BRPI0616643A2 - compostos de carbamato que inibem a adesão leucocitária mediada por vla-4 - Google Patents

compostos de carbamato que inibem a adesão leucocitária mediada por vla-4 Download PDF

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Christopher Michael Semko
Ying-Zi Xu
Frank Stappenbeck
Jenifer Lea Smith
Kassandra Inez Rossiter
Juri Y Fukuda
Andrei W Konradi
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Elan Pharm Inc
Wyeth Corp
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Abstract

COMPOSTOS DE CARBAMATO QUE INIBEM A ADESãO LEUCOCITáRIA MEDIADA POR VLA-4. São revelados compostos que ligam VLA-4. Certos desses compostos também inibem a adesão leucocitária e, em particular, adesão leucocitária mediada por VLA-4. Tais compostos são úteis no tratamento de doenças inflamatórias em um mamífero, por exemplo, humano, como asma, doença de Alzheimer, aterosclerose, AIDS demência, diabetes, doença inflamatória do intestino, artrite reumatóide, transplante de tecido, metástase de tumor e isquemia miocárdica. Os compostos também podem ser administrados para o tratamento de doenças inflamatórias cerebrais como esclerose múltipla (Fórmula I).

Description

COMPOSTOS DE CARBAMATO QUE INIBEM A ADESÃO LEUCOCITÃRIAMEDIADA POR VLA-4
REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDO RELACIONADO
Esse pedido reivindica os benefícios sob 35 U.S.C.119 (e) para o pedido U.S. provisório co-pendente N° deSérie 60/722.355, depositado em 29 de setembro de 2005, queé aqui incorporado por referência em sua totalidade.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
Campo da invenção
Essa invenção está relacionada aos compostos queinibem a adesão leucocitária e, em particular, a adesãoleucocitária mediada por integrinas a4, em que a integrina119 é, de preferência, VLA-4. Essa invenção também estárelacionada às composições farmacêuticas que compreendemesses compostos, além de métodos para o tratamento, porexemplo, de inflamação, com o uso de um dos compostos oudas composições farmacêuticas dessa invenção.
Referências
As publicações a seguir são citadas nesse pedido comonúmeros sobrescritos:
1 Hemler e Takada, Publicação de Patente EuropéiaN0 330.506," publicada em 30 de agosto de 1989
2 Elices, e cols., Celll 60: 577-584 (1990)
3 Springer, Naturel 346: 425-434 (1990)
4 Osborn, Cell, 62: 3-6 (1990)
5 Vedder, e cols., Surgery, 106: 509 (1989)
6 Pretolani, e cols., J. Exp. Med., 180: 795 (1994)
7 Abraham, e cols., J. Clin. Invest., 93: 776(1994)
8 Mulligan, e cols., J. Inununology, 150: 2.407(1993)
9 Cybulsky, e cols., Science, 251: 788 (1991)
10 Li, e cols., Arterioscler. Thromb., 13: 197(1993)
11 Sasseville, e cols., Am. J. Path., 144: 27 (1994)
12 Yang, e cols., Proc. Nat. Acad. Science (USA),90: 10.494 (1993)
13 Burkly, e cols., Diabetes, 43: 529 (1994)
14 Baron, e cols., J. Clin. Invest., 93: 1.7 00(1994)
15 Hamann, e cols., J. Immunology, 152: 3.238 (1994)
16 Yednock, e cols., Nature, 356: 63 (1992)
17 Baron, e cols., J. Exp. Med., 177: 57 (1993)
18 van Dinther-Janssen, e cols., J. Immunology, 147:4.207 (1991)
19 van Dinther-Janssen, e cols., Annals. RheumaticDis., 52: 672 (1993)
20 Elices, e cols., J. Clin. Invest., 93: 405 (1994)
21 Postigo, e cols., J. Clin. Invest., 89: 1.445(1991)
22 Paul, e cols., Transpl. Proceed., 25:813 (1993)
23 Okarhara, e cols., Can. Res., 54: 3.233 (1994)
24 Paavonen, e cols., Int. J. Can., 58: 298 (1994)
25 Schadendorf, e cols., J. Path., 170: 429 (1993)26 Bao, e cols., Diff., 52: 239 (1993)
27 Lauri, e cols., British J. Câncer, 68: 862 (1993)
28 Kawaguchi, e cols., Japanese J. Câncer Res., 83:1.304 (1992)
29 Konradi, e cols., PCT/US00/01686, depositado em21 de janeiro de 2 000Todas as publicações acima são aqui incorporadas porreferência em sua totalidade, na mesma extensão como secada publicação individual fosse especifica eindividualmente indicada para ser incorporada porreferência em sua totalidade.
Técnica estabelecida
VLA-4 (também denominada integrina α4βΐ e CD49d/CD29),identificada inicialmente por Hemler e Takada,1 é um membroda família de integrina βα de receptores da superfíciecelular, cada um dos quais compreendendo duas subunidades,uma cadeia a.* e uma cadeia βχ. VLA-4 contém uma cadeia a euma cadeia βι. Há pelo menos nove integrinas βχ, todascompartilhando a mesma cadeia βχ e cada uma tendo umacadeia α distinta. Todos esses nove receptores se ligam aum complemento diferente das várias moléculas da matrizcelular como, por exemplo,, fibronectina, laminina ecolágeno. VLA-4, por exemplo, se liga à fibronectina. VLA-4também se liga às moléculas que não são da matriz que sãoexpressas por células endoteliais e por outras células.Essas moléculas que não são da matriz incluem VCAM-1, que éexpressa em células endoteliais da veia umbilical humanaativadas por citocina, em cultura. Epitopos distintos deVLA-4 são responsáveis pelas atividades de ligaçãofibronectina e de VCAM-1, e foi demonstrado que cadaatividade era inibida independentemente.2
A adesão intercelular mediada por VLA-4 e por outrosreceptores da superfície celular está associada a diversasrespostas inflamatórias. No local de uma lesão ou outroestímulo inflamatório, as células endoteliais vascularesativadas expressam moléculas que são adesivas paraleucócitos. A mecânica da adesão leucocitãria às célulasendoteliais envolve, em parte, o reconhecimento e a ligaçãode receptores da superfície celular nos leucócitos àsmoléculas da superfície celular correspondentes nas célulasendoteliais. Uma vez ligados, os leucócitos migram atravésda parede do vaso sangüíneo para entrar no local lesado eliberar mediadores químicos para combater a infecção. Pararevisões sobre receptores de adesão do sistema imunológico,veja, por exemplo, Springerj e Osborn.4
Distúrbios cerebrais inflamatórios como, por exemplo,encefalomielite autoimune experimental (EAE), esclerosemúltipla (EM) e meningite, são exemplos de distúrbios dosistema nervoso central nos quais o mecanismo de adesãoendotélio/leucócito causa a destruição de tecido cerebralaté então saudável. Grandes números de leucócitos migramatravés da barreira hematencefálica (BHC) em indivíduos comessas doenças inflamatórias. Os leucócitos liberammediadores toxíco's que causam dano tecidual extenso queproduzem prejuízo à condução nervosa e paralisia.
Em outros sistemas orgânicos, o dano tecidual tambémocorre através de um mecanismo de adesão que causa amigração ou ativação de leucócitos. Por exemplo, foidemonstrado que a agressão inicial após isquemia miocárdicaao tecido cardíaco pode ser ainda mais agravada pelaentrada de leucócitos no tecido danificado, causando aindamais agressão (Vedder, e cols.).5 Outras condiçõesinflamatórias ou médicas mediadas por um mecanismo deadesão incluem, por exemplo, asma,6"8 doença de Alzheimer,aterosclerose,9-10 demência por AIDS,11 diabetes 12-14(incluindo diabetes agudo de surgimento. juvenil), doençainflamatória do intestino (incluindo colite ulcerativa edoença de Crohn) , esclerose múltipla,16"17 artritereumatóide, 18 transplante de tecidos,22 metástase
tumoral,23"28 meningite, encefalite, acidente vascularcerebral e outros traumas cerebrais, nefrite, retinite,dermatite atópica, psoríase, isquemia miocárdica e lesãopulmonar aguda mediada por leucócitos, como a que ocorre nasíndrome de sofrimento respiratório do adulto.
Aminopirimidinas substituídas, como uma classe, foramdescobertas como inibidoras de ligação de VLA-4 ao VCAM-Ie, conseqüentemente, exibem propriedades
antiinflamatórias.29 Embora esses compostos possuampropriedades antagonistas para tal ligação, outroscompostos que possuam essas propriedades também seriamúteis .
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
São fornecidos compostos, sais farmaceuticamenteaceitáveis, ésteres, e pró-fármacos, composições, síntesesdestes, e métodos para o tratamento de doenças mediadas porVLA-4.
Em uma modalidade, a presente invenção fornececompostos de fórmula I:
em queAr é selecionado do grupo que consiste em aril,heteroaril, aril substituído e heteroaril substituído;η é um número inteiro de 1 a 4;X é S ou O;
Té selecionado do grupo que consiste em uma ligação,-O-, -S-,-S(O)2- e -N(R9) - , em que R9 é selecionado do grupoque consiste em hidrogênio, alquil e alquil substituído, ouR1 e R9, juntos com os átomos pendentes a ele, formam umanel heterocíclico, um heterocíclico substituído, umheteroaril, ou um heteroaril substituído, desde que, quandoT for -O- ou -S-, R1 não será alcoxi ou alcoxi substituído;
R1 é selecionado do grupo que consiste em alquil,alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;
R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,acil, alquil, alquil substituído, alquenil, alquenilsubstituído, alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxisubstituído, cicloalquil, cicloalquil substituído, aril,aril substituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;
ou R1, R2 e T, juntos com os átomos pendentes a ele, formam um anel heterocíclico que consiste em de 4 a 8átomos de anel da fórmula:
<formula>formula see original document page 7</formula>
em que W é selecionado do grupo que consiste em alquileno ealquileno substituído, e em que um ou mais dos átomos decarbono na cadeia de alquileno podem ser substituídos por -C(O)-, -C(S)-, -O- ou -N (R'10) - , em que R10 é hidrogênio, C1a C4 alquil ou Ci a C4 alquil substituído;
R3 e R4 são selecionados independentemente do grupoque consiste em hidrogênio, alquil, alquil substituído,alcoxi, alcoxi substituído, aril, aril substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, heteroaril,heteroaril substituído, heterocíclico, heterocíclicosubstituído e hidroxi; ou R3 e R4, juntos com o átomo denitrogênio ao qual estão pendentes, formam um anelheterocíclico ou heterocíclico substituído;
desde que, quando um de R3 e R4 for hidroxi, alcoxi,ou alcoxi substituído, o outro de R3 e R4 será selecionadodo grupo que consiste em hidrogênio, alquil, alquilsubstituído, aril, aril substituído, cicloalquil,cicloalquil substituído, heteroaril, heteroarilsubstituído, heterocíclico e heterocíclico substituído;
Rb é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,C1 a C4 alquil e C1 a C4 alquil substituído;
R6 é selecionado do grupo que consiste em carboxi eéster de carboxi;
R7 e R8 são selecionados independentemente do grupoque consiste em hidrogênio, alquil e alquil substituído, ouR7 e R8, juntos com o átomo de nitrogênio a ele pendente,formam um anel heterocíclico ou heterocíclico substituído;e
Y é N OU CH; OU
um sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamenteaceitável desses, desde que se exclua os seguintescompostos, bem como seu sal, éster ou pró-fármacofarmaceuticamente aceitável:
N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(trifluoracetil)araino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(iso-propilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-diet ilamino-5 -{N-etil-N-(t-butilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino- 5 -{N-etil-N-(furan-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piperidin-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-etil-N-iso-propilaminocarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4 ' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-3-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}
fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-3 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina; e
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3 -1iapirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4 ' - { (pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina.
Certos pró-fármacos excluídos por essa condiçãoincluem:
Ester t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2 -ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il) carboniloxi}-fenilalanina;
Ester t-butílico de N-[2-dietilamino-5 -{ (N-etil-N-trifluormetilcarboni1)amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina ;
Ester t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{ (N-etil-N-t-butilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina; e
Ester t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{(N-etil-N-f uran-3 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina.
Os compostos dentro do escopo dessa invenção sãcfornecidos na Tabela I abaixo, que inclui seus sais,ésteres ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis:
TABELA I
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DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção está relacionada aos compostos,sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres e pró-fármacos,composições e métodos destes, para o tratamento de doençasmediadas, pelo menos em parte, por VLA-4.
Definições
Deve-se entender que a terminologia aqui usada tem porobjetivo a descrição de modalidades particulares apenas enão pretende limitar o escopo da presente invenção, deveser observado que como aqui usado e nas reivindicações, asformas singulares "um/uma", "e" e "a/o" e a menos que ocontexto dite claramente em contrário. Nessa especificaçãoe nas reivindicações que se seguem, será feita referência ainúmeros termos que devem ser definidos como tendo osseguintes significados:
Como aqui usado, "alquil" refere-se' a gruposhidrocarbil monovalentes saturados alifáticos que têm de 1a 6 átomos de carbono e, pref erivelmente, 1 a 3 átomos decarbono. Esse termo é exemplificado por grupos como metil,etil, n-propil, iso-propil, n-butil, t- butil, n-pentil, eoutros.
"Alquil substituído" refere-se a um grupo alquil quetêm de 1 a 3 e, pref erivelmente, 1 a 2, subs t ituintesselecionado do grupo que consiste em alcoxi, alcoxisubstituído, acil, acilamino, aciloxi, amino, aminosubstituído, aminoacil, aril, aril substituído, ariloxi,ariloxi substituído, ciano, halogênio, hidroxil, nitro,carboxil, carboxil ester, cicloalquil, cicloalquilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído.
"Alquileno" refere-se a um grupo alquil de cadeialinear ou ramificada divalente que tem de 1 a 5 átomos decarbono.
"Alquileno substituído" refere-se a um grupo alquilenoque têm de 1 a 3 e, pref erivelmente, 1 a 2, subs tituintesselecionados do grupo que consiste em alcoxi, alcoxisubstituído, acil, acilamino, aciloxi, amino, aminosubstituído, aminoacil, aril, aril substituído, ariloxi,ariloxi substituído, ciano, halogênio, hidroxil, nitro,carboxil, éster carboxílico, cicloalquil, cicloalquilsubstituído, heteroarll, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído. Um grupoalquileno substituído pode ser fundido a um grupoheterocíclico ou um grupo cicloalquil.
"Alcoxi" refere-se ao grupo "alquil-O-" que inclui,por via de exemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, iso-propoxi,n-butoxi, t-butoxi, sec-butoxi, n-pentoxi, e outros.
"Alcoxi substituído" refere-se a o grupo "alquilsubstituído-O-".
"Acil" refere-se aos grupos H-C(O)-, alquil-C(O) -,alquil substituído-C(O) -, alquenil-C(O) -, alquenilsubstituído-C(O) -, alquinil-C(O) -, alquinil substituído-C(O)- cicloalquil-C(O) -, cicloalquil substituído-C(O) - ,aril-C(O) -, aril substituído-C(O)-, heteroaril-C(O)-,heteroaril substituído-C(O)-, heterocíclico-C(O) - , eheterocíclico-C(O) - substituído, em que alquil, alquilsubstituído, alquenil, alquenil substituído, alquinil,alquinil substituído, cicloalquil, cicloalquil substituído,aril, aril substituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído são como aquidefinido.
"Aminoacil" refere-se a o grupo -C (O) NR11R11 em quecada R11 é independentemente selecionado do grupo queconsiste em hidrogênio, alquil, alquil substituído,alquenil, alquenil substituído, alquinil, alquinilsubstituído, aril, aril substituído, cicloalquil,cicloalquil substituído, heteroaril, heteroarilsubstituído, heterocíclico, heterocíclico substituído, e emque cada R11 é ligado para formar junto com o átomo denitrogênio um anel heterocíclico ou heterocíclicosubstituído em que alquil, alquil substituído, alquenil,alquenil substituído, alquinil, alquinil substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído são como aquidefinido.
"Aciloxi" refere-se aos grupos alquil-C(O)O-, alquil-C(O)O- substituído, alquenil-C(0)0-, alquenil-C(0)0-substituído, alquinil-C(0)0-, alquinil-C(0)0- substituído,aril-C(0)0-, aril-C(0)0- substituído, cicloalquil-C(0)0-,cicloalquil-C(0)0- substituído, heteroaril-C(O)O-,heteroaril-C(O)O- substituído, heterocíclico-C(O)0-, eheterocíclico-C(0)0- em que alquil, alquil substituído,alquenil, alquenil substituído, alquinil, alquinilsubstituído, cicloalquil, cicloalquil substituído, aril,aril substituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído são como aquidefinido.
"Alquenil" refere-se a grupos alquenil que têm de 2 a6 átomos de carbono e, pref erivelmente, 2 a 4 átomos decarbono e que tem pelo menos 1 e, preferivelmente, de 1 a 2sítios de insaturação de alquenil. Tais grupos sãoexemplificados por vinil, alil, but-3-en-1-il, e outros.
"Alquenil substituído" refere-se a grupos alquenil quetêm de 1 a 3 subst ituintes e, pref erivelmente, 1 a 2substituintes, selecionado do grupo que consiste em alcoxi,alcoxi substituído, acil, acilamino, aciloxi, amino, aminosubstituído, aminoacil, aril, aril substituído, ariloxi,ariloxi substituído, ciano, halogênio, hidroxil, nitro,carboxil, ésteres carboxílicos, cicloalquil, cicloalquilsubstituído, heteroaril, substituído heteroaril,heterocíclico e heterocíclico substituído desde quequalquer substituição de hidroxil não seja ligada a umátomo de carbono de vinil (insaturado).
"Alquinil" refere-se a grupos alquinil que têm de 2 a6 átomos de carbono e, preferivelmente, 2 a 3 átomos decarbono e que tem pelo menos 1 e, preferivelmente, de 1 a 2sítios de insaturação de alquinil.
"Alquinil substituído" refere-se a grupos alquinil quetêm de 1 a 3 substituintes e, pref erivelmente, 1 a 2substituintes, selecionado do grupo que consiste em alcoxi,alcoxi substituído, acil, acilamino, aciloxi, amino, aminosubstituído, aminoacil, aril, aril substituído, ariloxi,ariloxi substituído, ciano, halogênio, hidroxil, nitro,carboxil, ésteres carboxílicos, cicloalquil, cicloalquilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído desde quequalquer substituição de hidroxil não seja ligada a umátomo de carbono acetilênico.
"Amino" refere-se a o grupo -NH2.
"Ciano" refere-se a o grupo -CN.
"Amino substituído" refere-se a o grupo -NR'R" em queR' e R" são selecionados independentemente do grupo queconsiste em hidrogênio, alquil, alquil substituído,alquenil, alquenil substituído, alquinil, alquinilsubstituído, aril, aril substituído, cicloalquil,cicloalquil substituído, heteroaril, heteroarilsubstituído, heterocíclico, heterocíclico substituído e emque R' e R" são unidos, junto com o nitrogênio ligado aeles para formar um grupo heterocíclico ou heterocíclicosubstituído desde que R' e R" não sejam hidrogênio. QuandoR' é hidrogênio e R" é alquil, o grupo amino substituído éalgumas vezes referido como alquilamino. Quando R' e R" sãoalquil, o grupo amino substituído é algumas vezes aquireferido como dialquilamino. Quando se faz referência a umamino mono-substituído, entende-se que R' ou R" éhidrogênio mas não ambos. Quando se faz referência a umamino di - substituído, entende-se que nem R' nem R" éhidrogênio.
"Acilamino" refere-se aos grupos -NR12C(O)alquil,NR12C(O)SubStituido alquil, -NR12-C (O) cicloalquil,R12C (O) cicloalquil substituído, -NR12C (O) alquenil,NR12C (O) alquenil substituído, -NR12 (O) alquinil,NR12C (O) alquinil substituído, -NR12C (O) aril, -NR12C (O) arilsubstituído, -NR12C (0) heteroaril, -NR12C (O) heteroarilsubstituído, -NR12C(O)heterocíclico, eNR12C (O) heterocíclico substituído em que R12 é hidrogênio oualquil e em que alquil, alquil substituído, alquenil,alquenil substituído, alquinil, alquinil substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído são como aquidefinido.
"Nitro" refere-se a o grupo -NO2.
"Aril" ou "Ar" refere-se a um grupo carbocíclicoaromático monovalente de 6 a 14 átomos de carbono que temum anel único (por exemplo, fenil) ou anéis múltiploscondensados (por exemplo, naftil ou antril) cujos anéiscondensados podem ou não ser aromáticos (por exemplo, 2-benzoxazolinona, 2H-1, 4-benzoxazin-3(4H)-ona-7-il, eoutros) desde que o ponto de adesão esteja em um átomo decarbono aromático. Grupos aril preferidos incluem fenil enaftil.
"Aril substituído" refere-se a grupos aril que sãosubstituídos com de 1 a 3 substituintes e, preferivelmente,1 a 2 substituintes, selecionado do grupo que consiste emhidroxil, acil, acilamino, aciloxi, alquil, alquilsubstituído, alcoxi, alcoxi substituído, alquenil, alquenilsubstituído, alquinil, alquinil substituído, amino, aminosubstituído, aminoacil, aril, aril substituído, ariloxi,ariloxi substituído, carboxil, ésteres carboxílicos, ciano,tiol, tioalquil, tioalquil substituído, tioaril, tioarilsubstituído, tioheteroaril, tioheteroaril substituído,tiocicloalquil, tiocicloalquil substituído,tioheterocíclico, tioheterocíclico substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, halo, nitro,heteroaril, heteroaril substituído, heterocíclico,heterocíclico substituído, heteroariloxi, heteroariloxisubstituído, heterocicliloxi, heterocicliloxi substituído,amino sulfonil (NH^-SO?-) , e amino sulfonil substituído.
"Ariloxi" refere-se a o grupo aril-0- que inclui, porvia de exemplo, fenoxi, naftoxi, e outros.
"Ariloxi substituído" refere-se a grupos aril-0-substituído. "Carboxil" ou "carboxi" refere-se a -COOH ousais desses.
"Éster carboxílico" ou "éster de carboxi" refere-seaos grupos -C(O)0-alquil, -C(O)0-alquil substituído,C(O)0-alquenil, -C(O)O-alquenil substituído, -C(O)O-alquinil, -C(O)O-alquinil substituído, -C(O)-aril, -C(O)O-aril substituído, -C(O)-cicloalquil, -C(O)0-cicloalquilsubstituído, -C(O)-cicloalquenil, -C(O)O-cicloalquenilsubstituído, -C(O)0-heteroaril, -C(0)0-heteroarilsubstituído, -C(0)-heterocíclico, e -C(0)0-heterocíclicosubstituído.
"Cicloalquil" refere-se a cíclico grupos alquil de 3 a10 átomos de carbono que têm anéis cíclicos únicos oumúltiplos incluindo, por . via de exemplo, adamantil,ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclooctil, e outros.
"Cicloalquenil" refere-se a cíclico grupos alquenil de4 a 10 átomos de carbono que têm anéis cíclicos únicos oumúltiplos e também tendo pelo menos 1 e, preferivelmente,de 1 a 2 sítios internos de insaturação etilênica ou vinil(>C=C<).
"Cicloalquil substituído" e "cicloalquenilsubstituído" refere-se a um grupo cicloalquil oucicloalquenil, que têm de 1 a 5 substituintes selecionadosdo grupo que consiste em oxo ( = 0) , tioxo alcoxi, alcoxisubstituído, acil, acilamino, aciloxi, amino, aminosubstituído, aminoacil, aril, aril substituído, ariloxi,ariloxi substituído, ciano, halogênio, hidroxil, nitro,carboxil, ésteres carboxí1icos, cicloalquil, cicloalquilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído.
"Cicloalcoxi" refere-se a grupos -0-cicloalquil.
"Substituído cicloalcoxi" refere-se a grupos -0-cicloalquil substituídos.
"Halo" ou "halogênio" refere-se a flúor, cloro, bromo,e iodo e, preferivelmente, é flúor ou cloro.
"Hidroxil" ou "hidroxi" refere-se a o grupo -0H."Heteroaril" refere-se a um grupo aromático de 1 a 10átomos de carbono e 1 a 4 heteroátomos selecionados dogrupo que consiste em oxigênio, nitrogênio, e enxofredentro do anel. Tais grupos heteroaril podem ter um anelúnico (por exemplo, piridinil ou furil) ou anéis múltiploscondensados (por exemplo, indolizinil ou benzotienil) emque os anéis condensados podem ou não ser aromáticos e/ oucontêm um heteroátomo desde que o ponto de adesão sejaatravés de um átomo do grupo heteroaril aromático. Gruposheteroaril preferidos incluem piridinil, pirrolil, indolil,tiofenil, e furanil.
"Heteroaril substituído" refere-se a grupos heteroarilque são substituídos com de 1 a 3 substituintesselecionados do mesmo grupo de substituintes definido paraaril substituído.
"Heteroariloxi" refere-se a o grupo -0-heteroaril e"heteroariloxi substituído" refere-se a o grupo -0-heteroarí1 substituído.
"Heterociclo" ou "heterocíclico" ou"heterocicloaIqui1" ou "heterociclil" refere-se a um gruponão aromático insaturado, saturado, ou parcialmentesaturado que tem um anel único ou anéis múltiploscondensados, de 1 a 12 átomos de carbono e de 1 a 4heteroátomos selecionados do grupo que consiste emnitrogênio, enxofre ou oxigênio no anel cujo anel podecompreender opcionalmente 1 a 3 grupos exo carbonil outiocarbonil. Em sistemas de anel fundido, um ou mais dosanéis pode ser cicloalquil, aril, ou heteroaril desde que oponto de adesão seja através do anel heterocíclico.
"Heterocíclico substituído" ou "heterocicloalquilsubstituído" ou "heterociclil substituído" refere-se agrupos heterociclil que são substituídos com de 1 a 3 dosmesmos substituintes como definido para cicloalquilsubstituído.
Exemplos de grupos heterociclil e heteroaril incluem,sem limitação, azetidina, pirrol, imidazol, pirazol,piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolizina,isoindol, indol, diidroindol, indazol, purina, quinolizina,isoquinolina, quinolina, ftalazina, naftilpiridina,quinoxalina, quinazolina, cinolina, pteridina, carbazol,carbolina, fenantridina, acridina, fenantrolina, isotiazol,fenazina, isoxazol, fenoxazina, fenotiazina, imidazolidina,imidazolina, piperidina, piperazina, indolina, ftalimida,1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina, 4,5,6,7 -tetrahidrobenzo
[b]tiofeno, tiazol, tiazolidina, tiofeno, benzo[b]tiofeno,morfolinil, tiomorfolinil (também referido comotiamorfolinil), piperidinil, pirrolidina,tetrahidrofuranóleo, e outros.
"Tiol" refere-se a o grupo -SH.
"Tioalquil" ou "alquiltiOéter" ou "tioalcoxi" refere-se a o grupo -S-alquil.
"Tioalquil substituído" ou "alquiltioéter substituído"ou "tioalcoxi substituído" refere-se ao grupo -S-alquilsubstituído.
"Tioaril" refere-se a o grupo -S-aril, em que aril édefinido acima.
"Tioaril substituído" refere-se a o grupo -S-arilsubstituído, em que aril substituído é definido acima.
"Tioheteroaril" refere-se a o grupo -S-heteroaril, emque heteroaril é como acima definido."Tioheteroaril substituído" refere-se a o grupo -S-heteroaril substituído, em que tioheteroaril substituído édefinido acima.
"Tioheterocíclico" refere-se a o grupo -S-heterocíclico e "tioheterocíclico substituído" refere-se ao grupo -S-heterocíclico substituído, em que heterocíclicoe heterocíclico substituído são definidos acima.
"Heterocicliloxi" refere-se a o grupo heterociclil-0-e "heterociclil-O- substituído" referem-se a o grupoheterociclil-0- substituído em que heterociclil eheterociclil substituído são como definidos acima.
"Tiocicloalquil" refere-se ao grupo -S-cicloalquil e"tiocicloalquil substituído" refere-se a o grupo -S-cicloalquil substituído, em que cicloalquil e cicloalquilsubstituído são como definidos acima.
"Pró-fármaco" refere-se a qualquer derivadofarmaceuticamente aceitável de um composto dessa invençãoque é capaz de fornecer diretamente ou indiretamente umcomposto dessa invenção ou um metabólito ativo ou resíduodesse quando administrado a um indivíduo. Derivados e pró-fármacos particularmente favorecidos são aqueles queaumentam a biodisponibilidade dos compostos dessa invençãoquando tais compostos são administrados a um indivíduo (porexemplo, ao permitir que um composto administrado oralmenteseja mais facilmente absorvido no sangue) ou que aumente aliberação do composto original a um compartimento biológico(por exemplo, o cérebro ou sistema linfático) em relação àespécie original. Pró-fármacos incluem formas de éster doscompostos da invenção, uma revisão geral de pró-fármacos éfornecida em T. Higuchi e V. Stella, "Pro-drugs as NovelDelivery Systems", Vol. 14 da "A.C.S. Symposium Series", eem Edward B. Roche, ed., "Bioreversible Carriers in DrugDesign", American Pharmaceutical Association e PergamonPress, 1987, ambos aqui incorporados por referência.
"Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a sais queretêm a eficácia e as propriedades biológicas dos compostosdessa invenção e que não são biologicamente ou de outromodo indesejáveis. Em muitos casos, os compostos dessainvenção são capazes de formar sais ácidos e/ ou básicos emvirtude da presença de grupos amino e/ ou carboxil ougrupos similares.
Sais farmaceuticamente aceitáveis de adição de basespodem ser preparados a partir de bases inorgânicas eorgânicas. Sais derivados de bases inorgânicas incluem,apenas como exemplo, sais de sódio, potássio, litio,amônio, cálcio e magnésio. Sais derivados de basesorgânicas incluem, sem limitação, sais de aminas primárias,secundárias e terciárias, tais como alquil aminas, dialquilaminas, trialquil aminas, alquil substituído aminas,di(alquil substituído) aminas, tri(alquil substituído)aminas, alquenil aminas, dialquenil aminas, trialquenilaminas, alquenil substituído aminas, di(alquenilsubstituído) aminas, tri(alquenil substituído) aminas,cicloalquil aminas, di(cicloalquil) aminas,tri(cicloalquil) aminas, cicloalquil substituído aminas,dicicloalquil substituído amina, tricicloalquil substituídoaminas, cicloalqueni1 aminas, di(cicloalquenil) aminas,tri(cicloalquenil) aminas, substituído cicloalquenilaminas, cicloalquenil amina di-substituída, cicloalquenilaminas tri-substituídas, aril aminas, diaril aminas,triaril aminas, heteroaril aminas, diheteroaril aminas,triheteroaril aminas, aminas heterocíclicas, aminasdiheterocíclicas, aminas triheterocíclicas, di- e tri-aminas mistas nas quais pelo menos dois dos substituintesna amina são diferentes e são selecionado do grupo queconsiste em alquil, alquil substituído, alquenil, alquenilsubstituído, cicloalquil, cicloalquil substituído,cicloalquenil, cicloalquenil substituído, aril, heteroaril,heterocíclico, e outros. Também estão incluídas aminas nasquais dois ou três substituintes, junto com o aminonitrogênio, formam um heterocíclico ou heteroaril grupo.
Exemplos de aminas adequadas incluem, apenas comoexemplo, isopropilamina, trimetil amina, dietil amina,tri(iso-propil) amina, tri(n-propil) amina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, arginina,histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína,etilenodiamina, glicosamina, N-alquilglucaminas,teobromina, purinas, piperazina, piperidina, morfolino, N-etilpiperidina, e outros. Deve-se entender também queoutros derivados do ácido carboxílico seriam úteis naprática dessa invenção, por exemplo, amidas de ácidocarboxílico, incluindo carboxamidas, carboxamidas de alquilinferior, dialquil carboxamidas e outros.
Sais farmaceuticamente aceitáveis de adição ácidapodem ser preparados a partir de ácidos inorgânicos eorgânicos. Sais derivados de ácidos inorgânicos incluemácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico,ácido nítrico, ácido fosfórico, e outros. Sais derivados deácidos orgânicos incluem ácido acético, ácido propiônico,ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácidomálico, ácido malônico, ácido succinico, ácido maléico,ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácidobenzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácidometanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-tolueno-sulfônico, ácido salicílico e outros.
0 termo "cátion farmaceuticamente aceitável" refere-seao cátion de um sal farmaceuticamente aceitável.
Compreende-se que em todos os grupos substituídos aquidefinidos, polímeros que chegam por definição desubstituintes com substituintes adicionais a eles (porexemplo, aril substituído que tem um grupo aril substituídocomo um substituinte que é em si substituído com um grupoaril substituído etc.) não são aqui incluídos. Nessescasos, o número máximo de tais substituintes é três. Ouseja, que cada uma das definições acima é constrita por umalimitação, por exemplo, que os grupos aril substituídos selimitam a -aril substituído-(aril substituído)-(arilsubstituído).
