BRPI0615619A2

BRPI0615619A2 - composições terapêuticas que compreendem hialuronana e anticorpos terapêuticos bem como métodos de tratamento

Info

Publication number: BRPI0615619A2
Application number: BRPI0615619-3A
Authority: BR
Inventors: Tracey Brown; Gary Brownlee
Original assignee: Alchemia Oncology Pty Ltd
Priority date: 2005-09-07
Filing date: 2006-09-04
Publication date: 2011-05-24
Also published as: CN101287475A; JP2013082737A; EA200800763A1; WO2007028196A1; CN101287475B; JP5627181B2; EP1922077A1; MY149606A; US20090220497A1; CA2621279C; EP2772260A2; CA2621279A1; JP2009507043A; EP1922077A4; EP2772260A3; US20140328828A1; US8623354B2; AU2006289651B2; AU2006289651A1; IL189972A

Abstract

COMPOSIçõES TERAPEUTICAS QUE COMPREENDEM HIALURONANA E ANTICORPOS TERAPEUTICOS BEM COMO METODOS DE TRATAMENTO A presente invenção relaciona-se, de modo geral, aos protocolos de tratamento e profilaxia para doenças ou distúrbios celulares, como doenças e distúrbios associados à proliferação celular anormal. Mais particularmente, a presente invenção fornece composições que compreendem anticorpos terapêuticos e hialuronana e seu uso no tratamento e profilaxia de doenças e distúrbios celulares.

Description

COMPOSIÇÕES TERAPÊUTICAS QUE COMPREENDEM HIALURONANA EANTICORPOS TERAPÊUTICOS BEM COMO MÉTODOS DE TRATAMENTO

Fundamento da invenção

Campo da invenção

A presente invenção relaciona-se, de modo geral, aosprotocolos de tratamento e profilaxia para doenças oudistúrbios celulares, como doenças e distúrbios associadosà proliferação celular anormal. Mais particularmente, apresente invenção fornece composições que compreendemanticorpos terapêuticos e hialuronana e seu uso notratamento e profilaxia de doenças e distúrbios celulares.

Descrição da técnica prévia

Todas as citações científicas, patentes, pedidos depatentes e especificações técnicas do fabricante referidasnesta são aqui incorporadas em sua totalidade porreferência.

Câncer é uma doença celular hiperproliferativa queocorre quando uma população de células se replica naausência de controle genético ou bioquímico normal do ciclocelular. Nos Estados unidos isoladamente, 2.604.650 depessoas morreram de câncer entre 1990-1994, com mais homens(53%) que mulheres (47%) afetados. As mortes por câncermais numerosas foram o resultado de câncer do pulmão(-30%), cólon e reto (-11%), mama (-8%), e próstata(-6,5%). Entre as mulheres, os cânceres de maior ocorrênciasão os de mama (31%), pulmão (12%), cólon e reto (12%),útero (6%) e ovário (4%).

Historicamente, o tratamento para câncer geralmenterequer um protocolo terapêutico que compreende um ou maisde cirurgia, radiação e quimioterapia. Mais recentemente,anticorpos terapêuticos direcionados para alvos de câncertêm sido desenvolvidos. Esses anticorpos são usados comocitotóxicos parenterais e exibem eficácia e toxicidadedependente de dose. A quimioterapia sistêmica é o principaltratamento disponível para doença maligna localizada oudisseminada. Quimioterapia, seja curativa ou paliativa,requer múltiplos ciclos de tratamento em que os agentesquimioterápicos exibem um efeito de resposta a dose e amorte celular correlaciona-se com a exposição aomedicamento.

A maioria das abordagens terapêuticas para odesenvolvimento de tratamentos seletivos para tumor tem seufoco nas diferenças morfológicas e funcionais entre tecidosmalignos e saudáveis. Medicamentos projetados paramanipular as diferenças morfológicas têm se baseado narápida proliferação de células cancerosas que coincide comuma necessidade por um suprimento eficaz de oxigênio enutrientes freqüentemente cumprida pelo processo deneovascularização. A vasculatura resultante do tumor édefeituosa, o que permite a penetração de grandes moléculasno espaço extravascular e, devido à pouca drenagemlinfática intratumoral, pode haver um acúmulo preferencialde grandes compostos no local da malignidade.

Os requisitos funcionais para que as células tumoraissejam metabolicamente eficientes e móveis resultam em umasuperexpressão de numerosos receptores específicos paratumor que podem ser usados como um alvo seletivo para aliberação ativa de agentes anticâncer via ligantesespecíficos contra esses epitopos. Um mecanismo desobrepujar a pouca especificidade das atuais terapias paracâncer tem sido o uso anticorpos que são direcionados areceptores específicos para tumor ou moléculas,adicionalmente, anticorpos terapêuticos têm o potencial deserem agentes eficazes no tratamento e profilaxia de váriasdoenças.

Anticorpos humanizados e desimunizados têm grandepotencial, embora seja geralmente necessário que sejamliberados em uma alta dose e sejam de produção cara. Umpré-requisito para um direcionamento de anticorpo eficaz éque os anticorpos devem ser capazes de penetrar tecidos.Além disso, é preferível ter um método de liberação localcontrolado que libere anticorpos ao local da doença. Noentanto, desafios de formulação ocorrem freqüentementequando da ligação de anticorpos com veículos de liberação.

A penetração de anticorpos é um problema particular comanticorpos terapêuticos associados a tumor e a pesquisatambém mostrou que os fragmentos de alta afinidade podemser retidos na periferia de tumores enquanto fragmentos demédia e baixa afinidade parecem ter melhor penetração. Emtais casos, o direcionamento não específico do anticorpopode se tornar um problema.

Uma vez que o desenvolvimento de anticorposmonoclonais deixou os anticorpos de camundongos para osanticorpos quiméricos, humanizados e desimunizados, foiobservada uma redução da resposta anti-anticorpo,entretanto, existem preocupações potenciais em relação aotratamento repetido ou crônico em um ambiente clínico. Umoutro efeito colateral possível da terapia com anticorpo éa liberação de citocinas que é mediada através dorecrutamento de células efetoras imunes. Há umanecessidade, portanto, de se desenvolver formulações deanticorpo que possam melhorar a eficácia ou reduzir osefeitos colaterais de anticorpos ou fragmentos deanticorpos.

Sumário da invenção

Por toda a especificação, a menos que o contexto diteem contrário, a palavra "compreende", ou variações como"que compreende" ou "compreendem", serão compreendidas comoindicando a inclusão do elemento determinado ou númerointeiro ou grupo de elementos ou números inteiros, mas nãoa exclusão de qualquer outro elemento ou número inteiro ougrupo de elementos ou números inteiros.

A presente invenção é baseada em parte no uso dehialuronana (HA) e seus derivados e formas sintetizadas equimicamente modificadas e sais em combinação comanticorpos terapêuticos ou fragmentos, análogos, derivados,porções, quimeras ou formas desimunizadas destes parafacilitar a liberação eficaz de anticorpos ao local dadoença resultando em um regime de tratamento minimamentetóxico, mas eficaz para doença celular proliferativa.

A presente invenção fornece, portanto, formulações deanticorpo e protocolos terapêuticos e profiláticos paradoenças e distúrbios celulares.

Portanto, um aspecto da presente invenção fornece umaformulação que compreende HA ou um derivado ou formasintetizada ou quimicamente modificada ou sal destas e umanticorpo terapêutico, ou fragmento, análogo, derivado,porção, quimera ou forma desimunizada destas, eopcionalmente um ou mais, veículos, diluentes e/ouexcipientes farmaceuticamente aceitáveis.Uma vez que HA é administrada em altas concentrações,há uma constante internalização de HA, o que significa quequalquer anticorpo que está em um equilíbrio no domíniovolumétrico da HA é co-internalizado, resultando em umaliberação intracelular concentrada do medicamento oucomposição farmacêutica. Em adição, a ligação de HA areceptores de não internalização pode facilitar odesenvolvimento de um HA/anticorpo terapêutico glycoclayxque pode assegurar uma prolongada retenção do anticorpo nasuperfície celular, resultando em uma maior disponibilidadepara o epitopo do anticorpo.

De acordo com a presente invenção, a combinação de HAcom um anticorpo facilita a melhor eficácia do anticorpocomparada ao uso do anticorpo na presença de HA. "Melhoreficácia" inclui melhor eficácia na inibição daproliferação de células cancerosas ou transformação de umefeito citotóxico em células de câncer, resultando em menoscarga tumoral. As formulações de anticorpo da presenteinvenção são propostas para serem úteis no tratamento ouprofilaxia de doenças celulares.

A presente invenção é baseada em parte na determinaçãode que HA e seus derivados, formas sintetizadas ouquimicamente modificadas, e sais destas, não apenas inibemas células por si, mas também permitem a administraçãosegura de anticorpos selecionados em doses padrão, menorese maiores para tratar indivíduos incluindo humanos eanimais. A administração in vivo de hialuronana emcombinação com anticorpos também melhora o efeitoterapêutico desses agentes contra células que sãorefratárias, assim evitando o subseqüente surgimento deresistência a multimedicamentos. Através da capacidade deHA de fornecer uma via de internalização celular, ou seja,via sistema de processamento lisossomal, uma combinação deHA e anticorpos terapêuticos sensitiza as células queseriam, de outro modo, resistentes ao tratamento através demecanismos de resistência intrínsecos ou adquiridos.

Anticorpos contemplados pela presente invenção incluemquaisquer anticorpos que são específicos para visar tiposde células associados, ou que têm o potencial de seremassociados a uma doença celular. Exemplos de taisanticorpos incluem: ABX-EGF; Alemtuzumab; ApolizumabBevacizumab; Cantuzumab; Cetuximab; cG25 0; cmc-54 4Daclizumab; Epratuzumab; erlotinib; Gemtuzumab ozogamicinhA2 0; HCBE-Il; Hun901; Ibritumomab tiuxetan; IDEC 159Infliximab; Lumiliximab; mAb 3F8; mAb b43.13; mAb BC8; mAbCC49-deltaCH2; mAb Chl4.18; mAb CP-675,206; mAb HeFi-I; mAbHU3S193; mAb HuGl-M195; mAb huHMFGl; mAb J591; mAb MDX-CTLA4; mAb MiK-beta-1; MDX-OlO; MEDI-507; MLN2704;Pertuzumab; RAVl2; Rituximab; SGN30; SGN-40; Tositumomab;Trastuzumab (herceptin); TRM-I (TRAIL Rl Mab); e ítrio-ibritumomab.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação de anticorpo que compreende HAe cetuximab.

Uma outra modalidade particular fornece uma formulaçãode anticorpo que compreende HA e bevacizumab.

Ainda uma outra modalidade particular fornece umaformulação de anticorpo que compreende HA e herceptin.

Ainda um outro aspecto fornece uma formulação quecompreende HA ou um derivado ou forma sintetizada ouquimicamente modificada desta e um anticorpo selecionado dalista na Tabela 1.

Essas formulações opcionalmente também compreendem umou mais veículos, excipientes e/ou diluentesfarmaceuticamente aceitáveis.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a hialuronana ouanálogo ou derivado ou forma sintetizada ou modificadadesta está na faixa de peso molecular de cerca de 360Daltons a 20.000 kDaltons.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a hialuronana ouanálogo ou derivado ou forma sintetizada ou modificadadesta está na faixa de peso molecular de cerca de 360Daltons a 2.000 kDaltons.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a hialuronana ouanálogo ou derivado ou forma sintetizada ou modificadadesta está na faixa de peso molecular de cerca de 20kDaltons a 1.500 kDaltons.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a hialuronana ouanálogo ou derivado ou forma sintetizada ou modificadadesta está na faixa de peso molecular modal de cerca de 860kDaltons.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a hialuronana ouanálogo ou derivado ou forma sintetizada ou modificadadesta e o anticorpo não são ligados de forma covalente.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a faixa de pH dacomposição está entre pH 2,5 e 10,5.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a faixa de pH dacomposição está entre pH 5,0 e 8,5.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o anticorpo, fragmento,derivado, porção, quimera ou forma totalmente desimunizadadesta é para uso no tratamento ou profilaxia de uma doençaproliferativa celular.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o anticorpo, fragmento,derivado ou porção desta é selecionado do grupo deanticorpos que consiste em: ABX-EGF; Alemtuzumab;

Apolizumab; Bevacizumab; Cantuzumab; Cetuximab; CG250; cmc- 544 ; Daclizumab; Epratuzumab; erlotinib; Gemtuzumabozogamicin; hA20; HCBE-11; Hun901; Ibritumomab tiuxetan;IDEC 15 9; Infliximab; Lumiliximab; mAb 3F8; mAb b4 3.13; mAbBC8; mAb CC49-deltaCH2; mAb Chl4.18; mAb CP-675,206; mAbHeFi-1; mAb Hu3S193; mAb HuGl -M195; mAb huHMFGl; mAb J591mAb MDX-CTLA4; mAb MiK-beta-1; MDX-010; MEDI-507; MLN2704Pertuzumab; RAV 12; Rituximab; SGN-30; SGN-40; TositumomabTrastuzumab (herceptin); TRM-I (TRAIL Rl Mab); e ítrio-ibritumomab.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a doença proliferativacelular é qualquer uma de câncer, doença neoplásica ouqualquer doença que envolve inflamação de tecido ouliberação de agentes inflamatórios.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a doença proliferativacelular resulta em um ou mais de um tumor, neoplasia,hiper-proliferação descontrolada ou metástase.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a doença proliferativacelular está presente em um ou mais órgãos ou tecidosincluindo a mama, pulmão, próstata, rim, pele, tecidoneural, ovário, útero, fígado, pâncreas, célulasepiteliais, tecido gástrico, intestino, sistema exócrino,endócrino, linfático, sistema hematopoiético, tecido dacabeça e tecido do pescoço.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a doença proliferativacelular ocorre em um mamífero.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o anticorpo écetuximab.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o anticorpo ébevacizumab.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o anticorpo éherceptin.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o anticorpo éhumanizado.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação para uso no tratamento ouprofilaxia de câncer colo-retal.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o mamífero éselecionado do grupo que consiste em primata, bovino,canino, eqüino, felino e suíno.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o primata é um humano.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a composição está emforma oral, tópica ou parenteral.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a forma oral éapresentada como um comprimido, pílula, cápsula, losango,pastilha, pó, grânulo, emulsão, líquido, suspensão aquosaou oleosa, medicamento, xarope, elixir ou spray.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a forma tópica éadministrada na forma de um creme, loção, emulsão, gel,filme, spray, pasta ou pomada.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a forma parenteral éadministrada por injeção subcutânea, aerossol, injeçãointravenosa, intramuscular, intratecal, intracraniana,intrastemal ou técnicas de infusão na forma de um líquido,pomada, supositório ou dispositivo intra-vaginal.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação junto com um segundo agente oucomposição usado no tratamento de doença proliferativacelular em que o segundo agente é um agente quimioterápicoou anticorpo terapêutico.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que o segundo agente oucomposição é irinotecan ou doxorrubicina ou fluoruracil ouleucovorin ou oxaliplatina ou metotrexato ou gemcitabina.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a biodisponibilidade doanticorpo, fragmento, derivado ou porção deste é aumentada.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a HA é administradaantes ou subseqüente à administração do agente.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a HA é administradaantes da administração do agente.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a HA é administradasubseqüente ã administração do agente.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a HA é administrada porvia oral.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a HA é administrada emuma quantidade de cerca de 0,01 a cerca de 40 mg/kg de pesocorporal.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação em que a HA é administrada emuma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 27 mg/kg de pesocorporal.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação junto com uma segundacomposição usada no tratamento de doença proliferativacelular em que a segunda composição compreende um agentequimioterápico ou anticorpo terapêutico.Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação junto com uma segundacomposição usada no tratamento de doença proliferativacelular em que a segunda composição compreende HA ou umderivado ou forma sintetizada ou quimicamente modificada ousal destas e agente quimioterápico ou anticorpoterapêutico.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a uma formulação que compreende cetuximab e HAou um derivado ou forma sintetizada ou quimicamentemodificada ou sal destas junto com um segundo componente,irinotecan.

