BRPI0615668A2

BRPI0615668A2 - composto, composição farmacêutica, uso de um composto, e, sal farmaceuticamente aceitável

Info

Publication number: BRPI0615668A2
Application number: BRPI0615668-1A
Authority: BR
Inventors: Mui Cheung; Kyle Allen Emmitte; James Michael Salovich
Original assignee: Smithkline Beecham Corp
Priority date: 2005-09-06
Filing date: 2006-08-28
Publication date: 2011-05-24
Also published as: AU2006287766B2; PL1937671T3; AU2006287766A1; PE20070518A1; ATE452132T1; AR055616A1; CA2621879A1; KR20080047585A; WO2007030361A2; EA200800546A1; DE602006011192D1; US7786127B2; TW200800967A; DK1937671T3; US20070270437A1; HRP20100122T1; JP5002597B2; JP2009508816A; EP1937671A2; EA014111B1

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIçãO FARMACêUTICA, USO DE UM COMPOSTO, E, SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITáVEL A presente invenção provê compostos benzimidazol tiofeno, composições farmacêuticas contendo os mesmos, processos para preparar os mesmos e seus usos como agentes farmacêuticos.

Description

"COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DE UMCOMPOSTO, E, SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL"ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a novos compostosbenzimidazol tiofeno, formulações farmacêuticas compreendendo estescompostos, e ao uso destes compostos em terapia.

As quinases de tipo Polo ("PLK") são serina/treoninaquinases evolucionariamente conservadas que desempenham papéiscríticos nos processos de regulação no ciclo celular. PLK desempenha umpapel na entrada dentro e na saída da mitose em diversos organismosdesde células de levedura a de mamíferos. PLK inclui PLKl, PLK2,PLK3, e PLK4.

A super-expressão de PLKl parece ser fortementeassociada com células neoplásicas (incluindo cânceres). Um estudopublicado mostrou níveis elevados de expressão de RNA PLKl em > 80%de tumores de pulmão e mama, com pouca a nenhuma expressão emtecido normal adjacente. Vários estudos demonstraram correlações entreexpressão de PLK, tipo histológico, e prognose em vários tipos de câncer.As correlações significantes foram encontradas entre porcentagens decélulas positivas para PLK e tipo histológico de câncer ovariano eendometrial (P < 0,001). Estes estudos notaram que PLK é fortementeexpressado em células invasoras de carcinoma endometrial e que istopoderia refletir o grau de malignidade e proliferação em carcinomaendometrial. Usando análise RT-PCR, a super-expressão de PLK foidetectada em 97% de carcinomas esofageanos e 73% de carcinomasgástricos, como comparado com os tecidos normais correspondentes.Além disso, pacientes com níveis elevados de super-expressão de PLK emcarcinoma esofageano representaram um grupo de prognosesignificantemente mais fraco do que os com níveis baixos de super-expressãode PLK. Em cânceres de cabeça e pescoço, expressão de mRNA elevada dePLKl foi observada na maior parte dos tumores; uma análise de Kaplan-Méier mostrou que os pacientes com níveis moderados de expressão de PLKlsobreviveram mais tempo do que os com níveis elevados de expressão dePLKl. A análise dos pacientes com carcinoma de pulmão de célula nãopequena mostraram resultados similares relacionados com a expressão dePLKl.

Publicação PCT WO 2004/014899 para SmithKline Beechamdescreve novos compostos benzimidazol tiofeno de fórmula (I)

<formula>formula see original document page 3</formula>

em que:

R1 é selecionado dentre o grupo consistindo de H, alquila,alquenila,

alquinila, -C(O)R7, -CO2R7, -C(O)NR7R8, -C(O)N(R7)OR8, -C(O)N(R7)-R2-OR8, -C(O)N(R7)-Ph, -C(O)N(R7)-R2-Ph, -C(O)N(R7)C(O)R8,-C(O)N(R7)CO2R8, -C(O)N(R7)C(O)NR7R8, -C(O)N(R7)S(O)2R8, -R2-OR7, -R2-O-C(O)R7, -C(S)R7, -C(S)NR7R8, -C(S)N(R7)-Ph, -C(S)N(R7)-R2-Ph, -R2-SR7, -C(=NR7)NR7R8, -C(=NR7)N(R8)-Ph, -C(=NR7)N(R8)-R2-Ph, -R2-NR7R8, -CN, -OR7, -S(O)fR7, -S(O)2NR7R8, -S(O)2N(R7)-Ph, -S(O)2N(R7)-R2-Ph, -NR7R8, N(R7)-Ph, -N(R7)-R2-Ph, -N(R7)-SO2R8 e Het;

Ph é fenila opcionalmente substituída de 1 a 3 vezes com umsubstituinte selecionado dentre o grupo consistindo de halo,alquila, -OH, -R2-OH, -O-alquila, -R2-0-alquila, -NH2, -N(H)alquila, -N(alquil)2, -CN e -N3;

Het é um heterociclo de 5 a 7 membros tendo 1, 2, 3 ou 4heteroátomos selecionados dentre Ν, O e S, ou uma heteroarilade 5 a 6 membros tendo 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos selecionados dentre Ν, O eS, cada opcionalmente substituída de 1 a 2 vezes com um substituinteselecionado dentre o grupo consistindo de halo, alquila, oxo, -OH5 -R2-OH5 -O-alquila, -R2-Oalquila, -NH2, -N(H)alquila, -N(alquil)2, -CN e -N3;

Q1 é um grupo de fórmula: -(R2)a-(Y1)b-(R2)c-R3a, b e c são iguais ou diferentes e cada são independentemente 0 ou

1 e pelo menos um dentre a ou b é 1;η é O, 1, 2, 3 ou 4;

Q2 é um grupo de fórmula: -(R2)aa-(Y2)bb-(R2)cc-R4

ou dois grupos Q2 adjacentes são selecionados dentre o grupo

consistindo de alquila, alquenila, -OR7, -S(0)fR7 e -NR7R8 ejuntos com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, eles formam umC5-6cicloalquila, C5_6CÍcloalquenila, fenila, heterociclo de 5 a 7 membros tendo1 ou 2 heteroátomos selecionados dentre Ν, O e S, ou heteroarila de 5 a 6membros tendo 1 ou 2 heteroátomos selecionados dentre Ν, O e S;

aa, bb e cc são iguais ou diferentes e cada éindependentemente O ou 1;

cada Y1 e Y2 é igual ou diferente e é independentementeselecionado dentre o grupo consistindo de -O-, -S(0)r, -N(R7)-, -C(O)-, -OC(O)-, -CO2-, -C(O)N(Rt)-, -C(O)N(R7)S(O)2-, -OC(O)N(Rt)-, -OS(O)2-, -S(O)2N(Rt)-, -S(O)2N(R7)C(O)-, -N(R7)S(O)2-, -N(R7)C(O)-, -N(R7)CO2- e -N(R7)C(O)N(Rt)-;

cada R2 é igual ou diferente e é independentementeselecionado

dentre o grupo consistindo de alquileno, alquenileno ealquinileno;

cada R3 e R4 é igual ou diferente sendo, cada,independentemente

selecionado dentre o grupo consistindo de H, halo, alquila,alquenila, alquinila, -C(O)R75 -C(O)NR7R8, -CO2R7, -C(S)R7, -C(S)NR7R8, -C(=NR7)R8, -C(^NR7)NR7R8, -CR7=N-OR7, -OR7, -S(O)fR7, -S(O)2NR7R8, -NR7R8, -N(R7)C(O)R8, -N(R7)S(O)2R8, -NO2, -CN, -N3 e um grupo defórmula (ii):

<formula>formula see original document page 5</formula>

em que:

O anel A é selecionado dentre o grupo consistindo de C5.10cicloalquila, Cs-iociciloalquenila, arila, heterociclo de 5 a 10membros tendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados dentre N, O e S eheteroarila de 5 a 10 membros tendo 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionadosdentre N, OeS

cada d é O ou 1;eéO, 1,2, 3 ou 4;

cada R6 é igual ou diferente e é independentementeselecionado

dentre o grupo consistindo de H, halo, alquila, alquenila,alquinila, cicloalquila, cicloalquenila, Ph, Het, -CH(OH)-R -OH, -C(O)R , -CO2R7, -CO2-R2-Ph, -CO2-R2-Het, -C(O)NR7R8, -C(O)N(R7)C(O)R7, -C(O)N(R7)CO2R7, -C(O)N(R7)C(O)NR7R8, -C(O)N(R7)S(O)2R7, -C(S)R7, -C(S)NR7R8, -C(=NR7)R8, -C(=NR7)NR7R8, -CR7=N-OR8, =O, -OR7, -OC(O)R7, -OC(O)Ph, -OC(O)Het, -OC(O)NR7R8, -O-R2-S(O)2R7, -S(O)fR7, -S(O)2NR7R85 -S(O)2Ph, -S(O)2Het, -NR7R8, -N(R7)C(O)R8, -N(R7)CO2R8, -N(R7)-R2-CO2R8, -N(R7)C(O)NR7R8, -N(R7)-R2-C(O)NR7R8, -N(R7)C(O)Ph,-N(R7)C(O)Het, -N(R7)Ph, -N(R7)Het, -N(R7)C(O)NR7-R2-NR7R8, -N(R7)C(O)N(R7)Ph, -N(R7)C(O)N(R7)Het, -N(R7)C(O)N(R7)-R2-Het, -N(R7)S(O)2R8, -N(R7)-R2-S(O)2R85 -NO2, -CN e -N3;

em que quando Q1 é definido onde b é 1 e c é O, R3 não é halo,-C(O)R75 -C(O)NR7R85 -CO2R75 -C(S)R75 -C(S)NR7R8, -C(=NR7)R8,

-C(=NR7)NR7R85 -CR7=N-OR75 -OR7, -S(O)fR75 -S(O)2NR7R8,-NR7R8,

-N(R7)C(O)R85 -N(R7)S(O)2R8, -NO2, -CN ou-N3;

em que quando Q2 é definido onde bb é 1 e cc é 0,R4 nao e

halo, -C(O)R75 -C(O)NR7R8, -CO2R7, -C(S)R7, -C(S)NR7R8, -C(=NR7)R8,

-C(=NR7)NR7R8, -CR7=N-OR7, -OR7, -S(O)fR7, -S(O)2NR7R8,

-N(R7)C(O)R85 -N(R7)S(O)2R8, -NO2, -CN ou-N3;-NR7R8,

-N(R7)C(O)R85 -N(R7)S(O)2R8, -NO2, -CN ou-N3;

R5 é selecionado dentre o grupo consistindo de H, halo,alquila,

cicloalquila, OR7, -S(O)fR75-NR7R8, -NHC(O)R7, -NHC(O)NR7R8 e -NHS(O)2R7;

f é 0, 1 ou 2; e

cada R7 e cada R8 são iguais ou diferentes e são cada

independentemente selecionados dentre o grupo consistindo deH, alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila e cicloalquenila;

em que quando R1 é -CO2CH3 e n é 0, Q1 não é -OH;

ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou derivadofisiologicamente funcional dos mesmos.

Também são descritas as composições farmacêuticas contendoestes compostos, processos para sua preparação e métodos para tratamento decondições mediadas por PLK usando estes compostos.

BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO

De acordo com um primeiro aspecto da invenção, provê-se umcomposto selecionado dentre:<formula>formula see original document page 7</formula>

em que * indica carbono quiral;

e sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos.

Em outro aspecto, provê-se um composto enantiomericamenteenriquecido selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G, e H em que aestereoquímica do carbono quiral é R.

Em um terceiro aspecto da invenção, provê-se umacomposição farmacêutica compreendendo um composto selecionado dentreA, B, C, D, E, F, G e H e sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dosmesmos. Em uma forma de realização, a composição farmacêutica aindacompreende um veículo farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente.

Em um quarto aspecto da invenção, provê-se um método paratratar uma condição mediada por PLK em um mamífero em necessidade domesmo. O método compreende a administração ao mamífero de umaquantidade terapeuticamente efetiva de um composto selecionado dentre A,B, C, D, E, F, G e H e sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dosmesmos.

Em um quinto aspecto da invenção, provê-se um método paratratar um neoplasma suscetível em um mamífero em necessidade do mesmos.O método compreende a administração ao mamífero de uma quantidadeterapeuticamente efetiva de um composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F,GeHe sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos. Oneoplasma suscetível pode ser selecionado dentre o grupo consistindo decâncer de mama, câncer de cólon, câncer de pulmão, incluindo câncer depulmão de célula pequena e câncer de pulmão de célula não pequena, câncerde próstata, câncer endometrial, câncer gástrico, melanoma, câncer de ovário,câncer pancreático, carcinoma de célula escamosa, carcinoma da cabeça epescoço, carcinoma do esôfago, carcinoma hepatocelular, e malignidadeshematológicas, como leucemias agudas e linfomas agressivos.

Em um sexto aspecto da invenção, provê-se um método paratratar um câncer de mama em um mamífero em necessidade do mesmo. Ométodo compreende a administração ao mamífero de uma quantidadeterapeuticamente efetiva de um composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F,GeHe sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos.

Em um sétimo aspecto da invenção, provê-se um método paratratar câncer de ovário em um mamífero em necessidade do mesmo. Ométodo compreende a administração ao mamífero de uma quantidadeterapeuticamente efetiva de um composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F,GeHe sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos.

Em um oitavo aspecto da invenção, provê-se um método paratratar câncer de pulmão de célula não pequena em um mamífero emnecessidade do mesmo. O método compreende a administração ao mamíferode uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto selecionadodentre A, B, C, D, E, F, G e H e sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatosdos mesmos.

Em um nono aspecto da invenção, provê-se um método paratratar câncer de próstata em um mamífero em necessidade do mesmo. Ométodo compreende a administração ao mamífero de uma quantidadeterapeuticamente efetiva de um composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F,GeHe sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos.

Em um décimo aspecto da invenção, provê-se um método paratratar uma malignidade hematológica em um mamífero em necessidade domesmo. O método compreende a administração ao mamífero de umaquantidade terapeuticamente efetiva de um composto selecionado dentre A,B, C, D, E, F, G e H e sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dosmesmos.

Em outro aspecto da invenção, provê-se um método para trataruma condição caracterizada por proliferação celular inapropriada. O métodocompreende contatar a célula com uma quantidade terapeuticamente efetivade um composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos.

Em outro aspecto, a presente invenção provê um método parainibir proliferação de uma célula. O método compreende contatar a célulacom uma quantidade de um composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, Ge H e sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos.

Em outro aspecto, a presente invenção provê um método parainibir mitose em uma célula. O método compreende a administração na célulade uma quantidade de um composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G eH e sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos.

Em outro aspecto, a presente invenção provê um compostoselecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e sais farmaceuticamenteaceitáveis ou solvatos dos mesmos para uso em terapia.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê umcomposto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para usar notratamento de uma condição mediada por PLK em um mamífero emnecessidade do mesmo.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê umcomposto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para uso no tratamentode um neoplasma suscetível em um mamífero.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê umcomposto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para uso no tratamentode câncer de mama, câncer de ovário, câncer de pulmão de célula nãopequena, câncer de próstata, ou uma malignidade hematológica em ummamífero.

Em outro aspecto, a presente invenção provê um compostoselecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e sais farmaceuticamenteaceitáveis ou solvatos dos mesmos para usar no tratamento de uma condiçãocaracterizada por proliferação celular inapropriada.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê umcomposto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para uso em inibir aproliferação de uma célula.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê umcomposto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para uso na inibição demitose em uma célula.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê o uso deum composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para a preparação deum medicamento para o tratamento de condição mediada por PLK em ummamífero.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê o uso deum composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para a preparação deum medicamento para o tratamento de um neoplasma suscetível em ummamífero.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê o uso deum composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para a preparação deum medicamento para o tratamento de um câncer de mama, câncer de ovário,câncer de pulmão de célula não pequena, câncer de próstata, ou umamalignidade hematológica em um mamífero.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê o uso deum composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para a preparação deum medicamento para o tratamento de uma condição caracterizada porproliferação celular inapropriada em um mamífero.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê o uso deum composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para a preparação deum medicamento para inibir a proliferação de uma célula.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê o uso deum composto selecionado dentre A, B, C, D, E, F, G e H e saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dos mesmos para a preparação deum medicamento para inibir mitose em uma célula.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção provê umacomposição farmacêutica compreendendo um composto selecionado dentreA, B, C, D, E, F, G e H e sais farmaceuticamente aceitáveis ou solvatos dosmesmos para usar no tratamento de um neoplasma suscetível, como câncer demama, câncer de ovário, câncer de pulmão de célula não pequena, câncer depróstata, e malignidades hematológicas, em um mamífero.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Como usado aqui, "composto (s) da invenção" ou "composto(s) selecionado (s) dentre A, B, C, D, E, F, G e H" significa(m) composto (s)selecionado(s) dentre A, B, C, D, E, F, G e H, ou composto (s)enantiomericamente enriquecido(s) selecionado(s) dentre A, B, C, D, E, F, Ge H, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato dos mesmos.

Como usado aqui, "composto (s) selecionado (s) dentre A-1,B-1, C-1, D-1, E-1, F-1, G-I e H-1" significa composto (s) selecionado (s)dentre A-1, B-1, C-1, D-1, E-1, F-1, G-I e H-I ou um sal farmaceuticamenteaceitável ou solvato dos mesmos.

Como usado aqui, o termo "opcionalmente" significa que oevento (s) subseqüentemente descrito pode ou não pode ocorrer, e inclui tantoevento (s) que ocorrem como eventos que não ocorrem.

Os compostos da invenção existem nas formasestereoisoméricas (por exemplo, eles contêm um ou mais átomos de carbonoquirais ou assimétricos). O termo "quiral" refere-se a uma molécula que nãopode ser superposta em sua imagem no espelho. O termo "aquiral" refere-se auma molécula que pode ser superposta na sua imagem no espelho.

O termo "estereoisômeros" refere-se aos compostos que temuma constituição química comum, mas diferem na disposição dos átomos ougrupo no espaço. Os estereoisômeros podem ser os isômeros ópticos ou osisômeros geométricos. Os isômeros ópticos incluem ambos enantiômeros ediastereômeros. Um "enantiômero" é um de um par de isômeros ópticoscontendo um átomo de carbono quiral cuja configuração molecular temformas (quirais) à esquerda e à direita. Isto é, "enantiômero" refere-se a cadaum dentre um par de isômeros ópticos de um composto que não são imagensde espelho que podem ser superpostas uma na outra. Um "diastereômero" éum dentre um par de isômeros ópticos de um composto com dois ou maiscentros de dissimetria e cujas moléculas não são imagens de espelho uma daoutra. A nomenclatura de um centro quiral é governada pelo sistema (R)-(S).Se um composto particular é designado como o enantiômero "R" ou "S" deacordo com o sistema depende da natureza dos átomos ou grupos que sãoligados no carbono quiral.

Os enantiômeros diferem em seu comportamento para a luzpolarizada no plano, isto é, sua atividade óptica. Um enantiômero que gira luzpolarizada no plano em uma direção sentido horário, é dito comodextrorotatório, e é designado pelo símbolo "d" ou "(+)" para rotaçãopositiva. Um enantiômero que gira luz polarizada no plano pela direção nosentido anti-horário é dito como sendo levorotatório e é designado pelosímbolo "1" ou "(-)" para rotação negativa. Não há correlação entre aconfiguração de enantiômeros e a direção em que eles giram a luz polarizadano plano. Também não existe uma correlação necessária entre a designação(R) e (S) e a direção de rotação da luz polarizada no plano. A atividade óptica,ou direção de rotação de luz polarizada no plano, de um enantiômero de umcomposto da invenção pode ser determinada usando técnicas convencionais.

Os termos "racemato" e "mistura racêmica" como usados aquireferem-se a uma mistura dos isômeros (R) e (S) ópticos (por exemplo,enantiômeros) de um composto em uma proporção igual, isto é, 50:50.

O termo "enantiomericamente enriquecido" como usado aquirefere-se às preparações compreendendo uma mistura de isômeros ópticos emque a quantidade de um enantiômero é maior do que a quantidade do outro.Assim, "enantiomericamente enriquecido" refere-se às misturas de isômerosópticos em que a relação de enantiômero é maior que 50:50. Um compostoenantiomericamente enriquecido compreende mais do que 50% em peso deum enantiômero relativo ao outro. Por exemplo, 5-{6-[(metilsulfonil) metil] -l//-benzimidazol-1 -il} -3 -( { (1 i?)-1 -[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxamida enantiomericamente enriquecido refere-se a umacomposição compreendendo mais do que 50% em peso do (R)-enantiômerorelativo ao (S)-enantiômero do composto. Em uma forma de realização, umcomposto enantiomericamente enriquecido compreende pelo menos 75% empeso de um enantiômero relativo ao outro. Em outra forma de realização, umcomposto enantiomericamente enriquecido compreende pelo menos 80% empeso de um enantiômero relativo ao outro. Em uma forma de realizaçãoparticular, um composto enantiomericamente enriquecido compreende pelomenos 85% em peso de um enantiômero relativo ao outro.

O termo "enantiomericamente puro" como usado aqui refere-se aos compostos enantiomericamente enriquecidos compreendendo pelomenos 90% em peso de um enantiômero relativo ao outro. Em uma forma derealização, um composto enantiomericamente puro compreende pelo menos95% em peso de um enantiômero relativo ao outro. Em uma forma derealização particular, um composto enantiomericamente puro compreendepelo menos 99% em peso de um enantiômero relativo ao outro.