De modo similar, entende-se que as definições acimanão devem incluir padrões inaceitáveis de substituição (porexemplo, metil substituído com 5 grupos flúor ou um grupohidroxil alfa para insaturação etenílica ou acetilênica).Tais padrões inaceitáveis de substituição são bemconhecidos pelo profissional experiente.
"Tratar" ou o "tratamento" de uma doença inclui:
(1) a prevenção da doença, ou seja, fazer com que ossintomas clínicos da doença não se desenvolvam em ummamífero que pode estar exposto ou predisposto à doença,mas que ainda não apresenta ou exibe os sintomas da doença,
(2) a inibição da doença, ou seja, interromper oureduzir o desenvolvimento da doença ou de seus sintomasclínicos, ou
(3) o alívio da doença, ou seja, causar a regressão dadoença ou de seus sintomas clínicos.
Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" significa umaquantidade de um composto que, quando administrada a ummamífero para o tratamento de uma doença, é suficiente paraefetuar tal tratamento para a doença. A "quantidadeterapeuticamente eficaz" irá variar, dependendo docomposto, da doença e de sua gravidade, e da idade, pesoetc., do mamífero a ser tratado.
"Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos saisfarmaceuticamente aceitáveis de um composto de fórmula Icujos sais são derivados de diversos contra-íons orgânicose inorgânicos bem conhecidos na técnica, e incluem, apenascomo exemplo, sódio, potássio, cálcio, magnésio, amônio,tetraalquilamônio, e outros; e quando a molécula contém umafuncionalidade básica, sais de ácidos orgânicos ouinorgânicos, tais como cloridrato, hidrobrometo, tartarato,mesilato, acetato, maleato, oxalato, e outros.
As integrinas são uma grande família de proteínashomólogas de ligação transmembrana que são os receptoresprincipais em células animais para ligação da maioria dasproteínas da matriz extracelular como, por exemplo,colágeno, fibronectina e laminina. As integrinas sãoheterodímeros compostos por uma cadeia α e uma cadeia β.Até hoje, vinte heterodímeros de integrina diferentes,feitos de 9 diferentes subunidades α e 14 diferentessubunidades β, foram identificados. O termo "integrinas α4" refere-se à classe de receptores da superfície celularde heterodímeros, ligados à enzima, que contêm a subunidadea4 pareada com qualquer uma das subunidades β. VLA-4 é umexemplo de uma integrina α.4, e é um heterodímero dassubunidades α 4 e βΐ, e é também referida como α.4 βΐintegrina.
Compostos, sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres,e pró-fármacos, composições, sínteses desses, e métodospara o tratamento de doenças mediadas por VLA-4 sãofornecidos.
Em uma modalidade, a presente invenção fornececompostos de fórmula I:
<formula>formula see original document page 47</formula>
em que:
Ar é selecionado do ,grupo que consiste em aril,heteroaril, aril substituído, 20 e heteroaril substituído;
η é um número inteiro de 1 a 4;
X é S ou O;
T é selecionado do grupo que consiste em uma ligação,-O-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, e -N (R9) - , em que R9 éselecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquil ealquil substituído ou R1 e R9 juntos com os átomospendentes a ele, formam um anel heterocíclico, umheterocíclico substituído, um heteroaril, ou um heteroarilsubstituído desde que, quando T for -O- ou -S-, R1 não seráalcoxi ou alcoxi substituído;
R1 é selecionado do grupo que consiste em alquil,alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;
R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,acil, alquil, alquil substituído, alquenil, alquenilsubstituído, alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxisubstituído, cicloalquil, cicloalquil substituído, aril,aril substituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;
ou R1, R2, e T, juntos com os átomos pendentes a ele,formam um anel heterocíclico que consiste em de 4 a 8átomos de anel da fórmula:
em que W é selecionado do grupo que consiste emalquileno e alquileno substituído, e em que um ou mais dosátomos de carbono na cadeia de alquileno podem sersubstituídos por -C(O)-, -C(S)-, -O- ou -N (R10) - em que RI0é hidrogênio, C1 a C,, alquil, ou C1 a C4 alquil substituído;
R3 e r'1 são selecionados independentemente do grupoque consiste em hidrogênio, alquil, alquil substituído,alcoxi, alcoxi substituído, aril, aril substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, heteroaril,heteroaril substituído, heterocíclico, heterocíclicosubstituído, e hidroxi; ou R3 e R4, juntos com o átomo denitrogênio ao qual estão pendentes, formam um anelheterocíclico ou heterocíclico substituído;
desde que quando um de R3 e R4 é hidroxi, alcoxi, oualcoxi substituído o outro de R3 e R4 seja selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquil, alquilsubstituído, aril, aril substituído, cicloalquil,cicloalquil substituído, heteroaril, heteroarilsubstituído, heterocíclico e heterocíclico substituído;
R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,C1 a C4 alquil, e C1 a C, alquil substituído;
R6 é selecionado do grupo que consiste em carboxi eéster de carboxi;
R7 e R8 são selecionados independentemente do grupoque consiste em hidrogênio, alquil e alquil substituído, ou
R7 e R8, juntos com o átomo de nitrogênio a ele pendente,formam um anel heterocíclico ou heterocíclico substituído;
e
Y é N ou CH; ou um sal, éster ou pró-fármacofarmaceuticamente aceitável desses, desde que se exclua osseguintes compostos bem como seu sal, éster ou pró-fármacofarmaceuticamente aceitável desses:
N-[2-diet ilamino-5 -{N-etil-N-(trifluoracetil)amino}pirimidin-4 -il]-L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(iso-propilcarbonil)aminoIpirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(t-butilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-2 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piperidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-etil-N-isopropilaminocarbonil)amino}-pirimidin-4-il] -L-4 ' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-3 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-3-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi} fenilalanina; e
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3-1iapirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{ (pirrolidin-l-il) carboniloxi}fenilalanina.
Certos pró-fármacos excluídos por essa condiçãoincluem:
éster t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;
éster t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-trifluormetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;
éster t-butílico de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-t-butilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina; e
éster t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-furan-3-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' -{ (pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina.
Em outra modalidade, a presente invenção fornececompostos de fórmula II:
<formula>formula see original document page 51</formula>
em que:X é S ou O;
T é selecionado do grupo que consiste em uma ligação,-O-, -S-, -S(O)-, -S(O),-, e -N (R9) - , em que R9 éselecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquil, ealquil substituído ou R1 e R9 juntos com os átomospendentes a ele, formam um anel heterociclico, umheterocíclico substituído, um ^heteroaril, ou um heteroarilsubstituído desde que, quando T for -O- ou -S- então R1 nãoé alcoxi ou alcoxi substituído;
R1 é selecionado do grupo que consiste em alquil,alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;
R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,acil, alquil, alquil substituído, alquenil, alquenilsubstituído, alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxisubstituído, cicloalquil, cicloalquil substituído, aril,aril substituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;
ou R1 , R2, e T, juntos com os átomos pendentes a ele,formam um anel heterocíclico que consiste em de 4 a 8átomos de anel da fórmula:
<formula>formula see original document page 52</formula>
em que W é selecionado do grupo que consiste emalquileno e alquileno substituído, e em que um ou mais dosátomos de carbono na cadeia de alquileno podem sersubstituídos por -C(O)-, -C(S)-, -O- ou -N (R10) - em que Rl0é hidrogênio, C1 a Cn alquil, ou C1 a C^ alquil substituído;
R3 e R4 são selecionados independentemente do grupoque consiste em hidrogênio, alquil, alquil substituído,alcoxi, alcoxi substituído, aril, aril substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, heteroaril,heteroaril substituído, heterocíclico, heterocíclicosubstituído, e hidroxi; ou R3 e R4, juntos com o átomo denitrogênio ao qual estão pendentes, formam um anelheterocíclico ou heterocíclico substituído;
desde que quando um de R3 e R4 é hidroxi, alcoxi, oualcoxi substituído o outro de R3 e R4 seja selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquil, alquilsubstituído, aril, aril substituído, cicloalquil,cicloalquil substituído, heteroaril, heteroarilsubstituído, heterocíclico e heterocíclico substituído;
R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,C1 a C4 alquil, e C1 a C4 alquil substituído;
R6 é selecionado do grupo que consiste em carboxi eéster de carboxi;
R7 e R8 são selecionados independentemente do grupoque consiste em hidrogênio, alquil e alquil substituído, ouR7 e R8, juntos com o átomo de nitrogênio a ele pendente,formam um anel heterocíclico ou heterocíclico substituído;e
Y é N ou CH; ou
um sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamenteaceitável desses, desde que se exclua os seguintescompostos bem como seu sal, éster ou pró-fármacofarmaceuticamente aceitável desses:
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(trifluoracetil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N-etil-N- (iso-propilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(t-butilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piperidin-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-etil-N-isopropilaminocarboni1)amino}-pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-3 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-3-ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi} fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3 -1iapirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}fenilalanina;
Certos pró-fármacos excluídos por essa condiçãoincluem:
éster t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{ (pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;
éster t-butílico- de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-trifluormetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4 ' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;
éster t-butílico de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-t-butilcarboni1)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-i1)carboniIoxi}-fenilalanina; e
éster t-butilico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-furan-3-ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il] -L_4' - { (pirrolidin-1 -il)carboniloxi}-fenilalanina.
Ainda em uma outra modalidade, a presente invençãofornece compostos de fórmula III:
<formula>formula see original document page 55</formula>
em que:
X é S ou O;
T é selecionado do grupo que consiste em uma ligação,-O-, -S-, -S(O)-, -S(O),-, e -N (R9) -, em que R9 éselecionado do grupo que' consiste em hidrogênio, alquil ealquil substituído ou R1 e R9 junto com os átomos pendentesa ele formam um heterocíclico, um heterocíclicosubstituído, um heteroaril, ou um anel heteroarilsubstituído, desde que, quando T for -O- ou -S-, R1 nãoserá alcoxi ou alcoxi substituído;
R1 é selecionado do grupo que consiste em alquil,alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, substituído heteroaril,heterocíclico e heterocíclico substituído;
R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,alquil, alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;
ou RI, R2, e T, juntos com os átomos pendentes a ele,formam um anel heterocíclico que consiste em de 4 a 8átomos de anel da fórmula:
<formula>formula see original document page 56</formula>
em que W é selecionado do grupo que consiste emalquileno e alquileno substituído, e em que um ou mais dosátomos de carbono na cadeia de alquileno podem sersubstituídos por -C(O)-, -C(S)-, -O- ou -N (R10) - em que R10é hidrogênio, C1 a C4 alquil, ou C1 a C4 alquil substituído;
Rb é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,C1 a C4 alquil, e substituído Cn a C4 alquil;
R6 é selecionado do grupo que consiste em carboxi eéster de carboxi;
R7 e R8 são selecionados independentemente do grupoque consiste em hidrogênio, alquil e alquil substituído, ouR7 e R8, juntos com o átomo de nitrogênio a ele pendente,formam um anel heterocíclico ou heterocíclico substituído;e
Y é N ou CH; ou
um sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamenteaceitável desses, desde que se exclua os seguintescompostos bem como seu sal, éster ou pró-fãrmacofarmaceuticamente aceitável desses:
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(trifluoracetil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(iso-propilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(t-butilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -i1] -L-4 ' -{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piperidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-etil-N-isopropilaminocarboni1)amino}-pirimidin-4 -il] -L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-3-ilcarbonil)aminoJpirimidin-4 -il]-L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-3-ilcarbonil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3 -1iapirrolidin-1-ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina,·
Certos pró-fármacos excluídos por essa condiçãoincluem:
éster t-butílico de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;
éster t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-trifluormetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;
éster t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-t-butilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina; e
éster t-butílico de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-furan-3-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4 ' - { (pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina.
Em uma modalidade, essa invenção fornece compostos defórmula I, II, ou III em que o grupo -OC(O)NR7R8 está naposição para de um anel fenílico. Em alguns aspectos dessamodalidade, Y é N e X é oxigênio.
Em outra modalidade, essa invenção fornece compostosde fórmula I, II, ou III em que Y é N.
Ainda em uma outra modalidade, essa invenção fornececompostos de fórmula I, II, ou III em que X é oxigênio.
Ainda em uma outra modalidade, essa invenção fornececompostos de fórmula I, II, ou III em que Y é N e X éoxigênio.
Em uma outra modalidade dessa invenção, X é oxigênio eT é uma ligação. Em alguns aspectos dessa modalidade, R1 éselecionado do grupo que consiste em metil, trifluormetil,metoximetil, etil, fenil, 4-fluorfenil, 3-fluorfenil, 2-fluorfenil, 4-clorofenil, 3-clorofenil, 2-clorofenil, 2,6-diclorofenil, benzil, pirid-2-il, pirid-4-il, furan-2-il,furan-3-il, 3-metilfuran-2-il, 3- metiltien-2-il, 5-metil-tien-2-il, tien-2-il, 5-clorotien-2-il, 5-(pirid-2-il)tien-2-il, tiazol-2-il, benzo[b]tien-2-il, e t-butil.
Ainda em uma outra modalidade dessa invenção, X éoxigênio e T é -N (R9) - . Em alguns aspectos dessamodalidade, R1 e R9 são preferivelmente selecionados dogrupo que consiste nas seguintes combinações metil/metil,etil/etil, ciclopentil/metil, benzil/hidrogênio,ciclohexil/etil, propargil/metil, benzil/metil,fenetil/hidrogênio, fenetil/metil, biciclo[2.2.1]heptan-2 -il/hidrogênio, fenil/hidrogênio, fenil/metil, 4-clorofenil/metil, 3-clorofenil/metil, ciclohexil/hidrogênio, metoxi/metil, e etoxicarbonilmetil/hidrogênio.
Ainda em uma outra modalidade dessa invenção, R1 e R9,junto com o átomo de nitrogênio pendente a ele, formam umanel heterocíclico selecionado do grupo que consiste empirrolidinil, morfolino, tiomorfolino, 2,6-
dimetilmorfolino, 2,5-diidropirrolil, piperidinil, 4-metilpiperidinil, 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolinil, 1,2,3,4-tetrahidroquiniolinil, e isoindolinil.
Em uma outra modalidade dessa invenção, X e T sãooxigênio. Em alguns aspectos da modalidade, R1 éselecionado do grupo que consiste em metil e fenil.
Em uma modalidade, essa invenção fornece compostos defórmula I, II, ou III em que, R2 é alquil ou alquilsubstituído. Em alguns aspectos da modalidade, R2 éselecionado do grupo que consiste em metil, etil, iso-propil, n-propil, benzil, fenetil,e 4-clorofenilcarbonilmetil (4-C,^-C(0) -CH2-) .
Em uma outra modalidade dessa invenção, R2 é alquenilou alquinil. Em alguns aspectos da modalidade, R2 éselecionado do grupo que consiste em alil, vinil, epropargil.
Ainda em uma outra modalidade dessa invenção, R2 éacil. Em alguns aspectos da modalidade, R2 é formil.
Em outras modalidades dessa invenção, X é oxigênio, Té uma ligação e R1 e R2, junto com o átomo de nitrogênioligado a R2, formam um anel heterocíclico que consiste em 4a 8 átomos de anel da fórmula:
<formula>formula see original document page 60</formula>
em que W é selecionado do grupo que consiste emalquileno e alquileno substituído, e em que um ou mais dosátomos de carbono na cadeia de alquileno podem sersubstituídos por -C(O)-, -C(S)-, -O- ou -N (R10) - em que R10é hidrogênio, C3 a C, alquil ou C1 a C4 alquil substituído.Em alguns aspectos, R1 e R2 formam um heterocíclico gruposelecionado do grupo que consiste em 2,5-dioxopirrolidinil,2-oxopirrolidinil, ι, 3-dioxoisoindolinil, 1-oxoisoindolinil, e 5,6-dicloro-1,3-dioxoisoindolinil.
Em uma modalidade de fórmula I ou II, R3 e R4 sãoindependentemente alquil. Em alguns aspectos da modalidade,R3 e R4 são ambos etil.
Em uma modalidade de fórmula I, II, ou III, R ehidrogênio.Em uma modalidade de fórmula I, η é um.
Em uma modalidade de fórmula I, Ar é selecionado dogrupo que consiste em fenil, piridil, e pirimidil. Emalguns aspectos dessa modalidade, Ar é fenil.
Em uma modalidade de fórmula I, II, ou III, R7 e R8são cada independentemente alquil. Em alguns aspectos damodalidade, R7 e R8 são preferivelmente selecionados dogrupo que consiste nas seguintes combinações metil/metil,metil/etil, e etil/etil. Em outro aspecto dessa modalidade,R7 e R8, junto com o átomo de nitrogênio ao qual eles sãoligados, formam um anel heterocíclico. Em alguns aspectos,o anel heterocíclico é selecionado do grupo que consiste empirrolidinil, morfolino, e piperidinil.
Ainda em uma outra modalidades, a invenção fornecealquil ésteres dos compostos de fórmula I, II e III. Emalguns aspectos, o alquil éster é selecionado do grupo queconsiste em a metil, etil, propil, butil, sec-butil, iso-butil, e t-butil éster.
Os compostos dentro do escopo dessa invenção sãofornecidos na Tabela I abaixo, que inclui seus sais,ésteres ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis:
TABELA I
<table>table see original document page 61</column></row><table><table>table see original document page 62</column></row><table><table>table see original document page 63</column></row><table><table>table see original document page 64</column></row><table><table>table see original document page 65</column></row><table><table>table see original document page 66</column></row><table><table>table see original document page 67</column></row><table><table>table see original document page 68</column></row><table><table>table see original document page 69</column></row><table><table>table see original document page 70</column></row><table><table>table see original document page 71</column></row><table><table>table see original document page 72</column></row><table><table>table see original document page 73</column></row><table><table>table see original document page 74</column></row><table><table>table see original document page 75</column></row><table><table>table see original document page 76</column></row><table><table>table see original document page 77</column></row><table><table>table see original document page 78</column></row><table><table>table see original document page 79</column></row><table><table>table see original document page 80</column></row><table><table>table see original document page 81</column></row><table><table>table see original document page 82</column></row><table><table>table see original document page 83</column></row><table>que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e umaquantidade terapeuticamente eficaz de um composto dessainvenção. Em outro aspecto, essa invenção é direcionada aouso de uma composição farmacêutica que compreende umcomposto dessa invenção para a manufatura de um medicamentopara o tratamento de uma doença mediada por a4 integrina.
Os compostos e composições farmacêuticas dessainvenção são úteis para o tratamento de condições de doençamediadas, pelo menos em parte, por a4 integrinas, em que acx4 integrina é pref erivelmente VLA-4 . Tais condições dedoença incluem, por exemplo, asma, doença de Alzheimer,aterosclerose, demência por AIDS, diabetes, diabetes agudode surgimento juvenil, doença inflamatória do intestino,colite ulcerat iva, doença de Crohn, esclerose múltipla,artrite reumatóide, transplante de tecido, metástasetumoral, meningite, encefalite, acidente vascular cerebral,traumas cerebrais, nefrite, retinite, dermatite atópica,psoríase, isquemia miocárdica, dano pulmonar agudo mediadopor leucócitos, e síndrome do sofrimento respiratório doadulto.
Em algumas modalidades, a condição de doença mediadapor a4 integrina é uma doença inflamatória. A doençainflamatória inclui eritema nodoso, conjuntivite alérgica,neurite ótica, uveíte, rinite alérgica, espondiliteanquilosante, artrite psoriática, vasculite, síndrome deReiter, lúpus eritematoso disseminado, esclerose sistêmicaprogressiva, polimiosite, dermatomiosite, granulomatose deWegner, aortite, sarcoidose, Iinfocitopenia, arteritetemporal, pericardite, miocardite, insuficiência cardíacacongestiva, poliarterite nodosa, síndromes dehipersensibilidade, alergia, síndromes de hipereosinofilia,síndrome de Churg-Strauss, doença pulmonar obstrutivacrônica, pneumonite de hipersensibilidade, hepatite crônicaativa, cistite intersticial, insuficiência endócrinaautoimune, cirrose biliar primária, anemia aplásticaautoimune, hepatite crônica persistente e tireoidite.Preparação do Composto
Os compostos dessa invenção podem ser preparados apartir de materiais de partida facilmente disponíveis com ouso dos seguintes métodos e procedimentos gerais. Seráobservado que, quando forem fornecidas condições deprocesso típicas ou preferidas (ou seja, temperaturas dareação, times, proporções molares de reagentes, solventes,pressões etc.), outras condições de processo também poderãoser usadas, a menos que especificado de forma diferente. Ascondições ótimas de reação podem variar com os reagentes ousolventes específicos usados, mas estas condições podem serdeterminadas por aqueles habilitados na técnica porprocedimentos de otimização de rotina.
Adicionalmente, como ficará evidente para aqueleshabilitados na técnica, podem ser necessários gruposprotetores convencionais para evitar que certos gruposfuncionais sejam submetidos a reações indesejadas. Gruposprotetores adequados para vários grupos funcionais, além decondições adequadas para a proteção e desproteção de gruposfuncionais específicos são bem conhecidos na técnica. Porexemplo, diversos grupos protetores são descritos em T.W.Greene e G.M. Wuts, "Protecting Groups in OrganicSynthesis", Segunda Edição, Wiley, Nova York, 1991, ereferências nele citadas.Além disso, os compostos dessa invenção terãotipicamente um ou mais centros quirais. Conseqüentemente,caso desejado, tais compostos podem ser preparados ouisolados como estereoisômeros puros, ou seja, comoenantiômeros ou diastereoisômeros individuais, ou comomisturas enriquecidas em estereoisômeros. Todos essesestereoisômeros (e misturas enriquecidas) estão incluídosdentro do escopo dessa invenção, a menos que indicado deforma diferente. Estereoisômeros puros (ou misturasenriquecidas) podem ser preparados, por exemplo, com o usode materiais de partida opticamente ativos ou reagentesestéreo-seletivos bem conhecidos na técnica.
Alternativamente, misturas racêmicas destes compostos podemser separadas, por exemplo, com o uso de cromatografia decoluna quiral, agentes de resolução quiral e outros.
Em outras modalidades, a invenção fornece métodos para asíntese de compostos da invenção como mostrado abaixo nosEsquemas 1, 2, e 3.
<formula>formula see original document page 86</formula>Esquema 1No Esquema 1, 5-aminopirimidina 1.1, em que Pg é umgrupo protetor carboxi, pode ser preparada de acordo com WO03/099809. A amina 1.1 é convertida à trifluoracetamidacorrespondente 1.2 por métodos convencionais. Nessamodalidade, o grupo trif luoracetil atua como um grupoprotetor amina. Um leve excesso de anidrido trifluoracéticoé combinado com amina 1.1 em um diluente inerte adequado,por exemplo, tetrahidrofurano, cloreto de metileno,piridina, e outros. A reação é mantida em de cerca de O0C acerca de 30°C até que a reação esteja substancialmentecompleta o que ocorre tipicamente em cerca de 0,5 a 24horas. Após o término da reação, a trifluoracetamida 1.2 érecuperada por métodos convencionais ou, alternativamente,é empregada na etapa seguinte sem purificação e/ ouisolamento.
A conversão de trifluoracetamida 1.2 à amida terciária1.3 novamente é feita através de técnicas convencionais.Por exemplo, um excesso de um haleto de alquila como m R2Ié combinado com trifluoracetamida 1.2 em um diluente inerteadequado, por exemplo, dimetilformamida (DMF) na presençade um excesso de uma base adequada, por exemplo, carbonatode potássio. Em uma modalidade, aproximadamente doisequivalentes de RpiI e carbonato de potássio são empregados.A reação é mantida sob condições ambientes e é continuadaaté que a reação esteja substancialmente completa o queocorre tipicamente em 20-72 horas. Após o término dareação, o produto 1.3' é recuperado por métodosconvencionais ou, alternativamente, é empregado na etapaseguinte sem purificação e/ ou isolamento. o grupo protetorcarboxi do composto 1.3 pode ser removido por condiçõesconvencionais para fornecer o ácido carboxílico 1.4. Em umamodalidade, o grupo protetor Pg é um grupo protetor t-butile é removido por contato com ácido fórmico. Em outramodalidade, Pg é um grupo protetor benzil que é removidopor contato com hidrogênio na presença de um catalisador depaládio/carbono, tipicamente em um solvente prótico como,por exemplo, metanol, sob pressões elevadas de hidrogênio.
Esquema 2 ilustra a síntese de uréia 1.8 e derivadoacilamino 1.3.
<formula>formula see original document page 88</formula>
Esquema 2.O grupo protetor trifluoracetamida do composto 1.3pode ser removido para fornecer a amina correspondente 1.5como mostrado no Esquema 2. Como acima, essa reaçãoconvencionalmente avança, por exemplo, por contato docomposto 1.3 com um excesso grande de uma base adequada,por exemplo, carbonato de potássio, em uma mistura de águae um solvente prótico como, por exemplo, metanol. A reaçãoé conduzida em temperaturas elevadas como cerca de 40°C a60°C e é continuada até que a reação estejasubstancialmente completa. Após o término da reação, aamina 1.5 é recuperada por métodos convencionais ou,alternativamente, é empregada na etapa seguinte sempurificação e/ou isolamento. A amina 1.5 pode ser usadapara preparar derivados de uréia 1.8 ou derivados deacilamino 1.10. Na primeira modalidade, o cloreto de amido1.6 é preparado por contato de amina 1.5 com um excesso defosgeno na presença de uma base adequada, por exemplo,carbonato de potássio, bicarbonato de potássio, carbonatode sódio, e outros. Após o término da reação, o cloreto deamido 1.6 pode ser recuperado por métodos convencionais,mas preferivelmente é empregada na etapa seguinte sempurificação e/ ou isolamento. Ele é então convertido aoderivado de uréia correspondente 1.7· por reação com umaamina adequada R1R9NH sob condições convencionais. Depreferência, a reação de uma quantidade eqüimolar ouexcesso da amina faz contado com cloreto de amido 1.6 em umsolvente adequado como, por exemplo, tetrahidrofurano,dioxano, clorofórmio, e outros. Após o término da reação,uréia 1.7 pode ser recuperado por métodos convencionais ou,alternativamente, é empregada na etapa seguinte sempurificação e/ ou isolamento. o grupo protetor carboxil ofuréia 1.7 pode ser removido por condições convencionais(como descrito no Esquema 1) para fornecer o ácidocarboxílico 1.8.
o Esquema 3 ilustra a síntese de imida 1.15 e lactama
<formula>formula see original document page 90</formula>
Esquema 3.
Como mostrado no Esquema 3, a 5-aminopirimidina deiniciação, intermediário 1.1, também pode ser usada parapreparar imida cíclica 1.15 ou lactama 1.13. A imidacíclica 1.15 é preparada via ligação do composto 1 com umanidrido como anidrido succínico ou um derivado de anidridosuccínico como ftalimida em um solvente como cloreto demetileno usando 1,1'-carbonildiimidazol como um agente deligação. Após o término da reação, imida 1.14 pode serrecuperada por métodos convencionais ou, alternativamente,ela é empregada na etapa seguinte sem purificação e/ ouisolamento. O grupo protetor carboxil do composto 1.14 podeser removido por métodos convencionais (como descrito noEsquema 1) para gerar imida 1.15.
Lactama 1.13, é preparada a partir de 5-aminopirimidina 1.1 em duas etapas. A ligação do composto1.1 com um haleto de acila como 4-clorobutiril cloreto napresença de uma base como diisopropiletilamina (DIEA) e umsolvente como cloreto de metileno a 0°C gera amida 1.11.Após o término da reação, amida 1.11 pode ser recuperadapor métodos convencionais ou alternativamente ela éempregada na etapa seguinte sem purificação e/ ouisolamento. A ciclização intramolecular de 1.11 na presençade carbonato de césio em um solvente como acetonitrila geralactama 1.12. Após o término da reação, lactama 1.12 podeser recuperada por métodos convencionais oualternativamente ela é empregada na etapa seguinte sempurificação e/ ou isolamento. O grupo protetor carboxil delactama 1.12 pode ser removido por métodos convencionaispara gerar lactam 1.13.
Formulações farmacêuticas
Quando empregada como farmacêuticos, os compostosdessa invenção são normalmente administrados na forma decomposições farmacêuticas. Esses compostos podem seradministrados por diversas vias, incluindo a via oral,retal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramusculare intranasal. Esses compostos são eficazes como composiçõestanto injetáveis quanto orais. Essas composições sãopreparadas de uma forma bem conhecida na técnicafarmacêutica e compreendem pelo menos um composto ativo.
Essa invenção também inclui composições farmacêuticasque contêm, como ingrediente ativo, um ou mais doscompostos de fórmula I-III acima associados com veículosfarmaceuticamente aceitáveis. Na fabricação das composiçõesdessa invenção, o ingrediente ativo é normalmente misturadocom um excipiente, diluído por um excipiente ou englobadodentro deste veículo, que pode estar na forma de umacápsula, sachê, papel ou outro recipiente. 0 excipienteempregado é tipicamente um excipiente adequado paraadministração a seres humanos ou a outros mamíferos. Quandoo excipiente serve como diluente, ele pode ser um materialsólido, semi-sólido ou líquido, que atua como um veículo,transportador ou meio para o ingrediente ativo. Dessaforma, as composições podem estar na forma de comprimidos,pílulas, pós, pastilhas, sachês, sinetes, elixires,suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como umsólido ou em um meio líquido), pomadas contendo, porexemplo, até 10% por peso do composto ativo, cápsulas degelatina macia e dura, supositórios, soluções injetáveisestéreis, e pós embalados estéreis.
Na preparação de uma formulação, pode ser necessáriotriturar o composto ativo para gerar o tamanho de partículaapropriado, antes da combinação com os outros ingredientes.Caso o composto ativo seja substancialmente insolúvel, elenormalmente é triturado até um tamanho de partícula demenos de 200 wesh. Caso o composto ativo sejasubstancialmente hidrossolúvel, o tamanho de partícula énormalmente ajustado por trituração para fornecer umadistribuição substancialmente uniforme na formulação, porexemplo, cerca de 40 mesh.
Alguns exemplos de excipientes adequados incluemlactose1 dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos,goma acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto,gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina,polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope e metilcelulose. As formulações podem adicionalmente incluir:agentes lubrificantes, tais como talco, estearato demagnésio e óleo mineral; agentes umidificantes; agentesemulsificantes e de suspensão; agentes conservantes, taiscomo metil- e propil-hidroxi-benzoatos; agentes adoçantes;e agentes flavorizantes. As composições da invenção podemser formuladas de forma a fornecer uma liberação rápida,sustentada ou retardada do ingrediente ativo apósadministração ao paciente pelo emprego de procedimentosconhecidos na técnica.
A administração de agentes terapêuticos por formulaçãointravenosa é bem conhecida na indústria farmacêutica. Umaformulação intravenosa deve possuir certas qualidades alémde serem apenas uma composição na qual o agente terapêuticoé solúvel. Por exemplo, a formulação deve promover aestabilidade global do ingrediente(s) ativo(s) e, alémdisso, a manufatura da formulação deve ser economicamenteviável. Todos esses fatores em última análise determinam osucesso global e a utilidade de uma formulação intravenosa.
Outros aditivos acessórios que podem ser incluídos emformulações farmacêuticas de compostos da presente invençãosão os seguintes: solventes: etanol, glicerol, propilenoglicol; estabilizantes: EDTA (ácido etileno diamina tetra-acético), ácido citrico; conservantes antimicrobianos:álcool benzílico, metil parabeno, propil parabeno; agentesde tamponamento: ácido citrico/citrato de sódio, tartaratode potássio hidrogênio, tartarato de sódio hidrogênio,ácido acético/acetato de sódio, ácido maléico/maleato desódio, hidrogênio ftalato de sódio, ácido fosfórico/fosfatode potássio diidrogênio, ácido fosfórico/fosfato dissódicode hidrogênio,· e modif icadores da tonicidade: cloreto desódio, manitol, dextrose.
A presença de um tampão pode ser necessária paramanter o pH aquoso na faixa de cerca de 4 a cerca de 8 e,mais preferivelmente, em uma faixa de cerca de 4 a cerca de6. O sistema tampão é geralmente uma mistura de um ácidofraco e um sal solúvel deste, por exemplo, citrato desódio/ácido citrico; ou o sal de monocátion ou dicátion deum ácido dibásico, por exemplo, tartarato de potássiohidrogênio; tartarato de sódio hidrogênio, ácidofosfórico/fosfato de potássio diidrogênio e ácidofosfórico/fosfato dissódico de hidrogênio.
A quantidade de sistema tampão usada depende: (1) dopH desejado; e (2) da quantidade de fármaco. Geralmente, aquantidade de tampão usada está em uma proporção molar0,5:1 a 50:1 de tampão: f ármaco (em que os moles de tampãosão considerados como os moles combinados dos ingredientesdo tampão, por exemplo, citrato de sódio e ácido citrico)da formulação para manter um pH na faixa de 4 a 8 e,geralmente,é usada uma proporção molar de 1:1 a 10:1 detampão (combinado) para o fármaco presente.
