é 1000 μg por semana, as doses po-dem ser divididas em qualquer número de permutações. Isto também é ver-dade se a apropriada dose para uma particular situação é maior que ou me-nos que 1000 μg.
O período de tempo em que a formulação baseada em MUC-1 éadministrada para o sujeito pode ser qualquer período apropriado. Exemplosde tais períodos apropriados incluem, mas não são limitados a, pelo menoscerca de 3 meses, pelo menos cerca de 4 meses, pelo menos cerca de 5meses, pelo menos cerca de 6 meses, pelo menos cerca de 7 meses, pelomenos cerca de 8 meses, pelo menos cerca de 9 meses, pelo menos cercade 10 meses, pelo menos cerca de 11 meses, pelo menos cerca de 12 me-ses, pelo menos cerca de 13 meses, pelo menos cerca de 14 meses, pelomenos cerca de 15 meses, pelo menos cerca de 16 meses, pelo menos cer-ca de 17 meses, pelo menos cerca de 18 meses, pelo menos cerca de 19meses, pelo menos cerca de 20 meses, pelo menos cerca de 21 meses, pe-lo menos cerca de 22 meses, pelo menos cerca de 23 meses, ou pelo me-nos cerca de 24 meses ou mais. O período de tratamento também pode con-tinuar por mais que 24 meses, se desejado, tal como, por 30 meses, 31 me-ses, 32 meses, 33 meses, 34 meses, 35 meses, 36 meses, ou mais que 36meses.
Em uma outra modalidade da invenção, o período de tempo dedosagem para qualquer um dos processos aqui descritos é por pelo menoscerca de 2 semanas, pelo menos cerca de 4 semanas, pelo menos cerca de8 semanas, pelo menos cerca de 16 semanas, pelo menos cerca de 17 se-manas, pelo menos cerca de 18 semanas, pelo menos cerca de 19 sema-nas, pelo menos cerca de 20 semanas, pelo menos cerca de 24 semanas,pelo menos cerca de 28 semanas, pelo menos cerca de 32 semanas, pelomenos cerca de 36 semanas, pelo menos cerca de 40 semanas, pelo menoscerca de 44 semanas, pelo menos cerca de 48 semanas, pelo menos cercade 52 semanas, pelo menos cerca de 60 semanas, pelo menos cerca de 68semanas, pelo menos cerca de 72 semanas, pelo menos cerca de 80 sema-nas, pelo menos cerca de 88 semanas, pelo menos cerca de 96 semanas,ou pelo menos cerca de 104 semanas.
A formulação baseada em MUC-1 pode ser administrada emdiferentes fases de tratamento. Por exemplo, a formulação baseada emMUC-1 pode ser administrada em ambas, uma fase de tratamento e umafase de manutenção. Em algumas modalidades, a fase de tratamento com-preenderá administração da formulação baseada em MUC-1 em dosagenssemanais, enquanto a fase de manutenção pode ser em períodos de tempomais longos, como cerca de cada 6 semanas, cerca de cada 7 semanas,cerca de cada 8 semanas, cerca de cada 9 semanas, cerca de cada 10csemanas, cerca de cada 11 semanas, cerca de cada 12 semanas, ou maislongo. Em alguns casos, a dosagem dada na fase de tratamento será maiorque a dosagem dada na fase de manutenção. Entretanto, fases de tratamen-to e manutenção podem ser desenhadas para um particular indivíduo demodo que o tempo e dosagens entre as fases de tratamento e manutençãopodem variar significantemente a partir dos exemplos acima. Geralmente, afase de manutenção pode começar no momento julgado apropriado. Por e-xemplo, em algumas modalidades, a fase de tratamento será oito semanas ea fase de manutenção continuará por toda a vida do indivíduo. Em outrasmodalidades, somente uma fase de tratamento ou uma de manutenção seráempreendida.
Ainda em modalidades, a formulação baseada em MUC-1 serádada profilaticamente. Nestas modalidades, a administração da formulaçãobaseada em MUC-1 pode prevenir desenvolvimento de câncer em um indi-víduo, tal como NSCLC ou câncer de próstata. Quando a formulação basea-da em MUC-1 é usada profilaticamente, a quantidade e regime de dosagempodem ser facilmente determinados.Médicos podem determinar a quantidade de tempo que o sujeitopode permanecer na formulação baseada em MUC-1. Em alguns casos, po-de ser vantajoso administrar a formulação baseada em MUC-1 pelo resto davida do indivíduo.
III. Lipossomas
Em muitas modalidades, a formulação baseada em MUC-1 seráusada com lipossomas. Lipossomas são vesículas microscópicas que con-sistem em uma mais bicamadas de lipídeo circundando compartimentosaquosos. Ver, por exemplo, Bakker-Woudenberg et al., Eur. J. Clin. Micro-biol. Infect. Dis. 12 (Suppl. 1):S61 (1993), e Kim, Drugs, 46:618 (1993). De-vido lipossomas serem formulados com moléculas de lipídeos volumosasque também são encontradas em membranas celulares naturais, liposso-mas geralmente podem ser administrados seguramente e são biodegradá-veis. Assim, lipossomas são freqüentemente usadas em liberação de fár-maco.
Dependendo do processo de preparação, lipossomas podem serunilamelares ou multilamelares, e podem variar em tamanho com diâmetrosvariando de cerca de 0,02 μιτι a maior que 10 μπι. Uma variedade de agen-tes pode ser encapsulada ou inserida nos lipossomas. Agentes hidrofóbicosparticionam nas bicamadas e agentes hidrofílicos particionam dentro de es-paço(s) aquosos interno. Ver, por exemplo, Machy et al., LIPOSOMES INCELL BIOLOGY AND PHARMACOLOGY (John Libbey,1987), e Ostro et al.,American J. Hosp. Pharm. 46:1576 (1989).
Lipossomas podem adsover virtualmente qualquer tipo de célulae então liberar um agente incorporado. Em alguns casosa Iipossoma podefundir com a célula alvo, pelo que os conteúdos do Iipossoma então esvazia-se na célula alvo. Alternativamente, um Iipossoma pode ser endocitosadopor células que são fagocíticas.Endocitose é seguida por degradação intrali-sossomal de lipídeos Iipossomais e liberação dos agentes encapsulados.Scherphof et al., Ann. Ν. Y. Acad. Sci., 446:368(1985).
Adicionalmente, lipossomas podem ser usadas para apresenta-ção de agentes ativos, tais como polipeptídeos, em sua superfície e, por is-so, induzir vários eventos, tais como cascatas de sinalização ou iniciação decaminhos bioquímicos, sem fusão a uma célula ou superfície alvo comomencionado no parágrafo anterior. Assim, Por exemplo, um polipeptídeo po-de ser incorporado na bicamada de lipídeo, por exemplo, de um Iipossomavia um lipídeo que está ligado ao polipeptídeo.
Lipossomas são usados como veículos de liberação com as for-mulações baseadas em MUC-1 da presente invenção. Lipossomas apropria-dos exemplares que podem ser usados nos processos da invenção incluemvesículas multilamelares (MLV), vesículas oligolamelares (OLV), vesículasunilamelares (UV)1 vesículas unilamelares pequenas (SUV), vesículas uni-Iamelares de tamanho médio (MUV), vesículas unilamelares grandes (LUV),vesículas unilamelares gigantes (GUV), vesículas multivesiculares (MVV),vesículas simples ou oligolamelares fabricadas por processo de evaporaçãode fase reversa (VER), vesículas multilamelares fabricadas pelo processo deevaporação de fase - reversa (MLV-VER), vesículas plurilamelares estáveis(SPLV), congeladas e descongeladas MLV (FATMLV), vesículas preparadaspor processos de extrusão (VET), vesículas preparadas por prensa Francesa(FPV), vesículas preparadas por fusão (FUV), vesículas de desidratação-reidratação (DRV), e bubblesomes (BSV). Entretanto, como entendido poraqueles versados na técnica, o tipo de Iipossoma não é pretendido ser Iimi-tante e pode incluir qualquer Iipossoma fabricado de qualquer matéria queseja compatível com os processos da invenção. Técnicas para preparaçãode Iipossomas são bem-conhecidas. Ver COLLOIDAL DRUG DELIVERYSYSTEMS, vol. 6 (J. Kreuter ed., Mareei Dekker, Inc. (1994)).
IV. Lipídeos
Em muitas modalidades, a formulação baseada em MUC-1 podeser lipidada, tal como com SEQ ID NO: 2. Como aqui usado, um "lipídeo"pode ser uma molécula miristila, palmitoíla, ou Iaurila que pode ser ligada aaminoácidos que possuem grupos oxigênio, nitrogênio ou enxofre funcionais.Tais aminoácidos incluem, mas não são limitados, treonina, serina, lisina,arginina e cisteína.
Um "monolipopeptídeo" é um peptídeo ao qual somente umacadeia lipídeo está ligada. Similarmente, um "dilipopeptídeo" é um peptídeoque tem duas cadeias lipídeo ligadas a um ou dois aminoácidos. Se as duascadeias de lipídeo estão ligadas a dois resíduos de aminoácido, aqueles re-síduos podem ser espaçados por qualquer número de aminoácidos. Em ca-sos onde mais de um lipídeo está ligado, os lipídeos podem ser idênticos oupodem ser diferentes. Similarmente, se mais de dois lipídeos estão ligadosdois ou mais dos lipídeos podem ser idênticos ou todos os lipídeos podemser diferentes.
É acreditado que um lipopeptídeo, tal como BLP25, pode serincorporado em um Iipossoma porque a porção lipídeo deste peptídeo inte-gra espontaneamente na bicamada de lipídeos do lipossoma. Assim, nestecaso, um lipopeptídeo pode ser apresentado sobre a "superfície" de um li-possoma. Alternativamente, um peptídeo pode ser encapsulado dentro deum lipossoma. Técnicas para preparação e formulação de Iipossomas commoléculas tais como peptídeos são bem-conhecidas.
V. Adiuvantes Exemplares
A presente formulação baseada em MUC-1 também pode incluirum ou mais adjuvantes. Alternativamente, um ou mais adjuvantes podem seradministrados antes, em conjunção com, ou após administração da formula-ção baseada em MUC-1 da invenção.
Como é bem-apreciado, adjuvantes são substâncias que atuamem conjunção com específicos estímulos antigênicos para aperfeiçoamentode uma específica resposta a um antígeno. Monofosforil lipídeo A (MPLA),por exemplo, é um adjuvante eficaz que causa aumentada apresentação deantígeno lipossômico para específicos linfócitos T. Alving, C.R., Immunobiol.,187:430-446 (1993). MPLA pode ligar a receptores semelhantes a toll, quepodem conduzir a ativação de caminhos de sinalização de defesa que con-trolam a expressão de vários genes de resposta imune.
Adjuvantes baseados em lipídeos, como Lipídeo A e seus deri-vados, são impróprios para uso com as formulações baseadas em MUC-1.
Quando incorporado em lipossomas, um dipeptídeo muramila (MDP) tam-bém mostrou aumentar a capacidade adjuvante (Gupta RK et al., "Adju-vants-A balance between toxicity and adjuvancity", Vaccine, 11, 293-306(1993)).