A presente invenção provê os compostos selecionados dentre:em que * indica carbono quiral;

e sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos dos mesmos.Em uma forma de realização particular, os compostos A, B, C,D, E, F, G e H são enantiomericamente enriquecidos, em que aestereoquímica do carbono quiral é R. Em outra forma de realização oscompostos A, B, C, D, E, F, G e H são enantiomericamente puros, em que aestereoquímica do carbono quiral é R.Assim, em uma forma de realização preferida, a presenteinvenção provê compostos enantiomericamente enriquecidos eenantiomericamente puros selecionados dentre:

<formula>formula see original document page 16</formula>

5-{6-[(Metilsulfonil) metil] -l#-benzimidazol-l-il}-3-({(li?)-l-[2-(trifluorometil) fenil] -etil} óxi) -2-tiofenocarboxamida;

<formula>formula see original document page 16</formula>

3 - {[(1 i?)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(metilsulfonil) metil]-1 //-benzimidazol-1 -il} -2-tiofenocarboxamida;

<formula>formula see original document page 16</formula>

5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il) metil] -lH-benzimidazol-l-il}-3-{(li?)-1 -[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxamida;

<formula>formula see original document page 16</formula>

3- {[(li?)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(4-metilpiperazin-l-il) metil] - !//-benzimidazol-1-il} tiofeno-2-carboxamida;<formula>formula see original document page 17</formula>

5-[6-(4-Piperidinilóxi) -li/-benzimidazol-l-il]-3-({(li?)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxamida;

<formula>formula see original document page 17</formula>

3- {[(17?)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[6-(4-piperidinilóxi) -l/Z-benzimidazol-1 -il]-2-tiofenocarboxamida;

<formula>formula see original document page 17</formula>

5 - { 6- [(1 -Metil-4-piperidinil) óxi] -1 /f-benzimidazol-1 -il} -3 -({(1R)-1 -[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxamida; e

<formula>formula see original document page 17</formula>

3-{[(l£)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(l-metil-4-piperidinil) óxi]- li/-benzimidazol-1 -il} -2-tiofenocarboxamida;

e sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos dos mesmos.

Será notado pelo versado na técnica que os compostos dapresente invenção podem ser usados na forma de um sal farmaceuticamenteaceitável ou solvato dos mesmos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis doscompostos da presente invenção (ou as formas enantiomericamenteenriquecidas ou puras dos mesmos) incluem sais convencionais formados deácidos orgânico e inorgânico farmaceuticamente aceitáveis ou bases assimcomo sais de amônio quaternário. Exemplos mais específicos de sais de ácidoapropriado incluem clorídrico, bromídrico, sulfurico, fosfórico, nítrico,perclórico, fumárico, acético, propiônico, succínico, glicólico, fórmico,láctico, maleico, tartárico, cítrico, palmóico, malônico, hidroximaleico,fenilacético, glutâmico, benzóico, salicílico, fumárico, toluenossulfônico,metanossulfônico (mesilato), naftaleno-2-sulfônico, benzenossulfônicohidroxinaftóico, iodídrico, málico, esteróico, tânico e outros. Outros ácidoscomo oxálico, apesar de não serem sozinhos farmaceuticamente aceitáveis,podem ser utilizáveis na preparação de sais utilizáveis como intermediários naobtenção dos compostos da invenção e seus sais farmaceuticamenteaceitáveis. Exemplos específicos de sais básicos apropriados incluem sais desódio, lítio, potássio, magnésio, alumínio, cálcio, zinco, N,N'-dibenziletilenodiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina,N-metilglucamina e procaína.

O termo "solvato" como usado aqui refere-se a um complexode estequiometria variável formado por um soluto (um composto da invençãoou uma forma enantiomericamente enriquecida ou pura dos mesmos) e umsolvente. Solventes, a título de exemplo, incluem água, metanol, etanol, ouácido acético.

Processos para preparar sais farmaceuticamente aceitáveis esolvatos dos compostos da invenção são convencionais na técnica. Ver, porexemplo, Burger's Medicinal Chemistry And Drug Discovery quinta edição,vol 1: Principies And Practice.

Como será evidente para o versado na técnica, nos processosdescritos abaixo para a preparação dos compostos da invenção, determinadosintermediários, podem alternativamente estar na forma de saisfarmaceuticamente aceitáveis ou solvatos do composto. Os termos comoaplicados a qualquer intermediário empregado no processo de preparação doscompostos da invenção tem o mesmo significado como notado acima comrelação aos compostos da invenção. Processos para preparar os saisfarmaceuticamente aceitáveis e solvatos de tais intermediários são conhecidosna técnica e são análogos ao processo para preparação dos saisfarmaceuticamente aceitáveis e solvatos dos compostos da invenção.

Os compostos da presente invenção são tipicamente inibidoresde PLK. Por inibição de PLK, entende-se um composto que exibe pIC50 maiorque 6 no teste de inibição de PLK descrito abaixo nos exemplos ou um IC5omenor que 10 μΜ no teste de azul de metileno ou de inibição de crescimentoCell-Titre Glo descrito abaixo nos exemplos; mais particularmente uminibidor de PLK é um composto que exibe um pIC5o maior que 7 ou um IC5omenor que 1 μΜ usando métodos descritos nos exemplos abaixo.

A presente invenção ainda provê compostos da invenção parauso em terapia medicinal em um animal, por exemplo mamífero tal como umhumano. Em particular, a presente invenção provê compostos para uso notratamento da condição mediada por PLK. A presente invenção também provêcompostos para uso no tratamento de um neoplasma suscetível. O termo"neoplasma suscetível" é definido abaixo. Em particular, a presente invençãoprovê compostos para uso no tratamento de uma variedade de tumores sólidosincluindo, mas não limitado a, câncer de mama, câncer de ovário, câncer depulmão de célula não pequena, câncer de próstata, e malignidadeshematológicas incluindo, mas não limitadas a leucemias agudas (mielóide elinfóide) e linfomas agressivos.

A presente invenção provê compostos para uso no tratamentoda condição caracterizada pela proliferação celular inapropriada. A presenteinvenção também provê compostos para uso na inibição da proliferação deuma célula. A presente invenção também provê compostos para uso nainibição da mitose em uma célula.A presente invenção provê métodos para o tratamento devárias condições ou doenças, todas que compreendem uma etapa deadministração de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um compostoda invenção. Como usado aqui, o termo "tratamento" refere-se ao alívio dacondição especificada, eliminando ou reduzindo os sintomas da condição,diminuindo a velocidade ou eliminando a progressão da condição eprevenindo ou retardando a recorrência da condição em um indivíduopreviamente afligido.

Como usado aqui, o termo "quantidade farmaceuticamenteefetiva" significa uma quantidade de um composto da invenção que ésuficiente, no indivíduo ao qual é administrado, para elicitar um respostabiológica ou medicinal de uma cultura celular, tecido, sistema, animal(incluindo humano), que está sendo procurada por exemplo, por umpesquisador ou clínico. Por exemplo, uma quantidade farmaceuticamenteefetiva de um composto da invenção para o tratamento da condição mediadapor PLK é uma quantidade suficiente para tratar a condição mediada por PLKno indivíduo. Similarmente, uma quantidade terapeuticamente efetiva de umcomposto da invenção para o tratamento de um neoplasma suscetível é umaquantidade suficiente para tratar o neoplasma suscetível no indivíduo.Em umaforma de realização da presente invenção, um quantidade terapeuticamenteefetiva do composto da invenção é uma quantidade suficiente para inibir amitose celular. Em uma forma de realização da presente invenção, umaquantidade terapeuticamente efetiva do composto da invenção é umaquantidade suficiente para regular, modular, ligar ou inibir PLK.

A quantidade terapeuticamente efetiva precisa do composto dainvenção irá depender de vários fatores incluindo, mas não limitados a idade eo peso do indivíduo sendo tratado, o distúrbio exato requerendo tratamento esua severidade, a natureza da formulação, e a via de administração, e, emúltima análise, ficará à critério do clínico atendente ou veterinário.Tipicamente, um composto da invenção será dado para tratamento na taxa de0,1 a 200 mg/kg peso corporal do recipiente (animal) por dia ou por dose oupor ciclo de tratamento e mais geralmente na taxa de 1 a 100 mg/kg pesocorporal por dia ou por dose ou por ciclo de tratamento.

Dosagens aceitáveis, podem ser de cerca de 0,1 a cerca de2000 mg por dia, dose, ou ciclo de tratamento, e preferivelmente de cerca de0,1 a cerca de 500 mg por dia, dose, ou ciclo de tratamento.

Como um aspecto, a presente invenção provê métodos deregulação, modulação, ligação, ou inibição de PLK para o tratamento decondições mediadas por PLK, particularmente PLKl. "Regulando,modulando, ligando ou inibindo PLK" refere-se à atividade de regulação,modulação, ligação ou inibição de PLK , particularmente PLK1, bem como asuper-expressão da regulação, modulação, ligação ou inibição de PLK,particularmente PLKl. Tais condições incluem determinados neoplasmas(incluindo cânceres e tumores) que foram associados com PLK,particularmente PLKl, e condições caracterizadas pela proliferação celularinapropriada.

A presente invenção provê um método para tratamento de umacondição mediada por PLK, particularmente PLK1, que inclui administrar aoanimal uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto da invenção.Este método e outros métodos da presente invenção são úteis para otratamento de um animal tal como um mamífero e em particular humanos.Condições que são mediadas por PLK e são conhecidas na técnica e incluem,mas não limitadas a, neoplasmas e condições caracterizadas por proliferaçãocelular inapropriada.

A presente invenção também provê um método paratratamento de um neoplasma suscetível (câncer ou tumor) em uma animal talcomo um mamífero (por exemplo, um humano) em necessidade do mesmo,cujo método compreende administrar a um animal uma quantidadeterapeuticamente efetiva do composto da invenção. "Neoplasma suscetível"como usado aqui refere-se aos neoplasmas que são susceptíveis ao tratamentocom um inibidor de PLK. Neoplasmas que foram associados com PLK e sãopor esta razão suscetíveis ao tratamento com um inibidor de PLK sãoconhecidos na técnica, e incluem tumores, tanto primários como metásticos ecânceres. Por exemplo, neoplasmas suscetíveis dentro do escopo da presenteinvenção incluem mas não limitados a, câncer de mama, câncer de cólon,câncer de pulmão (incluindo câncer de pulmão de célula pequena e câncer depulmão de célula não pequena), câncer de próstata, câncer endometrial,câncer gástrico, melanoma, câncer de ovário, câncer pancreático, carcinomacelular escamoso, carcinoma de cabeça e pescoço, carcinoma esofágico,carcinoma hepatocelular, e malignidades hematológicas incluindo, mas nãolimitado a, leucemias agudas e linfomas agressivos. Em uma forma derealização particular, a presente invenção provê um método de tratamento decâncer de mama em um animal, tal como um mamífero (por exemplo, umhumano) em necessidade do mesmo por administração de uma quantidadeterapeuticamente efetiva da composto da presente invenção. Em outra formade realização particular, a presente invenção provê um método de tratamentode câncer de ovário em um animal, tal como um mamífero (por exemplo, umhumano) em necessidade do mesmo por administração de uma quantidadeterapeuticamente efetiva do composto da presente invenção. Em outra formade realização particular, a presente invenção provê um método de tratamentode câncer de pulmão de célula não pequena em um animal, tal como ummamífero (por exemplo, um humano) em necessidade do mesmo poradministração de uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto dapresente invenção. Em outra forma de realização particular, a presenteinvenção provê um método de tratamento de câncer de próstata em umanimal, tal como um mamífero (por exemplo, um humano) em necessidade domesmo por administração uma quantidade terapeuticamente efetiva docomposto da presente invenção. Em outra forma de realização particular, apresente invenção provê um método de tratamento de leucemia aguda,incluindo leucemia miolóide aguda e leucemia linfóide aguda, em um animal,tal como um mamífero (por exemplo, um humano) em necessidade do mesmopor administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva do compostoda presente invenção. Em outra forma de realização particular, a presenteinvenção provê um método de tratamento de linfoma agressivo em umanimal, tal como um mamífero (por exemplo, um humano) em necessidade domesmo por administração de uma quantidade terapeuticamente efetiva docomposto da presente invenção.

Os compostos da presente invenção podem ser usadossozinhos no tratamento de tais neoplasmas suscetíveis ou podem ser usadospara prover efeitos aditivos ou sinergísticos, com um ou mais de outroscompostos da invenção, ou em combinação com determinadas quimioterapiasexistentes e/ou outras terapias antineoplásicas. Em adição, os compostos dainvenção podem ser usados para restaurar a eficácia de um ou mais compostosda invenção, determinadas quimioterapias existentes e/ou terapiasantineoplásicas. Como usado aqui, "terapias antineoplásicas" incluem, masnão são limitadas a, quimioterapia citotóxica, terapia hormonal, inibidores dequinase marcados, anticorpos monoclonais terapêuticos, cirurgia ou terapia deradiação.

A presente invenção também provê um método de tratamentode uma condição caracterizada por proliferação celular inapropriada em umanimal, tal como um mamífero (por exemplo, um humano) em necessidade domesmo. O método compreende administrar uma quantidade terapeuticamenteefetiva de um composto da presente invenção. Por "proliferação celularinapropriada" entende-se proliferação celular resultando de um crescimentocelular inapropriado, proliferação celular resultando de divisão celularexcessiva, proliferação celular resultando de divisão celular em uma taxaacelerada, proliferação celular resultando de sobrevivência celularinapropriada, e/ou proliferação celular em uma ocorrência celular normal emuma taxa normal, que todavia não é desejada. Condições caracterizadas porproliferação celular inapropriada incluem, mas não são limitadas a,neoplasmas, distúrbios proliferativos dos vasos sangüíneos, distúrbiosfibróticas, distúrbios proliferativos de células mesangiais e doenças mediadasimunes/inflamatórias. Distúrbios proliferativos dos vasos sangüíneos incluemartrite e restenose. Distúrbios fibróticos incluem cirrose hepática eaterosclerose. Distúrbios proliferativos de células mesangiais incluemglomerulonefrite, nefrosclerose maligna, e glomerulopatias. Doençasmediadas imunes/inflamatórias incluem psoríase, cicatrização crônica,rejeição de órgão transplantado, síndrome de microangiopatia trombótica edoenças neurodegenerativas.Osteoartite e outras doenças dependentes deproliferação de osteoclastos de excesso de reabsorção óssea são exemplos decondições caracterizadas por proliferação celular inapropriada em que aproliferação celular ocorre em células normais em taxas normais, mas étodavia indesejada.

A presente invenção também provê um método para inibir aproliferação de uma célula, cujo método compreende contatar a célula comuma quantidade de um composto da invenção suficiente para inibir aproliferação da célula. Em uma forma de realização particular, a célula é umacélula neoplásica. Em uma forma de realização particular, a célula é umacélula inapropriadamente proliferativa. O termo "célula inapropriadamenteproliferativa" como usado aqui refere-se à células que cresceminapropriadamente (anormalmente), células que se dividem excessivamenteou a uma taxa acelerada, células que inapropriadamente (anormalmente)sobrevivem e/ou células normais que se proliferam a uma taxa normal maspara qual é indesejada. Células neoplásicas (incluindo células de câncer) sãoum exemplo de células inapropriadamente proliferativas mas não são asúnicas células inapropriadamente proliferativas.

PLK é essencial para a mitose celular e conseqüentemente,acredita-se que os compostos da invenção são eficazes para inibir mitose."Inibir mitose" refere-se a inibir a entrada na fase M do ciclo celular, inibindoa progressão normal da fase M do ciclo celular uma vez que a fase M foiintroduzida e inibindo a saída normal da fase M do ciclo celular. Deste modo,os compostos da presente invenção podem inibir mitose inibindo a entradacelular na mitose, inibindo a progressão celular através da mitose ou inibindoa saída celular da mitose. Como um aspecto, a presente invenção provê ummétodo para inibir a mitose em uma célula, cujo método compreendeadministrar à célula uma quantidade de um composto da invenção suficientepara inibir mitose. Em uma forma de realização particular, a célula é umacélula neoplásica. Em uma forma de realização particular, a célula é umacélula inapropriadamente proliferativa.

A presente invenção também provê o uso de um composto dainvenção para a preparação de um medicamento para o tratamento de umacondição mediada por PLK em um animal, tal como um mamífero (porexemplo, um humano). A presente invenção ainda provê o uso de umcomposto para a preparação de um medicamento para o tratamento de umneoplasma suscetível em um animal. Em particular, a presente invenção provêo uso de um composto para a preparação de um medicamento para otratamento de um câncer de mama em um animal. A presente invençãotambém provê o uso de um composto para a preparação de um medicamentopara o tratamento de câncer de ovário em um animal. A presente invençãoprovê o uso de um composto para a preparação de um medicamento para otratamento de um câncer pulmonar de célula não pequena em um animal. Apresente invenção também provê o uso de um composto para a preparação deum medicamento para o tratamento de câncer de próstata em um animal. Apresente invenção provê o uso de um composto para a preparação de ummedicamento para o tratamento de leucemia aguda (incluindo leucemia agudamielóide e leucemia aguda linfóide) em um animal. A presente invençãoprovê o uso de um composto para preparação de um medicamento para otratamento de linfoma agressivo em um animal. A presente invenção aindaprovê o uso de um composto para a preparação de um medicamento para otratamento de uma condição caracterizada por proliferação celularinapropriada. A presente invenção ainda provê o uso de um composto parapreparação de um medicamento para inibir a proliferação de uma célula. Apresente invenção ainda provê o uso de um composto para a preparação deum medicamento para inibir mitose em uma célula.

Apesar de ser possível que, para uso em terapia, umaquantidade terapeuticamente efetiva de um composto da invenção possa seradministrada como o produto químico bruto, ela está tipicamente presentecomo o ingrediente ativo de uma composição ou formulação farmacêutica.

Conseqüentemente, a invenção ainda provê uma composição farmacêuticacompreendendo um composto da invenção. A composição farmacêutica podeainda compreender um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis,diluentes, e/ou excipientes. O(s) veículo(s), diluente(s) e/ou excipiente(s)deve(m) ser aceitável(eis) no sentido de ser(em) compatível(eis) com osoutros ingredientes da formulação e não deletérios ao recipiente dos mesmos.

De acordo com outro aspecto da invenção, provê-se um processo para apreparação de uma formulação farmacêutica incluindo misturar um compostoda invenção com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis,diluentes e/ou excipientes.

Formulações farmacêuticas podem ser apresentadas na formade dose unitária contendo uma quantidade predeterminada de um ingredienteativo por dose unitária. Tal unidade pode conter uma dose terapeuticamenteefetiva de um composto da invenção ou uma fração de uma doseterapeuticamente efetiva tal que formas de dosagem unitárias múltiplaspossam ser administradas a um dado tempo para alcançar a doseterapeuticamente efetiva desejada. Formulações de dosagem unitáriapreferidas são aquelas contendo uma dose diária ou subdose, como aqui acimanovamente citado, ou uma fração apropriada da mesma, de um ingredienteativo. Além disso, tais formulações farmacêuticas podem ser preparadas porqualquer um dos métodos conhecidos na técnica da farmácia.

Formulações farmacêuticas podem ser adaptadas para aadministração por qualquer via apropriada, por exemplo: por vias oral(incluindo bucal ou sublingual), retal, nasal, tópica (incluindo bucal,sublingual ou transdérmica), vaginal ou parenteral (incluindo subcutânea,intramuscular, intravenosa ou intradérmica). Tais formulações podem serpreparadas por qualquer método conhecido na técnica da farmácia, porexemplo levando em associação o ingrediente ativo com o veículo(s) ouexcipiente(s).

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração oralpodem estar apresentadas como unidades discretas tal como cápsulas oucomprimidos; pós ou grânulos; soluções ou suspensões em líquidos aquosos enão aquosos; espumas ou doces comestíveis; ou emulsões líquidas de óleo emágua ou emulsões líquidas de água em óleo. Por exemplo, para administraçãooral na forma de um comprimido ou cápsula, o componente de fármaco ativopode ser combinado com um veículo inerte oral farmaceuticamente aceitávelnão tóxico tal como etanol, glicerol, água e semelhantes. Pós são preparadoscominuindo-se o composto em um tamanho muito pequeno e misturando comum veículo farmaceuticamente aceitável similarmente cominuído, tal comoum carboidrato comestível, como, por exemplo, amido ou manitol. Agentesaromatizantes, conservantes, dispersantes e colorantes podem também estarpresentes.

Cápsulas podem ser feitas preparando-se uma mistura em pócomo descrito acima, e enchendo bainhas de gelatina conformada.Fluidificantes e lubrificantes tais como sílica coloidal, talco, estearato demagnésio, estearato de cálcio ou polietileno glicol sólidos podem seradicionados à mistura de pó antes da operação de enchimento. Um agentedesintegrante ou solubilizante tal como ágar-ágar, carbonato de cálcio oucarbonato de sódio pode também ser adicionado para aumentar a eficácia domedicamento quando a cápsula é ingerida.

Além disso, quando desejado ou necessário, aglutinantesadequados, lubrificantes, agentes desintegrantes e agentes colorantes podemtambém ser incorporados na mistura. Os aglutinantes adequados incluemamido, gelatina, açúcares naturais tais como glicose ou beta-lactose,adoçantes de milho, gomas naturais e sintéticas tais como acácia, tragacantoou alginato de sódio, carboximetilcelulose, polietileno glicol, ceras esemelhantes. Lubrificantes usados nestas formas de dosagens incluem oleatode sódio, estearato de sódio, estearato de magnésio, benzoato de sódio,acetato de sódio, cloreto de sódio e semelhantes. Desintegrantes incluem, semlimitação, amido, metil celulose, ágar, bentonita, goma de xantato esemelhantes. Comprimidos são formulados, por exemplo, preparando umamistura em pó, granulando ou formando pastilhas, adicionando umlubrificante e desintegrante e pressionando nos comprimidos. Uma mistura depó é preparada misturando o composto, adequadamente triturado, com umdiluente ou base como descrito acima, e opcionalmente, com um aglutinantetal como carboximetilcelulose, um aliginato, gelatina, ou polivinil pirrolidona,uma solução retardante tal como parafina, um acelerador de reabsorção talcomo um sal quaternário e/ou um agente de absorção tal como bentonita,caulim ou fosfato de dicálcio. A mistura de pó pode ser granulada molhandocom um aglutinante, tal como xarope, pasta de amido, mucilagem de acáciaou soluções de materiais celulósicos ou poliméricos e forçando através deuma peneira. Como um alternativa à granulação, a mistura de pó pode serpassada através da máquina de formação de comprimidos e o resultado são aspastilhas formadas de modo imperfeito quebradas em grânulos. Os grânulospodem ser lubrificados para prevenir o agarramento às matrizes formadorasde comprimidos por meio de adição de ácido esteárico, um sal de estearato,talco ou óleo mineral. A mistura lubrificada é então comprimida noscomprimidos. Os compostos da presente invenção também podem sercombinados com um veículo inerte de escoamento livre e condensados noscomprimidos diretamente sem passar por etapas de granulação e formação depastilhas. Uma camada protetora clara ou opaca consistindo de uma camadaselante de verniz shellac, uma camada de açúcar ou material polimérico e umacamada de polimento de cera podem ser providas. Corantes podem seradicionados à estas camadas para distinguir dosagens unitárias diferentes.