Um tampão útil na invenção é citrato de sódio/ácidocítrico na faixa de 5 a 50 mg por ml de citrato de sódiopara 1 a 15 mg por ml de ácido cítrico, suficiente paramanter um pH aquoso de 4-6 da composição.
O agente tampão também pode estar presente para evitara precipitação do fármaco através da formação de complexometálico solúvel com Ions metálicos dissolvidos, porexemplo, Ca, Mg, Fe, Al, Ba, que podem se desprender derecipientes de vidro ou tampas de borracha ou estarpresentes na água corrente comum. 0 agente pode atuar comoum agente competitivo de formação de complexos com ofármaco e produzir um complexo metálico solúvel, levando àpresença de particulados indesejáveis.
Além disso, a presença de um agente, por exemplo,cloreto de sódio, em uma quantidade de cerca de 1-8 mg/ml,para ajustar a tonicidade no mesmo valor do sangue humano,pode ser necessária para evitar o edema ou o encolhimentode eritrócitos mediante a administração da formulaçãointravenosa, causando efeitos colaterais indesejáveis como,por exemplo, náuseas ou diarréia e, possivelmente,distúrbios sangüíneos associados. Em geral, a tonicidade daformulação combina com a do sangue humano, que é de cercade 282 a 288 mOsm/kg e, em geral, é de 285 mOsm/kg, o que éequivalente à pressão osmótica que corresponde uma solução0,9% de cloreto de sódio.
A formulação intravenosa pode ser administrada porinjeção intravenosa direta, i.v. em bolo, ou pode seradministrada por infusão por adição a uma solução deinfusão apropriada como, por exemplo, injeção de cloreto desódio 0,9% ou outra solução de infusão compatível.
As composições são formuladas preferivelmente em umaforma de dosagem unitária, cada dosagem contendo de cercade 5 a cerca de 100 mg, mais normalmente de cerca de 10 acerca de 3 0 mg do ingrediente ativo. O termo "formas dedosagem unitária" refere-se às unidades fisicamentedistintas adequadas às dosagens unitárias para sereshumanos e outros mamíferos, cada unidade contendo umaquantidade predeterminada de material ativo calculada paraproduzir o efeito terapêutico desejado, associado a umexcipiente farmacêutico adequado.
O composto ativo é eficaz em uma ampla faixa dedosagens, e é geralmente administrado em uma quantidadefarmaceuticamente eficaz. Subentende-se, no entanto, que aquantidade do composto realmente administrada serádeterminada por um médico, à luz das circunstânciasrelevantes, incluindo a condição a ser tratada, a via deadministração escolhida, o composto específico
administrado, a idade, o peso e a resposta do pacienteindividual, a gravidade dos sintomas do paciente, e outros.
Para a preparação de composições sólidas como, porexemplo, comprimidos, o ingrediente ativo principal émisturado com um excipiente farmacêutico para formar umacomposição de pré - formulação sólida que contém uma misturahomogênea de um composto da presente invenção. Quando sediz que essas composições de pré-formulação são homogêneas,significa dizer que o ingrediente ativo está dispersoigualmente por toda a composição, de forma que a composiçãopode ser facilmente subdividida em formas de dosagemunitária igualmente eficazes, tais como comprimidos,pílulas e cápsulas. Essa pré-formulação sólida é entãosubdividida em formas de dosagem unitária do tipo descritoacima contendo, por exemplo, de 0,1 a cerca de 500 mg doingrediente ativo da presente invenção.
Os comprimidos ou as pílulas da presente invençãopodem ser revestidos ou de algum outro modo compostos parafornecer uma forma de dosagem, gerando a vantagem da açãoprolongada. Por exemplo, o comprimido ou a pílula podecompreender um componente de dosagem interno e umcomponente de dosagem externo, esse último estando na formade um envelope sobre o primeiro. Os dois componentes podemser separados pode uma camada entérica que serve pararesistir à desintegração no estômago, e permitir que ocomponente interno passe intacto para o duodeno ou quetenha a sua liberação retardada. Diversos materiais podemser usados para essas camadas ou revestimentos entéricos,tais materiais incluindo vários ácidos poliméricos emisturas de ácidos poliméricos com materiais como gomalaca, álcool cetílico e acetato de celulose.
As formas líquidas nas quais as composições inéditasda presente invenção podem ser incorporadas paraadministração por via oral ou por injeção incluem soluçõesaquosas, adequadamente xaropes flavorizados, suspensõesaquosas ou oleosas, e emulsões flavorizadas com óleoscomestíveis como, por exemplo, óleo de semente de algodão,óleo de gergelim, óleo de coco ou óleo de amendoim, além deelixires e similares veículos farmacêuticos.
Composições para inalação ou insuflação incluemsoluções e suspensões em solventes aquosos ou orgânicosfarmaceuticamente aceitáveis, ou misturas destes, e pós. Ascomposições líquidas ou sólidas podem conter excipientesfarmaceuticamente aceitáveis adequados, como descritosupra. De preferência, as composições são administradaspela via respiratória oral ou nasal para efeito local ousistêmico. As composições, preferivelmente em solventesfarmaceuticamente aceitáveis, podem ser nebulizadas pelouso de gases inertes. Soluções nebulizadas podem serinaladas diretamente do dispositivo de nebulização, ou odispositivo de nebulização pode ser anexado a uma tenda demáscaras, ou a um respirador de pressão positivaintermitente. De preferência, composições de solução,suspensão ou pó podem ser administradas oral ou nasalmente,por dispositivos que liberam a formulação de formaadequada.
Os seguintes exemplos de formulações ilustram ascomposições farmacêuticas da presente invenção.
Exemplo de formulação 1
São preparadas cápsulas de gelatina dura contendo osseguintes ingredientes:
Ingrediente Quantidade (mg/cápsula)
Ingrediente ativo 30,0
Amido 3 05,0
Estearato de magnésio 5,0
Os ingredientes acima são misturados e preenchidos emcápsulas de gelatina dura em quantidades de 340 mg.
Exemplo de formulação 2
Uma fórmula de comprimido é preparada com o uso dosingredientes abaixo:
Ingrediente Quantidade (mg/comprimido)
Ingrediente ativo 25,0
Celulose, microcristalina 200,0
Dioxido de silício coloidal 10,0Ácido esteárico 5,0
Os componentes são misturados e compactados paraformar comprimidos, cada um pesando 24 0 mg.
Exemplo de formulação 3
Uma formulação de inalação de pó seco é preparadacontendo os seguintes componentes:Ingrediente Peso %
Ingrediente ativo 5
Lactose 95
o ingrediente ativo é misturado com a lactose e amistura é adicionada a um aparelho de inalação de pó seco.
Exemplo de formulação 4
Comprimidos, cada um contendo 3 0 mg de ingredienteativo, são preparados da seguinte forma:
Ingrediente Quantidade (mg/comprimido)
Ingrediente ativo 30,0 mg
Amido 45,0 mg
Celulose microcristalina 35,0 mg
Polivinilpirrolidona 4,0 mg
(como solução 10% em água estéril)
Amido de carboximetil sódico 4,5 mg
Estearato de magnésio 0,5 mg
Talco 1,0 mg
Total 120 mg
o ingrediente ativo, o amido e a celulose são passadosatravés de uma peneira U.S. de trama N° 20 e misturadoscuidadosamente. A solução de. polivinilpirrolidona émisturada com os pós resultantes, que são então passadosatravés de uma peneira U.S. de trama 16. Os grânulos assimproduzidos são secos a 50°C a 60°C, e passados através deuma peneira U.S. de trama 16. O amido de carboximetilsódico, o estearato de magnésio e o talco, passadospreviamente através de uma peneira U.S. de trama N° 30, sãoentão adicionados aos grânulos, os quais, após mistura, sãocompactados em uma máquina de comprimidos para gerarcomprimidos, cada um pesando 120 mg.
Exemplo de formulação 5Cápsulas, cada uma contendo 4 0 mg de medicamento, sãofeitas da seguinte forma:
Ingrediente Quantidade (mg/cápsula)
Ingrediente ativo 40,0 mg
Amido 109,0 mg
Estearato de magnésio 1,0 mg
Total 150,0 mg
o ingrediente ativo, o amido e o estearato de magnésiosão misturados, passados através de uma peneira U.S. detrama Nc 20, e preenchidos em cápsulas de gelatina dura emquantidades de 15 0 mg.
Exemplo de formulação 6
Supositórios, cada um contendo 25 mg de ingredienteativo, são feitos da seguinte forma:
Ingrediente Quantidade
Ingrediente ativo 25 mg
Glicerideos de ácido graxo saturado a 2.000 mg
O ingrediente ativo é passado através de uma peneirade trama N0 60 e suspenso nos glicerideos de ácido graxosaturado previamente derretidos com o uso do mínimo decalor necessário. Uma mistura é então despejada em um moldede supositório de capacidade nominal de 2,0 g, e permite-seque resfrie.Exemplo de formulação 7
Suspensões, cada uma contendo 50 mg de medicamento pordose de 5,0 ml, são feitas da seguinte forma
Ingrediente Quantidade
Ingrediente ativo 50,0 mg
Goma xantana 4,0 mg
Carboximetil celulose sódica (11%)
Celulose microcristalina (89%) 50,0 mg
Sacarose 1,75 g
Benzoato de sódio 10,0 mg
Flavorizante e corante q.v.
Água purificada até 5,0 ml
o ingrediente ativo, a sacarose e a goma xantana sãomisturados, passados através de uma peneira U.S. de tramaN0 10, e depois misturados uma solução feita previamente dacelulose microcristalina e da carboximetil celulose sódicaem água. 0 benzoato de sódio, o flavorizante e o corantesão diluídos com um pouco da água e adicionados comagitação. É então adicionada água suficiente para aprodução do volume necessário.
Exemplo de formulação 8
Ingrediente Quantidade (mg/cápsula)
Ingrediente ativo 15,0 mg
Amido 4 0 7,0 mg
Estearato de magnésio 3,0 mg
Total 425,0 mg
o ingrediente ativo, o amido e o estearato de magnésiosão misturados, passados através de uma peneira U.S. detrama N0 20, e preenchidos em cápsulas de gelatina dura emquantidades de 425,0 mg.Exemplo de formulação 9
Uma formulação subcutânea pode ser preparada daseguinte forma:
Ingrediente Quantidade
Ingrediente ativo 5,0 mg
Óleo de milho 1,0 ml
Exemplo de formulação 10Uma formulação tópica pode ser preparada da seguinteforma:
Ingrediente Quantidade
Ingrediente ativo 1-10 g
Cera emulsificante 30 g
Parafina liquida 20 g
Parafina macia branca até para 100 g
A parafina macia branca é aquecida até derretida. Aparafina liquida e a cera emulsificante são incorporadas eagitadas até dissolvidas. O ingrediente ativo é adicionado,e a agitação é continuada até a dispersão. Uma mistura éentão resfriada até ficar sólida.
Exemplo de formulação 11
Uma formulação intravenosa pode ser preparada daseguinte forma:
Ingrediente Quantidade
Ingrediente ativo 250 mg
Soro fisiológico isotônico 1.000 ml
Outra formulação preferida empregada nos métodos dapresente invenção emprega dispositivos de liberaçãotransdérmica ("emplastros"). Esses emplastros transdérmicospodem ser usados para fornecer infusão contínua oudescontínua dos compostos da presente invenção emquantidades controladas. A construção e o uso de emplastrostransdérmicos para a liberação of agentes farmacêuticos sãobem conhecidos na técnica. Veja, por exemplo, a PatenteU.S. 5.023.252, emitida em 11 de junho de 19 91, aquiincorporada por referência. Esses emplastros podem serconstruídos para liberação contínua, pulsátil ou sobdemanda de agentes farmacêuticos.
Freqüentemente, será desejável ou necessáriointroduzir a composição farmacêutica no cérebro, direta ouindiretamente. As técnicas diretas normalmente em evolvem acolocação de um cateter de liberação de fármaco no sistemaventricular do hospedeiro para ultrapassar a barreirahematencefálica. Um desses sistemas de liberaçãoimplantáveis usado para o transporte de fatores biológicospara regiões anatômicas do corpo específicas é descrito naPatente U.S. 5.011.472, que é aqui incorporada porreferência.
Técnicas indiretas, que são geralmente preferidas,normalmente envolvem a formulação das composições paragerar uma latência do fármaco pela conversão de fármacoshidrofílicos em fármacos lipossolúveis. Essa latência égeralmente obtida através do bloqueio dos grupos hidroxil,carbonil, sulfato, e amina primária presente no fármacopara torná-lo mais lipossolúveis e passíveis de transporteatravés da barreira hematencefálica. Alternativamente, aliberação de fármacos hidrofílicos pode ser aumentada porinfusão intra-arterial de soluções hipertônicas que podemabrir transitoriamente a barreira hematencefálica.
Outras formulações adequadas para uso na presenteinvenção podem ser encontradas em ^Remington'sPharmaceutical Sciences", Mace Publishing Company,PhiIadeIphia, PA, 17a ed. (1985).
Como observado acima, os compostos aqui descritos sãoadequados para uso em diversos sistemas de liberação defármacos descritos acima. Adicionalmente, a fim de aumentara meia-vida sérica in vivo do composto administrado, oscompostos podem ser encapsulados, introduzidos no lúmen delipossomos, preparados como um colóide, ou podem serempregadas outras técnicas convencionais que fornecem umaumento da meia-vida sérica dos compostos. Vários métodossão disponíveis para a preparação de lipossomos, comodescrito, por exemplo, em Szoka, e cols., Patentes U.S. Nos4.235.871, 4.501.728 e 4.837.028, cada uma delas aquiincorporada por referência.
Os conjugados dessa invenção são antagonistas de VLA-4e são contemplados por fornecerem aumento da retenção invivo, quando comparados com os compostos não conjugados.Esse aumento da retenção do conjugado dentro do corporesultaria na redução das dosagens do fármaco necessárias,o que, por sua vez, resultaria em menos efeitos colateraise probabilidade reduzida de toxicidade. Além disso, aformulação do fármaco pode ser administrada menosfreqüentemente ao paciente, embora obtendo um efeitoterapêutico similar ou aprimorado.
Prevê-se que os conjugados dessa invenção exibaminibição, in vivo, da adesão de leucócitos às célulasendoteliais mediada por VLA-4 por ligação competitiva àVLA-4. De preferência, os compostos dessa invenção podemser usados em formulações intravenosas para o tratamento dedoenças mediadas por VLA-4 ou por adesão leucocitária.Essas doenças incluem doenças inflamatórias em pacientesmamíferos como, por exemplo, asma, doença de Alzheimer,aterosclerose, demência por AIDS, diabetes (incluindodiabetes agudo de surgimento juvenil), doença inflamatóriado intestino (incluindo colite ulcerativa e doença deCrohn), esclerose múltipla, artrite reumatóide, transplantede tecidos, metãstase tumoral, meningite, encefalite,acidente vascular cerebral, e outros traumas cerebrais,nefrite, retinite, dermatite atópica, psoríase, isquemiamiocárdica e lesão pulmonar aguda mediada por leucócitoscomo, por exemplo, a que ocorre na síndrome de sofrimentorespiratório do adulto. As formulações da presente invençãosão especialmente úteis no tratamento de esclerose múltiplae artrite reumatóide.
Modelos in vivo adequados para a demonstração daeficácia no tratamento de condições inflamatórias incluemEAE (encefalomielite autoimune experimental) emcamundongos, ratos, porquinhos-da-índia ou primatas, alémde outros modelos inflamatórios que dependem das integrinascx4 .
A doença inflamatória do intestino é um termo coletivopara duas doenças similares denominadas doença de Crohn ecolite ulcerativa. A doença de Crohn é uma doençainflamatória idiopática crônica, ulcero-constritiva,caracterizada por envolvimento nitidamente delimitado etipicamente transmural de todas as camadas da paredeintestinal por uma reação inflamatória granulomatosa.Qualquer segmento do trato gastrintestinal, da boca aoânus, pode estar envolvido, embora a doença mais comumenteafete o íleo terminal e/ou o cólon. A colite ulcerativa éuma resposta inflamatória limitada grandemente à mucosa esubmucosa do cólon. Os linfõcitos e macrófagos sãonumerosos nas lesões da doença inflamatória do intestino, epodem contribuir para a lesão inflamatória.
A asma é uma doença caracterizada por aumento dacapacidade de resposta da arvore traqueobrônquica a váriosestímulos que potencializam a constrição paroxísmica dasvias aéreas brônquicas. Os estímulos causam a liberação devários mediadores da inflamação dos mastócitos cobertos porIgE, incluindo histamina, fatores quimiotáticoseosinofílicos e neutrofílicos, leucotrineos, prostaglandinae fator de ativação plaquetária. A liberação desses fatoresrecruta basófilos, eosinófilos e neutrófilos, que causam alesão inflamatória.
A aterosclerose é uma doença das artérias (porexemplo, coronárias, carótidas, aorta e ilíacas). A lesãobásica, o ateroma, consiste em uma placa focai elevadadentro da íntima, que possui um núcleo de lipídeo e umacapa fibrosa de cobertura. Os ateromas comprometem o fluxosangüíneo arterial e enfraquecem as artérias afetadas.Infartos do miocárdio e cerebrais são as conseqüênciasprincipais dessa doença. Macrófagos e leucócitos sãorecrutados para os ateromas e contribuem para a lesãoinflamatória.
A artrite reumatóide é uma doença inflamatóriacrônica, recidivante, que primariamente causa adeterioração e destruição das articulações. A artritereumatóide normalmente afeta primeiro as pequenasarticulações das mãos e dos pés, mas então pode envolver ospunhos, cotovelos, tornozelos e joelhos. A artrite resultada interação de células sinoviais com leucócitos que seinfiltram da circulação para dentro do revestimentosinovial das articulações. Veja, por exemplo, Paul,Imwunology (3a ed., Raven Press, 1993).
Outra indicação para os compostos dessa invenção é notratamento de rejeição de órgãos ou enxertos mediada porVLA-4. Nos últimos anos, houve uma melhora considerável naeficiência de técnicas cirúrgicas para o transplante detecidos e órgãos como a pele, o rim, fígado, coração,pulmão, pâncreas e medula óssea. Talvez o principalproblema existente seja a ausência de agentes satisfatóriospara a indução de imunotolerância no receptor ao aloenxertoou órgão transplantado. Quando células alogênicas ou órgãossão transplantados em um hospedeiro (ou seja, o doador e oreceptor são indivíduos diferentes da mesma espécie), osistema imunológico do tem tendência a montar uma respostaimunológica contra os antígenos estranhos presentes notransplante (doença enxerto versus hospedeiro), levando àdestruição do tecido transplantado. As células CD8+, ascélulas CD4 e os monócitos estão envolvidos na rejeição detecidos transplantados. Os compostos dessa invenção que seligam à integrina alfa-4 são úteis, inter alia, para obloqueio das respostas imunológicas induzidas poraloantógenos no receptor evitando, dessa forma, que essascélulas participem na destruição do tecido ou órgãotransplantado. Veja, por exemplo, Paul e cols., TransplantInternational 9, 420-425 (1996); Georczynski e cols.,Immunology 87, 573-580 (1996); Georcyznski e cols.,Transplant. Immunol. 3, 55-61 (1995); Yang e cols.,Transplantation 60, 71-76 (1995); Anderson e cols., APMIS102, 23-27 (1994) .
Um uso relacionado para os compostos dessa invençãoque se ligam à VLA-4 é na modulação da resposta imunológicaenvolvida na doença "enxerto versus hospedeiro" (DEVH).Veja, por exemplo, Schlegel e cols., J. Immunol. 155,3.856-3.865 (1995). A DEVH é uma doença potencialmentefatal que ocorre quando células imunologicamentecompetentes são transferidas para um receptor alogênico.Nessa situação, as células imunocompetentes do doador podematacar tecidos no receptor. Tecidos da pele, epitéliosintestinais e do fígado são alvos freqüentes, e podem serdestruídos durante a evolução da DEVH. A doença apresentaum problema especialmente grave no caso de transplante detecido imunológico como, por exemplo, no transplante demedula óssea; mas também há relatos de DEVH menos gravetambém em outros casos, incluindo transplantes cardíacos ehepáticos. Os agentes terapêuticos da presente invenção sãousados, inter alia, para bloquear a ativação das células Tdo doador interferindo, dessa forma, com sua habilidadepara lisar células-alvo no hospedeiro.
Um uso adicional dos compostos dessa invenção é nainibição de metástase tumoral. Há relatos de que váriascélulas tumorais expressam VLA-4, e os compostos que seligam ã VLA-4 bloqueiam a adesão destas células às célulasendoteliais. Steinback e cols., Urol. Res. 23, 175-83(1995); Orosz e cols., Int. J. Câncer 60, 867-71 (1995);Freedman e cols., Leuk. Lymphoma 13, 47-52 (1994); Okaharae cols., Câncer Res. 54, 3.233-6 (1994).
Os compostos que possuem a atividade biológicadesejada podem ser modificados da forma necessária parafornecerem as propriedades desejadas como, por exemplo,propriedades farmacológicas aprimoradas (por exemplo,estabilidade in vivo, biodisponibilidade), ou a habilidadepara serem detectados em aplicações diagnosticas. Aestabilidade pode ser testada de diversas formas como, porexemplo, pela determinação da meia-vida das proteínasdurante incubação com peptidases ou plasma ou soro humano.Foram descritos vários desses ensaios de estabilidade deproteínas (veja, por exemplo, Verhoef e cols., Eur. J. DrugMetab. Pharmacokinet., 199 0, 15(2):83-93).
Um uso adicional dos compostos dessa invenção é notratamento de esclerose múltipla. A esclerose múltipla éuma doença autoimune neurológica progressiva que afeta umnúmero estimado de 250.000 a 350.000 pessoas nos EstadosUnidos. Acredita-se que a esclerose múltipla seja oresultado de uma reação autoimune específica na qual algunsleucócitos atacam e iniciam a destruição de mielina, abainha de isolamento que cobre as fibras nervosas. Em ummodelo animal para esclerose múltipla, demonstrou-se queanticorpos monoclonais murídeos dirigidos contra VLA-4bloqueiam a adesão de leucócitos ao endotélio e, dessaforma, evitam a inflamação do sistema nervoso central e asubseqüente paralisia nos animais.16
As composições farmacêuticas da invenção são adequadasao uso em diversos sistemas de liberação de fármacos.Formulações adequadas para uso na presente invenção sãoencontradas em "Remington's Pharmaceutical Sciences", MacePublishing Company, Philadelphia, PA, 17a ed. (1985).
A quantidade administrada ao paciente irá variar,dependendo do composto administrado, da finalidade daadministração, por exemplo, profilaxia ou terapia, doestado do paciente, da forma de administração, e outros. Emaplicações terapêuticas, as composições são administradas aum paciente que já sofre de uma doença em uma quantidadesuficiente para curar, ou pelo menos interromperparcialmente, os sintomas da doença e suas complicações.Uma quantidade adequada para atingir esse objetivo édefinida como "dose terapeuticamente eficaz". Asquantidades eficazes para esse uso dependerão da condiçãode doença que estiver sendo tratada, bem como da avaliaçãodo médico assistente, levando em consideração fatores comoa gravidade da inflamação, da idade, peso e condição geraldo paciente, e outros, com referência aos dados do modeloanimal apropriado, como aqueles aqui apresentados. Métodospara se estimar dosagens humanas adequadas com base nessesdados são conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Wagner,J.G. "Pharmacokinetics for the Pharmaceutical Scientist".Technomic, Inc., Lancaster, PA 1993).
As composições administradas a um paciente estão naforma de composições farmacêuticas descritas acima. Essascomposições podem ser esterilizadas por técnicasconvencionais de esterilização, ou podem ser filtradas deforma estéril. As soluções aquosas resultantes podem serembaladas para uso imediato, ou Iiofilizadas, a preparaçãoliofilizada sendo combinada com um veículo aquoso estéril,antes da administração.
A dosagem terapêutica dos compostos da presenteinvenção irá variar de acordo, por exemplo, com o uso emparticular para o qual o tratamento é feito, a forma deadministração do composto, a saúde e a condição do pacientee a avaliação do médico responsável pela prescrição. Porexemplo, para administração intravenosa, a dose estarátipicamente na faixa de cerca de 20 pg a cerca de 2.000 pgpor quilograma de peso corporal, preferivelmente cerca de20 pg a cerca de 500 pg, mais preferivelmente, cerca de 100pg a cerca de 300 pg por quilograma de peso corporal.Faixas de dosagens adequadas para administração intranasalsão geralmente de cerca de 0,1 pg a 1 mg por quilograma depeso corporal. Doses eficazes podem ser extrapoladas apartir de curvas de dose - resposta derivadas de sistemas deteste in vitro ou em modelo animal.
Os compostos dessa invenção também são capazes de seligar ou antagonizar as ações das integrinas αεβι, ctgPi/α4β7,aαβ2, αeβ1, (embora α4β1 e α9β3 sejam preferidas η essainvenção). Conseqüentemente, os compostos dessa invençãotambém são úteis para a prevenção ou reversão dos sintomas,distúrbios ou doenças induzidos pela ligação dessasintegrinas aos seus respectivos ligantes.
Por exemplo, a Publicação Internacional Número WO98/53817, publicada em 3 de dezembro de 1998 (cujarevelação é aqui incorporada por referência em suatotalidade) e as referências nela citadas descrevemdistúrbios mediados por α4,β7. Essa referência tambémdescreve um ensaio para determinação do antagonismo daligação dependente de α4,β7 à proteína de fusão VCAM-Ig.
Adicionalmente, compostos que se ligam às integrinasαάβ2 e aeβ7 são particularmente úteis para o tratamento deasma e doenças pulmonares relacionadas. Veja, por exemplo,Μ. H. Grayson e cols. , J. Exp. Med. 1998, 188(11) 2.187-2.191. Os compostos que se ligam ã integrina αθβ7 também sãoúteis para o tratamento de lúpus eritematoso disseminado(veja, por exemplo, M. Pang e cols., Arthritis Rheum. 1998,41(8), 1.456-1.463); doença de Crohn, colite ulcerativa edoença inflamatória do intestino (DII) (veja, por exemplo,D. Elewaut e cols., Scand. J. Gastroenterol. 1998, 33(7)743-748); síndrome de Sjõgren (veja, por exemplo, U.Kroneld e cols., Scand. J. Gastroenterol. 1998, 27(3), 215-218); e artrite reumatóide (veja, por exemplo, Scand. J.Gastroenterol. 1996, 44(3), 293-298), e compostos que seligam à Ci6P1 podem ser úteis na prevenção da fertilização(veja, por exemplo, H. Chen e cols., Chem. Biol. 1999, 6,1-10) .
Em outro aspecto da invenção, os compostos e ascomposições aqui descritos podem ser usados para inibir amigração de células imunolõgicas da corrente sangüínea parao sistema nervoso central no caso, por exemplo, deesclerose múltipla, ou para áreas que resultam nadestruição induzida por inflamação da mielina. Depreferência, esses reagentes inibem a migração de célulasimunológicas de um modo que inibe a desmielinização e aindapodem promover a remielinização. Os reagentes também podemevitar a desmielinização e promover a remielinização dosistema nervoso central para distúrbios metabólicoscongênitos nos quais a infiltração de células imunológicasafeta o desenvolvimento da bainha de mielina,principalmente no SNC. Os reagentes preferivelmente tambémreduzem paralisia quando administrados a um indivíduo comparalisia induzida por uma doença ou condiçãodesmielinizante.
Doenças inflamatórias que estão incluídas para otratamento pelas composições, compostos e métodos aquirevelados incluem geralmente condições relacionadas àdesmielinização. Histologicamente, as anormalidades demielina são desmielinizantes ou dismielinizante. Adesmielinização implica na destruição de mielina. Adismielinização refere-se à formação ou manutençãodefeituosa da mielina causada por disfunção dosoligodendrõcitos. De preferência, as composições e osmétodos aqui revelados são contemplados para o tratamentode doenças e condições relacionadas à desmielinização eauxiliam a remielinização. Doenças ou condições adicionaiscontempladas para o tratamento incluem meningite,encefalite e lesões da medula vertebral e condições quegeralmente induzem a desmielinização em conseqüência de umaresposta inflamatória.
As composições, os compostos e coquetéis aquirevelados são contemplados para uso no tratamento decondições e doenças associadas à desmielinização. Asdoenças e condições que envolvem a desmielinização incluem,sem limitação, esclerose múltipla, distúrbios metabólicoscongênitos (por exemplo, fenilcetonúria, doença de Tay-Sachs, doença de Niemann-Pick, doença de Gaucher, síndromede Hurler, doença de Krabbe e outras leucodistrofias) ,neuropatias com mielinização anormal (por exemplo, GuillainBarré, polineuropatia desmielinizante imune crônica (PDIC),PDIC multifocal, sindrome anti-MAG, síndrome GALOP,síndrome do anticorpo anti-sulfatida, síndrome do anticorpoanti-GM2, síndrome POEMS, perineurite, síndrome doanticorpo IgM anti-GD lb) , desmielinização relacionada afármacos (por exemplo, causada pela administração decloroquina, FK506, perhexilina, procainamida e zimeldina),outras condições desmielinizantes hereditárias (porexemplo, glicoproteína deficiente em carboidratos, síndromede Cockayne, hipomielinização congênita, distrofia muscularcongênita, doença de Farber, síndrome de Marinesco-Sjõgren,leucodistrofia metacromática, doença de Pelizaeus-Merzbacher, doença de Refsum, condições relacionadas apríons e doença de Salla) e outras condições ou doençasdesmielinizantes (por exemplo, meningite, encefalite oulesão da medula vertebral).
Há vários modelos de doença que podem ser usados paraestudar essas doenças in vivo. Por exemplo, modelos animaisincluem, sem limitação:
Tabela 4
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Esclerose múltipla
A doença desmielinizante mais comum é a esclerosemúltipla, mas muitos outros distúrbios metabólicos einflamatórios causam mielinização deficiente ou anormal. AEM é uma doença neurológica crônica, que aparece no inícioda vida adulta e progride até uma incapacidadesignificativa na maioria dos casos. Há aproximadamente350.000 casos de EM apenas nos Estados Unidos. Nãoconsiderando os traumas, a EM é a causa mais freqüente deincapacidade neurológica no início e meio da vida adulta.
A causa da EM ainda não foi determinada. Ela écaracterizada por inflamação crônica, desmielinização egliose (cicatrização). A desmielinização pode resultar emefeitos negativos ou positivos sobre a condução axonal. Asanormalidades positivas da condução incluem condução axonalmais lenta, bloqueio variável da condução que ocorre napresença de seqüências de impulsos de alta freqüência, masnão de baixa freqüência, ou bloqueio completo da condução.As anormalidades positivas da condução incluem geraçãoectópica de impulso, espontaneamente ou após estressemecânico e "cross-talk" anormal entre éxonsdesmielinizados.
Observou-se que as células T reativas contra proteínasde mielina, tanto a proteína básica de mielina (MPB) quantoa proteína proteolipídica de mielina (PLP), medeiam ainflamação do SNC na encefalomielite alérgica experimental.Também se observou que os pacientes possuem níveis elevadosde imunoglobulina (Ig) no SNC. É ainda possível que algunsdos danos teciduais observados na EM sejam mediados porprodutos de citocina de células T ativadas, macrófagos ouastrócitos.
Hoje, 80% dos pacientes diagnosticados com EM vivem 20anos após o surgimento da doença. Os tratamentos para a EMincluem: (1) tratamento dirigido à modificação da evoluçãoda doença, incluindo tratamento de exacerbações agudas, edirigido à supressão de longo prazo da doença; (2)tratamento dos sintomas da EM; (3) prevenção e tratamentode complicações médicas; e (4) gerenciamento dos problemaspessoais e sociais secundários.O surgimento da EM pode ser dramático ou tão discretoa ponto de fazer com que o paciente não procure atendimentomédico. Os sintomas mais comuns incluem fraqueza em um oumais membros, turvação visual causado por neurite óptica,distúrbios sensoriais, diplopia e ataxia. A evolução dadoença pode ser classificada em três categorias gerais: (1)EM recidivada, (2) EM progressiva crônica, e (3) EMinativa. A EM recidivada é caracterizada por ataquesrecorrentes de disfunção neurológica. Os ataques da EMgeralmente duram dias a semanas, e podem ser seguidos porrecuperação completa, parcial ou sem recuperação. Arecuperação dos ataques geralmente ocorre no intervalo desemanas a vários meses a partir do pico dos sintomas,embora raramente algum tipo de recuperação continue por 2ou mais anos.
A EM progressiva crônica resulta em piora gradualmenteprogressiva, sem períodos de estabilização ou remissão.Essa forma se desenvolve em pacientes com uma históriaprévia de EM recidivada, embora em 20% dos pacientes nãohaja relatos de recidivas. As recaídas agudas também podemocorrer durante a evolução progressiva.