Uma outra classe de adjuvantes que pode ser usada com a pre-sente invenção inclui citocinas estimuladoras, como interleucina-2 (IL-2). As-sim, as presentes vacinas Iipossomais podem ser formuladas com IL-2, ouIL-2 pode ser administrado separadamente para ótima resposta àntigênica.Em muitas modalidades, IL-2 é beneficamente formulada com lipossomas.
Imitações sintéticas de adjuvantes também podem ser co-formuladas com uso das formulações baseadas em MUC-1. Por exemplo,uma imitação de lipídeo A pode ser usada em conjunção com a vacina Iipos-somal. Um particular tipo de imitação de lipídeo A é uma onde uma ou am-bas as unidades açúcar do dissacarídeo lipídeo A está substituída com pelomenos o esqueleto carbono de pentaeritritol. Ver, por exemplo, WO03/094850, que é aqui incorporado por referência.
VI. Formulações exemplares de vacina
Quando a formulação baseada em MUC-1 é uma vacina, as va-cinas também podem ser formuladas com um ou mais excipientes farmaceu-ticamente aceitáveis. As propriedades de tais excipientes são bem-conhecidas na técnica, mas tipicamente incluem excipientes que são fisiolo-gicamente toleráveis e inertes ou aperfeiçoam com relação às propriedadesde vacina das composições inventivas. Exemplos não-limitantes de excipien-tes farmaceuticamente aceitáveis incluem veículos líquidos como soluçãosalina fisiológica estéril. Um excipiente pode ser adicionado em qualquerponto em formulação de uma vacina lipossômica ou ele pode ser misturadocom a composição de vacina completa. Pode-se determinar facilmente am-bos, quando adicionar o excipiente e o apropriado excipiente para uso comas vacinas da invenção.
Uma particular formulação de vacina pode compreender cercade 300 μg de lipopeptídeo de MUC-1 BLP25 de SEQ ID NO: 2, cerca de 150μg de lipídeo A, e cerca de 15 mg de um ou mais lipídeos Iipossomais adi-cionais, como dipalmitoil fosfatidil colina (DPMC), colesterol, e dimiristoil fos-fatidil glicerol (DPMG).VII. Ciclofosfamida
Antes de tratamento com uma formulação baseada em MUC-1,um sujeito pode ser "pré-tratado" com ciclofosfamida. Em muitas modalida-des, a dose de ciclofosfamida será cerca de 300 mg/m2, cerca de 400mg/m2, cerca de 500 mg/m2, ou cerca de 600 mg/m2. Uma dose de ciclofos-famida na faixa de cerca de 300 mg/m2 é considerada uma dose baixa. Emcertas modalidades, a ciclofosfamida será dada em uma dose simples. Emoutras modalidades,a ciclofosfamida será dada em mais de uma dose sobreum período de tempo.
O uso de uma dose de ciclofosfamida, tal como 300 mg/m2, po-de superar parcialmente a supressão imune vista em alguns pacientes decâncer. Em vários modelos animais, ciclofosfamida foi vista em alguns sujei-tos aumentar respostas de hiper-sensitividade tipo retardada, aumentar pro-dução de anticorpos, anular tolerância, e potencializar imunidade antitumor.
Outros fármacos que afetam o sistema imune em uma maneira similar a ci-clofosfamida também podem ser usadas em regimes de pré-tratamento comas formulações da presente invenção.
VIII. Rota de administração e alveiamento de vacina L-BLP25
As formulações baseadas em MUC-1 da invenção, incluindo asvacinas, podem ser formuladas para múltiplas rotas de administração. Espe-cíficas rotas incluem qualquer processo de administração farmaceuticamenteapropriado, tal como via injeção intravenosa, intramuscular, subcutânea, ouintradérmica, aerossol, pulmonar, nasal, oral, vaginal, retal, ocular, local(pulverizados, pomadas ou gotas), bucal, intra-cisternal, intraperitoneal, ouadministração tópica, e similares, ou através de uma combinação destasrotas, administrada de uma vez ou em uma pluralidade de dosagens unitá-rias. A vacina ou o peptídeo de repetição de núcleo MUC-1 ligado Iiposso-malmente também pode ser administrado via uma formulação apropriadapara liberação transdérmica, tal como via um emplastro transdérmico.
Administração de vacinas é bem-conhecida e por último depen-de da particular formulação e o julgamento do médico atendente. Formula-ções baseadas em MUC-1, tal como L-BLP25 podem ser mantidas comouma suspensão ou elas podem ser Iiofilizadas e posteriormente hidratadaspara gerarem uma formulação utilizável.
Em algumas modalidades, tal como a modalidade em exemplo1, uma dose de formulação baseada em MUC-1 pode ser injetada em váriossítios diferentes. Por exemplo, na modalidade de exemplo 1, 1000 μg de po-lipeptídeo baseado em MUC-1 podem ser dados em quatro subdoses deaproximadamente 250 μg cada. No caso de injeções, a quantidade da inje-ção é irrelevante tanto quanto a apropriada dose ou subdose de composiçãoinventiva esteja sendo dada. Por exemplo, uma injeção pode ser de 1 cm(mL), enquanto uma outra injeção com a mesma exata dose pode ser de 5cm3 (mL). Além disso, a quantidade na subdose é pretendida somente comoum exemplo não-limitante e modalidades onde as subdoses são mais oumenos Va da dose inteira são antecipadas.
A subdose ou doses podem ser administradas na região deltõideou tríceps de braços superiores, e os aspectos anterolaterais esquerdo edireito do abdome. Entretanto, estes sítios de injeção são somente exempla-res. Em algumas modalidades, somente duas subdoses serão dadas e estassubdoses podem ser dadas em qualquer uma das regiões mostradas acima.
Ainda em modalidades, subdoses ou doses completas serão dadas em regi-ões completamente diferentes. Se a formulação baseada em MUC-1 é inje-tada, então um apropriado sítio de injeção pode ser facilmente determinado.
Para prover maior especificidade, assim teoricamente reduzindo o risco deefeitos tóxicos ou outros indesejados durante a administração in vivo, emalgumas modalidades composições inventivas serão alvejadas para as célu-Ias através das quais elas são desenhadas para atuar, por exemplo, célulasapresentando antígeno. Isto pode ser convenientemente realizado usandoconvencional tecnologia de alvejamento para direcionar um Iipossoma con-tendo um peptídeo imunogênico para uma particular localização dentro docorpo. Para alvejar células apresentando antígeno, por exemplo, manose e aporção Fc de anticorpos podem ser quimicamente conjugados a um peptí-deo antigênico, ou o peptídeo de alvejamento pode ser recombinantementefundido ao lipopeptídeo imunogênico. Outras estratégias similares serão fa-miliares para o praticamente. Não obstante, em algumas modalidades ascomposições inventivas não serão alvejadas para específicos tipos de célu-las ou órgãos.
IX. Indivíduos Para Tratamento
Qualquer sujeito diagnosticado com um câncer suscetível a tra-tamento com uma formulação baseada em MUC-1, tal como NSCLC e cân-cer de próstata, pode receber tratamento com formulações baseadas emMUC-1 aqui descritas. Alternativamente, qualquer indivíduo que exiba sinto-mas de qualquer estágio de um câncer suscetível a tratamento com umaformulação baseada em MUC-1, tais como sintomas de qualquer estágio deNSCLC ou qualquer estágio de câncer de próstata, mas que não foi formal-mente diagnosticado como tendo o câncer, também pode receber tratamentocom as formulações baseadas em MUC-1. Além disso, como estabelecidoacima, as formulações baseadas em MUC-1 podem ser dadas profilatica-mente para prevenir um sujeito de contrair um câncer suscetível a tratamen-to com uma formulação baseada em MUC-1, tal como NSCLC ou câncer depróstata.
Na seleção de um sujeito com um câncer suscetível a tratamen-to com uma formulação baseada em MUC-1, tal como um sujeito com NS-CLC e/ou câncer de próstata, para tratamento com a formulação baseadaem MUC-1, pode ser benéfico determinar o nível de MUC_1 no soro de su-jeito antes ou durante tratamento. Em certos pacientes de câncer, aos níveisde MUC-1 em soro foram correlacionados com pobre diagnóstico. Ver, porexemplo, Pihl et al., Pathology, 12:439-447 (1980). Porque uma quantidadeanormal de MUC-1 circulante pode inibir ou reduzir a eficácia das interaçõesde formulações baseadas em MUC-1 exógenas, conhecimento de quantida-de de MUC-1 endógena pode auxiliar na decisão de apropriada dose deformulações baseadas em MUC-1 a serem administradas a um sujeito.A. Marcador de Tumor CA27.29 (MUC1)
CA27.29 é o nome para um antígeno que é um alvo particular-mente útil para identificação de proteína MUC-1, especialmente para identifi-cação de fragmentos de proteína MUC-1 circulando na corrente sangüíneade sujeito, ou em uma amostra biológica apropriada, tal como em uma a-mostra de sangue, urina, ou soro. O antígeno CA27.29 pode ser detectadopor um anticorpo monoclonal que é específico para o núcleo de proteína doproduto MUC-1. Mapeamento de epítopo mínimo com peptídeos sintéticosse sobrepondo pode ser usado para identificar um apropriado anticorpo mo-noclonal. Um tal anticorpo é B27.29.
Várias variáveis, como o número de repetições tandem de MUC-1 e glicosilação pós-transcricional de epítopos de MUC-1, podem afetar de-tecção e quantificação in vivo de marcadores relacionados com MUC-1. De-tecção in vivo de MUC-1 e seus fragmentos pode ser ainda complicada pelapresença de auto-anticorpos antimucina circulantes, ocasionalmente encon-trados em pacientes de câncer como um resultado de uma resposta de hos-pedeiro a alterada bioquímica de mucina. Estes anticorpos são capazes deformarem imunocomplexos de mucina - anticorpo mucina que podem afetardetecção de MUC-1, dependendo do formato de ensaio. Ver Gion et al., Cli-nicai Chemistry, 45:630-637 (1999), que é aqui incorporado por referencia.
Qualquer processo pode ser usado para detectar ou ensaiarquantidades de antígeno ÇA27.29 em uma amostra de sangue de sujeito, talcomo um ensaio imunossorvente ligado a enzima. Um outro ensaio é o en-saio ACS:180BR (Bayer Diagnostics), que é um ensaio imuno quimiolumi-nescente competitivo automatizado. Um anticorpo monoclonal de camun-dongo, elevado contra um epítopo peptídeo na região tandem da cadeiaprincipal de MUC-1 e marcado com acridínio éster, é incubado por 7,5 minu-tos com ambos, amostra de paciente e CA27.29 purificado acoplado cova-lentemente a partículas paramagnéticas (fase sólida). Ambos, o antígeno naamostra e CA27.29 de fase sólida competem para ligação ao anticorpo mar-cado. Por isso, uma relação inversa é verificada entre a quantidade de antí-geno na amostra e a quantidade de unidade de luz relativas detectadas pelosistema. O ensaio pode ser realizado de acordo com as instruções do fabri-cante.
Um outro ensaio é o ensaio radioimuno TRUQUANT BR, queusa anticorpo monoclonal B27.29 notado acima para quantificar antígenomucina CA27.29 em soro. Ver MacLean et al., J. Immunother., 20(1):70-8(1997).