Fluidos orais tais como solução, xaropes e elixires podem serpreparados na forma de dosagem unitária a fim de resultar em uma dadaquantidade contendo uma quantidade predeterminada de um ingrediente ativo.Xaropes podem ser preparados dissolvendo o composto em uma soluçãoaquosa aromatizada adequadamente, enquanto elixires são preparados atravésdo uso de um veículo alcoólico não tóxico. Suspensões podem ser formuladasdispersando o composto em um veículo não tóxico. Solubilizantes eemulsificadores tais como álcoois de isoesterila etoxilatados e éteres desorbitol de polioxi etileno, conservantes, aditivos de sabor tais como óleo dehortelã-pimenta ou adoçantes naturais ou sacarina ou outro adoçante artificial,e semelhantes também podem ser adicionados.

Onde apropriado, formulações de dosagem unitária paraadministração oral podem ser microencapsuladas. A formulação pode tambémser preparada para prolongar e sustentar a liberação como por exemplo porrevestimento ou incrustação de material particulado em polímeros, ceras ousemelhantes.

Os compostos da invenção podem também ser administradosna forma de sistemas de liberação de lipossomas, tais como vesículasunilamelares pequenas, vesículas unilamelares grandes e vesículasmultilamelares. Lipossomas podem ser formados de uma variedade defosfolipídeos, tais como colesterol, estearilamina ou fosfatidilcolinas.

Os compostos da invenção podem também ser distribuídospelo uso de anticorpos monoclonais como veículos individuais para que asmoléculas do composto sejam copuladas. Os compostos podem também sercopulados com polímeros solúveis como veículos de fármaco marcáveis. Taispolímeros podem incluir peptídeos, polivinilpirrolidona, copolímero pirano,polihidroxipropilmetacrilamida-fenol, polihidroxietilaspartamidafenol, oupolietilenooxidepolilisina substituída com resíduos de palmitoila. Além disso,os compostos podem ser copulados a uma classe de polímeros biodegradáveisúteis para obter uma liberação controlada de um fármaco, por exemplo, ácidopoliláctico, caprolactona de polepsilon, ácido polihidroxi butírico,poliortoésteres, poliacetais, polihidropiranos, policianocrilatos e copolímerosde bloqueio anfipático ou reticulado de hidrogéis.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administraçãotransdérmica pode ser apresentadas como curativos discretos para permanecerem contato íntimo com a epiderme de um recipiente por um períodoprolongado de tempo. Por exemplo, o ingrediente ativo pode ser liberado docurativo por iontoforese como geralmente descrito em PharmaceuticalResearch, 3(6):318(1986).

Formulações farmacêuticas adaptadas para administraçãotópica podem ser formuladas como ungüentos, cremes, suspensões, loções,pós, soluções, pastas, géis, pulverizadores, aerossóis ou óleos.

Para tratamentos do olho ou outros tecidos externos, porexemplo boca e pele, as formulações são preferencialmente aplicadas comoum ungüento tópico ou creme. Quando formulado em um ungüento, oingrediente ativo pode ser empregado com qualquer uma base de ungüentomiscível de água ou parafínico. Alternativamente, o ingrediente ativo pode serformulado em um creme com uma base de creme de óleo em água ou umabase de água em óleo.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administraçãotópica ao olho incluem colírios onde o ingrediente ativo é dissolvido oucolocado em suspensão em um veículo adequado, especialmente em umsolvente aquoso.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administraçãotópica na boca incluem pastilhas expectorantes, pastilhas e colutórios bucais.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração retalpodem ser apresentadas como supositórios ou como enemas.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração nasalonde o veículo é um sólido incluindo um pó grosseiro, contendo um tamanhode partícula por exemplo na taxa de 20 a 50 mícrons que é administrado comoem uma inalação ou fungada, isto é, por inalação rápida através de passagemnasal a partir de um recipiente de pó mantido próximo ao nariz. Formulaçõesadequadas onde o veículo é um líquido, para administração como umpulverizador nasal ou como um gotejador nasal, incluem soluções de óleo ouaquosas de um ingrediente ativo.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administração porinalação incluem polvilhos ou névoas de partículas muito pequenas, quepodem ser geradas por meio de vários tipos de medidas, aerossóis de dosepressurizada, nebulizadores e insufladores.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administraçãovaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis,pastas, espumas ou formulações de pulverização.

Formulações farmacêuticas adaptadas para administraçãoparenteral incluem soluções de injeção estéril não aquosas e aquosas quepodem conter anti-oxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos quetornariam a formulação isotônica com sangue do destinatário; e suspensõesestéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de colocação emsuspensão e agentes espessantes. As formulações podem estar presentes emrecipientes de dose unitária ou dose múltipla, por exemplo ampolas seladas efrascos pequenos, e podem ser armazenadas em uma condição secada porcongelamento (Iiofilizada) requerendo apenas a adição do veículo líquidoestéril, por exemplo água para injeções, imediatamente anterior ao uso.Soluções de injeção extemporânea e suspensões podem ser preparadas a partirdos pós estéreis, grânulos e comprimidos.

Deve-se entender que além dos ingredientes particularmentemencionados acima, as formulações podem incluir outros agentesconvencionais na técnica tendo relação ao tipo de formulação em questão, porexemplo aqueles adequados para administração oral podem incluir agentesaromatizantes.

Nos métodos acima descritos de tratamentos e usos, umcomposto da invenção pode ser empregado sozinho, em combinação com umou mais outros compostos da invenção ou em combinação com outros agentesterapêuticos e/ou em combinação com outras terapias antineoplásicas. Emparticular, em métodos de tratamento de condições mediadas por PLK emétodos de tratamento de neoplasmas suscetíveis, combinação com outrosagentes quimioterapêuticos é considerada bem como combinação com terapiacirúrgica ou terapia de radiação. O termo agentes "quimioterapêuticos" comousado aqui refere-se a qualquer agente químico tendo um efeito terapêutico noindivíduo ao qual ele é administrado. Agentes "quimioterapêuticos" incluem,mas não são limitados a, agentes antineoplásicos, analgésicos e antieméticos.Como usado aqui, "agentes antineoplásicos" incluem ambos agentescitostáticos e citotóxicos tal como, mas não limitados a, quimioterapiacitotóxica, terapia hormonal, inibidores de quinase marcados e anticorposmonoclonais terapêuticos. Terapias de combinação de acordo com a presenteinvenção deste modo compreendem a administração de pelo menos umcomposto da invenção e o uso de pelo menos um outro método de tratamentode câncer. Em uma forma de realização, terapias de combinação de acordocom a presente invenção compreendem a administração de pelo menos umcomposto da invenção e pelo menos um agente quimioterapêutico. Em umaforma de realização particular, a presente invenção compreende aadministração de pelo menos um composto da invenção e pelo menos umagente neoplásico. Como um aspecto adicional, a presente invenção provêmétodos de tratamento e usos como descrito acima, que compreendeadministrar um composto da invenção junto com pelo menos um agentequimioterapêutico. Em uma forma de realização particular, o agentequimioterapêutico é um agente antineoplásico. Em outra forma de realização,a presente invenção provê uma composição farmacêutica como descrito acimaainda incluindo pelo menos um outro agente quimioterapêutico, maisparticularmente, o agente quimioterapêutico é um agente antineoplásico.

Tipicamente, qualquer agente quimioterapêutico que tematividade versus um neoplasma suscetível sendo tratado pode ser usado emcombinação com os compostos da invenção, desde que o agente particularseja clinicamente compatível com terapia empregando um composto dainvenção. Agentes antineoplásicos típicos úteis na presente invenção incluem,mas não são limitados a, agentes antimicrotúbulos tal como diterpenóides, ealcalóides de vinca; complexos de coordenação de platina; agentes alquilantestais como mostardas de nitrogênio, oxazafosforinas, alquilsulfonatos,nitrosouréias, e triazenos; agentes antibióticos tais como antraciclinas,actinomicinas e bleomicinas; inibidores de topoisomerase II tais comoepipodofilotoxinas; antimetabólitos tais como análogos de purina e pirimidinae compostos de antifolato; inibidores de topoisomerase I tais comocamptotecinas; análogos de hormônios ou hormonais; inibidores de via detransdução de sinais; inibidores de angiogênese de tirosina quinase nãoreceptora; agentes imunoterapêuticos; agentes pró-apoptóticos; e inibidores desinalização de ciclo celular.

Agentes antimicrotúbulos ou antimitóticos são agentes ativosespecíficos de fase contra os microtúbulos das células de tumor durante M oua fase de mitose do ciclo celular. Exemplos de agentes antimicrotúbulosincluem, mas não são limitados a, diterpenóides e alcalóides de vinca.Exemplos de diterpernóides incluem, mas não são limitados a, paclitaxel e seuanálogo docetaxel. Exemplos de alcalóides de vinca incluem, mas não sãolimitados a, vimblastina, vincristina, e vinorelbina. Complexos decoordenação de platina são agentes antineoplásicos não específicos para afase, que são interativos com o DNA. Os complexos de platina entram nascélulas de tumor, sofrem aquação e formam reticulações intra- einterfilamentares com DNA causando efeitos biológicos adversos aotumor.Exemplos de complexos de coordenação de platina incluem, mas nãosão limitados a, oxaliplatina, cisplatina e carboplatina.

Agentes alquilantes são agentes antineoplásicos nãoespecíficos para a fase e eletrófilos fortes. Tipicamente, agentes alquilantesformam ligações covalentes, por alquilação, para DNA através de porçõesnucleofílicas da molécula de DNA tais como grupos fosfato, amino ehidroxila. Tal alquilação interrompe a função de ácido nucléico levando àmorte celular. Exemplos de agentes alquilantes incluem, mas não sãolimitados a, mostardas de nitrogênio tais como ciclofosfamida, melfalan, eclorambucil; sulfonatos de alquila tais como busulfan; nitrosouréias tais comocarmustina; e triazenos tais como dacarbazina.

Agentes quimioterapêuticos antibióticos são agentes nãoespecíficos para a fase, que ligam ou intercalam com DNA. Tipicamente, talação resulta em complexos de DNA estáveis ou rompimento do filamento,que interrompe função comum dos ácidos nucléicos conduzindo à mortecelular. Exemplos de agentes antineoplásicos antibióticos incluem, mas nãosão limitados a, actinomicinas tais como dactinomicinas, antraciclinas taiscomo daunorubicina e doxorubicina; e bleomicinas.

Inibidores de topoisomerase II incluem, mas não são limitadosa, epipofilotoxinas.

Epipofilotoxinas são agentes antineoplásicos específicos dafase derivados da planta mandrágora. Epipofilotoxinas tipicamente afetamcélulas nas fases S e G2 do ciclo celular formando um complexo ternário comtopoisomerase II e DNA causando rompimento do filamento de DNA. Osrompimentos de filamentos acumulam-se e a morte celular segue. Exemplosde epipofilotoxinas incluem, mas não são limitados a, etoposídeo eteniposídeo.

Agentes neoplásicos antimetabólitos são agentesantineoplásicos específicos da fase que atuam na fase S (síntese de DNA) dociclo celular inibindo a síntese de DNA ou inibindo a síntese de base purinaou pirimidina e por meio disso limitando a síntese de DNA.Conseqüentemente, a fase S não prossegue e a morte celular segue. Exemplosde agentes antineoplásicos antimetabólicos incluem, mas não são limitados a,fluorouracil, metotrexato, citarabina, mecaptopurina e tioguanina.

Camptotecinas, incluindo, camptotecinas e derivados decamptotecinas estão disponíveis ou sob desenvolvimento como inibidores deTopoisomerase I. Acredita-se que a atividade citotóxica de camptotecinasesteja relacionada a sua atividade inibitória de Topoisomerase I. Exemplos decamptotecinas incluem, mas não são limitados a irinotecan, topotecan, e avárias formas ópticas de 7-(4-metilpiperozino-metileno)-10, 11-etilenodioxi-20-camptotecina. Hormônios e análogos hormonais são compostos úteis paratratamento de câncer em que ocorre uma relação entre o(s) hormônio(s) ecrescimento e/ou falta de crescimento do câncer. Exemplos de hormônios eanálogos hormonais que são úteis, como se acredita, no tratamento deneoplasmas incluem, mas não são limitados a, adrenocorticosteróides taiscomo prednisona e prednisolona que são úteis no tratamento de linfomasmalignos e leucemia aguda em crianças; aminoglutetimida e outros inibidoresde aromatase tais como anastrazol, letrazol, vorazol exemestano úteis notratamento de carcinoma adrenocortical e carcinoma de mama dependente dehormônio contendo receptores de estrogênio; progestrinas tais como acetatode megestrol útil no tratamento de câncer de mama dependente de hormônio ecarcinoma endometrial; estrogênios, androgênios, e anti-androgênios taiscomo flutamida, nitulamida, bicalutamida, acetato de ciproterona e 5 a-redutases tais como finasterida e dutasterida, úteis no tratamento decarcinoma prostático e hipertrofia prostática benigna; antiestrogênios taiscomo tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno e iodoxifeno úteis notratamento de carcinoma de mama dependente de hormônio; e hormônioliberando gonadotropina (GnRH) e análogos dos mesmos, tais como acetatode goserelina e leuprolida, que estimulam a liberação de hormônioluteinizante (LH) e/ou hormônio estimulante de folículo (FSH) com uso decurto prazo ou intermitente mas conduzindo à supressão de LH e FSH comuso de longo prazo indicado para tratamento de carcinoma prostático ecarcinoma de mama dependente de hormônio.

Inibidores da via de transdução de sinais são aqueles inibidoresque bloqueiam ou inibem um processo químico que evoca uma mudançaintracelular. Como usado aqui, esta mudança é proliferação, sobrevivênciaangiogênese ou diferenciação celular. Inibidores de transdução de sinal úteisna presente invenção incluem inibidores de tirosina quinase receptora, tirosinaquinase não receptora, bloqueadores de domínio SH2/SH3, serina/treoninaquinases, fosfotidil inositol-3 quinases, sinalização de mioinositol, eoncogenes Ras.

Várias proteínas tirosina quinase catalisam a fosforilação doresíduos de tirosila específicos em várias proteínas envolvidas na regulaçãodo crescimento celular. Tais proteínas tirosina quinase podem ser geralmenteclassificadas como quinases receptoras e não receptoras.Tirosinas quinases receptoras são proteínas de transmembranatendo um domínio de ligação de ligando extracelular, um domínio detransmembrana, e um domínio de tirosina quinase. Tirosinas quinasesreceptoras estão envolvidas na regulação do crescimento celular e sãoalgumas vezes chamadas de receptoras de fator de crescimento. Ativaçãoinapropriada ou descontrolada de muitas destas quinases, isto é, atividadeaberrante de receptor de fator de crescimento de quinase, por exemplo porsuper-expressão ou mutação, foi mostrada para resultar em crescimentocelular descontrolado. Conseqüentemente, a atividade aberrante de taisquinases foi ligada ao crescimento de tecido maligno. Conseqüentemente,inibidores de tais quinases poderiam prover métodos de tratamento de câncer.Receptores de fator de crescimento incluem, por exemplo, receptor de fator decrescimento epidérmico (EGFR, ErbB2 e ErbB4), receptor de fator decrescimento derivado de plaquetas (PDGFR), receptor de fator de crescimentoendotelial vascular (VEGFR), tirosina quinase com domínios de homologia defator de crescimento epidérmico e semelhante a imunoglobulina (TIE-2),receptor de fator-I de crescimento de insulina (IGF-I), fator estimulante decolônia de macrófagos (CFMS), BTK, ckit, cmet, receptores de fator decrescimento de fibroblastos, receptores de Trk (TrkA, TrkB e TrkC),receptores de efrina (Eph), e a proto-oncogene de RET. Vários inibidores dereceptores de fator de crescimento estão sob desenvolvimento e incluemantagonistas de ligando, anticorpos, inibidores de tirosina quinase,oligonucleotídeos anti-sentido e aptâmeros. Receptores de fator decrescimento e agentes que inibem a função de receptor de fator decrescimento são descritos, por exemplo, em Kath, John C., Exp Opin. Ther.Patents (2000) 10 (6):803-818; Shawver et al DDT Vol 2, N0 2 February1997; e Lofts, F. J. et al, "Growth Factor Receptors as Targets", NewMolecular Targets for Câncer Chemotherapy, Ed. Workman, Paul e Kerr,David, CRC Press 1994, London.Tirosinas quinases, que não são quinases receptoras de fator decrescimento são denominadas tirosinas quinase não receptoras. Tirosinasquinases não receptoras úteis na presente invenção, que são alvos oupotenciais alvos de fármacos antineoplásicos, incluem cSrc, Lck3 Fyn, Yes,Jak5 cAbl, FAK (quinase de adesão focai), Brutons tirosina quinase, e Bcr-Abl. Tais quinases não receptoras e agentes que inibem a função da tirosinaquinase não receptora são descritos em Sinh, S. e Corey, S.J., (1999) Journalof Hematotherapy and Stem Cell Research 8 (5):465-80; e Bolen, J.B.,Brudge, J.S., (1997) Annual Review of Immunology, 15:371-404.

Bloqueadores de domínio SH2/SH3 são agentes que rompem aligação de domínio de SH2 ou SH3 em uma variedade de enzimas ouproteínas de adaptador incluindo subunidade PI3-K p85, quinases de famíliaSrc, moléculas de adaptador (Shc, Crk, Nck, Grb2) e Ras-GAP. Domínios deSH2/SH3 como alvos para fármacos anticâncer são examinados em Smithgall,T.E. (1995), Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 34(3) 125-32.

Inibidores de serina/ treonina quinases incluem bloqueadoresde cascata MAP quinase que incluem bloqueadores de Raf quinases (Rafk),mitogênio ou quinase extracelular regulada (MEKs), e quinases reguladasextracelulares (ERKs); e bloqueadores de membro de família C de proteínaquinase incluindo bloqueadores de subtipos de PKCs (alfa, beta, gama,epsilon, mu, lambda, iota, zeta), família de IkB quinase (IKKa, IKKb),quinases de família de PKB, membros de família de Akt quinase e quinasesreceptoras beta TGF. Tais serina/treonina quinases e inibidores das mesmassão descritos em Yamamoto, T., Taya, S., Kaibuchi, K.,(1999), Journal ofBiochemistry. 126(5) 799-803; Brodt, P, Samani, A., e Navab, R. (2000),Biochemical Pharmacology, 60. 1101-1107; Massague, J., Weis-Garcia, F.(1996) Câncer Surveys. 27:41-64; Philip, P.A., e Harris, A.L. (1995), CâncerTreatment and Research. 78:3-27, Lackey, K. et al Bioorganic and MedicinalChemistry Letters, (10), 2000, 223-226; e Martinez-lacaci, L., et al, Int. J.Câncer (2000),88(1),44-52.

Inibidores de membros de família de fosfotidil inositol-3quinase incluindo bloqueadores de PI3-quinase, ATM, DNA-PK, e Ku sãotambém úteis em combinação com a presente invenção. Tais quinases sãodiscutidas em Abraham, R.T. (1996),Current Opinion in Immunology. 8 (3)412-8; Canman, CE. , Lim, D.S. (1998), Oncogene 17 (25) 3301-3308;Jackson, S.P. (1997), International Journal of Biochemistry and Cell Biology.29 (7):935-8; e Zhong, H. et al, Câncer Res, (2000) 60(6), 1541-1545.

Também úteis na combinação com a presente invenção sãoinibidores de sinalização de mio-inositol, tais como bloqueadores defosfolipase C e análogos de mioinositol. Tais inibidores de sinal estãodescritos em Powis, G., and Kozikowski A., (1994) New Molecular Targetsfor Câncer Chemotherapy ed., Paul Workman e David Kerr, CRC Press 1994,London.

Outro grupo de inibidores de via de transdução de sinal úteisem combinação com a presente invenção são inibidores Ras oncogene. Taisinibidores incluem inibidores de farnesiltransferase, geranil-geraniltransferase, e CAAX proteases, bem como oligonucleotídeos anti-sentido,ribozimas e imunoterapia. Tais inibidores foram mostrados para bloquear aativação de Ras em células contendo Ras mutante de tipo selvagem, assimagindo como agentes antiproliferação. Inibição de Ras oncogene é discutidaem Scharovsky, O. G., Rozados, V.R., Gervasoni, S.I. Matar, P. (2000),Journal of Biomedical Science. 7(4) 292-8; Ashby, M.N. (1998), CurrentOpinion in Lipidology. 9(2)99-102; and BioChim. Biophys. Acta, (1989)1423(3): 19-30.

Como mencionado acima, anticorpos para ligação de ligandoquinase receptora podem também servir como inibidores de transdução desinal. Este grupo de inibidores de via de transdução de sinal incluem o uso deanticorpos humanizados para o domínio de ligação de ligando extracelular detirosina quinase receptora. Por exemplo, anticorpo específico EGFR deImclona C225 (ver Green, M.C. et al, Monoclonal Antibody Therapy forSolid Tumors5 Câncer Treat. Rev., (2000), 26(4), 269- 286); anticorpo deErbB2 de Herceptin® (ver Tyrosine Kinase Signaling in Breast Câncer ErbBFamily Receptor Tyrosine Kinases, Breast Câncer Res., 2000, 2(3), 176-183);e anticorpo específico 2CB VEGFR2 (ver Brekken, R.A. et al, SelectiveInhibition of VEGFR2 Activity by a Monoclonal Anti-VEGF AntibodyBlocks Tumor Growth in Mice, Câncer Res. (2000) 60, 5117-5124).