Em um aspecto relacionado, a presente invenção tambémfornece métodos de tratamento ou profilaxia para doençascelulares em um indivíduo, o método compreendendo aadministração a um indivíduo em necessidade deste de umanticorpo terapêutico ou um fragmento, derivado, porção,quimera ou forma desimunizada deste e HA ou um análogo, umderivado ou forma sintetizada ou quimicamente modificada ousal destas por um tempo e sob condições para que ossintomas da doença celular sejam melhorados.

Em uma modalidade, a presente invenção contempla ummétodo de tratamento ou profilaxia de um indivíduo com umadoença celular, o referido método compreendendo aadministração ao referido indivíduo de uma formulação deanticorpo que compreende HA e cetuximab.

Ainda uma outra modalidade da atual invençãorelaciona-se a um método de tratamento ou profilaxia de umadoença celular em um indivíduo, o referido métodocompreendendo a administração ao referido indivíduo de umaformulação de anticorpo que compreende HA e bevacizumab.

Ainda uma outra modalidade da atual invençãorelaciona-se a um método de tratamento ou profilaxia de umadoença celular em um indivíduo, o referido métodocompreendendo a administração ao referido indivíduo de umaformulação de anticorpo que compreende HA e herceptin.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método de tratamento ou profilaxia paradoenças celulares em um indivíduo, o método compreendendo aadministração a um indivíduo em necessidade deste de umanticorpo terapêutico ou um fragmento, análogo, derivado,porção, quimera ou forma totalmente desimunizada deste, eHA ou um análogo, um derivado ou forma sintetizada ouquimicamente modificada ou sal destas por um tempo e sobcondições para que os sintomas da doença celular sejammelhorados.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a hialuronana ou um análogoou derivado ou forma sintetizada ou modificada desta estána faixa de peso molecular de 360 Dalton a 20.000 kDaltons.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a hialuronana ou um análogoou derivado ou forma sintetizada ou modificada desta estána faixa de peso molecular de cerca de 360 Daltons a 2.000kDaltons.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a hialuronana ou um análogoou derivado ou forma sintetizada ou modificada desta estána faixa de peso molecular de cerca de 20 kDaltons a 1.500kDaltons.Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a hialuronana ou um análogoou derivado ou forma sintetizada ou modificada desta estáem uma faixa de peso molecular modal de cerca de 860kDaltons.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a hialuronana ou um análogoou derivado ou forma sintetizada ou modificada desta e oanticorpo não são ligados de forma covalente.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a faixa de pH da composiçãoestá entre pH 2,5 e 10,5.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o anticorpo, fragmento,derivado ou porção deste é selecionado do grupo deanticorpos que consiste em: ABX-EGF; Alemtuzumab;Apolizumab; Bevacizumab; Cantuzumab; Cetuximab; c G250; cmc-544; Daclizumab; Epratuzumab; erlotinib; Gemtuzumabozogamicin; hA20; HCBE-11; Hun901; Ibritumomab tiuxetan;IDEC 159; Infliximab; Lumiliximab; mAb 3F8; mAb b43.13; mAbBC8; mAb CC49-deltaCH2; mAb Chl4.18; mAb CP-675,206; mAbHeFi-I; mAb Hu3S193; mAb HuGl -M195; mAb huHMFGl; mAb J591;rnAb MDX-CTLA4; mAb MiK-beta-1; MDX-010; MEDI-507; MLN2704;Pertuzumab; RAVl2; Rituximab; SGN-30; SGN-40; Tositumomab;Trastuzumab (herceptin); TRM-I (TRAIL Rl Mab); e ítrio-ibritumomab.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a doença proliferativacelular é qualquer um de câncer, doença neoplásica ouqualquer doença que envolve inflamação de tecido ouliberação de agentes inflamatórios.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a doença proliferativacelular resulta em um ou mais de um tumor, neoplasia,hiper-proliferação descontrolada ou metástase.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a doença proliferativacelular está presente em um ou mais órgãos ou tecidosincluindo uma mama, pulmão, próstata, rim, pele, tecidoneural, ovário, útero, fígado, pâncreas, célulasepiteliais, tecido gástrico, intestino, sistema exócrino,endócrino, linfático, sistema hematopoiético, tecido dacabeça e tecido do pescoço.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a doença proliferativacelular ocorre em um mamífero.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o anticorpo é cetuximab.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o anticorpo é bevacizumab.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o anticorpo é herceptin.

Uma modalidade particular da atual invençãodirecionada a um método para o tratamento ou profilaxia decâncer colo-retal.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o mamífero é selecionado dogrupo que consiste em primata, bovino, canino, eqüino,felino e suíno animal.

Uma modalidade particular da atual invenção éedirecionada a um método em que o primata é um humano.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o tratamento é administradopor via oral, tópica ou parenteral.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a forma de administrada porvia oral é comprimido, pílula, cápsula, losango, pastilha,pó, grânulo, emulsão, líquido, suspensão aquosa ou oleosa,medicamento, xarope, elixir ou spray.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a forma administrada por viatópica é creme, loção, emulsão, gel, filme, spray, pasta oupomada.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a administração parenteral épor injeção subcutânea, aerossol, injeção intravenosa,intramuscular, intratecal, intracraniana, intrastemal outécnicas de infusão na forma de um líquido, pomada,supositório ou dispositivo intra-vaginal.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a hialuronana ou um análogoou um derivado ou forma sintetizada ou modificada desta éadministrado simultaneamente, seqüencialmente, antes, emcombinação, durante ou subseqüente à administração doanticorpo, fragmento, derivado ou porção deste.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a segunda composiçãocompreende um agente quimioterápico ou anticorpoterapêutico.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que uma segunda composiçãocompreende HA ou um derivado ou forma sintetizada ouquimicamente modificada ou sal destas e agentequimioterápico ou anticorpo terapêutico.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o segundo agente oucomposição compreende HA formulada com irinotecan oudoxorrubicina ou fluoruracil ou leucovorin ou oxaliplatinaou metotrexato ou gemcitabina.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o segundo agente oucomposição compreende HA formulada com qualquer um dosanticorpos listados na tabela 1.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o segundo agente oucomposição compreende irinotecan ou doxorrubicina oufluoruracil ou leucovorin ou oxaliplatina ou metotrexato ougemcitabina.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o segundo agente oucomposição compreende qualquer um dos anticorpos no grupoque consiste em: ABX-EGF; Al emtuzum ab; Apo lizumab ;Bevacizumab; Cantuzumab; Cetuximab; c G2 50; cmc-544;Daclizumab; Epratuzumab; erlotinib; Gemtuzumab ozogamicin;hA2 O; HCBEll; Hun901; Ibritumomab tiuxetan; IDEC 159;Infliximab; Lumiliximab; mAb 3F8; mAb b4 3.13; mAb BC 8; mAbCC49-deltaCH2; mAb Chl4.18; mAb CP-675,206; mAb HeFi-I; mAbHU3S193; mAb HuGl-M195; mAb huHMFGl; mAb J591; mAb MDX-CTLA4; mAb MiK-beta-1; MDX-010; MEDI-507; MLN2704;Pertuzumab; RAVl2; Rituximab; SGN-3 0; SGN-4 0; Tositumomab;Trastuzumab (herceptin); TRM-I (TRAIL Rl Mab); e ítrio-ibritumomab.

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que o segundo agente oucomposição compreende o regime de tratamento FOLFOX(fluoruracil, leucovorin e oxaliplatina), FOLFIRI (quecompreende irinotecan, leucovorin e fluoruracil) e IFL (quecompreende irinotecan, fluoruracil e leucovorin).

Uma modalidade particular da atual invenção édirecionada a um método em que a biodisponibilidade doanticorpo, fragmento, derivado ou porção deste é aumentada.

Um outro aspecto da atual invenção é direcionada parao uso de um anticorpo terapêutico ou fragmento, derivado,porção, quimera ou forma totalmente desimunizada deste, emcombinação com HA ou seus derivados ou formas sintetizadasou quimicamente modificadas ou sais na manufatura de ummedicamento para o tratamento ou profilaxia de doençacelular.

Em particular, as formulações de anticorpo da presenteinvenção podem ser usadas no tratamento ou profilaxia decâncer de cólon.

Adicionalmente, as formulações da presente invençãotambém podem compreender um ou mais agentes terapêuticosadicionais, como um agente anticâncer, um agente antiviral,um agente antibacteriano, um agente antifúngico, ouqualquer outro agente que também facilite o tratamento ouprofilaxia da doença celular ou distúrbio.

Em uma modalidade adicional, a formulação de anticorpoda presente invenção é administrada como parte de terapiade combinação.Ainda uma outra modalidade particular da presenteinvenção fornece uma formulação que compreende hialuronanae cetuximab administrados em combinação com uma segundaformulação que compreende hialuronana e um segundoanticorpo ou agente quimioterápico ou regime de tratamento.

Ainda uma outra modalidade particular da presenteinvenção relaciona-se a uma formulação que compreendehialuronana e bevacizumab administrados em combinação comuma segunda formulação que compreende hialuronana e umsegundo anticorpo ou agente quimioterápico ou regime detratamento.

Ainda uma outra modalidade particular da presenteinvenção relaciona-se a uma formulação que compreendehialuronana e herceptin administrados em combinação com umasegunda formulação que compreende hialuronana e um segundoanticorpo ou agente quimioterápico ou regime de tratamento.

Novamente, as formulações também podem compreender umou mais veículos, excipientes e/ou diluentesfarmaceuticamente aceitáveis.

A presente invenção também contempla sistemas deliberação para as atuais formulações. Em uma modalidade, HAe anticorpo são mantidos separadamente e são misturadoslogo antes da administração. Nessa modalidade, a HA e oanticorpo podem ser administrados através de um dispositivoúnico de entrada invasivo em tecido do corpo ou através demúltiplos dispositivos de entrada invasivos em tecido docorpo como, sem limitação, seringas e agulhas.Conseqüentemente, a administração simultânea ou seqüencialde uma HA e anticorpo, em qualquer ordem, é parte dapresente invenção.A presente invenção também fornece o uso de umanticorpo terapêutico ou um fragmento, derivado, porção,quimera ou forma desimunizada deste, em combinação com HAou seus derivados ou formas sintetizadas ou quimicamentemodificadas ou sais na manufatura de um medicamento para otratamento ou profilaxia de doença celular.

Breve descrição das figuras

As Figuras IAeB são uma representação gráfica queilustra a mudança de percentagem no volume tumoral duranteo tratamento dos camundongos que portam xenoenxertos decâncer de cólon humano, em que os camundongos são tratadoscom hialuronana formulada com cetuximab (HyERB) oucetuximab (ERB) como um único agente. A Figura 1 A mostra aatividade de monoterapia antitumor de HyERB (150/0,25) eERB (0,25) em camundongos atímicos que portam xenoenxertosde cólon humano LIM1215. A Figura IB demonstra a respostado tumor para ERB (0,5) e HyERB (150/0,5) durante otratamento (dia 32). Os pontos no gráfico marcados com 'a'denotam que a diferença entre os grupos de tratamento éestatisticamente significante (p = < 0,05, teste t).

A Figura 2 é uma representação gráfica de % de mudançana massa corporal dos camundongos que portam xenoenxertosde câncer de cólon humano, em que os camundongos sãotratados com hialuronana formulada com cetuximab (HyERB)(150/0,5) ou ERB (0,5) durante o tratamento, dia 32. Ospontos no gráfico marcados com 'a' denotam que a diferençaentre os grupos de tratamento é estatisticamentesignificante (p = < 0,05, teste t).

A Figura 3 é uma representação gráfica do % desobrevivência de camundongos que portam xenoenxertos decâncer de cólon humano, em que os camundongos são tratadoscom hialuronana formulada com cetuximab (HyERB) (150/0,5)ou ERB (0,5). Ponto final experimental foi atingido no dia120 após o início do tratamento, em que o % desobrevivência é expresso como o dia da morte do camundongodividido por 0,120 χ 100. Os dados de sobrevivência podemser considerados como um indicador substituto de um índiceterapêutico aumentado.

As Figuras 4 A e B são uma representação gráfica decamundongos que recebem a terapia de combinação, HAformulada com cetuximab (HyERB) com HA formulada comirinotecan (HyCAMP). A Figura 4A mostra os tratamentos atéo dia 32 (o dia da última injeção) após o início dotratamento. A Figura 4 B mostra o mesmo experimento até oponto final experimental, dia 300 após o início dotratamento. Nota: áreas em que a diferença entre os gruposé significativa (p = <0,05, teste t) são apontadas por 'a'.

A Figuras 5 é uma representação gráfica de % demudança na massa corporal em terapia de combinação, HAformulada com cetuximab (HyERB) com HA formulada comirinotecan (HyCAMP) até o ponto final experimental, dia 300após o início do tratamento.

A Figura 6 é uma representação gráfica do % desobrevivência de camundongos para a terapia de combinação,HA formulada com cetuximab (HyERB) com HA formulada comirinotecan (HyCAMP) até o ponto final experimental, dia 300após o início do tratamento.

A Figura 7 é uma ilustração de representação gráfica amudança percentual no volume do tumor durante o tratamentodos camundongos até o final do tratamento (dia 32) após oinício do tratamento com irinotecan/5-fluoruracil/leucovorin (IFL + solução salina) , IFL +bevacizumab (BEV) e IFL + HyBEV (HA formulada combevacizumab). 'a' denota que a diferença entre a respostade IFL + BEV e IFL + HyBEV é significativa ( ρ = < 0,05,teste t) .

A Figura 8 é uma representação gráfica de % de mudançana massa corporal para I após o início do tratamento comirinotecan/5-fluoruracil/leucovorin (IFL + solução salina) ,IFL + bevacizumab (BEV) e IFL + HyBEV (HA formulada combevacizumab). A diferença entre o grupo IFL+solução salinaé significativa a partir do dia 25 ao 134 quando comparadaa IFL+BEV e IFL+HyBEV. Para o mesmo período, embora sejaobservada uma tendência em que o ganho de peso é maior paraos camundongos que recebem IFL + HyBEV quando comparadoscom aqueles que recebem IFL + BEV, essas diferenças não sãosignificativas.