A terceira forma é a EM inativa. A EM inativa écaracterizada por déficits neurológicos fixos de magnitudevariável. A maioria dos pacientes com EM inativa possui umahistória anterior de EM recidivada.
A evolução da doença também depende da idade dopaciente. Por exemplo, fatores prognósticos favoráveisincluem surgimento precoce (excluindo a infância), umaevolução em recidivas e pouca incapacidade residual 5 anosapós o surgimento. Em contraste, um prognóstico ruim estáassociado ao surgimento em uma idade tardia (ou seja, aos40 ou mais) e uma evolução progressiva. Essas variáveis sãointerdependentes, na medida em que a EM progressiva crônicatende a começar em uma idade mais avançada do que a EMrecidivada. A incapacidade da EM progressiva crônica énormalmente causada por paraplegia progressiva ouquadriplegia (paralisia) nos pacientes. Em um aspecto dainvenção, os pacientes preferivelmente serão tratadosquando estiverem em remissão, e não em um estágio derecaída da doença.
o uso por curto prazo de hormônio adrenocorticotrópicoou corticosteróides orais (por exemplo, prednisona oral oumetilprednisolona intravenosa) é a única medida terapêuticaespecífica para o tratamento de pacientes com exacerbaçãoaguda da EM.
As terapias mais novas para EM incluem o tratamento dopaciente com interferon beta-lb, interferon beta-la eCopaxone® (anteriormente conhecido como copolímero 1).Esses três fármacos demonstraram reduzir significativamentea taxa de recidiva da doença. Esses fármacos são auto-administrados por via intramuscular ou subcutânea.
No entanto, nenhuma das modalidades atuais detratamento inibe a desmielinização, isoladamente promove oupermite a remielinização espontânea ou reduz a paralisia.Um aspecto da invenção contempla o tratamento de EM comagentes aqui revelados, tanto isoladamente quanto emcombinação com outras modalidades padronizadas detratamento.
Distúrbios wetabólicos congênitos
Os distúrbios metabólicos congênitos incluemfenilcetonúria (FCU) e outras aminoacidúrias, doença deTay-Sachs, doença de Niemann-Pick, doença de Gaucher,síndrome de Hurler, doença de Krabbe e outrasleucodistrofias que interferem com o desenvolvimento dabainha, como descrito com mais detalhes abaixo.
A FCU é um erro hereditário do metabolismo causado poruma deficiência na enzima fenilalanina hidroxilase. A perdadessa enzima causa retardo mental, danos orgânicos, posturaincomum e pode, em casos de FCU materna, comprometer gravemente a gravidez. Foi descoberto um modelo para oestudo de FCU em camundongos. De preferência, os bebêsidentificados com FCU são mantidos em uma dieta semfenilalanina ou com redução de fenilalanina. Um aspecto dainvenção seria a combinação dessas dietas com os compostose as composições aqui reveladas para evitar adesmielinização e remielinizar as células danificadas pelaFCU.
A doença de Tay-Sachs clássica aparece no indivíduopor volta dos 6 meses de idade, e eventualmente resulta na morte do indivíduo por volta dos 5 anos de idade. A doençaé causada pela ausência da enzima hexoaminidase A (hex A),que é necessária para a degradação de certas substânciasgordurosas no cérebro e nas células nervosas. Essassubstâncias, na ausência da enzima, se acumulam e levam àdestruição das células nervosas. Outras formas dedeficiência da enzima hex A ocorrem em uma idade maisavançada, e são denominadas formas juvenis, crônicas eadultas de deficiência de hex A. Os sintomas são similaresàqueles que caracterizam a doença de Tay-Sachs clássica.Também existe uma forma de surgimento adulto da deficiênciada enzima. Atualmente não há cura ou tratamento para adoença/deficiência, apenas a medida preventiva de testar ofeto no útero quanto à doença. Dessa forma, os compostos eas composições aqui reveladas podem ser úteis na atenuaçãoou prevenção da destruição de células nervosas nessespacientes.
A doença de Niemann-Pick se divide em três categorias:a forma infantil aguda, o Tipo B, é uma forma menos comum,crônica, não neurológica, e o Tipo C, uma forma bioquímica e geneticamente distinta da doença. Em um indivíduo normal,o colesterol celular é importado em lisossomos paraprocessamento, após o qual é liberado. Foi demonstrado quecélulas retiradas de indivíduos com Niemann-Pick apresentamdefeitos na liberação de colesterol dos lisossomos. Issoleva a um acúmulo excessivo de colesterol dentro doslisossomos, causando erros de processamento. Verificou-seque NPC1 possui regiões conhecidas sensíveis ao esterolsimilares àquelas em outras proteínas, o que sugere suaparticipação na regulação do tráfego de colesterol. Nãoforam identificadas terapias bem sucedidas para as formasdos Tipos A e C de Niemann-Pick. Para o Tipo C, recomenda-se que os pacientes adotem uma dieta pobre em colesterol.Dessa forma, os compostos e as composições aqui reveladaspodem ser úteis na atenuação ou prevenção da destruição das células.
A doença de Gaucher é uma doença hereditária causadapor uma mutação gênica. Normalmente esse gene é responsávelpor uma enzima chamada glucocerebrosidase, a qual énecessária para que o corpo degrade a gordura,glucocerebrosídeo. Em pacientes com doença de Gaucher, ocorpo não é capaz de produzir adequadamente essa enzima, ea gordura não pode ser degradada. Da mesma forma que adoença de Tay-Sachs, a doença de Gaucher éconsideravelmente mais comum nos descendentes de pessoas judias do leste europeu (Ashkenazi) , embora indivíduos dequalquer grupo étnico possam ser afetados. Dentre apopulação judia Ashkenazi, a doença de Gaucher é odistúrbio genético mais comum, com uma incidência deaproximadamente uma em cada 450 pessoas. No público em geral, a doença de Gaucher afeta aproximadamente uma emcada 100.000 pessoas.
Em 1991, tornou-se disponível uma terapia de reposiçãoda enzima como o primeiro tratamento eficaz para a doençade Gaucher. o tratamento consiste em uma forma modificadada enzima glucocerebrosidase administrada por viaintravenosa. Contempla-se que as composições e os compostosaqui revelados podem ser usados isoladamente ou, depreferência, em combinação com a administração deglucocerebrosidase para o tratamento da doença em umapessoa com a doença.
A síndrome de Hurler, também conhecida comomucopolissacaridose do tipo I, é uma classe de doençassuperpostas. Essas doenças genéticas dividem em comum oacúmulo celular de mucopolissacarídeos em fibroblastos. Asdoenças são geneticamente distinguíveis. 0 transplante defibroblastos e de medula óssea não parece ser útil e, dessaforma, são necessários compostos e composições úteis naatenuação da gravidade e progressão da doença. Os compostose as composições aqui reveladas podem ser administrados aum indivíduo para atenuar a progressão e/ou a gravidade dadoença.
A doença de Krabbe (também conhecida comoleucodistrofia de células globóides) é uma condiçãoautossômica recessiva causada por deficiência de galactosilceramidase (ou galactocerebrosidase), uma enzimalipossômica que cataboliza um componente lipídicoimportante da mielina. Estima-se que a incidência na Françaseja de 1:150.000 nascimentos. A doença leva àdesmielinização do sistema nervoso central e periférico. 0surgimento geralmente ocorre durante o primeiro ano devida, e a condição é rapidamente progressiva, mas formasjuvenis, adolescentes ou adultas também foram relatadas,com uma taxa de progressão mais variável. 0 diagnóstico éestabelecido por um ensaio enzimático (deficiência degalactosilceramidase). Há vários modelos animais naturais(camundongo, cachorro, macaco). A doença de Krabbe, comotodas as leucodistrof ias, não tem cura ou tratamentoseficazes conhecidos. Uma modalidade da presente invençãoconsiste na utilização das composições e dos compostos aquirevelados para tratar ou atenuar a doença de Krabbe eoutras leucodistrofias.
As leucodistrofias são um grupo de distúrbiosprogressivos geneticamente determinados que afetam océrebro, a medula vertebral e os nervos periféricos. Elaspodem incluir adrenoleucodistrofia (ALD),adrenomieloneuropatia (AMN) , síndrome de Aicardi-Goutiers,doença de Alexander, CACH (ou seja, ataxia infantil comhipomielinização do sistema nervoso central ou doença dodesaparecimento da substância branca), CADASIL (ou seja,arteriopatia cerebral autossômica dominante com infartossubcorticais e leucoencefalopatia), doença de Canavan(degeneração esponjosa), Xantomatose Cerebrotendinosa(CTX) , doença de Krabbe (discutida acima) , leucodistrofiametacromática (MLD), adrenoleucodistrofia neonatal,síndrome de ovário-leucodistrofia, doença de Pelizaeus-Merzbacher (paraplegia espástica ligada ao X), doença deRefsum, síndrome de van der Knaap (leucodistrofiavacuolizante com cistos subcorticais) e síndrome deZellweger. Nenhuma das doenças possui cura atravéstratamentos isolados eficazes. Conseqüentemente, sãonecessários meios de tratamento ou atenuação dos sintomasda doença, por exemplo, pela utilização das composições edos compostos aqui revelados.Neuropatias com mielinização anormal
Há várias polineuropatias imunes crônicas que causamdesmielinização no paciente. A idade de surgimento dascondições varia de acordo com a condição. Existemtratamentos padronizados para essas doenças, e estespoderiam ser combinados com as composições e os compostosaqui revelados. Alternativamente, as composições e oscompostos revelados podem ser usados isoladamente. Asterapias padronizadas incluem as seguintes:
Tabela 5
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Desmielinização induzida por fármacos e radiação
Certos fármacos e radiação podem induzir adesmielinização nos indivíduos. Fármacos responsáveis peladesmielinização incluem, sem limitação, cloroquina, FK506,perhexilina, procainamida e zimeldina.
A radiação também pode induzir desmielinização.Acredita-se que a toxicidade do sistema nervosa central(SNC) seja causada por: (1) lesão de estruturas vasculares,(2) eliminação de progenitores de oligodendrócito-2astrócito e oligodendrócitos maduros; (3) eliminação depopulações de célula-tronco neurais no hipocampo, cerebeloe córtex, e alterações generalizadas da expressão decitocina. A maioria das lesões por radiação é causada porradioterapias administrada durante o tratamento de certoscânceres. Para uma revisão sobre o tema veja Belka e cols. ,2001 Br. J. Câncer 85: 1.233-9. No entanto, a exposição àradiação também pode ser um problema para astronautas(Hopewell, 1994 Adv. Space Res. 14: 433-42), bem como nocaso de exposição às substâncias radioativas.
Pacientes que receberam fármacos ou que foram expostosacidental ou intencionalmente à radiação podem sebeneficiar com a administração de um dos compostos ou dascomposições aqui reveladas para evitar a desmielinização oupara promover a remielinização.
Condições que envolvem as desmielinização
Síndromes/doenças hereditárias adicionais que causamdesmielinização incluem a sindrome de Cockayne,hipomielinização congênita, doença de Farber,leucodistrofia metacromática, doença de Peliszaeus-Merzbacher, doença de Refsum, condições relacionadas apríons e doença de Salla.
A sindrome de Cockayne (SC) é um distúrbio hereditárioraro no qual as pessoas são sensíveis à luz solar, possuembaixa estatura e têm a aparência envelhecida prematuro. Naforma clássica da sindrome de Cockayne (Tipo I) , ossintomas são progressivos e tipicamente se tornam evidentesapós a idade de um ano. Um surgimento precoce ou a formacongênita de síndrome de Cockayne (Tipo II) é aparente aonascimento. Curiosamente, diferentemente de outras doençasdo reparo do DNA, a síndrome de Cockayne não está ligada aocâncer. A SC é um distúrbio multissistêmico que causa tantofalhas profundas do crescimento do soma e do cérebro quantocaquexia progressiva, degeneração retiniana, coclear eneurológica, com uma leucodistrofia e neuropatiadesmielinizante, sem um aumento da incidência de câncer.Após exposição ao UV (por exemplo, luz solar) , osindivíduos com síndrome de Cockayne não conseguem realizaro reparo acoplado à transcrição. Até agora, foramidentificados dois genes defeituosos na síndrome deCockayne, CSA e CSB. O gene CSA é encontrado no cromossomo5. Ambos os genes codificam proteínas que interagem comcomponentes do maquinário da transcrição e com proteínas dereparo do DNA.
Até hoje, não foram iderjtifiçadas curas ou tratamentoseficazes para pacientes com essa doença. Dessa forma, umaspecto da invenção consiste no tratamento dessa doença comos compostos e as composições aqui revelados.
A hipomielinização congênita tem vários nomes,incluindo neuropatia desmielinizante congênita,polineuropatia por hipomielinização congênita,hipomielinização congênita ("bulbo de cebola")polineuropatia, neuropatia por hipomielinização congênita,neuropatia congênita causada por hipomielinização,neuropatia por hipomielinização e CHN. Neuropatiasperiféricas hereditárias, dentre os distúrbios genéticosmais comuns em humanos, são um grupo complexo, clínica egeneticamente heterogêneo, de distúrbios que produzemdeterioração progressiva dos nervos periféricos. Ahipomielinização congênita é um de um grupo de distúrbios.Esse grupo inclui neuropatia hereditária com probabilidadede paralisias por pressão, doença de Charcot-Marie-Tooth,sindrome de Dejerine- Sottas, e neuropatia porhipomielinização congênita. Não há curas ou tratamentoseficazes conhecidos para nenhum desses distúrbios.
A doença de Farber tem vários nomes, incluindo:lipogranulomatose de Farber, deficiência de ceremidase,deficiência de ácido ceramidase, deficiência AC,deficiência de N-Iaurilesfingosina deacilase e N-acilesfingosina amidohidrolase. Como certos nomes revelam,a doença ocorre por causa de uma deficiência de ácidoceramidase (também conhecida como N-acilesfingosinaamidohidrolase, ASAH). A ausência da enzima resulta em umacúmulo de mucopolissacarídeo ácido não sulfonado nosneurônios e nas células gliais. Os pacientes com a doençanormalmente morrem antes dos 2 anos de idade.
A leucodistrofia metacromática (MLD) é um distúrbiogenético causado por uma deficiência da enzimaarilsulfatase A. É um de um grupo de distúrbios genéticosdenominados "leucodistrofias" que afetam o crescimento dabainha de mielina. Há três formas de MLD: infantil tardia,juvenil e adulta. Na forma late infantil tardia, que é amais comum, o surgimento de sintomas começa entre 6 meses e2 anos de idade. o bebê é habitualmente normal aonascimento, mas eventualmente perde as habilidadesadquiridas previamente. Os sintomas incluem hipotonia(baixo tônus muscular), anormalidades da fala, perda dashabilidades mentais, cegueira, rigidez (ou seja, forçamuscular descontrolada), convulsões, deglutição alterada,paralisia e demência. Os sintomas da forma juvenil começamentre 4 e 14 de idade, e incluem desempenho escolardeficiente, deterioração mental, ataxia, convulsões edemência. Na forma adulta, os sintomas, que começam após 16anos de idade, podem incluir déficit de concentração,depressão, alterações psiquiátricas, ataxia, tremor edemência. As convulsões podem ocorrer na forma adulta, massão menos comuns nas outras formas. Em todas as trásformas, a deterioração mental é normalmente o primeirosinal.
A doença de Peliszaeus-Merzbacher (também conhecidacomo leucodistrofia perinatal sudanofílica) é um distúrbiogenético ligado ao X que causa uma anormalidade de umaproteína proteolipídica. A anormalidade causa a morte dobebê, tipicamente antes de um ano de idade. Não hátratamentos ou curas conhecidas para a doença.
A doença de Refsum (também conhecida como deficiênciade ácido fitânico oxidase, heredopatia atáticapolineuritiforme ou neuropatia motora e sensorialhereditária IV, HMSN IV) é causada por mutações no gene quecodifica fitanoil-CoA hidroxilase (PAHX ou PHYH). Ascaracterísticas clínicas principais são retinitepigmentosa, polineuropatia crônica e sinais cerebelares. 0ácido fitânico, um ácido graxo de cadeia ramificada incomum(ácido 3,7,11,15-tetrametil-hexadecanóico) se acumula nostecidos e fluidos corpóreos de pacientes com a doença, e éincapaz de ser metabolizado em função da ausência de PAHX.A plasmaferese realizada uma ou duas vezes ao mês removeeficazmente o ácido do corpo e permite a liberalização derestrições dietéticas que limitam a ingestão de ácidofitânico.
Condições relacionadas a príons incluem doença deGerstmann-Straussler (GSD), doença de Creutzfeldt-Jakob(CJD), insônia familiar fatal. Isoformas aberrantes daproteína de príon podem atuar como agentes infecciososnesses distúrbios, além de kuru e scrapie (uma doençaencontrada em carneiros). O termo "príon" deriva de "agenteinfeccioso de protéico" (Prusiner, Science 216: 136-44,1982). Há uma clivagem proteolítica da proteína relacionadaao príon (PRP) que resulta em um peptídeo amiloidogênicoque se polimeriza em fibrilas insolúveis.
A doença de Salla e outros tipos de sialúrias sãodoenças que envolvem problemas com a estocagem de ácidosiálico. São distúrbios neurodegenerativos autossômicosrecessivos que podem se apresentar como uma forma infantilgrave (ou seja, ISSD) ou como uma forma adulta lentamenteprogressiva que é prevalente na Finlândia (ou seja, doençade Salla). Os sintomas principais são hipotonia, ataxiacerebelar e retardo mental. Essas condições e doençastambém são contempladas para tratamentos paliativos ouatenuantes.
Outras condições que causam desmielinização incluemencefalite pós - infecciosa (também conhecida comoencefalomielite aguda disseminada, ADEM), meningite elesões da medula vertebral. As composições e os compostosaqui revelados também são contemplados para uso notratamento dessas outras condições desmielinizantes.
Os exemplos sintéticos e biológicos a seguir sãooferecidos para ilustrar essa invenção, e não devem serconsiderados de forma alguma como limitantes do escopodessa invenção. A menos que especificado de formadiferente, todas as temperaturas estão em graus Celsius.
EXEMPLOS
Nos exemplos abaixo, as seguintes abreviações possuemos definidos a seguir. Caso uma abreviação não sejadefinida, ela possui seu significado geralmente aceito.Aq = aquoso
DMAP = 4-dimetilaminopiridina
eq. = equivalentes
Et3N = trietil amina
EtOAc = acetato de etila
g = grama
HPLC = cromatografia líquida de.alto rendimento
M = molar
mg = miligrama
ml = mililitro
mm = milímetro
mmol = milimol
N = normal
nm nanômetro
RMN = ressonância magnética nuclear
psi = libras por polegada quadrada
rt = temperatura ambiente
sat. = saturado
TEA = trietilamina
TFA = ácido trifluoracético
TLC = cromatografia de camada delgada
ρ,L = microlitroMS = espectroscopia de massa
CDCl3 = deuteroclorofórmio
CD3OD = deuterometanol
AcCl = cloreto de acetila
CH2Cl2 = metileno cloreto
NaHC03 = bicarbonato de sódio
MgSO,, = magnésio sulfato
KOtBU = terc-butoxido de potássio
THF = tetrahidrofurano
EtI = iodeto de etila
Na = nitrogênio
H2O = água
MeI = iodeto de metila
Cat. = quantidade catalítica
μ = micron
NaCNBH3 = sódio cianoborohidreto
HCl = ácido clorídrico
Ac2O = anidrido acético
K2CO3 = carbonato de potássio
KI = iodeto de potássio
Na2SO4 = sulfato de sódio
DMF = dimetilformamida
DIEA = diisopropiletilamina
Cs2CO3 = Carbonato de césio
CH3CN = acetonitrila
CDI = N,N'-carbonildiimidazol
Na2C03 = carbonato de sódio
can = acetonitrila
MeOH = metanol
Rf fator de retenção (proporção da distânciapercorrida por substância/distância percorrida porsolvente)
RPC = cromatografia de fase reversa
COOH = ácido fórmico
(CF3CO)2O = anidrido trifluoracético
h = hora
ng = nanograma
kg = quilograma
mol = mol
Pd/C = paládio sobre carbono
Wt/wt = proporção peso/peso
m/z = proporção massa/carga litro
L= litro
μg = micrograma
μΜ = micromolar
NaOH = hidroxido de sódio
CO2 = dioxido de carbono
CH3OH = metanol
Rpm = revoluções por minuto
s = singleto
d = dupleto
dd = dupleto de dupletos
m = multipleto
bs ou br s = singleto amplo
br = amplo
t= tripleto
q = quarteto
Os compostos a seguir 1-8 são usados como material departida para os exemplos subseqüentes. Sua síntese édescrita nos Exemplos 1-9.<formula>formula see original document page 133</formula>
Exemplo 1
Preparação de éster terc-butíIico de N-[2-dietilamino-5-{N-amino}pirimidin-4-il]-L-4%{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina, composto 1.
<formula>formula see original document page 133</formula>Uma mistura de nitropirimidina-carbamato A (160,25 g,0,3035 mol; preparada como em WO 03/099809) e Pd/C 5% (15g, 50/50 p/p com H2O1 Degussa E 101 R/W) em solução THF-água (1 litro THF e 50 ml de H2O) foi agitada sob 413,68kPa de hidrogênio em temperatura ambiente. Após 22 horas,TLC (EtOAc 50%/hexanos em sílica gel) mostrou 100% deconversão em produto. A mistura de reação foi filtradaatravés de um absorvente de celite (200 ml) . O frasco dehidrogenação e o absorvente de celite foram enxaguados comTHF anidro fresco (500 ml) para gerar uma solução dofiltrado verde. O filtrado foi concentrado in vácuo paragerar o produto bruto um óleo pegajoso preto esverdeado. Oevaporador rotatório foi descarregado sob N2 e THF anidrofresco (600 ml) foi adicionado. A solução foi concentradain vácuo e descarregada sob nitrogênio. 0 processo dedissolução em THF anidro fresco e concentração foi repetidoduas vezes mais para remover de forma azeotrópica residualágua para gerar composto bruto 1. Esse material é usadoimediatamente no Exemplo 2 devido à sensibilidade aparenteao ar. m/z = 499,5 para [M+l] ' para o produto desejado.
Exemplo 2
Preparação de éster terc-butíIico de N-[2-dietil amino-5-{N-trifluoracetilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il) carboniloxi}fenilalanina, composto 2.O carbamato de aminopirimidina bruto 1 do Exemplo 1foi dissolvido em 600 ml de THF anidro. A solução foiresfriada até 0°C sob nitrogênio. Anidrido trifluoracético(45,5 ml, 1,51 g/ml, 327,3 mmol) foi adicionado lentamenteà solução gelada de amina por meio de uma bomba de seringaao longo de 45 minutos. Permitiu-se que uma soluçãoaquecesse até a temperatura ambiente e ela foi agitada deum dia para o outro. TLC (EtOAc 40% em Hexanos, silica gel)indicou que a reação estava essencialmente completa. Aanálise por LC/MS confirmou a reação, e não mostrou nenhummaterial de partida. A reação foi diluída com acetato deetila (1,4 litros) e foi lavada com uma mistura de água(400 ml) e NaHCO3 aquoso saturado (700 ml, 0°C) . A soluçãoorgânica foi lavada com salmoura (700 ml) e seca sobreMgSO4 (105 g) para gerar uma solução marrom-castanha. Asolução seca foi filtrada através de um absorvente desilica gel (400 ml) para gerar uma solução cinza esverdeada(a impureza de cor castanha foi retida na silica gel.) Asilica gel foi enxaguada com EtOAc (400 ml) . A solução dofiltrado foi concentrada in vácuo e o frasco foidescarregado sob nitrogênio para minimizar a exposição aooxigênio Foi acrescentado tolueno anidro (600 ml). Asolução foi concentrada in vácuo e foi submetida àazeotropia uma segunda vez por tolueno anidro (400 ml) paragerar um óleo preto-esverdeado pegajoso, composto bruto 2.o frasco foi descarregado sob N2. Esse produto bruto m/ζ =595,5 para [M+H]' foi encaminhado para o Exemplo 3.
Exemplo 3
Preparação de éster terc-butíIico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-trifluoracetilamino}pirimidin-4 --{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina, composto Β.
<formula>formula see original document page 136</formula>
Trifluoracetamidopirimidina carbamato bruto, composto2, do Exemplo 2, foi dissolvido em DMF (350 ml). carbonatode potássio sólido anidro (79,6 g, 575,7 mraol; moído até umpó fino com um pilão e almofariz e depois colocado em umforno a vácuo a IlO0C sob vácuo de 94,8 KPa de um dia parao outro) foi adicionado. Iodeto de etila (46,5 ml, 89,8 g,575,7 mmol) foi adicionado rapidamente em temperaturaambiente. 0 frasco de reação foi tampado firmemente e ocaldo foi agitado vigorosamente. Após agitação emtemperatura ambiente por 20 horas, a reação foi testada(TLC, LC/MS) . A reação foi agitada por mais 18 horas paraassegurar o término da reação. Novamente, a reação foitestada e um pequeno exame foi realizado, no qual a análisepor TLC indicou o consumo do material de partida. A reaçãofoi diluída com 2,7 litros de acetato de etila e foiagitada vigorosamente. 0 caldo foi filtrado através depapel de filtro Whatman #1 para a remoção de K2CO3 sólido.A solução orgânica foi colocada em um funil de separação de6 L. Água (2,5 litros) foi adicionada e vigorosamentemisturada. As camadas foram separadas lentamente, depoisfoi acrescentada (200 ml) para quebrar a emulsão. A camadaorgânica foi lavada com mais 1 litro de água, e depois com2 litros de salmoura. A camada orgânica foi seca sobreMgSO4 (50 g) e Na2SO4 (200 g) . A solução orgânica seca foifiltrada através de um tampão de sílica gel (700 ml) paraobter uma solução turva de cor verde-oliva acastanhada (umaimpureza de base roxa/vermelha foi removida). A sílica gelfoi enxaguada com EtOAc (800 ml) A solução orgânica foiconcentrada para gerar um sólido verde-oliva (194,3 g, 103%do bruto) . Hexano (300 ml) foi adicionado. As laterais dofrasco foram raspadas com uma espátula de metal para soltaro produto sólido, e uma barra de agitação magnética foiadicionada ao frasco. A mistura foi girada lentamente por30 minutos para quebrar os pedaços sólidos, e depoisrapidamente por 3 0 minutos, até que se formasse um caldofino. o caldo foi filtrado através de papel de filtroWhatman #1 e o precipitado foi enxaguado com hexano (1,2litro) para gerar um sólido branco (141 g, 74% derendimento, 92% puro por LC/MS). 0 filtrado foi concentradopara gerar uma goma verde acastanhada (33,3 g) , a qual,através de análise por TLC, contém um pouco do produtodesejado, composto B.
1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ, ppm: 7,80 (d aparente, 1H) ,7,18 (d aparente, AA'XX', 2H) , 7,03 (dd aparente, AA'XX',2H), 5,00 (d aparente, 1H), 4,80 (dq aparente, 1H), 3,95 (dsexteto aparente, 1H) , 3,4-3,7 (m, 8,5H), 3,0-3,3 (m, 3H) ,2,78 (sexteto, 0,7H), 1,93 (AA'BB', 4H), 1,38 (d aparente,9H) , 1,24-1,05 (m, 9H). A 1H RMN mostra rotâmeros como éevidenciado pela duplicação da maioria dos picos.
13C RMN (CDCl3, 75 MHz) δ, ppm: 166,5, 166,3, 155,6,152,7, 150,9, 146,0, 145,9, 128,7, 128,3, 125,44, 125,39,117,18, 77,66, (72,82, 72,28, 71,97 - CDCl3), 50,23, 49,74,41,72, 41,64, 40,16, 39,90, 37,28, 32,60, 32,44, 23,24,23,17, 21,05, 20,23, 8,50, 8,47, 7,32.Exemplo 4
Preparação de éster terc-butíIico de N-[2-dietilamino-5-{N-etilamino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina, composto 3.
<formula>formula see original document page 138</formula>
A trifluoracetamida B (140 g) foi suspensa/dissolvidoem metanol (1.6 litros). Uma solução aquosa de carbonato depotássio (7% K2CO3)(480ml) foi adicionada (atrifluoracetamida precipitou parcialmente e formou um gel).o frasco de reação foi reduzido em um banho-maria a 55°C. Asolução foi misturada a 55°C, com monitoramento por TLC, aolongo de 9 horas. A reação foi concentrada in vácuo muitocuidadosamente até que 1,2 litro de metanol fosse coletado.A solução foi diluída com água (200 ml) e salmoura (600ml) , e foi extraída com EtOAc (2 litros) para gerar umasolução de cor laranja. A camada de EtOAc foi lavada comágua (1 litro) , e depois salmoura (400 ml) . Cada uma dastrês camadas aquosas/lavagens foi extraída de volta emordem seqüencial com um único litro de EtOAc para obter umasolução amarelo brilhante. Os extratos orgânicos foramcombinados e secos sobre MgSO^ (126 g). A solução orgânicaseca foi filtrada através de um absorvente de aluminabásica (3 00 ml), e concentrada in vácuo para gerar uma gomamarrom. Após azeotropia por 600 ml de tolueno, um sólidoavermelhado (117,1 g), composto 3, foi obtido.
Exemplo 5
Preparação de éster terc-butíIico de N-[2-dietilamino-5-(N-isopropilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina, composto 4.
<formula>formula see original document page 139</formula>
O composto 4 pode ser sintetizado a partir do composto2 em duas etapas. Alquilação seguindo o Exemplo 3 usandohaleto de isopropila em vez de iodeto de etila e entãoRemoção do grupo trifluoracetil seguindo o Exemplo 4.
Exemplo 6
Preparação de éster terc-butíIico de N-(2-[N,Nt-dietilamino] -5-nitropirimidin-4-il)-1-tirosina, composto 5.
<formula>formula see original document page 139</formula>
A uma solução de L-tirosina éster terc-butílico (H-Tyr(OH)-OtBu) (30,6 g, 0,129 mol) em THF (250 ml) a -10°Cfoi adicionada 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (25 g, 0,129mol), mantendo a temperatura abaixo 5°C durante a adição.Uma vez que a adição está completa, NiN-diisopropiletilamina (EtiPrzN) (33,7 ml, 0,194 mol) foiadicionada em gotas. Após agitação por 1 hora a -10°C,dietilamina (Et2NH) (66,73 ml, 0,645 mol) foi adicionadalentamente, e então a mistura de reação foi aquecida atemperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura dereação foi diluída com dietil éter (500 ml), e a camadaorgânica foi lavada com 0,2 N de ácido cítrico (3 χ 150ml), água (1 χ 150 ml), e 10% K2CO3 (3 χ 150 ml). A faseorgânica foi seca (Na2SOzi), filtrada, e concentrada invácuo para gerar um resíduo amarelo. 0 resíduo foipurificado por cromatografia instantânea (20% EtOAc/hexanosem sílica gel) para gerar 37,39 g (67%) do composto 5 comouma espuma amarela. Rr = 0,21 (25% EtOAc/hexanos em sílicagel) .
Exemplo 7
Preparação de éster terc-butíIico de N-[2-dietilamino-5 - {n-amino}pirimidin-4-il]-L-4'-(N',N'-dimetilcarbamiloxi}fenilalanina, composto 6.
<formula>formula see original document page 140</formula>
Composto 6 pode ser sintetizado a partir do composto 5em duas etapas. Carbamoilação de 5 com o uso de N,N-dimetilcarbamoil cloreto em vez de pirrolidinacarbamoilcloreto como descrito em WO 03/099809 seguido por reduçãode grupo nitro seguindo o procedimento para o Exemplo 1.
Exemplo 8
Preparação de éster terc-butíIico de N-[2-dietilamino-5-{N-isopropilamino}pirimidin-4-il] -L-4'-(N',N'-dimetilcarbamiloxi}fenilalanina, composto 7.<formula>formula see original document page 141</formula>
Composto 7 pode ser sintetizado a partir do composto 6em três etapas. Trifluoracetilação seguindo o Exemplo 2,alquilação com isopropil haleto seguindo o Exemplo 3,seguido pela remoção do grupo trifluoracetil como noExemplo 4.
Exemplo 9
Preparação de éster terc-butíIico N- [2-dietilamino-5-{N-etilamino-N-clorocarbonil}pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina, composto 8.
<formula>formula see original document page 141</formula>
Composto 8 podem ser preparados a partir de composto 3via tratamento com um excesso de fosgeno na presença de umabase adequada, por exemplo, carbonato de potássio,bicarbonato de potássio, carbonato de sódio e outros.