Inibidores de angiogênese de quinase receptora tambémpodem encontrar uso na presente invenção. Inibidores de VEGFR e TIE2relacionados com angiogênese são discutidos acima em consideração aosinibidores de sinal de transdução (ambos receptores são tirosinas quinasesreceptoras).Outros inibidores podem ser usados em combinação com oscompostos da presente invenção. Por exemplo, anticorpos anti-VEGF, quenão reconhecem VEGFR (a tirosina quinase receptora), mas ligam ao ligando;inibidores de moléculas pequenas de integrina (alfavbeta3) que irão inibirangiogênese; endostatina e angiostatina ( não RTK) podem tambémdemonstram-se úteis em combinação com inibidores de PLK.

Agentes usados em regimes imunoterapêuticos também podemser úteis em combinação com os compostos da invenção.

Agentes usados em regimes proapoptóticos (por exemplo,oligonucleotídeos bcl-2 anti-sentido) também podem ser usados emcombinação com a presente invenção. Membros da família Bcl-2 de proteínasbloqueiam a apoptose. A regulação positiva de bcl-2 foi, assim, ligada àquimioresistência. Estudos têm mostrado que o fator de crescimentoepidérmico (EGF) estimula membros anti-apoptóticos da família bcl-2 (isto é,mcl-1). Assim, estratégias projetadas para regular de modo negativo aexpressão de bcl-2 em tumores têm demonstrado benefícios clínicos e estãoagora em experiências de fase ΙΙ/ΙΠ, isto é oligonucleotídeos anti-sentido bcl-2 G3139 de Genta. Tais estratégias pró-apoptóticas usando a estratégia denucleotídeo anti-sentido para bcl-2 são discutidas em Water JS et al., J. Clin.Oncol. 18:1812-1823 (2000); e Kitada S et al., Antisense Res. Dev.4:71-79 (1994).

Inibidores de sinalização do ciclo celular inibem moléculasenvolvidas no controle do ciclo celular. Quinases dependentes de ciclina esuas ciclinas de interação controlam a progressão através do ciclo celulareucariótico. A ativação e inativação coordenada de complexos de ciclina/CDK diferentes é necessária para progressão normal através do ciclo celular.Vários inibidores de sinalização do ciclo celular estão em desenvolvimento.

Por exemplo, exemplos de quinases dependentes de ciclinas, incluindo CDK2,CDK4, e CDK6 e inibidores para os mesmos estão descritos em, por exemplo,Rosania, et al., Exp. Opin. Ther Patents 10(2):215-230 (2000).

Em uma forma de realização, os métodos da presente invençãocompreendem administrar ao animal um composto da invenção emcombinação com um inibidor de via de transdução de sinal, particularmentegefitinib (IRESSA®).

Os métodos e usos empregando estas combinações podemcompreender a administração do composto da invenção e outro agentequimioterapêutico/ antineoplásico ou seqüencialmente em qualquer ordem ousimultaneamente em composições farmacêuticas separadas ou combinadas.

Quando combinados na mesma formulação, será estimado que os doiscompostos devem ser estáveis e compatíveis entre si e com outroscomponentes da formulação e podem ser formulados para administração.

Quando formulados separadamente, eles podem ser providos em qualquerformulação conveniente, de tal modo como são conhecidos para taiscompostos na técnica.

Quando um composto da invenção é usado em combinaçãocom um agente quimioterapêutico, a dose de cada composto pode diferir dequando o composto é usado sozinho. Doses apropriadas serão prontamenteestimadas pelos versados na técnica. A dose apropriada dos compostos dainvenção e o(s) outro(s) agente(s) terapeuticamente ativo(s) e os temposrelativos de administração serão selecionados a fim de realizar o desejadoefeito terapêutico combinado, e estão dentro da perícia e critério do clínicoatendente.

Os compostos da invenção podem ser convenientementepreparados por métodos descritos no exemplos a seguir.

A presente invenção também provê compostos radio-rotuladosda invenção e compostos biotinilados da invenção e versões ligadas a umsuporte sólido dos mesmos. Compostos radio-rotulados da invenção ecompostos biotinilados da invenção podem ser preparados usando técnicasconvencionais. Por exemplo, compostos radio-rotulados da invenção podemser preparados reagindo o composto da invenção com gás de trítio na presençade um catalisador apropriado para produzir compostos radio-rotulados dainvenção. Em uma forma de realização, os compostos são tritiados.

Os compostos radio-rotulados da invenção e compostosbiotinilados da invenção são úteis em testes para a identificação de compostosque inibem PLK, para a identificação de compostos para o tratamento de umacondição mediada por PLK, para o tratamento de neoplasmas suscetíveis, parao tratamento de condições caracterizadas por proliferação inapropriada, para ainibição da proliferação celular e para a inibição de mitose em uma célula.Conseqüentemente, a presente invenção provê um método de teste paraidentificar tais compostos, cujo método compreende a etapa deespecificamente ligar o composto radio-rotulado da invenção ou compostosbiotinilados da invenção à proteína alvo ou homogenados celulares. Maisespecificamente, métodos de teste apropriados irão incluir testes de ligação decompetição. Os compostos radio-rotulados da invenção e compostosbiotinilados da invenção e versões ligadas a um suporte sólido dos mesmos,podem ser empregados nos testes de acordo com os métodos convencionaisna técnica.

Os seguintes exemplos se destinam a apenas ilustração e nãose destinam a limitar o escopo da invenção em qualquer modo, a invençãosendo definida pelas reivindicações que seguem.

As seguintes abreviações como empregadas nos exemplos, temos significados descritos.

g grama (s)mg miligrama (s)mol mol (s)mmol milimol (s)N normalL litro (s)mL mililitro (s)pL microlitro (s)h hora (s)min minuto (s)0C graus centígradosHCl ácido clorídricoDCM diclorometanoMeOH metanolEtOAc acetato de etilaMgSO4 sulfato de magnésioNaHCO3 bicarbonato de sódioK2CO3 carbonato de potássioNa2SO4 sulfato de sódioN2 nitrogênioH2 hidrogênioXANTFOS (4,5-Bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno) é um

catalisador comercialmente disponível, de Aldrich.

Reagentes são comercialmente disponíveis ou são preparadosde acordo com os procedimentos na literatura. Nas seguintes estruturas, "Me"refere-se ao grupo -CH3.

Exemplo de intermediário 1: 5-Amino-3-(((lRVl-r2-(trifluorometil) fenill etil) óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 44</formula>

EtapaA - 5-Nitro-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi)-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 44</formula>

Uma suspensão de trifenilfosfina suportada em polímero(62,36 g, 2,21 mmol/g, 137,8 mmol) em DCM (1,0 L) foi agitada emtemperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura foi resfriada a 0 °C. 3-Hidróxi-5-nitro-2-tiofenocarboxilato de metila (20,00 g, 98,44 mmol), quepode ser preparado em um modo análogo no procedimento da literatura(Barker, J. M.; Huddleston, P. R.; Wood, M. L.; Burkitt, S.A. Journal ofChemical Research (Miniprint) 2001, 1001-1022) foi adicionado, seguido por(15)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etanol (26,20 g, 137,8 mmol) eazodicarboxilato de di-férc-butila (31,73 g, 137,8 mmol). A mistura de reaçãofoi agitada em temperatura ambiente durante 21,25 h e então filtrada atravésde um funil de vidro Mtado e concentrada. O resíduo foi tratado com HCl 4 Nem 1,4-dioxano (300 mL) e agitado em temperatura ambiente durante 3 h. Amistura foi então resfriada bruscamente por adição de hidróxido de sódio 3 N(300 mL) e NaHCO3 aquoso saturado (200 mL). A mistura foi extraída comDCM (3 χ 250 mL). As frações orgânicas combinadas foram secadas sobreMgSO4, filtradas, e concentradas sobre sílica gel. Purificação porcromatografia de coluna (0 a 25% de EtOAc:hexanos) deu 36,08 g (98%) docomposto titular como um óleo amarelo. 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 7,82(d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,68 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 7,59 (t, 1H, J= 7,4 Hz), 7,46 (s,1H), 7,42 (t, 1H, J= 7,6 Hz), 5,77 (q, 1H, J= 6,1 Hz), 3,94 (s, 3H), 1,74 (d,3H, J= 6,1 Hz).

Etapa B - 5-Amino-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil}όxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 45</formula>

Em um frasco equipado com uma sonda de temperatura, umagitador mecânico de topo, um condensador de refluxo, e um funil de adiçãoforam adicionados pó de ferro (26,84 g, 480,6 mmol) e ácido acético (130mL). A suspensão de ferro/ácido acético foi agitada mecanicamente eaquecida em uma temperatura interna de 5 °C. No funil de adição foiadicionada uma solução de 5-nitro-3-({(li?)-l-[2-(trifiuorometil) fenil] etil}óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (36,08 g, 96,13 mmol) em ácido acético(160 mL). A solução no funil de adição foi então adicionada em gotas nasuspensão de ferro/ácido acético em uma taxa de modo que a temperaturainterna foi mantida a <60 0C (2,5 h tempo de adição total). A mistura dereação foi resfriada em temperatura ambiente, diluída com DCM (500 mL), eentão resfriada bruscamente por adição de hidróxido de sódio 6 N (750 mL) eNaHCO3 aquoso saturado (200 mL). A mistura completa foi então filtradaatravés de um chumaço de Celite para remover o material insolúvel,enxaguando o Celite com DCM adicional (250 mL). As frações aquosa eorgânica foram separadas. A fração aquosa foi extraída com EtOAc (2 χ 400mL). As frações orgânicas foram combinadas, secadas sobre MgSO4,filtradas, e concentradas para dar 30,66 g (92%) do composto titular como umsólido laranja. 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 7,89 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,62(d, 1H, J= 7,7 Hz), 7,56 (t, 1H, J= 7,7 Hz), 7,36 (t, 1H, J= 7,7 Hz), 5,72 (s,1H), 5,65 (q, 1H, J= 6,3 Hz), 4,26 (br s, 2H), 3,80 (s, 3H), 1,66 (d, 3H, J =6,3 Hz); MS (APCI): 368,00 [M+Na]+.

Exemplo de intermediário 2: 5-Amino-3 - {[(1R)-1 -(2-clorofenil) etil] -óxi I -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 46</formula>

Etapa A - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-nitro-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 46</formula>

3 - {[(1R)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-nitro-2tiofenocarboxilato de metila foi preparado a partir de 3-hidróxi-5-nitro-2-tiofenocarboxilato de metila e (lS)-l-(2-clorofenil) etanol por umprocedimento análogo ao exemplo de intermediário 1, etapa A. 1H RMN (400MHz, DMSO-í/é): δ 7,96 (s, 1H), 7,65 (dd, 1H, J= 1,7, 7,8 Hz), 7,47 (dd, 1H,J= 1,5, 7,7 Hz), 7,40 (dt, 1H, J= 1,3, 7,5 Hz), 7,34 (dt, 1H, J= 1,9, 7,5 Hz),5,98 (q, 1H, J= 6,0 Hz), 3,85 (s, 3H), 1,59 (d, 3H, J= 6,2 Hz).

Etapa B - 5-Amino-3-{[(IR)-I-(2-clorofenil) etil] óxij-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 46</formula>5- Amino-3 - {[(1R)-1 -(2-clorofenil) etil] óxi}-2-tiofenocarboxilato de metila foi preparado a partir de 3-{[(li?)-l-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-nitro-2-tiofenocarboxilato de metila por umprocedimento análogo ao exemplo de intermediário 1, etapa B. 1H RMN (400MHz, DMSO-^6): δ 7,54 (dd, 1H, J = 1,8, 7,9 Hz), 7,45 (dd, 1H, J = 1,4, 7,7Hz), 7,37 (dt, 1H, J= 1,4, 7,7 Hz), 7,31 (dt, 1H, J= 1,8, 7,6 Hz), 6,76 (br s,2H), 5,57 (q, 1H, J= 6,2 Hz), 5,49 (s, 1H), 3,63 (s, 3H), 1,51 (d, 3H, J= 6,4Hz); MS (ESI): 334,03 [M+Na]+.

Exemplo 1: 5-{6-[(Metilsulfonil) metil] -1 //-benzimidazol-1 -ill-3-C((1R)-1 -r2-(,trifluorometi 1) fenill etil> óxi) -2-tiofenocarboxamida

<formula>formula see original document page 47</formula>

Via 1:

Etapa A - 5-(Hidroximetil)-2-nitrofenol

A uma mistura de ácido 3-hidróxi-4-nitrobenzóico (5,0 g, 27,3mmol) em 1,2-dicloroetano (100 mL) foi adicionado borato de trimetila (4,9mL, 43,7 mmol), seguido por eterato de dietil trifluoreto de boro (5,5 mL,43,7 mmol). Complexo borano-piridina (4,1 mL, 41,0 mmol) foi entãoadicionado lentamente em gotas. A reação foi agitada 4 h em temperaturaambiente, então resfriada a O0C e resfriada bruscamente com MeOH (10 mL).A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo tomado em tolueno (200mL), então extraído com hidróxido de sódio aquoso 1 N (3 χ 100 mL). Ascamadas orgânicas combinadas foram ajustadas a pH 1,0 por adição de HCl12 N, então extraídas com EtOAc (3 χ 250 mL). As camadas orgânicascombinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas sobre MgS04 econcentradas sob vácuo para dar 4,55 g (98%) do composto titular como umsólido amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6): δ 10,87 (s, 1H), 7,85(d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,08 (s, 1H), 6,88 (dd, 1H, J = 1,19, 8,51 Hz), 5,43 (s,1H), 3,33 (s, 2H).

Etapa B - Pivalato de 3-hidróxi-4-nitrobenzila

<formula>formula see original document page 48</formula>

Uma mistura de 5-(hidroximetil)-2-nitrofenol (11,35 g, 67,15mmol) e 3-(2,2-dimetilpropanoil)-l,3-tiazolidina-2-tiona (15,0 g, 73,89mmol), que pode ser preparada em um modo análogo no procedimento daliteratura (Yamada, S. Tetrahedron Letters 1992, 33, 2171-2174), foi agitadaem tolueno (670 mL) a 100 0C durante 40 h, então resfriada em temperaturaambiente. A reação foi concentrada sob vácuo em um volume deaproximadamente 200 mL e a suspensão resultante foi filtrada através defiltro de papel, lavando o sólido com tolueno frio. O filtrado foi entãoconcentrado sob vácuo e purificado por cromatografia de sílica gel eluindocom um gradiente de 0 a 20% de EtOAc/hexanos para dar 11,09 g (65%) docomposto titular como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 11,05 (s, 1H), 7,87 (d, 1H, J= 8,42 Hz), 7,06 (s, 1H), 6,90 (dd, 1H, J=1,46, 8,42 Hz), 5,09 (s, 2H), 1,18 (s, 9H).

Etapa C - Pivalato de 4-nitro-3-{[(trifluorometil) sulfonil] óxijbenzila<formula>formula see original document page 49</formula>

A uma solução agitada, resfriada (0 0C) de pivalato de 3-hidróxi-4-nitrobenzila (11,11 g, 43,9 mmol) e N-feniltriofluorometanossulfonimida (16,51 g, 46,2 mmol) em DCM (220 mL)foi lentamente adicionada Λ^-diisopropiletilamina (15,5 mL, 88,9 mmol). Areação foi agitada durante 45 min a 0 0C, então 45 min em temperaturaambiente. A reação foi então concentrada sob vácuo e purificada porcromatografia de sílica gel eluindo com um gradiente de 5 a 20% deEtOAc/hexanos para dar 16,87 g (99%) do composto titular como um sólidobranco indefinido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-J6): δ 8,36 (d, 1H, J= 8,42Hz), 7,75 - 7,69 (m, 2H), 5,27 (s, 2H), 1,19 (s, 9H).

Etapa D - 5-[(5-{[(2,2-Dimetilpropanoil) όχι] metil}-2-nitrofenil) amino]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} όχι) tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 49</formula>

Uma mistura de pivalato de 4-nitro-3-{[(trifluorometil)sulfonil] óxi} benzila (1,0 g, 2,60 mmol), 5-amino-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil}-óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila (1,34 g, 3,88mmol), tetraquis (trifenilfosfina) paládio (0) (150 mg, 0,13 mmol),trifenilfosfina (68 mg, 0,26 mmol) e K2CO3 (900 mg, 6,5 mmol) foi agitadaem tolueno (5,2 mL) a 100 0C durante 2 h, então resfriada em temperaturaambiente e filtrada através de Celite, lavando com EtOAc e DCM. O filtradofoi concentrado sob vácuo e purificado por cromatografia de sílica gel eluindocom um gradiente de 5 a 25% de EtOAc/hexano para dar 1,26 g (84%) docomposto titular como um óleo vermelho. 1H RMN (400 MHz, DMSO-(I6): δ9,75 (s, 1H), 8,09 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,89 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,69 - 7,78(m, 2H), 7,52 (t, 1H, J = 7,59 Hz), 7,34 (s, 1H), 7,01 (dd, 1H, J = 1,46, 8,60Hz), 6,62 (s, 1H), 5,70 - 5,75 (m, 1H), 5,07 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 1,58 (d, 3H,J = 6,22 Hz), 1,13 (s, 9H).

Etapa E - 5-[(2-Amino-5-{[(2,2-dimetilpropanoil) όχι] metil}fenil) amino]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etilj óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 50</formula>

Uma mistura de 5-[(5-{[(2,2-dimetilpropanoil) óxi] metil} -2-nitrofenil) amino]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila (2,42 g, 4,17 mmol) e platina ( sulfiirada, 5% em pesode carbono) (811 mg, 0,21 mmol) em EtOAc (30 mL) foi adicionada a umfrasco de reação de pressão elevada. A reação foi purgada com vácuo e gásN2, então gás H2 foi aplicado a 3,5 kg/cm durante 1 h. A mistura de reaçãofoi filtrada através de Celite, lavada com EtOAc. O filtrado foi concentradosob vácuo para dar 2,27 g (99%) do composto titular como um sólidocastanho. 1H RMN (400 MHz, DMSO-(I6): δ 8,62 (s, 1H), 7,84 (d, 1H, J =7,87 Hz), 7,72 (dd, 2H, J = 7,60, 13,09 Hz), 7,50 (t, 1H, J = 7,60 Hz), 7,01 (d,1H, J - 1,46 Hz), 6,88 (dd, 1H, J = 1,74, 8,15), 6,68 (d, 1H, J = 8,24 Hz), 5,83(s, 1H), 5,59 - 5,65 (m, 1H), 4,97 (s, 2H), 4,85 (s, 2H), 3,64 (s, 3H), 1,55 (d,3H, J = 6,23 Hz), 1,11 (s, 9H); MS (ESI): 551 [M+H]+.

Etapa F - 5-(6-{[(2,2-Dimetilpropanoil) óxi] metil} -IH-benzimidazol-l-il)-3-({(lR)-1 -[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila<formula>formula see original document page 51</formula>

A uma mistura de 5-[(2-amino-5-{[(2,2-dimetilpropanoil) óxi]metil} fenil) amino]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil}-óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila (2,27 g, 4,13 mmol) em ortoformato de trietila (10 mL,60,2 mmol) e DCM (3 mL) foi adicionado p-toluenossulfonato de piridínio(100 mg, 0,4 mmol). A reação foi agitada a 40 0C durante 1 h, então resinadaem temperatura ambiente. A mistura de reação completa foi carregada sobresílica gel e purificada por cromatografia de sílica gel eluindo com umgradiente de 0 a 50% de EtOAc/hexanos para dar 2,0 g (86%) do compostotitular como um sólido castanho claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ8,65 (s, 1H), 7,99 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,75 - 7,80 (m, 2H), 7,72 (d, 1H, J =7,87 Hz), 7,63 (s, 1H), 7,53 (t, 1H, J = 7,60 Hz), 7,40 (s, 1H), 7,35 (d, 1H, J =8,42 Hz), 5,96 (q, 1H, J = 6,10 Hz), 5,21 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 1,65 (d, 3H, J =6,23 Hz), 1,16 (s, 9H); MS (ESI): 561 [M+H]+.

Etapa G - 5-[6-(Hidroximetil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etilj óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila<formula>formula see original document page 51</formula>Em uma solução agitada de 5-(6-{[(2,2-dimetilpropanoil) óxi]metil} -1 H-benzimidazol-l-il)-3-({(lR)-1 -[2-(trifluorometil) fenil] etil) óxi)tiofeno-2-carboxilato de metila (5,21 g, a partir de uma batelada diferenteusando procedimento análogo ao exemplo 1, via 1, etapa F, 9,30 mmol) emMeOH (24 mL) foi adicionado 0,5M de hidróxido de sódio em MeOH (24,0mL, 12 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 72 h,então resfriada bruscamente com ácido acético (2 mL). A mistura foi diluídacom DCM (350 mL) e solução de salmoura aquosa meio-saturada (150 mL).

A camada orgânica foi extraída com DCM (250 mL). Os orgânicoscombinados foram secados sobre MgSO4 e concentrados sob vácuo para dar4,40 g (99%) do composto titular como um sólido amarelo claro. 1H RMN(400 MHz5 DMSO-Cl6): δ 8,58 (s, 1H), 7,99 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,69-7,81(m, 3H), 7,51-7,58 (m, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,30 (d, 1H, J = 8,42), 5,96 (q, 1H, J- 6,10 Hz), 5.30 (t, 1H, J = 5,77 Hz) 4.62 (d, 2H, J = 5,86 Hz), 3,83 (s, 3H),1,65 (d, 3H, J = 6,23 Hz); MS (ESI): 477 [M+H]+.

Etapa H - 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} όχι) tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 52</formula>

Em uma solução agitada de 5-[6-(hidroximetil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila (1,47 g, 3,08 mmol) e trifenilfosfina (1,05 g, 4,01 mmol)em DCM (30 mL) foi adicionada N-clorossuccinimida (0,53 g, 4,01 mmol). Areação foi então aquecida a refluxo e agitada durante 20 minutos, entãoresfriada em temperatura ambiente. A reação foi diluída com DCM (400 mL)e solução de salmoura aquosa meio- saturada (150 mL). A camada orgânicafoi então extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foramsecadas sobre Na2SO4, concentradas sob vácuo e purificadas porcromatografia de sílica gel eluindo com um gradiente de 10 a 60% deEtOAc/hexanos para dar 1,4 g (92%) do composto titular como um sólidobranco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,65 (s, 1H), 7,99 (d, 1H, J = 7,87Hz), 7,72-7,81 (m, 3H), 7,69 (s, 1H), 7,54 (t, 1H, J = 7,69 Hz), 7,43 (d, 1H, J= 8,42), 7,38 (s, 1Η), 5,97 (q, 1H, J = 6,10 Hz), 4,91 (s, 2H), 3,84 (s, 3H),1,66 (d, 3H, J = 6,23 Hz); MS (ESI): 495 [M+H]+.