Descrição detalhada da invenção

Por toda esta especificação e nas reivindicações quese seguem, a menos que o contexto dite em contrário, apalavra "compreende", e variações como "compreendem" e "quecompreende", serão entendidas como significando a inclusãode um número inteiro determinado ou etapa ou grupo denúmeros inteiros ou etapas, mas não a exclusão de qualqueroutro número inteiro ou etapa ou grupos de números inteirosou etapas.

Todas as citações científicas, patentes, pedidos depatentes e especificações técnicas do fabricante referidasnesta são aqui incorporados em sua totalidade porreferência.Referência a qualquer técnica prévia nestaespecificação não é, e nem deve ser considerada como, umreconhecimento ou qualquer forma de sugestão de que atécnica prévia é parte do conhecimento geral comum emqualquer pais.

Deve ser entendido que, a menos que indicado de outraforma, a atual invenção não é limitada a componentesespecíficos de formulação, métodos de produção, materiaisou reagentes biológicos, regimes de dosagem e outros, umavez que tais podem variar. Também deve ser entendido que aterminologia aqui usada é para o objetivo de descrição demodalidades particulares apenas, e não deve ser limitante.

Como usado na atual especificação, as formassingulares "um", "uma" e "o/a" incluem aspectos no plural,a menos que o contexto dite claramente em contrário.Portanto, por exemplo, referência a "uma formulação" incluiuma formulação única, bem como duas ou mais formulações;referência a "um agente" ou "um reagente" inclui a agenteou reagente único, bem como dois ou mais agentes oureagentes; referência a "a célula cancerosa" inclui umúnica célula cancerosa ou grupo ou tecido de célulascancerosas; e assim por diante.

Os termos "composto", "agente", "reagente", "agentefarmacologicamente ativo", "medicamento", "terapêutico","ativo" e "medicamento" são usados de modo intercambiávelnesta para referir-se a um anticorpo ou outra moléculainterativa que será ou é formulada com HA ou seus derivadosquimicamente sintetizados e que são úteis no tratamento ouprofilaxia de doenças e distúrbios celulares. Os termostambém englobam ingredientes ativos farmaceuticamente efarmacologicamente aceitáveis daqueles agentes ativosespecificamente aqui mencionados. Quando os termos"agente", "reagente", "composto", "agentefarmacologicamente ativo", "medicamento", "terapêutico","ativo" e "medicamento" são usados, então deve serentendido que esses incluem a entidade ativa por si bemcomo sais farmaceuticamente aceitáveis, farmacologicamenteativos, quimeras e formas recombinantes dos anticorpos ou HA.

Referência a um "agente", "agente químico","composto", "agente farmacologicamente ativo","medicamento", "terapêutico", "ativo" e "medicamento"inclui combinações de dois ou mais agentes ativos. Uma"combinação" também inclui composições em multi-partes comoduas partes em que os agentes são fornecidos separadamentee dados ou distribuídos separadamente ou misturados antesda distribuição. Por exemplo, uma embalagem farmacêutica demulti-partes pode ter dois ou mais agentes mantidosseparadamente. Portanto, esse aspecto da presente invençãoinclui terapia de combinação. Terapia de combinação incluia co-administração do anticorpo e HA ou o anticorpo, HA eoutro.

Os termos "quantidade eficaz" e "quantidadeterapeuticamente eficaz" de um agente como aqui usadossignificam uma quantidade suficiente do agente parafornecer o efeito ou resultado terapêutico ou fisiológicodesejado. Tal efeito ou resultado inclui a redução oumelhoria dos sintomas de doença celular. Efeitosindesejáveis, por exemplo, efeitos colaterais, são algumasvezes manifestados junto com o efeito terapêutico desejado;portanto, um profissional equilibra os benefíciospotenciais contra os riscos potenciais na determinação dequal é uma "quantidade eficaz" adequada. A quantidade exatanecessária irá variar de indivíduo para indivíduo,dependendo da espécie, idade e condição geral do indivíduo,modo de administração e outros. Portanto, pode nãç> serpossível especificar uma "quantidade eficaz" exata. Noentanto, uma "quantidade eficaz" adequada em qualquer casoindividual pode ser determinada por pessoa de habilidadecomum na técnica com o uso apenas de experimentaçãorotineira. Geralmente, o agente ou agentes é/são dados emuma quantidade e sob condições suficientes para reduzir ainflamação e/ou proliferação de células.

As composições e métodos da presente invenção sãoúteis para aumento da sensibilidade de células aosanticorpos, como aquelas usadas no tratamento de doençaproliferativa celular exemplificadas na Tabela 1. Emparticular, as composições e métodos da atual invenção sãoúteis para aumento da sensibilidade de células associadas adistúrbios proliferativos celulares, como câncer. Poraumento da eficácia sem concomitante toxicidade paracélulas não cancerosas, a presente invenção fornececomposições e métodos úteis, entre outros, para otratamento de doenças celulares como câncer e prevenção ouredução das chances de recaída e morte como um resultado decitotoxicidade.

O termo "indivíduo" como aqui usado refere-se aqualquer humano ou animal que tem uma doença ou condiçãoque requer tratamento com um anticorpo em que o anticorpotem reduzida eficácia em relação àquela desejada.Geralmente, o indivíduo sofre de um distúrbio proliferativocelular, por exemplo, câncer, crescimento de célulaneoplásica etc. Referência a "câncer" inclui um tumor ousarcoma, bem como um câncer hematológico como leucemia.Indivíduos para os objetivos da presente invenção incluem,sem limitação, mamíferos (por exemplo, primatas, incluindohumanos, bovinos, caninos, eqüinos, felinos e suínos) epreferivelmente humanos.

Por "distúrbio proliferativo celular", entende-se queuma célula ou células demonstram crescimento anormal,tipicamente crescimento aberrante que pode levar a umaneoplasia ou um câncer.

Distúrbios proliferativos celulares incluem, porexemplo, doenças neoplásicas, cânceres (por exemplo,cânceres da mama, pulmão, próstata, rim, pele, neural,ovário, útero, fígado, pâncreas, epitelial, gástrico,intestinal, do sistema exócrino, endócrino, linfático,hematopoiético ou do tecido da cabeça ou pescoço),distúrbios fibróticos e outros.

Geralmente, doenças neoplásicas são condições em que aproliferação anormal de células resulta em uma massa detecido chamada uma neoplasia ou um câncer. Neoplasias têmgraus variáveis de anormalidades em estrutura ecomportamento. Algumas neoplasias são benignas, enquantooutras são malignas ou cancerosas. Um tratamento de doençaneoplásica eficaz representa uma contribuição valiosa paraa pesquisa por procedimentos preventivos ou curativos decâncer.

Os compostos e métodos da presente invenção são tambémpropostos para serem usados para tratar ouras doençasassociadas a anticorpo e tratamento quimioterápico, comodistúrbios neurodegenerativos, desequilíbrio hormonal eoutros. Portanto, a presente invenção engloba métodos paramelhorar os sintomas de um distúrbio associado aproliferação celular, neoplasias, cânceres e outros,incluindo tratamento de um indivíduo que tem o distúrbio,no local do distúrbio, com HA, e um anticorpo em umaquantidade suficiente para inibir ou melhorar aproliferação celular ou o distúrbio.

Como aqui usado um "câncer" refere-se a um grupo dedoenças e distúrbios que são caracterizados por crescimentocelular descontrolado (por exemplo, formação de massacelular) sem qualquer diferenciação daquelas células emcélulas especializadas e diferentes. Cânceres que podem sertratados com o uso dos métodos da presente invençãoincluem, sem limitação, protooncogene ABLl, cânceresrelacionados com a AIDS, neuroma acústico, leucemialinfocítica aguda, leucemia mielóide aguda, carcinomaadenocístico, câncer adrenocortical, metaplasia mielóideagnogânica, alopécia, sarcoma alveolar de partes moles,câncer anal, angiossarcoma, anemia aplástica, astrocitoma,ataxia-telangiectasia, carcinoma de célula basal (pele),câncer da bexiga, cânceres ósseos, câncer intestinal,glioma de tronco cerebral, tumores do cérebro e SNC, câncerde mama, tumores do SNC, tumores carcinóides, câncercervical, tumores cerebrais da infância, câncer dainfância, leucemia da infância, sarcoma de tecido mole dainfância, condrossarcoma, coriocarcinoma, leucemialinfocítica crônica, leucemia mielóide crônica, câncerescolo-retais, Iinfoma ce célula T cutâneo,dermatofibrossarcoma-protuberans, tumor de célula redondadesmoplástico, carcinoma ductal, cânceres endócrinos,câncer endometrial, ependimoma, câncer esofageano, sarcomade Ewing, câncer de duto biliar extra-hepático, câncerocular, olho: raelanoma, retinoblastoma, câncer da trompa deFalópio, anemia falciforme, fibrossarcoma, câncer devesícula biliar, câncer gástrico, cânceresgastrointestinais, tumor-carcinóide-gastrointestinal,cânceres geniturinários, tumores de célula germinativa,doença trofoblástica gestacional, glioma, cânceresginecológicos, malignidades hematológicas, leucemia decélulas pilosas, câncer da cabeça e pescoço, câncerhepatocelular, câncer de mama hereditário, histiocitose,doença de Hodgkin, papilomavírus humano, molahidatidiforme, hipercalcemia, câncer da hipofaringe,melanoma intraocular, câncer de célula da ilhota, sarcomade Kaposi, câncer renal, histiocitose de célula deLangerhan, câncer de laringe, leiomiossarcoma, leucemia,sindrome de li-fraumeni, câncer de lábios, lipossarcoma,câncer hepático, câncer pulmonar, linfedema, linfoma,linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, câncer de mamamasculino, tumor do rim maligno rabdóide, meduloblastoma,melanoma, câncer de célula de Merkel, mesotelioma, câncermetastático, câncer da boca, neoplasia endócrina múltipla,micose fungóide, síndromes mielodisplásicas, mieloma,distúrbios mieloproliferativos, câncer nasal, câncer donasofaringe, nefroblastoma, neuroblastoma,neurofibromatose, sindrome de quebra de nijmegen, câncer depele não melanoma, câncer pulmonar de célula não pequena(nscic), cânceres oculares, câncer esofageano, câncer dacavidade oral, câncer do orofaringe, osteossarcoma, câncerovariano de ostomia, câncer de pâncreas, câncer paranasal,câncer da paratireóide, câncer da glândula parótida, câncerdo pênis, tumores neuroectodérmicos periféricos, câncer dapituitária, polictemia vera, câncer da próstata, cânceresraros e distúrbios associados, carcinoma de célula renal,retinoblastoma, rabdomiossarcoma, síndrome de Rothmund-Thomson, câncer da glândula salivar, sarcoma, schwanoma,Síndrome de Sezary, câncer de pele, câncer pulmonar decélula pequena (scic), câncer do intestino delgado, sarcomatecido mole, tumores da medula espinhal, carcinoma decélula escamosa (pele), câncer gástrico, sarcoma sinovial,câncer testicular, câncer de timo, câncer de tireóide,câncer de célula de transição (bexiga), câncer de célula detransição (pelve renal/ureter), câncer trofoblástico,câncer uretral, câncer dos sistema urinário, uroplaquinas,sarcoma uterino, câncer de útero, câncer vaginal, câncer davulva, macroglobulinemia de Waldenstrom ou tumor de Wilms.Como acima indicado, o termo "câncer" abrange tumores,sarcomas e leucemias e todos aqueles termos podem serusados de forma intercambiável.

Os compostos da presente invenção são utilizados emcomposições farmacêuticas por adição de uma quantidadeeficaz de um composto a um excipiente, diluente ou veículofarmaceuticamente aceitável adequado. O uso dos compostos emétodos da presente invenção são também úteisprofilaticamente.

O termo "anticorpo", conforme empregado aqui, serefere a uma molécula de imunoglobulina ou porçãoimunológica dessa, ou seja, uma porção de ligação aantígeno e inclui partes, anticorpos de domínios,fragmentos, quimeras e formas desimunizadas desses.Exemplos de porções imunologicamente ativas de moléculas deimunoglobulina incluem fragmentos scFV e dcFV, fragmentosF(ab) e F(ab')2 que são gerados por tratamento do anticorpocom uma enzima como papaína ou pepsina, respectivamente. Oanticorpo pode ser um anticorpo policlonal, monoclonal,recombinante, por exemplo, um anticorpo quimérico,humanizado, desimunizado totalmente humano, não humano, porexemplo, de murídeo, ou de cadeia única. O anticorpo podeser ligado a uma toxina ou agente de imagem.Especificamente, os anticorpos da atual invenção sãosanticorpos anticâncer que têm um efeito terapêutico para umindivíduo que tem um distúrbio proliferativo celular, porexemplo, câncer. Em modalidades específicas, os anticorpossão aqueles listados na tabela 1. Em outras modalidades, osanticorpos se ligam a um alvo listado na tabela 1. Ainda emoutras modalidades, os anticorpos são anticorposterapêuticos que se ligam a uma proteína envolvida napatogênese de câncer e têm um efeito benéfico para umindivíduo. Anticorpos quiméricos, humanizados,desimunizados mas mais preferivelmente, completamentehumanos são desejáveis para tratamento terapêutico depacientes humanos.

TABELA 1

Exemplos de anticorpos para uso em doenças proliferativascelulares especialmente câncer.

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Um anticorpo (ou fragmento desse também pode serconjugado a uma porção terapêutica como uma citotoxina, umagente terapêutico ou um Ion radioativo. Uma citotoxina ouum agente citotóxico inclui qualquer agente que sejaprejudicial às células. Exemplos incluem taxol,citocalasina B, gramicidina D, brometo de etídio, emetina,mitomicina, etoposida, tenoposida, vincristina,vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina,desidroxi antracina diona, mitoxantrona, mitramicina,actinomicina D, l-desidrotestosterona, glicocorticóides,procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol, puromicina,maitansinóides, por exemplo, maitansinol (veja Patente U.S.No. 5.208.020), CC-1065 (veja Patentes U.S. Nos. 5.475.092,5.585.499, 5.846.545) e análogos ou homólogos desses.

Agentes terapêuticos incluem, sem limitação,antimetabólitos (por exemplo, metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracildecarbazina), agentes alquilantes (por exemplo,mecloretamina, tioepa clorambucil, CC-1065, melfalan,canustina (BSNU) e lomustina (CCNU) , ciclofosfamida,bussulfan, dibromomanitol, estreptozotocina, mitomicina C,e cis-diclorodiamina platina (II) (DDP) cisplatina),antraciclinas (por exemplo, daunorrubicina (anteriormentedaunomicina) e doxorrubicina), antibióticos (por exemplo,dactinomicina (anteriormente actinomicina), bleomicina,mitramicina, e antramicina (AMC)), DM-I e agentesantimitóticos (por exemplo, vincristina e vinblastina,taxol e maitansinóides). fons radioativos incluem, semlimitação iodo, ítrio e praseodímio.

