BRPI0613868A2 - compostos orgánicos - Google Patents

Abstract

COMPOSTOS ORGáNICOS. A presente invenção refere-se a uma combinação farmacêutica compreendendo: a) um composto pirimidil amino-benzamida e b) um inibidor da FIt-3 e um método para o tratamento ou prevenção de uma doença proliferativa utilizando esta combinação.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS ORGÂNICOS".

A presente invenção refere-se a uma combinação farmacêuticacompreendendo um composto pirimidil amino-benzamida e um inibidor daFlt-3 e os usos desta combinação, por exemplo, em doenças proliferativas,como, por exemplo, tumores, mielomas, leucemias, psoríase, reestenose,esclerodermite e fibrose.

Embora existam inúmeras opções de tratamento para pacientescom doenças proliferativas, permanece sendo necessária a provisão de a-gentes antiproliferativos efetivos e seguros, além da necessidade de seu usopreferencial em terapia combinada.

Sumário da Invenção

Foi constatado atualmente que uma combinação compreenden-do pelo menos um composto pirimidil amino-benzamida e um inibidor da Flt-3, por exemplo, conforme descrito abaixo, exercia um efeito benéfico sobredoenças proliferativas, por exemplo, tumores, mielomas, leucemias, psoría-se, reestenose, esclerodermite e fibrose.

Descrição Detalhada da Invenção

A presente invenção refere-se ao uso de compostos pirimidil a-mino-benzamida da fórmula I:

<formula>formula see original document page 2</formula>

em que,

R1 representa hidrogênio, um grupo alquila inferior, alcóxi-alquilainferiores, acilóxi-alquila inferior, carbóxi-alquila inferior, alcoxicarbonil-alquilainferiores ou fenil-alquila inferior;

R2 representa hidrogênio, um grupo alquila inferior, opcionalmentesubstituído por um ou mais radicais idênticos ou diferentes do R3, um ciclo-alquila, benzocicloalquila, heterociclila, um grupo arila ou um grupo heteroa-rila mono ou bicíclico compreendendo um, dois ou três átomos de nitrogênio,ou nenhum, no anel e nenhum ou um átomo de oxigênio e nenhum ou umátomo de enxofre, grupos estes, em cada caso, sendo não substituídos oumono ou polissubstituídos;e

R3 representa hidróxi, um grupo alcóxi inferior, acilóxi, carbóxi,alcoxicarbonila inferior, carbamoíla, carbamoíla N-mono ou A/,/\/-dissubstituído,amino, amino mono ou dissubstituído, cicloalquila, heterociclila, um grupoarila ou um grupo heteroarila mono ou bicíclico compreendendo um, dois outrês átomos de nitrogênio, ou nenhum, no anel e nenhum ou um átomo deoxigênio e nenhum ou um átomo de enxofre, grupos estes, em cada caso,sendo não substituídos ou mono ou polissubstituídos; ou

R1 e R2 representam, em conjunto, um alquileno com quatro,cinco ou seis átomos de carbono, opcionalmente mono ou dissubstituído porum grupo alquila inferior, cicloalquila, heterociclila, fenila, hidróxi, alcóxi infe-rior, amino, amino mono ou dissubstituído, oxo, piridila, pirazinila ou pirimidi-nila; um benzalquileno com quatro ou cinco átomos de carbono; um oxalqui-Ieno com um oxigênio e três ou quatro átomos de carbono ou um azalquilenocom um nitrogênio e três ou quatro átomos de carbono, em que o nitrogênioé não substituído ou substituído por um grupo alquila inferior, fenil-alquilainferior, alcoxicarbonil-alquila inferiores, carbóxi-alquila inferior, carbamoíla-alquila inferior, carbamoíla N-mono ou A/,/\/-dissubstituído-alquila inferior,cicloalquila, alcoxicarbonila inferior, carbóxi, fenila, fenila substituído, piridini-Ia, pirimidinila ou pirazinila; e

R4 representa hidrogênio, um grupo alquila inferior ou halogênio;e um Λ/-όχido ou um sal farmaceuticamente aceitável destecomposto para o preparo de uma composição farmacêutica para o tratamen-to de doenças dependentes de quinases.

Os termos gerais utilizados acima e abaixo neste documentopossuem preferencialmente no contexto desta exposição os significados aseguir, exceto se indicado de outra forma:O adjetivo "inferior" indica um radical com até e incluindo no má-ximo 7 átomos de carbono, especialmente até e incluindo no máximo 4 áto-mos de carbono, os radicais em questão sendo lineares ou ramificados comuma única ou diversas ramificações.

Quando a forma no plural for utilizada para compostos, sais esimilares, deverá ser entendido que se refere também a um único composto,sal ou similar.

Quaisquer átomos de carbono assimétricos podem estar presen-tes na configuração (R), (S) ou (R,S), preferencialmente na configuração (R)ou (S). Os compostos podem estar presentes, portanto, como misturas deisômeros ou como isómeros puros, preferencialmente como enantiômeros-diastereômeros puros.

A invenção refere-se também a possíveis tautômeros dos com-postos da fórmula I.

Um grupo alquila inferior é preferencialmente um alquila conten-do de 1 a 7 inclusive, preferencialmente de 1 a 4 inclusive, sendo este linearou ramificado; preferencialmente, o alquila inferior é butila, como n-butila,sec-butila, isobutila, terc-butila, propila, como n-propila ou isopropila, etila oumetila. Preferencialmente o alquila inferior é um grupo metila, propila ou terc-butila.

Um grupo acila inferior é preferencialmente formila ou alquilcar-bonila inferior, particularmente um grupo acetila.

Um grupo arila é um radical aromático ligado à molécula pormeio de uma ligação localizada em um átomo de carbono da cadeia aromá-tica do radical. Em uma concretização preferida, o arila é um radical aromáti-co contendo de 6 a 14 átomos de carbono, especialmente fenila, naftila, te-trahidronaftila, fluorenila ou fenantrenila, sendo este não substituído ou subs-tituído por um ou mais substituintes, preferencialmente por até três, especi-almente por um ou dois, especialmente selecionados do grupo composto poramino, amino mono ou dissubstituído, halogênio, alquila inferior, alquila infe-rior substituído, alquenila inferior, alquinila inferior, fenila, hidróxi, hidróxi ete-rificado ou esterificado, nitro, ciano, carbóxi, carbóxi esterificado, alcanoíla,benzoíla, carbamoíla, carbamoíla N-mono ou A/,A/-dissubstituído, aminidino,guanidino, ureído, mercapto, sulfo, alquiltio inferior, feniltio, fenil-alquiltio infe-rior, alquilfeniltio inferior, alquilsulfinila inferior, fenilsulfinila, fenil-alquilsulfinilainferior, alquilfenilsulfinila inferior, alquilsulfonila inferior, fenilsulfonila, fenil-alquilsulfonila inferior, alquilfenilsulfonila inferior, halogênio-alquilmercaptoinferior, halogênio-alquilsulfonila inferior, como especialmente trifluormeta-nossulfonila, dihidroxibora (B-(OH)2), heterociclila, um grupo heteroarila mo-no ou bicíclico e um dióxi alquileno inferior ligado nos átomos de C adjacen-tes do anel, como dióxi metileno.

O grupo arila é mais preferencialmente fenila, naftila ou tetrahi-dronaftila, os quais, em cada caso, não são substituídos ou são substituídosindependentemente por um ou mais substituintes selecionados do grupocompreendendo halogênio, especialmente o flúor, cloro ou bromo; hidróxi;hidróxi eterificado por um grupo alquila inferior, por exemplo, por metila, porum halogênio-alquila inferior como, por exemplo, trifluormetila ou por fenila;alquileno dióxi inferior ligado a dois átomos de C adjacentes, por exemplo,metileno dióxi, alquila inferior, por exemplo, metila ou propila; halogênio-alquila inferior, por exemplo, trifluormetila, hidróxi-alquila inferior, por exem-plo, hidroximetila ou 2-hidróxi-2-propila; alcóxi-alquila inferiores, por exem-pio, metoximetila ou 2-metoxietila; alcoxicarbonil-alquila inferiores, por exem-plo, metoxicarbonilmetila; alquinila inferior, como 1-propinila; carbóxi esteri-ficado, especialmente alcoxicarbonila inferior, por exemplo, metoxicarbonila,n-propróxi carbonila ou iso-propóxi carbonila; carbamoíla /V-monossubstituí-da, principalmente, carbamoíla monossubstituída por alquila inferior, por e-xemplo, metila, n-propila ou isopropila; amino, alquilamino inferior, por e-xemplo, metilamino; di-alquilamino inferior, por exemplo, dimetilamino oudietilamino; alquileno-amino inferior, por exemplo, pirrolidino ou piperidino;oxalquilenoamino inferior, por exemplo, morfolino, azalquilenoamino inferior,por exemplo, piperazino, acilamino, por exemplo, acetilamino ou benzoilami-no; alquilsulfonila inferior, por exemplo, metilsulfonila, sulfamoíla, ou fenilsul-fonila.

Um grupo cicloalquila é preferencialmente ciclopropila, ciclopen-tila, ciclohexila ou cicloheptila, os quais podem ser não substituídos ou subs-tituídos por um ou mais substituintes, especialmente por um ou dois, sele-cionados do grupo definido acima como substituintes para arila, mais prefe-rencialmente por alquila inferior, como metila, alcóxi inferior, como metóxi ouetóxi, ou hidróxi, e ainda por oxo ou fundido a um anel benzeno, como ben-zociclopentila ou benzociclohexila.

Alquila substituída é uma alquila conforme definida no final, es-pecialmente alquila inferior, preferencialmente metila; quando pode estarpresente um ou mais, especialmente até três, substituintes primariamenteselecionados do grupo composto por halogênio, especialmente flúor, amino,/V-alquilamino inferior, /V./V-dialquilamino inferior, /V-alcanoílamino inferior,hidróxi, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila inferior e fenil-alcoxicarbonila inferior.

A trifluormetila é especialmente preferida.