Etapa I - 5-{6-[(Metiltio) metil] -lW-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} όχι) tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 53</formula>

A uma mistura agitada de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxilato demetila (200 mg, 0,40 mmol) em N,N-dimetilformamida (2,5 mL) foiadicionado tiometóxido de sódio (37 mg, 0,52 mmol). A reação foi agitada 30min, então diluída com EtOAc, lavada com água (5x), salmoura, secada sobreNa2SC>4, concentrada sob vácuo e purificada por cromatografia de sílica geleluindo com um gradiente de 0 a 60% de EtOAc/hexanos para dar 147 mg(72%) do composto titular como um sólido branco. MS (ESI): 507 [M+H]+.

Etapa J - 5-{6-[(Metiltio) metil] -lH-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-l-[2-(trtfluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 53</formula>

Uma mistura de 5-{6-[(metiltio) metil] -lH-benzimidazol-1-il}-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxilato demetila (144,0 mg, 0,28 mmol) e 7N de amônia em MeOH (18 mL, 126,0mmol) foi adicionada em um frasco de vidro de reação de pressão elevada. Ofrasco foi vedado, então aquecido a 80 0C durante aproximadamente 16 h. Ofrasco foi resfriado em temperatura ambiente, aberto, e a mistura de reaçãoconcentrada sob vácuo, então purificada por cromatografia de sílica gel,eluindo com um gradiente de 0 a 3% de MeOH/DCM com 1% de hidróxidode amônio para dar 130 mg (93%) do composto titular como um sólido deouro branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-fife): δ 8,49 (s, 1H), 7,93 (d, 1H, J =7,68 Hz), 7,85 (br s, 1H), 7,80 - 7,75 (m, 2H), 7,69 (d, 1H, J= 8,23 Hz), 7,56(t, 1H, J = 7,68 Hz), 7,39 (s, 1H), 7,29 (d, 1H, J = 8,42 Hz), 7,15 (br s, 1H),7,08 (s, 1H), 5,94 (m, 1H), 3,79 (s, 2H), 1,93 (s, 3H), 1,75 (d, 3H, J= 6,22Hz); MS (ESI): 492 [M+H]+.

Etapa K - 5-{6-[(Metilsulfonil) metil] -lH-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etilj όχι) tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 54</formula>

A uma solução agitada, resfriada (-10 0C) de 5-{6-[(metiltio)metil] -1 H-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-1 -[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi)tiofeno-2-carboxamida (76 mg, 0,15 mmol) em DCM (3,0 mL) foi adicionadoácido m-cloroperoxibenzóico (70 mg, 0,31 mmol). A reação foi agitada 30min, aquecida em temperatura ambiente e agitada 15 min, então foiconcentrada sob vácuo. O resíduo foi diluído com clorofórmio e lavado comNaHCOs aquoso saturado, água, secado sobre Na2SO^ concentrado sobvácuo, e purificado por cromatografia de sílica gel eluindo com um gradientede 0 a 5% de MeOH/DCM, com 1% de hidróxido de amônio, para dar 78 mg(96%) do composto titular como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz,DMSOd6): δ 8,57 (s, 1H), 7,95 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,85 (br s, 1H), 7,80 -7,73 (m, 3H), 7,69 (s, 1H), 7,55 (t, 1H, J = 7,69 Hz), 7,38 (d, 1H, J = 8,42Hz), 7,19 (s, 1H), 7,12 (br s, 1H), 5,95 - 5,89 (m, 1H), 4,61 - 4,58 (m, 2H),2,89 (s, 3H), 1,75 (d, 3H, J = 6,04 Hz); MS (ESI): 524 [M+H]+.Via 2:

Etapa A — 5-{6-[(Metilsulfonil) metil] -lH-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 55</formula>

Uma mistura de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila(4,53 g, de uma batelada diferente usando procedimento análogo ao exemplo1, via 1, etapa H, 9,17 mmol), sal de sódio de ácido metanossulfônico (2,81 g,27,5 mmol) e etanol (40,0 mL) foi adicionada em um frasco de vidro dereação de pressão elevada. O frasco foi vedado, então aquecido a 85 0Cdurante aproximadamente 16 h. O frasco foi resinado em temperaturaambiente, aberto , e a mistura de reação concentrada sob vácuo, entãopurificada por cromatografia de sílica gel, eluindo com um gradiente de 5 a35% de EtOAc/hexano para dar 4,54 g (92%) do composto titular como umsólido amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-J6): δ 8,67 (s, 1H), 8,01 (d,IH,J = 7,87 Hz), 7,82 - 7,70 (m, 4H), 7,53 (t, 1H, J = 7,69 Hz), 7,45 (s, 1H),7,40 (d, 1H, J= 8,42 Hz), 5,95 (m, 1H), 4,63 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 2,90 (s,3H), 1,65 (d, 3H, J= 6,204 Hz); MS (ESI): 539 [M+H]+.

Etapa B - 5-{6-[(Metilsulfonil) metil] -lH-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 55</formula>

Uma mistura de 5-{6-[(metilsulfonil) metil] -IH-benzimidazol- l-il}-3-({(l R)-1 - [2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (4,53 g, 8,42 mmol) e 7N de amônia em MeOH(250,0 mL, 1,75 mol) foi adicionada em um frasco de vidro de reação depressão elevada. O frasco foi vedado, então aquecido a 85 0C duranteaproximadamente 36 h. O frasco foi resfriado em temperatura ambiente,aberto , e a mistura de reação combinada com uma segunda batelada de 5-{6-[(metilsulfonil) metil] -1 H-benzimidazol-1 -il} -3-({(1R)-1 -[2-(trifluorometil)fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (4,11 g, 7,63 mmol), quetambém foi tratado com 7N de amônia em MeOH (200,0 mL, 1,40 mol) emum frasco de vidro de reação de pressão elevada a 85 0C duranteaproximadamente 36 h, então resfriada em temperatura ambiente e aberto. Asmisturas de reação combinadas foram concentradas sob vácuo, entãopurificadas por cromatografia de sílica gel, eluindo com um gradiente de 0 a5% de MeOH/DCM, com 1% de hidróxido de amônio, para dar 7,47g (89%)do composto titular como um sólido branco indefinido. MS (ESI): 524[M+H]+.

Exemplo 2: 3-U(lR)-l-(2-C\orofemY) etil! óxi)-5-{6-["(metilsulfonil) metil] -1 /7-benzimidazol-1 -il} -2-tiofenocarboxamida

<formula>formula see original document page 56</formula>

Etapa A - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] òxi}-5-{6-[(metiltio)metil] -1 H-benzimidazol-l-il}tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 56</formula>

O composto titular foi preparado a partir de 5-[6-(clorometil)-1 H-benzimidazol-1 -il] -3- {[(1R)-1 -(2-clorofenil) etil] óxi} tiofeno-2-carboxilato de metila por um procedimento análogo ao exemplo 1, via 1,etapa I. MS (ESI): 473 [M+H]+.

Etapa B - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] òxi}-5-{6-[(metiltio)metil] -lH-benzimidazol-l-il} tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 57</formula>

O composto titular foi preparado a partir de 3-{[(IR)-I-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(metiltio) metil] -lH-benzimidazol-l-il} tiofeno-2-carboxilato de metila por um procedimento análogo ao exemplo 1, via 1,etapa J. 1H RMN (400 MHz, DMSO-(I6): δ 8,53 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,71 -7,66 (m, 2H), 7,49 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,45 - 7,35 (m, 3H), 7,29 (d, 1H, J =8,42 Hz), 7,16 - 7,11 (m, 2H), 6,01 - 5,95 (m, 1H), 3,82 (s, 2H), 1,94 (s, 3H),1,73 (d, 3H, J= 6,41 Hz); MS (ESI): 458 [M+H]+.

Etapa C - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] òxi}-5-{6-[(metilsulfonil) metil] -lH-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxamida

<formula>formula see original document page 57</formula>

Exemplo de intermediário 3il)-3-hidróxi-2-tiofenocarboxilato de metila<formula>formula see original document page 58</formula>

Etapa A - 5-(6-Bromo-lH-benzimidazol-l-il)-3-{[(l,l-dimetiletil) (dimetil) silil] óxij-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 58</formula>

A uma mistura de 5-bromo- l/f-benzimidazol (43,78 g, 222,0mmol) em clorofórmio (800 mL) foi adicionado N-metilimidazol (44,5 mL,560,0 mmol), seguido por 2-cloro-3-oxo-2,3-dihidro-2-tiofenocarboxilato demetila (44,8 g, 233,0 mmol). A reação foi agitada 20 h em temperaturaambiente, então N-metilimidazol (18,0 mL, 226,0 mmol) foi adicionado,seguido por cloreto de t-butildimetilsilila (36,8 g, 245,0 mmol). A reação foiagitada 1 h, então resfriada bruscamente com MeOH e despejada em DCM eágua. A camada orgânica foi extraída com DCM (3x). Os orgânicoscombinados foram então secados sobre Na2SO^ concentrados ecromatografados em sílica gel, eluindo com um gradiente de 50 a 75% de25% de EtOAc em hexano/hexano para dar 25,18 g (24%) do compostotitular. MS (ESI): 467 [M+H]+.

Etapa B - 5-(6-Bromo-lH-benzimidazol-l-il)-3-hidróxi-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 58</formula>

Em uma solução agitada de 5-(6-bromo-l//-benzimidazol-l-il)-3-{[(1,1 -dimetiletil) (dimetil) silil] óxi}-2-tiofenocarboxilato de metila(25,18 g, 53,9 mmol) em THF (540,0 mL) foi adicionado fluoreto detetrabutilamônio 1,0M em THF (60,0 mL, 60,0 mmol). A reação foi agitada1,5 h então NH4Cl aquoso saturado foi adicionado (200 mL). A suspensãoresultante foi agitada 15 min então diluída com água (750 mL) e EtOAc (1,0L). A camada orgânica foi separada e seu pH ajustado a 3,0 por adição de IMde HCl aquoso. A camada orgânica foi então extraída com EtOAc (3x). Ascamadas orgânicas combinadas foram lavadas com 0,1M de HCl aquoso,salmoura, secadas sobre MgSO4 e concentradas sob vácuo para dar 19,4 g(100%) do composto titular como um sólido amarelo claro. MS (ESI): 353[M+H]+.

Exemplo 3: 5-{6-["(4-Metilpiperazin-l-iO metill -IH-benzimidazol-l-il I-3-((IR)-I-P-Ctrifluorometil) fenil] etóxi) tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 59</formula>

Via 1:

Etapa A - 5-(6-Bromo-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(lR)-l-[2-(trtfluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de 3-metila

<formula>formula see original document page 59</formula>

Uma suspensão de trifenilfosfina suportada em polímero (53,0g, 2,04 mmol/g, 108 mmol), (lS)-l-[2-(trifliioiOmetil) fenil]etanol (15,4 g,81,0 mmol), e 5-(6-bromo- l/Z-benzimidazol-1 -il)-3 -hidroxitiofeno-2-carboxilato de metila (exemplo de intermediário 3) (19,0 g, 53,9 mmol) emDCM (750 mL) foi agitada em temperatura ambiente, durante 10 min. Asuspensão foi então tratada com azodicarboxilato de di-ferc-butila (24,8 g,108 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 3 h, então despejadaatravés de um filtro de papel, lavando os sólidos de resina com DCM eMeOH. O filtrado foi concentrado sob vácuo e purificado por cromatografiade sílica gel, eluindo com um gradiente de 5 a 50% de EtOAc/hexano para dar23,8 g (84%) do composto titular como um sólido amarelo claro. 1H RMN(400 MHz, DMSO-J6): δ 8,63 (s, 1H), 7,97 (d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,80 - 7,71(m, 3H), 7,65 (d, 1H, J= 1,65 Hz), 7,57 - 7,48 (m, 2H), 7,35 (s, 1H), 5,99 (q,IH,J = 5,98 Hz), 3,83 (s, 3H), 1,65 (d, 3H, J = 6,04 Hz); MS (ESI): 525[M+H]+.

Etapa B - 3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi}-5-(6-viníl-lH-benzimidazol-l-il)tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 60</formula>

A uma mistura de 3-metil-5-(6-bromo-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato (23,8 g, 45,4mmol), trifluoroborato de potássio de vinila (7,25 g, 54,5 mmol) e trietilamina(6,3 mL, 45,4 mmol), agitada em temperatura ambiente em n-propanol (23015 mL) foi adicionado complexo de diclorometano de [1,1'-bis (difenilfosfino)-ferroceno] dicloropaládio (II) (750 mg, 0,91 mmol). A mistura foi entãoaquecida a refluxo e agitada durante 3 h, então resfriada em temperaturaambiente, despejada em água e extraída com EtOAc (3x). As camadasorgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre MgS04,concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia de sílica gel, eluindocom um gradiente de 10 a 40% de EtOAc/hexano para dar 17,06 g (80%) docomposto titular como um sólido de espuma amarelo. 1H RMN (400 MHz,DMSO-J5): δ 8,59 (s, 1H), 7,98 (d, 1H, J= 7,87 Hz), 7,80 - 7,71 (m, 3H),7,59 (s, 1H), 7,56 - 7,52 (m, 2H), 7,39 (s, 1H), 6,85 (dd, 1H, J= 10,98 e 17,75Hz), 6,00 (q, 1H, J= 6,10 Hz), 5,86 (d, IH,J = 17,56 Hz), 5,31 (d, 1H, J =10,98 Hz), 3,83 (s, 3Η), 1,65 (d, 3H, J= 6,04 Hz); MS (ESI): 473 [M+H]+.

Etapa C - 5-[6-(l,2-dihidroxietil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-{(lR)-l-[2-(trtfluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 61</formula>

Em uma solução agitada de 3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil]etóxi}-5-(6-vinil-lH-benzimidazol-l-il) tiofeno-2-carboxilato de metila(17,06 g, 36,1 mmol) em 360 mL de acetona/água (3:1) foi adicionado N-óxido de 4-metilmorfolina (5,1 g, 43,4 mmol) seguido por 2,5% em peso desolução de tetróxido de ósmio em 2-metil-2-propanol (10,0 mL, 0,8 mmol). Areação foi agitada em temperatura ambiente durante 18 h, então resinadabruscamente com sulfito de sódio aquoso (saturado). A mistura foi extraídacom EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas comsalmoura, secadas sobre MgSC>4, concentradas sob vácuo e purificadas porcromatografia de sílica gel, eluindo com um gradiente de 1 a 8% deMeOH/DCM com 1% de hidróxido de amônio para dar 16,72 g (92%) docomposto titular como um sólido de espuma amarela clara. 1H RMN (400MHz, DMSCM,): δ 8,59 (d, 1H, J= 1,46 Hz), 7,98 (d, IH,/= 7,87 Hz), 7,80- 7,68 (m, 3H), 7,59 - 7,52 (m, 2H), 7,36 - 7,31 (m, 2H), 5,95 (q, 1H, J= 6,10Hz), 5,37 (t, 1H, J= 3,66 Hz), 4,76 - 4,64 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,46 - 3,42(m, 2H), 1,65 (d, 3H, J= 6,04 Hz); MS (ESI): 507 [M+H]+.

Etapa D - 5-(6-Formil-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 61</formula>A uma solução de 5-[6-( 1,2-dihidroxietil)-1 H-benzimidazol-1 -il]-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila(16,72 g, 33,0 mmol) em 1:1:1 DCM/água/MeOH (220 mL) foi adicionadoperiodato de sódio (10,58 g, 49,5 mmol). A suspensão resultante foi agitadadurante 1 h, então foi diluída com água e EtOAc. A camada orgânica foiextraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadascom salmoura, secadas sobre MgSÜ4 e concentradas sob vácuo para dar 14,76g (94%) do composto titular como um sólido de espuma amarela clara. 1HRMN (400 MHz, DMSO-^5): δ 10,09 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,027,89 (m, 3H), 7,81 - 7,72 (m, 2H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 5,98 (q, 1H, J= 6,10Hz), 3,84 (s, 3H), 1,66 (d, 3H, J= 6,22 Hz); MS (ESI): 475 [M+H]+.

Etapa E - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il) metil] -IH-benzimidazol-l-il}-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila<formula>formula see original document page 62</formula>A uma solução agitada de 5-(6-formil-l H-benzimidazol-1-il)-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila(14,76 g, 31,1 mmol), n-metilpiperazina (5,72 mL, 62,3 mmol) e ácido acético(2,1 mL, 37,4 mmol) em dicloroetano (150 mL) foi adicionadotriacetoxiborohidreto de sódio (9,9 g, 46,7 mmol). A reação foi agitadadurante 1,5 h, então 5% de K2CO3 aquoso foi adicionado até o pH foiaproximadamente 8. A mistura foi então diluída com EtOAc e água. Acamada orgânica foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicascombinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre Na2SO^concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia de sílica gel, eluindocom um gradiente de 1 a 8% de MeOH/DCM com 1% de hidróxido deamônio para dar 15,82 g (91%) do composto titular como um sólido deespuma amarela clara. 1H RMN (400 MHz5 DMSO-J5): δ 8,57 (s, 1H), 7,98(d, 1H, J = 7,87 Hz), 7,80 - 7,68 (m, 3H), 7,54 (t, 1H, J = 7,59 Hz), 7,46 (s,1H), 7,33 - 7,28 (m, 2H), 5,97 (q, 1H, J= 6,16 Hz), 3,83 (s, 3H), 3,55 (s, 2H),2,45 - 2,20 (m, 8H), 2,13 (s, 3H), 1,66 (d, 3H, J= 6,04 Hz); MS (ESI): 559[M+H]+.

Etapa F - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-ü) metil] -IH-benzimidazol-l-il}-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 63</formula>

Uma mistura de 5-{6-[(4-metilpiperazin-l-il) metil] -IH-benzimidazol-l-il}-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila (15,82 g, 28,35 mmol) e 7N de amônia em MeOH (250mL, 1,75 mol) foi adicionada em um frasco de vidro de reação de pressãoelevada. O frasco foi vedado, então aquecido a 80 0C duranteaproximadamente 40 h. O frasco foi resfriado em temperatura ambiente,aberto, e a mistura de reação concentrada sob vácuo, então purificada porcromatografia de sílica gel, eluindo com um gradiente de 2 a 8% deMeOHZDCM com 1% de hidróxido de amônio para dar 14,11 g (92%) docomposto titular como um sólido de espuma branca. Ή RMN (400 MHz,DMSO-J6): δ 8,49 (s, 1H), 7,93 (d, 1H, J= 7,87 Hz), 7,86 (br s, 1H), 7,80 -7,75 (m, 2H), 7,68 (d, IH,J = 8,23 Hz), 7,56 (t, 1H, J= 7,68 Hz), 7,33 (s,1H), 7,28 (d, 1H, J= 8,42 Hz), 7,15 (br s, 1H), 7,06 (s, 1H), 5,94 (q, 1H, J =6,10 Hz), 3,52 (s, 2H), 2,45 - 2,20 (m, 8H), 2,13 (s, 3H), 1,74 (d, 3H, J= 6,22Hz); MS (ESI): 544 [M+H]+.

Via 2:EtapaA - 2-bromo-4-{[(metilóxi) metil] òxi}-l-nitrobenzeno

<formula>formula see original document page 64</formula>

Uma solução de 3-bromo-4-nitrofenol (20,0 g, 91,7 mmol) emDCM (475 mL) foi agitada a 0 0C. Diisopropiletilamina (19,2 mL, 110,0mmol) foi adicionado, seguido pela adição em gotas de uma solução de éterclorometil metílico (7,7 mL, 100,9 mmol) em DCM (25 mL). A reação foiagitada a 0 0C durante 1 h, então aquecida em temperatura ambiente eresfriada bruscamente com água (150 mL). A mistura foi despejada emsalmoura (150 mL) e a camada aquosa extraída com EtOAc (3x). As camadasorgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre MgS04,concentradas sob vácuo e cromatografadas em sílica gel (330 g), eluindo comum gradiente de 0 a 25% de EtOAc/hexano para dar 20,0 g (83%) docomposto titular como um óleo laranja claro. 1H RMN (400 MHz, DMSOd6):δ 8,07 (d, 1H, J= 8,97 Hz), 7,50 (d, IH,J= 2,20 Hz), 7,21 (dd, IH,J= 8,97 e2,38 Hz), 5.34 (s, 2H), 3,39 (s, 3H).

Etapa B - 5-[(5-{[(Metilóxi) metil] òxi}-2-nitrofenil) amino]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etilj όχι) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 64</formula>

A uma solução agitada de 5-amino-3-({(li?)-l-[2-(trifluorometil) fenil] -etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (1,32 g, 3,82mmol) e 2-bromo-4-{[(metilóxi) metil] óxi}-l-nitrobenzeno (1,0 g, 3,82mmol) em dioxano (20 mL) foi adicionado tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (70,0 mg, 0,076 mmol) e XANTFOS (97,0 mg, 0,17 mmol)seguido por carbonato de césio (6,2 g, 19,0 mmol). A mistura foi aquecida a60 °C e agitada durante 12 h, então resfriada em temperatura ambiente,diluída com EtOAc e filtrada através de Celite, lavando os sólidos comEtOAc e DCM. O filtrado foi concentrado sob vácuo e cromatografado emsílica gel (120 g), eluindo com um gradiente de 5 a 35% de EtOAc/hexanopara dar 1,64 g (82%) do composto titular como um óleo vermelho. 1H RMN(400 MHz, DMSO-J6): δ 9,85 (s, 1H), 8,12 (d, 1H, J= 9,33 Hz), 7,90 (d, 1H,J = 7,87 Hz), 7,74 (m, 2H), 7,53 (t, 1H, J= 7,68 Hz), 6,84 (d, 1H, J= 2,56Hz), 6,73 - 6,68 (m, 2H), 5,77 - 5,72 (m, 1H), 5,23 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,37(s, 3H), 1,58 (d, 3H, J= 6,22 Hz); MS (ESI): 527 [M+H]+.