Os métodos da presente invenção envolvem em umamodalidade, (1) a administração de HA, antes, junto com, ousubseqüente à administração de um anticorpo; ou (2) aadministração de uma combinação de HA e um anticorpo.

Como aqui usado, o termo "quantidade terapeuticamenteeficaz" refere-se a uma quantidade de um composto dapresente invenção eficaz para gerar uma respostaterapêutica desejada. Por exemplo, para evitar câncer outratar os sintomas de câncer em um hospedeiro ou umaquantidade eficaz para tratar câncer.

A "quantidade terapeuticamente eficaz" específica irávariar com tais fatores como a condição em particular sendotratada, a condição física do paciente, o tipo de mamíferosendo tratado, a duração do tratamento, a natureza daterapia concomitante (se houver), e as formulaçõesespecíficas empregadas e o anticorpo.

Como aqui usado, a "veículo farmacêutico" é umsolvente, agente de suspensão ou veículo farmaceuticamenteaceitável para liberação de uma HA e/ou agentequimioterápico ao animal ou humano. 0 veículo pode serlíquido ou sólido e é selecionado com a maneira planejadade administração em vista.

Como aqui usado, o termo "célula" inclui, mas não élimitado a, células animais e particularmente células demamíferos (por exemplo, células humanas, células decamundongo ou células de rato).

A atual invenção também fornece composições queincluem um ou mais anticorpos anticâncer e derivados,fragmentos e/ou sais de HA. Inúmeros derivados e fragmentosde HA foram descritos na literatura e devem ser incluídosnas formulações e métodos da atual invenção. HA também podeser quimicamente modificada ou sintetizada. HA pode serreferida como um "polímero", "ácido hialurônico" ,"hialuronato" ou "hialuronana".

Sendo uma molécula polimérica, as moléculas de HApodem exibir uma faixa de pesos moleculares variáveis. Asformulações de HA podem, portanto, compreender moléculas dediferentes pesos moleculares. Quase qualquer média deformulação de HA de peso molecular modal pode ser eficaznos métodos da presente invenção e a presente invenção nãoé limitada a qualquer tamanho ou faixa de tamanho emparticular de HA. HA tendo um peso molecular modal na faixade 1 a 2 milhões de daltons é considerada particularmenteútil embora a presente invenção não seja assim limitada.Exemplos de pesos moleculares úteis de HA incluemaproximadamente em dáltons 360, 370, 380, 390 400, 410, 420, 430, 440, 4 50, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550 , 560, 5 70, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 6 90, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800, 8 10, 820, 830, 840, 850, 860, 870, 880, 890, 900, 910, 920, 930, 940, 950, 960, 970, 980, 990, 1000, 1010, 1020 , 1030 , 1040, 1050, 1060 1070 , 1080, 1090, 1100, 1110 , 1120 , 1130 , 1140, 1150, 1160 1170 , 1180, 1190 , 1200, 1210, 1220 , 1230 , 1240, 1250, 1260 1270 , 1280, 1290, 1300, 1310, 1320 , 1330 , 1340, 1350, 1360 1370 , 1380, 1390, 1400, 1410, 1420 , 1430 , 1440, 1450, 1460 1470 , 1480, 1490, 1500, 1510, 1520 , 1530 , 1540, 1550, 1560 1570 , 1580, 1590, 1600, 1610, 1620 , 1630 , 1640, 1650, 1660 1670 , 1680, 1690, 1700, 1710, 1720 , 1730 , 1740, 1750 , 1760 1770 , 1780, 1790, 1800, 1810, 1820 , 1830 , 1840, 1850, 1860 1870 , 1880, 1890, 1900, 1910, 1920 , 1930 , 1940, 1950, 1960 1970 , 1980, 1990, 2000, 2010, 2020 , 2030 , 2040, 2050, 2060 2070 , 2080, 2090, 2100, 2110, 2120 , 2130 , 2140, 2150, 2160 2170 , 2180, 2190, 2200, 2210, 2220 , 2230 , 2240, 2250, 2260 2270 , 2280, 2290, 2300, 2310, 2320 , 2330 , 2340, 2350, 2360 2370 , 2380, 2390, 2400, 2410, 2420 , 2430 , 2440, 2450, 2460 2470 , 2480, 2490, 2500, 2510, 2520 , 2530 , 2540, 2550, 2560 2570 , 2580, 2590, 2600,261027102810291040004100420043004400450046004700480049005000510052005300550055005600570058005900600061006200630064006500

262027202820292040104110421043104410451046104710,481049105010511052105310541055105610571058105910601061106210631064104510

263027302839293040204120422043204420452046204720 ,482049205020512052205320542055205620572058205920602061206220632064206520

264027402840294040304130423043304430453046304730 ,483049305030513052305330543055305630573058305930603061306230633064304530

265027502850295040404140424043404440454046404740 ,484049405050515052405350545055405640574058405940604061406240634064406540

266027602860296040504150425043504450455046504750 ,485049505050515052505350545055505650575058505950605061506250635064506550

267027702870297040604160426043604460456046604760,486049605060516052605360546055605660576058605960606061606260636064606560

26802780,2880,298040704170427043704470457046704770,487049705070517052705370547055705670577058705970607061706270637064706570

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21740218202190021980220502213022210222902237022452253022610226902277022850229302300023080231602324023320234002348023560236402372023800238802396024040

21750218302191021990220602214022220223002238022460225402262022700227802286022940230102309023170232502333023410,2349023570236502373023810238902397024050

21760218402192022000220702215022230223102239022470225502263022710227902287022950230202310023180232602334023420,2350023580236602374023820239002398024060

21770218502193022000220802216022240223202240022480225602264022720228002288022960230302311023190232702335023430,2351023590236702375023830239102399024070

2178021860219402201022090221702225022330224102249022570226502273022810228902297023040231202320023280233602341902352023600236802376023840239202400024080

21790218702195022020221002218022260223402242022500225802266022740228202290022980230502313023210232902337023450235302361023690237702385023930240102409024110, 24120, 24130, 24140, 24150, 24160, 24170, 24180,24190, 24200, 24210, 24220, 24230, 24240, 24250, 24260,24270, 24280, 24290, 24300, 24310, 24320, 24330, 24340,24350, 24360, 24370, 24380, 24390, 24400, 24410, 24420,24430, 244240, 24450, 24460, 24470, 24480, 24490, 24500,24510, 24520, 24530, 24540, 24550, 24560, 24570, 24580,24590, 24600, 24610, 24620, 24630, 24640, 24650, 24660,24670, 24680, 24690, 24700, 24710, 24720, 24730, 24740,24750, 24760, 24770, 24780, 24790, 24800, 24810, 24820,24830, 24840, 24850, 24860, 24870, 24880, 24890, 24900,24910, 24920, 24930, 24940, 24950, 24960, 24970, 24980,24990, 25000, 30000, 35000, 40000, 45000, 50000, 55000,60000, 65000, 70000, 75000, 80000, 85000, 90000, 95000,

100000, 200000, 300000, 400000, 500000, 600000, 700000,800000, 900000, 1000000, 1100000, 1200000, 1300000,1400000, 1500000, 1600000, 1700000, 1800000, 1900000,2000000 dáltons.

Exemplos de derivados de HA são aqueles descritos naPatente U.S. No. 6.620.927 (derivados de ácido hialurônicomodificados por tiol); Patente U.S. No. 6.552.184(compostos entrecruzados de ácido hialurônico e osderivados desses); Patente U.S. No. 6.579.978 (compostossulfatados de ácido hialurônico e derivados desses);Patente U.S. No. 6.831.172 (ácidos hialurônicosentrecruzados e derivados hemissuccinilados desses);Patente U.S. No. 6.027.741 (ácido hialurônico sulfatado eésteres desses); Patente européia No. 0138572 (fragmentosde Ácido hialurônico HYALECTIN e HYALASTINE); Patente U.S.No. 4.851.521 (ésteres de ácido hialurônico com diferentesálcoois aromáticos alifáticos e/ou aralifáticos) ; PatenteU.S. No. 5.202.431 (ésteres parciais de ácido hialurônico);Patente U.S. No. 5.676.964 (polímeros de ácido hialurônicoentrecruzados) e Patente Européia No. 0265116 (ésteresentrecruzados de ácido hialurônico).

Além dos fragmentos e derivados de ácido hialurônico,derivados sintéticos, ou seja, derivados semi-sintéticospodem ser usados nas composições e métodos da presenteinvenção. Exemplos de derivados semi-sintéticos de HA sãoésteres de HA com álcoois da série alifáticos,aralifáticos, heterocíclicos e cicloalifáticos, designada"HYAFF" , que são descritos nas Patentes U.S. Nos.4.851.521, 4.965.353, e 5.202.431, Patente Européia No.0341745 e Patente Européia No. 0216453. Os conteúdos decada uma das patentes acima identificadas são expressamenteincorporados nessa por referência.

As composições de HA e anticorpo e métodos da presenteinvenção podem ser administradas por via oral, tópica, ouparenteral em formulações de dosagem unitária contendoveículos, excipientes e adjuvantes convencionais nãotóxicos farmaceuticamente aceitáveis.

As composições e métodos contemplados pela presenteinvenção incluem formas orais apresentadas como umcomprimido, pílula, cápsula, losango, pastilha, pó,grânulo, emulsão, líquido, suspensão aquosa ou oleosa,medicamento, xarope, elixir ou spray.

A composição para uso oral podem conter um ou maisagentes selecionado do grupo de agentes adoçantes, agentesflavorizantes, agentes colorantes e agentes conservantespara fornecer preparações palatáveis. Os comprimidos contêmo ingrediente ativo em mistura com excipientesfarmaceuticaraente aceitáveis não tóxicos que são adequadospara a manufatura de comprimidos.

Esses excipientes podem ser, por exemplo, (1)diluentes inertes, como carbonato de cálcio, lactose,fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; (2) agentes degranulação e desintegrantes, como amido de milho ou ácidoalgínico; agentes de ligação, como amido, gelatina ouacácia; e agentes lubrificantes, como estearato demagnésio, ácido esteárico ou talco. Esses comprimidos podemser não revestidos ou revestidos por técnicas conhecidaspara retardar a desintegração e absorção no tratogastrointestinal e dessa forma fornecem uma ação sustentadapor um período mais longo. Por exemplo, um material deretardo de tempo como monostearato de gliceril oudistearato de gliceril podem ser empregados. 0 revestimentotambém podem ser realizado com o uso de técnicas descritasnas Patentes U.S. Nos. 4.256.108; 4.160.452 e 4.265.874para formar comprimidos terapêuticos osmóticos paracontrole de liberação.

Além disso, os métodos e composições contemplados pelapresente invenção incluem formas tópicas administradas comoum creme, loção, emulsão, gel, filme, spray, pasta oupomada.

Além disso, as composições e métodos contemplados pelapresente invenção incluem administração parenteral e comoaqui usado inclui injeção subcutânea, aerossol, injeçãointravenosa, intramuscular, intratecal, intracraniana,intra-esternal, administração e técnicas de infusão.Formulações ou composições parentais podem estar na formade um líquido, pomada, supositório ou dispositivo intra-vaginal.

Uma HA bem como os anticorpos úteis no método dainvenção podem ser administrados, para aplicação in vivo,parenteral por injeção ou por perfusão gradual pelo tempoindependentemente ou juntos. A administração pode serintravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutânea,intracavitária, ou transdérmica. Para estudos in vitro osagentes podem ser adicionados ou dissolvidos em um tampãoadequado biologicamente aceitável e adicionado a uma célulaou tecido.

Preparações para administração parenteral incluemsoluções estéreis aquosas ou não aquosas, suspensões, eemulsões. Exemplos de solventes não aquosos são propilenoglicol, polietileno glicol, óleos vegetais como óleo deoliva, e ésteres orgânicos injetáveis como oleato de etila.Veículos aquosos incluem água, soluções alcoólicas/aquosas,emulsões ou suspensões, incluindo solução salina e meiotamponado. Veículos parenterais incluem solução de cloretode sódio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sódio,veículos intravenosos de Ringer lactato incluem fluido erepositores de nutrientes, repositores de eletrólitos (comoaqueles com base em dextrose de Ringer), e outros.

Conservantes e outros aditivos também podem estar presentescomo, por exemplo, antimicrobianos, anti-oxidantes, agentesquelantes, fatores de crescimento e gases inertes e outros.

As composições da presente invenção também podemcompreender um ou mais agentes quimioterápicos ou agentespara reduzir a dor.

É previsto que a invenção é usada para tratarpatologias associadas a distúrbios proliferativoscelulares, incluindo, por exemplo, neoplasias, cânceres(por exemplo, cânceres da mama, pulmão, próstata, rim,pele, neural, ovário, útero, fígado, pâncreas, epitelial,gástrico, intestinal, do sistema exócrino, endócrino,linfático, hematopoiético ou tecido da cabeça e pescoço),distúrbios fibróticos e outros.

Os compostos e métodos da presente invenção tambémpodem ser usados para tratar outras doenças associadas atratamento de câncer como distúrbios neurodegenerativos,desequilíbrio hormonal e outros. Portanto, a presenteinvenção engloba métodos para melhoria de um distúrbioassociadas a proliferação celular, neoplasias, cânceres eoutros, incluindo o tratamento de um indivíduo que tem odistúrbio, no local do distúrbio, com HA e um anticorpo emuma quantidade suficiente para inibir ou melhorar aproliferação celular ou o distúrbio.

Geralmente, os termos "tratar", "tratamento" e outrossão aqui usados como afetando um indivíduo, tecido oucélula para obter um efeito farmacológico e/ou fisiológicodesejado. O efeito pode ser profilático em termos deprevenção completa ou parcial de um distúrbio proliferativocelular ou sinal ou sintoma desse, e/ou pode serterapêutico em termos de uma cura parcial ou completa paraum distúrbio e/ou efeito adverso atribuível, por exemplo, àproliferação celular aberrante. "Tratamento" como aquiusado cobre qualquer tratamento de, ou prevenção de umdistúrbio proliferativo celular em um vertebrado, ummamífero, particularmente um humano, e inclui: (a) evitarque o distúrbio ocorra em um indivíduo que pode serpredisposto ao distúrbio, mas ainda não foi diagnosticadoscomo o tendo; (b) inibição do distúrbio, ou seja,impedimento do seu desenvolvimento; ou (c) alivio oumelhora do distúrbio, ou seja, causa regressão dodistúrbio.

A presente invenção inclui várias composiçõesfarmacêuticas úteis para melhorar um distúrbioproliferativo celular, que inclui, neoplasias, cânceres eoutros. As composições farmacêuticas de acordo com umamodalidade da atual invenção são preparadas com HA,análogos, derivados ou formas sintetizadas ou quimicamentemodificadas dessa ou sais dessa e um ou mais anticorpos porexemplo, anticorpos anticâncer como aqueles identificadosna Tabela 1, ou combinações de HA e um ou mais anticorposem uma forma adequada para administração a um indivíduo queusa veículos, excipientes e aditivos ou auxiliares. Tambémé contemplada pela presente invenção uma combinação de HAcom um ou mais anticorpos junto com um ou mais agentesquimioterápicos-não anticorpos, como, por exemplo,paclitaxel, analgésicos, opiáceos, hormônios ouantibióticos e outros. Adicionalmente ou alternativamente,a formulação pode compreender um agente de alivio da dor.