Amino mono ou dissubstituído é especialmente um amino substi-tuíao por um ou dois radicais selecionados independentemente um do outrodo grupo composto por alquila inferior, como metila; hidróxi-alquila inferior,como 2-hidroxietila; alcóxi-alquila inferiores, como metóxi etila; fenil-alquilainferior, como benzila ou 2-feniletila; alcanoíla inferior, como acetila; benzoí-la; benzoíla substituído, em que o radical fenila é especialmente substituídopor um ou mais substituintes, preferencialmente um ou dois, selecionadosdentre nitro, amino, halogênio, /V-alquilamino inferior, /\/,A/-dialquilamino infe-rior, hidróxi, ciano, carbóxi, alcoxicarbonila inferior, alcanoíla inferior e car-bamoíla; e fenil-alcoxicarbonila inferior, em que o radical fenila é não substi-tuído ou especialmente substituído por um ou mais substituintes, preferenci-almente um ou dois, selecionados dentre nitro, amino, halogênio, N-alquilamino inferior, Λ/,/V-dialquilamino inferior, hidróxi, ciano, carbóxi, alcoxi-carbonila inferior, alcanoíla inferior e carbamoíla; sendo preferencialmente N-alquilamino inferior, como /V-metilamino, hidróxi-alquilamino inferior, como 2-hidroxietilamino ou 2-hidroxipropila, alcóxi alquila inferiores, como metóxietila, fenil-alquilamino inferior, como benzilamino, /V,AkJiaIquiIamino inferior,/V-fenil-alquil inferior-/V-alquilamino inferior, A/,A/-dialquilfenilamino inferior,alcanoilamino inferior, como acetilamino ou um substituinte selecionado dogrupo compreendendo benzoilamino e fenil-alcoxicarbonilamino inferior, emque o radical fenila, em cada caso, é não substituído ou especialmente subs-tituído por nitro ou amino, ou também por halogênio, amino, /V-alquilaminoinferior, A/,/V-dialquilamino inferior, hidróxi, ciano, carbóxi, alcoxicarbonilainferior, alcanoíla inferior, carbamoíla ou amino carbonilamino. Amino dis-substituído é também um alquileno-amino inferior, por exemplo, pirrolidino,2-oxo-pirrolidino ou piperidino; oxalquileno-amino inferior, por exemplo, mor-folino, ou azalquileno-amino inferior, por exemplo, piperazino ou /V-pipera-zino substituído, como A/-metilpiperazino ou /V-metoxicarbonilpiperazino.

Halogênio é especialmente flúor, cloro, bromo ou iodo, especi-almente flúor, cloro ou bromo.

Hidróxi eterificado é especialmente um Ce-C2oalquilóxi, como n-decilóxi, um alcóxi inferior (preferido), como metóxi, etóxi, isopropilóxi ouferc-butilóxi, um fenil-alcóxi inferior, como benzilóxi, fenilóxi, um halogênio-aicóxi inferior, como trifiuormetóxi, 2,2,2-trifluoretóxi ou 1,1,2,2,-tetrafIuore-tóxi, ou um alcóxi inferior substituído por um heteroarila mono ou bicíclicocompreendendo um ou dois átomos de nitrogênio, preferencialmente umalcóxi inferior substituído por imidazolila, como 1H-imidazol-1-ila, pirrolila, umbenzimidazolila, como 1-benzimidazolila, um piridila, especialmente 2, 3 ou4-piridila, um pirimidinila, especialmente 2-pirimidinila, pirazinila, um isoqui-nolinila, especialmente 3-isoquinolinila, quinolinila, indolila ou tiazolila.

Hidróxi esterificado é especialmente um alcanoilóxi inferior, ben-zoilóxi, alcoxicarbonilóxi inferior, como ferc-butoxicarbonilóxi ou um fenil-alcoxicarbonilóxi inferior, como benziloxicarbonilóxi.

Carbóxi esterificado é especialmente alcoxicarbonila inferior,como fe/r-butoxicarbonila, isopropoxicarbonila, metoxicarbonila ou etoxicar-bonila, fenil-alcoxicarbonila inferior ou feniloxicarbonila.

Alcanoíla é primariamente alquilcarbonila, especialmente umalcanoíla inferior, por exemplo, acetila.

Carbamoíla /V-mono ou Λ/,/V-dissubstituida é substituída especi-almente por um ou dois substituintes, selecionados independentemente den-tre alquila inferior, fenil-alquila inferior e hidróxi-alquila inferior, ou alquilenoinferior, oxalquileno inferior ou azalquileno inferior, opcionalmente substituídono átomo terminal de nitrogênio.

Um grupo heteroarila mono ou bicíclico compreendendo dois,três ou nenhum átomo de nitrogênio no anel e nenhum ou um átomo de oxi-gênio e nenhum ou um átomo de enxofre, grupos estes que em cada casonão são substituídos ou são mono ou polissubstituídos, refere-se a uma por-ção heterocíclica cujo anel de ligação do radical heteroarila ao resto da mo-lécula na fórmula I é não saturado, sendo preferencialmente um tipo de anelde ligação em que pelo menos um átomo de carbono do anel de ligação,porém opcionalmente de qualquer parte anelada, é substituído por um hete-roátomo selecionado do grupo constituído por nitrogênio, oxigênio e enxofre;em que o anel de ligação possui preferencialmente de 5 a 12 átomos no a -nel, mais preferencialmente 5 ou 6 átomos, e que pode ser não substituídoou substituído por um ou mais substituintes, especialmente um ou dois, se-lecionados do grupo definido acima como substituintes para arila, mais pre-ferencialmente por um alquila inferior como metila, um alcóxi inferior comometóxi ou etóxi, ou hidróxi. Preferencialmente o grupo heteroarila mono oubicíclico é selecionado do grupo constituído por 2/-/-pirrolila, pirrolila, imida-zolila, benzimidazolila, pirazolila, indazolila, purinila, piridila, pirazinila, pirimi-dinila, piridazinila, 4H-quinolizinila, isoquinolila, quinolila, ftalazinila, naftiridi-nila, quinoxalila, quinolinila, pteridinila, indolizinila, 3H-indolila, indolila, isoin-dolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, triazolila, tetrazolila, furaza-nila, benzo[a(]pirazolila, tienila e furanila. Mais preferencialmente, o grupoheteroarila mono ou bicíclico é selecionado do grupo composto por pirrolila,imidazolila, como 1H-imidazol-1-ila, benzimidazolila, como 1-benzimidazolila,indazolila, especialmente 5-indazolila, piridila, especialmente 2, 3 ou 4-piridila, pirimidinila, especialmente 2-pirimidinila, pirazinila, isoquinolinila, es-pecialmente 3-isoquinolinila, quinolinila, especialmente 4 ou 8-quinolinila,indolila, especialmente 3-indolila, tiazolila, benzo[c(]pirazolila, tienila e furani-Ia. Em uma concretização preferida da invenção, o radical piridila é substitu-ído por hidróxi na posição orto em relação ao átomo de nitrogênio e, dessaforma, está presente, pelo menos parcialmente, na forma do tautômero cor-respondente que é a piridin-(1/-/)2-ona. Em outra concretização preferida, oradical pirimidinila é substituído por hidróxi tanto na posição 2 como na 4,estando dessa forma presente sob diversas formas tautoméricas, por exem-plo, como pirimidina-(1H,3/-/)2,4-diona.

Heterociclila é especialmente um sistema heterocíclico compostopor cinco, seis ou sete membros com um ou dois heteroátomos selecionadosdo grupo constituído por nitrogênio, oxigênio e enxofre, podendo este sernão saturado ou total ou parcialmente saturado, além de ser não substituídoou substituído especialmente por alquila inferior como metila, fenil-alquilainferior, como benzila, oxo ou heteroarila, como 2-piperazinila; heterociclila éespecialmente 2 ou 3-pirrolidinila, 2-oxo-5-pirrolidinila, piperidinila, A/-benzil-4-piperidinila, /V-alquil inferior-4-piperidinila, A/-alquil inferior-piperazinila, mor-folinila, por exemplo, 2 ou 3-morfolinila, 2-oxo-1H-azepin-3-ila, 2-tetrahidrofu-ranila ou 2-metil-1,3-dioxolan-2-ila.

Os sais são especialmente os sais farmaceuticamente aceitáveisde compostos da fórmula I.

Estes sais são formados, por exemplo, sob a forma de sais deácidos adicionados, preferencialmente de ácidos orgânicos ou inorgânicos,de compostos da fórmula I com um átomo de nitrogênio básico, especial-mente os sais farmaceuticamente aceitáveis. Ácidos inorgânicos adequadossão, por exemplo, ácidos de halogênios como ácido clorídrico, ácido sulfúri-co ou ácido fosfórico. Ácidos orgânicos adequados são, por exemplo, ácidoscarboxílicos, fosfônicos, sulfônicos ou sulfâmicos, como por exemplo ácidoacético, ácido propiônico, ácido octanóico, ácido decanóico, ácido dodeca-nóico, ácido glicólico, ácido lático, ácido fumárico, ácido succínico, ácido a-dípico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azeláico, ácido málico, ácidotartárico, ácido cítrico, aminoácidos como ácido glutâmico ou ácido aspárti-co, ácido maléico, ácido hidroximaléico, ácido metilmaléico, ácido ciclohexa-nocarboxílico, ácido adamantanocarboxílico, ácido benzóico, ácido salicílico,ácido 4-amino salicílico, ácido ftálico, ácido fenilacético, ácido mandélico,ácido cinâmico, ácido metano ou etano sulfônico, ácido 2-hidroxietano sulfô-nico, ácido etano-1,2-dissulfônico, ácido benzeno sulfônico, ácido 2-nafta-Ieno sulfônico, ácido 1,5-naftaleno dissulfônico, ácido 2, 3 ou 4-metilbenzenosulfônico, ácido metil sulfúrico, ácido etil sulfúrico, ácido dodecil sulfúrico,ácido N-ciclohexil sulfâmico, ácido N-metil, N-etil ou N-propil-sulfâmico ououtros ácidos orgânicos protônicos como o ácido ascórbico.