Etapa C - 5-(6-{[(metilóxi) metil] óxij-lH-benzimidazol-J-il)-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 65</formula>

Em um frasco de reação de hidrogenação de pressão elevadafoi adicionado 5-[(5-{[(metilóxi) metil] óxi}-2-nitrofenil) amino]-3-(((IR)-I-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (2,0 g, 3,8mmol), p-tolueno sulfonato de piridínio (95,0 mg, 0,38 mmol), 5% em pesode platina em carbono (sulfurada) (740 mg, 0,19 mmol) e ortoformato detrimetila (40 mL). O frasco foi purgado com N2 (gás) vácuo (3x), então comH2 (gás) /vácuo (3x). Gás de H2 foi então aplicado a 3,5 kg/cm2 durante 3 h.

A mistura de reação foi então filtrada através de Celite, lavando os sólidoscom EtOAc e DCM. O filtrado foi então concentrado sob vácuo a 1,92 g(100%) do composto titular como um sólido de espuma amarela clara. 1HRMN (400 MHz, DMSO-J6): δ 8,49 (s, 1H), 7,98 (d, 1H, J= 8,05 Hz), 7,79 -7,66 (m, 3H), 7,53 (t, 1H, J= 7,59 Hz), 7,35 (s, 1H), 7,22 (d, 1H, J= 2,20Hz), 7,06 (dd, 1H, J= 8,78 e 2,20 Hz) 5,97 (q, 1H, J= 6,04 Hz), 5,23 (s, 2H),3,83 (s, 3Η), 3,39 (s, 2Η), 1,65 (d, 3Η, J= 6,22 Hz); MS (ESI): 507 [M+H]+.

Etapa D - 5-(6-Hidròxi-lH-benzimidazol-l-il)-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} όχι) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 66</formula>

A uma solução agitada de 5-(6-{[(metilóxi) metil] óxi}-IH-benzimidazol-1 -il)-3 -( { (1R)-1 - [2-(trífluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (8,18 g, uma batelada diferente usandoprocedimento análogo ao exemplo 3, via 2, etapa C, 16,16 mmol) em 1:1THF/MeOH (130 mL) foi adicionado IN HCl in água (65 mL, 65,0 mmol). Amistura de reação foi aquecida a 35 0C e agitada durante 72 h então resfriadaem temperatura ambiente. A reação foi despejada em DCM (500 mL) eadicionado água (100 mL). A mistura foi neutralizada a pH 7 por adição deNaHCC>3 aquoso (saturado). A camada orgânica foi então extraída com DCM(Ix) e EtOAc (lx). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobreMgSC>4, concentradas sob vácuo, e cromatografadas em sílica gel (120 g),eluindo com um gradiente de 10 a 60% de EtOAc/hexano para dar 6,9 g(92%) do composto titular como um sólido de espuma incolor salmão claro.1H RMN (400 MHz, DMSO-J6): δ 9,62 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,00 (d, IH,J =7,87 Hz), 7,80 - 7,71 (m, 2H), 7,56 - 7,51 (m, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,05 (d, 1H, J= 2,01 Hz), 6,81 (dd, 1H, J = 8,70 e 2,11 Hz) 5,95 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 1,64(d, 3H, J= 6,23 Hz); MS (ESI): 463 [M+H]+.

Etapa E - 3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -5-(6-{[(trifluorometil) sulfonil] óxi}-lH-benzimidazol-1 -il)-2-tiofenocarboxilato demetila<formula>formula see original document page 67</formula>

A uma solução agitada, resfriada (O0C) de 5-(6-hidróxi-lH-benzimidazol-l-il)-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (2,49 g, 5,38 mmol) e n-feniltriofluorometanosulfonamida (2,06 g, 5,76 mmol) em DCM (30 mL) foi adicionadadiisopropiletilamina (2,0 mL, 11,5 mmol). A reação foi deixada aquecer emtemperatura ambiente e agitada durante 12 h. A mistura de reação foi entãoconcentrada sob vácuo, e cromatografadas em sílica gel (120 g), eluindo comum gradiente de 5 a 40% de EtOAc/hexano para dar 3,12 g (98%) docomposto titular como um sólido amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,76 (s, 1H), 8,01 - 7,94 (m, 2H), 7,80 - 7,70 (m, 3H), 7,56 - 7,43 (m,3H), 5,98 (q, 1H, J = 6,10 Hz), 3,84 (s, 3H), 1,65 (d, 3H, J = 6,22 Hz); MS(ESI): 595 [M+H]+.

Etapa F - 3-{(lR)-l-[2-(Trifluorometil) fenil] etòxi}-5-(6-vinil-lH-benzimidazol-l-il) tiofeno-2-carboxilato

<formula>formula see original document page 67</formula>

A uma mistura de 3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil}óxi) -5-(6-{[(trifluorometil) sulfonil] óxi}-lH-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato de metila (20,69g, de uma batelada diferente usandoprocedimento análogo ao exemplo 3, via 2, etapa E, 34,83 mmol),viniltrifluoroborato de potássio (5,6 g, 42,10 mmol) e trietilamina (4,85 mL,34,86 mmol), agitada em temperatura ambiente em n-propanol (175 mL) foiadicionado complexo de diclorometano de [1,1'-bis (difenilfosfino)-ferroceno] dicloropaládio (II) (570 mg, 0,70 mmol). A mistura foi entãoaquecida a refluxo e agitada durante 3 h, então resfriada em temperaturaambiente, despejada em água e extraída com EtOAc (3x). As camadasorgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre MgS04,concentradas sob vácuo e purificadas por cromatografia de sílica gel, eluindocom um gradiente de 10 a 50% de EtOAc/hexano para dar 12,98 g (79%) docomposto titular como um sólido de espuma branca amarela. MS (ESI): 473

Etapa G - 5-[6-(l,2-Dihidroxietil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila<formula>formula see original document page 68</formula>O composto titular pode ser preparado por um procedimentoanálogo ao exemplo 3, via 1, etapa C.

Etapa H - 5-(6-Formil-lH-benzimidazol-l-il)-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila

O composto titular pode ser preparado por um procedimentoanálogo ao exemplo 3, via 1, etapa D.

Etapa I - 5-{6-[(4-metilpiperazin-l-il) metil] -IH-benzimidazol-l-il}-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxilato de metila[M+H]+.<formula>formula see original document page 69</formula>

O composto titular pode ser preparado por um procedimentoanálogo ao exemplo 3, via 1, etapa E.

Etapa J - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il) metil] -IH-benzimidazol-l-il}-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxij tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 69</formula>

O composto titular pode ser preparado por um procedimentoanálogo ao exemplo 3, via 1, etapa F.

Via 3:

Etapa A - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il) metil] -1 Η-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxilato de metila

<formula>formula see original document page 69</formula>

A uma solução agitada de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) tiofeno-2-carboxilato demetila (150 mg, 0,30 mmol) em dioxano (1,0 mL) foi adicionada N-metilpiperazina (50 jjL, 0,45 mmol). A reação foi aquecida a 60 0C durante 18h, resfriada em temperatura ambiente e concentrada sob vácuo. O resíduo foidissolvido em EtOAc e água. A camada orgânica foi extraída com EtOAc. Ascamadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobresulfato de sódio, concentradas sob vácuo, e purificadas por cromatografia desílica gel eluindo com um gradiente de 0 a 10% de MeOH/DCM, com 1% dehidróxido de amônio, para dar 134 mg (79%) do composto titular como umsólido branco. MS (ESI): 559 [M+H]+.

Etapa B - 5-{6-[(4-Metilpiperazin-l-il) metil] -IH-benzimidazol-l-il}-3-{(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxamida

Via 4:

Etapa A - 4-[Bis(metilóxi) metil] -2-bromo-l-nitrobenzeno

<formula>formula see original document page 70</formula>

Uma solução de 3-bromo-4-nitrobenzaldeído (7,97 g, 34,6mmol), que foi preparada em um modo análogo no procedimento da literatura(Katritzky, A. R.; Xie, L. Tetrahedron Letters 1996, 37, 347 - 350),ortoformato de trimetila (11,4 mL, 104 mmol), e hidrato de ácido p-toluenossulfônico (329 mg, 1,73 mmol) em MeOH (69 mL) foi refluxadodurante 3 h. A reação foi então resinada bruscamente por adição de hidróxidode amônio aquoso saturado (1 mL) e concentrada sobre sílica gel. Purificaçãopor cromatografia de coluna (10 a 25% de EtOAc:hexanos) deu 8,76 g (92%)do composto titular como um óleo laranja. 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ7,89 (m, 2Η), 7,59 (m, 1Η), 5,47 (s, 1Η), 3,38 (s, 6Η).

Etapa B - 5-({5-[Bis(metilóxi) metil] -2-nitrofenil} amino)-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometíl) fenil] etil} όχι) -2-tiofenocarboxilato de metila

Uma solução de tris(dibenzilidenoacetona) dipaládio (0) (117mg, 0,127 mmol), 9,9-dimetil-4,5-bis(difenilfosfmo)xanteno (162 mg, 0,280mmol), 5-amino-3-({(li?)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (2,31 g, 6,69 mmol), 4-[bis(metilóxi) metil] -2-bromo-l-nitrobenzeno (1,76 g, 6,37 mmol), e carbonato de césio (10,39 g,31,89 mmol) em 1,4-dioxano (25 mL) foi preparada em um frasco de fundoredondo sob N2. O frasco foi evacuado e reabastecido três vezes com N2 eentão agitado a 60 0C durante 16 h. A mistura de reação foi então diluída comtetrahidrofurano (100 mL) e concentrada sobre sílica gel. Purificação porcromatografia de coluna (5 a 75% de EtOAc:hexanos) deu 2,79 g (81%) docomposto titular como uma espuma vermelha. 1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ9,63 (br s, 1H), 8,21 (m, 1H), 7,94 (m, 1H), 7,62 (m, 2H), 7,48 (s, 1H), 7,40(m, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,73 (q, 1H, J = 6,2 Hz), 3,88 (s, 3H),3,34 (s, 1H), 3,31 (s, 3H), 3,28 (s, 3H), 1,72 (d, 3H, J = 6,2 Hz); MS (ESI):541 [M+H]+.

Etapa C — 5-{6-[Bis(metilóxi) metil] -1 K-benzimidazol-1 -ilj-3-({(l~R)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 71</formula>

A uma solução de 5-({5-[bis(metilóxi) metil] -2-nitrofenil} amino)-3 -({{\R)-\- [2-(trifluorometi 1) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (2,71 g, 5,01 mmol) em ortoformato de trimetila(50 mL) em um frasco Fischer-Porter foi adicionado p-toluenossulfonato depiridínio (126 mg, 0,501 mmol) e platina sulfurada em carbono (5% em pesoPt, 977 mg, 0,250 mmol Pt). A mistura foi hidrogenada em um aparelho dehidrogenação de Fischer-Porter a 3,5 kg/cm2 de hidrogênio até a absorção dehidrogênio ter cessado (17 h). A mistura de reação foi filtrada através de umfiltro de vidro fritado para remover o catalisador, lavando com DCM (75 mL).O eluente foi concentrado para dar 2,61 g (100%) do composto titular brutocomo um óleo laranja, que foi realizado na próxima etapa sem purificação.

EtOAc:hexanos) deu 1,37 g (58%, 2 etapas) do composto titular como umsólido amarelo claro. 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 10,06 (s, 1H), 8,13 (s,1H), 7,96 - 7,88 (m, 4H), 7,72 - 7,61 (m, 2H), 7,44 (m, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,84MS (ESI): 521 [M+H]+.

Etapa D — 5-(6-Form il -1 H-benzim idazol- l-il)-3-({(lR)-l -[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 72</formula>

A uma solução de 5-{6-[bis(metilóxi) metil] -1H-benzimidazol-1 -il} -3 -( { (1R)-1 - [2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato metila bruto (2,61 g, 5,01 mmol) (de etapa C, acima) emacetona (20 mL) e água (5 mL) foi adicionado p-toluenossulfonato depiridínio (126 mg, 0,501 mmol). A reação agitada durante 2 h em temperaturaambiente e foi então despejada em água (30 mL) e NaHC03 aquoso saturado(30 mL). A mistura foi extraída com DCM (2 χ 30 mL). As frações orgânicascombinadas foram secadas sobre sulfato de sódio, filtradas, e concentradassobre sílica gel. Purificação por cromatografia de coluna (30 a 100% de(q, 1H, J = 6,3 Hz), 3,95 (s, 3H), 1,79 (d, 3H, J = 6,3 Hz); MS (ESI): 475[M+H]+.

Etapa E - 5-{6-[(4-Metil-l-piperazinil) metil] -IH-benzimidazol- l-ilj-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} όχι) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 73</formula>

composto titular pode ser preparado por um procedimentoanálogo ao exemplo 3, via 1, etapa E.

Etapa F - 5-{6-[(4-Metilpíperazin-l-il) metil] -IH-benzimidazol-l-il}-3-{(lR)-l-[2-(trtfluorometil) fenil] etóxi} tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 73</formula>

composto titular pode ser preparado por um procedimentoanálogo ao exemplo 3, via 1, etapa F.

Exemplo 4: 3-{rqiO-l-(2-Clorofenin etill όχί)-5-{6-Γ(4-metilpiperazin-l-il) metill - !//-benzimidazol- 1-il} tiofeno-2-carboxamida

<formula>formula see original document page 73</formula>

Etapa A - 3-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-[(5-{[(2,2-dimetilpropanoil) óxij metil} -2-nitrofenil) aminoJ-2-tiofenocarboxilato demetila<formula>formula see original document page 74</formula>

Uma mistura de 2,2-dimetilpropanoato de (4-nitro-3-{[(trifluorometil) sulfonil] óxi} fenil) metila (1,0 g, 2,59 mmol), 5-amino-3-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etil] óxi}-2-tiofenocarboxilato de metila (exemplo deintermediário 2) (860 mg, 2,75 mmol), tris(dibenzilidenoacetona) dipaládio(0) (70,0 mg, 0,076 mmol), e XANTFOS (90,0 mg, 0,16 mmol) foiadicionado tolueno (7,0 mL). A agitação foi começada, seguido pela adiçãode carbonato de césio (2,95 g, 9,1 mmol). A reação foi aquecida a 60 0C eagitada durante 30 min, então resfriada em temperatura ambiente, diluída comEtOAc e filtrada através de Celite, lavando os sólidos com EtOAc e DCM. Ofiltrado foi concentrado sob vácuo e cromatografado em sílica gel (40 g),eluindo com um gradiente de 5 a 15% de acetona/hexano para dar 920 mg(65% de) do composto titular como um sólido vermelho. 1H RMN (400 MHz,DMSO-J6): δ 9,77 (s, 1H), 8,09 (d, 1H, J = 8,61 Hz), 7,63 (dd, 1H, J = 7,69 e1,65 Hz), 7,46 - 7,30 (m, 4H), 7,01 (dd, 1H, J= 8,79 e 1,47 Hz), 6,67 (s, 1H),5,76 - 5,70 (m, 1H), 5,09 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 1,56 (d, 3H, J= 6,23 Hz), 1,14(s, 9H); MS (ESI): 547 [M+H]+.

Etapa B — 5-[(2-Amino-5-{[(2,2-dimetilpropanoil) óxi] metil} -fenil) amino]-3-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etil] òxi}-2-tiofenocarboxilato demetila

<formula>formula see original document page 74</formula>

A um frasco de reação de hidrogenação de pressão elevada foiadicionado 3-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-[(5-{[(2,2-dimetilpropanoil)óxi] metil} -2-nitrofenil) amino]-2-tiofenocarboxilato de metila (6,5 g, deuma batelada diferente usando procedimento análogo ao exemplo 4, etapa A,11,9 mmol), 5% em peso de platina em carbono (sulfurada) (2,2 g, 0,56mmol) e EtOAc (95 mL). O frasco foi purgado com N2 (gás) vácuo (3x),então com H2 (gás) vácuo (3x). Gás hidrogênio foi então aplicado a 3,5kg/cm2 durante 3 h. A mistura de reação foi então filtrada através de Celite,lavando os sólidos com EtOAc e DCM. O filtrado foi então concentrado sobvácuo para dar 5,46 g (89%) do composto titular como um sólido amarelo.MS (ESI): 517 [M+H]+.

Etapa C -3-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-(6-{[(2,2-dimetilpropanoil) óxi] metil} -lH-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato demetila<formula>formula see original document page 75</formula>

Uma mistura agitada de 5-[(2-amino-5-{[(2,2-dimetilpropanoil) óxi] metil} fenil) amino]-3-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etil]óxi}-2-tiofenocarboxilato de metila (5,45 g, 10,5 mmol), p-tolueno sulfonatode piridínio (265 mg, 1,0 mmol) e ortoformato de trietila (15 mL) foiaquecida a 40 0C durante 1 h, então resfriada em temperatura ambiente. Amistura completa foi despejada sobre um cartucho de sílica gel (25 g) epurificada por cromatografia de sílica gel (120 g), eluindo com 100% dehexanos durante 10 min, então um gradiente de 0 a 10% de EtOAc/hexanopara dar 4,71 g (85% de) do composto titular como um sólido amarelo. MS(ESI): 527 [M+H]+.

Etapa D - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[6-(hidroximetil)-lH-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metila<formula>formula see original document page 76</formula>

O composto titular foi preparado a partir de 3-([(IR)-I-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-(6-{[(2,2-dimetilpropanoil) óxi] metil} -IH-benzimidazol-1-il)-2-tiofenocarboxilato de metila por um procedimentoanálogo ao exemplo 1, via 1, etapa G. MS (ESI): 443 [M+H]+.

Etapa E — 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-l-il]-3-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etil] óxij-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 76</formula>

O composto titular foi preparado a partir de 3-([(IR)-I-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-[6-(hidroximetil)-lH-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metila por um procedimento análogo ao exemplo 1, via1, etapa H. MS (ESI): 461 [M+H]+.

Etapa F - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(4-metilpiperazin-l-il) metil] -lH-benzimidazol-l-iljtiofeno-2-carboxílato demetila

<formula>formula see original document page 76</formula>

A uma mistura agitada de 5-[6-(clorometil)-lH-benzimidazol-1 -il]-3- ([(1R)-1 -(2-clorofenil) etil] óxi}-2-tiofenocarboxilato de metila (150mg, 0,32 mmol) em dioxano (1,5 mL) foi adicionada n-metilpiperazina (55uL, 0,49 mmol) e trietilamina (136 uL, 0,97 mmol). A reação foi entãoaquecida a 45 0C durante 18 h, resfriada em temperatura ambiente econcentrada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (125 mL) e água(50 mL). A camada orgânica foi então extraída com EtOAc. As camadasorgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre MgSO4,concentradas sob vácuo e cromatografadas em sílica gel (4 g), eluindo comum gradiente de 0 a 10% de MeOH/DCM, com 1% de hidróxido de amônio,para dar 123 mg (72%) do composto titular como um sólido amarelo claro.MS (ESI): 525 [M+H]+.

Etapa G - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etilj óxi}-5-{6-[(4-metilpiperazin-l-il) metil] -lH-benzimidazol-l-il}tiofeno-2-carboxamída<formula>formula see original document page 77</formula>

O composto titular foi preparado a partir de 3-([(IR)-I-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(4-metilpiperazin-l-il) metil] -lH-benzimidazol-1-il}tiofeno-2-carboxilato de metila por um procedimento análogo ao exemplo3, via 1, etapa F. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 8,52 (s, 1H), 7,83 (s, 1H),7,69 (d, 2H, J = 8,24 Hz), 7,51 - 7,34 (m, 4H), 7,28 (d, 1H, J = 8,24 Hz), 7,1615 - 7,11 (m, 2H), 5,98 (q, 1H, J = 6,35 Hz), 3,55 (s, 2H), 2,42 - 2,22 (m, 8H),2,13 (s, 3H), 1,72 (d, 3H, J = 6,23 Hz); MS (ESI): 510 [M+H]+.

Exemplo de intermediário 4: 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil]óxi}-5-(6-hidróxi- l/Z-benzimidazol-1 -il)-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 77</formula>

Etapa A - 2-Bromo-4-({[4-(metilóxi) fenil] metil} óxi) -I-nitrobenzeno<formula>formula see original document page 78</formula>

2-Bromo-4-fluoro-l-nitrobenzeno (20,0 g, 90,9 mmol) e álcool4-metoxibenzílico (22,7 mL, 182 mmol) foram dissolvidos em DCM (400mL) com agitação. Solução IN de hidróxido de sódio (400 mL) foiadicionada seguido por hidrogenossulfato de tetrabutilamônio (3,09 g, 9,10mmol). A reação foi agitada durante 8 h e despejada em um funil separador.

As camadas foram separadas e o aquoso foi extraído uma vez com DCM euma vez com éter dietílico. As camadas orgânicas combinadas foram secadassobre MgSC>4, filtradas, e concentradas in vácuo. Purificação porcromatografia cintilante deu 28,01 g (91%) do composto titular. 1H RMN(400 MHz, CDCl3): δ 8,03 (d, 1H, J= 9,2 Hz), 7,50 (d, 1H, J= 2,6 Hz), 7,39 -7,34 (m, 2H), 7,17 (dd, 1H, J= 2,7, 9,0 Hz), 6,95 - 6,91 (m, 2H), 5,14 (s, 2H),3,73 (s, 3H).

Etapa B - 3-{[(IR)-I-(2-clorofenil) etil] óxi}-5-{[5-({[4-(metilóxi) fenil] metil} όχι) -2-nitrofenil]amino}-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 78</formula>

2-Bromo-4-({[4-(metilóxi) fenil] metil} óxi) -1-nitrobenzeno(20,19 g, 59,7 mmol) e 5-amino-3-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etil] óxi}-2-tiofenocarboxilato de metila (18,60 g, 59,7 mmol) foram dissolvidos em 1,4-dioxano (500 mL) com agitação em um frasco equipado com um agitadormecânico, condensador de refluxo, e termômetro. A solução foidesgaseificada durante 75 min por borbulhamento de nitrogênio através daagitação da solução. 9,9-Dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)xanteno (1,52 g, 2,63mmol), carbonato de césio (97,26 g, 299 mmol), e tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (1,09 g, 1,19 mmol) foram adicionados. A reação foi aquecida e60 0C e agitada durante 16 h. A reação foi resfriada em temperatura ambientee filtrada através de Celite. O sólido foi lavado com 20% de MeOH em DCM.