Os Exemplos 10-29 a seguir foram sintetizados viaacilação de 3 com agente de acilação adequado seguido pelaremoção de grupo protetor t-butil com ácido fórmico deacordo com o esquema geral mostrado abaixo.<formula>formula see original document page 142</formula>
A amino-pirimidina 3 (222,2 mmol) é dissolvida em umsolvente adequado como THF anidro (1,5 litro) : uma basecomo diisopropiletil amina, (3 eq., 666,6 mmol) éadicionada. A solução é resfriada a 0°C sob N2. O frasco dereação é ajustado com um funil de adição para igualar apressão e o funil de adição é carregado com uma solução deum haleto de acila adequado em um solvente como THF (90ml) . O haleto de acila solução é adicionado lentamente àsolução gelada de amina ao longo de duas horas. A reaçãochega lentamente até a temperatura ambiente e é agitada por36 horas. O produto N-acil resultante é recuperado eopcionalmente purificado por métodos convencionais, comoprecipitação, filtração, evaporação, cristalização eoutros.
Exemplo 10
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3-metilfuran-2 -Ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 142</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,88-1,5 (9H, m) , 1,90 (4H, bs),2,36 (3Η, bs) , 2,504,15 (12Η, m) , 4,60-4,91 (1Η, m) , 6,20-6,50 (IH, m), 6,85-7,25 (7Η, m), 7,60 (1Η, bs); eHPLC/MS: MHi = 579,2
Exemplo 11
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{Ν-(5-clorotien-2ilcarbonil)-N-etilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 143</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,90-1,30 (9H, m) , 1,94 (4H, m) ,2,75-3,75 (11H, m) , 3,85-4,20 (1H, m) , 4,75-5,00 (1H, m) ,6,17 (0, 5H, bs) , 6,5-7,00 (5H, m) , 7,14 (1H, 15 m) , 7,27(0,5H, m), 7,73 (0,5H, s), 7,78 (0,5H, s), 9,55 (IH, br); eHPLC/MS: MHi = 615.
Exemplo 12
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(5-metiltien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 143</formula>
1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,00-1,29 (9H, m) , 1,98 (4H, m) ,2,40 (3H, m) , 2,85 (0,5H, m) , 3,10-3,50 (4,5H, m) , 3,60(6H, m) , 4,02-4,28 (1H, m) , 4,76-4,95 (1H, m, superpostocom CD3OD), 6,70 (1H, m), 6,85 (1H, m), 6,98-7,15 (2H, m),7,20-7,30 (2H, m), 7,49 (0,5H, m), 7,58 (0,5H, m); eHPLC/MS: MHi = 5 9 5,2.
Exemplo 13
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(5-(piridina-2 -il)tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 144</formula>
1H RMN (3 00 MHz, CDCl3) δ 1,09-1,3 5 (9H, m) , 1,94 (4H, bs),2,82 (0,5H, bs), 3,00- 15 3,75 (10,5H, m), 3,98-4,20 (1H,m), 4,94 (1H, bs), 6,73-8,70 (12H, m), 9,71 (1H, bs); eHPLC/MS: MH' = 6 5 8,2.
Exemplo 14
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tiazol-2-ilcarbonil)aminojpirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 144</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,05-1,27 (9H, m) , 1,96 (4H, m) ,2,95-3,70 (1IH, m) , 3,97 (1H, m) , 4,91 (1H, m) , 6,74 (1H,m) , 6,70 (2,5Η, m) , 7,10-7,25 (1,5Η, m) , 7,397,80 (3Η, m) ,8,69 (IH, br); e HPLC/MS: MHi = 582,2.
Exemplo 15
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-(benzo[b] tien-2-ilcarbonil)-N-etilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 145</formula>
1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,10-1,40 (9H, m) , 1,99 (4H, m) ,2,90 (0, 5H, m) , 3,10 (0,5H, m) , 3,20-3,77 (10H, m) , 4,25(1H, m) , 5,04 (1H, m) , 6,72 (1H, d, J = 8,4 Hz), 6,98 (1H,d, J = 8,4 Hz), 7,17 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,31 (1H, d, J =8,4 Hz), 7,38-7,44 (2H, m), 7,70 (0,5H, s), 7,75 (0,5H, s),7,8 2 (3H, m); e HPLC/MS: MH+ = 6 31,2.
Exemplo 16
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3-metiltien-2-ilcarbonil)aminojpirimidin-4-3,1]-1-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 145</formula>
1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,05-1,60 (9H, m), 1,90-2,23 (4H,m), 2,39-2,72(3H, m), 2,85 (0,5H, m), 3,08-3,88 (10,5H, m) ,4,16 (IH, m), 4,75-5,00 (1Η, m, superposto com CD3OD), 6,70(0,8Η, m) , 6,84 (1,2Η, m) , 6,97 (0,8Η, m) , 7,08 (1,2Η, m) ,7,15- 7,30 (2Η, m) , 7,48 (0,4Η, m) , 7,56 (0,6Η, m) ; eHPLC/MS: MHi = 595,2.
Exemplo 17
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(4 -fluorfenilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 146</formula>
1H RMN (3 00 MHz, CDCl3) δ 1,04 (3H, t, J= 6,9 Hz), 1,17(6H, t, J = 6,9 Hz), 1,96 (4H, m), 2,55-3,28 (2H, m), 3,28-4,30 (10H, m), 4,93 (1H, bs), 6,34 (2H, br), 6,86 (2H, m),7,03 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,05-7,65 (5H, m); eHPLC/MS: MEl+ = 593.
Exemplo 18
Preparação de N- [2-dietilamino-5-(N-etil-N-(3 -fluorfenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 146</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,03 (3H, bs), 1,16 (6H, bs),1,96 (4H, m) , 2,60-3,28 (2H, m) , 3,28-4,30 (10H, m) , 4,94(IH, bs) , 6,85-8,20 (10Η, m) , 9,00 (1Η, br); eHPLC/MS: MH1 = 5 93.
Exemplo 19
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(2 -fluorfenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 147</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,85-1,30 (9H, m) , 2,03 (4H, bs) ,2,84 (0,4H, m), 3,0515 3,70 (11H, m), 4,11 (0,6H, m), 4,89(1H, bs) , 6,64 (0,4 H, bs) , 6,80-7,35 (7H, m) , 7,46 (0,6H,bs) , 7,57 (0, 6H, bs), 7,63 (0,4H, bs), .7,80-8,00 (1H, m) ,9,68 (1H, br); e HPLC/MS: MHi = 593.
Exemplo 20
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(4 -Clorofenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 147</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,04 (3H, t, J = 6,3 Hz), 1,15(6H, t, J = 6,3 Hz), 1,92 (4H, m) , 2,75 (0,4H, br), 2,85-3,25 (1,6H, m) , 3,25-3,70 (9,4H, m) , 4,08 (0,6H, br), 4,92(1H, br), 6,80-7,70 (11H, m); e HPLC/MS: MHf = 609.
Exemplo 21Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3 -clorofenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
1H RMN (300 MHzi CDCl3) δ 1,04 (3H, bs), 1,15 (6H, t, J =6,3 Hz), 1,95 (4H, m) , 2,75 (0,4H, br), 2,85-3,25 (1,6H,m) , 3,25-3,70 (9,4H, m) , 4,08 (0,6H, br), 4,95 (1H, br),7,01 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,10-7,70 (8H, m), 9,19 (1H, br);e HPLC/MS: MHi = 609.
Exemplo 22
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(2-clorofenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
]H RMN (300 MHz, CDCl,) δ 0,85-1,35 (9H, m) , 2,04 (4H, bs),2,75 (0, 4 H, m) , 2,953,70 (11H, m) , 4,21 (0,6H, br), 4,93(1H, br), 6,65-8,00 (10H, m), 9,33 (1H, br); e HPLC/MS: MH+= 609 .
Exemplo 2 3
Preparação de N- [2-dietilamino-5-ΙΝ-etil-N-(2,6-diclorofenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 149</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,95-1,30 (9Η, m) , 1,96 (4Η, m) ,2,83 (0, 19Η, πι), 15 3,15-3,75 (11,38Η, m) , 4,13 (0,19Η, m) ,4,25 (0, 13Η, m) , 4,33 (0,13Η, τη), 4,78 (0,31Η, m) , 5,00(0,6 9Η, m) , 6,60 (0,31Η, d, J = 6,6 Hz), 6,72 (0,69Η, br),7,01 (2Η, d, J= 8,4 Hz), 7,10-7,40 (6Η, m) , 7,80 (1Η, br),7,93 (IH, s); e HPLC/MS: MH1 = 644.Exemplo 2 4
15 Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piridin-2-
ilcarb onil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-(pirrolidin-1-
il)carboniloxi)fenilalanina
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,17 (9H, bs), 1,94 (4H, bs) ,2,91 (0, 4H, m) , 3,00-3,65 (11H, m) , 4,01 (0,6H, m) , 4,9025 (1H, bs), 6,62 (1H, bs), 6,80-8,25 (10H, m); e HPLC/MS: MH+= 576 .Exemplo 2 5
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piridin-4-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-30 il)carboniloxi}fenilalanina
20
O<formula>formula see original document page 150</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,75-1,5 (9Η, m), 1,96 (4Η, m),2,80-4,04 (1IH, m), 4,15 (IH, m), 4,75-5,00 (1Η, m), 5,90-6,20 (IH, m), 6,80-8,70 (9Η, m), 9,25 (1Η, br); e HPLC/MS:MH1 = 576.
Exemplo 26
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(etilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-1,4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 150</formula>
HPLC/MS: MHi = 527.
Exemplo 27
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N(metiloximetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 150</formula>HPLC/MS : Ml-I+ = 543.
Exemplo 28
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 151</formula>
RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,80-1,30 (9H, m) , 1,90 (4H, m) ,2,81 (0,4 H, br), 3,00- 3,80 (11H, m) , 4,01 (0,6H, m) , 4,91(1H, bs) , 6,70-7,70 (10,4H, m) , 8,04 (0,6H, d, J" = 6,1 Hz),9,63 (1H, br); e HPLC/MS: MH' = 556.
Exemplo 2 9
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenilmetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 151</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,97 (3H, m) , 1,17 (6H, t, J" =6,1 Hz), 1,23 (6H, bs), 1,91 (4H, m), 2,79 (0,4H, m), 2,80-3,64 (12,6H, m), 3,82 (1H, m), 4,68 (0,4H, m), 4,82 (0,6H,m) , 5,99 (1H, m) , 6,84-7,35 (10,4H, m) 7,61 (0,6H, d, J =8,4 Hz); e HPLC/MS: MH" = 589.Exemplo 30
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboni1oxi}fenilalanina.
<formula>formula see original document page 152</formula>
Etapa 1 - Preparação de Composto 9
<formula>formula see original document page 152</formula>
o composto 9 foi preparado por adição de cloreto deacetila (124 μΐ,, 1,173 mmol) a uma solução de 5-aminopirimidina 1 da Etapa 1 (825 mg, 1,65 mmol) e TEA (242µL, 1,73 mmol) em CHiCl5. (4 ml) a 0°C. A solução homogêneafoi deixada para aquecer até a temperatura ambiente e foiagitada por 16 horas. A solução foi diluída com EtOAc eágua (10 ml each) . A fase orgânica separada foi extraídacom 0,2 N de ácido cítrico (3 χ 10 ml) e o pH dos extratosaquosos combinados foi ajustado a aproximadamente 7,5 comNaHCO3 sólido. 0 produto foi extraído com EtOAc (3 χ 15 ml)e os extratos orgânicos foram combinados e lavados comsalmoura (1 χ 20 ml) , secos sobre MgSO4, filtrados, econcentrados para gerar composto 9 como uma espuma (760 mg,85%).1H RMN (CDCl3) δ 8,79 (0,7Η, s), 8,75 (0,3Η, s), 7,15 (2Η,m) , 7,05 (2Η, m) , 6,85 (0,7 Η, s), 6,35 (0,3Η, s), 5,37(0,7Η, d), 5,25 (0,3Η, d), 4,82 (1Η, m) , 3,70 - 3,40 (8Η,m) , 3,25 - 3,00 (2Η, m) , 2,10 (1,5Η, s), 2,05 (1,5Η, s),1,95 (4Η, m), 1,40 (9Η, s), 1,20 (6Η, m); e HPLC/MS: MH+ =541 .
Etapa 2 - Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 153</formula>
o produto foi preparado por adição do haleto dealquila EtI (0,37 mmol) a pirimidina 9 da Etapa 2 (0,185mmol) em THF (0,5 ml) a 0°C sob N2. KOtBu (0,2 ml, 1 M emTHF) foi adicionado a 0°C. A mistura foi agitada a 0°C por1 a 4 horas e foi então extinta com 10% ácido cítrico a0°C. A mistura foi aquecida até a temperatura ambiente. Amistura foi dividida entre EtOAc e H2O. A camada orgânicaresultante foi lavada com NaHCO3 saturado, H2O, e salmoura.A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada,concentrada, e o resíduo foi purificado por cromatografiainstantânea em sílica usando EtOAc/Hexanos. 0 produtoresultante foi aquecido com HCOOH (1 ml) a 40°C de um diapara o outro. 0 produto final foi obtido após remoção dosolvente.
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,03 (3H, m) , 1,21 (6H, m) , 1,73(0,9H, s), 1,88 (2,IH, s), 1,95 (4H, m), 2,78-3,10 (1H, m),3,17 (IH, m) , 3,35 (1Η, m) , 3,40-3,70 (8Η, m) , 3,89 (1Η,m) , 4,93 (IH, m) , 6,91 (0,3Η, d, J = 8,1 Hz), 7,03 (2Η, m) ,7,17 (0, 7Η, d, J = 8,1 Hz), 7,24 (1,4Η, d, J = 6,8 Hz),7,55 (0,6Η, d, J= 6,3 Hz), 7,78 (0,7Η, s), 7,81 (0,3Η, s),8,78 (IH, br); e HPLC/MS : MHi' = 513.
Exemplo 31
Preparação de N-[2-dietil amino-5-{N-metil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
N- [2-dietilamino-5 -{N-metil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-5L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina foi preparada como no Exemplo 30 com o uso deMeI.
<formula>formula see original document page 154</formula>
1H RMN (3 00 MHz, CDCl3) δ 1,2 3 (6H, bs), 1,71-2,20 (7H, m),2,90-3,15 (3H, m) , 3,20 (1H, m) , 3,35 (1H, m) , 3,40-3,77(8H, m) , 4,99 (1H, bs), 7,03 (2H, m) , 7,17 (1H, 10 d, J =8,1 Hz), 7,27 (1,4H, d, J = 6,3 Hz), 7,30-8,30 (2,6H, m); eHPLC/MS: = 4 99.
Exemplo 32
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-metilcarbonil-N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina.
N- [2-dietilamino-5 -{N-metilcarbonil-N-(prop-2 -inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina foi preparada como no Exemplo30 usando cloreto de propargila.
<formula>formula see original document page 155</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,26 (6H, m) , 1,74 (0,9H, s),1,94 (6, IH, m) , 2,15-2,40 20 (1H, m) , 3,19 (1H, m) , 3,3610 (1H, m) , 3,40-3,75 (8H, m) , 3,85 (1H, m) , 4,55 (1H, m) ,4,98 (1H, m) , 7,03 (2H, m) , 7,18 (1H, m) , 7,28 (1,4H, d, J= 6,8 Hz), 7,72 (0,6H, d, J = 6,3 Hz), 7,80-8,20 (2H, m); eHPLC/MS: MH'' = 523.
Exemplo 3 3
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-metilcarbonil-N-(prop-2 -inil)aminojpirimidin-4-il] -L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina.
Etapa 1 Preparação do composto 6
O composto 6 foi preparado como mostrado no Exemplo 7.
Etapa 2 Preparação do composto 10
<formula>formula see original document page 155</formula>
Composto 10 foi preparado por adição de cloreto deacetila (124 iiL, 1,173 mmol) a uma solução de 5-aminopirimidina 6 da Etapa 1 (825 mg, 1,65 mmol) e TEA (242μm, 1,73 mmol) em CH2Cl2 (4 ml) a 0°C. A solução homogêneafoi deixada para aquecer até a temperatura ambiente e foiagitada por 16 horas. A solução foi diluída com EtOAc eágua (10 ml cada). A fase orgânica separada foi extraídacom 0,2 N de ácido cítrico (3 χ 10 ml) e o pH dos extratosaquosos combinados foi ajustado a aproximadamente 7,5 comNaHCO3 sólido. 0 produto foi extraído com EtOAc (3 χ 15 ml)e os extratos orgânicos foram combinados e lavados comsalmoura (1 χ 20 ml), secos sobre MgSO4, filtrados econcentrados para gerar Composto 10 como uma espuma (760mg, 8 5%).
HPLC/MS: MH' = 515.
Etapa 3 - Preparação de N- [2-dietilamino-5- {ti-me ti lcarbonil -N- (prop-2 - inil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina.
<formula>formula see original document page 156</formula>
0 produto foi preparado por adição de propargilcloreto (0,37 mmol) a pirimidina 10 da Etapa 2 (0.185 mmol)em THF (0,5 ml) a O0C sob N2. KOtBu (0,2 ml, 1 M em THF)foi adicionado a O0C. A mistura foi agitada a O0C por 1 a 4horas e foi então extinta com 10% ácido cítrico a 0°C. Amistura foi aquecida até a temperatura ambiente. A misturafoi dividida entre EtOAc e H2O. A camada orgânicaresultante foi lavada com NaHCO3 saturado, H2O, e salmoura.
A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada,concentrada, e o resíduo foi purificado por cromatografiainstantânea em sílica usando EtOAc/Hexanos. 0 produtoresultante foi aquecido com HCOOH (1 ml) a 40°C de um diapara o outro. 0 produto final foi obtido após remoção dosolvente.
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,25 (6H, m), 1,75 (0,9H, s),1,92 (2,IH, s), 2,20 (0,7H, s), 2,31 (0,3H, s), 2,98 (3H,s), 3,09 (3H, s), 3,15 (1H, m), 3,36 (1H, m), 3,57 (4H,bs), 3,94 (1H, m), 4,50 (IH,' m), 4,95 (1H, m), 6,99 (2H,m), 7,18 (1H, m), 7,28-8,19 (4H, m); e HPLC/MS: MH+ = 497.
Exemplo 34
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-Ν-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-(dimetilamino)carboniloxi}fenilalaninafoi preparada como no Exemplo 33 usando EtI.
<formula>formula see original document page 157</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,98 (3H, m), 1,23 (6H, bs),1,71-2,20 (3H, m), 2,50- 2,90 (1H, m), 3,00 (3H, s), 3,09(3H, s), 3,18 (1H, m), 3,36 (1H, m), 3,57 (4H, m), 3,94(1H, m), 4,91 (1H, m), 7,02 (2H, m), 7,16 (1H, d, J = 8,1Hz), 7,28-7,90 (3H, m), 8,19 (1H, br); e HPLC/MS: MH+ = 487.
Exemplo 35
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-metil-N-metilcarbonilamino}pirimidin-4- 15il]-L-4'- (dimetilamino)carboniloxil fenilalanina
N-[2-dietilamino-5-{N-metil-N-metilcarbonilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina foi preparada como no Exemplo 33 usando Mel.
<formula>formula see original document page 158</formula>
1H RMN (3 00 MHz, CDCl3) δ 1,21 (6H, m) , 1,76 (1,2H, s),1,93 (1,8H, s) , 2,90-3,15 (9H, m) , 3,20 (1H, m) , 3,39 (1H,m) , 3,58 (4H, m) , 4,96 (1H, bs), 6,80-7,10 (3H, m) , 7,15-7,50 (3H, m), 7,88 (1H, s); e HPLC/MS: MH+ = 473.
Exemplo 3 6
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-Nisopropilamino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1- Preparação do composto 4
O composto 4 foi preparado como mostrado no Exemplo 5.Etapa 2 - Preparação do composto 11
<formula>formula see original document page 158</formula>
Anidrido trifluoracético (0,5 ml) foi adicionado a umasolução de 5 - aminopir imidina 4 da Etapa 1 (145 mg, 0,268mmol) e DMAP (2 mg, 0,013 mmol) em piridina (1 ml) a 0°C. Areação foi deixada para aquecer até a temperatura ambientee agitada por 16 horas. A reação foi então diluída comEtOAc e 0,2 N de ácido cítrico (10 ml cada) . A faseorgânica separada foi lavada com 0,2 N de ácido cítrico (4χ 15 ml), água (1 χ 10 ml), e salmoura (1 χ 15 ml). A faseorgânica lavada foi seca sobre MgSO4, filtrada, econcentrada para gerar o produto como uma espuma. 0 produtofoi purificado em em uma placa de cromatografiapreparatória de camada delgada (TLC), eluindo duas vezescom 2:1 hexanos/EtOAc para gerar o éster t-butilico 11 (105mg, 61%).
1H RMN (CDCl3) δ 7,61 (1H, app s), 7,15 (2H, d), 7,05 (2H,m), 5,15 (0,5H, d), 5,05 (0,5, d), 4,80 (1H, m), 4,60 (0,5H, m), 4,45 (0, 5H, m), 3,70 - 3,40 (8H, m), 3,30 - 2,95(2H, m), 1,95 (4H, m), 1,41 (9H, app d), 1,25 -1,05 (10 H,m), 1,90 (2H, app d).
0 1H RMN mostra evidência de rotâmeros como édemonstrado pela duplicação de alguns picos.
HPLC/MS: MHi = 637.
Etapa 3 - Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-isopropilamino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 159</formula>
0 éster t-butilico 11 da Etapa 2 (105 mg, 0,165 mmol)foi dissolvido em ácido fórmico (2 ml) e a soluçãohomogênea foi aquecida a 40°C por 16 horas. A mistura dereação foi concentração para gerar N-[2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-isopropilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como umsólido amarelo (93 mg, 97%). TLC: Rf = 0,39 (7:3 MeOH/HzO +TFA 0,1%, RPC-18 silica):
1H RMN (CD3OD) δ 7,59 (1H, app d), 7,25 (2H, app t) , 7,02(2H, d), 4,90 (1H, m) , 4,61 (0,5H, m) , 4,45 (0,5H, m) , 3,70- 3,50 (6H, m) , 3,42 (2H, m) , 3,30 - 3,10 (2H, m) , 1,95(4H, m) , 1,30 - 1,15 (6H, m) , 1,15 - 1,00 (4H, m) , 1,75(2H, app d) ; O nH RMN mostra evidência de rotâmeros como édemonstrado pela duplicação de alguns picos.
13C RMN (CD3OD) δ 176,7, 176,4, 162,4, 162,1, 160,6, 160,5,156,1, 155,6, 152,6, 137,2, 137,0, 132,0, 131,9, 123,8,123,7, 120,5, 120,4, 116,6, 107,7, 107,4, 57,7, 57,4, 53,3,49,1, 49,0, 48,4, 48,3, 44,3, 38,2, 37,9, 27,5, 26,7,21,3, 21,2, 19,5, 19,4, 14,2;
O 13C RMN mostra evidência de rotâmeros como édemonstrado pela duplicação de vários picos.HPLC/MS: MH" = 581.
Exemplo 37
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-Nisopropilamino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação de Composto 7
O composto 7 foi preparado como mostrado no Exemplo 8.
Etapa 2 Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-isopropilamino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi)fenilalanina
<formula>formula see original document page 160</formula>N- [2-dietilamino-5 -{N-trifluormetilcarbonil-Nisopropilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina foi preparada em um procedimentosimilar como descrito para N- [2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-isopropilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina no Exemplo 37usando composto 7 da Etapa 1 como o composto de iniciação.1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,66-1,40 (12H, m), 2,97 (3H, s),3,09 (3H, s), 3,153,50 (2H, m), 3,63 (4H, m), 4,55 (1H, m,4,98 (1H, superposto com CD3OD), 7,00 (2H, m), 7,27 (2H,m), 7,71 (1H, m); e HPLC/MS: MH1 = 555.
Exemplo 38
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-isopropil-N(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(morfolin-4il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1- Preparação do composto 5
0 composto 5 foi preparado como mostrado no Exemplo 6.
Etapa 2 - Preparação do composto 12
<formula>formula see original document page 161</formula>
DMAP (0,28 g, 2,3 mmol) e nitropirimidina 5 da Etapa 1(1,0 g, 2,3 mmol) foram dissolvido em CH2Cl2 (5 ml) .Trietilamina (0,49 ml, 3,5 mmol) e 4-morfolino carbonilcloreto (0,4 ml, 3,5 mmol) foram adicionados e a reação foiaquecida em refluxo por 18 horas. A mistura de reação foiresfriada a temperatura ambiente e concentrada in vácuo. 0resíduo foi absorvido em acetato de etila e lavada com 0,2N de ácido cítricô, água, e salmoura. A camada orgânica foiseca sobre NazSOzi, filtrada, e concentrada in vácuo paragerar 1,2 g (96%) de carbamato 12 como uma espuma amarela.1H RMN (CDCl3) δ 8.98 (1H, s), 8,70 (1H, d), 7,25-7,20 (2H,d), 7,06-7,01 (2H, d), 4,92-4,88 (1H, m) , 3,74-3,45 (12H,m), 3,22-3,28 (2H, m), 1,40 (9H, s), 1,23-1,16 (6H, m).
Etapa 3 -Preparação do composto 13]
<formula>formula see original document page 162</formula>
Um frasco agitador Parr foi carregado comnitropirimidina 12 da Etapa 2 (0,9 g, 1,65 mmol), oxido deplatina (0, 045 g, 5% em peso), e metanol (4 ml). Ácidoacético glacial (3 gotas, cat.) e acetona (0,36 ml, 4,96mmol) foram adicionados e o frasco foi agitado em umhidrogenador (303,36 kPa) por 24 horas. A mistura de reaçãofoi filtrada através de um absorvente de celite econcentrada in vácuo. 0 resíduo foi abosrovido em acetatode etila e lavado com NaHCO3 saturado e salmoura. A camadaorgânica foi seca sobre Na2SOzi, filtrada, e concentrada invácuo para gerar 0,76 g (83%) N-isopropilaminopirimidina 13cmo uma espuma marrom.
1H RMN (CDCl3) δ 7,61 (1H, s), 7,26-7,16 (2H, d), 7,03-6,93(2H, d), 6,92 (1H, m), 4,85-4,78 (1H, m), 3,74 (4H, m),3,70-3,45 (9H, m), 3,20-3,15 (2H, d), 3,10-2,98 (1H, m),1,38 (9H, s), 1,19-1,14 (6H, m), 1,06-1,03 (6H, m).
Etapa 4 - Preparação do composto 14<formula>formula see original document page 163</formula>
N-isopropilaminopirimidina 13 da Etapa 3 (0,23 g, 0,41mmol) foi dissolvida em diclorometano (1,5 ml). Piridina(0,1 ml, 1,2 mmol) foi adicionada e a reação foi resfriadaèm um banho de gelo. Cloreto de acetila (0,088 ml, 1,2mmol) foi adicionado e a reação aquecida até a temperaturaambiente e agitada por 18 horas. A mistura de reação foiconcentrada in vácuo e o resíduo abosrovido em acetato deetila. A solução foi lavada com NaHCO3 saturado, água, esalmoura.
A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada, econcentrada in vácuo para gerar produto bruto como umaespuma marrom. 0 resíduo foi purificado por cromatografiainstantânea (2:1 acetato de etila/hexanos) para gerar 0,18g (73%) acetamida 14 como um sólido bege.
1H RMN (CDCl3) δ 7,60 (1H, s), 7,20-7,10 (2H, m), 7,03-6,98(2H, d), 5,15-5,00 (1H, dd), 4,85-4,70 (2H, m), 3,75-3,72(4H, m), 3,70-3,50 (9H, m), 3,25-3,00 (3H, m), 1,87 (1H,s), 1,41-1,39 (9H, d), 1,25-1,18 (6H, m), 1,13-1,05 (3H,m), 1,00-0,95 (1,5H, d), 0,74-0,68 (1,5H, d); e HPLC/MS:MH+ = 599.
Etapa 5- Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(morfolin-4-il)carboniloxi}fenilalanina<formula>formula see original document page 164</formula>
Um frasco foi carregado com éster t-Butílico 14 daEtapa 4 (180 mg, 0,30 mmol) e dissolvido em ácido fórmico(5 ml) . A solução foi aquecida a 40°C por 18 horas. Amistura foi resfriada até a temperatura ambiente econcentrada in vácuo. 0 resíduo foi purificado por HPLCpreparatória (30-50% AcN/H^O por 100 minutos em uma colunaa Luna 5μ C18(2) (250 χ 10 mm); 230nm detector) para gerar75 mg (46%) de N- [2- dietilamino-5-{N-isopropil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(morfolin-4-il)carboniloxi}fenilalanina como um pó branco. Rf derotâmeros= 0,52 e 0,59 (7/3 metanol: água + 0,1% ácidotrifluoracético em Whatman MKC18F Sílica Gel 60 A).1H RMN (CD3OD) δ 7,60 (1H, s), 7,26 (2H, m), 7,02-6,99 (2H,d), 5,15-5,00 (1H, m), 4,75-4,60 (1H, m), 3,72-3,42 (13H,m) , 3,31-3,20 (1H, m) , 1,90 (1H, s), 1,67 (1H, s), 1,30-1,20 (6H, m), 1,13-1,06 (3H, m), 0,95-0,90 (1,5H, d), 0,70-0,65 (1,5H, d);
13C RMN (CD3OD) δ 174,1, 173,9, 173,6, 163,0, 155,6, 152,5,151,6, 143,3, 143,0, 136,3, 131,3, 131,2, 123,3, 123,2,112,1, 67,6, 57, 56,9, 36,5, 35,3, 22,9, 21,4, 21,3, 19,0,12,9; e HPLC/MS: MHi = 543.
Exemplo 3 9
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-isopropil-N(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação do composto 4
0 composto 4 foi preparado como mostrado no Exemplo 5.
Etapa 2 - Preparação do composto 15
<formula>formula see original document page 165</formula>
N-isopropilaminopirimidina 4 da Etapa 1 (0,44 g, 0,81mmol) foi dissolvida em diclorometano (3 ml). Piridina (0,2ml, 2,4 mmol) foi adicionada e a reação foi resfriada em umbanhod e gelo. Cloreto de acetila (0,17 ml, 2,4 mmol) foiadicionado e a reação aquecida até a temperatura ambiente eagitada por 18 horas. A mistura de reação foi concentradain vácuo e o resíduo abosrovido em acetato de etila. Asolução foi lavada com NaHC03 saturado, água, e salmoura. Acamada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada, econcentrada in vácuo para gerar produto bruto como umaespuma marrom. 0 resíduo foi purificado por cromatografiainstantânea (2:1 acetato de etila/hexanos) para gerar 0,42g (89%) acetamida 15 como um gel bege.
1H RMN (CDCl3) δ 7,60 (1H, s), 7,18-7,00 (4H, m), 5,15-5,00(1H, dd), 4,85-4,75 20 (2H, m), 3,68-3,42 (8H, m), 3,25-3,00 (2H, m), 1,98-1,87 (7H, m), 1,40-1,38 (9H, d), 1,25-1,17 (6H, m), 1,15-1,05 (3H, m), 1,00-0,95 (1,5H, d), 0,74-0,68 (1,5H, d); e HPLC/MS: MH+ = 583.
Etapa 3 - Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-isopropil-N(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 166</formula>
Um frasco foi carregado com éster t-butílico 15 daEtapa 2 (0,25 g, 0,43 mmol) e dissolvido em ácido fórmico(5 ml) . A solução foi aquecida a 40°C por 18 horas. Amistura foi resfriada até a temperatura ambiente econcentrada ín vácuo para gerar 200 mg (88%) de N- [2-dietilamino-5 -{N-isopropil-N-(metilcarboni1)amino)pirimidin-4-il] - L-4'-{ (pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina. Ri-- de rotâmeros= 0,32 e 0,38 (7/3 metanol:água + 0,1% ácido trifluoracético em Whatman MKC18F SílicaGel 60 A).
1H RMN (CD3OD) δ 8,12 (1H, s), 7,52 (1H, m), 7,28-7,20 (2H,t) , 7,01-6,96 (2 H, d), 4,75-4,60 (1H, m) , 3,54 (6H, m) ,3,43-3,37 (3H, m) , 3,30-3,15 (2H, m) , 2,00-1,90 (6H, m) ,1,62 (1H, s) , 1,23-1,19 (6H, t), 1,15-1,05 (3H, m) , 0,95-0,85 (1,5H, d), 0,75-0,65 (1,5H, d);
13C RMN (CD3OD) δ 174,7, 174,5, 165,4, 155,3, 151,7, 136,5,136,4, 131,2, 131,1, 123,0, 110,6, 56,9, 56,7, 37,1, 36,8,26,7, 25,9, 22,9, 22,7, 21,6, 21,4, 19,3, 13,3; e HPLC/MS:MEI+ = 527.
Exemplo 40
Preparação de N-12-dietilamino-5-{N-metilcarbonil-N-(fenilmetil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalaninaEtapa 1 - Preparação do composto 1
O composto 1 foi preparado como mostrado no Exemplo 1.