Na presença de radicais negativamente carregados, como car-bóxi ou sulfo, os sais podem ser formados também com bases, por exemplo,sais de metal ou amônio, como sais de metal alcalino ou de metal alcalino-terroso, por exemplo, sais de sódio, potássio, magnésio ou cálcio, ou sais deamônio com amônia ou aminas orgânicas adequadas como monoaminasterciárias, por exemplo, trietilamina ou tri(2-hidroxietil)amina, ou bases hete-rocíclicas, por exemplo, /V-etil-piperidina ou Λ/,Λ/'-dimetilpiperazina.

Quando um grupo básico e grupo ácido estiverem presentes namesma molécula, os compostos da fórmula I podem formar também saisinternos.

Para fins de isolamento ou purificação, é possível utilizar tam-bém sais farmaceuticamente inaceitáveis, por exemplo, picratos ou perclora-tos. Para uso terapêutico, somente sais farmaceuticamente aceitáveis oucompostos livres são empregados (quando aplicável na forma de preparadosfarmacêuticos), e estes são, por conseguinte, os preferidos.

Em vista da estreita relação entre os novos compostos na formalivre e aqueles na forma de seus sais, incluindo aqueles sais que podem serutilizados como intermediários, por exemplo, na purificação ou identificaçãodos novos compostos, qualquer referência aos compostos livres, feita anteri-or ou posteriormente no presente, deverá ser entendida como se referindotambém aos sais correspondentes, conforme for apropriado e expediente.

Compostos abrangidos pela fórmula I e o processo para suaprodução são descritos na patente WO 04/005281, publicada em 15 de ja-neiro de 2004, a qual é aqui incorporada por referência no presente pedidode patente. Um composto preferido é o 4-metil-3[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino-/V-[5-(4-metil-1 H-imidazol-1 -il)-3-(trifluormetil)fenil]benzamida.

Inibidores da Flt-3 são, por exemplo, compostos cujo valor deIC5O varia de 1-10.000 nM, preferencialmente no intervalo de 1-100 nM, nosseguintes ensaios:

A inibição da Flt-3 quinase é determinada da forma como segue:o vetor doador do baculovírus pFbacGOI (GIBCO) é utilizado para um bacu-lovírus recombinante que expressa a região de aminoácidos dos aminoáci-dos 563-993 do domínio da quinase citoplasmática da Flt-3 humana. A se-qüência do código do domínio citoplasmático da Flt-3 é amplificada por PCR,a partir de bibliotecas de cDNA humano (Clontech). A ligação dos fragmen-tos amplificados de DNA e do vetor pFbacGOI é compatibilizada pela diges-tão com BamHI e Hindlll. A ligação destes fragmentos de DNA resulta noplasmídeo Flt-3(1.1), doador de baculovírus. A produção dos vírus, a ex-pressão de proteínas em células Sf9 e a purificação das proteínas GST fun-didas são executadas da forma como segue:

Produção do vírus: o vetor de transferência (pFbacGOI-Flt-3),contendo o domínio da Flt-3-quinase é transfectado em uma célula da Iinha-gem DHIOBac (GIBCO), e as células transfectadas são colocadas em lâmi-nas seletivas de ágar. As colônias nas quais não há inserção da seqüênciade fusão no genoma viral (transmitida pela bactéria) são azuis. As colôniasbrancas isoladas são coletadas e o DNA viral (bacmídeo) é isolado da bacté-ria por meio de procedimentos convencionais para purificação de plasmí-deos. As células Sf9 ou Sf21 (Coleção de Cultura do Tipo Americano) sãoentão transfectadas em tubos com o DNA viral utilizando o reagente Cellfec-tin.

Determinação de expressão de proteínas em pequena escalaem células SF9: o meio que contém o vírus é coletado da cultura de célulastransfectadas e utilizado para infecção e aumento de seu título. O meio con-tendo o vírus obtido após dois ciclos de infecção é utilizado para expressãode proteínas em larga escala. Para a expressão de proteínas em larga esca-la, lâminas redondas de cultura de tecido de 100 cm2 são semeadas com 5 χ107 células/lâmina e infectadas com 1 ml de meio contendo vírus (aproxima-damente 5 Mols). Após 3 dias, as células são descoladas da lâmina e centri-fugadas a uma velocidade de 500 rpm por 5 minutos. Os conglomerados decélulas de 10-20 lâminas de 100 cm2 são novamente suspensos em 50 mlde tampão gelado de lise (Tris-HCI a 25 mM, pH 7,5, EDTA a 2 mM, NP-40 a1%, DTT a 1 mM, PMSF a 1 mM). As células são agitadas em gelo por 15minutos e, em seguida, centrifugadas a 5.000 rpm por 20 minutos.

Purificação de proteínas com GST marcada: o Iisado celular cen-trifugado é carregado em uma coluna de sefarose contendo 2 ml de glutatio-na (Pharmacia) e lavado três vezes com 10 ml de Tris-HCI a 25 mM, pH 7,5,EDTA a 2 mM, DTT a 1 mM e NaCI a 200 mM. A proteína com GST marca-da é eluída em seguida por meio de 10 aplicações (1 ml cada) de Tris-HCI a25 mM, pH 7,5, glutationa reduzida a 10 mM, NaCI a 100 mM e DTT a 1 mMe Glicerol a 10% e armazenada a -70°C.

Determinação de atividade enzimática: os ensaios da proteínatirosina quinase com GST-Flt-3 purificada são conduzidos em um volumefinal de 30 μΙ contendo 200-1, 800 ng de enzima protéica (dependendo daatividade específica), Tris-HCI a 20 mM, Ph 7,6, MnCI2 a 3 mM, MgCI2 a 3mM, DTT a 1 mM, Na3VO4 a 10 μΜ, 3 μg/ml de poli(Glu,Tir), 4:1, ATP a 8,0μΜ e [γ33 P]ATP a 0,1 μL. É efetuado o ensaio da atividade na presença ouausência de inibidores, pela medição de 33P do [γ33 P]ATP no substrato depoli(Glu,Tir). O ensaio (30 μl) é conduzido em lâminas com 96 caviadades,em temperatura ambiente por 20 minutos sob as condições descritas abaixo,e finalizado pelo acréscimo de 20 μl de EDTA a 125 mM. Subseqüentemen-te, 40 μl da mistura da reação é transferida para uma membrana Immobilon-PVDF (Millipore, Bedford, MA, EUA), previamente encharcada por 5 minutosem metanol, lavada com água e, a seguir, encharcada por 5 minutos emH3PO4 a 0,5% e montada em coletor de admissão a vácuo com fonte desco-nectada de vácuo. Após localizar todas as amostras, o vácuo é conectado ecada caviadade lavado com 200 μl de H3PO4 a 0,5%. As membranas sãoremovidas e lavadas 4 χ em um agitador com H3PO4 a 1,0% e uma vez cometanol. As membranas são contadas depois de dessecadas em temperaturaambiente, montadas em uma estrutura contendo 96 caviadades TopCountda Packard e o acréscimo de 10 μl de Microscint TM (Packard) por caviada-de. Os valores de IC50 são calculados por análise de regressão linear dopercentual de inibição de cada composto, em duplicata, em quatro concen-trações (geralmente 0,01; 0,1; 1 e 10 μΜ). Uma unidade de atividade de pro-teína quinase é definida como 1 nmol de 33P ATP transferido do [γ33 PjATPpara o substrato protéico por minuto por mg de proteína a 37°C. Os compos-tos da fórmula I do presente exibiram valores de IC50 que variaram entre0,005 e 20 μΜ, preferencialmente entre 0,01 e 10 μΜ.

Inibidores adequados de Flt-3 incluem, por exemplo,A. Compostos conforme descritos na patente WO 03/037347,por exemplo, derivados de estaurosporina da fórmula (IV) ou (V):

<formula>formula see original document page 13</formula>

em que (V) é o derivado parcialmente hidrogenado do composto (IV), ou<formula>formula see original document page 14</formula>

R1 e R2 são, independentemente um do outro, alquila não substi-tuída ou substituída, hidrogênio, halogênio, hidróxi, hidróxi eterificado ou es-terificado, amino, amino mono ou dissubstituído, ciano, nitro, mercapto, mer-capto substituído, carbóxi, carbóxi esterificado, carbamoíla, carmabomíla N-mono ou N,N-dissubstituída, sulfo, sulfonila substituído, aminossulfonila ouaminossulfonila A/-mono ou N,N-dissubstituída; nem são, independente-mente um do outro, um número de e incluindo Oae incluindo 4,

n' e m1 são, independentemente um do outro, um número de eincluindo Oae incluindo 4,

R3, R4, Re e Rio são, independentemente um do outro, hidrogê-nio, -0, acila com até 30 átomos de carbono, um radical alifático, carbocíclicoou carbocíclico alifático com até 29 átomos de carbono, em cada caso, umradical heterocíclico ou heterocíclico alifático com até 20 átomos de carbono,em cada caso, e , em cada caso, até 9 heteroátomos, um acila com até 30átomos de carbono em que R4 pode também estar ausente ou se R3 for acilacom até 30 átomos de carbono, R4 não será um acila;

ρ é 0, se R4 estiver ausente, ou 1 se R3 e R4 estiverem ambospresentes e são, em cada caso, um dos radicais supramencionados;

R5 é hidrogênio, um radical alifático, carbocíclico ou carbocíclicoalifático com até 29 átomos de carbono, em cada caso, ou um radical hete-rocíclico ou heterocíclico alifático com até 20 átomos de carbono, em cadacaso, e, em cada caso, com até 9 heteroátomos ou acila com até 30 átomosde carbono;

R7, R6 e Rg são acila ou —(alquila inferior)-acila, alquila não subs-tituída ou substituída, hidrogênio, halogênio, hidróxi, hidróxi eterificado ouesterificado, amino, amino mono ou dissubstituído, ciano, nitro, mercapto,mercapto substituído, carbóxi, carbonila, carbonildióxi, carbóxi esterificado,carbamoíla, carbamoíla N-mono ou N,N-dissubstituída, sulfo, sulfonila substi-tuído, aminossulfonila ou aminossulfonila N-mono ou N,N-dissubstituídâ;

X representa 2 átomos de hidrogênio, 1 átomo de hidrogênio ehidróxi, O ou hidrogênio e alcóxi inferior;

Z representa hidrogênio ou alquila inferior;

e, ou as duas ligações caracterizadas pelas linhas onduladasestão ausentes no anel A e substituídas por 4 átomos de hidrogênio e asduas linhas onduladas no Anel B significam, cada uma, juntamente com arespectiva ligação paralela, uma ligação dupla, ou as duas ligações caracte-rizadas pelas linhas onduladas estão ausentes no anel B e substituídas porno total 4 átomos de hidrogênio e as duas linhas onduladas no anel A signifi-cam, cada uma juntamente com a respectiva ligação paralela, uma ligaçãodupla, ou em ambos os anéis AeB, todas as 4 ligações onduladas estãoausentes e são substituídas por no total 8 átomos de hidrogênio;

ou um sal do mesmo, se pelo menos um grupo formador de salestiver presente.