O filtrado foi concentrado sobre aproximadamente 200 g de sílica gel. Osólido foi colocado em um funil de vidro fritado e lavado com 10% de EtOAcem DCM. O filtrado foi concentrado a vácuo. Purificação por cromatografiacintilante deu 27,18 g (80%) do composto titular. 1H RMN (400 MHz,CDCl3): δ 9,87 (s, 1H), 8,10 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 7,63 (m, 1H), 7,39 - 7,29 (m,4H), 7,23 (m, 1H), 6,96 - 6,90 (m, 2H), 6,80 (d, 1H, J = 2,6 Hz), 6,75 (s, 1H),6,69 (dd, 1H, J = 2,6, 9,3 Hz), 5,75 (q, IH,J= 6,3 Hz), 5,03 (AB, 2H, Jab =13,2 Hz, Jab = 11,3 Hz), 3,74 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 1,55 (d, 3H, J= 6,4 Hz).

Etapa C - 5-{[2-Amino-5-({[4-(metilóxi) fenil] metil} όχι) -fenil] aminoj-3-{[(lR)-1 -(2-clorofenil) etil] óxij-2-tiofenocarboxUato demetila

<formula>formula see original document page 79</formula>

3 - {[(lR)-1 -(2-Cloro fenil) etil] óxi}-5-{[5-({[4-(metilóxi)fenil]-metil} óxi) -2-nitrofenil] amino}-2-tiofenocarboxilato de metila (27,18g, 47,8 mmol) foi dissolvido em EtOAc (400 mL) com agitação. Platinasulfurada (5% em peso em carbono, 2,80 g) foi adicionado, e a reação foicolocada sob 1 atm de H2 usando um aparelho de balão. Após 36 h umaquantidade adicional de catalisador (2,80 g) foi adicionado e a agitação foicontinuada sob 1 atm de hidrogênio. Após mais 16 h, a reação foi filtradaatravés de um chumaço de Celite lavado com EtOAc. O filtrado foiconcentrado para dar o composto titular, que foi imediatamente realizado napróxima etapa. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,66 (br s, 1H), 7,56 (dd, 1H, J= 1,7, 7,8 Hz), 7,41 - 7,09 (m, 5H), 6,93 - 6,88 (m, 2H), 6,71 (d, 1H, J= 2,8Hz), 6,65 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 6,57 (dd, IH,J = 2,7, 8,6 Hz), 5,87 (s, 1H),5,62 (q, 1H, J = 6,4 Hz), 4,82 (s, 2H), 4,46 (br s, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,64 (s,3H), 1,52 (d, 3H, J= 6,2 Hz).

Etapa D - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[6-({[4-(metilóxi) fenil] metil} óxi) -lH-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato demetila

<formula>formula see original document page 80</formula>

5-{[2-Amino-5-({[4-(metilóxi) fenil] metil} óxi) fenil]amino}-3-{[(li?)-l-(2-clorofenil)-etil] óxi}-2-tiofenocarboxilato de metila foidissolvido em ortoformato de trimetila (100 mL) e éter dietílico (100 mL)com agitação. P-toluenossulfonato de piridínio (0,601 g, 2,39 mmol) foiadicionado em uma porção única. A reação foi agitada durante 2,5 h eresfriada bruscamente pela adição de trietilamina (aproximadamente 3 mL). Amistura foi concentrada e purificada por cromatografia cintilante para dar25,45 g (97% sobre 2 etapas) do composto titular. 1H RMN (400 MHz,15 CDCl3): δ 8,47 (s, 1H), 7,71 (dd, 1H, J= 1,6, 8,2 Hz), 7,63 (d, IH,J= 9,0Hz), 7,43 - 7,08 (m, 7H), 7,00 (dd, 1H, J= 2,4, 8,8 Hz), 6,96 - 6,90 (m, 2H),5,97 (q, 1H, J= 6,4 Hz), 5,03 (AB, 2H, Jab = 17,1 Hz, Jab = 11,3 Hz), 3,80 (s,3H), 3,73 (s, 3H), 1,60 (d, 3H, J= 6,4 Hz).

Etapa E - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-(6-hidróxi-lH-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 80</formula>

3-{[(l/?)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[6-({[4-(metilóxi) fenil]-metil} óxi) -l#-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metila (25,45 g,46,4 mmol) foi dissolvido em DCM (120 mL) e resfriado a 0 0C comagitação. O ácido trifluoroacético (40,0 mL, 519 mmol) foi adicionado emgotas via funil de adição. A reação foi agitada durante lhe hidróxido desódio (20,0 g, 500 mmol) em água (120 mL) foi adicionado em gotas via funilde adição. O pH da mistura foi então ajustado para neutro com uma soluçãode NaHCO3 saturado. A reação foi despejada em um funil separador, e ascamadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com EtOAc. Ascamadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, econcentradas in vácuo. Purificação por cromatografia cintilante deu 14,86 g(75% de) do composto titular. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 9,62 (s, 1H),8,45 (s, 1H), 7,74 (dd, 1H, J = 1,7, 7,7 Hz), 7,53 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,46 -7,38 (m, 3H), 7,32 (m, 1H), 7,08 (d, 1H, J= 2,2 Hz), 6,79 (dd, IH,J= 2,2,8,6 Hz), 5,94 (q, 1H, J= 6,2 Hz), 3,79 (s, 3H), 1,60 (d, 3H, J= 6,2 Hz).

Exemplo de intermediário 5: 5-(6-Hidróxi-1 H-benzimidazol-1 -il)-3-({(IiQ-1 -[2-(trifluorometil) fenill etiü óxi) -2-tiofenocarboxilato demetila

Etapa A - 5-{[5-({[4-(Metilóxi) fenil] metilj óxi) -2-nitrofenil]amino}-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

O composto titular foi preparado a partir de 5-amino-3-({(li?)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofeno carboxilato de metila e 2-bromo-4-({[4-(metilóxi) fenil] metil} óxi) -1-nitrobenzeno por umprocedimento análogo ao exemplo de intermediário 4, etapa B. MS (ESI): 603[M+H]+.

Etapa B - 5-{[2-Amino-5-({[4-(metilòxi) fenil] metil} όχι)fenil] amino}-3-({(HK)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 82</formula>

O composto titular foi preparado a partir de 5-{[5-({[4-(metilóxi) fenil] metil} óxi) -2-nitrofenil] amino }-3-({( 17?)-1 -[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila por umprocedimento análogo ao exemplo de intermediário 4, etapa C. MS (ESI): 573[M+H]+.

Etapa C - 5-(6-Hidròxi-lH-benzimidazol-l-il)-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 82</formula>

5-{[2-Amino-5-({[4-(metilóxi) fenil] metil} óxi) fenil] amino}-3-({(li?)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila(11 g, 19,19 mmol) foi dissolvido em 100 mL de ortoformato de trimetila comagitação. P-toluenossulfonato de piridínio (0.502 g, 1,91 mmol) foiadicionado em uma porção única. A reação foi agitada durante 2,5 h. Amistura foi concentrada e o 5-[6-({[4-(metilóxi) fenil] metil} óxi) -IH-benzimidazol- l-il]-3-({( li?)-1 - [2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila foi dissolvido em clorofórmio (75 mL) eresinado a 0°C com agitação. Ácido trifluoroacético (50,0 mL, 649 mmol)foi adicionado. A reação foi agitada durante lhe deixada come emtemperatura ambiente. A mistura foi concentrada enquanto resfriando pararemover o máximo do ácido trifluoroacético. A mistura foi dissolvida emclorofórmio (200 mL). A reação foi despejada em um funil separador, e ascamadas foram separadas. O pH da mistura foi então ajustado para neutrocom uma solução de NaHCO3 saturado. A camada orgânica foi lavada comclorofórmio. As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4,filtradas, e concentradas in vácuo. Purificação por cromatografia cintilantedeu 8,16 g (92% sobre 2 etapas) do composto titular. 1H RMN (400 MHz,CDCl3): δ 7,88 (d, 1H, J= 7,87 Hz), 7,83 (s, 1H), 7,66 - 7,55 (m, 3H), 7,40 (t,1H, J = 7,7 Hz), 6,92 (d, 1H, J= 2,2 Hz), 6,85 (dd, 1H, J= 2,3, 8,7 Hz), 5,78(q, 1H, J= 6,23 Hz), 5,47 (s, 1H), 3,91 (s, 3H), 1,75 (d, 3H, J= 6,23 Hz); MS(ESI): 463 [M+H]+.

Exemplo 5: 546-(4-Piperidinilóxi) -lH-benzimidazol-l-ill-3-(((1R)-1 -í2-ftrifluorometi 1) fenill etill óxi) -2-tiofenocarboxamida

<formula>formula see original document page 83</formula>

Etapa A - 4-({l-[5-[(Metilóxi) carbonil]-4-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etilj óxi) -2-tienil]-lH-benzimidazol-6-il} óxi) -I-piperidinacarboxilato de 1,1-dimetiletila

<formula>formula see original document page 83</formula>

5-(6-Hidróxi-1 H-benzimidazol-1 -il)-3 -( {(1R)-1 - [2-(trifluorometil) fenil] -etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (0,478 g, 1,03mmol), carbonato de césio (0,470 g, 1,44 mmol), e éster terc-butílico de ácido4-(tolueno-4-sulfonilóxi) -piperidina-l-carboxílico (0,439 g, 1,24 mmol)foram combinados em 10 mL de TV^TV-dimetilformamida e aquecidos a 60 0Ccom agitação. A reação foi aquecida durante 36 h e resfriada em temperaturaambiente. A mistura foi despejada em EtOAc e água, e as camadas foramseparadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, e as camadasorgânicas combinadas foram extraídas com EtOAc. As camadas orgânicascombinadas foram secadas sobre MgS04, filtradas, e concentradas in vácuo.Purificação por cromatografia cintilante deu 0,482 g (72%) do compostotitular. 1H RMN (400 MHz, DMSO-J6) δ 8,43 (s, 1H), 7,95 (dd, J= 7,7 Hz,1H), 7,78 - 7,66 (m, 2H), 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,29 (s, 1H),7,09 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,01 (dd, J= 8,8, 2,2 Hz, 1H), 5,97 (q, J= 6,2 Hz,1H), 4,59 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,65 - 3,56 (m, 2H), 3,25 - 3,15 (m, 2H), 1,91- 1,82 (m, 2H), 1,63 (d, J= 6,2 Hzj 3H), 1,59 - 1,49 (m, 2H), 1,38 (s, 9H). MSm/z 646 (M+l).

Etapa B - 5-[6-(4-Piperidinilòxi) -lH-benzimidazol-l-ilJ-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} όχι) -2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 84</formula>

4-({l-[5 - [(Metilóxi) carbonil]-4-({(lR)-l-[2-(trifluorometil)fenil] etil} óxi) -2-tienil]-lH-benzimidazol-6-il} óxi) -1-piperidinacarboxilatode 1,1-dimetiletila (1,84 g, de uma batelada diferente usando procedimentoanálogo ao exemplo 5, etapa A, 2,85 mmol) foi dissolvido em 30 mL de DCMcom agitação e resfriado a 0 0C. Ácido trifluoroacético (10,0 mL, 130 mmol)foi adicionado em gotas via funil de adição. A reação foi agitada durante lh, euma solução de hidróxido de sódio 2 N (60 mL) foi adicionada em gotas viafunil de adição. Uma solução de NaHCO3 aquoso saturado foi usada paraajustar o pH para básico. A mistura foi despejada em um funil separador, e ascamadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada uma vez com DCMe uma vez com éter dietílico. As camadas orgânicas combinadas foramsecadas sobre MgSO4, filtradas, e concentradas in vácuo. Purificação porcromatografia cintilante deu 1,37 g (88%) do composto titular. 1H RMN (400MHz, DMSO-J6): δ 8,42 (s, 1H), 7,95 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,78 - 7,67 (m,2H), 7,61 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,61 (m, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,05 (d, J= 2,2 Hz,1H), 6,97 (dd, J= 8,8, 2,2 Hz, 1H), 5,96 (q, J= 6,1 Hz, 1H), 4,41 (m, 1H),3,80 (s, 3H), 2,97 - 2,88 (m, 2H), 2,59 - 2,49 (m, 2H), 1,92 - 1,83 (m, 2H),1,63 (d, J= 6,1 Hz, 3H), 1,51 - 1,38 (m, 2H). MS m/z 546 (M+l).

Etapa C - 5-[6-(4-Piperidinilóxi) -1 H-benzimidazol-1-ilJ-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etilj óxi) -2-tiofenocarboxamida

<formula>formula see original document page 85</formula>

5-[6-(4-Piperidinilóxi) -1 H-benzimidazol-1-il]-3-({(IR)-1-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (0,154 g, 0,282mmol) foi dissolvido em amônia 2 N em MeOH (12,0 mL, 84,0 mmol) emum tubo vedado e aquecido a 80 0C durante 2 dias. A reação foi resfriada emtemperatura ambiente e concentrada in vácuo. Purificação por cromatografiacintilante deu 0,129 g (86%) do composto titular. 1H RMN (400 MHz,DMSO-J6) δ 8,34 (s, 1H), 7,91 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,81 (br s, 1H), 7,78 -7,70 (m, 2H), 7,61 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,12 (br s, 1H), 7,03 (s,1H), 7,00 - 6,93 (m, 2H), 5,94 (q, J= 6,2 Hz, 1H), 4,44 (m, 1H), 3,03 - 2,94(m, 2H), 2,70 - 2,61 (m, 2H), 1,96 - 1,86 (m, 2H), 1,72 (d, J= 6,2 Hz, 3H),1,59 - 1,46 (m, 2H). MS m/z 531 (M+l).

Exemplo 6: 3-(raR>H2-Clorofenin etill όχί}-5-Γ6-(4-piperidinilóxi) -1 H-benzimidazol-1 -il]-2-tiofenocarboxamida

<formula>formula see original document page 85</formula>Etapa A - 4-[(l-{4-{[(lR)-l-(2-clorofenil) etilj óxij-5-[(metilóxi) carbonil]-2-tienil}-lH-benzimidazol-6-il) óxi]-l-piperidinacarboxilato de 1,1-dimetiletila

<formula>formula see original document page 86</formula>

3 - {[(1R)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-(6-hidróxi-l//-benzimidazol-l-il)-2-tiofenocarboxilato de metila (2,00 g, 4,66 mmol),trifenilfosfma (4,89 g, 18,6 mmol), e 4-hidróxi-l-piperidinacarboxilato de t-butila (1,88 g, 9,34 mmol) foram dissolvidos em DCM (50 mL) com agitaçãoe resfriado a 10 0C. Azodicarboxilato de diisopropila (1,84 mL, 9,35 mmol)foi adicionado em gotas via seringa. A reação foi agitada durante 5 min edeixada aquecer em temperatura ambiente. A reação foi agitada durante 4 h eadsorvida sobre sílica gel. Purificação por cromatografia cintilante deu ocomposto titular junto com quantidades pequenas de impureza. 1H RMN (400MHz, DMSO-J6): δ 8,47 (s, 1H), 7,70 (dd, 1H, J= 1,6, 7,7 Hz), 7,64 (d, 1H, J= 8,8 Hz), 7,44 - 7,37 (m, 2H), 7,34 (s, 1H), 7,31 (m, 1H), 7,15 (d, 1H, J= 2,4Hz), 7,01 (dd, 1H, J = 2,2, 8,8 Hz), 5,97 (q, 1H, J= 6,2 Hz), 4,59 (m, 1H),3,80 (s, 3H), 3,65 - 3,56 (m, 2H), 3,27 - 3,14 (m, 2H), 1,92-1,81 (m, 2H),1,60 (d, 3H, J= 6,2 Hz), 1,60 - 1,47 (m, 2H), 1,38 (s, 9H); MS (ESI): 612[M+H]+.

Etapa B - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[6-(4-piperidinilóxi) -lH-benzimidazol-l-ilJ-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 86</formula>

4- [(1 - { 4- {[(1R)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[(metilóxi) -carbonil]-2-tienil}-l//-benzimidazol-6-il) óxi]-l-piperidinacarboxilato de 1,1-dimetiletila foi dissolvido em DCM (60 mL) e resfriado a 0 0C. Ácidotrifluoroacético (15,0 mL, 195 mmol) foi adicionado em gotas via funil deadição. A reação foi agitada durante 1,5 h, e solução 2N de hidróxido de sódio(88 mL) foi adicionado em gotas via funil de adição. Solução de NaHCO3aquoso saturado foi usada para ajustar o pH a ~8. A mistura foi despejada emum funil separador, e as camadas foram separadas. A camada orgânica foilavada com DCM (3x) e EtOAc (lx). As camadas orgânicas combinadasforam secadas sobre MgSO^ filtradas, e concentradas in vácuo. Purificaçãopor cromatografia cintilante deu 1,95 g (82% sobre 2 etapas) do compostotitular. 1H RMN (400 MHz, DMSO-J5): δ 8,46 (s, 1H), 7,71 (dd, 1H, J = 1,7,7,7 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,46 - 7,38 (m, 2H), 7,35 (s, 1H), 7,32 (m,1H), 7,09 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 6,97 (dd, 1H, J = 2,2, 8,8 Hz), 5,97 (q, 1H, J =6,2 Hz), 4,42 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 2,96 - 2,88 (m, 2H), 2,58 - 2,49 (m, 2H),1,93 - 1,84 (m, 2H), 1,60 (d, 3H, J= 6,2 Hz), 1,51-1,39 (m, 2H); MS (ESI):512 [M+l]+.

Etapa C - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[6-(4-piperidinilóxi) -ΙΗ-benzimidazol- 1-íl]-2-tiofenocarboxamidaSk^nh-

<formula>formula see original document page 87</formula>

3-{[(1R)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[6-(4-piperidinilóxi) -l//-benzimidazol-1 -il]-2-tiofenocarboxilato de metila (0,150 g, 0,293 mmol)foi dissolvido em amônia 7 N em MeOH (12,0 mL, 84,0 mmol) em um tubovedado e aquecido a 80 0C durante 48 h. A solução foi concentrada erecarregada com amônia 7 N nova em OH (12,0 mL, 84,0 mmol) e aquecida a110°C durante 72 h. A reação foi resfriada em temperatura ambiente econcentrada in vácuo. Purificação por cromatografia cintilante deu 0,126 g(87%) do composto titular. 1H RMN (400 MHz, DMSO-J6): δ 8,38 (s, 1H),7,79 (br s, 1H), 7,66 (dd, 1H, J= 1,6, 7,7 Hz, 1H), 7,61 (d, 1H, J= 8,8 Hz),7,45 (dd, 1Η, J = 1,3, 7,8 Hz), 7,40 (m, 1Η), 7,84 (m, 1Η), 7,11 (s, 1Η), 7,11(br s, 1H), 7,01 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 6,96 (dd, 1H, J= 2,3, 8,7 Hz), 5,98 (q,1H, J= 6,2 Hz), 4,41 (m, 1H), 2,98 - 2,89 (m, 2H), 2,62 - 2,53 (m, 2H), 1,94 -1,84 (m, 2H), 1,70 (d, 3H, J= 6,2 Hz), 1,54 - 1,40 (m, 2H); MS (ESI): 497[M+H]+.

Exemplo 7: 5-{6-r(l-Metil-4-piperidinil) óxil-lH-benzimidazol-1 -il) -3 { (1R)-1 - r2-(trifluorometil) fenill etilj óxi) -2-tiofenocarboxamida

EtapaA - 5-{6-[(l-Metil-4-piperidinil) óxiJ-lH-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-l-[2-(trífluorometil) fenil] etilj óxi) -2-tiofenocarboxilato demetila

5-[6-(4-Piperidinilóxi) -lH-benzimidazol-l-il]-3-( ((IR)-I-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila (0,200 g, 0,367mmol) foi dissolvido em DCM (4 mL) e MeOH (2 mL). Acido acético (0,025mL, 0,44 mmol) e formaldeído (0,055 mL, 37% em água, 0,74 mmol) foramadicionados via seringa. Triacetoxiborohidreto de sódio (0,117 g, 0,552mmol) foi adicionado em uma porção única. A reação foi agitada durante 1 he resfriada bruscamente com uma solução de NaHCO3 saturado. A mistura foidespejada em DCM e NaHCO3 aquoso meio-saturado. As camadas foramseparadas, e a camada orgânica foi lavada com DCM (3x) e EtOAc (lx). Ascamadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, econcentradas in vácuo. Purificação por cromatografia cintilante deu 0,150 g

(73%) do composto titular. 1H RMN (400 MHz5 DMSOrftf): δ 8,43 (s, 1H),7,96 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,78 - 7,68 (m, 2H), 7,62 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,51(m, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,06 (br s, 1H), 6,98 (m, 1H), 5,97 (q, J = 6,0 Hz, 1H),4,41 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,26 (s, 3H), 2,52 - 2,43 (m, 2H), 2,27 - 2,11 (m,2H), 1,98 - 1,85 (m, 2H), 1,73 - 1,60 (m, 2H), 1,62 (d, J= 6,0 Hz, 3H). MS(ESI): 560 [M+H]+.

Etapa B - 5-{6-[(l-Metil-4-piperidinil) óxiJ-lH-benzimidazol-l-il}-3-({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxamida

({(lR)-l-[2-(trifluorometil) fenil] etil} óxi) -2-tiofenocarboxilato de metila(0,148 g, 0,264 mmol) foi dissolvido em amônia 7 N em MeOH (12,0 mL,84,0 mmol) em um tubo vedado e aquecido a 80 0C durante 24 horas. Areação foi resfriada em temperatura ambiente e concentrada in vácuo.Purificação por cromatografia cintilante deu 0,138 g (96%) do composto

titular. 1H RMN (400 MHz, DMSOrf6): δ 8,35 (s, 1H), 7,92 (d,J= 7,7 Hz,1H), 7,82 (br s, 1H), 7,80 - 7,71 (m, 2H), 7,64 - 7,51 (m, 2H), 7,12 (br s, 1H),7,06 (s, 1H), 6,99 - 6,94 (m, 2H), 5,95 (q, J= 6,2 Hz, 1H), 4,36 (m, 1H), 2,64- 2,53 (m, 2H), 2,23 - 2,11 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,94 - 1,84 (m, 2H), 1,73 (d,J= 6,2 Hz, 3H), 1,71 - 1,57 (m, 2H). MS (ESI): 545 [M+H]+.