Tipicamente, no presente caso exemplificado no Exemplo 4, umnível normal de antígeno CA27.29 em soro ou sangue circulante é cerca de37,7 U/mL. Níveis de MUC-1 em soro que são maiores que cerca de 37,7U/mL indicam uma anormalidade.
Está bem dentro do conhecimento daqueles versados na técnicadeterminar níveis limites de peptídeos MUC-1 circulantes, tal como o antíge-no CA27.29, em diferentes grupos de indivíduos. Ou seja, o valor de "37,7U/mL" não é necessariamente um limite definitivo para todas as populaçõesensaiáveis. Uma "quantidade "normal" de CA27.29 circulante, por exemplo,pode ser determinada a partir de uma desejada subpopulação e usada comoum indicador para classificar quantidades de C27.29 como normal ou anormal.
No presente caso, o limite superior para níveis normais de MUC-1 circulante, como medidos por níveis de C27.29, foi 37,7 U/mL. De acordocom a presente, por isso, um indivíduo com um nível de MUC-1 que é cercade 37,7 U/mL ou menor que cerca de 37,7 U/mL é um candidato apropriadopara tratamento com uma vacina baseada em MUC-1, tal como com BLP25,ou uma das outras formulações de MUC-1 aqui descritas.
Também de acordo com a presente invenção, um sujeito comum nível de MUC-1 que está no, ou menor que um diferente nível normal"limite" de MUC-1 circulante é também um candidato apropriado para trata-mento com uma vacina baseada em MUC-1, tal como com BLP25, ou umadas outras formulações de MUC-1 aqui descritas.
B. Tipificação HLA A2
O termo HLA refere-se ao Sistema Antígeno de Leucócito Hu-mano, que é controlado por genes sobre o braço curto de cromossoma seis.
Os Ioci HLA são parte da região genética conhecida como o Principal Com-plexo de Histocompatibilidade (MHC). O MHC tem genes (incluindo HLA)que são integrados a função normal da resposta imuno. O papel essencialdos antígenos HLA está no controle de auto-reconhecimento e assim defesacontra microorganismos. Alguns antígenos HLA são reconhecidos sobre to-dos os tecidos do corpo, antes que justo apenas células de sangue.
Antígeno de leucócito humano (HLA) A2 é o alelo mais hetero-gêneo no Iocus HLA A, com aproximadamente 56 subtipos diferentes. Subs-tancial heterogeneidade em distribuição de A02 foi observada em popula-ções por todo mundo. HLA B40 é o alelo mais comum associado com haplo-tipos A2. HLA A2 também foi implicado em um número de doenças incluindomal de Alzheimer1 artrite psoriática, vitiligo, e tuberculose pulmonar.
É possível detectar a presença de proteína HAL A2 em uma a-mostra de sangue ou tecido de indivíduo ou de ADN ou ARN. Portanto, oúltimo tipo de ensaio, a reação de cadeia polimerase (PCR) pode ser em-pregado para detectar ADN, ARN ou ADN c HLA A2. Por exemplo, técnicade hibridização de oligonucleotídeo específica de seqüência de mancha re-versa baseada em PCR. Alternativamente, Southern ou Northern blots comuma sonda específica de HLA A2 podem ser empregadas. Por outro lado,um anticorpo pode ser usado para detectar proteína HLA A2.
A presença ou ausência de ácido nucléico de HLA ou a proteínaHLA A2 é um fator a ser considerado em preparação de sujeito para trata-mento com uma vacina baseada em MUC-1, tal como BLP25.
X. Indivíduos com NSCLC
Quando sujeitos com NSCLC são para serem tratados com umaformulação baseada em MUC-1 da invenção, sujeitos diagnosticados comotendo NSCLC em estágio IIIB loco-regional (LR), estágio IIIB com efusãopleural maligna, ou estágio IV podem ser especificamente tratados. Não obs-tante, a presente invenção também abrange o tratamento de indivíduos NS-CLC outros que não aqueles tendo doença em estágio Ill loco-regional, es-tágio Ill de efusão pleural, e estágio IV. Assim, a presente invenção contem-pla tratamento de pacientes diagnosticados com NSCLC em estágio IA, es-tágio IB, estágio MA, estágio IIB, estágio IIIA, estágio IIIB, estágio IIIB Ioco-regional, estágio IIIB de efusão pleural, e estágio IV. Ver Mountain C.F.,Chest, 111 (6):1710-7 (1997), que é aqui incorporado por referência.A. Estadiamento de Câncer de Pulmão
Geralmente, quando as formulações baseadas em MUC-1 sãousadas em sujeitos com NSCLC1 o estágio de NSCLC no indivíduo pode serdeterminado antes, após, ou durante tratamento. Um esboço de estadiamen-to de câncer de pulmão é mostrado abaixo:
Normalmente em câncer de pulmão, um crescente número de"estágios" correlaciona-se com um pior prognóstico. Para diagnosticar umindivíduo em um particular estágio, o tamanho e a localização do tumor pri-mário (valor "T"), assim como o grau de envolvimento nodal e crescente pro-habilidade de metástases (valor "N"), são levados em consideração. Tam-bém notada quando diagnosticando indivíduos é a ausência ("MO") ou pre-sença ("M1") de metástases.
1. Categoria T
A categoria T é constituída por subcategorias, T1-T4, pelo queum número crescente de 1 a 4 representa crescente tamanho e invasão lo-cal pelo tumor primário. T1 e T2 são primariamente diferenciados no tama-nho, por exemplo, T1 é de menos que 3 cm enquanto T2 é maior que 3 cm.
Tumores T3 tipicamente envolvem a parede de tórax, ê incluem mas nãosão limitados a, sulco pulmonar superior, diafragma, pleura mediastinal, pe-ricárdio, ou brônquio de tronco principal proximal, mas pode ser ressecável.Tumores T4 não são cirurgicamente ressecáveis porque eles invadiram omediatinum e podem envolver coração, grandes vasos, traquéia, carina, ouesôfago, ou no caso de uma efusão pleural maligna, a pleura.
2. Categoria N
Estágios nodais são divididos em N1, N2, e N3. Nodos N1 tipi-camente envolvem nodos hilares ipsilaterais ou peribronquiais. Estes nodossão de posição intrapleural. Nodos N2 tipicamente envolvem nodos subcari-nais ou mediastinais ipsilaterais. Nodos N3 tipicamente envolvem nodos hila-res contralaterais, ou mediastinais, qualquer escaleno, ou nodos supraclavi-culares.
3. Estágios de NSCLC
Os "estágios" de NSCLC, por isso, representam classificaçõesdistintas de NSCLC que são baseadas nas várias permutações de valoresde T1 N, e M. Os estágios reconhecidos de NSCLC são como se segue:
Carcinoma Oculto: Nesta categoria, pacientes são classificadoscomo TX NO MO, significando que eles tiveram células malignas detectadasem suas secreções broncopulmonares, mas não há tumor evidente atravésde processos radiográficos ou broncoscópicos.
Estágio IA e Estágio IB: Estágio IA é classificado como T1 NOMObaseado em um resultado de sobrevivência de 5 anos significantemente me-lhor que pacientes com doença em estágio IB (T2 NO MO). Cirurgia é o tra-tamento preferido para estes pacientes. Em 1997, a taxa de sobrevivênciade 5 anos para pacientes cirurgicamente classificados como estágio IA foi de67% e para estágio IB foi de 57%.
Estágio IIA e Estágio MB: Doença em estágio IIA é definida comoT1 N1 MO e tem uma taxa de sobrevivência de 55% em 5 anos baseado emestadiamento cirúrgico. Doença em estágio IIB é composta por T2 N1 MO eT3 NO MO. A designação T3 NO MO representa extensão extrapulmonar dotumor sem envolvimento de nodo linfático. A classificação T3 NO MO é agru-pada com T2 N1 MO devido suas respectivas taxas de sobrevivência de 5anos para doença cirurgicamente classificada, 38% versus 39%, não sãosignificantemente diferentes. Cirurgia também é o tratamento primário paraestes indivíduos.
Estágio MIA: Pacientes de estágio IIIA são considerados seremressecáveis, enquanto pacientes de estágio IIIB não são. Pacientes de está-gio IIIA são definidos por lesões com extensão extrapulmonar (T3) e limitadoenvolvimento de nodo linfático (N1 ou N2). O envolvimento nodal pode seestender para os nodos linfáticos subcarinais e/ou mediastinais ipsilaterais.Estes pacientes são classificados como T3 N1 MO, ou T1 -3 N2 MO. Como de1997, a taxa de sobrevivência de 5 anos para doença de estágio IIIA foi de23%.
Estágio IMB: Classificação de estágio IIIB refere-se a pacientesque têm envolvimento extrapulmonar incluindo, mas não limitado a nodoslinfáticos hilares ou mediastinais contralaterais; nodos escalenos ou supra-claviculares ipsilaterais ou contralaterais; nodos mediastinais extensivos semmetástases distantes; ou efusão pleural maligna de citologia positiva. Estespacientes podem ser classificados como T1-3 N3 MO ou T4 NO-3 MO. Em1997, a taxa de sobrevivência de 5 anos para doença classificada clinica-mente foi de 5% com terapia multimodal.
Estágio IV: Estágio IV é definido por qualquer envolvimento me-tastático. Estes pacientes são classificados como M1 com qualquer T equalquer N. Como de 1997, mais que um quarto de pacientes com NSCLCteve estágio clínico IV.
XI. Indivíduos com câncer de próstata
Similar à taxa de sobrevivência de indivíduos com câncer depulmão de estágio avançado que sofreram terapia multimodal, homens comcâncer de próstata que experimentam insuficiência bioquímica após umaprostatectomia têm poucas opções terapêuticas. Uma opção terapêutica queeles têm é terapia de privação de andrógeno (ADT). Infelizmente, esta tera-pia tem significante morbidez, especialmente se usada por longos períodosde tempo.
Em indivíduos com câncer de próstata, é conhecido, por exem-plo, que níveis de antígeno específico de próstata ("PSA") no sangue ten-dem a elevar-se quando a glândula próstata aumenta. Da mesma maneira,PSA é um bom marcador de tumor ou biológico para câncer de próstata. Emindivíduos com doença mais avançada, declínio em PSA induzido por trata-mento correlaciona-se com aperfeiçoada sobrevivência (Scher et al., J. NatiCâncer Inst., 91 (3):244-51 (1999)).
XII. Tratamento de indivíduos com NSCLC ou câncer de próstata
A presente invenção abrange tratamento com as formulaçõesbaseadas em MUC-1 da invenção de indivíduos com NSCLC em todos osestágios de NSCLC assim como o tratamento de indivíduos com câncer depróstata, incluindo indivíduos com câncer de próstata que têm insuficiênciaPSA, prostatectomia pós-radical. O uso da frase "tratamento" é pretendidoque a formulação ou vacina é útil para prevenção, cura, reversão, atenua-ção, alívio, minimização, supressão, ou impedimento de efeitos prejudiciaisde um estado de doença, progressão de doença, agente causador de doen-ça, ou outra condição anormal. Em algumas modalidades, indivíduos comNSCLC ou câncer de próstata podem ter sido previamente tratados com ra-diação ou cirurgia antes de tratamento com as composições inventivas. Indi-víduos também podem sofrer tratamento com quimioterapia, radiação oucirurgia antes, durante, ou após terem sido tratados com as formulações ba-seadas em MUC-1 da invenção. No caso destes indivíduos, qualquer trata-mento de câncer aceito pode ser dado antes, durante, ou após tratamentocom as formulações baseadas em MUC-1.