Preferencialmente o inibidor da FLT-3 é o N-[(9S,10R,11R,13R)-2,3,10,11,12,13-hexahidro-10-metóxi-9-metil-1 -oxo-9,13-epóxi-1 H,9H-diindol[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]pirrol[3,4-j][1,7]benzodiazonin-11 -il]-/V-metilbenzamida dafórmula (X):

<formula>formula see original document page 16</formula>

B. Compostos conforme descritos na patente WO O,/099771, porexemplo, derivados de diaril uréia da fórmula (XI):

<formula>formula see original document page 16</formula>

em que,

G ou não está presente ou é um alquileno inferior ou C3-C5 ci-cloalquileno; e

Z é um radical da fórmula (Xla):

<formula>formula see original document page 16</formula>

G não está presente e

Z é um radical da fórmula (Xlb):<formula>formula see original document page 17</formula>

A é CH1 N ou N->0 e A' é N ou N->0, com a ressalva de quenão mais do que um A e A' podem ser N->0;

η é 1 ou 2,

m é 0,1 ou 2,

ρ é O, 2 ou 3,

r é de O a 5,

X é NR se ρ for O, em que R é hidrogênio ou uma porção orgâni-ca, ou se ρ for 2 ou 3, X é nitrogênio, o qual juntamente com (CH2)p e as li-gações, representadas pelas linhas tracejadas (interrompidas) (incluindo osátomos aos quais estão ligadas) formam um anel, ou

X é CHK em que K é alquila inferior ou hidrogênio e ρ é zero,com a ressalva de que as ligações representadas por linhas tracejadas, se ρfor zero, estão ausentes;

Y1 é O, SouCH2,

Y2 é O, S ou NH, com a ressalva de que (Yi)n-(Ya)m não incluigrupos 0-0, S-S, NH-O, NH-S ou S-O;

cada R1, R2, R3 e R5 são, independentemente dos outros, hidro-gênio ou uma porção inorgânica ou orgânica, ou quaisquer dois dos mesmosformam em conjunto uma ponte ligando um alquileno dióxi inferior por meiodos átomos de oxigênio, e a outra destas porção é hidrogênio ou uma por-ção inorgânica ou orgânica; e

R4 (se presente, ou seja, se r não for zero) é um grupamentoinorgânico ou orgânico;

ou um tautômero do mesmo ou um sal farmaceuticamente acei-tável do mesmo.

Exemplos de compostos da fórmula (XI) incluem:

• N-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-N-(4-etil-fenil)-uréia;

• N-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-N-(3-trifluormetil-fenil)-uréia;/V-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-A/-(4-(2,2,2-trifluoretóxi)-3-trifluormetil-fen

/V-(4-(4-(4-hidroxifenilamino)-pirimidin-6-il)-oxifenil)-N-(3-triflourmetilfenil)-uréia;

/V-(4-(2-metil-piridin-4-il)-oxifenil)-A/,-(3-trifluormetil-fenil)-uréi

A/-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-/V-(4-n-propil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-/\/,-(4-metil-fenil)-uréia;

A/-metil-/V-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-/V-(4-etil-fenil)-uréia;

/V-metil-/V-(4^iridin-4-il-óxi-fenil)-A/,-(3-trifluormetil-fenil)-uréia;

/V-metil-A/-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-/V-(4-n-propil-fenil)-uréia;

/V-metrl-A/-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-/V-(4-metil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-/V-(4-bromo-3-trifluormetil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)-/V-(3-metóxi-5-trifluormetil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-metil-fenil)-/V-(4-n-propil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-metil-fenil)-/V-(4-etil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-metil-fenii)-/V-(4-meíii-íenii)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-metil-fenil)-/V-(3-trifluormetil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-1-óxi-fenil)acetil-(4-etil-fenil)-amida;

A/-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)acetil-(4-metil-fenil)-amida;

A/-(4-piridin-4-il-óxi-fenil)acetil-(4-n-propil-fenil)-amida;

5-(4-piridil-óxi)-A/-(3-trifluormetil-fenil)amino-carbonil-2,3-dihidroindol;

5-(4-piridil-óxi)-/V-(3-trifluormetil-fenil)amino-carbonil-1,2,3,4-tetrahidroquinolina;

A/-(4-piridin-4-rimidin-6-il)-oxifenil)-/V-(3-trifluormetilfenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(4-fenil-3-trifluormetil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(4-(piperidin-1-il)-3-trifluormetil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(4-(morfolino)-3-trifluormetil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(3,4,5-trimetóxi-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(3-metóxi-4-fenil-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(3-metóxi-4,5-(etilen-1,2-dióxi)-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(3-metóxi-4-(2,2,2-trifluoretóxi)-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(3-metóxi-4-piperidin-1-il-fenil)-uréia;

A/-(4-piridin-4-il-oxifenil)-/V-(4-piperidin-1-il-fenil)-uréia;• A/-(4-[2-(4-hidroxifenil)-amino-pirimidin-4-il]-oxifenil-/V-(3-trifluormfenil)-uréia;

• /V-(4-[4-(4-sulfamoilfenil)-amino-pirimidin-6-il]-oxifenil-/V-(3-trifl^fenil)-uréia;

/V-(4-[4-(4-carbamoilfenil)-amino^irimidin-6-il]-oxifenil-A/,-(3-tri^fenil)-uréia;

• A/-(4-[4-(4-(A/-2-hidroxietilcarbamoil)-fenil^(3-trifluormetil-fenil)-uréia;

• /V-(4-[4-(4-hidroxifenil)-amino^iimidin-6-N^(2,2,2-trifluoretóxi)-fenil)-uréia;

• /V-(4-(A/-óxido-piridin-4-il)-oxifenil)-A/,-(3-trifluormetil-fenil)-uréia;

• A/-(4-(2-metoxipiridin-5-il)-oxifenil)-/V-(3-trifluormetil-fenil)-uréia;

• /V-(4-(2-piridon-5-il)-oxifenil)-/V-(3-trifluormetil-feniI)-uréia;

• A/-[4-{(2-acetilamino)-piridin-4-il}-óxi]-fenil-/V-(3-trifluormetil-fenil)-uréi

A/-[4-(piridin-4-il-óxi)-2-cloro-fenil]-/V-(3-trifluormetil-fenil)-uréia;

• A/-[4-(piridin-4-il-óxi)-2-metil-fenil]-/V-(3-trifluormetil-fenil)-uréia; e

• A/-(4-[4-(2-aminoetoxifenil)-amino^irimidin-6-i^fenil))-uréia,

ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Os mais preferidos são1 -[4-(4-etil-piperazinil-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-3-[4-(6-metilamino-pirimidin -4-ilóxi-fenil)]-uréia; 1-[4-(2-amino-pirimidin-4-ilóxi)-fenil]-3-[4-(4-etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-uréia e 1 -[4-(2-amino-pirimidin-4-ilóxi)-fenil]-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-uréia.

C. Compostos conforme descritos na patente WO 04/046120,por exemplo, compostos da fórmula (XII):

Um composto da fórmula (XI):

<formula>formula see original document page 19</formula>

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,em que,

R1 é hidrogênio ou Y-R', em que Y é uma cadeia de CrC6 alqui-Ieno opcionalmente substituído, em que até duas unidades de metileno são,opcional e independentemente, substituídas com -O-, -S-, -NR-, -OCO-,-COO- ou -C0-; toda vez que R ocorrer, ele é independentemente hidrogê-nio ou um grupo CrC6 alifático opcionalmente substituído e toda vez que R1ocorrer, ele é independentemente hidrogênio ou um grupo opcionalmentesubstituído, selecionado dentre um grupo CrC6 alifático, um anel monocícli-co contendo de 3 a 8 membros, saturado, parcialmente não saturado ou in-teiramente não saturado, com 0-3 heteroátomos, independentemente sele-cionados dentre nitrogênio, oxigênio ou enxofre ou um sistema em anel bicí-clico contendo de 8 a 12 membros, saturado, parcialmente não saturado ouinteiramente não saturado, com 0-5 heteroátomos independentemente sele-cionados dentre nitrogênio, oxigênio ou enxofre; ou quando ReR' ocorre-rem, ou R ocorrer duas vezes ou Ri ocorrer duas vezes, eles são considera-dos juntamente com o(s) átomo(s) aos quais estão ligados para formaremum anel monocíclico ou bicíclico opcionalmente substituído contendo de 3 a12 membros, saturado, parcialmente não saturado ou inteiramente não satu-rado, com 0-4 heteroátomos, independentemente selecionados dentre nitro-gênio, oxigênio ou enxofre;

R2 é -(T)nAr1 ou -(T)nCi1, em que T é uma cadeia Ci-C4 alquilide-no, opcionalmente substituída, em que uma unidade de metileno de T é op-cionalmente substituída por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -CO2-, -OCO-, -CO-,-COCO-, -CONR-, -NRCO-, -NRCO2-, -SO2NR-, -NRSO2-, -CONRNR-,-NRCONR-, -OCONR-, -NRNR-, -NRSO2NR-, -S0-, -SO2-, -P0-, -PO2- ou-POR-;