Freqüentemente usados, "veículos" ou "auxiliares"incluem carbonato de magnésio, dióxido de titânio, lactose,manitol e outros açúcares, talco, proteína do leite,gelatina, amido, vitaminas, celulose e seus derivados,óleos animais e vegetais, polietileno glicóis e solventes,como água estéril, álcoois, glicerol e álcoois poliídricos.

Veículos intravenosos incluem repositores de fluido enutrientes. Conservantes incluem antimicrobianos, anti-oxidantes, agentes quelantes e gases inertes. Outrosveículos farmaceuticamente aceitáveis incluem soluçõesaquosas, excipientes não tóxicos, incluindo sais,conservantes, tampões e outros, como descrito, por exemplo,em Remington's Pharmaceutical Sciences, 15a ed. Easton:Mack Publishing Co. : 1.405-1.412, 1.461-1.487, 1975 e TheNational Formulary XIV., 14a ed. Washington: AmericanPharmaceutical Association, 1975 cujos conteúdos são aquiincorporados por referência. O pH e concentração exata dosvários componentes da composição farmacêutica são ajustadosde acordo com técnica rotineira. Veja, Goodman e Gilman1SThe Pharmacological Basis for Therapeutics (7th ed.).

As composições farmacêuticas são preferivelmentepreparadas e administradas em doses unitárias. Dosesunitárias sólidas são comprimidos, cápsulas e supositórios.Para tratamento de um indivíduo, dependendo da atividade docomposto, vias de administração, natureza e severidade dodistúrbio, idade e peso corporal do indivíduo, diferentesdoses diárias podem ser usadas. Sob certas circunstâncias,no entanto, doses diárias maiores ou menores podem seradequadas. A administração da dose diária pode serrealizada por administração única na forma de uma unidadede dose individual ou várias doses unitárias menores etambém por múltiplas administrações de doses subdivididasem intervalos específicos.

As composições farmacêuticas de acordo com a invençãopodem ser administradas local ou sistemicamente em uma doseterapeuticamente eficaz. Quantidades eficazes para esse usodependerão da severidade da doença e do peso e estado geraldo indivíduo. Tipicamente, dosagens usadas in vitro podemfornecer um guia útil nas quantidades úteis paraadministração in si tu da composição farmacêutica, e modelosanimais podem ser usados para determinar dosagens eficazespara tratamento de distúrbios particulares. Váriasconsiderações são descritas, por exemplo, em Langer,Science 249.1527, 1990. Formulações para uso oral podeestar na forma de cápsulas de gelatina dura em que oingrediente ativo é misturado com um diluente sólidoinerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato decálcio ou caolin. Eles também põem estar na forma decápsulas de gelatina mole em que o ingrediente ativo émisturado com água ou um meio oleoso, como óleo deamendoim, parafina líquida ou óleo de oliva.

Suspensões aquosas normalmente contêm os materiaisativos em mistura com excipientes adequados para amanufatura de suspensão aquosa. Tais excipientes podem ser(1) agentes de suspensão como sódio carboximetilcelulose,metiIcelulose, hidropropilmetilcelulose, alginato de sódio,polivinilpirrolidona, goma tragacanto e goma acácia; (2)agentes de dispersão ou umectantes que podem ser (a) umfosfatídeo de ocorrência natural, por exemplo, lecitina,(b) um produto de condensação de um óxido de alquileno comácido graxo, por exemplo estearato de polioxietileno; (c)um produto de condensação de óxido de etileno com um álcoolalifático de cadeia longa, por exemploheptadecaetilenoxicetanol; (d) um produto de condensação deóxido de etileno com um derivado de ésteres parcial de umácido graxo e um hexitol como monooleato de polioxietilenosorbitol, ou (e) um produto de condensação de óxido deetileno com um éster parcial derivado de ácidos graxos eanidridos de hexitol, por exemplo, monooleato depolietileno sorbitano.

As composições farmacêuticas podem estar na forma deuma suspensão estéril injetável aquosa ou oleaginosa. Essasuspensão pode ser formulada de acordo com métodosconhecidos que usam aqueles agentes de dispersão ouumectantes adequados e agentes de suspensão que foram acimamencionados. A preparação injetável estéril também pode sersolução ou suspensão injetável estéril em um diluente ousolvente não tóxico parentalmente aceitável, por exemplo,como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos esolventes aceitáveis que podem ser empregados estão água,solução de Ringer, e solução isotônica de cloreto de sódio.

Além disso, óleos fixados estéreis são convencionalmenteempregados como um solvente ou meio de suspensão. Para esseobjetivo qualquer óleo fixado pode ser empregado incluindomono ou diglicerídeos sintéticos. Em adição, ácidos graxoscomo ácido oléico são úteis na preparação de injetáveis.

HA junto com um anticorpo da presente invenção tambémpode ser administrada na forma de sistemas de liberação delipossomo, como pequenas vesículas unilamelares, grandesvesículas unilamelares e vesículas multilamelares.Lipossomos podem ser formados a partir de váriosfosfolipídeos, como colesterol, estearilamina, oufosfatidilcolinas.

Níveis de dosagem dos compostos da presente invençãosão da ordem de cerca de 0,5 mg a cerca de 10 mg porquilograma de peso corporal, com uma faixa de dosagempreferida entre cerca de 5 mg a cerca de 20 mg porquilograma de peso corporal por dia (de cerca de 0,3 g acerca de 1,2 g por paciente por dia). A quantidade deingrediente ativo que pode ser combinada com os materiaisde veículo para produzir uma dosagem única irá variardependendo do hospedeiro tratado de e do modo deadministração particular. Por exemplo, a formulação paraadministração oral a humanos pode conter cerca de 5 mg al gde um composto ativo com uma quantidade adequada econveniente de material de veículo que pode variar de cercade 5 a 95 por cento da composição total. Formas de dosagemunitária conterão geralmente entre de cerca de 5 mg a 500mg de ingrediente ativo combinado ou ingrediente ativoindividual.

Deve-se compreender, no entanto, que o nível de doseespecífico para qualquer paciente particular dependerá deuma variedade de fatores incluindo a atividade do compostoespecífico empregado, da idade, peso corporal, saúde geral,sexo, dieta, tempo de administração, via de administração,e taxa de excreção, combinação medicamentosa e daseveridade da doença particular sob terapia.

Adicionalmente, alguns dos compostos da atual invençãopodem formar solvatos com água ou solventes orgânicoscomuns. Tais solvatos são englobados no escopo da invenção.

As formulações da presente invenção podem seradministradas como uma monoterapia (veja, exemplos naTabela 2) ou terapia de combinação para fornecer umtratamento operativo. Deve ser incluída qualquer combinaçãoquimicamente compatível de agentes quimioterápicos,incluindo anticorpos e terápicos diferentes de anticorpos.

A Tabela 3 abaixo fornece uma lista não limitante deexemplos dos tipos de terapias de combinação contempladaspela presente invenção.TABELA 2

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TABELA 3

Exemplos de terapias de combinação

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*veja a Tabela 2, acima, para exemplos que incluem HAe cetuximab (HyERB), HA e bevacizumab (HyBEV) etc

A formulação de anticorpo da presente invenção podeser usada em uma combinação com vários tratamentos padrãode quimioterapia. Tais tratamentos padrão incluem, porexemplo, FOLFOX (fluoruracil, leucovorin e oxaliplatina),FOLFIRI (que compreende irinotecan, leucovorin efluoruracil) e IFL (que compreende irinotecan, fluoruracile leucovorin).

Esses tratamentos padrão são bem conhecidos por pessoade habilidade comum na técnica.

A atual invenção é agora também descrita por via dereferência apenas aos exemplos não limitantes a seguir.Deve ser entendido, no entanto, que os exemplos a seguirsão apenas ilustrativos, e não devem ser vistos em qualquermodo como uma restrição sobre a amplitude da invençãoacima descrita. Em particular, embora a presente invençãoseja descrita em detalhes em relação a câncer, estaráclaramente entendido que os achados nessa não são limitadosao tratamento de câncer. Por exemplo, composições deHA/anticorpo podem ser usadas para tratamento de outrascondições como infecção por agentes patogênicos.

Os Exemplos a seguir podem ser realizados para testara eficácia de anticorpos administrados subseqüente a, ou emcombinação com HA para o tratamento de distúrbiosproliferativos celulares. As linhas de células usadasnesses experimentos são obtiveis, por exemplo, da "AmericanType Cultura Collection" (ATCC) localizada em Manassas, VA,USA.

Os Exemplos abaixo descritos são apenas um conjunto deexperimentos que pode ser realizado.Uma pessoa habilitada na técnica compreenderá quequalquer anticorpo dado pode ser testados em inúmeros tiposdiferentes de câncer, e que o tipo específico de célulascancerosas usado nos exemplos é apenas um dos múltiplostipos de células que podem ser usados.

Os seguintes exemplos não limitantes são ilustrativosda invenção. todos os documentos aqui mencionados sãoincorporados em sua totalidade por referência.

EXEMPLO 1

Efeito de HA e anticorpos anticâncer sobre célulascancerosas in vitro

O exemplo a seguir apresenta como uma pessoahabilitada na técnica por comparar os efeitos de qualquerum dos anticorpos listados na tabela 1 quando formuladoscom HA para o tratamento de uma doença hiperproliferativacomo câncer.

Uma linha de células de câncer cresce e é subcultivadacomo uma monocamada em frascos de cultura de 17 5 cm2 emmeio Leibovitz L-15 suplementado com 10% v/v Soro fetal debezerro (FCS) e reagentes antibióticos/antimicóticos a 37°Cem incubador com umidade controlada com 100% v/v ar.

Para os testes, linhas de células crescem em 90% demeio Leibovitz L-15 suplementado com 10% v/v FCS. Quandoconfluentes as culturas são lavadas 1 X em HBSS etripsinizadas em 0,25% w/v tripsina/0, 05% w/v EDTA. Asuspensão de células é contada com um contador de célulasautomático (ZM-2 Coulter Counter) por adição de 15 mL desolução salina + 0,2 mL de suspensão de células. As célulassão suspensas a um número entre 5.000 e 50.000 decélulas/ml de meio.As células são plaqueadas em placas de 48 cavidades (1cm2 de área ade superfície) por adição de 1 ml de suspensãode células por cavidade.

As células são deixadas para fixar por 24 horas, atesdo meio ser removido, monocamadas lavadas. 0 meio de testecontém meio de crescimento contendo anticorpos anticâncerformulados com hialuronana como uma terapia única ou emcombinação com agentes quimioterápicos padrão.

As células são expostas a várias formulações deHA/anticorpos como uma terapia única ou em combinação comagentes quimioterápicos padrão por diferentes tempos emdiferentes concentrações.

Após a incubação e períodos de crescimento asmonocamadas de células são lavadas com HBSS etripsinaizadas. A suspensão de células é contada com umcontador de células automático por adição de solução salina+ suspensão de células. Os resultados são expressos como %de nenhum controle de medicamento que é calculado como:Contagem de células X 100

Células em nenhum controle de medicamento

Ou dependendo do experimento como % de controle demedicamento, calculado como:

Contagem de células X 100

Células em controle de medicamento

O aumento na eficácia do tratamento é determinado porcomparação da concentração da combinação de anticorpo HAe/ou agente quimioterápico necessária para inverter umefeito citotóxico em 50% da população de células (IC50) .

EXEMPLO 2

Eficácia de anticorpos anticâncer formulados comHialuronana in vivo

Com base nos resultados dos experimentos desensibilidade a medicamento in vitro no Exemplo 1,avaliação da eficácia de tratamento de hialuronanaformulada com anticorpos anticâncer para o tratamento decâncer in vivo será avaliada.

Linhas de células crescem e são subcultivadas comopreviamente descrito no Exemplo 1. para injeção emcamundongos, as células crescem a 80% de confluência,tripsinizadas, lavadas duas vezes por centrifugação,contadas e ressuspensas em meio Leibovitz L-15 livre desoro.

Camundongos atímicos de seis a oito semanas de idadeCBA/WEHI são mantidos sob condições livres de patógenoespecíficas, com alimento esterilizado e água disponível àvontade. Cada camundongo recebe uma injeção contendoaproximadamente 5 χ IO6 células em 50 μL. As medições dotumor são feitas semanalmente 'por medição de trêsdiâmetros perpendiculares (dld2d3). 0 volume do tumor éestimado com o uso da fórmula:

<formula>formula see original document page 60</formula>

Tratamento com anticorpos anticâncer e HA sãoiniciados quando o volume do tumor atinge 50-100 mm3.Injeções individuais de anticorpos anticâncer formuladoscom HA são preparadas de acordo com massas individuais decamundongo, com o objetivo de liberar uma doseterapeuticamente eficaz a cada camundongo.

Os animais são pesados e volumes do tumor são medidosno dia da aplicação do tratamento. Os animais são injetadosna veia caudal.O ponto final experimental ocorre quando:

1. a massa tumoral é tão grande que o animal éimobilizado;

2. o animal não se alimenta ou bebe e tem grande perda depeso; ou

3. o tamanho do tumor é maior que 10% de massa corporal.

No ponto final experimental os animais sãoanestesiados por injeção intraperitoneal de Nembutal,sangue é coletado seguido por morte dos animais com o usode deslocamento cervical.

Imediatamente após a morte do camundongo o tumor,fígado, coração, baço, bexiga, rins direito e esquerdo,útero, pulmões, estômago, intestinos, cérebro e linfonodossão retirados e colocados em formalina e cloreto decetilpiridínio. 0 tecido é fixado por 16-24h antes doprocessamento histológico. 0 tecido fixado é desidratado emetapas a 100% etanol e incrustado em blocos de parafina dosquais seções são colocadas em laminas de vidro demicroscopia. A coloração das seções de tecido com umcorante de hematoxilina nuclear e eosina citoplasmáticaevidencia quaisquer características patológicas que possamindicar toxicidade do tratamento.

Os linfonodos que drenaram a área do tumor sãocoletados de cada animal.

Os linfonodos corados por hematoxilina e eosina sãoexaminados quando cada nodo será microscopicamenteexaminado para a presença de células tumorais. Oslinfonodos imunocorados com CEA são microscopicamenteexaminados, quando quaisquer nodos positivamente coradossão contados e considerados positivos para metástase delinfonodos.

O volume do tumor é monitorado em uma base diária ousemanal por medição do calibre e volume do tumor calculadoscomo previamente descrito.

Para demonstração de qualquer mudança de peso o pesocorporal do animal é normalizado ao peso corporal nomomento do inicio do tratamento como

Massa corporal (ex tumor)- Massa corporal no inicio dotratamento (ex tumor)

Massa corporal no inicio do tratamento (ex tumor) X100

Efeito de tratamento sobre a massa de órgão

Para assegurar que o tratamento não induz a umaatrofia ou aumento de órgão, os órgãos são removidos epesados durante o post mortem. A massa de cada órgão serácalculada como uma % do peso corporal total, e comparado àsmassas do órgão de um grupo de controle.