Quando escolhendo indivíduos para tratar com as formulações evacinas da presente invenção, critérios de inclusão e exclusão podem serusados. Por exemplo, em uma modalidade, quando indivíduos NSCLC sãopara serem tratados com a formulação baseada em MUC-1, indivíduos aserem tratados podem ser homens ou mulheres acima da idade de 18 cujadoença é estável ou que respondeu a tratamento seguindo término de suaprimeira linha de quimioterapia padrão. Indivíduos outros que não aquelesacima podem ser tratados com as formulações baseadas em MUC-1. Defato, alguns indivíduos tratados com as composições inventivas não terãosido tratados com quimioterapia antes de tratamento com a formulação ba-seada em MUC-1.
XIII. Possíveis critérios de inclusão e exclusão para indivíduos com NSCLC
Em uma outra modalidade, um indivíduo com NSCLC escolhidopara tratamento tem um status de desempenho de Eastern Cooperative On-cology Group (ECOG) de < 2, com uma contagem de neutrófilos > 1,5x109/L;contagem de plaqueta > 100x109/L; WBC > 2,5x109/L e hemoglobina 90 g/L.Embora os números ECOG possam ser usados para avaliação de indivíduospara tratamento, particulares números ECOG não são requeridos antes, du-rante, ou após tratamento.
Outros critérios de inclusão podem incluir uma sobrevivênciaesperada de quatro meses e onde o indivíduo entendeu e assinou um con-sentimento escrito. É claro, estes não são conjunto de critérios de inclusão etratamento de indivíduos com menores expectativas de vida é imaginado.Além disso, na medida em que formulação baseada em MUC-1 se torneprincipal em tratamentos de câncer, indivíduos provavelmente terão ascomposições inventivas prescritas e nenhum consentimento escrito será re-querido.
Com relação a indivíduos com NSCLC que podem ser excluídosde tratamento, os critérios de exclusão são pretendidos somente como dire-trizes. Em muitos casos, indivíduos exibindo um ou mais dos critérios de ex-clusão, incluindo todos os critérios de exclusão, ainda poderão ser tratadoscom as formulações baseadas em MUC-1. Exemplos de critérios de exclu-são para indivíduos NSCLC incluem: (a) cirurgia ou imunoterapia dentro dequatro semanas antes de tratamento, (b) fármacos imuno-supressivos inclu-indo corticosteróides sistêmicos dentro de três semanas antes de tratamen-to, (c) história passada ou atual de neoplasma outro que não carcinoma depulmão, (d) doença automine ou doença de imunodeficiência reconhecida,(e) disfunção renal ou hepática clinicamente significante, (f) significante do-ença cardíaca ou infecção ativa, ou (g) indivíduos que tiveram uma esple-noctomia.
XIV. Possíveis critérios de inclusão e exclusão para indivíduos com câncerde próstata
Similar a indivíduos com NSCLC, indivíduos com câncer depróstata também podem ser submetidos a critérios de inclusão e exclusão.
Novamente, estes critérios são diretrizes somente e um indivíduo com cân-cer de próstata que não satisfaz qualquer um dos critérios de inclusão ousatisfaz qualquer de, ou todos de, critérios de exclusão ainda pode ser trata-do sob os processos da presente invenção. Para indivíduos com câncer depróstata, critérios de inclusão podem incluir: (a) prostatectomia radical pelomenos 6 meses antes de tratamento, (b) três valores aumentados consecuti-vos de PSA em soro de prostatectomia pós-radical com pelo menos um au-mento de 50% acima de nadir pós-prostatectomia, (c) nenhuma evidência dedoença maligna nas avaliações de pré-tratamento como evidenciado por CTpélvica negativa e exploração de osso, (d) status de desempenho ECOG de0, 1, (e) testes de função renal e hepática, hematológica normais, (f) enten-dimento e assinar um consentimento informado; e (g) indivíduos que foramtratados com terapia hormonal para câncer de próstata (isto é, tratamentoneoadjuvante pré-RP) têm de ter testosterona dentro de faixa normal. Comoestabelecido acima, estes critérios de inclusão são somente diretrizes e mui-tos indivíduos com diferentes critérios podem ser tratados usando os pro-cessos da invenção. Por exemplo, indivíduos com câncer de próstata quenão tiveram uma prostatectomia radical podem ser tratados. Além disso, in-divíduos que não têm aumentado PSA em soro ou cujo PSA em soro nãoaumentou consecutivamente ou não está acima de 50% como comparadoao nadir pós-prostatectomia também podem ser tratados.
Critérios de exclusão que podem ser usados, embora não reque-ridos, para indivíduos com câncer de próstata incluem: (a) terapia hormonaldentro de 6 meses antes de tratamento, (b) imunoterapia dentro de 4 sema-nas antes de tratamento, (c) radioterapia para o leito de próstata dentro deum ano antes de tratamento, (d) tratamento com fármacos imuno-supres-sivos como ciclosporina ou hormônio adrenocorticotrópico (ACTH) ou reque-rendo tratamento crônico com corticosteróides, (e) doença de imunodeficiên-cia ou auto-imune conhecida, ou (f) infecção ativa ou doença cardíaca clini-camente significante. Novamente, estes critérios de exclusão são somenteexemplos. Por exemplo, indivíduos com ambos câncer de próstata e doençacardíaca clinicamente significante podem ser tratados com os processos dapresente invenção em casos individuais.
XV. Efeitos de tratamento
Tratamento com as formulações baseadas em MUC-1 aqui des-critas pode resultar em vários efeitos. Um efeito de tratamento de um indiví-duo diagnosticado com NSCLC, especificamente um indivíduo diagnosticadocom NSCLC em estágio IIIB, com a formulação baseada em MUC-1 é umaumento no comprimento de sobrevivência. Similarmente, administração deformulação baseada em MUC-1 prescrita a um indivíduo pode impactar a-quela "qualidade de vida" do indivíduo ou "qualidade de vida relacionadacom saúde". Um aumento em sobrevivência, assim como um impacto sobrequalidade de vida, também pode ser visto em indivíduos tratados com cân-cer de próstata. Além disso, em certos indivíduos com câncer de próstata,tratamento com a formulação baseada em MUC-1 resultará em taxas de du-plicação de PSA menores, estabilizadas, ou diminuídas.
Comparações dos efeitos de tratamento com formulações base-adas em MUC-1 podem ser feitas entre indivíduos tratados e indivíduos quenão estão sendo cuidados ou indivíduos que estão sob melhor cuidado su-porte (BSC). BSC compreende muitos tipos alternativos de cuidados quenão incluem tratamento com a formulação baseada em MUC-1. Por exem-plo, BSC, embora usualmente discricionário dependendo das circunstâncias,pode incluir suporte psico-social, analgésicos, e suporte nutricional.
Em algumas modalidades, comparação dos efeitos de tratamen-to será feita entre indivíduos recebendo diferentes quantidades da formula-ção baseada em MUC-1. Ainda em modalidades, indivíduos sofrerão BSCem conjunção com tratamento com formulações baseadas em MUC-1.
Antes de tratamento de um indivíduo com as formulações base-adas em MUC-1 da presente invenção, indivíduos podem sofrer avaliação depré-tratamento. Um exemplo não-limitante de uma avaliação de pré-trata-mento inclui uma exame físico e histórico completo. O exame físico podeincluir coisas como uma exploração CT ou raios-X. Indivíduos também po-dem sofrer avaliações de tratamento durante o curso de tratamento. Umaavaliação de tratamento pode incluir monitoração de sinais vitais de indiví-duo, inspeção de sítios de injeção, e análises de amostras de sangue.
Um indivíduo tratado também pode ser avaliado através de de-terminação de: (a) tamanho de tumor, localização de tumor, (c) estágio no-dal, (d) taxa de crescimento do NSCLC ou câncer de próstata, (e) taxa desobrevivência do indivíduo, (f) mudanças no câncer de pulmão do indivíduoou sintomas de câncer de próstata, (g) mudanças na concentração de PSAde indivíduo, (h) mudanças na taxa de duplicação de concentração de PSAde indivíduo, ou (i) mudanças na qualidade de vida de indivíduo.XVI. Aumentado tempo de sobrevivência em indivíduos NSCLC através deadministração de formulação baseada em MUC-1 ou Vacina LipossomaBLP25Uma das vantagens de tratamento de um indivíduo com NSCLCou câncer de próstata com as formulações baseadas em MUC-1 da inven-ção é que o indivíduo pode ter um tempo de sobrevivência mais longo queum indivíduo que não recebe tratamento com as composições inventivas.
Taxas de sobrevivência podem ser determinadas através de comparação denúmeros atuais de sobreviventes com o número de indivíduos que iniciaramtratamento com a formulação baseada em MUC-1. Em outras modalidades,taxas de sobrevivência podem ser comparadas a taxas de sobrevivênciapublicadas para um particular tipo de câncer. Em geral, a taxa de sobrevi-vência pode ser medida em qualquer momento seguindo o início de trata-mento.
Por exemplo, a taxa de sobrevivência pode ser medida em me-nos que 6 meses seguindo o início de tratamento, mais que 6 meses masmenos que um ano, um ano ou mais porém menos que 2 anos, 2 anos oumais porém menos que 5 anos, ou 5 ou mais anos. Em algumas modalida-des, uma aumentada taxa de sobrevivência será evidência de que as formu-lações baseadas em MUC-1 da invenção estão afetando um indivíduo parti-cular.
XVII. Manutenção de qualidade de vida e sintomas de câncer de pulmão a-través de administração de formulações baseadas em MUC-1
Como mostrado acima, uma outra vantagem de tratamento deum indivíduo com NSCLC ou câncer de próstata com as formulações basea-das em MUC-1 da invenção é manutenção ou um aumento na qualidade devida do indivíduo. Médicos e agências reguladoras reconhecem que uma"qualidade de vida" de indivíduo ("QoL") é um ponto final importante em ex-perimentos clínicos de câncer. Ver, por exemplo, Plunkett et al., Clin. Lungcâncer, 5(1):28-32 (2003), e Cella et al., J. Clin. Epidemiol., 55(3):285-95(2002), que são aqui incorporados por referência.
Quatro dos mais importantes indicadores de qualidade de vidasão função física e ocupacional, estado psicológico, interação social, e sen-sações somáticas. Neste sentido, em indivíduos com NSCLC, dois questio-nários de câncer de pulmão, o European Organization for Research andTreatment of Câncer ("EORTC") e o Functional Assessment of Câncer The-rapy ("FACT-L"), podem ser usados para avaliação de um indivíduo, especi-ficamente uma qualidade de vida relacionada a saúde de indivíduo antes,durante, e após tratamento com as formulações baseadas em MUC-1 aquidescritas.