η é O ou 1;

Ar1 é um grupo arila opcionalmente substituído, selecionadodentre um anel monocíclico contendo de 5 a 6 membros ou um anel bicíclicocontendo de 8 a 12 membros, com 0-5 heteroátomos independentementeselecionados dentre nitrogênio, oxigênio ou enxofre; e

Ci1 é um grupo opcionalmente selecionado dentre um anel mo-nocíclico de 3 a 7 membros, saturado ou parcialmente não saturado, com 0-3 heteroátomos independentemente selecionados dentre nitrogênio, oxigênioou enxofre, ou um sistema bicíclico em anel contendo de 8 a 12-membros,não saturado, com 0-5 heteroátomos independentemente selecionados den-tre nitrogênio, oxigênio ou enxofre, ou

R1 e R2, considerados juntos ao nitrogênio para formar um anelmonocíclico contendo de 5 a 8 membros, opcionalmente substituído, ou umanel bicíclico contendo de 8 a 12 membros, saturado, parcialmente não satu-rado ou inteiramente não saturado, com 0-3 heteroátomos adicionais inde-pendentemente selecionados dentre nitrogênio, oxigênio ou enxofre, em queAr1, Ci1 ou qualquer anel formado por R1 e R2, considerados, juntos, são,cada um, independente e opcionalmente substituído com χ ocorrências in-dependentes de Q-Rx, em que χ é 0-5, Q é uma ligação ou uma cadeiaCi-C6alquilideno, em que até duas unidades de metileno de Q são opcio-naimente substituídas por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -CO2-, -OCO-, -CO-, -COCO-,-CONR-, -NRCO-, -NRCO2-, -SO2NR-, -NRSO2-, -CONRNR-, -NRCONR-,-OCONR-, -NRNR-, -NRSO2NR-, -SO-, -SO2-, -PO-, -PO2- ou -POR-; e cadaocorrência de Rx é independentemente R', halogênio, NO2, CN, OR1, SR',N(R1)2, NR1COR', NR1CONRi2, NR1CO2R1, COR1, CO2R1, OCOR1, CON(R1)2,OCON(R1)2, SOR1, SO2R1, SO2N(R1)2, NR1SO2R', NR1SO2N(R1)2, COCOR1 ouCOCH2CORi;

R3 é ligado ao átomo de nitrogênio na posição 1 ou 2 do anel e é(L)mAr2 ou (L)mCi2, em que L é uma cadeia CrC4alquilideno, opcionalmentesubstituída, em que uma unidade de metileno de L é opcionalmente substitu-ido por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -CO2-, -OCO-, -CO-, -COCO-, -CONR-, -NRCO-,-NRCO2-, -SO2NR-, -NRSO2-, -CONRNR-, -NRCONR-, -OCONR-, -NRNR-, -NRSO2NR-, -S0-, -SO2-, -P0-, -PO2- ou -POR-;m é O ou 1;

Ar2 é um grupo arila opcionalmente substituído, selecionadodentre um anel monocíclico contendo de 5 a 6 membros ou bicíclico conten-do de 8 a 12 membros, com 0-5 heteroátomos selecionados independente-mente dentre nitrogênio, oxigênio ou enxofre; eCi2 é um grupo opcionalmente substituído, selecionado dentreum anel monocíclico contendo de 3 a 7 membros, saturado ou parcialmentenão saturado, com 0-3 heteroátomos independentemente selecionados den-tre nitrogênio, oxigênio ou enxofre, ou um sistema bicíclico em anel contendode 8 a 12 membros, saturado ou parcialmente não saturado, com 0-5 hete-roátomos, independentemente selecionados dentre nitrogênio, oxigênio ouenxofre, em que Ar2 e Ci2 são independente e opcionalmente substituídoscom y ocorrências de Z-Rv; em que y é 0-5, Z é uma ligação ou uma cadeiaCrC6alquilideno, em que até duas unidades metileno de Z são opcionalmentesubstituídas por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -CO2-, -OCO-, -CO-, -COCO-, -CONR-,-NRCO-, -NRCO2-, -SO2NR-, -NRSO2-, -CONRNR-, -NRCONR-, -OCONR-,-NRNR-, -NRSO2NR-, -S0-, -SO2-, -PO-, -PO2- ou -POR-; e cada ocorrênciade Ry é independentemente R', halogênio, NO2, CN, OR', SR1, N(R1)2,NR1COR', NR1CONRi2, NR1CO2R1, COR', CO2R1, OCOR1, CON(R1)2, OCON(R1)2, SOR1, SO2R', SO2N(R1)2, NR1SO2R1, NR1SO2N(R1)2, COCOR1 ou CO-CH2COR1;

R4 é hidrogênio ou Ci-Cealquila, desde que, quando R5 for hi-drogênio, R4 será hidrogênio também;

R5 é hidrogênio, ou

R3 e R5, considerados juntos formam um grupo opcionalmentesubstituído, selecionado dentre um anel monocíclico contendo de 5 a 7membros, saturado, parcialmente não saturado ou inteiramente não satura-do com 0-3 heteroátomos selecionados independentemente dentre nitrogê-nio, oxigênio ou enxofre, ou um sistema bicíclico em anel contendo de 8 a 10membros, saturado, parcialmente não saturado ou inteiramente não satura-do, com 0-3 heteroátomos, independentemente selecionados dentre nitrogê-nio, oxigênio ou enxofre; e

em que qualquer anel formando por R3 e R5 considerados juntos,é opcionalmente substituído com até cinco substituintes, selecionados dentreW-Rw, em que W é uma ligação ou cadeia Ci-Cealquilideno, em que até du-as unidades de metileno de W são opcional e independentemente substituí-das por -NR-, -S-, -O-, -CS-, -CO2-, -OCO-, -CO-, -COCO-, -CONR-, -NRCO--NRCO2-, -SO2NR-, -NRSO2-, -C0NRNR-, -NRCONR-, -OCONR-, -NRNR-,-NRSO2NR-, -S0-, -SO2-, -PO-, -PO2- ou -POR-; e cada ocorrência de Rw éindependentemente R', halogênio, NO2, CN, OR', SR', N(R1)2, NR1COR',NR1CONRi2, NR1CO2R1, COR', CO2R1, OCOR11 CON(R1)2, OCON(R1)2, SOR1,SO2R1, SO2N(R1)2, NR1SO2R1, NR1SO2N(R1)2, COCOR1 ou COCH2CORi, des-de que, quando:

a) R3 for fenila não substituída e R1 for hidrogênio, então R2 nãoserá:

i) fenila não substituída;

ii) piridila não substituída;

iii) benzila substituída com o-OMe;

iv) -(C=S)NH(C=0)fenila;

<formula>formula see original document page 23</formula>

vi) -(C=S)NH-naftila ou -(C=0)NH-naftila; ou

b) R3 for fenila substituída ou não substituída, então, R2 não seráfenila substituída na posição para com oxazol, tiazol, tiadiazol, oxadiazol,tetrazol, triazol, diazol ou pirrol;

c) R3 for fenila, piridila, pirimidinediona ou ciclohexila, e R1 forhidrogênio, então, R2 não será fenila simultaneamente substituída com umaocorrência de OMe na posição meta, e uma ocorrência de oxazol na posiçãopara;

d) R3 for 4-CI fenila ou 3,4-CI-fenila, então, R2 não será p-CI fenila;

e) R3 for pirimidinila substituída, então R2 não será fenila nãosubstituída, fenila substituída com p-OMe, fenila substituída com p-OEt ou fenilasubstituída com o-OMe, ou, quando R3 for 4-Me pirimidinila ou 4,6-dimetil-pirimidinila, então, R2 não será fenila não substituída;

f) compostos da fórmula (XII) excluem:<formula>formula see original document page 24</formula>

g) R2 for 3-piridinila e R1 for hidrogênio, então, R3 não será trime-toxibenzoíla;

h) R3 for opcionalmente fenila substituída e R1 for hidrogênio,então, R2 não será -(C=S)NH(C=0)fenila, -(C=O)NH fenila, -(C=S)NH fenilaou -(C=O)CH2(C=O)- fenila;

i) R1 for hidrogênio e R2 for benzila não substituída, então, R3não será tiadiazol substituído com fenila opcionalmente substituída;

j) R1 for hidrogênio, R2 for piridila e R3 for piridila, então, R2 nãoserá substituído com um ou mais dentre CF3, Me1 OMe, Br ou Cl;

k) R1 for hidrogênio e R2 for piridila, então, R3 não será piridilanão substituída, quinolina não substituída, fenila não substituída ou isoquino-Iina não substituída;

I) R1 for hidrogênio e R2 for quinolina não substituída, então, R3não será piridila não substituída ou quinolina não substituída;

m) R1 for hidrogênio e R2 for isoquinolina não substituído ou naf-tila não substituída, então, R3 não será piridila não substituída;

n) compostos da fórmula (XII) excluem aqueles compostos coma estrutura geral:

<formula>formula see original document page 24</formula>

em que

R1, R2 e R3 são conforme definidos acima;MeK são O ou H2, desde que KeM sejam diferentes, AeBsejam cada um -CH2-, -NH-, -N-alquila-, N-aralquila-, -NCORa, -NCONHRbou -NCSNHRb, em que Ra é alquila ou aralquila inferior; e Rb é um alquila,aralquila ou arila de cadeia reta ou ramificada que pode ser não substituídaou substituída com um ou mais substituintes alquila e/ou haloalquila;

o) compostos da fórmula (XII) excluem aqueles compostos coma estrutura geral:

<formula>formula see original document page 25</formula>

em que

R1 e R2 são conforme definidos acima; e

r e s são, cada um, independentemente O, 1, 2, 3 ou 4, desdeque a soma de s e r seja pelo menos 1;

p) compostos da fórmula (XII) excluem qualquer um ou mais detodos os compostos seguintes:

<formula>formula see original document page 25</formula><formula>formula see original document page 26</formula>

em que R2 é NH(CH)(Ph)C=O(Ph);

<formula>formula see original document page 26</formula>

em que R2 é fenila não substituído ou fenila substituído com OMe1 Cl ou Me;

<formula>formula see original document page 26</formula>

em queR2 é aralquila opcionalmente substituída; e

Rc e Rd são, cada um independentemente, Me1 hidrogênio,CH2Cl ou Cl;

<formula>formula see original document page 27</formula>

em que Re é fenila opcionalmente substituída;

<formula>formula see original document page 27</formula>

em que R2 é fenila opcionalmente substituída com Me1 OMe1 Br ou Cl; ou

q)quando

R1 for hidrogênio; e

R2 for fenila ou fenila opcionalmente substituída; e

m for 1, então, L não será -CO-, -COCH2- ou -COCH=CH-.