Etapa 2 - Preparação do composto 16
<formula>formula see original document page 167</formula>
Benzaldeído (0,043 g, 0,413 mmol) e NaCNBH3 (0,037 g,0,60 mmol) seguido por algumas gotas de ácido acético foramadicionados a uma solução de aminopirimidina 1 da Etapa 1(0,20 g, 0,40 mmol) em MeOH (2 ml). A mistura de reação foiagitada de um dia para o outro sob nitrogênio. Com otérmino, 1 ml de HCl foi adicionado e a mistura de reaçãofoi dividida entre EtOAc/ solução saturada de NaHCO3. Acamada orgânica foi seca sobre Na2SO4 e concentrada invácuo. 0 material bruto foi purificado em colunainstantânea com um gradiente solvente 60-100% EtOAc emhexanos para produzir 16.
HPLC/MS: = 589,3.
Etapa 3 - Produção de N- [2-dietilamino-5-{N-metilcarbonil-N(fenilmetil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1 -il)carboniloxi)fenilalanina.
<formula>formula see original document page 167</formula>
Trietilamina (0,03 ml, 0,20 mmol) e Ac2O (0,02 ml,0,21 mmol) foram adicionados a uma solução de N-benzilaminopirimidina 16 da Etapa 2 (0,100 g, 0,17 mmol) emCH2Cl2 (0,85 ml). A mistura foi agitada por 2 dias. Com otérmino, a mistura de reação foi dividida entre EtOAc eH2O. A camada orgânica foi seca com Na2SO4 e concentrada invácuo. 0 resíduo foi purificado em uma placa de TLCpreparatória eluída com 5% MeOH em CH2Cl2. Ácido fórmico (1ml) foi adicionado a éster t-butílico e agitado a 40°C deum dia para o outro. 0 ácido fórmico foi removido paragerar produto ácido puro N- [2-dietilamino-5-{N-metilcarbonil-N-(feniImetil)amino}pirimidin-4-il] -L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina.
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,12-1,17 (6H, m), 1,70 (1,5H,s), 1,89-1,97 (5,5H, m), 2,91-2,98 (0,50H, m), 3,06-3,14(1H, m), 3,25-3,70 (8,5H, m), 4,12-4,18 (0,5H, m), 4,73(0, 5H, m), 4,92 (1H, m), 5,02-5,06 (0,5H, m), 5,41-5,46(1H, d, J = 14,4 Hz), 6,08 (0,5H, br), 6,98-7,09 (5H, m),7,14 (2H, d, J= 7,2 Hz), 7,27 (2H, superposto com CDCl3),7,35 (1H, s), 8,17 (1H, bs); e HPLC/MS: MH+ = 575,2
Exemplo 41
Preparação de N-12-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-(prop-2 -inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação do composto 2
0 composto 2 foi preparado como mostrado no Exemplo 2.
Etapa 2 - Preparação do composto 17
<formula>formula see original document page 168</formula>Propargil brometo (375 μϋ,, 3,37 mmol, 80% em tolueno) ,carbonato de potássio (465 mg, 3,37 mmol), e iodeto depotássio (111 mg, 0,673 mmol) foram adicionados a umasolução de trif luoracetamida 2 da Etapa 1 (392 mg, 0,67mmol) em acetona (10 ml). A mistura foi agitada emtemperatura ambiente de um dia para o outro. Acetona foiremovida e o resíduo foi dissolvido em 100 ml diclorometanoe lavado com 5 0 ml de água. A camada orgânica foi secasobre Na2SOzi, filtrada, concentrada in vácuo para produzir N-propargil amida 17 (425 mg, 100% de rendimento).
Etapa 3 - N- [2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 169</formula>
o éster 17 da Etapa 2 (50 mg, 0,08 mmol) foidissolvido em ácido fórmico (2 ml), agitado a 40°C de umdia para o outro. Ácido fórmico foi removido in vácuo, e amistura bruta foi purificada por HPLC preparatória paraobter o ácido N- [2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-(prop-2 -inil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como um pó branco como sal deTFA.
1H RMN (300 MHz, CD:i0D) δ 1,18 (6H, m) , 1,90 (4H, m) , 2,38(1H, m) , 3,05-3,85 (11H, m, superposto com CD3OD), 4,48-4,70 (1H, m) , 4,82-4,95 (1H, bs) , 6,95 (2H, m) , 7,10 (2H,<formula>formula see original document page 170</formula>
m) , 7,93 (IH, s); e HPLC/MS: MH+ = 577,2.
Exemplo 42
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{Ν-(furan-2-ilcarbonil) -N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1- Preparação do composto 18
<formula>formula see original document page 170</formula>
Uma solução de éster 17 (preparada como no Exemplo 41)(226 mg, 0,357 mmol) em MeOH (4:1) foi resfriada até a O0Cem um banho de gelo. A essa solução foi adicionadocarbonato de potássio (247 mg, 1,79 mmol), e a mistura foideixada para aquecer até a temperatura ambiente, e ela foiagitada de um dia para o outro. MeOH foi removido in vácuo.
0 resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 (50 ml), e lavado comsalmoura (25 ml). A camada aquosa foi extraída com CH2Cl2(50 ml), e a camada orgânica combinada foi seca sobreNa2SO4, filtrada, concentrada, e seca in vácuo paraproduzir 18 como um óleo escuro (191 mg, 100% derendimento).
Etapa 2 - Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(furan-2-ilcarbonil)-N-(prop-2- 10 inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi)fenilalanina
<formula>formula see original document page 170</formula>Cloreto de oxalila (50 μϋι, 0,57 mmol) e uma gota deDMF foram adicionados a uma solução de ácido 2-furanocarboxilico 19 (43 mg, 0,38 mmol) em 1 ml CH2Cl2 e asolução foi agitada por uma hora e resfriada a 0°C em umbanho de gelo. Trietilamina (53 RL, 0,38 mmol), DMAP(quantidade catalítica), e N-propargilaminopirimidina 18 daEtapa 2 (100 mg, 0,19 mmol) foram adicionados à solução. Amistura foi deixada para aquecer até a temperatura ambientee ela foi agitada de um dia para o outro. A mistura dereação foi diluída com CH2Cl2 (50 ml) , lavada com IN HClaq. (25 ml), NaHCO3 saturado (25 ml), e salmoura (25 ml). Acamada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada,concentrada in vácuo. Uma mistura bruta foi triturada comheptano. O sólido resultante foi filtrado, e enxaguado com heptano. O sólido foi purificado por a cromatografiainstantânea com sistema de solvente 1:1 Hexano e EtOAc paraproduzir 100 mg de pó (83,5% de rendimento). 0 sólido foidissolvido em 2 ml ácido fórmico e agitado a 40°C de um diapara o outro. Ácido fórmico foi removido e o resíduo foipurificado por HPLC preparatória para obter pó branco de N-[2-dietilamino-5 -{N-(furan-2 -ilcarbonil)-N-(prop-2 -inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como um sal de TFA.
1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,26 (6H, t, J = 7,0 Hz), 1,99(4H, m) , 2,68 (0,5H, s), 2,79 (0,5H, s), 3,18 (1H, m) ,3,33-3,84 (IlH, m), 4,78-4,99 (1H, m, superposto comCD3OD), 6,50 (1H, m) , 6,85 (0,5H, m) , 6,96 (1H, m) , 7,04(1, 5H, m) , 7,19 (1H, d ,J = 8,4 Hz, 7,30 (1H, d, J = 8,4Hz), 7,46 (0, 5H, s), 7,60 (0,5H, s), 7,67 (1H, s); e 5HPLC/MS: MH1 = 5 7 5,2.Exemplo 43
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-prop-2-inil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 172</formula>
[Ν-[2-dietilamino-5-{N-prop-2-inil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina foi preparada em umprocedimento similar que N- [2-dietilamino-5-{N-(furan-2 -ilcarbonil) - N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il] -1-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina descrita noExemplo 42.
1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,22 (6H, m), 1,98 (4H, bs), 2,65(0,5H, s), 2,72 (0,5H, s), 3,06-3,50 (5H, m), 3,60 (6,5H,m), 3,80-3,90 (0,5H, m), 4,83-5,00 (1H, superposto comCD3OD), 6,87 (1H, d, J" = 8,4 Hz), 7,02 (2H, m), 7,12 (1H,d,J= 8,4 Hz), 7,27 (1H, bd), 7,40 (0,5H, bs), 7,58 (2H,m) , 7,68 (0,5H, bs); e HPLC/MS: MH+ = 591,2
Exemplo 44
Preparação de N- [2-dietilamino-5- {N-trif luormetilcarbon.il -N-(2-fenetil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação do composto 2
O composto 2 foi preparado como mostrado no Exemplo 2.
Etapa 2 - Preparação do composto 21<formula>formula see original document page 173</formula>
Bromoetilbenzeno 20 (1,2 ml, 8,5 mmol) , carbonato depotássio (l,2g, 8,5 mmol), e iodeto de potássio (282 mg,1,7 mmol) foram adicionados a uma solução detrifluoracetamida 7 da Etapa 1 (1,0 g, 1,7 mmol) e amistura foi agitada em temperatura ambiente por 5 dias.Acetona foi removida in vácuo, e o resíduo foi dissolvidoem EtOAc (IOOml) e lavado com IN HCl (50ml) , e NaHCO3saturado (50 ml). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4,filtrada, concentrada in vácuo. 0 resíduo foi isolado porcromatografia em coluna em sílica gel usando 9:1hexanosEtOAc, e 5:5 hexanos-EtOAc como eluante para gerar oproduto 21(420 mg, 35 % de rendimento).
Etapa 3 - Preparação de ácido N-[2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-(2 - fenetil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 173</formula>
o és ter 21 da Etapa 2 foi tratado com HCOOH como napreparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(furan-2-ilcarbonil) -N-(prop-2 -inil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como descrito no Exemplo 42para obter o ácido N- [-dietilamino-5 -{N-trifluormetilcarboniI-N-(2-fenetil)amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' -{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina.1H RMN (3 00 MHz, CDCl;,) δ 1,00-1,29 (6H, m) , 1,94 (4H, m) ,2,80-4,30 (13H, m), 4,44 (0,3H, t,J= 6,9 Hz), 4,88 (0,7H,m) , 5,25 (0, 3H, m) , 6,08 (0,35H, br), 6,40 (0,35H, br),6,82-7,34 (9H, m) , 7,04-8,10 (2H, m) ; e HPLC/MS: MH+ =643 , 2
Exemplo 4 5
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-2-feniletil-N-(tien-2 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxijfenilalanina
<formula>formula see original document page 174</formula>
N- [2-dietilamino-5-{N-2 -feniletil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina foi preparada emprocedimento similar que o de N- [2-dietilamino-5-IN-(furan-2-ilcarbonil)-N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como descrito no
Exemplo 42.
1H RMN (300 MHz, CD:i0D) δ 1,21 (6H, m) , 2,01(4H, m) , 2,70-3,80 (13H, m) , 4,0815 4,18 (0,3H, m) , 4,25-4,45 (0,7H, m) ,4,79-4,92 (1H, m, superposto com CD3OD), 6,83 (2H, m) , 6,98(2H, m) , 7,10-7,45 (7,5H, m) , 7,53 (1,5H, m) ; e HPLC/MS:
MH'' = 6 5 7,2
Exemplo 4 6Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(4-clorofenilcarbonilmetil)-N-(trifluormetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-(pirrolidin-l-il)carboniIoxi}fenilalanina
Etapa 1- Preparação do composto 2
O composto 2 foi preparado como mostrado no Exemplo 2.
Etapa 2 - Preparação do composto 23
<formula>formula see original document page 175</formula>
Dicloroacetofenona 22 (567 mg, 3,0 mmol) e carbonatode potássio (4 97 mg, 3,6 mmol) foram adicionados a umasolução de trif luoracetamida 7 da Etapa 1 (330 mg, 0,6mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 4dias. Mais 400 mg de dicloroacetof enona 22 foramadicionados, e a mistura foi agitada em temperaturaambiente por mais três dias. Acetona foi removida in vácuo.
0 resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 (50 ml), e lavado comágua (25 ml χ 1). A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4,filtrada, concentrada in vácuo. O. bruto foi triturado comEtOAc e o sólido foi filtrado e coletado para gerar oproduto puro 23 (217 mg, 48% de rendimento).
Etapa 3- Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(4 -clorofenilcarbonilmetil)-N-(trifluormetilcarbonil)amino}
<formula>formula see original document page 175</formula>O éster 23 da Etapa 2 foi tratado com HCOOH como napreparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(furan-2-ilcarbonil) -N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4 -il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como descrito no Exemplo 42para obter o ácido, N-[2-dietilamino-5-{N-(4 -clorofenilcarbonilmetil)-N-(trifluormetilcarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina.
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,16 (6H, m) , 1,94 (4H, bs),3,08-4,05 (IOH, m) , 4,51 (1H, dd, J = 18,0 Hz, 24,0 Hz),4,68 (0,5H, m) , 4,90 (1H, m) , 5,28 (0,5H, d, J = 18,0 Hz),6,77 (1H, d, J = 9,0 Hz), 7,00-7,07 (2H, m), 7,19 (0,5H, d,J = 6,0 Hz), 7,28 , (1H, m), 7,45 (2,5H, m), 7,79 (1H, d, J= 9,0 Hz), 7,90 (1H, d, J = 9,0 Hz), 7,96 (1H, d, J = 9,0Hz), 8,05-8,11 (1H, superposto com HCOOH); e HPLC/MS: MH+ =691,2
Exemplo 4 7
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{2-oxopirrolidin-1-il}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação do composto 1
O composto 1 foi preparado como mostrado no Exemplo 1.
Etapa 2 - Preparação do composto 24
<formula>formula see original document page 176</formula>
4 - c lorobut ir i 1 cloreto (250 uL, 2,22 mmol) foiadicionado a uma solução da 5-aminopirimidina 1 da Etapa 1(1,01 g, 2,03 mmol) e DIEA (3 88 μL, 2,22 mmol) em CH2Cl2 (4ml) a 0°C. A solução homogênea foi deixada para aquecer atéa temperatura ambiente e foi agitada por 16 horas. Amistura de reação foi diluída com EtOAc e hexanos (10 mleach) e a porção orgânica foi lavada com água (2 χ 20 ml),NaHCO3 saturado (3 χ 20 ml), salmoura (1 χ 20 ml), secasobre MgSO4, filtrada, e concentrada até um óleo marrom 24(1,21 g, 99%) que foi usado sem purificação adicional.
HPLC/MS: MH' = 603.
Etapa 3- Preparação do composto 25
<formula>formula see original document page 177</formula>
Uma solução heterogênea do cloreto 24 da Etapa 2 (316mg, 0,523 mmol) e Cs2CO3 (187 mg, 0,576 mmol) em CH3CN (4ml) foi aquecida a 60°C por 4 horas. A mistura de reaçãofoi diluída com EtOAc e água (10 ml cada) e a porçãoorgânica separada lavada com água (2 χ 20 ml), salmoura (1χ 20 ml), seca sobre MgSO4, filtrada, e concentrada a umóleo dourado escuro 25 (261 mg, 88%) que foi usado sempurificação adicional.
1H RMN (CDCl3) δ 7,79 (1H, s), 7,17 (2H, d), 7,13 (2H, d),5.19 (2H, d), 4,85 (1H, m),3,70 - 3,40 (10H, m), 3,20 (2H,t), 2,55 (2H, t), 2,15 (2H, t), 1,95 (4H, m), 1,40 (9H, s),1.20 (6H, t) ; e HPLC/MS: MHi = 567.
Etapa 4 - Preparação de N- [2-dietilamino-5-{2 -oxopirrolidin-1-il}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 178</formula>
o éster t-butílico 25 da Etapa 3 (261 mg, 0,461 mmol)foi dissolvido em ácido fórmico (2 ml) e a soluçãohomogênea foi aquecida a 40°C por 16 horas. A mistura dereação foi concentrada e o produto foi purificado por HPLCde fase reversa para gerar N-[2-dietilamino-5-{2 -oxopirrolidin-1-il}pirimidin-4-il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como um sal de TFA quase branco(46,5 mg, 16%). TLC: Rf = 0,51 (7:3 MeOH/HzO + TFA 0,1%,RPC-18 sílica):
1H RMN (CD3OD) δ 7,79 (1H, s), 7,30 (2H, d), 7,02 (2H, d),3,70 - 3,40 (1IH, m), 3,20 (1H, m), 2,58 (2H, t), 2,25 (2H,m), 1,99 (4H, m), 1,25 (6H, t);
13C RMN (CD3OD) δ 180,8, 174,5, 161,6, 156,1, 153,2, 152,7,143,2, 136,8, 132,2, 124,0, 112,5, 57,9, 52,1, 50,8, 48,3,45,3, 37,5, 32,3, 27,5, 26,7, 19,8, 13,7; e HPLC/MS: MEI+ =511 .
Exemplo 4 8
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{2,5-dioxopirrolidin-l-il}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação do composto 1
O composto 1 foi preparado como mostrado no Exemplo 1.
Etapa 2 - Preparação de Composto 2 6<formula>formula see original document page 179</formula>
CDI (298 mg, 1,80 mmol) foi adicionado a uma soluçãoda 5-aminopirimidina 1 da Etapa 1 (306 mg, 0,614 mmol) eanidrido succínico (214 mg, 2,15 mmol) em CH2Cl2 (3 ml). Areação foi agitada por 16 horas em temperatura ambiente eentão EtOAc e água foram adicionados (10 ml cada). A faseorgânica separada foi lavada com água (1 χ 10 ml), NaHCO3saturado (2 χ 20 ml), salmoura (1 χ 20 ml), seca sobreMgSO4, filtrada, e concentrada para gerar o produto 26 comouma espuma (236 mg, 66%) que foi usado sem purificaçãoadicional. TLC: Rf = 0,24 (100% EtOAc, silica gel).
1H RMN (CDCl3) δ 7,70 (1H, s), 7,10 (2H, d), 7,00 (2H, d),4,95 (2H, app br s), 3,55 - 3,40 (8H, m), 3,19 (2H, app brs), 2,85 (4H, br s), 1,95 (4H, m), 1,40 (9H, s), 1,20 (6H,t) ; e HPLC/MS: MH}= 581,
Etapa 3 - Preparação de N-[2-dietilamino-5-{2,5 -dioxopirrolidin-l-il}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 179</formula>
O éster t-butílico 26 da Etapa 2 (236 mg, 0,406 mmol)foi dissolvido em ácido fórmico (2 ml) e uma soluçãohomogênea foi aquecida a 40°C por 16 h. A mistura de reaçãofoi concentrada e o produto foi purificado por HPLC de fasereversa para gerar N-[2-dietilamino-5 -{2,5-dioxopirrolidin-l-il}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina como um sal de TFA branco (72 mg, 28%) . TLC:Rf = 0,63 (7:3 Me0H/H20 + TFA 0,1%, RPC-18 sílica):
1H RMN (CD3OD) δ 7,75 (1H, s), 7,25 (2H, d), 7,05 (2H, d),3,60 (6H, m), 3,45 (2H, 15 in), 3,15 (1 H, m), 2,85 (4H,s), 2,00 (4H, m), 1,25 (6H, t);
13C RMN (CD3OD) 6 179,7, 174,3, 161,2, 156,2, 153,7, 152,7,145,0, 136,6, 132,4, 123,9, 106,7, 58,2, 48,4, 48,3, 45,8,37,8, 30,6, 27,5, 26,7, 13,7; e HPLC/MS: = 525.
Os Exemplos 49-72 a seguir foram sintetizados a partirdo composto 8, preparado como mostrado no Exemplo 9, porreação com uma amina adequada sob condições convencionais.
<formula>formula see original document page 180</formula>
De preferência, a reação de uma quantidade eqüimolarou excesso da amina faz contato com composto 8 em umsolvente adequado como, por exemplo, tetrahidrofurano,dioxano, clorofórmio e outros. Após o término da reação, oproduto da uréia pode ser recuperado por métodosconvencionais, incluindo neutralização, evaporação,extração, precipitação, cromatografia, filtração, e outrosou, alternativamente, é empregada na etapa seguinte sempurificação e/ ou isolamento. 0 grupo protetor t-butil podeser removido por contato com ácido fórmico para gerar as N-etil uréias de acordo com o esquema geral mostrado abaixo.Após o término da reação, o produto da uréia pode serrecuperado por métodos convencionais, incluindoneutralização, evaporação, extração, precipitação,cromatografia, filtração, e outros.
Exemplo 4 9
Preparação de N-[2-dietil amino-5-{N-etil-N-(morfolin-4 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L,4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 181</formula>
HPLC/MS: MHi = 584,2.
Exemplo 50
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(2Η-5H-pirrol-1-il-carbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 181</formula>
1H RMN (3 00 MHz, CDCl3) δ 1,05 (3H, t, J = 1 Hz), 1,21 (6H,t, J = 7 Hz), 1,89-1,98 (4H, m), 3,09-3,66 (12H, m), 3,84-3,95 (4H, m), 4,89-4,94 (1H, m), 5,64 (2H, s), 6,72 (1H, d,J = 7,2 Hz), 6,99 (2H, d,J = 8,4 Hz), 7,12 (2H, d,J= 8,7Hz), 7,71 (1H, s), 8,13 (1H, s);
HPLC/MS: MHi = 566,6.Exemplo 51
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-(dietilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 182</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,93 (6H, t, J = 7 Hz), 1,03 (3H,t, J = 7,2 Hz), 1,21 (6H, t, J = 7,2 Hz), 1,90-1,99 (4H,m), 2,99-3,07 (4H, m), 3,11-3,22 (3H, m) , 3,38 (1H, m),3,44 (2H, t, J = 6,3 Hz), 3,52-3,66 (6H, m), 4,83-4,89 (1H,m) , 6,66 (1H, d, J = 7 Hz), 7,02 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,14(2H, d, J = 8,4 Hz), 7,64 (1H, s), 8,12 (1H, s); e HPLC/MS:MH+ = 570,3.
Exemplo 52
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-ciclopentilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 182</formula>
1H RMN (3 00 MHz, CDCl3) δ 1,03 (3H, t, J = 6,9 Hz), 1,22(6H, t,J= 7,2 Hz), 1,28- 1,68 (8H, m), 1,90-1,99 (4H, m),2,44 (3H, s), 3,13-3,22 (3H, m), 3,31-3,36 (1H, m) , 3,44(2H, t, J = 6,3 Hz), 3,52-3,66 (6H, m), 4,14-4,22 (1H, πι),4,84-4,91 (1H, m), 6,69 (1H, d, J = 16,9 Hz), 7,02 (2H, d,J = 8,4 Hz), 7,14 (2Η, d, J = 8,7 Hz), 7,64 (1Η, s), 8,11(1H, s) ;
HPLC/MS: MH' = 596,3.
Exemplo 5 3Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenilmetilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxil fenilalanina
<formula>formula see original document page 183</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl;i) δ 1,05 (3H, t, J = 7, 2 Hz), 1,19(6H, t, J = 6,9 Hz), 1,881,96 (4H, m), 2,90 (1,5H, m), 3,35(1, 5H, m) , 3,40-3,66 (9H, m) , 4,34 (2H, m) , 5,01 (1H, m) ,5,50 (2H, br), 6,94 (2H, m) , 7,08 (2H, d, J = 8,4 Hz),7,21-7,28 (5H, superposto com CDCl3), 7,80 (1H, s); eHPLC/MS: MHi = 6 04,3.
Exemplo 54
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(1,3 -dimetilmorfoLin-4 -ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il}-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 183</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,99-1,07 (9H, m), 1,22 (6H, t, J= 7,2 Hz), 1,90-1,99 (4H, m) , 2,38-2,48 (1,8H, m) , 3,12-3,65 (16,2Η, m) , 4,81-4,88 (1Η, m) , 5,30-6,40 (1Η, br),6,48 (1Η, m) , 7,04 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,13 (2H, d,J =8,4 Hz), 7,75 (1H, s); e HPLC/MS: MH+ = 612,3Exemplo 55
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3 , 4 -diidroisoquinolin-2(IH) -ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 184</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,01-1,06 (3H, t, J = 6, 9 Hz),1,69-1,21 (6H, t, J = 6,9 Hz), 1,91-203 (4H, m), 2,67 (1H,15 m), 3,15-3,73 (15H, m), 4,25 (2H, bs), 4,85 (1H, bs), 6,33(1H, m) , 6,94-7,19 (8H, m) , 7,20-7,50 (1H, br), 7,73 (1H,S) ; HPLC/MS: = 630,3.
Exemplo 56
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(N-ciclohexil-N-etilaminocarbonil)-N-etilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 184</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,95-1,051 (6H, m) , 1,18-1,69(16H, m) , 1,92-1,97 (4H, m) , 2,90-3,72 (15H, m) , 4,80-4,65(1H, q, J,= 6 Hz), 6,50 (1H, d,J= 6,3 Hz), 7,03 (2H, d, J= 8,4 Hz), 7,15 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,66 (1H, s), 8,16(IHi S); HPLC/MS: MH' = 624,3.
Exemplo 5 7
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(4-metilpiperidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 185</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,88-0,98 (3H, m) , 0,99-1,04 (3H,t, J = 7,2 Hz), 1,201,38 (8H, m), 1,45-1,53 (3H, m), 1,90-1,99 (4H, m) , 2,62 (2H, m) , 3,14-3,22 (3H, m) , 3,31-3,44(1H, m) , 3,45 (2H, t, J" = 6,6' Hz), 3,52-3,73 (8H, m) , 4,84-15 4,90 (1H, q, J = 5,1 Hz), 6,61 (1H, d, J = 7,2 Hz), 7,03(2H, d ,J = 8,4 Hz), 7,14 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,69 (1H,s) , 8,09 (1H, s) ; HPLC/MS: MHi = 596,3.
Exemplo 58
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-prop-2 -inilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 185</formula>
1H RMN (300 MHz, CDC1:!) δ 1,05 (3H, t, J = 6,9 Hz) , 1,23(6H, t, J = 6,9 Hz), 1,91- 1,99 (4H, m) , 2,19 (1H, m) , 2,67(3H, s) , 3,17-3,66 (12H, m) , 3,74-3,77 (2H, m) , 4,84-4,91(1H, q, J = 7,2 Hz), 6,53 (1H, d, J = 6,1 Hz), 7,03 (2H, d,J = 8,4 Hz), 7,14 (2Η, d, J = 8,4 Hz), 7,65 (1Η, s), 8,09(1H, s); e HPLC/MS: = 5 6 6,2
Exemplo 59
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-Nfenilmetilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 186</formula>
3H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,05 (3H, t, J = 6, 9 Hz), 1,14(6H, t, J = 6,9 Hz), 1,89- 1,98 (4H, m) , 2,48 (3H, bs),3,06-3,56 (12H, m), 4,22-4,31 (2H, m), 4,72-4,75 (1H, m),5,36 (1H, m) , 7,00-7,05 (4H, m) , 7,14-7,26 (5H, m) , 7,26(1H, br), 7,62 (1H, s); e HPLC/MS: MEI+ = 618,3
Exemplo 60
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenetilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 186</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,97-1,02 (3H, t, J = 7,2 Hz),1,21 (6H, t,J= 6,9 Hz), 1,87-1,94 (4H, m) , 2,71 (2H, m) ,2,92-2,95 (2H, m), 3,22-3,65 (12H, m), 4,99-5,06 (1H, q, J= 7,2 Hz), 5,25 (IH, bs), 6,60-6,90 (1Η, br), 6,94 (2Η, d,J = 8,4 Hz), 7,057,24 (2Η, m), 7,71 (1H, s); e HPLC/MS: MH+= 618,3
Exemplo 61
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(biciclo[2 .2.1]heptan-2 -il)aminocarbonil)-N-etil amino}pirimidin-4-il]-L-4 ' -(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 187</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) ó 0,86-1,45 (16 Η, τη) , 1,70-2,19(6H, m) , 2,80-3,81 (13H, m) , 4,45 (1H, m) , 5,06 (1H, m) ,15 5,89 (1H, m), 6,34 (1H, m), 6,99 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,15(2H, d ,J = 7,8 Hz), 7,26 (1H, br), 7,69 (1H, s); eHPLC/MS: MHi = 608,3
Exemplo 62
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3 , 4 -diidroquinolin-1(2H)-ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4 ' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 187</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,09-1,15 (9H, m), 1,66-1,75 (1H,m) , 1,89-1,97 (5H, m) , 2,47 (2H, m) , 3,19-3,75 (14H, m) ,4,63 (1H, m) , 6,47 (1H, bs), 6,81-6,89 (3H, m) , 6,96-7,01(3H, m), 7,09 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,65 (1H, s), 8,21 (1H,S); e HPLC/MS: MH: = 6 3 0,3
Exemplo 63
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-fenilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 188</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,98-1,03 (3H, t, J = 7,2 Hz),1,21 (6H, t, J = 6,9 Hz), 1,89-1,97 (4H, m), 2,52 (3H, s),2,64-2,69 (2H, m), 3,12-3,74 (13H, m), 3,75 (0,5H, s), 4,32(0, 5H, s), 4,78-4,84 (1H, q ,J = 5,4 Hz), 6,22 (1H, s),6,97 (2H, d, J = 8,7 Hz), 7,07-7,11 (4H, m), 7,14-7,27 (3H,superposto com CDCl3), 7,61 (1H, s) , 8,14 (1H, s); eHPLC/MS: MH1 = 632,3.
Exemplo 64
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 188</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,03-1,08 (3H, t, J = 7,2 Hz),1,19 (6H, t,J= 6,9 Hz), 1,87-2,01 (4H, m), 2,80-4,0 (12H,m), 4,95 (1H, s), 6,67 (2H, bs), 6,90-7,50 (9 H, superpostocom CDCl3), 7,77 (1H, s), 8,09 (1H, s); e HPLC/MS: MH+ =590,2.
Exemplo 65
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(4tiomorfolinocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 189</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,04 (3H, t, J = 7,2 Hz), 1,22(6H, t, J = 6,9 Hz), 1,911,99 (4H, m) , 2,39 (4H, m) , 3,10-3,63 (16H, m), 4,88 (1H, q, J = 5,1 Hz), 6,51 (1H, d,J =7,2 Hz), 7,04 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,14 (2H, d ,J = 8,7Hz), 7,69 (1H, s), 8,14 (1H, s); e HPLC/MS: MH+ = 600,2.
Exemplo 66
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-Nmetoxiaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 189</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,92-0,97 (3H, m), 1,10 (6H, t, J= 6,9 Hz), 1,81-1,89 (4 H, m), 2,84 (4H, m), 3,03 (1H, m),3,22-3,31 (4H, m), 3,42-3,76 (9H, m), 4,78 (1H, m), 6,88-7,06 (3H, m), 7,20-7,34 (2H, m), 7,66 (1H, s), 8,20-8,50(1H, br); e HPLC/MS: MH' = 557,9.
Exemplo 67
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-Nfenilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,08-1,21 (9H, m), 1,88-1,96 (4H,m) , 3,05-3,27 (6Η, m) , 3,41-3,50 (9Η, m) , 4,51 (1Η, bs),6,23 (IH, bs) , 6,91 (1Η, bs), 7,03 (9Η, m) , 7,53 15 (1Η,S); e HPLC/MS: MH' = 6 04,0.
Exemplo 6 8
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-isoindolin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 190</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,06 (3H, t, J= 6,9 Hz), 1,19(6H, t, J = 6,9 Hz), 1,89- 1,98 (4H, m) , 3,08-3,58 (12H,m), 4,74 (4H, m), 4,92 (1H, q, J = 4,8 Hz), 6,63 (1H, d, J= 7,2 Hz), 6,89 (2H, d, J" = 8,4 Hz), 7,04-7,19 (6H, m) ,7,7 6 (1H, s), 8,11 (1H, bs); e HPLC/MS: MH+ = 616,2.
Exemplo 69
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{Ν-(N-4-clorofenil-N-metilaminocarbonil) -N-etilamino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina
1H RMN (3 00 MHz, CDCl3) δ 1,09 (3H, t, J = 6,9 Hz), 1,22(6H, t, J" = 6,9 Hz), 1,88- 1,96 (4H, m) , 3,14-3,29 (6H, m) ,3.40-3,53 (9H, m) , 4,56 (1H, bs), 6,29 (1H, d, J = 6 30Hz), 6,88-7,05 (8H, m) , 7,55 (1H, s), 8,11 (1H, bs); eHPLC/MS: MH1 = 63 8,2.
Exemplo 70
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{Ν-(N-3-clorofenil-N-metilaminocarbonil) -N-etilamino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,09 (3H, t, J = 7, 2 Hz), 1,19(6H, t, J- = 6,9 Hz), 1,88-1,96 (4H, m) , 3,14-3,35 (6 H, m) ,3.41-3,51 (9H, m) , 4,50 (1H, bs) , 6,16 (1H, m) , 6,91-7,01(8 H, m) , 7,54 (1H, s) , 8,19 (1H, bs); e HPLC/MS: MH+ =638,2.Exemplo 71
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(ciclohexilaminocarbonil) -N-etilamino}pirimidin-4-il] -L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 191</formula>
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,01-1,05 (5H, m), 1,19-1,35(1OH, m), 1,56-1,92 (8H, m), 2,85-3,75 (12H, m), 4,70 (1H,bs), 5,04 (1H, m) , 5,30 (1H, s), 6,90-7,40 (1H, br), 156,99 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,14 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,76(1H, s), 8,1 (1H, br); e HPLC/MS : MHt' = 596,3.