É antecipado que os processos da invenção podem ser usadosem conjunção com avaliações de acordo com várias subescalas que monito-ram um bem-estar físico de indivíduo (PWB), bem-estar social/família(SWB)1 bem-estar emocional (EWB), bem-estar funcional (FWB), e subesca-la de sintoma de câncer de pulmão (LCS). Embora a subescala de sintomade câncer de pulmão seja obviamente talhada para indivíduos com câncerde pulmão, diferentes subescalas podem ser usadas com diferentes tipos decâncer. Assim, uma diferente subescala pode ser usada com indivíduos comcâncer de próstata. Dependendo de quais escores de "bem-estar" sejamcombinados, pode-se obter um "escore FACT-L" (a soma de todas as sub-escalas) ou um "Escore de Resultado de Experimento (TOI)" (a soma dassubescalas PWB, FWB, e LCS). O TOI é um indicador confiável de mudançasignificativa em qualidade de vida. Ver, Cella et al., supra.
O indivíduo pode ser analisado por seus escores FACT-L e TOIantes, durante, e após tratamento com as formulações baseadas em MUC-1da invenção. Por exemplo, o escore TOI pode ser tomado em linha base,isto é, pré-tratamento, e então em vários intervalos após início de tratamen-to, isto é, 4 semanas, 8 semanas, 19 semanas, 31 semanas, ou 43 sema-nas, ou mais longo. Estes vários intervalos são somente exemplos e os indi-cadores de qualidade de vida podem ser tomados em qualquer momentoapropriado. Por exemplo, o primeiro escore TOI pode ser tomado após oprimeiro tratamento ao invés de em uma linha base. Então, a mudança emescores entre vários pontos de tempo pode ser calculada para determinartendências com relação a aperfeiçoamento, piora, ou manutenção de quali-dade de vida.
Foi calculado que uma diminuição de 3 pontos ou mais a partirda linha base para LCS é uma piora clinicamente significante em sintomasde câncer de pulmão e um aumento em 3 ou mais pontos é um aperfeiçoa-mento clinicamente significante em sintomas de câncer de pulmão. Damesma maneira para escores de TOI, uma diminuição de 7 ou mais pontosindica uma piora em qualidade de vida, enquanto um aumento de 7 ou maispontos indica um aperfeiçoamento em qualidade de vida.
Em algumas modalidades, um aperfeiçoamento clínico em sin-tomas de câncer de pulmão ou qualidade de vida demonstrará que as formu-lações baseadas em MUC-1 estão afetando o particular indivíduo.
Assim, administração de formulações baseadas em MUC-1 dainvenção pode ser útil em aperfeiçoamento ou manutenção de qualidade devida de indivíduos tratados que têm NSCLC ou câncer de próstata. Na medi-ção de efeito sobre qualidade de vida, um tamanho de efeito pode ser de-terminado a partir de linha base ou a partir de qualquer ponto de tratamento.
Em algumas modalidades, um tamanho de efeito de entre 0,2 a <0,49 indicaum efeito pequeno, 0,5 a 0,79 indica um efeito moderado, e 0,8 ou maiorindica um efeito grande. Estes números são somente exemplos e o tamanhode efeito pode mudar com tratamento de certos indivíduos.
Administração das formulações baseadas em MUC-1 tambémpode ser útil em prevenção de piora em qualidade de vida vista com o tempoem muitos pacientes de câncer. Por exemplo, em algumas modalidades,administração de uma formulação baseada em MUC-1 tal como a vacinaIipossomal BLP25 pode resultar em índices de qualidade de vida que per-manecem essencialmente inalterados ou não atingem o nível de piora ouaperfeiçoamento de qualidade de vida.
Em uma modalidade, a presente invenção abrange aperfeiçoa-mento ou manutenção de qualidade de vida ou aperfeiçoamento ou estabili-zação de sintomas de câncer de pulmão em um indivíduo diagnosticado comNSCLC através de determinação de escores de TOI ou LCS de indivíduoantes, durante, e após tratamento com a formulação baseada em MUC-1BLP25 aqui descrita.
XVIII. Diminuição de Tempo de Duplicação de PSA
Em algumas modalidades, tratamento de indivíduos com câncerde próstata com as formglações baseadas em MUC-1 da invenção resultaráem uma diminuição em concentrações de PSA, uma estabilização de con-centrações de PSA, ou uma diminuição em tempo de duplicação de PSA.
Geralmente, o efeito das formulações baseadas em MUC-1 sobre tempo deduplicação de PSA ou concentrações de PSA pode ser medido em qualquermomento. Por exemplo, embora concentrações de PSA seguindo tratamentopossam ser comparadas a um valor de linha base, a concentração de PSAtambém pode ser comparada entre pontos de tratamento ou entre um espe-cífico ponto de tratamento e o fim do tratamento. Em certas modalidades, aresposta de PSA será confirmada durante tratamento.
XIX. Avaliação de tratamento usando função imune
Em algumas modalidades, a resposta de indivíduos a formula-ções baseadas em MUC-1 será medida usando testes de função imuno, taiscomo ensaios de resposta de proliferação de célula-T. Em algumas modali-dades, os resultados de ensaios de resposta de proliferação de células-Tserão usados para determinar se o tratamento com formulação baseada emMUC-1 está afetando um indivíduo. Resultados destes ensaios também po-dem ser usados para determinação de resposta individual para as formula-ções durante diferentes pontos de tempo durante o curso do tratamento.
Ensaios para medir células T proliferativas não são particular-mente Iimitantes e podem ser realizados através de qualquer processo co-nhecido na técnica. Comparação da resposta de proliferação de células-Tpode ser empreendida para comparar resposta pré-tratamento versus pós-tratamento assim como para comparar respostas imunes dentro de trata-mento.
XX. Outros Cânceres
A presente invenção também abrange o tratamento de outroscânceres em adição a NSCLC e câncer da próstata com as formulações ba-seadas em MUC-1 aqui descritas.
Qualquer indivíduo que tem um câncer que expressa MUC-1pode ser alvejado para tratamento com as formulações baseadas em MUC-1. Por exemplo, um indivíduo com um câncer tipo mucinoso, ou um adeno-carcinoma que expressa uma proteína MUC-1 pode ser alvejado para trata-mento com a vacina de Iipossoma BLP25. Exemplos de adenocarcinomasincluem, mas não são limitados a câncer de ovário, câncer de fígado, porexemplo, colangiocarcinomas invasivos do fígado, câncer de cólon, câncerde mama, câncer pancreático, por exemplo, carcinomas dutais invasivos dopâncreas, e câncer de rim, e mieloma múltiplo. Outros cânceres incluemcâncer cervical, câncer de útero, e leucemia. Um outro câncer que expressaMUC-1 é câncer de cabeça e pescoço.
Os exemplos abaixo são pretendidos ilustrarem mas não Iimita-rem a invenção. Embora eles sejam típicos de como os processos da pre-sente invenção podem ser usados, outros processos, que se conformam aoespírito da invenção, são antecipados e podem ser usados. Por todo o rela-tório descritivo, todas e quaisquer referências a documento publicamentedisponível, incluindo uma patente US, são especificamente incorporadas porreferência.
Exemplo 1
Estudo Fase Il de Vacina MUC1 Lipossomal Para Tratamento de NSCLC
Este exemplo demonstra os efeitos de uma vacina L-BLP25 so-bre o tratamento de sujeitos com NSCLC estágio IIIB loco-regional ou está-giolV.
Pacientes tratados com a vacina L-BLP25 demonstraram au-mentadas taxas de sobrevivência. Além disso, uma clara vantagem da adi-ção de vacina Iipossoma BLP25 para melhor cuidado suporte comparada amelhor cuidado suporte sozinho foi demonstrada pela manutenção em está-vel bem-estar físico por todo o tratamento e fases de manutenção de terapiae manutenção na qualidade de vida do indivíduo, como medida pelo escoretotal FACT-L e o índice de resultado de experimento.
Processos: O experimento de fase Ilb marcador aberto, contro-lado, envolveu 171 pacientes. Dos 171 pacientes arrolados, 65 tiveram do-ença IIIB loco-regional. Destas, 35 foram randomizadas para tratamento e 30foram randomizadas para melhores cuidados padrões. Os grupos foram en-tão balanceados em termos de idade e etnicidade. Mais fêmeas e pacientesECOG 0 foram randomizados para tratamento versus melhores cuidadospadrões (BSC) (51,4% e 36,7%, e 40,0% e 26,7%) e mais pacientes no bra-ço de tratamento receberam radioterapia, em adição a quimioterapia, paratratamento de câncer antes de envolvimento em experimento (91,4 versus76,6%).
A vacina L-BLP25 usada neste particular experimento foi umapreparação Iiofilizada consistindo em (1) 1000 μς de um lipopeptídeoBLBP25, por exemplo, um peptídeo MUC-1 compreendendo SEQ ID NO:2,(2) 500 μς de imunoadjuvante monofosforil lipídeo A, e (3) três lipídeos: (i)17,3 mg de colesterol, (ii) 3,6 mg de dimiristoil fosfatidil diglicerol, e (iii) 29,1mg de dipalmitoil fosfatidil colina formando um produto lipossomal.
Todos os pacientes no braço L-BLP25 receberam pelo menoscinco vacinações, 96,6% destes pacientes completaram a fase primária e69,3% continuaram na fase de manutenção do plano de tratamento. Terapiade segunda linha enquanto em estudo consistiu principalmente em quimiote-rapia (segunda e terceira linha), radioterapia, e cirurgia. Durante o períodode tratamento primário do estudo, cinco pacientes no braço L-BLP25 e 10pacientes no braço BSC receberam terapia de segunda linha. Dos pacientesque continuaram no período de manutenção do estudo, 43 pacientes no bra-ço de L-BLP25 e 45 pacientes no braço de BSC receberam terapia de se-gunda linha.
Para aperfeiçoar a estimulação antigênica de um maior númerode nodos linfáticos drenando, a vacina foi administrada para quatro sítiosanatômicos. A dose de 1000 μg de L-BLP25 foi dada em quatro injeçõessubcutâneas de 0,5 mL, com cada injeção contendo um quarto da dosetotal. As subdoses foram administradas na região deltóide ou tríceps dosbraços superiores, e os aspectos antero-laterais esquerdo e direito do ab-dome.
Geralmente, como usado neste exemplo, tempo de sobrevivên-cia é definido como o tempo a partir da data de randomização para a data demorte. Para pacientes vivos ou perdidos de acompanhamento no momentode análise, o intervalo entre data de randomização e data na qual o pacientefoi por último conhecido vivo foi calculado e usado como uma observaçãocensurada nas análises. Neste exemplo, sobrevivência foi monitorada emintervalos de três meses por 12 meses após término de advento de paciente.
Um questionário FACT-L QoL foi administrado a todos os paci-entes em específicos pontos de tempo. As análises QoL incluíram avaliaçãode escores de mudança individual FACT-L média a partir de linha base parasemana quatro e semana oito, representação gráfica de escores QoL sobretempo, e análises de área sob a curva para escores total e de subescala. Otamanho de efeito das mudanças de qualidade de vida entre braços de tra-tamento foi determinado a partir de linha base. Um tamanho de efeito entre0,2 a <0,49 indica um efeito pequeno, 0,5 a 0,79 indica um efeito moderado,e 0,8 ou maior indica um efeito grande.