Em cada caso acima em que tiverem sido feitas citações a pedi-dos de patentes, o objeto em questão relacionado aos compostos é aqui in-corporado no presente pedido por referência. Da mesma forma são incluídosos sais farmaceuticamente aceitáveis destes, os racematos, diastereoisôme-ros, enantiômeros e os tautômeros correspondentes, bem como, quandopresente, as modificações de cristais correspondentes dos compostos des-critos acima, por exemplo, solvatos, hidratos e polimorfos, os quais são des-critos nas mesmas. Os compostos utilizados como ingredientes ativos nascombinações da invenção podem ser preparados e administrados conformedescrito nos documentos citados, respectivamente. Também incluído no es-copo desta invenção, há a combinação de mais de dois ingredientes ativosdistintos, conforme estipulado acima, ou seja, uma combinação farmacêuticadentro do escopo desta invenção poderia incluir três ingredientes ativos oumais.

De acordo com os achados particulares da presente invenção, éprovido:

1. Uma combinação farmacêutica compreendendo:

a) um composto pirimidil amino-benzamida da fórmula (I); e

b) pelo menos um inibidor da Flt-3.

2. Um método para tratamento ou prevenção de doença prolife-rativa em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo a co-administração para o referido indivíduo, por exemplo, concomitantemente ouem seqüência de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um compostopirimidil-amino-benzamida da fórmula (I) e de um inibidor da Flt-3, por exem-plo, conforme descrito acima.

Exemplos de doenças proliferativas incluem, entre outras, tumo-res, leucemias, psoríase, reestenose, esclerodermite e fibrose.

3. Uma combinação farmacêutica conforme definida abaixo de 1)acima, por exemplo, para uso em um método conforme definido abaixo de 2)acima.

4. Uma combinação farmacêutica conforme definida abaixo de 1)acima para uso no preparo de um medicamento a ser utilizado em um méto-do conforme definido abaixo de 2) acima.

A utilidade da combinação da invenção em um método conformeespecificado acima no presente pode ser demonstrada em métodos de tes-tes em animais, bem como na clínica, por exemplo, de acordo com os méto-dos descritos abaixo no presente.

Foi surpreendentemente descoberto agora que a combinação deum composto pirimidil amino-benzamida com um inibidor da Flt-3 possuipropriedades terapêuticas que o torna particularmente útil como tratamentode doenças proliferativas.

Em outra concretização, a invenção presente provê um métodopara tratamento de doenças proliferativas, compreendendo a administraçãoa um mamífero que necessita deste tratamento uma quantidade terapeuti-camente eficaz da combinação de um composto pirimidil amino-benzamidacom um inibidor da Flt-3, ou de sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

Preferencialmente, a presente invenção provê um método paratratamento de mamíferos, especialmente de seres humanos, que sofrem dedoenças proliferativas, compreendendo a administração a um mamífero quenecessita deste tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz dacombinação de um composto pirimidil amino-benzamida com um inibidor daFlt-3, ou de sais farmaceuticamente aceitáveis ou pró-fármacos destes.

Na presente invenção, o termo "tratamento" inclui não só trata-mento profilático ou preventivo, como também tratamento curativo ou su-pressivo de doenças, incluindo tratamento de pacientes sob risco de contraí-rem a doença ou com suspeita de terem contraído a doença, bem como pa-cientes enfermos. Este termo inclui ainda o tratamento para o retardo daprogressão da doença.

O termo "curativo", conforme utilizado no presente, significa efi-cácia no tratamento de episódios em curso, os quais envolvam doenças pro-liferativas.

O termo "profilático" significa a prevenção do aparecimento ourecorrência de doenças que envolvam doenças proliferativas.

O termo "retardo de progressão", conforme utilizado no presen-te, significa administração do composto ativo para pacientes em pré-estágioou em uma fase precoce da doença a ser tratada, em que pacientes, porexemplo, tenham recebido o diagnóstico de uma forma anterior que corres-ponda à doença ou quando pacientes estão em uma situação, por exemplo,durante um tratamento ou condição médica resultante de um acidente, se-gundo o qual é possível que uma doença correspondente se desenvolva.

Esta gama de propriedades imprevisíveis significa que o uso dacombinação de um composto pirimidil amino-benzamida com um inibidor daFlt-3 é particularmente interessante para a produção de um medicamentopara o tratamento de doenças proliferativas.

Para demonstrar que a combinação de um composto pirimidilamino-benzamida com um inibidor da Flt-3 é particularmente adequada parao tratamento de doenças proliferativas com boa margem terapêutica e outrasvantagens, foram conduzidos estudos clínicos seguindo uma maneira co-nhecida para o versado na técnica.

A. Tratamento Combinado

Estudos clínicos adequados são, por exemplo, estudos abertosde escalonamento de dose em pacientes com doenças proliferativas. Estesestudos comprovam, particularmente, o sinergismo dos ingredientes ativosda combinação da invenção. Os efeitos benéficos podem ser determinadosdiretamente por meio dos resultados destes estudos, os quais são conheci-dos para um versado na técnica. Estes estudos são particularmente ade-quados para comparar os efeitos de uma monoterapia com os ingredientesativos e uma combinação da invenção. Preferencialmente, a dose do agente(a) é escalonada até que a Dose Máxima Tolerada seja atingida, e o agente(b) é administrado em uma dose fixa. Alternativamente, o agente (a) é admi-nistrado em uma dose fixa e a dose do agente (b) é escalonada. Cada paci-ente recebe doses do agente (a) diariamente ou de forma intermitente. Aeficácia do tratamento pode ser determinada em estudos como estes após,por exemplo, 12, 18 ou 24 semanas avaliando-se pontuações de sintomas acada 6 semanas.

A administração de uma combinação farmacêutica da invençãotem como resultado não só um efeito benéfico, por exemplo, um efeito tera-pêutico sinergístico em relação, por exemplo, ao alívio, retardo na progres-são ou inibição dos sintomas, como também efeitos benéficos surpreenden-tes como, por exemplo, menos efeitos colaterais, melhora na qualidade devida ou diminuição de morbidade, em comparação a uma monoterapia queaplica somente um dos ingredientes ativos utilizados na combinação da invenção.

Um outro benefício, por exemplo, é que doses mais baixas dosingredientes ativos da combinação da invenção podem ser utilizadas, alémde as doses poderem ser muitas vezes não só menores, mas também apli-cadas com menos freqüência, o que pode diminuir a incidência ou gravidadede efeitos colaterais. O mesmo de acordo com os desejos e necessidadesdos pacientes a serem tratados.

Os termos "co-administração" ou "tratamento combinado", ousimilares, conforme utilizados no presente, visam englobar a administraçãodos agentes terapêuticos selecionados para um único paciente e pretendemincluir regimes de tratamento nos quais os agentes não são administradosnecessariamente pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo.

Um dos objetivos desta invenção é prover uma composição far-macêutica compreendendo uma quantidade da combinação da invenção, aqual é ao mesmo tempo terapeuticamente efetiva contra doenças proliferati-vas ou em sua prevenção. Nesta composição, o agente (a) e agente (b) po-dem ser administrados juntos, um após o outro ou separadamente em umaforma combinada de apresentação de dose unitária ou em duas formas deapresentação de dose unitária. A forma de apresentação de dose unitáriapode ser também uma combinação fixa.

As composições farmacêuticas para administração separada doagente (a) e agente (b) ou para a administração em uma combinação fixa,ou seja, uma única composição galênica compreendendo, pelo menos, osdois componentes (a) e (b) que formam o par da combinação, de acordocom a invenção, podem ser preparadas de maneira própria conhecida e sãoaquelas adequadas para administração enteral, como oral ou retal, e paren-teral para mamíferos (animais de sangue quente), incluindo seres humanos,compreendendo uma quantidade terapeuticamente efetiva de pelo menosum único par da combinação farmacologicamente ativo, por exemplo, con-forme indicado acima, ou em combinação com um ou mais veículos ou dilu-entes farmaceuticamente aceitáveis, especialmente adequados para aplica-ção enteral ou parenteral.

Composições farmacêuticas adequadas contêm, por exemplo,em torno de 0,1% a aproximadamente 99,9%, preferencialmente em tornode 1% a aproximadamente 60%, do(s) ingrediente(s) ativo(s). Preparadosfarmacêuticos para a terapia combinada de administração enteral ou paren-teral são, por exemplo, aquelas formas de apresentação de doses unitáriascomo comprimidos revestidos por açúcar, comprimidos, cápsulas ou suposi-tórios, ou ampolas. Se não indicado de outra forma, estes são preparados demaneira por si só conhecida, por exemplo, por meio de processos conven-cionais de mistura, granulação, revestimento com açúcar, dissolução ou Iiofi-lização. Será apreciado que o teor de cada par combinado contido em umadose individual de cada forma de apresentação não necessita por si só cons-tituir uma quantidade efetiva, uma vez que a quantidade efetiva necessáriapode ser atingida pela administração de diversas doses unitárias.