Exemplo 72
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(pirrolidin-1ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 191</formula>
HPLC/MS: MH1 = 568.
Exemplo 73
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-metil-N-(dimetilaminocarbonil)amino}-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação do composto 1
O composto 1 foi preparado como mostrado no Exemplo 1.
Etapa 2 - Preparação do composto 27<formula>formula see original document page 192</formula>
Dimetilcloreto de carbamila (256 ^iL, 2,78 mmol) foiadicionado a uma solução de piridina (6 ml) da 5-aminopirimidina 1 da Etapa 1 (1,26 mg, 2,53 mmol) a 0°C. Areação foi deixada para aquecer até a temperatura ambientee agitada por 16 horas. A mistura de reação foi tratada comEtOAc e água (10 ml cada) e a fase orgânica separada lavadacom 0,2 N de ácido citrico (5 χ 25 ml). 0 extrato de ácidocitrico combinado foi tratado com NaHCO3 sólido paraajustar o pH a aproximadamente 7,5. 0 produto foi extraídocom EtOAc (4 χ 15 ml) e o extrato orgânico combinado foilavado com salmoura (1 χ 10 ml), seco sobre MgSO4,filtrado, e concentrado para gerar o produto 27 como umaespuma (1,2 g, 84%) que foi usado sem purificaçãoadicional.
1H RMN (CDCl3) δ 7,25 (1H, s), 7,19 (2H, d), 7,05 (2H, d),5,55 (1H, s), 5,50 (1H, d), 4,85 (1H, m), 3,70 - 3,40 (8 H,m), 3,30 - 3,05 (2H, m), 2,99 (3H, s), 2,95 (4H, m), 1,39(9H, S), 1,15 (6H, t);
HPLC/MS: MH+ = 569.
Etapa 3 - Preparação do composto 28
<formula>formula see original document page 192</formula>KOtBu em THF (1M, 0,573 mmol, 573 μΐ,) foi adicionado auma solução de THF (2 ml) da uréia 27 da Etapa 2 (297 mg,0,521 mmol) e iodometano (1,04 mmol, 65 μΐ,) a 0°C. A reaçãofoi agitada por 1 hora a O0C e então extinta com 0,2 N deácido cítrico. O pH da reação ajustado a aproximadamente7,5 com NaHCO3 sólido e o produto extraído com EtOAc (3 χ10 ml) . Os extratos orgânicos combinado foram lavados comsalmoura (1 χ 20 ml), secos sobre MgSO4, filtrados econcentrados. 0 produto bruto foi purificado em ujma placade TLC preparatória eluindo duas vezes com 2:1EtOAc/hexanos para gerar produto puro 28 (134 mg, 44%) .TLC: Rí: = 0,25 (100% EtOAc, sílica gel).
1H RMN (CDCl3) δ 7,61 (1H, s), 7,18 (2H, d), 7,05 (2H, d),5,25 (1H, br d), 4,85 (1H, m) , 3,55 - 3,40 (8H, m) , 3,25(1H, dd) , 3,15 (1H, dd) , 2,81 (3H, s), 2,61 (6H, s), 1,95(4H, m), 1,41 (9H, s), 1,20 (6H, t); eHPLC/MS: MH' = 5 84.
Etapa 4 - Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-metil-N-(dimetilaminocarboni1)amino}-pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 193</formula>
O éster t-butílico 28 da Etapa 2 (127 mg, 0,217 mmol)foi dissolvido em ácido fórmico (3 ml) e a soluçãohomogênea foi aquecida a 40°C por 16 horas. A mistura dereação foi concentrada para gerar N- [2-dietilamino-5-{N-metiI-N-(dimetilamino-carbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como um sólidocastanho (107 mg, 93%). TLC: Rf= = 0,55 (7:3 MeOH/H20 + TFA0,1%, RPC-18 silica).
5 1H RMN (CD3OD) δ 7,40 (1H, s), 7,30 (2H, d), 7,05 (2H, d),3,60 (6H, m), 3,45 (3H, m), 3,30 - 3,20 (1H, m), 3,80 (3H,s), 3,70 (6H, s), 1,95 (4H, m), 1,21 (6H, t);13C RMN (CD3OD) δ 177,0, 165,4, 160,5, 157,0, 156,1, 152,5,146,4, 137,5, 132,1, 123,8, 123,7, 118,9, 58,2, 48,3, 44,7,39,7, 39,0, 38,3, 27,5, 26,7, 14,1; e
HPLC/MS: MH+ = 52 8.
Exemplo 74
N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(dimetilaminocarboni1)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1- Preparação do composto 29
<formula>formula see original document page 194</formula>
KOtBu em THF (1M, 0,3 90 mmol, 390 μυ foi adicionado auma solução de THF (1 ml) da uréia 27 (preparada comodescrito no Exemplo 64) (202 mg, 0,354 mmol) e iodoetano(0,709 mmol, 57 uL) a O0C. A reação foi agitada por 1 horaa 0°C e então extinta com 0,2 N de ácido cítrico. 0 pH dafase aquosa foi ajustado a aproximadamente 7,5 com NaHCO3sólido e o produto extraído com EtOAc (3 χ 10 ml). Osextratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (1χ 10 ml), secos sobre MgSO4, filtrados, e concentrados. 0produto bruto foi purificado em uma placa de TLCpreparatória eluindo duas vezes com 3:1 EtOAc/hexanos paragerar o produto puro 29 (72 mg, 34%). TLC: Rf = 0,13 (3:1EtOAc/hexanos, sílica gel).
1H RMN (CDCl3) δ 7,58 (1H, s), 7,15 (2H, d), 7,05 (2H, d),5,25 (1H, d), 4,85, (1H, m) , 3,70 - 3,40 (8H, m) , 3,30 -3,10 (4H, m) , 2,60 (6H, s), 1,90 (4H, m) , 1,41 (9H, s),1,20 (6H, t) , 1,05 (3H, t) ; eHPLC/MS: MH" = 5 98.
Etapa 2 - Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(dimetilaminocarbonil)-amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 195</formula>
O éster t-butílico 29 da Etapa 1 (71 mg, 0,119 mmol)foi dissolvido em ácido fórmico (2 ml) e a soluçãohomogênea resultante foi aquecida a 40°C por 16 horas. Amistura de reação foi concentrada para gerar N- [2-dietilamino-5 -{N-etil-N(dimetilaminocarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como um sólido castanho (63 mg,99%). TLC: Rf = 0,51 (7:3 MeOH/HzO + TFA 0,1%, RPC-18 silica).
1H RMN (CD3OD) δ 7,39 (1H, s), 7,25 (2H, d), 7,01 (2H, d),3,70 - 3,50 (6H, m) 3,45 - 3,40 (3H, m) , 2,30 - 3,05 (3H,m), 2,65 (6Η, s), 2,00 (4H, m), 1,25 (6H, t), 1,05 (3H, t);13C RMN (CD3OD) 6 176,9, 164,8, 160,7, 157,1, 156,1, 152,6,147,7, 137,3, 132,1, 123,7, 116,1, 58,1, 49,4, 48,3, 46,1,44,6, 39,2, 38,2, 27,5, 26,7, 14,1, 13,9;
HPLC/MS: MH± = 542.
Exemplo 75
Preparação de N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(pirrolidin-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação do composto 4
O composto 4 foi preparado como mostrado no Exemplo 5.
Etapa 2 - Preparação do composto 30
<formula>formula see original document page 196</formula>
N-isopropilaminopirimidina 4 da Etapa 1 (0,500 g, 0,93mmol) foi dissolvido em 4,0 ml CH2Cl2 e 2,0 ml NaHCO3 aquososaturado. A solução foi resfriada até 0°C e agitadavigorosamente por 5 minutos. Após 5 minutos, a agitação foiinterrompida e permitiu-se que as camadas imiscíveis seseparassem. Fosgeno (0,528 ml, 5,58 mmol) foi adicionado àcamada do fundo por meio de uma seringa. A mistura dereação foi agitada sob N2 por três horas. Com o término, amistura de reação foi concentrada in vácuo em temperaturaambiente, re-dissolvida em EtOAc, lavada com água, eextraída de volta com EtOAc duas vezes. As camadasorgânicas combinadas foram secas com Na2SO4 e concentradasin vácuo. O óleo bruto foi levado adiante para a próximareação.
HPLC/MS: MH1' = 6 03,2.
Etapa 3 - Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(pirrolidin-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 197</formula>
Cloreto de carbamila bruto 30 da Etapa 2 (1 eq.) eamina (5 eq.) foram dissolvidos em THF (0,2 M) e ela foiagitada de um dia para o outro sob N2. A mistura de reaçãofoi concentrada in vácuo e re-dissolvida em EtOAc. A camadaorgânica foi lavada com água, seca com Na2SO4, econcentrada in vácuo. 0 resíduo foi purificado em uma placaprep. eluído com 3 % MeOH em CH2Cl2. Ácido fórmico foiadicionado a éster t-butíli co e agitado a 40°C de um diapara o outro. 0 ácido fórmico foi removido para gerarproduto ácido puro, N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(pirrolidin-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina.
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,01 (6H, t, J = 7 Hz), 1,22 (6H,t, J = 7 Hz), 1,36 (4H, m), 1,49 (2H, m), 1,95 (4H, m),3,10-3,66 (16H, m), 4,86-4,92 (1H, m), 6,75 (1H, d, J = 7,2Hz), 7,25 (2H, d, J= 8,4 Hz), 7,14 (2H, d, J = 8,4 Hz),7,64 (1H, s), 8,26 (1H, bs); eHPLC/MS : MH'1 = 582,3.Exemplo 7 6
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(dimetilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 198</formula>
N- [2-dietilamino-5 -{N-isopropil-N(dimetilaminocarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina foi preparada emum método similar que o de N- [2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina como descrito no
Exemplo 6 6.
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,00 (3H, d, J = 6, 9 Hz), 1,06(3H, d, J = 6,9 Hz), 1,23 (6H, m) , 1,96 (4H, m) , 2,70 (6H,s) , 3,15 (1H, m) , 3,32 (1H, m) , 3,40-3,75 (8H, m) , 3,97(1H, m) , 4,18 (1H, br), 4,86 (1H, m) , 6,74 (1H, d, J = 7,2Hz), 7,04 (2H, d, J= 8,1 Hz), 7,14 (2H, d, J = 8,1 Hz),7,69 (1H, s); eHPLC/MS: MHi = 556.
Exemplo 7 7
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-prop-2-inil-N-(pirrolidin-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1 - Preparação do composto 31N-Propargilaminopirimidina 18 (preparada como descrito
no Exemplo 42) (100 mg, 0,19 mmol) foi dissolvida em CH2Cl2(4 ml) . A essa solução foi adicionado Na2CO3 sat. (aquoso,4 ml), e agitada vigorosamente. A mistura foi resfriada atéa 0°C em um banho de gelo, e fosgeno (400 nL, 2,0 M emtolueno) foi injetado na camada de CH2Cl2. A mistura foiagitada em temperatura ambiente por uma hora. A mistura foitransferida para um funil de separação, e a camada orgânicafoi seca sobre Na2SO/), filtrada, concentrada in vácuo. 0resíduo foi re-dissolvido em THF. Pirrolidina (46 ^iL, 0,558mmol) foi adicionada a essa solução e a mistura foi agitadana temperatura ambiente de um dia para o outro. THF foiremovido in vácuo. 0 resíduo foi adicionado a CH2Cl2 (50ml) , e lavado com IN HCl (25 ml χ 1) e NaHCO3 (25 ml χ 1) .A camada orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada,concentrada in vácuo. 0 produto 31 foi isolado por umacromatografia em coluna de sílica gel usando 2:8 hexanos-EtOAc e 10 % MeOH em EtOAc como eluente.
Etapa 2 - Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-prop-2-inil-N-(pirrolidin-lilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 199</formula>A uréia 31 da Etapa 1 foi adicionado excesso DE ácidofórmico e a solução foi agitada A 40°C de um dia para ooutro. Acido fórmico foi removido in vácuo e o produto foiisolado por HPLC preparatória para obter N-[2-dietilamino-5 -{N-prop-2-inil-N(pirrolidin-l-iIcarboni1)amino}pirimidin-4-il] -L-4'-{ (pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina comoum pó branco.
1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,19 (6H, t, J = 6, 0 Hz), 1,78(4H, bs), 1,99 (4H, m), 2,70 (1H, s), 3,01-3,70 (16H, m),5,07 (1H, m), 7,06 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,30 (2H, d, J =8,1 Hz), 7,5 6 (1H, s); e
HPLC/MS: MH+ = 578,2
Exemplo 78
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-(piperidin-1-ilcarbonil)-N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4' -(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 200</formula>
N-[2-dietilamino-5 -{N-(piperidin-1-ilcarbonil)-N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina foi preparada em umprocedimento similar ao de N- [2-dietilamino-5-{N-prop-2-inil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-(pirrolidin-1-il)carboniloxilfenilalanina como descrito noExemplo 77.
1H RMN (3 00 MHz, CDCl3) δ 1,2 2 (6H, m), 1,3 7 (4H, bs), 1,51(2H, bs), 1, 96(4 H, bs), 2,34 (1H, s), 3,00-4,00 (16H, m),4, 93 (1Η, m) , 6,86(1Η, d, J= 7,2 Hz), 7,03 (2Η, m) , 7,18(2Η, m) , 7,75 (1Η, m) ; eHPLC/MS: MH"1" = 592,2.
Exemplo 7 9
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-fenilmetil-N-(piperidin-1-ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina e N-[2-dietilamino-5 -{N-fenilmetil-N-(pirrolidin-1-ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
Etapa 1- Preparação do composto 32
<formula>formula see original document page 201</formula>
N-Benzil pirimidina 16 (preparada como descrito noExemplo 40) (0,22 g, 0,36 mmol) foi dissolvida em 1,5 mlCH2Cl2 e 0,7 5 ml NaHCO3 aquoso saturado. A solução foiresfriada até zero grau e agitada vigorosamente por 5minutos. Após 5 minutos a agitação foi interrompida epermitiu-se que as camadas imiscíveis se separassem.Fosgeno (0,23 ml, 2,20 mmol) foi adicionado à camada dofundo por meio de uma seringa. A mistura de reação foiagitada sob N2 por três horas. Com o término, a mistura dereação foi concentrada in vácuo com perda de calor, re-dissolvida em EtOAc, lavada com água, e extraída de voltaduas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foramsecas com Na2SO4 e concentradas in vácuo. 0 óleo bruto 32foi levado adiante para a próxima reação.HPLC/MS: MH1 = 651,2.
Etapa 2 - Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-fenilmetil-N-(piperidin-lilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 202</formula>
Cloreto de carbamila bruto 32 da Etapa 1 (1 eq.) epiperidina (5 eq. ) foram dissolvidos em THF (0,2 M) e elafoi agitada de um dia para o outro sob N2. A mistura dereação foi concentrada in vácuo e re-dissolvida em EtOAc. Acamada orgânica foi lavada com água, seca com Na2SO1, econcentrada in vácuo. 0 óleo foi purificado em uma placaprep. eluida com 3% MeOH em CH2Cl2. Ácido fórmico foiadicionado a t-butil ester e agitado a 40°C de um dia parao outro. 0 ácido fórmico foi removido para gerar produtoácido puro N- [2-dietilamino-5-{N-fenilmetil-N-(piperidin-1-ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina.
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 0,83-0,88 (6H, m) , 0,96-1,17 (6H,m) , 1,89-1,98 (4H, m) , 2,89-2,97 (1H, m) , 3,09 (4H, m) ,3,26-3,29 (1H, m), 3,43-3,52 (8H, m), 4,26 (1H, d, J= 14,4Hz), 4,52 (1H, d, J = 14,7 Hz), 4,72 (1H, m) , 6,09 (1 H,s) , 6,98-7,06 (4 H, m) , 7,19-7,28 (5H, m) , 7,44 (1H, s),7,61 (1H, bs); eHPLC/MS: MH+ = 644,3.
Exemplo 80
Preparação de N- [2-dietilamino-5-{N-fenilmetil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4' -{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina
<formula>formula see original document page 203</formula>
N- [2-dietilamino-5-{N-fenilmetil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina foi preparada como no Exemplo79 a partir de pirrolidina.
1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,18 (6H, t, J = 6,9 Hz), 1,71(4H, m), 1,91-1,99 (4H, 25 m), 2,98-3,13 (5H, m), 3,25-3,65(9H, m), 4,35 (1H, m), 4,63 (1H, d, J = 14,7 Hz), 4,84 (1H,bs), 6,67 (1H, d, J = 7,0 Hz), 7,03 (2H, d, J = 8,4 Hz),7,11 (2H, d,J = 8,4 Hz), 7,19-7,29 (6H, superposto comCDCl3), 8,13 (1H, bs); e
HPLC/MS: MHi = 630,3.
Exemplos 81-98
Seguindo os procedimentos apresentados acima tanto nadescrição detalhada da invenção quanto nos Exemplos, osseguintes exemplos adicionais foram preparados:
N- [2-dietilamino-5 - (1,3-dioxoisoindolin-2 -il)pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)-carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -(1-oxoisoindolin-2-il)pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)-carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -(5,6-dicloro-l,3-dioxoisoindolin-2 -il)pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N-(N-etiloxi-carbonilmetil-N-metilaminocarbonil)-N-formilamino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5 -{N-isopropil-N-metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)-carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N-isopropil-N-(fenilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{ (dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina ;
N- [2-dietilamino-5 -{N-isopropil-N-(metoxicarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N-isopropil-N-(feniloxicarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N-fenil-N-(trifluormetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N-fenil-N-(metilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-(3 - flúorfeni1)-N-(metilcarbonil)amino} pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-feniIalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-(4 - flúorfeni1)-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5 -{N- (pirid-4-il)-N-(metilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-vinil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;
N-[2-dietilamino-5 -{N-(pirid-3-il)-N-(metiIcarboni1)amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piperidin-1-iltiocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;
éster t-butílico de N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(pirid-4-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina; e
N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(pirid-4-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina.
Exemplo A
Ensaio de adesão de α4βΐ integrina: adesão celular deJurkat™ ã Fibronectina de Plasma HumanoProcedimento
Placas de 96 poços (placas Costar 3590 EIA) foramrevestidas com fibronectina humana (Gibco/BRL, cat. #33016-023) em uma concentração de 10 pg/ml de um dia para o outroa 4°C. As placas foram então bloqueadas com uma solução dealbumina sérica bovina (BSA; 0,3%) em soro fisiológico,células Jurkatlw (mantidas em crescimento em fase log)foram marcadas com Calcein AM de acordo com as instruçõesdo fabricante, e suspensas em uma concentração de 2 χ IO6células/ml em Hepes/soro fisiológico/BSA. As células foramentão expostas aos compostos de teste e de controle por 30minutos em temperatura ambiente, antes de seremtransferidas para poços individuais da placa revestida comfibronectina. Permitiu-se a ocorrência da adesão por 35minutos a 37°C. Os poços foram então lavados por aspiraçãoe pipetagem suaves com soro fisiológico fresco. Afluorescência associada às células aderentes restantes foiquantificada com a utilização de uma leitora defluorescência de placas a EX 485/EM 530.
Foram preparadas culturas de células inicialmentedividindo-se as células JurkatTM em fase estacionaria a1:10 no primeiro dia, e 1:2 no segundo dia, para realizar oensaio no 3° dia. As células divididas a 1:10 no primeirodia foram divididas a 1:4 no 3o dia para um ensaio no 4° dia.
As placas do ensaio foram preparadas fazendo-seinicialmente uma solução de trabalho de Gibco/BRL HumanFibronectina (cat. # 33016-023) em PBS++, a 10 ng/ml.
Uma placa Costar 3590 EIA foi então revestida com 50litro/poço por 2 horas em temperatura ambiente (emboratambém possa ser deixada de um dia para o outro a 4 °C) .Finalmente, a placa foi aspirada e bloqueada com tampão deHepes/soro fisiológico, 100 μΐ/poço, por 1 hora emtemperatura ambiente seguida por lavagem três vezes com 150μl de PBS++.
As diluições dos compostos foram feitas preparando-sediluições seriais 1:3 dos compostos da seguinte forma: paracada placa (4 compostos/placa), 600 μΐ foram adicionados a4 Titertubes Bio-Rad em uma prateleira de Titertubes. Foiadicionada uma quantidade suficiente de composto a cadatubo apropriado para gerar uma concentração de 2X com o usode métodos bem conhecidos na técnica. Utilizando-seFlexiplates Falcon, 100 μΐ de tampão de Hepes/sorofisiológico ou soro humano foram adicionados às Fileiras Ba G. Foi usado um pipetador de multicanais ajustado em 180μL com quatro pontas espaçadas igualmente no pipetador.Cada conjunto de quatro tubos foi misturado 5 vezes, e 180μL de composto 2X foram transferidos para a primeira colunade cada diluição do composto na Fileira B, deixando aFileira A vazia. Foram adicionados 180 μΐ aos outros poçosna Fileira A. Foram realizadas diluições seriais na placatransferindo-se 50 μΐ à diluição seguinte e misturando-se 5vezes, mudando as pontas a cada vez após a mistura. Asdiluições foram interrompidas na Fileira F. A Fileira G nãotinha composto presente.
Uma solução de 20 pg/ml em tampão de Hepes/sorofisiológico ou soro humano, de anticorpo 21/6 foi ocontrole positivo e foi colocado de lado em um reagentepara ser adicionada à placa de suspensão de células.
A coloração das células foi obtida colhendo-seinicialmente as células Jurkatiw em fase Iog porcentrifugação em tubos de 50 ml (1.100 rpm por 5 minutos).
As células foram re-suspensas em 50 ml de PBS++,centrifugadas e re-suspensas em 20 ml de PBS++. As célulasforam coradas pela adição de 20 μL de Calcein AM por 30minutos em temperatura ambiente. 0 volume foi trazido até50 ml com tampão de Hepes/soro fisiológico, e as célulasforam contadas, centrifugadas e re-suspensas até 2 χ IO6células/ml em tampão de Hepes/soro fisiológico ou sorohumano.
Os compostos foram incubados com o uso do seguinteprocedimento: em uma nova flexiplate, 65 μL de célulascoradas foram adicionados às Fileiras BaH. A seguir, 65μL de compostos 2X foram adicionados às fileirasapropriadas de acordo com a disposição das placas, emisturados 3X. Foram adicionados 65 μΐ de anticorpo 2X-21/6à Fileira H, e misturados 3X. Finalmente, a placa foiincubada em temperatura ambiente por 3 0 minutos.
A adesão de fibronectina foi medida com o uso de umaleitora de placas fluorescentes a EX 485/EM 530 após oprocedimento de desenvolvimento seguinte. Após incubação,as células foram misturadas 3X, e 100 μL foram transferidospara as placas revestidas com fibronectina, e incubadas a37 °C por cerca de 35 minutos. Cada placa foi lavada,fileira a fileira, pipetando-se suavemente 100 μL de PBS + +em temperatura ambiente pelas laterais dos poços, evirando-se a placa 90 graus para aspiração. Esseprocedimento foi repetido por um total de 3 lavagens. Cadapoço foi preenchido com 100 μL após a lavagem por pipetagempela lateral do poço.
Foi calculado um valor de IC50 para cada composto,tanto na presença do soro humano quanto na sua ausência. AIC50 é a concentração na qual o crescimento ou a atividadeé inibido em 50%. Verificou-se que todos os compostos aquirevelados têm uma ICbc de menos de 10 μΜ, quando testadosde acordo com o ensaio de fibronectina.
Exemplo B
Adesão celular ã fibronectina do plasma humano. Ensaio desaturação in vifcro para determinação da ligação decompostos candidatos à α4β1
A seguir será descrito um ensaio in vitro paradeterminar os níveis plasmáticos necessários para que umcomposto seja ativo no modelo de Encefalomielite AutoimuneExperimental ("EAE"), descrito no exemplo seguinte, ou emoutros modelos ín vivo. Células JurkatTM em crescimento Iogsão lavadas e re-suspensas em plasma animal normal contendo20 pg/ml do anticorpo 15/7 (Yednock, e cols., J. Biol.Chem., (1995) 270(48): 2.8740).
As células Jurkat'M são diluídas duas vezes emamostras de plasma normal contendo quantidades conhecidasdo composto candidato em várias concentrações que variam de66 μΜ a 0,01 μΜ, com o uso de uma diluição serialpadronizada de 12 pontos para uma curva-padrão, ou emamostras de plasma obtido do sangue periférico de animaistratados com o composto candidato.
As células são então incubadas por 30 minutos emtemperatura ambiente, lavadas duas vezes com sorofisiológico tamponado com fosfato ("PBS") contendo sorofetal bovino 2% e 1 mM de cada um de cloreto de cálcio ecloreto de magnésio (meio de ensaio) para a remoção deanticorpo 15/7 não ligado.
As células são então expostas a Fc de F(ab')2 anti-camundongo de IgG de cabra conjugado à ficoeritrina(Immunotech, Westbrook, ME) , que foi adsorvido paraqualquer reatividade cruzada inespecífica por co-incubaçãocom soro 5% da espécie animal que estiver sendo estudada, a1:200, e incubadas no escuro a 40C por 30 minutos.
As células são lavadas duas vezes com meio de ensaio,e re-suspensas no mesmo. Elas são então analisadas com umaanálise por classificador-padrão de células ativadas porfluorescência ("FACS"), como descrito em Yednock e cols.,J. Biol. Chem., 1995, 270:28740.
Os dados são então colocados em um gráfico defluorescência versus dose, por exemplo, na forma de umadose-resposta normal. Os níveis de dose que resultam noplatô superior da curva representam os níveis necessáriospara se obter eficácia em um modelo in vivo.
Esse ensaio também pode ser usado para determinar osníveis plasmáticos necessários para saturar os sítios deligação de outras integrinas como, por exemplo, a integrinaOi9Pi, que é a integrina mais intimamente relacionada à α4βχ(Palmer e cols. , 1993, J. Cell Bio., 123: 1.289). Essaligação é preditiva da utilidade in vivo para as condiçõesinflamatórias mediadas pela integrina α9βχ, incluindo, comoexemplo, a hiper-reatividade das vias aéreas e a oclusãoque ocorrem com asma crônica, proliferação de células demúsculo liso na aterosclerose, oclusão vascular apósangioplastia, fibrose e cicatrização glomerular emconseqüência de doença renal, estenose aórtica, hipertrofiade membranas sinoviais na artrite reumatóide e inflamação ecicatrização que ocorrem com a progressão da coliteulcerativa e da doença de Crohn.
Conseqüentemente, o ensaio descrito acima pode serrealizado com uma linhagem de células de carcinoma de cólonhumano, SW 480 (ATTC # CCL228) transfectadas com cDNA quecodifica integrina (X9 (Yokosaki e cols., 1994, J. Biol.Chem., 269: 26.691), no lugar das células Jurkat, paramedir a ligação da integrina α9βπ . Como controle, podem serusadas células SW 480 que expressam outras subunidades α e
Conseqüentemente, outro aspecto dessa invenção édirigido a um método para o tratamento de uma doença em umpaciente mamífero, cuja doença é mediada por α9βι, e cujométodo compreende a administração ao referido paciente deuma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto dessainvenção. Esses compostos são administrados preferivelmenteem uma composição farmacêutica aqui descrita acima. Adosagem diária eficaz dependerá da idade, do peso, dacondição do paciente, e esses fatores podem ser facilmenteverificados pelo médico assistente. No entanto, em umamodalidade preferida, os compostos são administrados em umadose de cerca de 20 a 500 pg/kg por dia.
Exemplo C
Dosagem do cassete e análise sérica para determinaçãode biodisponibilidade
A biodisponibilidade oral é verificada por dosagem deratos com um cassete, ou seja, uma mistura de 6 compostospor solução de dosagem. 0 cassete inclui 5 artigos de testee um composto-padrão, para uma dose total de 10 mg/kg. Cadacomposto/artigo de teste é convertido no sal sódico com 1 Nde NaOH eqüimolar, e dissolvido em água a 2 mg/ml. 0cassete é preparado por mistura de volumes iguais de cadauma das seis soluções. A solução de dosagem do cassete ébem misturada, e depois o pH era ajustado em 7,5-9. Asolução de dosagem é preparada no dia anterior ao estudo, eé agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente.
Machos de ratos Sprague Dawley (SD) de "Charles RiverLaboratories", com 6-8 semanas de idade, foram usados nesseestudo. Os ratos foram colocados em quarentena por pelomenos um dia, e tinham acesso continuo a alimentos e água.Na noite anterior ã administração do cassete, os ratosfaziam um jejum de aproximadamente 16 horas.
Quatro ratos SD foram distribuídos em cada cassete.
Uma dose única da solução de dosagem foi administradaoralmente a cada rato. 0 volume de dosagem (5 ml/kg) e omomento foram registrados, e os ratos foram alimentados 2horas após a dosagem.
Foram coletadas amostras de sangue por meio de punçãocardíaca nos seguintes momentos: 4 horas, 8 horas e 12horas. Imediatamente antes da coleta de sangue, os ratoseram anestesiados com gás CO2 em até 10-20 segundos. Depoisda coleta das amostras de 12 horas, os ratos foramsubmetidos à eutanásia por meio de asfixia com CO2, seguidapor deslocamento cervical.
As amostras de sangue foram mantidas em tubosmicrotainer heparinizados sob temperatura abaixo datemperatura ambiente (4°C) antes de serem processadas. Elasforam centrifugadas (10.000 rpm por 5 minutos), e asamostras de plasma foram removidas e estocadas em umcongelador a -20°C até serem analisadas quanto aos níveisde fármaco. Os níveis de fármaco no plasma foram analisadoscom a utilização do protocolo a seguir para precipitaçãodireta do plasma.
As amostras de plasma in vivo foram preparadas em umaplaca de 1,5 ml de 96 poços, por adição, em ordem, de 100μL do plasma de teste, 150 μΐ de metanol, seguido porturbilhonamento por 10-20 segundos. Cento e cinqüenta μL de0,05 μ5/μ1 de um Padrão Interno em acetonitrila foramacrescentados e turbilhonados por 30 segundos.
As amostras de plasma in vivo foram preparadas em umaplaca de 1,5 ml de 96 poços, por adição, em ordem, de 100μL do plasma de teste, 150 μL de metanol, seguido porturbilhonamento por 10-20 segundos. Cento e cinqüenta μL de0,05 ng/μL de um Padrão Interno em acetonitrila foramacrescentados e turbilhonados por 30 segundos. As amostrasda curva-padrão foram preparadas em uma placa de 1,5 ml de96 poços, por adição, em ordem, de 100 μΐ de plasma decamundongo de controle, seguidos por 150 μΐ de metanol eturbilhonamento por 10-20 segundos. Cento e cinqüenta 150μl de 0,05 ng/μΐ de um Padrão Interno em acetonitrila foramadicionados e turbilhonados por 30 segundos. As amostrasreceberam 0-200 ng (10 concentrações) do composto deinteresse em metanol 50% para obter uma faixa da curva-padrão de 0,5 ng/ml a 2.000 ng/ml. Novamente, a amostra éturbilhonada por 3 0 segundos.
As amostras são centrifugadas por 20-30 minutos a3.000 rpm em uma microcentrífuga Eppendorf, antes de 80-90%de sobrenadante serem transferidos em uma placa limpa de 96poços. O solvente orgânico é então evaporado até que asamostras estejam secas (sob N2 a 40°C/30-60 minutos(ZymarkTurbovap)).
O resíduo é então dissolvido em fase móvel de 200-600litros (CH3OH 50%/TFA 0,1%). É então executada LC/MS/MS como uso de um espectrômetro de massa triplo quadripolar PE-Sciex API-3000 (SN0749707), Perkin-Elmer, autosampler Série200 e uma bomba Shimadzu 10A. A aquisição é feita com umAnalisador PE-Sciex (v 1.1) e a análise e quantificação dosdados foram feitas com o uso de um Analisador PE-Sciex (v1.1) . Um volume de amostra de 5-50 μΐ foi injetado em umacoluna de fase reversa Thermo Hypersil DASH-18 (Keystone2,0 χ 20 mm, 5 μπι, PN: 8823025-701) usando uma fase móvelde CH3OH 25%, TFA 0,1%- CH3OH 100%, TFA 0,1%. 0 tempo deexecução é de cerca de 8 minutos, em uma taxa de fluxo decerca de 300 μΙ/minutos.A Área Sob a Curva (AUC) é calculada com o uso de umaregra trapezoidal linear de t = 0 para o último tempo deamostragem tx (veja "Handbook of Basic Pharmacokinetics" ,Wolfgang A. Ritschel e Gregory L. Kearns, 5a ed, 1999).