O tempo de sobrevivência geral do animal é calculadocomo o tempo (dias ou semanas) que o animal viveu após oinicio do tratamento.

EXEMPLO 3

Avaliação do efeito de hialuronana sobre as propriedadesantitumorais de cetuximab (Erbitux) no tratamento de câncerde cólon humano

Para avaliar o efeito de hialuronana sobre a eficáciade doses terapêuticas de cetuximab no tratamento de câncerde cólon em camundongos atimicos como monoterapia ou emcombinação com irinotecan ou sua formulação de hialuronana(HyCAMP). Consideração especifica dos seguintes parâmetrosde eficácia:- Volume do tumor primário

- Metástase de Câncer

- toxicidade do tratamento em relação à

- massa corporal

- massa do órgão

- Sobrevivência

Teste e artigos de controle

Os artigos de teste e dosagens que serão usados noestudo são como se segue:

- Ácido hialurônico (800-900 kD peso molecular modal);dosagem 150 mg/kg ou 26,6 mg/kg

- Cetuximab (Erbitux; ou ERB); dosagem 0,5 mg/kg

- cloridrato de Irinotecan (Camptosar ou CPT-11); dosagem50 mg/kg

- HyERB (150/0,25) contendo 150 mg/kg HA & 0,25 mg/kgcetuximab

- HyERB (150/0,5) contendo 150 mg/kg HA & 0,5 mg/kgcetuximab

HyCAMP(26,6/50) contendo 2 6,6mg/kg HA & 50 mg/kgirinotecan

Linha de células de carcinoma de cõlon humano

A linha de células de carcinoma de cólon humanoLIM1215 foi rotineiramente cultivada como monocamada emfrascos de cultura de 75 cm2 em meio RPMI164 0 suplementadocom 5% v/v soro fetal de bezerro, 10 μg/ml insulina bovina,ImM hidrocortisona e estoque antibacteriano/antimicótico.Para a geração do tumor primário e injeção em camundongos,as células cresceram até 80% de confluência, tripsinizadasem 0,05% tripsina/0,01% w/v EDTA solução, lavadas duasvezes por centrifugação em uma centrífuga de bancadaBeckman TJ-6 a 4 00 gav por 10 minutos, e contadas com o usode um contador Coulter então ressuspensas em meio RPMI164 0media a 2 χ IO8 células/ml. Essa linha de células foiescolhida devido a seu receptor CD44, sua capacidade deresposta a irinotecan apenas ou quando formulada com HA(HyCAMP) comparada com quimioterapia de irinotecan em ummodelo de xenoenxerto e aquela proliferação celular écontrolada por TGFa/EGF-R alça autócrina.

Modelo de Tumor de Camundongo

Camundongos atímicos fêmeas CBA/WEHI são mantidos sobcondições livres de patógeno específicas, com alimentoesterilizado e água disponível à vontade. Cada camundongorecebe uma injeção contendo aproximadamente 1 χ IO7 célulasem 50-100 μΣ,. As células foram injetadas com uma agulha decalibre 26 na primeira protuberância mamaria diretamenteabaixo do primeiro mamilo.

Tratamento com (i) solução salina, (ii) HA, (iii)cetuximab (ERB), (iv) a formulação que compreende HA &cetuximab (HyERB), (v) cetuximab/irinotecan e (vi) HA &cetuximab / HA & irinotecan (HyERB/HyCAMP) iniciouaproximadamente 4-8 semanas depois do volume do tumor estarna faixa de 50-100 mm2. Terapias foram liberadas em IV embolo no dia 1 e 4 por um total de 5-semanas. Aadministração de irinotecan ou HyCAMP foi no dia 1 de umciclo de 7 dias por um total de 5-semanas. Os camundongosforam observados por 120-dias para re-crescimento do tumor.A tabela 4 abaixo fornece os componentes da dosagem e ovolume médio do tumor de cada grupo de tratamento no iníciodo tratamento.

TABELA 4Volume do tumor no início do tratamento

<table>table see original document page 65</column></row><table><table>table see original document page 66</column></row><table>

* 8 animais por grupo de tratamento

Manutenção e abrigo de animais

Camundongos atímicos fêmeas CBA/WEHI, de 6 a 8 semanasde idade, foram mantidos sob condições livres de patógenoespecíficas, com alimento esterilizado e água disponível àvontade. Foi provado experimentalmente que estresse podeser um fator principal na resposta do paciente àquimioterapia portanto, será assegurado que números iguaisde camundongos são colocados em cada gaiola.

Administração de medicamentos e veículos de controle

Os camundongos foram aleatoriamente distribuídos emcada um de seis grupos de tratamento (n=8 por grupo) .Camundongos individuais foram colocados em uma caixa deinjeção e a administração do tratamento foi na veia caudalusando agulha de calibre 26. Para assegurar a precisão decada dosagem administrada, as seringas foram pesadas antese depois da injeção usando uma balança analítica de quatrodecimais.

O esquema de administração para cada grupo é listadona tabela 5 abaixo.TABELA 5

protocolo de administração de tratamento

<table>table see original document page 67</column></row><table><table>table see original document page 68</column></row><table>

Um estoque estéril de cetuximab (Erbitux) foiadquirido como um frasco único contendo 100 mg em umvolume final de 50 mL (2 mg/mL) . Dados pré-clinicos nomodelo de xenoenxerto de GEO demonstram que um regime dedosagem de 0,2 5 a 1 mg/injeção dado a cada 3 dias por umtotal de 5-doses é considerado ótimo no retardo docrescimento do tumor. Regimes alternados de 0,25 mg/injeçãodada duas vezes por semana (dias 1 e 4) por 5 semanas nomesmo modelo de xenoenxerto bem como 0,25-, 0,5-, e 1mg/injeção duas vezes por semana (dias 1 e 4) por 3semanas mostram atividade antitumor comparável. Essasdosagens são portanto, escolhidas como um ponto dereferência para o tratamento nesse estudo em que oscamundongos receberam uma dose de 0,35 mg/injeção.

Uma solução estoque estéril de 20 mg/ml de irinotecane diluída a 4 mg/mL em 0,9% (w/v) injeção livre de pirógenoNaCl e usada para preparar injeções de irinotecanformuladas com HA.

As injeções individuais foram preparadas de acordo commassas individuais do camundongo, com o objetivo de liberar50 mg/kg de irintoecan (equivalente a uma dose terapêuticahumana de 208 mg/m2; MIMS 1999). Lotes únicos de solução de10 mg/mL foram preparados e embalados em frascos de vidroestéreis de uso único de 100 mL e foram submetidos a testespadrão químicos e raicrobiológicos. Hialuronana formuladacom irinotecan [HyCAMP(150/50)] foi preparada por misturade uma porção de 4 mg/ml de estoque de irinotecan com umasolução de hialuronana a uma concentração final de HAequivalente a 15 0 mg/kg de massa de camundongo e 5 0 mg/kgirinotecan. Hialuronana formulada com cetuximab[HyERB(150/0,5)] foi preparada por mistura de uma porção de2 mg/ml de estoque de cetuximab com uma solução de HA a umaconcentração final de HA de 150 mg/kg de massa decamundongo e 0,5 mg/kg cetuximab.

Os tratamentos foram quantitativamente administradosna veia caudal. A seringa da injeção foi pesada antes edepois da injeção e os pesos registrados. A doseadministrada foi calculada com o uso das seguintesfórmulas:

volume injetados (ml) = massa da seringa antes da injeção(g) - massa da seringa depois da injeção (g)

concentração em solução de injeção (mg/ml) = concentraçãode solução de estoque X fator de diluição

Dose administrada (mg/kg) = <formula>formula see original document page 69</formula>

Monitoração da massa corporal, volume do tumor e bem estar do animal

Após o início do tratamento, as observações dosanimais foram feitas diariamente, incluindo o dia do pontofinal experimental e registrados. Os animais foram pesados,os volumes do tumor medidos e o bem estar do animalmonitorado por anotação dos níveis de energia e evidênciade toxicidade do trato GI como diarréia. Perda de peso foimonitorada por cálculo do peso corporal como estimado porsubtração do peso do tumor, que é calculado como Igxvolume do tumor (cm3) . Para demonstração de qualquermudança de peso o peso corporal animal foi normalizado aopeso corporal no tempo do início do tratamento como:

Massa corporal (ex tumor)— Massa corporal no início dotratamento (ex tumor) X 100

Massa corporal no início do tratamento (ex tumor)Morte de animais no ponto final experimental

No ponto final experimental os animais foramanestesiados por uma injeção intraperitoneal de 0,1 ml deNembutal (6 0mg/ml), o sangue foi coletado seguido por mortedos animais com o uso de deslocamento cervical.

Coleta e processamento de tumor e órgãos corporais

Imediatamente após a morte do camundongo o tumor,fígado, coração, baço, bexiga, rins direito e esquerdo,útero, pulmões, estômago, intestinos, cérebro e linfonodossão retirados e pesados e colocados em 10% de tampão deformalina. Os tecidos são fixados por 16-24h antes doprocessamento histológico. 0 tecido fixado é desidratado emetapas a 100% etanol e incrustado em blocos de parafina dosquais seções de 2-4 μπι são colocadas em laminas de vidro demicroscopia. As seções de tecido são coradas com um corantede hematoxilina nuclear e eosina citoplasmática. As seçõesdos órgãos foram examinadas para características que possamindicar toxicidade do tratamento e para a presença decélulas tumorais.

Análise de Dados

Comparação de dados do grupo de tratamento e decontrole foram realizadas pr análise estatística que usaanálise de teste t paramétrica. Com falha de distribuiçãonormal, implementação de análise não paramétrica foirealizada com o uso de:

Soma de Mann-Whitney Rank

Anova de uma via

As análises do dados foram divididas em seis seções:

- Volvime do tumor (os dados da fonte serão as mediçõesregistradas em folhas de observação. Os dados de massatumoral necessários para o valor de hidratação foramobtidos de folhas de autópsia de animal).

- Voliame inicial do tumor (Definido como o volume do tumor(mm3) no dia que o tratamento iniciou (ou seja dia 1)).

- Volume inicial do tumor como uma percentagem de pesocorporal -foi calculado com o uso da seguinte fórmula:

<formula>formula see original document page 71</formula>

- Volume do tumor no Ponto final experimental foi definidocomo o volume do tumor (mm3) no dia da morte. Para animaisque são encontrados mortos o volume do tumor medidos naúltima observação será usado.

- Mudança percentual no Volume do tumor no Ponto finalexperimental - foi calculado com o uso da seguinte fórmula:volume do tumor no ponto final (mm3) - volume inicial dotumor (mm3) X 100

volume inicial do do tumor (mm3)

- % T/C - foi calculado com o uso da seguinte fórmula:% mudança no volume do tumor no ponto final experimental dogrupo de tratamento X 100

% mudança no volume do tumor at ponto final experimental dogrupo de controle

Classificação da progressão do Tumor

Após o fim do estudo, os camundongos de cada grupo detratamento foram classificados em uma de quatro categoriasbaseado na extensão de sua progressão do tumor.

As categorias e critérios para cada foram como sesegue (Maucher & von Angerer, J Câncer Res Clin Oncol. 1208 :502-4, 1994) :

<table>table see original document page 72</column></row><table>

Volume médio do tumor

O volume médio do tumor foi calculado usando aseguinte fórmula:

Soma dos volumes do tumor (mm3) de cada camundongo

Número de camundongosPara cada semana do período de tratamento eorganizados ± SEM como uma função de tempo.Massa do Órgão

Para investigar possível atrofia ou aumento do órgãoinduzido por tratamento, os órgãos foram removidos epesados durante o post mor tem.

Os dados da fonte que incluem o camundongo e massastumorais foram registrados em que qualquer animalencontrado morto não foi incluído na análise de dados.

A massa de cada órgão foi calculada como uma % do pesocorporal na autópsia e comparada às massas de órgão dogrupo de controle com solução salina apenas.Massa.cprporal

Os dados da fonte foram as medições registradas.Qualquer animal encontrado morto não foi incluído naanálise de dados

% de mudança na massa corporal no ponto finalexperimental foi calculado usando a seguinte fórmula:

[massa corporal no ponto final (ex tumor) — massacorporal no início do tratamento (ex tumor)]X 100massa corporal no início do tratamento (ex tumor)

A % médio de mudança na massa corporal no ponto finalexperimental foi calculada usando a seguinte fórmula:

Soma do % de mudança na massa corporal no ponto finalexperimental de cada camundongo

Número de camundongos

Organizado ± SEM como uma função de tempo.

Sobrevivência

O tempo de sobrevivência geral do animal foi calculadocomo o tempo em dias que o animal viveu após o início dotratamento que será designado dia 1.Monoterapia: cetuximab como uma terapia única ou formuladocom hialuronana

Monoterapia: Comparação da eficácia de cetuximab e HyERB:Volume do tumor

O ponto final experimental de cetuximab, 0,25 e 0,5mg/kg formulado com ou sem regime de monoterapia de 150mg/kg de HA ocorreu at 120 dias após o início dotratamento. As Figuras IAeB mostram a mudança percentualno volume do tumor pelo tempo em diferentes doses decetuximab, 0,25 e 0,5 mg/kg, respectivamente.

A resposta do tumor é dose-dependente quando dacomparação do.s dados de cetuximab (0,25) e cetuximab (0,5) .A formulação de cetuximab (0,25) com HA [HyERB(150/0, 25) ]não demonstrou uma diferença significativa na resposta dotumor mas quando do exame das curvas de crescimento dotumor ficou evidente que HyERB(15 0/0,25) resultou em umcrescimento de tumor mais lento. Tumores tratados comERB(0,25) atingiram um aumento de 400% no volume do tumorno dia 58 enquanto animais tratados com HyERB(150/0,25)atingiram um tamanho equivalente do tumor no dia 90 assimresultando em um retardo do crescimento do tumor de 32 dias(35%). Camundongos que recebem cetuximab (0,5) com HAtumores [HyERB(150/0,5)] demonstraram uma resposta aindamaior em que os tumores foram significativamente menoresque o grupo de tratamento de cetuximab (0,5). A terapia comHyERB(150/0,5) causou uma resposta citotóxica (ou seja, umaredução no volume do tumor) sobre tratamento com ERB(0,5)(Figura 1B), uma resposta que não foi previamente observadaem estudos de anticorpo terapêutico. A diferença naresposta do tumor no grupo de tratamento de HyERB(150/0,5)versus ERB(O,5) foi estatisticamente significativa até odia 15.

Esses dados, portanto, demonstram que a formulação deHA com cetuximab pode aumentar a eficácia do anticorpoterapêutico.