Particularmente, uma quantidade terapeuticamente efetiva decada par da combinação da invenção pode ser administrada simultaneamen-te ou em seqüência, além de em qualquer ordem, e os componentes podemser administrados separadamente ou sob a forma de uma combinação fixa.Por exemplo, o método de prevenção ou tratamento de doenças proliferati-vas, de acordo com a invenção, pode compreender (i) administração do pri-meiro agente (a) em uma forma livre ou de sal farmaceuticamente aceitávele (ii) administração de um agente (b) em uma forma livre ou de sal farma-ceuticamente aceitável, simultaneamente ou em qualquer ordem de seqüên-cia, em quantidades conjunta e terapeuticamente efetivas, preferencialmenteem quantidades efetivas em sinergia, por exemplo, em doses diárias ou in-termitentes, correspondentes às quantidades descritas no presente. Cadacomponente da combinação da invenção pode se administrado separada-mente em tempos diferentes no decorrer da terapia ou concomitantementeem formas de combinação divididas ou isoladas. Ademais, o termo adminis-tração abrange também o uso de um pró-fármaco de um componente dacombinação que é convertido in vivo para o referido componente da combi-nação. Portanto, deverá ser entendido que esta invenção inclui também to-dos os regimes de tratamento simultâneos ou alternados, e o termo "admi-nistração" deverá ser interpretado de acordo.

As doses efetivas de cada componente combinado, empregadona combinação da invenção, podem variar na dependência do composto emparticular ou composição farmacêutica empregada, do modo de administra-ção, da condição que está sendo tratada, da gravidade da condição que estásendo tratada. Dessa forma, o regime de dose da combinação da invenção éselecionado de acordo com uma variedade de fatores, incluindo a via deadministração e a função renal e hepática do paciente. Um clínico ou médicode capacidade comum pode determinar prontamente e prescrever a quanti-dade efetiva dos ingredientes ativos isolados necessária para aliviar, conterou interromper o progresso da condição. A precisão ideal para se atingir aconcentração dos ingredientes ativos na faixa que leva à eficácia sem toxici-dade requer um regime que tenha como base a cinética da disponibilidadedos ingredientes ativos aos locais direcionados.

As doses diárias do agente (a) ou (b) variarão, evidentemente,na dependência de uma variedade de fatores, por exemplo, o composto es-colhido, a condição em particular a ser tratada e o efeito desejado. De ma-neira geral, são obtidos resultados satisfatórios na administração do agente

(a) em doses diárias da ordem de cerca de 0,03 a 5 mg/kg por dia, particu-larmente de 0,1 a 5 mg/kg por dia, por exemplo, de 0,1 a 2,5 mg/kg por dia,sob a forma de dose única ou em doses divididas. O agente (a) e agente (b)podem ser administrados por qualquer via convencional, particularmente porvia enteral, por exemplo, por via oral, por exemplo, na forma de comprimi-dos, cápsulas, soluções orais ou por via parenteral, por exemplo, na formade soluções ou suspensões injetáveis. Formas adequadas de doses unitá-rias, para administração oral, compreendem de cerca de 0,02 a 50 mg deingrediente ativo, geralmente de 0,1 a 30 mg, por exemplo, do agente (a) ou

(b) juntamente com um ou mais diluentes ou veículos farmaceuticamenteaceitáveis para os mesmos.

O agente (b) pode ser administrado para um ser humano emuma dose diária que varia de 0,5 a 1000 mg. Formas adequadas de doseunitária para administração oral compreendem de cerca de 0,1 a 500 mg deingrediente ativo, juntamente com um ou mais diluentes ou veículos farma-ceuticamente aceitáveis para o mesmo.

A administração de uma combinação farmacêutica da invençãoresulta não só em um efeito benéfico, por exemplo, um efeito terapêuticosinergístico, por exemplo, em relação à inibição da proliferação não reguladade células-tronco hematológicas ou o retardo da progressão de leucemias,como LMC (leucemia mielóide crônica) ou LMA (leucemia mielóide aguda),ou do crescimento de tumores, porém também de efeitos benéficos surpre-endentes adicionais, por exemplo, menos efeitos colaterais, melhora de qua-lidade de vida ou diminuição de morbidade, em comparação a uma terapiaque aplica somente um dos ingredientes farmacologicamente ativos utiliza-dos na combinação da invenção.

Um outro efeito benéfico, por exemplo, é ser possível utilizar do-ses mais baixas dos ingredientes ativos da combinação da invenção, é queas doses podem muitas vezes não só ser menores, mas também ser aplica-das com menos freqüência, ou podem ser utilizados de forma a diminuir aincidência de efeitos colaterais. O mesmo de acordo com os desejos e ne-cessidades dos pacientes a serem tratados.

Combinações de um composto pirimidil amino-benzamida comum inibidor da Flt-3 podem ser combinadas, independentemente ou junto,com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente,um ou mais outros adjuvantes farmacêuticos convencionais e administradospor via enteral, por exemplo, via oral, na forma de comprimidos, cápsulas,drágeas, etc., ou via parenteral, por exemplo, intraperitoneal ou intravenosa,na forma de soluções ou suspensões. As composições enterais e parente-rais podem ser preparadas por meios convencionais.

A combinação de um composto piridimilamino benzamida comum inibidor da Flt-3 pode ser utilizada isoladamente ou combinada a pelomenos um outro composto farmaceuticamente ativo, indicado para uso nes-tas patologias. Estes compostos ativos podem ser combinados no mesmopreparado farmacêutico ou na forma de "kit de partes" de preparados combi-nados, no sentido de que os componentes da combinação podem ser dosa-dos independentemente ou pelo uso de combinações fixas diferentes comquantidades distintas dos componentes da combinação, ou seja, simultane-amente ou em intervalos de tempo diferentes. Os componentes do kit departes podem ser, a seguir, por exemplo, administrados simultânea ou cro-nologicamente escalonados, ou seja, em intervalos de tempo diferentes ecom intervalos de tempo iguais ou diferentes para qualquer componente dokit das partes. Exemplos não restritivos de compostos que podem ser cita-dos para serem utilizados em combinação com a combinação de um com-posto pirimidil amino-benzamida com um inibidor da Flt-3 são fármacos cito-tóxicos de quimioterapia, como citosina arabinosídeo, daunorrubicina, doxor-rubicina, ciclofosfamida, VP-16 ou imatinib, etc. Ademais, a combinação deum composto pirimidil amino-benzamida com um inibidor da Flt-3 poderia sercombinada com outros inibidores de transdução de sinal ou outros fármacoscontra oncogênese com a expectativa de que pudesse resultar em uma si-nergia significativa.

B. Doenças a serem tratadas

O termo "doença proliferativa" inclui, entre outros, tumores, pso-ríase, reestenose, esclerodermite e fibrose.

O termo "malignidade hematológica" refere-se particularmente aleucemias, especialmente aquelas que expressam Bcr-Abl, c-Kit ou Flt-3, einclui, entre outras, leucemia mielóide crônica (LMC) e leucemia linfocíticaaguda (LLA), especialmente a leucemia linfocítica aguda com cromossomoPhiladelphia positivo (LLA Ph+), bem como leucemias resistentes a STI571.Especialmente preferido é o uso das combinações da presente invençãopara leucemias, tais como CML ou AML.

O termo "doença de tumor sólido" significa especialmente câncerovariano, câncer de mama, câncer do colo e geralmente do trato gastrintes-tinal, câncer da cérvice, câncer de pulmão, por exemplo, câncer de pulmãode células pequenas e câncer de pulmão de células não pequenas, câncerde cabeça e pescoço, câncer de bexiga, câncer da próstata ou sarcoma deKaposi.

As combinações de acordo com a invenção que inibem as ativi-dades da proteína quinase mencionada, especialmente tirosina proteína qui-nases, mencionadas acima e abaixo, podem, por conseguinte, ser utilizadasno tratamento de doenças dependentes de proteínas quinases. As doençasdependentes de proteína quinases são especialmente doenças proliferati-vas, tumores preferencialmente benignos ou especialmente malignos (porexemplo, carcinoma dos rins, fígado, glândulas adrenais, bexiga, mama, es-tômago, ovários, colo, reto, próstata, pâncreas, pulmões, vagina ou tiróide,sarcoma, glioblastomas e inúmeros tumores do pescoço e cabeça, bem co-mo leucemias). Elas são capazes de promover a regressão de tumores eimpedir a formação de metástases do tumor e o crescimento de metástases(além de micrometástases). Ademais, podem ser utilizadas na hiperprolifera-ção epidérmica (por exemplo, psoríase), na hiperplasia da próstata e no tra-tamento de neoplasias, especialmente as de caráter epitelial, por exemplo,carcinoma mamário. É possível também utilizar as combinações da presenteinvenção no tratamento de doenças do sistema imunológico, na medida emque várias ou, especialmente, tirosina proteína quinases individualizadasestejam envolvidas; além disso, as combinações da presente invenção po-dem ser utilizadas também no tratamento de doenças do sistema nervosocentral ou periférico quando a transmissão de sinal por pelo menos uma tiro-sina proteína quinase, especialmente selecionada daquelas especificamentemencionadas acima, estiver envolvida.

Na LMC, uma translocação cromossômica reciprocamente equi-librada nas células-tronco hematopoéticas (HSCs) produz o gene híbridoBcr-Abl. Este codifica a proteína de fusão oncogênica Bcr-Abl. Enquanto quea ABL codifica uma tirosina proteína quinase rigorosamente regulada e quedesempenha um papel fundamental na regulação da proliferação celular,aderência e apoptose, o gene da fusão Bcr-Abl codifica uma quinase estrutu-ralmente ativada que transforma HSCs, levando à produção de um fenótipocom proliferação clonal não regulada, redução da capacidade reduzida deaderência ao estroma da medula óssea e diminuição da resposta apoptóticaa estímulos mutagênicos, permitindo que ocorra o acúmulo progressivo detransformações mais malignas. Os granulócitos resultantes não conseguemse desenvolver em linfócitos maduros e são liberados na circulação, levandoa uma deficiência das células maduras e aumento da susceptibilidade à in-fecção. Foram descritos inibidores de Bcr-Abl que competem por ATP e im-pedem que a quinase ative vias mitogênicas e antiapoptóticas (por exemplo,P-3 quinase e STAT5), levando à morte das células com fenótipo Bcr-Abl e,desse modo, provendo uma terapia eficaz contra LMC. As combinações dapresente invenção são, portanto, especialmente apropriadas para a terapiade doenças relacionadas com sua superexpressão, especialmente Ieucemi-as, como as Ieucemiasi por exemplo, LMC ou LLA.