Resultados: Como mostrado na Figura 2, a sobrevivência dedois anos observada para pacientes de estágio IIIB loco-regionais é de 60%para o braço de vacina versus 36,7% para o braço controle, demonstrandoum significante aumento em expectativa de vida de 23,3%. Na população depacientes total, a sobrevivência de dois anos é de 43,2% para o braço devacina versus 28,9% para o braço controle, demonstrando um aumento emexpectativa de vida de 14,3%. Ver Figura 1. A sobrevivência média de paci-entes de estágio IIIB loco-regionais sofrendo somente melhores cuidadospadrões foi similar à sobrevivência média total do inteiro grupo sofrendo me-lhores cuidados padrões em 13,3 meses. Em contraste, a sobrevivência mé-dia total para os pacientes de estágio IIIB loco-regionais sofrendo tratamentocom L-BLP25 permaneceu não satisfeita com uma média mínima de 24 me-ses, demonstrando um aumento em expectativa de vida de pelo menos 10,7meses. Isto é surpreendente e inesperado, quando antes da introdução dascomposições MUC-1 da invenção, nenhuma opção de tratamento viável paraesta categoria de pacientes pode produzir tais resultados.
Com relação a qualidade de vida, uma clara vantagem para obraço L-BLP25 comparado ao braço BSC foi demonstrada. Mais pacientesno braço L-BLP25 mostraram tanto um aperfeiçoamento clinicamente signifi-cante como não mudam comparados a pacientes no braço BSC. No únicobraço BSC1 mais pacientes demonstraram uma piora clinicamente significan-te no índice de resultado de experimento (TOI).
Processo: Análises de comparação de subgrupo IV/efusão pleu-ral maligna (PE) com estágio IIIB e doença estágio IIIB loco-regional (LR)entre pacientes de tratamento e somente BSC foi realizada para o escoretotal FACT-L, as várias subescalas, e TOI usando um teste-T. Um escore demudança Total/TOI negativo indica uma piora em QoL, enquanto um escorede mudança Total/TOI positivo indica um aperfeiçoamento. As análises desubgrupo indicam um melhor QoL para pacientes de estágio MIB LR tratadoscom L-BLP25. Isto é consistente com dados anteriores demonstrando umaperfeiçoamento clinicamente significante em sobrevivência em pacientes deestágio IIIB LR tratados com BLP25 (p=0,0692).
Os resultados das comparações de qualidade de vida são mos-trados na Tabela 1 abaixo:
Tabela 1: Com Daração de Qualidade de Vida FACT-L em Estudo de NSCLC
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Desenho de Estudo
Semana-2: Administração de um questionário FACT-L QoL.
Semana-2: Pacientes foram randomizados para L-BLP25 plusmelhor padrão de cuidados ou para melhor padrão de cuidados sozinho (me-lhor padrão de cuidados inclui radioterapia paliativa e/ou quimioterapia desegunda linha de acordo com atual prática clínica padrão e também podeincluir suporte psico-social, analgésicos e suporte nutricional).
Semana-2: Avaliação de pré-tratamento (história completa, exa-me físico, e estudos clínicos de laboratório). Avaliações de outros potenciaissítios de doença foram conduzidas, se clinicamente garantidas, para regulardoença progressiva em outras áreas. Mulheres de potencial gravidez foramrequeridas terem um teste de gravidez negativa (HCG) antes de tratamento.
Dia-3: Pacientes de braço de tratamento receberam uma doseintravenosa simples de 300 mg/m2 de ciclofosfamida.
Semanas 0 a 7: vacinações com L-BLP25 N9 1 a Nq 8 (períodode tratamento primário). Pacientes no braço L-BLP25 tiveram sinais vitaisavaliados e sítios de injeção prévios inspecionados antes de cada tratamen-to com L-BLP25. Sinais vitais também foram monitorados uma hora seguin-do cada tratamento com L-BLP25. Pacientes receberam cartões diários se-guindo cada vacinação para anotação de quaisquer eventos adversos e pré-vios sítios de injeção foram avaliados em cada visita subseqüente. Toxicida-de foi graduada de acordo com CALGB Expanded Criteria.
Semana 4: Avaliação de tratamento e segurança e trabalho deimunologia de sangue para pacientes no braço de tratamento. QuestionárioFACT-L QoL para todos os pacientes.
Semana 8: Avaliação de tratamento (exame físico, status ECOG,sinais vitais, inspeção de sítio de tratamento para o braço L-BLP25, e avalia-ção de eventos adversos).
Amostras de sangue também foram retiradas e analisadas parasegurança padrão (hematologia e química) assim como resposta imune.Questionário FACT-L QoL para todos os pacientes.
Semana 19+: Vacinações de manutenção (intervalos de 6 se-manas) e avaliações de tratamento (intervalos de 12 semanas). Pacientesno braço de L-BLP25 tiveram avaliações de tratamento e trabalho de sanguede segurança realizados em cada vacinação de manutenção assim como umexame de perfil de imunologia uma semana seguindo a primeira vacinaçãode manutenção. Questionário FACT-L QoL para todos os pacientes.População de Pacientes
Critérios de Inclusão
1. Homens e mulheres acima da idade de 18 com NSCLC cuja doençafoi estável ou respondeu a tratamento seguindo término de sua qui-mioterapia padrão de primeira linha.
2. Status de desempenho de Eastern Cooperative Oncology Group (E-COG) de <2, com uma contagem de neutrófilo >1,5x109/L; contagemde plaquetas > 100x109/L; WBC >2,5x109/L e hemoglobina 90 g/L.
3. Sobrevivência esperada de quatro meses.
4. Entendido e assinado um consentimento escrito.Critérios de Exclusão
1. Cirurgia ou imunoterapia dentro de quatro semanas antes de entradaem estudo.
2. fármacos imuno-supressivos incluindo corticosteróides sistêmicosdentro de três semanas antes de entrada em estudo.
3. história passada e atual de neoplasma outro que não carcinoma depulmão.
4. doença auto-imune ou doença de imunodeficiência reconhecida.
6. disfunção hepática ou renal significante clínica.
7. significante doença cardíaca ou infecção ativa, ou pacientes que tive-ram esplenectomia.
Tabela 2:Características de paciente de estudo e NSCLC_
<table>table see original document page 48</column></row><table>Tabela 2:Características de paciente de estudo e NSCLC
<table>table see original document page 49</column></row><table>
Exemplo 2
Ensaios de resposta de proliferação de célula-T
Este exemplo demonstra que as formulações MUC-1 da inven-ção foram diretamente responsáveis pelo aumento em sobrevivência médiamostrado em Exemplo 1.
Ensaios de linfo-proliferação foram realizados usando os pacien-tes arrolados no estudo de Exemplo 1 para monitorar resposta TH específicade antígeno MUC-1 (proliferação de células-T auxiliares) antes e seguindovacinações para medir as dinâmicas, da resposta imune celular antimuC-1 depaciente. Ensaios de proliferação de células-T foram realizados em pacien-tes no braço L-BLP25 ambos, pré-imunização e em vários pontos de tempoapós imunização.
Dos pacientes no braço L-BLP25, 78 foram avaliados para umaresposta proliferativa de células-T. Dezesseis pacientes foram determinadosterem uma resposta proliferativa de células-T específicas para MUC-1 positi-va que foi induzida pela vacina L-BLP25 (a resposta não existe pré-imunização). Dos dezesseis pacientes que desenvolveram uma respostaimune, dois tiveram doença estágio IIIB loco-regional, com os pacientes res-tantes tendo doença de estágio IV. A sobrevivêncvia média dos pacientes nobraço L-BLP com uma resposta proliferativa positiva foi de 27,6 meses en-quanto aqueles pacientes com uma resposta proliferativa negativa tiveramuma sobrevivência média de 16,7 meses. Estes resultados demonstram quea formulação MUC-1 da invenção foi diretamente responsável pelo aumentoem sobrevivência média de expectativa de vida de 10,9 meses.Exemplo 3
Estudo de Fase Il de Vacina MUC1 Lipossomal em Insuficiências PSA deProstatectomia Pós-Radical (RP)
Este exemplo mostra os efeitos imunoterapêuticos de vacinaL-BLP25 sobre os níveis de PSA em homens com PSA crescente seguindoprostatectomia radical.
No fim de período de tratamento primário (semana 8), 8/16 paci-entes tiveram PSA estável. Um paciente manteve PSA estável até o fim doperíodo de estudo (semana 49). Houve um prolongamento notado em tempode duplicação de PSA ("PSADT") para todos exceto um paciente arrolados.O tempo de duplicação é o comprimento de tempo que o nível de PSA deum indivíduo leva para duplicar e é um fator usado para prever sobrevivênciaseguindo cirurgia em indivíduos com câncer de próstata. Os presentes da-dos mostram que, em 6/16 pacientes, o tempo de duplicação excedeu 50%.
Processos: Homens com insuficiência bioquímica como eviden-ciado por 3 elevações em PSA após prostatectomia foram arrolados. Estesincluíram dezesseis pacientes, com uma idade média de 60, um escore E-COG de 0 ou 1, e escore Gleason médio de 7. Pontos finais primários forameficácia (como medida por resposta PSA) e segurança de uma vacina Iipos-somai MUC1 (L-BLP25). Mudanças em tempo de duplicação PSA (PSADT)também foram avaliados. Pacientes receberam uma dose intravenosa sim-ples de 300 mg/m2 de ciclofosfamida (CTX) seguida por 8 vacinações subcu-tâneas semanais com L-BLP25 contendo 1000 μg de antígeno (tratamento).Subseqüentes vacinações foram dadas em intervalos de 6 semanas até se-mana 49 (manutenção). Concentrações de PSA foram medidas durante asfases de tratamento e manutenção e PSADT foi calculado para estes inter-valos e comparado a PSADT antes de alistamento.
Todos os 16 pacientes receberam CTX e 15/16 completaram operíodo de tratamento. Dez pacientes completaram o período de manuten-ção. Os eventos adversos mais comuns seguindo tratamento foram náusea(31%) e fadiga (25%); entretanto, nenhum destes efeitos adversos foi piorque grau 1.Resultados: Após indução, 8/15 pacientes avaliáveis tiveram tan-to estabilização como diminuição em PSA 9como para definição de grupo detrabalho PSA). Na última medição de PSA em estudo, um paciente mantevePSA estável. 6/15 pacientes tiveram um prolongamento de 50% de PSADTcomparado a PSADT pré-estudo.
Avaliação de ponto final primário de estabilização ou redução dePSA nesta população individual através do uso de vacina L-BLP25 foi comose segue:
- 8/16 indivíduos tiveram estabilidade PSA após período de tra-tamento primário;
- 1/16 indivíduos reteve estabilidade de PSA no fim do períodode manutenção; e
- PSADT foi prolongado em 14/15 sujeitos através de uso de va-cina; 6/16 indivíduos tiveram prolongamento de PSADT por > 50%.
Desenho de Estudo:
Semana-2: avaliação de pré-tratamento (exame físico, mediçãode concentração de PSA, CT pélvica, e exploração de osso).
Dia-3: pré-tratamento com ciclofosfamida.
Semanas 0 a 7: vacinações com L-BLP25 Nq 1 a Ne 8 (períodode pré-tratamento primário).