Exemplo 8: 3-UqRVl-O-Clorofenin etill όχί)-5-(6-Γ(1-metil-4-piperidinil) óxi]- 1/Z-benzimidazol-1 -il) -2-tiofenocarboxamida

5 - { 6- [(1 -Metil-4-piperidinil) óxi] -1 H-benzimidazol-1 -il} -3 -Etapa A - 3-{[(lR)-l-(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(l-metil-4-piperidinil) óxi]-lH-benzimidazol-l-Íl}-2-tiofenocarboxilato de metila

<formula>formula see original document page 90</formula>

3- {[(1R)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-[6-(4-piperidinilóxi) -l/7-benzimidazol-l-il]-2-tiofenocarboxilato de metila (0,260 g, 0,508 mmol)foi dissolvido em DCM (4 mL) e MeOH (2 mL). Ácido acético (0,035 mL,0,61 mmol) e formaldeído (0,076 mL, 37% em água, 1,0 mmol) foramadicionados via seringa. Triacetoxiborohidreto de sódio (0,161 g, 0,760mmol) foi adicionado em uma porção única. A reação foi agitada durante 2 he despejada em DCM e NaHCOs aquoso meio-saturado. As camadas foramseparadas, e a camada orgânica foi lavada com DCM e EtOAc. As camadasorgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, e concentradasin vácuo. Purificação por cromatografia cintilante deu 0,215 g (80%) docomposto titular. 1H RMN (400 MHz, DMSO-J5): δ 8,48 (s, 1H), 7,73 (dd,IH,J = 1,8, 7,7 Hz), 7,63 (d, IH,J= 8,8 Hz), 7,47 - 7,40 (m, 2H), 7,38 (s,1H), 7,34 (m, 1H), 7,12 (d, 1H, J= 2,2 Hz), 6,99 (dd, IH,J= 2,2, 8,8 Hz),5,98 (q, 1H, J= 6,2 Hz), 4,41 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 2,65 - 2,54 (m, 2H), 2,24- 2,13 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,97 - 1,87 (m, 2H), 1,72-1,61 (m, 2H), 1,62 (d,3H, J= 6,2 Hz); MS (ESI): 526 [M+H]+.

Etapa B - 3-{[(lR)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(l-metil-4-piperidinil) óxi]-lH-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxamida

<formula>formula see original document page 90</formula>

3 - {[(1R)-1 -(2-Clorofenil) etil] óxi}-5-{6-[(l-metil-4-piperidinil) óxi]-l//-benzimidazol-l-il}-2-tiofenocarboxilato de metila (0,214g, 0,407 mmol) foi dissolvido em amônia 7 N em MeOH (12,0 mL, 84,0mmol) em um tubo vedado e aquecido a 80 0C durante 2,5 dias. A reação foiresfriada em temperatura ambiente e concentrada in vácuo. Purificação porcromatografia cintilante deu 0,208 g (100%) do composto titular. 1H RMN(400 MHz, DMSO-^j): δ 8,39 (s, 1H), 7,80 (br s, 1H), 7,67 (dd, 1H, J = 1,5,7,6 Hz), 7,62 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,45 (m, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,34 (m, 1H),7.13 (s, 1H), 7,11 (br s, 1H), 7,02 (d, IH,J= 2,0 Hz), 6,97 (dd, 1H, J= 2,2,8,8 Hz), 5,99 (q, IH,J= 6,2 Hz), 4,37 (m, 1H), 2,63 - 2,53 (m, 2H), 2,22 -2.14 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,95 - 1,86 (m, 2H), 1,71 (d, 3H, J= 6,2 Hz), 1,70-1,59 (m, 2H); MS (ESI): 511 [M+H]+.

Exemplo comparativos

Exemplos comparativos números 121, 126, 127, 136 e 143podem ser preparados usando métodos conhecidos na técnica, incluindo osdescritos em publicação PCT No. WO 2004/014899 para SmithKline

Beecham Corp.

<table>table see original document page 91</column></row><table><table>table see original document page 92</column></row><table>

Exemplos biológicos

I. Teste para inibição de PLKl

A. Preparação de domínio quinase PLK etiquetado com His 6xN-terminal

Domínio quinase PLK etiquetado com His 6x N-terminal(aminoácidos 21-346 procedido por MKKGHHHHHHD) SEQ ID: No. 1. foipreparado a partir de células de T.ni, infectadas com baculovírus sob ocontrole do promotor de poliedrina. Todos procedimentos foram realizados a4 'C. As células foram lisadas em 50 mM de HEPES, 200 mM de NaCl5 50mM de imidazol, 5% de glicerol; pH 7,5. O homogenado foi centrifugado a14K rpm em um rotor SLA-1500 durante Iheo sobrenadante filtrado atravésde um filtro 1,2 mícron. O sobrenadante foi carregado sobre uma coluna"Nickel chelating Sepharose"(Amersham Pharmacia) e lavado com tampão delise. A proteína foi eluída usando etapas de 20%, 30% e 100% de tampão Bonde tampão B é 50 mM de HEPES, 200 mM de NaCl, 300 mM de imidazol,5% de glicerol; pH 7,5. As frações contendo PLK foram determinadas porSDS-PAGE. As frações contendo PLK foram diluídas cinco vezes com 50mM de HEPES, 1 mM de DTT, 5% de glicerol; pH 7,5, então carregadas emuma coluna SP Sepharose (Amersham Pharmacia). Após lavagem da colunacom 50 mM de HEPES, 1 mM de DTT, 5% de glicerol; pH 7,5, PLK foieluído em etapas com 50 mM de HEPES, 1 mM de DTT, 500 mM de NaCl;5% de glicerol; pH 7,5. PLK foi concentrado usando uma membrana de cortede peso molecular de 10 kDa e então carregado sobre uma coluna de filtraçãode gel Superdex 200 (Amersham Pharmacia) equilibrada em 25 mM deHEPES, 1 mM de DTT, 500 mM de NaCl, 5% de glicerol; pH 7,5. As fraçõescontendo PLK foram determinadas por SDS-PAGE. PLK foi reunido,dividido em alíquotas e armazenado a -80 0C. As amostras foram controladasna qualidade usando espectrometria em massa, sequenciamento N-terminal eanálise de aminoácidos.

B. Atividade de enzima +/- inibidores foi determinada como aseguir:

Todas as medidas foram obtidas sob condições onde aprodução de sinal aumentou linearmente com tempo e enzima. Os compostosde teste foram adicionados a placas de teste de 384 cavidades brancas (0,1 μΕdurante 10 \\L e alguns testes de 20 \\L, ΙμΕ para alguns testes de 20 μί) emconcentrações conhecidas variáveis em 100% de DMSO. DMSO (1-5% definal, como apropriado) e EDTA (65 mM em reação) foram usados comocontroles. A mistura de reação foi preparada como a seguir a 22 0C:25 mM de HEPES, pH 7,215 mM de MgC121 μΜ de ATP0,05 μα/cavidade 33Ρ-γ ATP (lOCi/mMol)1 μΜ de peptídeo substrato (Biotin-Ahx-SFNDTLDFD) SEQID:No. 2.0,15 mg/mL BSA

1 mM de DTT

2 nM de domínio quinase PLKln (adicionado por último)

A mistura de reação (10 ou 20 μί) foi rapidamente adicionadaem cada cavidade imediatamente seguindo adição de enzima via suportes delíquido automatizados e incubada 1-1,5 h a 22 0C. As reações enzimáticas 20uL foram paradas com 50 μί de mistura de parada (50 mM EDTA, 4,0 mg/mlcontas SPA de estreptavidina PBS de Dulbecco padrão (sem Mg2+ e Ca2+ ), 50μΜ de ATP) por cavidade. As reações de 10 μΐ, foram paradas com 10 μΐ. demistura de parada (50 mM EDTA, 3,0 mg/mL contas de formação de imagemde SPA copuladas com estreptavidina ("LeadVerker") em PBS de Dulbeccopadrão (sem Mg2+ e Ca2+), 50 μΜ de ATP) por cavidade. As placas foramvedadas com selantes de plástico transparente, giradas a 500 χ g durante 1min ou assentadas durante a noite, e contadas em Packard TopCount durante30 segundos/cavidade (SPA regular) ou a imagem formada usando umaparelho Viewlux imager (LeadVerker SPA). O sinal acima do fundo(controles de EDTA) foi convertido em inibição percentual relativa ao obtidoem cavidades de controle (DMSO apenas).

C. Resultados

Os dados são registrados na tabela 1 abaixo. Na tabela 1, + =PlC50 <6; ++ = pIC50 6-8; +++ = pIC50 >8.

II. Teste de inibição de crescimento com azul de metileno -Inibição de proliferação celular por inibidores de PLKl

Geralmente,as linhagens de células crescendoexponencialmente de origens de diferentes tumores, cultivadas em meioapropriado contendo 10% de soro bovino fetal a 37 0C em um incubador a 5%de CO2 foram colocadas em placas em densidade baixa (menos que 2000células/cavidade) em placas de 96cavidades. Vinte e quatro horas após acolocação nas placas, as células foram tratadas com concentrações diferentesde compostos de teste na faixa de 10 uM a 0,04 nM. Várias cavidades foramdeixadas não tratadas como um controle. Setenta e duas horas após otratamento, os números de células foram determinados usando ΙΟΟμΙ porcavidade de azul de metileno (Sigma M9140) (0,5% em 50:50 etanol:água). Acoloração foi incubada em temperatura ambiente durante 30 minutos antes dasplacas serem enxaguadas e o corante solubilizado em 1% N-Iauroil sarcosina,sal de sódio, (Sigma L5125, em PBS) ( outros detalhes de um teste de azul demetileno são descritos abaixo). As placas foram lidas em uma leitora demicroplaca, medindo o OD a 620 nm.

A inibição percentual de crescimento celular foi expressadacomo proliferação percentual com relação a 100% de proliferação (contorleO.

A concentração de composto de teste que inibiu 50% do crescimento celular(IC5o) foi determinada por uma configuração de 4 parâmetros de dados usandoXLfit (valor de controle sem célula foi subtraído de todas as amostras parafundo). Os dados são mostrados na tabela 1 abaixo e representam umacompilação de várias experiências diferentes, cada realizada usando osparâmetros gerais descritos acima, apesar de variações menores poderem serempregadas em alguns casos.

Em um teste, fibroblastos de prepúcio humano normal (HFF),linhagens de células de tumor humanas de cólon (HCT116, RKO), pulmão(H460, A549) e mama (MCF7) foram cultivados em DMEM com elevadoteor de glicose (Life Technologies) contendo 10% de soro bovino fetal (FBS)a 37 0C em um umidificador 5% de CO2, 95% de incubador de ar. As célulasforam coletadas usando tripsina/EDTA, contadas usando um hemocitômetro,e colocadas em placas em 100 μΕ de meio de cultura por cavidade, nasseguintes densidades, em uma placa de cultura de tecido de 96 cavidades(Falcon 3075): HFF 5.000 células/cavidade, HCTl 16 3.000 células/cavidade,RKO 2.500 células/cavidade, H460 2,500 células/cavidade, A549 5.000células/cavidade, MCF7 4.000 células/cavidade. No próximo dia, oscompostos foram diluídos em DMEM de teor baixo de glicose contendo 100μg/mL gentamicina, duas vezes a concentração requerida final, 10 mM desoluções de carga em DMSO. 100 μL/cavidade destas diluições foramadicionados para 100 μΙ, de meios atualmente nas placas de teste. Meiocontendo 0,6% de DMSO foi adicionado às cavidades de controle. Aconcentração final de DMSO em todas cavidades foi de 0,3%. As célulasforam incubadas a 37 0C5 5% de CO2 durante 72 h. O meio foi removido poraspiração. A biomassa celular foi estimada por coloração das células com 80μL por cavidade de azul de metileno (Sigma M9140, 0,5% em 50:50etanoliágua), e incubação em temperatura ambiente durante 30-60 min. Acoloração foi removida por aspiração e as placas enxaguadas por imersão emágua, então secadas ao ar. Para liberar a coloração das células, 100 μΐ desolução de solubilização foram adicionados (1% de N-Iauroil sarcosina, sal desódio, Sigma L5125, em PBS), e as placas foram agitadas suavemente durantecerca de 30 min. Densidade óptica a 620 nM foi medida em uma leitora demicroplaca. A inibição percentual de crescimento celular foi calculada comrelação às cavidades de controle tratadas com veículo. A concentração decomposto que inibe 50% de crescimento celular (IC5o) foi interpolada usandoregressão não linear (Levenberg-Marquardt) e a equação, y = Vmax*(l-(x/(K+x))) + Y2, onde "K" foi igual a IC50-

Os dados são registrados na tabela 1 abaixo. Na tabela 1, + =IC50 >1 μΜ; ++ = IC50 0,1 -1 μΜ: +++ = IC50 <0,1 μΜ.

III. Determinação de ligação de proteína para proteínas deplasma humano usando diálise de equilíbrio

Placa de 96 cavidades (Diálise de alta produção): As soluçõesde carga de compostos foram salpicadas em plasma humano a umaconcentração alvo de 2000 ng/mL. A mistura foi invertida suavemente váriasvezes para assegurar homogeneidade e alíquotas de 50 μL em triplicata foramcoletadas para verificar as concentrações iniciais. Após a montagem da placade diálise (tiras de membrana HTDialysis, limite de corte de peso molecular12.000 - 14.000 daltons), plasma salpicado (150 μL.) foi colocado nocompartimento do doador da cavidade e solução salina tamponada comfosfato 7,4 (150 μL.) no compartimento do receptor. Oito cavidades foramajustadas por composto e tipo de plasma. A placa foi colocada em umaincubadora a 37 0C em um agitador de placas. Após o período de incubaçãode 6 h, a placa foi removida. Alíquotas únicas de 50 |iL de cadacompartimento de doador e receptor (por cavidade) foram analisadas. Aanálise da amostra foi por LC/MS/MS (resultados relatados como relações deárea de pico de fármaco / área de pico padrão interno). O teste de ligação deproteína pode ser também realizado usando células de diálise em vez deplacas de 96 cavidades de diálise HT. Os dados são registrados na tabela 1abaixo. Na tabela 1, % ligação de proteína, + = >98%; ++ = 95-98%: +++ = <95%.

IV Teste de solubilização de produção elevada

Duas amostras são preparadas para cada composto. Uma (aamostra padrão) contém o composto em uma concentração fixa de 20 μΜ emum coquetel de solvente misto aquoso/ orgânico. A outra (a amostra de teste)contém o composto em uma concentração máxima de 200 μΜ em pH 7,4,0,05M tampão fosfato e agitando durante 24 h. A amostra de teste é filtradapor filtro de 0,45 μ e então girada durante 10 min para remover qualquersólido não dissolvido. Análises de HPLC são realizadas nestas amostras. Asáreas de pico são usadas para computar a solubilidade. Os dados sãoregistrados na Tabela 1 abaixo. Na tabela 1, solubilidade, + = <30 μΜ; ++ =30-100 μΜ: +++ = >100 μΜ.

Tabela 1

<table>table see original document page 97</column></row><table><table>table see original document page 98</column></row><table>

Tabela 1 mostra que os compostos atualmente reivindicadospossuem propriedades superiores com relação aos exemplos comparativos testados. Porexemplo, os compostos de exemplos 1-8 tem potência de enzima e célula superior sobre osexemplos comparativos 121, 136 e 143 no teste de enzima PLKl e teste deproliferação de células em azul de metileno em linhagens de células múltiplasexaminadas. Os compostos de exemplos 1-8 tem uma solubilização superiorem pH 7,4, tampão fosfato 0,05 M sobre exemplo comparativo 127. Oscompostos de exemplos 1-3 e 5-8 tem uma ligação de proteína superior emsoro humano por teste de diálise de equilíbrio sobre o exemplo comparativo126 e 127.

V. Cell-Titer-Glo - Inibição de proliferação celular porinibidores de PLKl

As linhagens de células crescendo exponencialmente deorigens de tumores diferentes, cultivadas em meio apropriado contendo 10%de soro bovino fetal a 37 0C em um incubador de CO2 a 5% foram colocadasem placas em densidade baixa (menor que 2000 células /cavidade) em placasde 96 cavidades. 24 horas após a colocação em placas, as células foramtratadas com concentrações diferentes de compostos de teste na faixa de 10μΜ a 0,04 nM. Várias cavidades foram deixadas não tratadas como umcontrole. 72 horas após o tratamento, os números de células foramdeterminados usando 50 - 100 ul por cavidade de CellTiter-Glo (Promega#G7573). As placas foram incubadas em temperatura ambiente durante 15minutos e o sinal quimioluminescente foi lido em uma leitora Victor V ouEnvison 2100.

A inibição percentual do crescimento celular foi expressadacomo proliferação percentual com relação a 100% de proliferação (controle).A concentração de composto de teste que inibiu 50% de crescimento celular(IC50) foi determinada por uma configuração de 4 parâmetros de dados usandoXLfit, (valor de controle sem células foi subtraído de todas as amostras parafundo). Os dados de Cell-Titer Glo são mostrados na tabela 2 abaixo erepresentam uma compilação de várias experiências diferentes, cada realizadausando os parâmetros gerais descritos acima, apesar de variações menorespoderem ser empregadas em alguns casos. Na tabela 2, + = IC50 >1 μΜ; ++ =IC50 0,5 -1 μΜ: +++ = IC50 <0,5 μΜ.

Tabela 2

<table>table see original document page 99</column></row><table>

Claims

1. Composto, caracterizado pelo fato de ser selecionado dentre: <formula>formula see original document page 100</formula> em que * indica um carbono quiral;e sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos dos mesmos.

2. Composto de acordo com a reivindicação l, caracterizadopelo fato de que a estereoquímica do carbono quiral é R.

3. Composto de acordo com a reivindicação l, caracterizadopelo fato de que compreende mais do que 50% em peso de um enantiômeroselecionado dentre as fórmulas A-1, B-1, C-1, D-I5 E-1, F-1, G-I e H-1:<formula>formula see original document page 101</formula>

4. Composto enantiomericamente puro, caracterizado pelo fatode ser selecionado dentre as fórmula A-1, B-1, C-1, D-1, E-1, F-1, G-I e H-1: <formula>formula see original document page 101</formula> e sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos dos mesmos.

5. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato decompreender um composto como definido na reivindicação 1 e um veículo,diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

6. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 5,caracterizada pelo fato de que ainda compreende um agentequimioterapêutico.

7. Uso de um composto como definido na reivindicação 1,caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para otratamento de um neoplasma suscetível em um mamífero em necessidade domesmo.

8. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelofato de que o dito neoplasma suscetível é selecionado do grupo consistindo decâncer de mama, câncer de cólon, câncer de pulmão de célula pequena, câncerde pulmão de célula não pequena, câncer de próstata, câncer endometrial,câncer gástrico, melanoma, câncer de ovário, câncer pancreático, carcinomade célula escamosa, carcinoma da cabeça e pescoço, carcinoma do esôfago,carcinoma hepatocelular, e malignidades hematológicas.

9. Uso de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelofato de que o dito neoplasma suscetível é selecionado dentre câncer de mama,câncer de ovário, câncer de pulmão de célula não pequena, câncer de próstata,e malignidades hematológicas.

10. Uso de um composto como definido na reivindicação 1,caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para otratamento de uma condição caracterizada por proliferação celularinapropriada em um mamífero em necessidade do mesmo.

11. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta afórmula C:<formula>formula see original document page 103</formula>

12. Sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato deser de um composto de fórmula C: <formula>formula see original document page 103</formula>

13. Composto de acordo com a reivindicação 11,caracterizado pelo fato de que compreende mais do que 50% em peso de umenantiômero de fórmula C-1: <formula>formula see original document page 103</formula>

14. Composto enantiomericamente puro, caracterizado pelofato de que apresenta a fórmula C-I: <formula>formula see original document page 103</formula>

15. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende um composto como definido na reivindicação 11.

16. Composição farmacêutica compreendendo o compostocomo definido na reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o compostocompreende mais do que 50% em peso do enantiômero de fórmula C-I: <formula>formula see original document page 104</formula>

17. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende um composto enantiomericamente puro de fórmula C-1: <formula>formula see original document page 104</formula>

18. Uso de um composto como definido na reivindicação 11,caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para otratamento de um neoplasma suscetível em um mamífero em necessidade domesmo.

19. Uso de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelofato de que o neoplasma suscetível é selecionado do grupo consistindo emcâncer de mama, câncer de cólon, câncer de pulmão de célula pequena, câncerde pulmão de célula não pequena, câncer de próstata, câncer endometrial,câncer gástrico, melanoma, câncer de ovário, câncer pancreático, carcinomade célula escamosa, carcinoma da cabeça e pescoço, carcinoma do esôfago,carcinoma hepatocelular, e malignidades hematológicas.

20. Uso de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelofato de que o dito composto compreende mais do que 50% em peso de umenantiômero tendo a estereoquímica absoluta de fórmula C-1:<formula>formula see original document page 105</formula>

21. Uso de um composto como definido na reivindicação 11,caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para otratamento de câncer de mama, câncer de ovário, câncer de pulmão de célulanão pequena, câncer de próstata, câncer gástrico, carcinoma da cabeça epescoço, ou uma malignidade hematológica em um mamífero em necessidadedo mesmo.

22. Uso de composto como definido na reivindicação 13,caracterizado pelo fato de ser na preparação de um medicamento para otrtamento de câncer de mama, câncer de ovário, câncer de pulmão de célulanão pequena, câncer de próstata, câncer gástrico, carcinoma da cabeça epescoço, ou uma malignidade hematológica em um mamífero em necessidadedo mesmo.

23. Uso de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelofato de que o composto é um composto enantiomericamente puro de fórmulaC-1:<formula>formula see original document page 105</formula><formula>formula see original document page 106</formula>