As combinações, de acordo com a invenção, que inibem a ativi-dade da proteína quinase mencionadas, especialmente a proteína tirosinaquinase mencionada acima e abaixo, pode então ser usada no tratamentode doenças dependentes de proteína quinase. Doenças dependentes deproteína quinase são especialmente doenças proliferativas, de tumores pre-ferivelmente benignos ou especialmente malignos (por exemplo, carcinomanos rins, fígado, glândulas adrenais, bexiga, tórax, estômago, ovários, cólon,reto, próstata, pâncreas, pulmões, vagina ou tireóide, sarcoma, glioblasto-mas e numerosos tumores no pescoço e cabeça, como também leucemias).

Estas são capazes de provocar a regressão dos tumores e prevenir a for-mação de metástases tumorais e o crescimento de (também mi-cro)metástases. Além disso, podem ser usadas em hiperproliferações epi-dermais (por exemplo, psoríase), em hiperplasia prostática e no tratamentode neoplasias, especialmente de caráter epitelial, por exemplo, carcinomamamário. É também possível utilizar as combinações da presente invençãono tratamento de doenças do sistema imune enquanto todas ou, especial-mente, proteína tirosina quinases individuais estão envolvidas, além disto, ascombinações da presente invenção podem ser usadas também no tratamen-to de doenças do sistema nervoso central ou periférico, onde a transmissãodo sinal de pelo menos uma proteína tirosina quinase, especialmente sele-cionada daquelas mencionadas especificamente, é envolvida.

Flt3 (FMD - tipo tirosina quinase) é especialmente expressa emcélulas progenitoras hematopoiéticas e da serie linfóide e mielóide. A expressãoanormal do gene de Flt3 tem sido documentada em ambas as leucemiasadulta e infantil incluindo LMA1 LMA com mielodisplasia trilinear (LMA/TMDS),LLA1 LMC1 e síndrome mielodisplásica (MDS), que são então as doenças pre-feridas para serem tratadas com compostos de formula (I). A ativação demutações em Flt3 tem sido encontrada em aproximadamente 25-30% dospacientes com LMA. Assim há uma evidência cumulativa para todas as Flt3em leucemias humanas, e as combinações da presente invenção, como osinibidores de Flt3 são especialmente para o uso na terapia destes tipos dedoenças (vide Tse e colaboradores, Leukemia 15(7), 1001 -1010 (2001); Tomokie colaboradores, Câncer Chemother. Pharmacol. 48 (Suppl. 1), S27-S30(2001); Birkencamp e colaboradores, Leukemia 15(12), 1923-1921 (2001);Kelly e colaboradores, Neoplasia 99(1), 310-318 (2002)).

Em LMC, uma translocação cromossomial balanceada recipro-camente em HSCs produz o gene híbrido BCR-ABL. O último codifica a pro-teína de fusão do BCR-ABL oncogênico. Enquanto ABL codifica a proteínatirosina quinase com forte regulação, a qual possui papel fundamental naregulação da proliferação celular, aderência e apoptose, o gene BCR-ABLde fusão codifica uma quinase constitutiva ativada, que transforma HSCspara produzir um fenótipo de proliferação clonal desregulada, com capacida-de reduzida de aderir a células tronco e com reduzida resposta a apoptoseestimulada por mutagênese, a qual permite a acumulação progressiva demais transformações malignas. Os granulócitos resultantes fracassam ao sedesenvolverem a linfócitos maduros e são liberados na circulação, levando auma deficiência de células maduras e ao aumento da susceptibilidade a in-fecções. Inibidores ATP-competitivos de BCR-ABL têm sido descritos porprevenirem as vias de ativação mitogênica e anti-apoptótica das quinases(por exemplo, P-3 quinase e STAT5), levando a morte do fenótipo celular deBCR-ABL e assim fornecendo uma terapia eficaz contra LMC. As combina-ções da presente invenção, úteis como inibidores BCR-ABL são especial-mente apropriadas para a terapia de doenças relacionadas a sua super ex-pressão, especialmente em leucemias, tal como as leucemias, por exemploLMC OU LLA.

As combinações da presente invenção inibem primariamente oιcrescimento de vasos sangüíneos e são, desta forma, eficazes, por exemplo,contra diversas doenças associadas a angiogênese desequilibrada, especi-almente doenças causadas por neovascularização, especialmente retinopa-tias, como retinopatia diabética ou degeneração de mácula relacionada aenvelhecimento, psoríase, hemangioblastoma, como hemangioma, distúr-bios proliferativos de células mesangiais, como doenças renais crônicas eagudas, por exemplo, nefropatia diabética, nefrosclerose maligna, síndromesde microangiopatia trombótica ou rejeição de transplante, ou especialmente,doença renal inflamatória, como glomerulonefrite, especialmente glomerulo-nefrite mesângio-proliferativa, síndrome urêmica hemolítica, nefropatia dia-bética, nefrosclerose hipertensiva, ateroma, reestenose arterial, doençasauto-imunes, diabetes, endometriose, asma crônica e, especialmente, doençasneoplásicas (tumores sólidos, porém também leucemias e outras malignidadeshematológicas), como especialmente câncer de mama, câncer de colo, cân-cer de pulmão (especialmente, câncer de pulmão de células pequenas),câncer de próstata ou sarcoma de Kaposi. Combinações da presente inven-ção inibem o crescimento de tumores e são especialmente adequadas paraa prevenção da disseminação metastática de tumores e o crescimento demicrometástases.

Claims (12)

1. Combinação farmacêutica compreendendo:a) um composto pirimidil amino-benzamida da fórmula (I) eb) pelo menos um inibidor da Flt-3.

2. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, emque o agente a) é selecionado dentre 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil] ami-no]-/V-[5-(4-metil-1/-/-imidazol-1-il)-3-(trifluormetil)fenil]benzamida ou sais domesmo.

3. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 2,em que o inibidor da Flt-3 é selecionado dentre /V-[(9S,10fí,11 fí,13fí)-2,3,10,-11,12,13-hexahidro-10-metóxi-9-metil-1-oxo-9,13-epóxi-1 /-/,9H-diindol[1,2,3-gh:-3',2',1'-lm]pirrol[3,4-j][1,7]benzodiazonin-11-il]-A/-metilbenzamida; 1 -[4-(4-etil-pi-perazinil-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-3-[4-(6-metilamino-pirimidin-4-uréia; 1 -[4-(2-amino-pirimidin-4-ilóxi)-fenil]-3-[4-(4-etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-tri-fluormetil-fenil]-uréia e 1-[4-(2-amino-pirimidin-4-ilóxi)-fenil]-3-[4-(4-metil-pipe-razin-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-uréia.

4. Método para preparo de um medicamento para o tratamentode uma doença proliferativa compreendendo uma combinação farmacêuticacomo definida na reivindicação 1.

5. Método de acordo com a reivindicação 4, em que a doençaproliferativa é leucemia.

6. Método de acordo com a reivindicação 4, em que o agente a)é selecionado dentre 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pimidinil]amino]-A/-[5-(4-metil--1 /-/-imidazol-1 -il)-3-(trifluormetil)fenil]benzamida.

7. Método de acordo com a reivindicação 6, em que o inibidor daFlt-3 é selecionado dentre A/-[(9S,10fí,11fí,13/:?)-2,3,10,11,12,13-hexahidro--10-metóxi-9-metil-1 -oxo-9,13-epóxi-1 H,9H-diindol[1,2$-q\\\2>\2x Λ '-lm]pirrol[3,4-j][1,7]benzodiazonin-11 -il]-/\/-metilbenzamida; 1 -[4-(4-eti l-pi pe razi η i I -1 -ilme-til)-3-trifluormetil-fenil]-3-[4-(6-metilamino-pirimidin-4-ilóxi-fenil]-uréia; 1-[4-(2-amino-pirirriidin-4-ilóxi)-fenil]-3-[4-(4-etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-fe-nil]-uréia e 1 -[4-(2-amino-pirimidin-4-ilóxi)-fenil]-3-[4-(4-metil-piperazin-1 -ilme-til)-3-trifluormetil-fenil]-uréia.

8. Método de tratamento ou prevenção de uma doença proliferativaem um indivíduo que necessita do mesmo, compreendendo a co-administraçãopara o referido indivíduo, por exemplo, concomitantemente ou em seqüên-cia, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um inibidorda Flt-3 e um composto pirimidil amino-benzamida da fórmula (I).

9. Método de acordo com a reivindicação 8, em que a doençaproliferativa é leucemia.

10. Método de acordo com a reivindicação 8, em que o compos-to pirimidil amino-benzamida da fórmula (i) é selecionado dentre 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pimidinil]amino]-A/-[5-(4-metil-1 H-imidazol-1 -il)-3-(trifluormetil)fenil]benzamida e sais do mesmo.

11. Método de acordo com a reivindicação 8, em que o inibidorda Flt-3 é selecionado dentre /V-[(9S,10F?,11fl,13fl)-2,3,10,11,12,13-hexa-hidro-10-metóxi-9-metil-1-oxo-9,13-epóxi-1/-/,9/-/-diindol[1,2,3-gh:3',2',1'-lm]pirrol[3,4-j][1,7]benzodiazonin-11 -il]-/V-metilbenzamida; 1 -[4-(4-etil-piperazinil-1-ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-3-[4-(6-metilamino-pirimidin-4-ilóxi-fenil]-uréia;-1-[4-(2-amino-pirimidin-4-ilóxi)-fenil]-3-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-triflu-ormetil-fenil]-uréia e 1 -[4-(2-amino-pirimidin-4-ilóxi)-fenil]-3-[4-(4-metil-pipera-zin-1 -ilmetil)-3-trifluormetil-fenil]-uréia.

12. Método para tratamento de leucemia, compreendendo a ad-ministração de uma combinação de:a) 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-A/-[5-(4-metil-1 H-imidazol-1 -il)-3-(trifluormetil)fenil] benzamida e sais do mesmo; eb) um inibidor da Flt-3.