Semana 8: avaliação de período de tratamento primário incluin-do resposta de PSA.
Semana 13: confirmação de resposta de PSA.
Semanas 13, 19, 25, 31, 37, 43 & 49: vacinações com L-BLP25N9 9 a Ne 15 (período de manutenção)
Semana 43: avaliação de resposta de PSA.Semana 49: confirmação de resposta de PSA.Semana 50: avaliação de tratamento de manutenção.
População Individual:
Critérios de Inclusão:
1. prostatectomia radical pelo menos 6 meses antes de entrar em estudo.
2. três aumentos consecutivos em valores de PSA em soro de prostatec-tomia pós-radical com pelo menos um aumento de 50% acima de nadirpós-prostatectomia.
3. nenhuma evidência de doença maligna em avaliações de pré-tratamen-to como evidenciado por CT pélvica negativa e exploração de osso.
4. status de desempenho ECOG de O, 1.
5. testes de função renal e hepática, hematológica normais.
6. Entendimento e assinatura de um consentimento informado escrito.
7. testosterona de soro dentro da faixa normal para todos os pacientesque foram tratados com terapia hormonal para câncer de próstata (istoé, tratamento neoadjuvante pré-RP).
Critérios de Exclusão
1. terapia hormonal dentro de 6 meses antes de entrada em estudo.
2. imunoterapia dentro de 4 semanas antes de entrada em estudo.
3. radioterapia para leito de próstata dentro de um ano antes de entradaem estudo.
4. tratamento com fármacos imuno-supressivar como ciclosporina ouhormônio adrenocorticotrópico (ACTH) ou tratamento crônico requeridocom corticosteróides
5. doença de imunodeficiência ou auto-imune conhecida.
6. doença cardíaca clinicamente significante ou infecção ativa.
Tabela 3: características de paciente para estudo de câncer de próstataIdade (anos):
<table>table see original document page 52</column></row><table>Diagnóstico inicial para entrada em estudo (anos):
<table>table see original document page 53</column></row><table>
Nadir pós-prostatectomia para entrada em estudo (anos):
<table>table see original document page 53</column></row><table>
Linha base de PSA μς/Ι.:
<table>table see original document page 53</column></row><table>
Tratamento Recebido
<table>table see original document page 53</column></row><table>
Vacinações de período de tratamento primário
<table>table see original document page 53</column></row><table>
Vacinações de período de tratamento de manutenção
<table>table see original document page 53</column></row><table>Tabela 4: mudança em PSA a partir de linha base para semana 8 (períodode tratamento primário)
<table>table see original document page 54</column></row><table>
Eventos Adversos
<table>table see original document page 54</column></row><table>
Seis de dezesseis pacientes não reportaram reações de qual-quer tipo no sítio de injeção. Nove pacientes reportaram eritema. Nenhumaulceração ocorreu. Não ocorreu nenhum evento severo ou impedidas aindavacinações.
Tabela 5: Tempo de duplicação de PSA
<table>table see original document page 55</column></row><table>
Intervalo A = pré-estudo (a partir de primeiro de 3 pré-estudos de elevaçãoconsecutiva de PSA antes de entrada de estudo em linha base)
Intervalo B = manutenção (a partir de semana 8 até o fim de estudo).
Exemplo 4
Marcador de tumor CA27.29
A Figura 1 lista a distribuição de freqüência de valores de CA27.29 de paciente por visita, braço (BLP25 ou Controle), e nível nor-mal/anormal. Determinação de níveis em soro de MUC1 (CA27.29) foi reali-zada em amostras de linha base de 166 pacientes (não existiram dados ge-rados para 4 pacientes no braço BLP25 (3-nenhuma amostra recebida; 1-marcação imprópria) e 1 paciente em braço controle (1-dados não recebidospara entrada) e em 8 amostras pós-imunização de 153 pacientes. Nenhumadiferença significante é vista entre os braços através de níveis de CA27.29.
As Figuras 5-9 mostram a curva de sobrevivência para pacientescom níveis normais do antígeno em linha base comparados àqueles pacien-tes que tiveram níveis anormais. O limite superior de normal para níveis emsoro de MUC1 como determinado neste ensaio (radioimunoensaio TruquantBR, baseado em soros de 1004 doadores fêmeas saudáveis) é 37,7 U/mL.Níveis em soro de MUC1 que foram maiores que 37,7 U/mL foram conside-rados anormais. Existiram 124 pacientes em linha base com níveis normaisde CA27.29 (63 no braço BLP25 e 61 no braço controle) e 42 com níveisanormais (21 no braço BLP25 e 21 no braço controle). A sobrevivência me-diana daqueles pacientes tendo níveis normais de CA27.29 em linha base foide 19,5 meses enquanto a sobrevivência mediana daqueles tendo níveisanormais foi de 10,5 meses (Cox p<0,0001).
As Figuras 6 e 7 ilustram a sobrevivência de pacientes em cadabraço baseado em se eles têm níveis normais ou anormais de CA27.29 emlinha base. No braço BLP25 (Figura 6) sobrevivência mediana daqueles pa-cientes com níveis normais de CA27.29 foi 24,2 meses enquanto aquela depacientes com níveis anormais foi de 9,8 meses (Cox p=0,0006). No braçocontrole (Figura 7), a sobrevivência mediana de pacientes com níveis nor-mais de CA27.29 foi de 15,1 meses comparada a 11,3 meses para aquelescom níveis anormais de CA27.29 (Cox ρ = 0,0042).
As Figuras 8 e 9 mostram as diferenças em sobrevivência depacientes de Braço A (BLP25) versus aqueles em Braço B (Controle) basea-do em se eles têm níveis em soro de CA27.29 pré-imunização normais ouanormais. Como ilustrado na Figura 8, pacientes com níveis normais pre-existentes de CA27.29 no braço BLP25 tiveram uma sobrevivência medianade 24,2 meses comparada com aqueles pacientes no braço controle quetiveram uma sobrevivência mediana de 15,1 meses (Cox p=0,0605). Na Fi-gura 9, os pacientes com níveis anormais pré-existentes de CA27.29 no bra-ço BLP25 tiveram uma sobrevivência mediana de 9,8 meses e aqueles paci-entes no braço controle tiveram uma sobrevivência mediana de 11,3 meses(Cox p=0,5234).
A figura 10 mostra as curvas Kaplan-Meier de duração de sobre-vivência através de proliferação de células-T. Ensaios de proliferação de cé-Iulas-T foram realizados sobre pacientes em Braço A (BLP25) em ambos,pré-imunização e em vários pontos de tempo pós-imunização. Estes pacien-tes foram então listados como tendo uma resposta positiva ou negativa seum ou mais dos pontos de tempo mostraram uma resposta que foi diferenteda resposta no ponto de tempo pré-imunização. Dos pacientes no braçoBLP25, 78 foram avaliados para uma resposta proliferativa de células-T. De-zesseis pacientes foram determinados terem uma resposta proliferativa decélulas T específica para MUC1 positiva que foi induzida pela vacina L-BLP25. A curva de sobrevivência de Kaplan-Meier (Figura 10) mostra popu-lações de três pacientes: o braço controle, os proliferadores positivos nobraço BLP25 e os proliferadores negativos no braço BLP25. A sobrevivênciamediana daqueles pacientes no braço BLP25 com uma resposta proliferativapositiva foi de 27,6 meses enquanto aqueles pacientes com uma respostaproliferativa negativa tiveram uma sobrevivência mediana de 16,7 meses; epacientes sobre o braço controle tiveram uma sobrevivência mediana de 13meses (Cox p=0,2148).
Exemplo 5
Tipificação de HLA
Tipipificação de HLA foi realizada em todos os pacientes emBraço A (BLP25) e em Braço B (controle). Esta tipificação foi feita para con-siderar a possibilidade de que alelos Classe I e Il HAL que um paciente ex-pressa podem sr de importância para a eficácia da vacina. Tipificação deHAL foi realizada através de análise de ADN não sorologia e a nomenclaturausada é aquela para ADN. Para cada braço, a % de freqüência e o η paraum dado alelo foram determinados. Para análises de sobrevivência, alelosHLA que tiveram um η > 19 em qualquer braço foram escolhidos. Adicional-mente, as análises foram realizadas para HLA 11 na medida em que há umconhecido epítopo CTL MUC1 para este haplotipo.
A Figura 11 ilustra as análises de sobrevivência que foram reali-zadas para os tipos HLA escolhidos entre braços de tratamento. A tabelalista o haplotipo/alelo, o número total de pacientes com aquele haplotipo (ca-da paciente tem mais de um haplotipo), o número de pacientes com aqueletipo nos braços BLP25 e Controle, a sobrevivência mediana para pacientescom aqueles haplotipos nos braços BLP25 e Controle e significância estatís-tica por teste de Log-Rank e análises de Cox H.R. quando comparando otratamento.
As Figuras 12-16 ilustram os resultados das análises de sobrevi-vência de Kaplan-Meier para uns poucos dos alelos HLA. Estas análises fo-ram corrigidas para estratificação de resposta e estadiamento em entrada deestudo nas análises de Cox. H.R. A Figura 12 mostra a sobrevivência depacientes com HLA A02 em cada um dos braços de estudo. Existiram 44pacientes com este tipo no braço BLP25 e 36 pacientes no braço Controle.Pacientes de HLA A02 no braço BLP25 tiveram uma sobrevivência medianade 22 meses comparada a uma sobrevivência mediana de 11,9 meses paraos pacientes de HLA A02 no braço Controle (Cox p=0,0063). A Figura 13demonstra as diferenças em sobrevivência entre os dois braços em pacien-tes com o alelo DQB 1-05. A sobrevivência mediana de pacientes com estealelo no braço BLP25 (N=25) ainda não foi atingida enquanto a sobrevivên-cia mediana para aqueles pacientes DQB1-05 no braço controle (n=27) é de12,9 meses (Cox p=0,0213). A Figura 14 mostra a sobrevivência de pacien-tes em ambos os braços que têm os haplotipos DRB1-04. Existiram 22 paci-entes no braço BLP25 com este haplotipo e 23 pacientes no braço controle.Sobrevivência mediana foi de 22 meses para aqueles pacientes no braçoBLP25 e 11,8 meses para aqueles pacientes sobre o braço controle (Cox ρ =0,0043).
A Figura 15 mostra uma outra curva de sobrevivência para paci-entes em ambos os braços que têm o alelo DQB 1 -02. Pacientes com estealelo no braço BLP25 (n=31) tiveram uma sobrevivência mediana de somen-te 9,8 meses enquanto aqueles no braço controle tiveram uma sobrevivênciamediana de 16 meses (Cox p=0,0424).
A Figura 16 ilustra adicionais análises de sobrevivência dentrode braços de tratamento para os mesmos haplotipos listados na Figura 17. Aprimeira porção da tabela lista o haplotipo, o número de pacientes no braçoBLP25 que são positivos e negativos para o haplotipo, os valores de CoxH.R. e Log-Rank, e as sobrevivências medianas dos pacientes no braçoBLP25 que são positivos e negativos para aquele haplotipo. A segunda por-ção da tabela proporciona a mesma informação para aqueles pacientes nobraço controle.