Monoterapia

Em estudos pré-clínicos, um perda de peso pode serfreqüentemente um indicador do bem estar animal e daprogressão da doença. Grupos tratados com ERB (0,5) e HyERB(150/0,5) são mostrados na Figura 2. Esses dados indicamque tratamento com HyERB (150/0,5) nos dias 15 e 22 sãoestatisticamente maiores que ERB (0,5) indicando atendência na direção de progressão diminuída da doençaquando o anticorpo foi formulada com HA.

Monoterapia: 0 efeito de cetuximab sobre a sobrevivência

Os dados de sobrevivência de camundongos são mostradosna Figura 3. Para o grupo de HyERB (150/0,5) um camundongofoi morto no dia 9 9 porque o volume do tumor era maior que1.000 mm3. Para o grupo de tratamento de ERB (0,5) umcamundongo foi morto antes do ponto final experimental nodia 53 e um no dia 8 5 porque o volume do tumor era de 1.000mm3. 0 restante dos camundongos foi morto devido àfinalização do regime de tratamento. Sobrevivênciaaumentada devido a uma diminuição na progressão da doençafoi observada para o grupo HyERB.

Terapia de combinação: HyERB (150/0,5)/ HyCAMP (26,6/50) eERB (0,5)/CAMP(50)

Terapia de combinação: comparação da eficácia de terapia decombinação sobre o volume do tumor

As Figuras 4 A e B mostram a percentagem de mudança novolume do tumor para camundongos que recebem a terapia decombinação, HA formulada com cetuximab com HA formulada comirinotecan (HyERB/HyCAMP), e cetuximab formulada comirinotecan (ERB/CPT-11). Figura 4 A mostra a percentagem demudança no volume do tumor para o tratamento até o dia 32(o dia da última injeção) . Figura 4B mostra os dados paraponto final experimental, dia 300.

Camundongos que recebem a terapia de combinaçãoHyERB/HyCAMP apresentam uma significativa resposta tumoralmais precoce quando comparada com os dados de ERB/CAMP(Figura 4 A) . A eficácia amplamente superior da combinaçãoHyERB/HyCAMP pelo período de tempo para ponto finalexperimental, dia 3 00, pode ser vista na Figura 4B em queisso é claramente indicado nas curvas de crescimento dotumor. Animais tratados com cetuximab/irinotecan (ERB/CAMP)Demonstraram um aumento médio no volume do tumor de 6 00%pelo dia 13 5 enquanto animais tratados com HyERB/HyCAMP nãoatingiram esse grau de crescimento do tumor, mesmo no pontofinal experimental de 300 dias.

Classificação da progressão de tumor

Após o final do estudo, os camundongos de cada grupode tratamento foram classificados em uma de quatrocategorias baseado na extensão de sua progressão do tumorcomo estimado a partir dos dados de volume do tumor (Tabela 6) .

No dia dia 92, todos os tumores dos grupos de soluçãosalina e HA foram classificados como estáticos (12,5%) ouem progressão (87,5%).

A comparação entre os grupos de monoterapia,tratamento HyERB com ERB, mostrou que a adição de HA aoanticorpo cetuximab resultou era uma mudança significativana progressão do tumor na direção de remissão parcial ecompleta do dia 92.

A comparação entre grupos de terapia de combinação,HyERB/HyCAMP com ERB/CAMP, mostrou que quando HA erapresente, não houve tumores estáticos ou em progressão;todos estavam em remissão completa ou parcial. Emcontraste, para o tratamento de ERB/CAMP, no dia 120 37,5%dos tumores progrediam.

Esses dados indicam que quando HA está presente em umaformulação, a progressão do tumor é alterada para remissão.Em conclusão, a adição de HA à formulação de terapia decombinação aumenta significativamente a eficácia dotratamento.

Terapia de combinação: Monitoramento da massa corporal eprogressão da doença

Perda de peso reduzida se traduz em um beneficioaumentado para o animal. A mudança percentula na masacorporal na Figura 5 indica uma carga tumoral reduzida paraa combinação HyERB/HyCAMP comparada a ERB/CAMP. Esses dataindicam que a adição de HA à formulação de terapia decombinação diminui a progressão da doença.Terapia de combinação: efeito sobre a sobrevivência

Mais impressionante é a percentagem de animais quesobrevive quando administrados com a formulação deHyERB/HyCAMP quando comparados ao grupo de ERB/CAMP (Figura6). Para o grupo HyERB/HyCAMP, 6 camundongos sobreviveramaté o dia 3 00 com um camundongo sendo humanamente morto nodia 211 e 218 porque o volume do tumor estava acima de1.000 mm3. Para o grupo de ERB/CAMP apenas um camundongosobreviveu até o dia 300. dois camundongos foram mortos nodia 134, um camundongo nos dias 141, 169 e 281 porque ovolume do tumor estava acima de 1.000 mm3. Nos dias 211 e294 os camundongos foram mortos por estresse metabólico (ouseja, perda de peso).

TABELA 6

Classificação da progressão de tumor em grupos detratamento com monoterapia e„ te.raoia de combinação

<table>table see original document page 78</column></row><table>EXEMPLO 5

Avaliação do efeito de hialuronana sobre as propriedadesantitumorais de bevacizumab (Avastin) no tratamento decâncer de cólon humano

Objetivo do estudo

Para avaliar o efeito de hialuronana sobre a eficáciade doses terapêuticas de bevacizumab no tratamento decâncer de cólon em camundongos atímicos como monoterapia ouem combinação com irinotecan e/ou leucovorin e/ou 5-FU.Consideração específica dos seguintes parâmetros deeficácia:

- Volume do tumor primário

- Metástase de Câncer

- toxicidade do tratamento em relação à

- massa corporal

- massa do órgão

- Sobrevivência

Materiais e Métodos

Teste e artigos de controle

Os artigos de teste e dosagens que serão usados noestudo são como se segue:

- Ácido hialurônico (800-900 kD peso molecular modal);dosagem 15 0 mg/kg

- Bevacizumab (Avastin; BEV); dosagem 5,0 mg/kg

- cloridrato de Irinotecan (Camptosar ou CAMP); dosagem 50mg/kg

- Leucovorin ; dosagem 5mg/kg

- 5-Fluoruracil (5-FU); dosagem 100 mg/kg

HyERB (150/0,5); essa formulação compreende oscomponentes como 150 mg/kg HA & 0,5 mg/kg bevacizumabTratamento com (i) solução salina, (ii) HA, (iii) aformulação que compreende HA com bevacizumab (HyBEV) (iv),bevacizumab (BEV), (v) HyBEVand irinotecan/leucovorin/5-FU(IFL) ou (vi) BEV & irinotecan/leucovorin/5-FU (IFL) foiiniciado aproximadamente 4-8 semanas depois do volume dotumor estar na faixa de 50-100 mm2. Terapias foramliberadas por IV em bolo no dia 1 e 4 por um total de 5-semanas. A administração de irinotecan/leucovorin/5-FU(IFL) foi no dia 1 de um diclo de 7 dias por um total de 5semanas. Camundongos foram observada por 12 0 dias para novocrescimento do tumor. A Tabela 7 fornece os componentes dadosagem e o volume médio do tumor de cada grupo detratamento no início do tratamento.

TABELA 7

Volume do tumor no início do tratamento

<table>table see original document page 80</column></row><table>

*8 animais por grupo de tratamento.

# Note após um ciclo de IFL redução da dose dequimioterapia de 5-FU de 100 para 50 mg/kg foi realizadadevido a excessiva perda de peso em ambos braços detratamento. Os quatro ciclos restantes são 50mg/kg 5-FU.

Administração de medicamentos e veículos de controle

Os camundongos foram aleatoriamente distribuídos emseis grupos de tratamento (n=8 por grupo). Camundongosindividuais foram colocados em uma caixa de injeção e aadministração do tratamento foi na veia caudal usandoagulha de calibre 26. Para assegurar a precisão de cadadosagem administrada, as seringas foram pesadas antes edepois da injeção usando uma balança analítica de quatrodecimais.

O esquema de administração para cada grupo é listadona tabela 8.

TABELA 8

Protocolo de administração de tratamento

<table>table see original document page 81</column></row><table>

*n= 8 por grupo

Um estoque estéril de Bevacizumab (Avastin) foiadquirido como um frasco único contendo 100 mg em umvolume final de 4mL (25mg/mL).

As injeções individuais foram preparadas de acordo commassas individuais do camundongo, com o objetivo de liberar50 mg/kg de irintoecan (equivalente a uma dose terapêuticahumana de 208 mg/m2; MIMS 1999). Solução de 10 mg/mL foipreparada a partir de lotes de hialuronana (HA) dissecada eembalada em frascos de vidro estéreis de uso único de 100mL. Hialuronana combinada com Bevacizumab (HyBEV) foipreparada por mistura de uma porção de 2 5 mg/mL de estoquede bevacizumab com uma solução de HA até a concentraçãofinal de HA de 150 mg/kg de massa de camundongo e 0,5 mg/kgde bevacizumab.

Soluções, formulações e administração para tratamentode IFL (ou seja irinotecan e leucovorin e 5 FU) foramadministradas em uma maneira padrão conhecida na técnica.

Os tratamentos foram quantitativamente administradosna veia caudal.

Para todos os outros materiais, métodos e cálculosusados para esse estudo, veja, por exemplo 4.

Esse inclui:

Linha de células de carcinoma de cólon humano

Modelo de Tumor de Camundongo

Manutenção e abrigo de animais

Monitoramento da massa corporal, volume do tumor e bemestar do animal

morte do animais no ponto final experimental

Coleta e processamento do tumor e órgãos do corpo

Análise de dados

Classificação da Progressão do Tumor

Volume médio do tumor

Massa do Órgão

Massa corporal

% de mudança na massa corporal no ponto finalexperimental

% médio de mudança na massa corporal no ponto finalexperimental

Sobrevivência

Resultados e ConclusõesIFL com bevacizumab no modelo de xenoenxerto LIM1215:

Volume do tumor

Figura 7 mostra a percentagem de mudança no volume dotumor para camundongos que recebem a terapia de combinaçãoIFL + BEV e IFL + HyBEV. A inclusão de HyBEV com o regimede IFL resulta em resposta tumoral significativamente maisprecoce (a: p<0,05) quando comparada com o grupo detratamento de IFL + BEV. Esses dados demonstram que aadição de HA ao anticorpo aumenta a eficácia.Classificação da progressão de tumor

No ponto final experimental (134 dias) os tumoresforam classificados em uma de quatro categorias baseado naextensão de sua progressão do tumor como estimado a partirdo volume do tumor data de acordo com Maucher & vonAngerer, 1994 supra. Esses dados estão apresentados na Tabela 9.

TABELA 9

Classificação de tumores nos dias 4, 15, 32, 46, 71,92 e 134 em xenoenxertos de câncer de cólon LIM1215 querecebem IFL + solução salina, IFL +BEV e IFL + HyBEV

<table>table see original document page 83</column></row><table>

*IFL+ solução salina (n=6) ; IFL + BEV (n=8) ; IFL + HyBEV(η=8)

#último dia de tratamento

Os dados mostram que IFL+ solução salina mantém ostumores estáticos até o dia 71, no entanto, no dia 134todos os tumor estão em progressão.

A comparação dos grupos, IFL + BEV com the IFL+ HyBEVno dia 92, mostra que a adição de HA ao tratamento resultouem uma troca na progressão do tumor para a remissão parciale completa. Indicando que HA aumenta a eficácia.

Toxicidade gastrointestinal: Monitoramento da massacorporal

A percentagem de mudança na massa corporal na Figura 8mostra que a diferença entre o grupo de IFL+solução salinaé significativa do dia 25 ao 134 quando comparado aosgrupos de IFL+BEV e IFL+HyBEV. Para o mesmo período noentanto, é observada uma tendência em que o ganho de peso émelhor para os camundongos que recebem IFL + HyBEV quandocomparados com aqueles que recebem IFL + BEV, essasdiferenças não são significativas. As tendências mostramque HyBEV aumenta o bem estar do animal. Esses dados

sugerem que HA tem um efeito sobre o trato gastrointestinalpor redução da toxicidade, uma toxicidade conhecida debevacizumab.

Aqueles habilitados na técnica perceberão que ainvenção aqui descrita é suscetível a variações emodificações além daquelas especificamente descritas. Deve-se compreender que a invenção inclui tais variações emodificações. A invenção também inclui todas as etapas,características, composições e compostos referidos ouindicados nessa especificação, individualmente oucoletivamente e qualquer e todas combinações de quaisquerduas ou mais das referidas etapas ou características.

BIBLIOGRAFIA

Patente Européia No. O 265 116

Patente Européia No. O 138 572

Goodman e Gilman1S The Pharmacological Basis for

Therapeutics (7th ed.) Langer, Science 249:1527, 1990

Maucher & von Angerer, J Câncer Res Clin Oncol. 120(8):502-4, 1994

MIMS annual, 1999

Remington1S Pharmaceutical Sciences, 15a ed. Easton: Mack

Publishing Co.:1405- 1412, 1461-1487, 1975

The National Formulary XIV., 14a ed. Washington: American

Pharmaceutical Association, 1975

<table>table see original document page 85</column></row><table>

Claims

1. Formulação caracterizada por compreenderhialuronana (HA) ou um análogo ou um derivado ou formamodificada quimicamente ou sintetizada ou sal desses em quea hialuronana está na faixa de peso molecular de cerca de-400 kDaltons a 20.000 kDaltons, e um anticorpo terapêutico,ou fragmento, derivado, porção, quimera ou forma totalmentedesimunizada desses e opcionalmente um ou mais, veículos,diluentes e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

2. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,caracterizada pelo fato de que a hialuronana ou análogo ouderivado ou forma sintetizada ou modificada dessa está nafaixa de peso molecular de cerca de 400 kDaltons a 10.000kDaltons.

3. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,caracterizada pelo fato de que a hialuronana ou análogo ouderivado ou forma sintetizada ou modificada dessa está nafaixa de peso molecular de cerca de 400 kDaltons a 2.000kDaltons.

4. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,caracterizada pelo fato de que a hialuronana ou análogo ouderivado ou forma sintetizada ou modificada dessa está nafaixa de peso molecular de cerca de 400 kDaltons a 1.500kDaltons.

5. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,caracterizada pelo fato de que a hialuronana ou análogo ouderivado ou forma sintetizada ou modificada dessa está nafaixa de peso molecular modal de cerca de 860 kDaltons.

6. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4 ou 5, caracterizada pelo fato deque a hialuronana ou análogo ou derivado ou formasintetizada ou modificada dessa e o anticorpo não sãoligados de forma covalente.

7. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,caracterizada pelo fato de que a faixa de pH da composiçãoestá entre pH 2,5 e 10,5.

8. Formulação, de acordo com a reivindicação 1,caracterizada pelo fato de que a faixa de pH da composiçãoestá entre pH 5,0 e 8,5.

9. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizada pelo fatode que o anticorpo, fragmento, derivado, porção, quimera ouforma totalmente desimunizada desses é para uso notratamento ou profilaxia de uma doença proliferativacelular.

10. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizada pelo fatode que o anticorpo, fragmento, derivado ou porção desses éselecionado do grupo de anticorpos que consistem em: ABX-EGF; Alemtuzumab; Apolizumab; Bevacizumab; Cantuzumab;Cetuximab; cG250; cmc- 544; Daclizumab; Epratuzumab;erlotinib; Gemtuzumab ozogamicin; hA20; HCBE-11; Hun901;Ibritumomab tiuxetan; IDEC 159; Infliximab; Lumiliximab;mAb 3F8; mAb b43.13; mAb BC8; mAb CC4 9-deltaCH2; mAbChl4.18; mAb CP-675,206; mAb HeFi-I; mAb Hu3S193; mAb HuGl-Ml95; mAb huHMFGI; mAb J591; mAb MDX-CTLA4; mAb MiK-beta-1;MDX-010; MEDI-507; MLN27 04; Pertuzumab; RAVl2; Rituximab;SGN-30; SGN-4 0; Tositumomab; Trastuzumab (herceptina); TRM--1 (TRAIL Rl Mab); and Yttrium-ibritumomab.

11. Formulação, de acordo com a reivindicação 9,caracterizada pelo fato de que a doença proliferativacelular é qualquer uma dentre câncer, doença neoplásica ouqualquer doença que envolve inflamação de tecido ouliberação de agentes inflamatórios.

12. Formulação, de acordo com a reivindicação 9,caracterizada pelo fato de que a doença proliferativacelular resulta em um ou mais dentre um tumor, neoplasia,hiperproliferação descontrolada ou metástase.

13. Formulação, de acordo com a reivindicação 9,caracterizada pelo fato de que a doença proliferativacelular está presente em um ou mais órgãos ou tecidos queincluem a mama, pulmão, próstata, rim, pele, tecido neural,ovário, útero, fígado, pâncreas, células epiteliais, tecidogástrico, intestino, sistema exócrino, sistema endócrino,sistema linfático, sistema hematopoiético, tecido da cabeçae pescoço.

14. Formulação, de acordo com a reivindicação 9,caracterizada pelo fato de que a doença proliferativacelular ocorre em um mamífero.

15. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizada pelo fatode que o anticorpo é cetuximab.

16. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizada pelo fatode que o anticorpo é bevacizumab.

17. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizada pelo fatode que o anticorpo é humanizado.

18. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 15, 16 ou 17 caracterizada pelo fato de serpara uso no tratamento ou profilaxia de câncer colo-retal.

19. Formulação, de acordo com a reivindicação 14,caracterizada pelo fato de que o mamífero é selecionado dogrupo que consiste em animal primata, bovino, canino,eqüino, felino e suíno.

20. Formulação, de acordo com a reivindicação 19,caracterizada pelo fato de que o primata é um ser humano.

21. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizada pelo fatode que a composição está em forma oral, tópica ouparenteral.

22. Formulação, de acordo com a reivindicação 21,caracterizada pelo fato de que a forma oral é apresentadacomo um comprimido, pílula, cápsula, losango, pastilha, pó,grânulo, emulsão, líquido, suspensão aquosa ou oleosa,medicinal, xarope, elixir ou spray.

23. Formulação, de acordo com a reivindicação 21,caracterizada pelo fato de que a forma tópica éadministrada na forma de um creme, loção, emulsão, gel,filme, spray, pasta ou pomada.

24. Formulação, de acordo com a reivindicação 21,caracterizada pelo fato de que a forma parenteral éadministrada por injeção subcutânea, aerossol, intravenosa,intramuscular, intratecal, intracraniana, técnicas deinjeção ou infusão intrasternal na forma de um líquido,pomada, supositório ou pessário.

25. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24, caracterizadapor estar junto com um segundo agente ou composição usadano tratamento de doença proliferativa celular em que osegundo agente é um agente quimioterápico ou anticorpoterapêutico.

26. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ou 25,caracterizada pelo fato de que a biodisponibilidade doanticorpo, fragmento, derivado ou porção dessa é aumentada.

27. Formulação, de acordo com a reivindicação 25,caracterizada pelo fato de que a HA é administrada antes ousubseqüente à administração do segundo agente.

28. Formulação, de acordo com a reivindicação 25,caracterizada pelo fato de que a HA é administrada antes daadministração do segundo agente.

29. Formulação, de acordo com a reivindicação 25,caracterizada pelo fato de que a HA é administradasubseqüente à administração do segundo agente.

30. Formulação, de acordo com a reivindicação 21,caracterizada pelo fato de que a HA é administrada por via oral.

31. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,-29 ou 30, caracterizada pelo fato de que a HA éadministrada em uma quantidade de cerca de 0,01 a cerca de-40 mg/kg de peso corporal.

32. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,-2 9 ou 30, caracterizada pelo fato de que a HA éadministrada em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de-27 mg/kg de peso corporal.

33. Método para o tratamento ou profilaxia paradoenças celulares em um indivíduo caracterizado porcompreender a administração a um indivíduo em necessidadedesse de um anticorpo terapêutico ou um fragmento,derivado, porção, quimera ou forma totalmente desimunizadadesses e HA ou um análogo, um derivado ou forma sintetizadaou quimicamente modificada ou sal desse em que ahialuronana está na faixa de peso molecular de cerca de 36 0Daltons a 20.000 kDaltons por um tempo e sob condições paraque os sintomas da doença celular sejam melhorados.

34. Método, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que a hialuronana ou um análogo,um derivado ou forma sintetizada ou modificada dessa estána faixa de peso molecular de 360 Dalton a 10.000 kDa.

35. Método, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que a hialuronana ou um análogo,um derivado ou forma sintetizada ou modificada dessa estána faixa de peso molecular de 360 Daltons a 2.000 kDaltons,

36. Método, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que a hialuronana ou um análogo,um derivado ou forma sintetizada ou modificada dessa estána faixa de peso molecular de 20 kDaltons a 1.500 kDaltons.

37. Método, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que a hialuronana ou um análogo,um derivado ou forma sintetizada ou modificada dessa estána faixa de peso molecular modal de cerca de 860 kDaltons.

38. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36 ou 37, caracterizado pelofato de que a hialuronana ou um análogo, um derivado ouforma sintetizada ou modificada dessa e o anticorpo não sãoligados de forma covalente.

39. Método, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que a faixa de pH da composiçãoestá entre pH 2,5 e 10,5.

40. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38 ou 39, caracterizadopelo fato de que o anticorpo, fragmento, derivado ou porçãodessa é selecionado do grupo de anticorpos que consistemem: ABX-EGF; Alemtuzumab; Apolizumab; Bevacizumab;Cantuzumab; Cetuximab; CG250; cmc-544; Daclizumab;Epratuzumab; erlotinib; Gemtuzumab ozogamicin; hA20; HCBE--11; Hun901; Ibritumomab tiuxetan; IDEC 159; Infliximab;Lumi 1 iximab; mAb 3F8; mAb b43.13; mAb BC8; mAb CC49-deltaCH2; mAb Chl4.18; mAb CP-675,206; mAb HeFi-I; mAbHu3S193; mAb HuGl -M195; mAb huHMFGl; mAb J591; mAb MDX-CTLA4; mAb MiK-beta-1; MDX-010; MEDI-507; MLN2704;Pertuzumab; RAVl2; Rituximab; SGN-30; SGN-40; Tositumomab;Trastuzumab (herceptina); TRM-I (TRAIL Rl Mab); e Yttrium-ibritumomab.

41. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 ou 40,caracterizado pelo fato de que a doença proliferativacelular é qualquer uma dentre câncer, doença neoplásica ouqualquer doença que envolve inflamação de tecido ouliberação de agentes inflamatórios.

42. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 ou 41,caracterizado pelo fato de que a doença proliferativacelular resulta em uma ou mais dentre um tumor, neoplasia,hiperproliferação descontrolada ou metástase.

43. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 ou 42,caracterizado pelo fato de que a doença proliferativacelular está presente em um ou mais órgãos ou tecidos queincluem a mama, pulmão, próstata, rim, pele, tecido neural,ovário, útero, fígado, pâncreas, células epiteliais, tecidogástrico, intestino, sistema exócrino, sistema endócrino,sistema linfático, sistema hematopoiético, tecido da cabeçae pescoço.

44. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42 ou-43, caracterizado pelo fato de que a doença proliferativacelular ocorre em um mamífero.

45. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36 ou 37, caracterizado pelofato de que o anticorpo é cetuximab.

46. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36 ou 37, caracterizado pelofato de que o anticorpo é bevacizumab.

47. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43,-44, 45 ou 46, caracterizado por ser para o tratamento ouprofilaxia de câncer colo-retal.

48. Método, de acordo com a reivindicação 44,caracterizado pelo fato de que o mamífero é selecionado dogrupo que consiste em animal primata, bovino, canino,eqüino, felino e suíno.

49. Método, de acordo com a reivindicação 48,caracterizado pelo fato de que o primata é um humano.

50. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42,-43, 44, 45, 46, 47, 48 ou 49, caracterizado pelo fato deque a administração é oral, tópica ou parenteral.

51. Método, de acordo com a reivindicação 50,caracterizado pelo fato de que a forma administrada por viaoral é um comprimido, pílula, cápsula, losango, pastilha,pó, grânulo, emulsão, líquido, suspensão aquosa ou oleosa,medicinal, xarope, elixir ou spray.

52. Método, de acordo com a reivindicação 50,caracterizado pelo fato de que a forma administrada por viatópica é um creme, loção, emulsão, gel, filme, spray, pastaou pomada.

53. Método, de acordo com a reivindicação 50,caracterizado pelo fato de que a administração parenteral épor injeção subcutânea, aerossol, intravenosa,intramuscular, intratecal, intracraniana, técnicas deinjeção ou infusão intrasternal na forma de um líquido,pomada, supositório ou pessário.

54. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43,-44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 ou 53, caracterizadopelo fato de que a hialuronana ou um análogo ou um derivadoou forma sintetizada ou modificada dessa é administradasimultaneamente, seqüencialmente, antes, em combinação,durante ou subseqüente à administração do anticorpo,fragmento, derivado ou porção dessa.

55. Método, de acordo com qualquer uma das-reivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43,-44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 ou 54, caracterizadopelo fato de que um segundo agente ou composição éadministrada quando usado no tratamento de doençaproliferativa celular em que o segundo agente é um agentequimioterápico ou anticorpo terapêutico.

56. Método, de acordo com a reivindicação 55,caracterizado pelo fato de que o segundo agente oucomposição compreende HA formulada com irinotecan oudoxorrubicina ou fluoruracil ou leucovorin ou oxaliplatinaou metotrexate ou gencitabina.

57. Método, de acordo com a reivindicação 56,caracterizado pelo fato de que o segundo agente oucomposição compreende HA formulada com qualquer um dosanticorpos selecionados do grupo que consiste em: ABX-EGF;Alemtuzumab; Apolizumab; Bevacizumab; Cantuzumab;Cetuximab; cG250; cmc-544; Daclizumab; Epratuzumab;erlotinib; Gemtuzumab ozogamicin; hA20; HCBE-Il; Hun901;Ibritumomab tiuxetan; IDEC 159; Infliximab; Lumiliximab;mAb 3F8; mAb b43.13; mAb BC8; mAb CC4 9-deltaCH2; mAbChl4,18; mAb CP-675,206; mAb HeFi-I; mAb Hu3S193; mAb HuGl-Ml95; mAb huHMFGl; mAb J591; mAb MDX-CTLA4; mAb MiK-beta-1;MDX-OlO; MEDI-507; MLN2704; Pertuzumab; RAVl2; Rituximab;SGN-30; SGN-40; Tositumomab; Trastuzumab (herceptina); TRM--1 (TRAIL Rl Mab); e Yttrium-ibritumomab.

58. Método, de acordo com a reivindicação 55,caracterizado pelo fato de que o segundo agente oucomposição compreende irinotecan ou doxorrubicina oufluoruracil ou leucovorin ou oxaliplatina ou metotrexate ougencitabina.

59. Método, de acordo com a reivindicação 55,caracterizado pelo fato de que o segundo agente oucomposição compreende qualquer um dos anticorposselecionados do grupo que consiste em: ABX-EGF;Alemtuzumab; Apolizumab; Bevacizumab; Cantuzumab;Cetuximab; CG250; cmc-544; Daclizumab; Epratuzumab;erlotinib; Gemtuzumab ozogamicin; hA20; HCBE-Il; Hun901;Ibritumomab tiuxetan; IDEC 159; Infliximab; Lumiliximab;mAb 3F8; mAb b43.13; mAb BC8; mAb CC4 9-deltaCH2; mAbChl4.18; mAb CP-675,206; mAb HeFi-I; mAb Hu3S193; mAb HuGl-Ml95; mAb huHMFGl; mAb J591; mAb MDX-CTLA4; mAb MiK-beta-1;MDX-OlO; MEDI-507; MLN2704; Pertuzumab; RAVl2; Rituximab;SGN30; SGN-4 0; Tositumomab; Trastuzumab (herceptina); TRM-I(TRAIL Rl Mab); e Yttrium-ibritumomab.

60. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 55, 56, 57, 58 ou 59, caracterizado pelofato de que o segundo agente ou composição compreende oregime de tratamento FOLFOX (fluoruracil, leucovorin eoxaliplatina), F0LFIRI (que compreende irinotecan,leucovorin e fluoruracil) e IFL (que compreende irinotecan,fluoruracil e leucovorin).

61. Método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43,-44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58,-59 ou 60, caracterizado pelo fato de que abiodisponibilidade do anticorpo, fragmento, derivado ouporção dessa é aumentada.

62. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,-29, 30, 31 ou 32 ou método, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43,-44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58,-59, 60 ou 61, caracterizada por ser substancialmente comoanteriormente definido com referência aos Exemplos.

63. Uso de um anticorpo terapêutico ou um fragmento,derivado, porção, quimera ou forma totalmente desimunizadadesses, em combinação com HA ou seus derivados ou formassintetizadas ou quimicamente modificadas ou sais dessa emque a hialuronana está na faixa de peso molecular de cercade 360 Daltons a 20.000 kDaltons caracterizado por ser namanufatura de um medicamento para o tratamento ouprofilaxia de doença celular.

64. Formulação de qualquer uma das reivindicações de-1 a 6, caracterizada pelo fato de que o anticorpo éherceptin.

65. Formulação, de acordo com a reivindicação 25,caracterizada pelo fato de que o segundo agente oucomposição é irinotecan ou doxorrubicina ou fluoruracil ouleucovorin ou oxaliplatina ou metotrexate ou gencitabina.

66. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24, caracterizadapor estar junto com uma segunda composição usada notratamento de doença proliferativa celular em que a segundacomposição compreende HA ou um derivado ou formasintetizada ou quimicamente modificada ou sal dessa eagente quimioterápico ou anticorpo terapêutico.

67. Formulação, de acordo com a reivindicação 66,caracterizada pelo fato de que a formulação compreendecetuximab e a segunda composição compreende irinotecan.

68. Formulação, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 OU 25,caracterizada pelo fato de que a HA é administrada antes doanticorpo.

69. Método de tratamento de doenças caracterizado porcompreender a formulação que compreende HA e um anticorpoem que a HA é administrada antes do anticorpo.