<formula>formula see original document page 214</formula>
No caso do paradigma da dosagem do cassete, amostrasem 4, 8 e 12 horas após a dosagem extravascular, a AUC écalculada de t = O a t = 12 horas.
Exemplo D
Modelos de asmaCondições inf lamatórias mediadas pela integrina α4βα.incluem, por exemplo, influxo de eosinófilos, hiper-reatividade das vias aéreas e oclusão que ocorre com asmacrônica. A seguir serão descritos modelos animais de asmaque são usados para estudas os efeitos in vivo doscompostos dessa invenção para uso no tratamento de asma.
Modelo de rato em asmaDe acordo com os procedimentos descritos por Chapman,e cols., Am. J. Resp. Crit. Care Med. 153-4, A219 (1996) eChapman, e cols., Am. J. Resp. Crit. Care Med. 155: 4, A881(1997), ambos aqui incorporados por referência em suatotalidade.
Ovalbumina (OA; 10 pg/ml) é misturada com hidróxido dealumínio (10 mg/ml) e injetada (intraperitoneal, i.p.) emratos Brown Norway no dia 0. As injeções de OA, junto comadjuvante, são repetidas no 7° e 14° dias. No 21° dia, osanimais sensibilizados são contidos em tubos plásticos eexpostos (60 minutos) a um aerossol de OA (10 mg/kg) em umsistema de exposição somente nasal. Os animais sãosacrificados 72 horas mais tarde, com pentobarbital (250mg/kg, i.p.). Os pulmões são lavados através de uma cânulatraqueal com o uso de 3 alíquotas (4 ml) de solução de Hank(HBSS x 10, 100 ml; 100 mM de EDTA, 100 ml; IM de HEPES,25 ml; trazida até 1 litro com H2O); as células recuperadassão reunidas em um pool e o volume total de fluidorecuperado ajustado até 12 ml por adição de solução deHank. As células totais são contadas (contador demicrocélula Sysmex F-500, TOA Medicai Electronics Otd.,Japan) e são feitos esfregaços por diluição de fluidorecuperado (até aproximadamente IO6 células/ml) e pipetagemde uma alíquota (100 μΐ) em uma centrífuga (Cytospin,Shandon, G.B.). Os esfregaços são secos ao ar, fixadosusando uma solução de verde rápido em metanol (2 mg/ml) por5 segundos, e corados com eosina G (5 segundos) e tiazina(5 segundos) (Diff-Quick, Browne Ltd. G.B.) a fim dediferenciar eosinófilos, neutrófilos, macrófagos elinfócitos. Um total de 500 células por esfregaço é contadopor microscopia óptica sob imersão em óleo (x 100). Oscompostos dessa invenção podem ser formulados em umasuspensão de carboximetilcelulose 0,5% e Tween 80 2%, eadministrados oralmente aos ratos que haviam sidosensibilizados ao alérgeno, ovalbumina. Os compostos queinibiram o acúmulo de leucócitos induzido por alérgeno nasvias aéreas de ratos Brown Norway sensibilizados ativamentesão considerados como ativos nesse modelo.
Modelo de asma em camundongos
Os compostos também foram avaliados em um modelo decamundongo de inflamação pulmonar aguda seguindo osprocedimentos descritos por Dung, e cols., Am. J. Respir.Cell. Mol. Biol., 13: 360-365, (1995) e Schneider, e cols.,(1999). Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 20: 448-457, (1999),que são individualmente aqui incorporados por referência emsua totalidade. Seis fêmeas de camundongos pretos (8-12semanas de idade) são sensibilizados no Io dia por umainjeção intraperitoneal (i.p.) de 0,2 ml de uma misturaova/alum contendo 20 de ova (Grau 4, Sigma) e 2 mg deAlum injetável (Pierce). Uma injeção de reforço éadministrada no 14" dia. Os camundongos são atacados nos28° e 29° dias com ova 1% em aerossol (em soro fisiológico0,9%) por 20 minutos. Os camundongos são submetidos àeutanásia, e são coletadas amostras de lavado bronco-alveolar (3 ml) no 30° dia, 48 horas após o primeiroataque. Os eosinófilos são quantificados por um método decoloração FACs/FITC. Os compostos dessa invenção sãoformulados em uma suspensão de carboximetilcelulose 0,5% eTween 80 2%, e administrados oralmente aos camundongos quehaviam sido sensibilizados ao alérgeno, ovalbumina. Oscompostos que inibiam o acúmulo de leucócitos induzido poralérgeno nas vias aéreas de camundongos C57BL/6sensibilizados ativamente são considerados como ativosnesse modelo.
Modelo de asma em carneiros
Esse modelo emprega os procedimentos descritos porAbraham, e cols., J. Clin. Invest., 93: 776-787 (1994) eAbraham, e cols., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 156: 696-703 (1997), ambos aqui incorporados por referência em suatotalidade. Os compostos dessa invenção foram avaliados poradministração intravenosa (solução salina aquosa), oral(Tween 80 2%, carboximetilcelulose 0,5%) e por aerossol aoscarneiros que são hipersensíveis ao antígeno de Ascarissuum antigen. Os compostos que diminuem a respostabrônquica inicial induzida por antigeno e/ou bloqueiam aresposta de fase tardia das vias aéreas, por exemplo,possuem um efeito protetor contra respostas tardiasinduzidas por antigeno e hiper-sensibilidade das viasaéreas ("AHR") são considerados como ativos nesse modelo.
Os carneiros alérgicos que comprovadamente desenvolvemrespostas brônquicas tanto iniciais quanto tardias aoantígeno inalado de Ascaris suum são usados para estudar osefeitos sobre as vias aéreas dos compostos candidatos. Apósanestesia tópica dos condutos nasais com lidocaina 2%, umcateter em balão é passado através de uma narina até oesôfago inferior. Os animais são então incubados com umtubo endotraqueal com um balão através da outra narina,tendo um broncoscópio flexível de fibra óptica como guia.
A pressão pleural é estimada de acordo com Abraham(1994). São gerados aerossóis (veja a formulação abaixo)com o uso de um nebulizador médico descartável que forneciaum aerossol com um diâmetro aerodinâmico de massa média de3.2 um, como determinado com um projétil em cascataAndersen. 0 nebulizador está conectado a um sistema dedosímetro que consiste em uma válvula solenóide of e umafonte de ar comprimido (137,89 kPa). A saída do nebulizadoré dirigida a uma divisão em "T" de plástico, umaextremidade da qual é conectada à entrada inspiratória deum respirador de pistão. A válvula solenóide é ativada por1 segundo no início do ciclo inspiratório do respirador. Osaerossóis são liberados em VT de 500 ml e uma taxa de 20respirações/minuto. Uma solução apenas de bicarbonato desódio 0,5% é usada como controle.
Para avaliar a capacidade de resposta brônquica, sãogeradas curvas cumulativas de concentração-resposta aocarbacol de acordo com Abraham (1994) . São coletadasbiópsias brônquicas antes e depois do início do tratamento,e 24 horas após o ataque com antígeno. São feitas biópsiasbrônquicas de acordo com Abraham (1994).
Também pode ser realizado um estudo in vitro de adesãode macrófagos alveolares de acordo com Abraham (1994), epode ser calculada uma percentagem de células aderentes.
Formulação em aerossolUma solução do composto candidato em bicarbonato desódio 0,5%/soro fisiológico (p/v) em uma concentração de30,0 mg/ml é preparada com o uso do seguinte procedimento:
A. Preparação de uma solução de estoque de bicarbonato desódio 0,5% /soro fisiológico: 100,0 ml
<table>table see original document page 218</column></row><table>
Procedimento:
1. Adicionar 0,5 g de bicarbonato de sódio em um frascovolumétrico de 100 ml.
2. Adicionar aproximadamente 90,0 ml de soro fisiológico esonificar até dissolvido.
3. Q.S. até 100,0 ml com soro fisiológico e misturarcuidadosamente .
B. Preparação de 30,0 mg/ml de composto candidato: 10,0 ml
<table>table see original document page 218</column></row><table><table>table see original document page 219</column></row><table>
Procedimento:
1. Adicionar 0,3 00 g do composto candidato em um frascovolumétrico de 10,0 ml.
2. Adicionar aproximadamente 9,7 ml de solução de estoquede bicarbonato de sódio 0,5%/soro fisiológico.
3. Sonificar até que o composto candidato estejacompletamente dissolvido.
4. Q. S. até 10,0 ml com solução de estoque de bicarbonatode sódio 0,5%/soro fisiológico, e misturar cuidadosamente.
Exemplo E
Estudo de toxicidade de 10 dias em camundongos C57B6
Foi feito um estudo de 10 dias para avaliar atoxicidade dos compostos da presente invenção em fêmeas decamundongos C57B6. 0 composto é administrado por engorda emcinco niveis de dose, 0 (controle de veiculo), 10, 30, 100,300 e 1.000 mg/kg (mpk), com cinco camundongos em cadanível de dose. O volume da dose para todos os níveis foi deml/kg. As soluções ou suspensões das doses sãopreparadas em Tween 80 2% em carboximetilcelulose 0,5%(CMC), e novas soluções ou suspensões das doses sãopreparadas a cada dois ou três dias. As observações em vidaincluem os pesos corporais (Io, 2°, 3°, 5o, 7°, 8o e 11°dias do estudo), observações clínicas diárias nas gaiolas(1-2/dia) e observações funcionais periódicas (-1, 2° e 9°dias do estudo).
Ao término, são coletadas amostras por punção cardíacapara exames de patologia clínica (hematologia e bioquímicaclínica) e níveis de fármaco. As amostras de sangue comEDTA são analisadas quanto à contagem total de célulassangüíneas brancas, contagem de células sangüíneasvermelhas, hemoglobina, hematócrito, índices de eritrócito(MCV, MCH, MCHC), plaquetas e uma contagem diferencial decinco células sangüíneas brancas (neutrófilos, linfócitos,monócitos, eosinófilos e basófilos). As amostrasheparinizadas de plasma são analisadas quanto aos níveis dealanina transaminase, aspartato transaminase, fosfatasealcalina, bilirrubina total, albumina, proteína, cálcio,glicose, uréia nitrogenada, creatinina, colesterol etriglicerídeos.
Após a coleta de sangue, a carcaça é submetida ànecropsia, e os órgãos (fígado, baço, rins, coração e timo)são pesados. São coletadas amostras de tecidos (cérebro,glândulas salivares, timo, coração, pulmão, fígado, rim,baço adrenal, estômago, duodeno, íleo, cólon eútero/ovário) e fixadas em formalina. Os tecidos docontrole de veículo e dos animais dos grupos de 300 e 1.000mpk são processados para lâminas de vidro coradas comhematoxilina/eosina, e avaliados quanto a lesõeshistopatológicas.
As alterações do peso corporal, os pesos absolutos erelativos dos órgãos e os resultados da patologia clínicasão analisados quanto à existência de diferençasestatisticamente significativas, comparados com controle deveículo pelo teste de comparação múltipla de Dunnet com ouso do programa de computador Prism. Os resultados dabateria de observações funcionais são analisados quanto adiferenças com o uso dos testes exatos de Dunnet, deFisher, e os efeitos da tendência da dose pelo teste decorrelação de Cochran-Mantel-Haenszel com o uso do programade computador SAS.
Com o uso de uma formulação oral convencional, oscompostos dessa invenção seriam ativos nesse modelo.
Exemplo F
Artrite induzida por adjuvante em ratos
A artrite induzida por adjuvante ("AIA") é um modeloanimal útil para o estudo de artrite reumatóide (RA), que éinduzida por injeção de M. tuberculosis na base do rabo deratos Lewis. Entre 10 e 15 dias após a injeção, os animaisdesenvolvem uma artrite grave e progressiva.
Geralmente, os compostos são testados quanto ã suahabilidade para alterar o edema da pata traseira e os danosósseos resultantes do edema induzido por adjuvante emratos. Para quantificar a inibição do edema da patatraseira resultante da AIA, foram definidas duas fases deinflamação: (1) a primária e secundária da pata traseirainjetada, e (2) a secundária da pata traseira não injetada,que geralmente começa a se desenvolver em torno de onzedias a partir da indução de inflamação na pata injetada. Aredução desse último tipo de inflamação é uma indicação deatividade imunossupressora. Veja Chang, Arth. Rheum., 20,1. 135-1.141 (1977).
0 uso de um modelo animal de RA, por exemplo, a AIA,permite o estudo dos eventos celulares envolvidos nosestágios iniciais da doença. A expressão de CD44 emmacrófagos e linfócitos está supra-regulada durante odesenvolvimento inicial da artrite por adjuvante, enquantoa expressão de LFA 1 está supra-regulada mais tarde nodesenvolvimento da doença. A compreensão das interaçõesentre as moléculas de adesão e o endotélio nos estágiosmais precoces da artrite por adjuvante poderia levar aavanços significativos nos métodos usados no tratamento de RA.

Claims (42)

1. Composto de fórmula I:<formula>formula see original document page 223</formula>caracterizado pelo fato de que:Ar é selecionado do grupo que consiste em aril,heteroaril, aril substituído e heteroaril substituído;η é um número inteiro de 1 a 4;X é S ou O;T é selecionado do grupo que consiste em uma ligação,-O-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- e -N (R9) -, em que R9 é selecionadodo grupo que consiste em hidrogênio, alquil e alquilsubstituído, ou R1 e R9 junto com os átomos pendentes aeles formam um anel heterocíclico, um heterocíclicosubstituído, um heteroaril ou um anel heteroarilsubstituído, desde que, quando T é -O- ou -S-, então R1 nãoseja alcoxi ou alcoxi substituído;R1 é selecionado do grupo que consiste em alquil,alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,acil, alquil, alquil substituído, alquenil, alquenilsubstituído, alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxisubstituído, cicloalquil, cicloalquil substituído, aril,aril substituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;ou R1, R2 e T, junto com os átomos pendentes a eles,formam um anel heterocíclico que consiste em 4 a 8 átomosde anel da fórmula:<formula>formula see original document page 224</formula>em que W é selecionado do grupo que consiste emalquileno e alquileno substituído, e em que um ou mais dosátomos de carbono na cadeia de alquileno podem sersubstituídos por -C(O)-, -C(S)-, -O- ou -N (R10) -, em que R10é hidrogênio, C1 a C4 alquil, ou C1 a C4 alquil substituído;R3 e R4 são independentemente selecionados do grupoque consiste em hidrogênio, alquil, alquil substituído,alcoxi, alcoxi substituído, aril, aril substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, heteroaril,heteroaril substituído, heterocíclico, heterocíclicosubstituído e hidroxi; ou R3 e R4, junto com o átomo denitrogênio ao qual eles são pendentes, formam um anelheterocíclico ou heterocíclico substituído;desde que, quando um de R3 e R4 é hidroxi, alcoxi oualcoxi substituído, o outro de R3 e R4 seja selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquil, alquilsubstituído, aril, aril substituído, cicloalquil,cicloalquil substituído, heteroaril, heteroarilsubstituído, heterocíclico e heterocíclico substituído;R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,C1 a C4 alquil, e C1 a C4 alquil substituído;R6 é selecionado do grupo que consiste em carboxi eéster de carboxi;R7 e R8 são independentemente selecionados do grupoque consiste em hidrogênio, alquil e alquil substituído, ouR7 e R8, junto com o átomo de nitrogênio pendente a eles,formam um anel heterocíclico ou heterocíclico substituído;eY é N ou CH; ouum sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamenteaceitável destes,com a condição que exclui os seguintes compostos, bemcomo seu sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamenteaceitável:N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(trifluoracetil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(iso-propilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(t-butilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(piperidin-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-etil-N-iso-propilaminocarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-3-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan-3-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3-tiapirrolidin-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}fenilalanina;t-butil éster de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;t-butil éster de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(trifluormetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;t-butil éster de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(t-butilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina; et-butil éster de N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(furan--3-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado por ter a fórmula II:<formula>formula see original document page 227</formula>em que:η é um número inteiro de 1 a 4;X é S ou O;T é selecionado do grupo que consiste em uma ligação,-O-, -S-, -S(O)-, -S (O) 2 - e -N (R9) -, em que R9 éselecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquil ealquil substituído, ou R1 e R9, junto com os átomospendentes a eles, formam um anel heterociclico, umheterocíclico substituído, um heteroaril ou um anelheteroaril substituído, desde que, quando T é -O- ou -S-,então R1 não seja alcoxi ou alcoxi substituído;R1 é selecionado do grupo que consiste em alquil,alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,acil, alquil, alquil substituído, alquenil, alquenilsubstituído, alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxisubstituído, cicloalquil, cicloalquil substituído, aril,aril substituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;ou R1, R2 e Τ, junto com os átomos pendentes a eles,formam um anel heterocíclico que consiste em 4 a 8 átomosde anel da fórmula:em que W é selecionado do grupo que consiste emalquileno e alquileno substituído,e em que um ou mais dos átomos de carbono na cadeia dealquileno podem ser substituídos por -C(O)-, -C(S)-, -O- ou-N (R10) -, em que R10 é hidrogênio, Ci a C4 alquil, ou Ci a C4alquil substituído;R3 e R4 são independentemente selecionados do grupoque consiste em hidrogênio, alquil, alquil substituído,alcoxi, alcoxi substituído, aril, aril substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, heteroaril,heteroaril substituído, heterocíclico, heterocíclicosubstituído e hidroxi; ou R3 e R4, junto com o átomo denitrogênio ao qual eles são pendentes, formam um anelheterocíclico ou heterocíclico substituído,·desde que, quando um de R3 e R4 é hidroxi, alcoxi oualcoxi substituído, o outro de R3 e R4 seja selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquil, alquilsubstituído, aril, aril substituído, cicloalquil,cicloalquil substituído, heteroaril, heteroarilsubstituído, heterocíclico e heterocíclico substituído;R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,C1 a C4 alquil, e C1 a C4 alquil substituído;R6 é selecionado do grupo que consiste em carboxi eéster de carboxi;R7 e R8 são independentemente selecionados do grupoque consiste em hidrogênio, alquil e alquil substituído, ouR7 e R8, junto com o átomo de nitrogênio pendente a eles,formam um anel heterocíclico ou heterocíclico substituído;eY é N ou CH; ouum sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamenteaceitável destes.
3. Composto da reivindicação 1 caracterizado por tera fórmula III:<formula>formula see original document page 229</formula>em que:η é um número inteiro de 1 a 4;X é S ou 0;T é selecionado do grupo que consiste em uma ligação,-O-, -S-, -S(O)-, -S(O)2- e -N(R9) -, em que R9 é selecionadodo grupo que consiste em hidrogênio, alquil e alquilsubstituído, ou R1 e R9, junto com os átomos pendentes aeles, formam um anel heterocíclico, um heterocíclicosubstituído, um heteroaril ou um anel heteroarilsubstituído, desde que, quando T é -O- ou -S-, então R1 nãoseja alcoxi ou alcoxi substituído;R1 é selecionado do grupo que consiste em alquil,alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,alquil, alquil substituído, alquenil, alquenil substituído,alquinil, alquinil substituído, alcoxi, alcoxi substituído,cicloalquil, cicloalquil substituído, aril, arilsubstituído, heteroaril, heteroaril substituído,heterocíclico e heterocíclico substituído;ou R1, R2 e T, junto com os átomos pendentes a eles,formam um anel heterocíclico que consiste em 4 a 8 átomosde anel da fórmula:em que W é selecionado do grupo que consiste emalquileno e alquileno substituído, e em que um ou mais dosátomos de carbono na cadeia de alquileno podem sersubstituídos por -C(O)-, -C(S)-, -O- ou -N (R10) -, em que R10é hidrogênio, C1 a C4 alquil, ou C1 a C4 alquil substituído;R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,C1 a C4 alquil, e C1 a C4 alquil substituído;R6 é selecionado do grupo que consiste em carboxi eéster de carboxi;R7 e R8 são independentemente selecionados do grupoque consiste em hidrogênio, alquil e alquil substituído, ouR7 e R8, junto com o átomo de nitrogênio pendente a eles,formam um anel heterocíclico ou heterocíclico substituído;eY é N ou CH; ouum sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticaraenteaceitável destes.
4. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que ogrupo -OC(O)NR7R8 está na posição para do anel fenil.
5. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que Y é N.
6. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4 ou 5, caracterizado pelo fato deque X é oxigênio.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que T é uma ligação e R1 éselecionado do grupo que consiste em metil, trifluormetil,metoximetil, etil, fenil, 4-fluorfenil, 3-fluorfenil, 2-fluorfenil, 4-clorofenil, 3-clorofenil, 2-clorofenil, 2,6-diclorofenil, benzil, pirid-2-il, pirid-4-il, furan-2-il,furan-3-il, 3-metilfuran-2-il, 3-metiltien-2-il, 5-metil-tien-2-il, tien-2-il, 5-clorotien-2-il, 5-(pirid-2-il)tien--2-il, tiazol-2-il, benzo[b]tien-2-il e t-butil.
8. Composto, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que T é -N(R9)-.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de que a combinação R1ZR9 éselecionada do grupo que consiste em metil/metil,etil/etil, ciclopentil/metil, benzil/hidrogênio,ciclohexil/etil, propargil/metil, benzil/metil,fenetil/hidrogênio, fenetil/metil, biciclo[2.2.1]heptan-2-il/hidrogênio, fenil/hidrogênio, fenil/metil, 4-clorofenil/metil, 3-clorofenil/metil,ciclohexil/hidrogênio, metoxi/metil eetoxicarbonilmetil/hidrogênio.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 9,caracterizado pelo fato de que R1 e R9, junto com o átomode nitrogênio pendente a eles, formam uma porçãoheterocíclica selecionada do grupo que consiste empirrolidinil, morfolino, tiomorfolino, 2,6-dimetilmorfolino, 2,5- dihidropirrolil, piperidinil, 4-metilpiperidinil, 1,2,3,4 -tetrahidroisoquinolinil, 1,2,3,4-tetrahidroquiniolinil e isoindolinil.
11. Composto, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que T é oxigênio.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 11,caracterizado pelo fato de que R1 é selecionado do grupoque consiste em metil e fenil.
13. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12,caracterizado pelo fato de que R2 é alquil ou alquilsubstituído.
14. Composto, de acordo com a reivindicação 13,caracterizado pelo fato de que R2 é selecionado do grupoque consiste em metil, etil, iso-propil, n-propil, benzil,fenetil e 4-clorofenilcarbonilmetil.
15. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou-14, caracterizado pelo fato de que R2 é selecionado dogrupo que consiste em alquenil e alquinil.
16. Composto, de acordo com a reivindicação 14,caracterizado pelo fato de que R2 é selecionado do grupoque consiste em alil, vinil e propargil.
17. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14 ou 15, caracterizado pelo fato de que R2 é acil.
18. Composto, de acordo com a reivindicação 17,caracterizado pelo fato de que R2 é formil.
19. Composto, de acordo com a reivindicação 6,caracterizado pelo fato de que T é uma ligação, e R1 e R2,junto com o átomo de nitrogênio ligado a R^, formam umgrupo heterocíclico que consiste em 4 a 8 átomos de anel dafórmula: <formula>formula see original document page 233</formula>em que W é selecionado do grupo que consiste emalquileno e alquileno substituído, e em que um ou mais dosátomos de carbono na cadeia de alquileno podem sersubstituídos por -C(O)-, -C(S)-, -0- ou -N (R10) -, em que R10é hidrogênio, C1 a C4 alquil ou C1 a C4 alquil substituído.
20. Composto da reivindicação 19 caracterizado pelofato de que R2 é selecionado do grupo 2,5-dioxopirrolidinil, 2-oxopirrolidinil, 1,3-dioxoisoindolinil, 1-oxoisoindolinil e 5,6-dicloro-1,3 -dioxoisoindolinil.
21. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2,caracterizado pelo fato de que R3 e R4 sãoindependentemente alquil.
22. Composto, de acordo com a reivindicação 21,caracterizado pelo fato de que R3 e R4 são ambos etil.
23. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ou 23, caracterizadopelo fato de que R5 é hidrogênio.
24. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que η é 1.
25. Composto, de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que Ar é selecionado do grupoque consiste em fenil, piridil e pirimidil.
26. Composto, de acordo com a reivindicação 25,caracterizado pelo fato de que Ar é fenil.
27. Composto, de acordo com qualquer uma dasreivindicações 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13,-14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 OU 26,caracterizado pelo fato de que R7 e R8 são, cada um,independentemente alquil.
28. Composto, de acordo com a reivindicação 27,caracterizado pelo fato de que a combinação R7/R8 éselecionada do grupo que consiste em metil/metil,metil/etil e etil/etil.
29. Composto, de acordo com a reivindicação 27,caracterizado pelo fato de que R7 e R8, junto com o átomode nitrogênio ao qual eles são ligados, formam um anelheterocíclico.
30. Composto, de acordo com a reivindicação 29,caracterizado pelo fato de que o anel heterocíclico épreferivelmente selecionado do grupo que consiste empirrolidinil, morfolino e piperidinil.
31. Composto caracterizado por ser selecionado dogrupo que consiste em:N-[2-dietilamino-5-{2,5-dioxopirrolidin-l-il}pirimidin-4-il] -L, 4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{2-oxopirrolidin-1-il}pirimidin-4-il] -L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-metil-N-metilcarbonilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(morfolin-4-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-metil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-metilcarbonil-N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-metilcarbonil-N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(dimetilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-metil-N-(dimetilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-isopropilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilaraino-5-{N-trifluormetilcarbonil-N-isopropilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-isopropil-N-(dimetilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(etilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(metiloxiraetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(fenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenil-metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(raorfolin-4-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(2H-5H-pirrol-l-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(dietilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi} -fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-Nciclopentilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina ;N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(4-fluorfenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3-fluorfenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(2-fluorfenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(4-clorofenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3-clorofenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(2-clorofenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(2,6-diclorofenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-trifluorraetil-carbonil-N-(prop2-inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(piridin-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piridin-4-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(3-metilfuran-2-ilcarboni1)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-(furan-2-ilcarbonil)-N-(prop-2inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-prop-2-inil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-trifluormetil-carbonil-N-(2-fenetil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-prop-2-inil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-(piperidin-l-ilcarbonil)-N-(prop-2-inil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-(5-clorotien-2-ilcarbonil)-N-etilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-2 -feniletil-N-(tien-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-fenilmetil-N-(piperidin-1-ilcarboni1)amino}piriraidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-metilcarbonil-N-(fenilmetil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-fenilmetil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N-(5-metiltien-2 -ilcarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(5-(piridina-2-il)tien-2-ilcarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(tiazol-2-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-(4-clorofenil-carbonilmetil)-N(trifluormetilcarbonil)-amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1- il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenilmetilaminocarbonil]amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(1,3-dimetilmorfolin-4-ilcarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3,4-dihidroisoquinolin--2(IH)-ilcarbonil)-amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin--1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-(N-ciclohexil-N-etilaminocarbonil)-N-etilamino}pirimidin-4-il] -L-4' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(4-metilpiperidin-l-ilcarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-prop-2-inilaminocarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin--1- il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-fenilmetilaminocarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4 ' -{(pirrolidin-1- il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-(benzo[b]tien-2-ilcarbonil)-N-etilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenetilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-(biciclo[2.2.1]heptan-2-il)aminocarbonil)-N-etilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3,4-dihidroquinolin--1(2H)-ilcarbonil)amino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin--1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(N-metil-N-fenilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(fenilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-(2-dietilamino-5-{N-etil-N-(3-metiltien-2 -ilcarboni1)amino}-piriraidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(4-tiomorfolinocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-metoxiaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - {(pirrolidin-l-il)-carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-fenilaminocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(N-metil-N-isoindolin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalaninaN-[2-dietilamino-5-{Ν-(N-4-clorofenil-N-metilaminocarbonil)-N-etilamino}-pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N- [2-dietilamino-5 -{Ν-(N-3-clorofenil-N-metilaminocarbonil)-N-etilamino}-pirimidin-4-il] -L-4' -{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-(ciclohexil-aminocarbonil)-N-etilamino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)-carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-(l-oxoisoindolin-2-il)pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)-carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-(5,6-diehloro-l,3-dioxoisoindolin--2 -il)pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-(N-etiloxi-carbonilmetil-N-metilaminocarbonil)-N-formilamino}pirimidin-4-il]-L-4' -{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)-carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(fenilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(metoxicarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-isopropil-N-(feniloxicarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(dimetilamino)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-fenil-N-(trifluormetilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-fenil-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-(3-fluorfenil)-N-(metilcarbonil)amino} pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-(4-fluorfenil)-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N- [2-dietilamino-5 -{N-(pirid-4-il)-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5 -{N-vinil-N-(pirrolidin-1-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-(pirid-3-il)-N-(metilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(piperidin-1-iltiocarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il) carboniloxi}-fenilalanina;t-butil éster de N-[2-dietilamino-5 -{N-etil-N-(pirid-4-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-1-il)carboniloxi}-fenilalanina;N-[2-dietilamino-5-{N-etil-N-(pirid-4-ilcarbonil)amino}pirimidin-4-il]-L-4'-{(pirrolidin-l-il)carboniloxi}-fenilalanina;ou um sal, éster ou pró-fármaco farmaceuticamenteaceitável destes.
32. Composição farmacêutica caracterizada porcompreender um veiculo farmaceuticamente aceitável e umaquantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais de umcomposto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-31.
33. Método para o tratamento de uma doença mediadapor a.4 integrina em um humano ou animal caracterizado porcompreender a administração ao ser humano ou animal de umacomposição farmacêutica da reivindicação 32.
34. Método, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que a a.4 integrina é VLA-4.
35. Método, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que a referida doença éselecionada do grupo que consiste em asma, doença deAlzheimer, aterosclerose, AIDS, demência, diabetes,diabetes de surgimento juvenil agudo, doença inflamatóriado intestino, colite ulcerativa, doença de Crohn, esclerosemúltipla, artrite, artrite reumatóide, transplante detecido, metástase de tumor, meningite, encefalite, AVC,traumas cerebrais, nefrite, retinite, dermatite atópica,psoriase, isquemia miocárdica, dano pulmonar agudo mediadopor leucócitos, e síndrome da angústia respiratória doadulto.
36. Método, de acordo com a reivindicação 33,caracterizado pelo fato de que a referida doença é umadoença inflamatória.
37. Método, de acordo com a reivindicação 36,caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória éselecionada do grupo que consiste em eritema nodoso,conjuntivite alérgica, neurite ótica, uveíte, rinitealérgica, espondilite anquilosante, artrite psoriática,vasculite, síndrome de Reiter, lúpus eritematosodisseminado, esclerose sistêmica progressiva, polimiosite,dermatomiosite, granulomatose de Wegner, aortite,sarcoidose, Iinfocitopenia, arterite temporal, pericardite,miocardite, insuficiência cardíaca congestiva, poliarteritenodosa, slndromes de hipersensibilidade, alergia, síndromesde hipereosinofilia, síndrome de Churg-Strauss, doençapulmonar obstrutiva crônica, pneumonite dehipersensibilidade, hepatite crônica ativa, cistiteintersticial, insuficiência endócrina autoimune, cirrosebiliar primária, anemia aplástica autoimune, hepatitecrônica persistente e tireoidite.
38. Uso de uma composição farmacêutica dareivindicação 3 2 caracterizado para a manufatura de ummedicamento para tratar uma doença mediada por a.4integrina.
39. Uso, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que a a.4 integrina é VLA-4.
40. Uso, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que a referida doença éselecionada do grupo que consiste em asma, doença deAlzheimer, aterosclerose, AIDS demência, diabetes, diabetesde surgimento juvenil agudo, doença inflamatória dointestino, colite ulcerativa, doença de Crohn, esclerosemúltipla, artrite, artrite reumatóide, transplante detecido, metástase de tumor, meningite, encefalite, AVC,traumas cerebrais, nefrite, retinite, dermatite atópica,psoríase, isquemia miocárdica, dano pulmonar agudo mediadopor leucócitos, e síndrome da angústia respiratória doadulto.
41. Uso, de acordo com a reivindicação 38,caracterizado pelo fato de que a referida doença é umadoença inflamatória.
42. Uso, de acordo com a reivindicação 41,caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória éselecionada do grupo que consiste em eritema nodoso,conjuntivite alérgica, neurite ótica, uveíte, rinitealérgica, espondilite anquilosante, artrite psoriática,vasculite, síndrome de Reiter, lúpus eritematosodisseminado, esclerose sistêmica progressiva, polimiosite,dermatomiosite, granulomatose de Wegner, aortite,sarcoidose, Iinfocitopenia, arterite temporal, pericardite,miocardite, insuficiência cardíaca congestiva, poliarteritenodosa, síndromes de hipersensibilidade, alergia, síndromesde hipereosinofilia, síndrome de Churg-Strauss, doençapulmonar obstrutiva crônica, pneumonite dehipersensibilidade, hepatite crônica ativa, cistiteintersticial, insuficiência endócrina autoimune, cirrosebiliar primária, anemia aplástica autoimune, hepatitecrônica persistente e tireoidite.
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