A última curva de sobrevivência Kaplan-Meier (Figura 18) mostrapacientes no braço BLP25 que somente têm o alelo CW07 (n=45) versusaqueles pacientes que não têm o alelo (n=43). A sobrevivência mediana dospacientes com o alelo CW07 no braço BLP25 tiveram uma sobrevivênciamediana de somente 12,6 meses enquanto aqueles no braço sem o alelotiveram uma sobrevivência mediana de 24,2 (Cox p=0,0171). Não houve di-ferença real na sobrevivência de pacientes sobre o braço controle com esem o alelo CW07 (Gráfico não mostrado). Em adição, não houve diferençareal em sobrevivência de pacientes no braço BLP25 que tiveram o aleloCW07 e aqueles no braço controle que tiveram o alelo (dados não mostrados).
Como será entendido, todas as faixas aqui mostradas tambémabrangem quaisquer e todas possíveis sub-faixas e combinações de suassub-faixas. Assim, qualquer faixa listada pode ser facilmente reconhecidacomo suficientemente descrevendo e permitindo a mesma faixa ser partidaem pelo menos porções, terços, quartos, quintos, décimos, etc., iguais. Co-mo um exemplo não-limitante, cada faixa aqui discutida pode ser facilmentepartida em um terço inferior, um terço médio e terço superior, etc. Comotambém será entendido, toda linguagem como "até", "pelo menos", "maiorque", "menos que", "mais que" e similares inclui o número recitado e refere-se a faixas que podem ser subseqüentemente partidas em sub-faixas comoaqui discutido. Da mesma maneira, todas as razões mostradas também in-cluem todas as sub-razões caindo dentro da razão mais ampla.
Também, onde membros são agrupados em uma maneira co-mum, tal como em um grupo Markush, a presente invenção abrange nãosomente o inteiro grupo listado como um todo, mas cada membro do grupoindividualmente e todos os possíveis subgrupos do grupo principal. Damesma maneira, para todos os propósitos, a presente invenção abrange nãosomente o grupo principal, mas também o grupo principal ausente um oumais dos membros de grupo. A presente invenção também imagina a explí-cita exclusão de um ou mais de quaisquer dos membros de grupo na inven-ção reivindicada.
Todas as referências, patentes e publicações aqui mostradassão especificamente incorporadas por referência.A menos que de outro mo-do especificado, "um" ou "uma" significa "um ou mais".
Será aparente para aqueles versados na técnica que várias mo-dificações e variações podem ser feitas nos processos e composições dapresente invenção sem se fugir do espírito ou escopo da invenção. Assim, épretendido que a presente invenção cubra as modificações e variações des-ta invenção contanto que elas estejam dentro do espírito das reivindicaçõesapostas e seus equivalentes.

Claims (30)

1. Processo para tratamento de um sujeito com câncer de pul-mão de célula não-pequena compreendendo:(a) seleção para tratamento de um sujeito tendo câncer de pulmão decélula não-pequena, e(b) administração àquele sujeito, por um período de tempo, uma formula-ção baseada em MUC-1, em que a formulação compreende:(i) um lipossoma; e(ii) pelo menos um polipeptídeo compreendendo a seqüência deaminoácidos selecionada do grupo consistindo na seqüência deaminoácidos de SEQ ID NO: 1, uma variante imunologicamenteativa da seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, a se-qüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, e uma variante imu-nologicamente ativa da seqüência de aminoácidos de SEQ IDNO. 2.
2. Processo para tratamento de um sujeito com câncer de prós-tata compreendendo:(a) seleção para tratamento de um sujeito tendo Câncer de próstata, e(b) administração para aquele sujeito, por um período de tempo, de umaformulação baseada em MUC-1, em que a formulação compreende:(i) um lipossoma; e(ii) pelo menos um polipeptídeo compreendendo a seqüência deaminoácidos selecionada do grupo consistindo na seqüência deaminoácidos de SEQ ID NO. 1, uma variante imunologicamenteativa da seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO. 1, a seqüên-cia de aminoácidos de SEQ ID NO. 2, e uma variante imunologi-camente ativa da seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.
3. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que aformulação ainda compreende pelo menos um adjuvante.
4. Processo de acordo com a reivindicação 3, em que o adjuvan-te é selecionado do grupo consistindo em lipídeo A, dipeptídeo muramila,alúmen, uma citocina, e uma sua combinação.
5. Processo de acordo com a reivindicação 4, em que o lipídeo Aé monofosforil lipídeo A ou um lipídeo A sintético.
6. Processo de acordo com a reivindicação 4, em que a citocinaé interleucina-2.
7. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-6, ainda compreendendo uma etapa (c) avaliando o sujeito tratado.
8. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que avaliaçãode sujeito tratado é realizada:(i) antes de período de tempo de etapa (b); (ii) durante o período de tempode etapa (b); (iii) após o período de tempo de etapa (b); ou (iv) uma suacombinação.
9. Processo de acordo com a reivindicação 7 ou 8, em que ava-liação de sujeito tratado compreende medição de uma reação imune no su-jeito tratado.
10. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que mediçãode reação imune nõ sujeito tratado compreende medição de proliferação decélulas-T.
11. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 7a 10, em que avaliação de sujeito tratado compreende determinação de pelomenos um de: (a) tamanho de tumor, (b) localização de tumor, (c) estágionodal, (d) taxa de crescimento do câncer de próstata ou câncer de pulmãode célula não-pequena, (e) taxa de sobrevivência do sujeito, (f) mudançasnos sintomas de câncer de próstata ou câncer de pulmão do sujeito, (g) mu-danças na concentração de PSA do sujeito, (h) mudanças na taxa de dupli-cação de concentração de PSA de sujeito, ou (i) mudanças na qualidade devida de sujeito.
12. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 11, em que o sujeito é diagnosticado como tendo loco-regional estágio 11IB,efusão pleural maligna de estágio IIIB, ou câncer de pulmão de célula não-pequena estágio IV.
13. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 12, em que a formulação é uma vacina de Iipossoma BLP25 compreen-dendo:(a) um peptídeo MUC-1 compreendendo a seqüência de SEQ ID NOs: 1ou 2;(b) um ou mais adjuvantes, e(c) um ou mais iipídeos Iipossomais adicionais.
14. Processo de acordo com a reivindicação 13, em que a vaci-na de Iipossoma BLP25 é provida em um kit.
15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesde 1 a 14, em que a etapa de administração é através de injeção, aerossol,nasal, vaginal, retal, bucal, ocular, local, tópica, intracisterna, intraperitoneal,ou liberação oral, e em que a injeção é uma injeção intramuscular, intrave-nosa, subcutânea, intranodal, intratumoral, intraperitoneal, ou intradérmica.
16. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 15, em que o período de tempo é selecionado do grupo consistindo empelo menos cerca de 2 semanas, pelo menos cerca de 4 semanas, pelo me-nos cerca de 8 semanas, pelo menos cerca de 16 semanas, pelo menoscerca de 17 semanas, pelo menos cerca de 18 semanas, pelo menos cercade 19 semanas, pelo menos cerca de 20 semanas, pelo menos cerca de 24semanas, pelo menos cerca de 28 semanas, pelo menos cerca de 32 sema-nas, pelo menos cerca de 36 semanas, pelo menos cerca de 40 semanas,pelo menos cerca de 44 semanas, pelo menos cerca de 48 semanas, pelomenos cerca de 52 semanas, pelo menos cerca de 60 semanas, pelo menoscerca de 68 semanas, pelo menos cerca de 72 semanas, pelo menos cercade 80 semanas, pelo menos cerca de 88 semanas, pelo menos cerca de 96semanas, e pelo menos cerca de 104 semanas.
17. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 16, em que o indivíduo é tratado com ciclofosfamida antes de (b).
18. Processo para aperfeiçoamento ou manutenção de qualida-de de vida de um sujeito diagnosticado com câncer de pulmão de célula não-pequena, compreendendo administração a um sujeito diagnosticado comcâncer de pulmão de célula não-pequena de uma vacina Iipossoma BLP25por um período de tempo, em que a vacina de Iipossoma BLP25 compreen-de:(a) um peptídeo MUC-1 compreendendo a seqüência de SEQ ID NOs; 1ou 2;(b) um ou mais adjuvantes;(c) um ou mais lipídeos Iipossomais adicionais.
19. Processo para aperfeiçoamento ou manutenção de qualida-de de vida de um sujeito diagnosticado com câncer de próstata, compreen-dendo administração a um sujeito diagnosticado com câncer de próstata deuma vacina de Iipossoma BLP25 por um período de tempo, em que a vacinade Iipossoma BLP25 compreende:(a) um peptídeo MUC-1 compreendendo a seqüência de SEQ ID NOs: 1 ou 2;(b) um ou mais adjuvantes; e(c) um ou mais lipídeos lipossomais.
20. Processo de acordo com a reivindicação 18 ou reivindicação-19, ainda compreendendo cálculo de um escore combinado do bem-estarfísico de sujeito, bem-estar funcional de sujeito, e sintomas de câncer depróstata ou câncer de pulmão antes, durante, e após o período de tempo emque o sujeito foi diagnosticado com câncer de pulmão de célula não-pequena ou câncer de próstata.
21. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações-18 a 20, em que o período de tempo é de pelo menos cerca de 6 meses,pelo menos cerca de 12 meses, pelo menos cerca de 18 meses, pelo menoscerca de 24 meses, ou mais que 24 meses.
22. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações-13, 18, ou 19, em que a quantidade de peptídeo MUC-1 é cerca de 300 μg.
23. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações-13, 18, ou 19, em que o adjuvante é lipídeo A.
24. Processo de acordo com a reivindicação 23, em que a quan-tidade de lipídeo A é cerca de 150 μg.
25. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações-13, 18, ou 19, em que a quantidade de lipídeos lipossômicos adicionais écerca de 15 mg.
26. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 13, 18, ou 19, em que o peptídeo MUC-1 compreende a seqüência mostradaem SEQ ID N0:1.
27. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações- 13, 18, ou 19, em que o peptídeo MUC-1 compreende a seqüência mostradaem SEQ ID N0:2.
28. Processo de acordo com a reivindicação 26, em que o peptí-deo MUC-1 é lipidado.
29. Processo para tratamento de um sujeito com câncer com-preendendo:(a) seleção para tratamento de um sujeito tendo uma célula de câncer queexpressa MUC-1, e(b) administração a este sujeito, por um período de tempo, uma formulaçãobaserada em MUC-1, em que a formulação compreende:(i) um lipossoma; e(ii) pelo menos um polipeptídeo compreendendo a seqüência deaminoácidos selecionada do grupo consistindo na seqüência deaminoácidos de SEQ ID NO. 1, uma variante imunologicamenteativa da seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO. 1, a seqüên-cia de aminoácidos de SEQ ID NO. 2, e uma variante imunologi-camente ativa da seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO. 2,e em que o sujeito não tem um alto nível de MUC-1 circulante no soro desujeito.
30. Processo de acordo com a reivindicação 29, em que o cân-cer é selecionado do grupo consistindo em câncer de ovário, câncer de fíga-do, câncer de cólon, câncer de mama, câncer pancreático, câncer de rim,câncer de cabeça e pescoço, câncer cervical, câncer uterino, leucemia, emieloma múltiplo.
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